CS272510B1

CS272510B1 - Centrifugal cytosedimentation

Info

Publication number: CS272510B1
Application number: CS820888A
Authority: CS
Inventors: Evzen Mudr Csc Krepela; Aleksi Mudr Sedo
Original assignee: Evzen Mudr Csc Krepela; Aleksi Mudr Sedo
Priority date: 1988-12-12
Filing date: 1988-12-12
Publication date: 1991-02-12
Also published as: CS820888A1

Abstract

Řešení se týká centrifugačního cytosedimentátoru určeného pro přípravu a další zpracování cytologických a jiných preparátů, jednoduchého zařízení, které sestává z nádobky, opatřené uzávěrem s plnicím otvorem, z vodicí zátky s vodicím otvorem a těsnicím okrajem, ve které je vsazena sedimentační trubice, opírající se o těsnění ve středové poloze polohovacího kroužku, jenž je uložen na mikroskopovém krycím sklu. Centrifugační cytosedimentátor se může výhodně uplatnit v mnoha oborech lékařské i jiné praxe, například v cytologii, hematologii, mikrobiologii apod.The solution concerns a centrifugation cytosedimentator preparation and more processing of cytological and other preparations, a simple device that consists of from a container fitted with a cap with a filler opening from a guide plug with a guide hole a a sealing edge in which sedimentation is embedded a tube leaning against a seal in the center position of the positioning ring, which is deposited on a microscope cover glass. Centrifugation cytosedimentator can be advantageously applied in many fields medical and other practices such as cytology, hematology, microbiology, etc.

Description

Vynález se týká centrifugačního cytosedimentátoru, určeného pro přípravu a další zpracování cytologických preparátů.The invention relates to a centrifugal cytosedimentator designed for the preparation and further processing of cytological preparations.

Jak je známo, užívají se tato zařízení především pro přípravu buněčných preparátů z buněčných suspenzí, které jsou předmětem experimentálního studia a diagnostiky v různých oborech, například v humánní a veterinární medicíně (cytologie, cytochemie, patologie, imunologie, mikrobiologie) a jiných vědních a průmyslových odvětvích. K tomuto účelu existují komerčně dostupné speciální cytocentrifugy různých typů, ale vždy s poměrně komplikovaným doplňkovým příslušenstvím pro sedimentaci buněk, které ovšem není použitelné v centrifuze jiné konstrukce. Hlavní funkční součástí je tzv. sedimentační komůrka, ve které se sedimentující materiál zachycuje na mikroskopovém podložním skle; další případné zpracování, například fixace, barvení, promývání a podobně je možné až po rozmontování sedimentační komůrky a vyjmutí skla. To představuje nevýhodu z hlediska možných ztrát buněk, vyšší spotřeby drahých chemikálií, protilátek atd. Vzhledem k vysokým cenám, včetně dalšího nezbytného příslušenství a složité a časově náročné manipulaci, nejsou tyto přístroje pro běžnou laboratorní praxi ekonomicky únosné. Jiná popsaná cytosedimentační zařízení (M. Šuta, Čs. neurol., 29, 101, 1966; Č. L. Hrazdíra, Čs. neurol., 29, 107, 1966) mají také některé nevýhody: sedimentace při 1 až 8g_„ na podložení sklo, zpracování preparátu až po rozmontování sedimentača v ního zařízení. Použití filtračního papíru k odsátí tekutého média podobně jako u výše zmíněných cytocentrifug způsobuje nerovnoměrnou distribuci buněk na sedimentační plochu.As is known, these devices are mainly used for the preparation of cell preparations from cell suspensions, which are the subject of experimental study and diagnostics in various fields, for example in human and veterinary medicine (cytology, cytochemistry, pathology, immunology, microbiology) and other scientific and industrial sectors. For this purpose, there are commercially available special cytocentrifuges of various types, but always with a relatively complicated accessory for cell sedimentation, which, however, is not usable in a centrifuge of another design. The main functional component is the so-called sedimentation chamber, in which sedimenting material is captured on a microscope slide; further possible processing, for example fixation, staining, washing and the like is possible only after disassembly of the sedimentation chamber and removal of the glass. This is a disadvantage in terms of possible cell losses, higher consumption of expensive chemicals, antibodies, etc. Due to high prices, including other necessary accessories and complex and time-consuming handling, these devices are not economically viable for normal laboratory practice. Other described cytosedimentation devices (M. Šuta, Czechoslovak neurol., 29, 101, 1966; No. L. Hrazdíra, Czechoslovak neurol., 29, 107, 1966) also have some disadvantages: sedimentation at 1 to 8 g on the substrate glass, preparation of the specimen only after disassembly of the sedimentator in it. The use of filter paper to aspirate the liquid medium, similar to the cytocentrifuges mentioned above, causes an uneven distribution of cells on the sedimentation area.

Úkolem vynálezu tedy bylo odstranit uvedené technické a ekonomické nedostatky, a to řešením takového centrifugačního cytosedimentátoru,’který by umožňoval použití běžně dostupné centrifugy s výkyvným rotorem, sedimentaci buněk na mikroskopové krycí sklo a následné zpracování, popřípadě přímo v cytosedimentátoru, pokud možno bez demontáže.The object of the invention was therefore to obviate the said technical and economic drawbacks by providing a centrifugal cytosedimentator which would allow the use of a commercially available centrifuge with a swinging rotor, sedimentation of cells on a microscope cover glass and subsequent processing, possibly directly in the cytosedimentator.

To se podařilo sestavením centrifugačního cytosedimentátoru, určeného pro přípravu a další zpracování cytologických a jiných preparátů, podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že sestává z nádobky, opatřené uzávěrem s plnicím otvorem, dále z vodicí zátky s vodicím otvorem a těsnicím okrajem, ve které je vsazena sedimentační trubice, opírající se o těsnění ve středové poloze polohovacího kroužku, který je uložen na mikroskopovém krycím sklu.This has been achieved by assembling a centrifugal cytosedimentator for the preparation and further processing of cytological and other preparations according to the invention, which consists in a container provided with a cap with a filling opening, a guide plug with a guide opening and a sealing edge, in which is inserted a sedimentation tube resting on the seal in the central position of the positioning ring, which is mounted on a microscope cover glass.

Pro snazší manipulaci, zejména při vkládání centrifugačního cytosedimentátoru do výkyvného rotoru centrifugy je účelné, když je uzávěr opatřen manipulačními elementy, například jedním, nebo více otvory a/nebo výstupky a/nebo očky.For easier handling, in particular when inserting the centrifugal cytosedimentator into the pivoting rotor of the centrifuge, it is expedient for the closure to be provided with handling elements, for example one or more openings and / or projections and / or eyelets.

Příklad provedení centrifugačního cytosedimentátoru podle vynálezu je schematicky znázorněn na připojeném výkresu v řezu, aniž by však byl jakkoliv omezen jen na zobrazené provedení. Jak je z výkresu patrno, tvoří základní část centrifugačního cytosedimentátoru nádobka 1, shora uzavíratelná uzávěrem 2_r v jehož středu je plnicí otvor 3 a který je opatřen výše zmíněnými, ale na výkresu neznázorněnými manipulačními elementy. Pod uzávěrem 2 je do nádobky 1 vsazena vodicí zátka 4, opatřená vodicím otvorem 5, jejíž těsnicí okraj 6 slouží jednak jako těsnění, především však brání nežádoucímu posunu do nitra nádobky 1. Vodicím otvorem 5 prochází sedimentační trubice 7, která se opírá svým spodním koncem o těsnění 9,'umístěné ve středové poloze polohovacího kroužku 8, který je položen na mikroskopovém krycím skle 10. Podložka 11 s vybráním 12 umožňuje sestavení a použití centrifugačního cytosedimentátoru i v tom případě, že na dně nádobky 1 je nálitek nebo jiná nerovnost. Je-li ovšem dno nádobky 1 dostatečně silné a rovné, není použití podložky 12 nutné a mikroskopové krycí sklo 10 spolu s polohovacím kroužkem 8 a těsněním 9 je možno pokládat přímo na dno nádobky 1 (tato eventualita není na výkresu znázorněna).An exemplary embodiment of a centrifugal cytosedimentator according to the invention is schematically shown in the accompanying sectional drawing, but is not limited in any way to the embodiment shown. As can be seen from the drawing, the basic part of the centrifugal cytosedimentator is a container 1, which can be closed from above by a closure 2 _r in the center of which is a filling opening 3 and which is provided with the above-mentioned handling elements not shown in the drawing. Under the closure 2, a guide plug 4 is inserted into the container 1, provided with a guide hole 5, the sealing edge 6 of which serves as a seal, but above all prevents undesired movement into the container 1. A sedimentation tube 7 passes through the guide hole 5 and rests on its lower end. o a seal 9, located in the central position of the positioning ring 8, which is placed on the microscope cover glass 10. The washer 11 with the recess 12 allows the centrifugal cytosedimentator to be assembled and used even if there is a spout or other unevenness at the bottom of the container 1. However, if the bottom of the container 1 is sufficiently thick and straight, the use of a pad 12 is not necessary and the microscope cover glass 10 together with the positioning ring 8 and the seal 9 can be placed directly on the bottom of the container 1 (this possibility is not shown in the drawing).

CS 272510 BlCS 272510 Bl

Centrifugační cytosedimentátor podle vynálezu je sestaven ze součástí, které jsou snadno dostupné a které lze popřípadě jednoduchými zásahy upravit nebo přizpůsobit požadovanému účelu. Všechny součásti mohou být vyrobeny z vhodných plastických hmot (některé popřípadě ze skla), které jsou pevné a alespoň omezeně pružné, pokud možno průhledné nebo‘průsvitné; u některých součástí to ale není nutné. Použitý materiál musí být samozřejmě chemicky stálý, nesmí se měnit samovolně, ani stykem s používanými činidly a musí být sterilizovatelný vhodnými způsoby, například zářením nebo plynnými prostředky.The centrifugal cytosedimentator according to the invention is composed of components which are easily accessible and which can optionally be modified or adapted to the desired purpose by simple interventions. All components may be made of suitable plastics (some possibly glass) which are strong and at least to a limited extent flexible, preferably transparent or translucent; however, this is not necessary for some components. The material used must, of course, be chemically stable, must not change spontaneously or in contact with the reagents used, and must be sterilizable by suitable means, for example by radiation or gaseous means.

Centrifugační cytosedimentátor podle vynálezu může být k dispozici v několika velikostech podle účelu použití a také zpravidla podle velikosti centrifugy, se kterou se obvykle pracuje. Poměr šířky k výšce nádobky 1 není nijak kritický, zpravidla se volí poměr například 1 : 2 až 1 : 3. Tomu je přizpůsoben i průměr sedimentační trubice 7, zhruba asi 1/3 průměru nádobky 1. Běžná velikost nádobky 1 se tedy může pohybovat asi okolo 25 až 30 mm (šířka) a 70 až 80 mm (výška), průměr sedimentační trubice 7 asi 8 až 12 mm. Pokud to okolnosti vyžadují, mohou se jim rozměry samozřejmě přizpůsobit.The centrifugal cytosedimentator according to the invention can be available in several sizes according to the purpose of use and also, as a rule, according to the size of the centrifuge which is usually used. The ratio of the width to the height of the container 1 is not critical, as a rule a ratio of, for example, 1: 2 to 1: 3 is chosen. The diameter of the sedimentation tube 7, about 1/3 of the diameter of the container 1, about 25 to 30 mm (width) and 70 to 80 mm (height), the diameter of the sedimentation tube 7 is about 8 to 12 mm. Of course, if circumstances so require, the dimensions can be adapted to them.

Uzávěr 2 slouží především k přitlačení sedimentační trubice 7 na těsnění 9 v polohovacím kroužku 8 na mikroskopovém krycím skle 10. Nejvýhodnější je upevnění uzávěru 2 k nádobce 1 pomocí závitu, který umožňuje citlivé dotažení a přiměřené přitlačení sedimentační trubice 7 bez deformace nebo poškození kterékoliv součásti centrifugačního cytosedimentátoru. Nejsou samozřejmě vyloučena ani jiná řešení, pokud se jimi dosáhne spolehlivě stejného účinku.The cap 2 serves primarily to press the sedimentation tube 7 against the seal 9 in the positioning ring 8 on the microscope cover glass 10. It is most advantageous to fasten the cap 2 to the container 1 by means of a thread. cytosedimentator. Of course, other solutions are not ruled out as long as they reliably achieve the same effect.

V běžné praxi se počítá s jednorázovým použitím součástí, které přicházejí do styku se sledovanou buněčnou suspenzí; možnosti opakovaného použití celé soupravy nebo jen některých jejích součástí nejsou samozřejmě vyloučeny a jsou dány povahou a/nebo četností prováděných vyšetření.In common practice, single use of components that come into contact with the cell suspension of interest is contemplated; the possibility of re-using the whole kit or only some of its components is of course not excluded and is determined by the nature and / or frequency of the examinations performed.

Manipulace s centrifugačním cytosedimentátorem podle vynálezu je velmi jednoduchá: Po sestavení se plnicím otvorem J3, v uzávěru 2 naplní do sedimentační trubice 7 (podle její velikosti) zkoumaná buněčná suspenze o objemu.od 0,1 až 5 ml, potom se cytosedimentátor vloží do centrifugy s výkyvným rotorem a odstřeluje se potřebnou dobu při zvoleném počtu otáček. Při centrifugaci se sedimentující buňky přichytí na mikroskopovém krycím skle 10. Po centrifugaci lze supernatant dekantovat, popřípadě odsát a potom lze v centrifugačním cytosedimentátoru provádět další operace, například promývání, fixaci, barvení i dobarvování buněk a v případě, že se používají drahá a/nebo obtížně dostupná činidla, stačí k překrytí sedimenteváných buněk právě potřebný objem takového činidla. Připravený buněčný sediment je možno podle potřeby zpracovat po vyjmutí z cytosedimentátoru nejen mikroskopickými technikami, ale i technikami buněčných kultur, kvantitativní densitometrie a podobně.The handling of the centrifugal cytosedimentator according to the invention is very simple: After assembly, the examined cell suspension with a volume of 0.1 to 5 ml is filled into the sedimentation tube 7 (according to its size) through the filling hole J3, in the cap 2, then the cytosedimentator is placed in the centrifuge. with a swinging rotor and the required time is fired at the selected speed. During centrifugation, the sedimenting cells are attached to a microscope cover glass 10. After centrifugation, the supernatant can be decanted or aspirated and then other operations can be performed in the centrifugal cytosedimentator, such as washing, fixing, staining and staining of cells and if expensive and / or difficult to obtain reagents, just the required volume of such reagent is sufficient to cover the sedimented cells. The prepared cell sediment can be processed as needed after removal from the cytosedimentator not only by microscopic techniques, but also by cell culture techniques, quantitative densitometry and the like.

Všechny popsané operace, včetně případných cytochemických reakcí, lze provádět při zvolené konstantní teplotě, kdy se centrifugační cytosedimentátor inkubuje ve vhodném termostatu. S centrifugačním cytosedimentátorem podle vynálezu lze spolehlivě pracovat v rozsahu teplot od 0 do 40 °C. .All described operations, including possible cytochemical reactions, can be performed at a selected constant temperature, whereby the centrifugal cytosedimentator is incubated in a suitable thermostat. The centrifugal cytosedimentator according to the invention can be operated reliably in the temperature range from 0 to 40 ° C. .

Výhody centrifugačního cytosedimentátoru podle vynálezu spočívají především v jednoduché konstrukci, používající běžných součástek z levného a dostupného materiálu a ve snadné manipulaci, dále ve vedení sedimentace buněk pouze silou kolmou k sedimentační ploše, na rozdíl od cytosedimentátorů používajících i odsávání media ze sedimentační plochy laterálně, což vede k nerovnoměrné distribuci i ke ztrátám buněk, možnost zpracování buněk přímo v centrifugačním cytosedimentátoru, což brání ztrátám buněk a šetří činidla a konečně možnost široké aplikace v mnoha oborech lékařské i jiné praxe.The advantages of the centrifugal cytosedimentator according to the invention consist mainly in a simple construction using conventional components made of cheap and available material and in easy handling, further sedimentation of cells by force only perpendicular to the sedimentation surface. leads to uneven distribution and cell loss, the possibility of processing cells directly in a centrifugal cytosedimentator, which prevents cell loss and saves reagents, and finally the possibility of wide application in many fields of medical and other practice.

Claims

Centrifugal cytosedimentator for the preparation and further processing of cytological and other preparations. ) and a sealing edge (6) in which a sedimentation tube (7) is inserted, resting on the seal (9) in the central position of the positioning ring (8), which is mounted on the microscope cover glass (10).

Cytosedimentator according to claim 1, characterized in that the closure (2) is provided with handling elements, for example one or more openings and / or projections and / or eyelets.

3. Cytosedimentator according to claim 1, characterized in that a washer (11) with a recess (12) is arranged between the microscope cover glass (10) and the bottom of the container (1).