CS261994B1 - Process for the separation of insuline from water solutions - Google Patents
Process for the separation of insuline from water solutions Download PDFInfo
- Publication number
- CS261994B1 CS261994B1 CS87657A CS65787A CS261994B1 CS 261994 B1 CS261994 B1 CS 261994B1 CS 87657 A CS87657 A CS 87657A CS 65787 A CS65787 A CS 65787A CS 261994 B1 CS261994 B1 CS 261994B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- insulin
- solid phase
- solution
- specific conductivity
- aqueous
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Řešení se týká izolace insulinu z přírodního materiálu, z vodných, roztoků po odstranění ethanolu a hlavního podílu lipidů. Podstata je v tom, že se vodný koncentrát surového insulinu o minimální koncentraci 100 ^g/cm3 upraví hází na hodnotu pH 6,9 ,až 10,5, potom se zvýší měrná vodivost roztoku na hodnotu 50 až 120 mS/cm buď solí alkalického kovu, nebo solí amonnou, nebo přídavkem vysoleného surového insulinu, načež se pevná fáze oddělí, promyje organickým rozpouštědlem nebo směsí organických rozpouštědel mísitelných s vodou. Ze získané pevné fáze se připraví farmaceuticky čistý insulin buď přímo krystalizací v přítomnosti zinečnatých lontů, anebo po předchozím chromatografickém nebo elektrochemickém přečištění. Řešení přináší zvýšení výroby žádaného· léku při současné úspoře surovin a energie a zjednodušuje celou izolaci insulinu.The solution concerns the isolation of insulin from natural material, from aqueous solutions after removal ethanol and the major lipid fraction. The essence is that it is an aqueous concentrate raw insulin of minimum concentration 100 µg / cm 3 adjusts to pH 6.9 , up to 10.5, then the specific conductivity of the solution is increased to a value of 50 to 120 mS / cm with either salt or an ammonium salt, or. \ t by adding salted raw insulin, whereupon the solid phase is separated, washed with organic solvent or organic mixture water miscible solvents. That the obtained solids are prepared pharmaceutically pure insulin either directly by crystallization in the presence of zinc ion or after previous chromatographic or electrochemical purification. The solution brings an increase production of the desired drug while saving raw materials and energy and simplifies the whole insulin isolation.
Description
Vynález se týká způsobu izolace insulinu z pankreatu jatečních zvířat.The invention relates to a process for the isolation of insulin from the pancreas of slaughter animals.
Výroba insulinu spočívá v desintegraci zmražených žláz, extrakcí vodným okyseleným ethanolem, vyčeření extraktu a následném odloučení aniontu kyseliny přítomné při extrakci, spolu s některými balastními látkami organického původu. Potom se ethanol oddestiluje za sníženého tlaku a z vodného odparku se vysolí surový insulin (vysolenina). Do tohoto základního schématu bývají často vkládány další operace s cílem zlepšení zpracovatelnosti meziproduktů, snížení ztrát a zvýšení kvality finální substance (např. čs. AO č. 187 784).The production of insulin consists in the disintegration of frozen glands, extraction with aqueous acidified ethanol, clarification of the extract and subsequent separation of the acid anion present in the extraction, together with some ballasts of organic origin. Then, ethanol was distilled off under reduced pressure, and crude insulin (saline) was salted out of the aqueous residue. In this basic scheme, other operations are often introduced in order to improve the processability of intermediates, reduce losses and improve the quality of the final substance (eg Czechoslovak AO No. 187 784).
Surový vysolený Insulin se po rozpuštění zbaví dalších bílkovinných příměsí úpravou pH a filtrací. Z čirého filtrátu se sráží amorfní insulin obvykle v přítomnosti zinečnatých iontů (tzv. Zn-amorfní insulin), často 1 pomocí přídavku organických s vodou mísitelných rozpouštědel. Z rozteku amorfního Zn-insulinu se postupným srážením při různých hodnotách pH (např. podle čs. pat. č. 131144) odstraní další průvodní látky bílkovinné povahy, načež je insulin krystalován za přítomnosti zinečnatých iontů.The crude salted Insulin is freed from further protein impurities after dissolution by pH adjustment and filtration. Amorphous insulin usually precipitates from the clear filtrate in the presence of zinc ions (so-called Zn-amorphous insulin), often by addition of organic water-miscible solvents. Additional proteinaceous concomitant substances are removed from the amorphous Zn-insulin solution by sequential precipitation at various pH values (e.g. according to U.S. Pat. No. 131144), whereupon insulin is crystallized in the presence of zinc ions.
Takto připravená substance se používá pro výrobu běžných insulinových přípravků. Pro výrobu přípravků o vyšší čistotě se insulin dále čistí např. chromatografií na molekulových sítech (např. čs. AO č. 186 988). Při chromatografickém přečištění by měl mít Insulin maximálně 10 % průvodních nečistot, ale nověji bylo zjištěno, že chromatografie probíhá se stejnou účinností i při 40 % znečištění insulinu, v závislosti na povaze průvodních nečistot.The substance thus prepared is used for the manufacture of conventional insulin preparations. For the production of higher purity preparations, the insulin is further purified, for example, by molecular sieve chromatography (e.g., AO No. 186 988). For chromatographic purification, Insulin should have a maximum of 10% concomitant impurities, but more recently it has been found that chromatography proceeds with the same efficacy at 40% contamination of insulin, depending on the nature of the concomitant impurities.
Každou čisticí operací však dochází ke ztrátám žádaného produktu a k velké spotřebě rozpouštědel. Nevýhodou většiny známých postupů je nutnost odstraňování krevních barvlv· v některých stupních izolace adsorpcí na sorbentech s velkým aktivním povrchem (viz čs. AO č. 187 784). Současnými klasickými postupy je insulin průmyslově vyráběn v celosvětovém měřítku od počátku padesátých let. Na více pracovištích byl proto hledán jednodušší a racionálnější postup, avšak zatím bez prakticky použitelného výsledku.However, each purification operation results in loss of the desired product and a large consumption of solvents. The disadvantage of most of the known methods is the necessity of removing blood stains in some stages of the isolation by adsorption on sorbents with a large active surface (cf. AO No. 187 784). By the current classical methods, insulin has been manufactured globally since the early 1950s. Therefore, a simpler and more rational procedure was sought in more workplaces, but so far without a practically applicable result.
Výjimku činí způsob izolace insulinu podle USA pat. spis. č. 3 719 055, který využívá krystalizace insulinu z bazických roztoků za přítomnosti iontů alkalických kovů nebo iontů amonných. Tento postup je však prakticky obtížně využitelný pro méně čisté meziprodukty, jako je například vysolený surový insulin (salt cákej a ve finálních stupních výroby postrádá význam. Příčinou je značná obtížnost nastavení optimální koncentrace iontů, což má za následek špatnou reprodukovatelnost výtěžků i čistoty izolovaného insulinu.The method of isolation of insulin according to U.S. Pat. Are you sleeping. No. 3,719,055, which utilizes crystallization of insulin from basic solutions in the presence of alkali metal or ammonium ions. However, this process is practically difficult to apply to less pure intermediates such as salted crude insulin (salt splash and lacks significance in the final stages of production. This is due to the difficulty of adjusting the optimal ion concentration resulting in poor reproducibility of yields and purity of isolated insulin.
V řadě případů, kdy je jako výchozí materiál používán vysolený surový insulin nebo vodný koncentrát z odparky, vylučuje se spolu s insulinem značné množství nepolárních látek, pocházejících z pankreatu, které mnohdy činí další zpracování téměř nemožným či značně ztrátovým.In many cases, when the raw crude insulin or aqueous concentrate from the evaporator is used as the starting material, a significant amount of non-polar pancreatic substances is precipitated with insulin, which often makes further processing almost impossible or considerably loss-making.
Uvedené nevýhody odstraňuje způsob izolace insulinu z vodných roztoků po odstranění ethanolu podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se vodný koncentrát surového insulinu o minimální koncentraci 100 gg/cm3 upraví bází na hodnotu pH 6,9 až 10,5. Potom se zvýší měrná vodivost roztoku na hodnotu 50 až 120 mS/cm, načež se pevná fáze oddělí, promyje organickým rozpouštědlem nebo směsí organických rozpouštědel mísitelných s vodou a ze získané pevné fáze se připraví farmaceuticky čistý insulin buď přímou krystalizaci ιν· přítomnosti zinečnatých iontů, anebo po předchozím chromatografickém nebo elektrochemickém přečištění.The above-mentioned disadvantages are eliminated by the process of isolating insulin from aqueous solutions after removal of ethanol according to the invention, which comprises treating the aqueous concentrate of crude insulin with a minimum concentration of 100 gg / cm 3 to a pH of 6.9 to 10.5. The specific conductivity of the solution is then increased to 50-120 mS / cm, whereupon the solid phase is separated, washed with an organic solvent or a mixture of organic solvents miscible with water, and the obtained solid phase is prepared by pharmaceutically pure insulin either by direct crystallization or zinc ions. or after previous chromatographic or electrochemical purification.
Způsob podle vynálezu se výhodně provádí tak, že se vodný koncentrát surového insulinu upraví přídavkem hydroxidu alkalického kovu nebo hydroxidu amonného na hodnotu pH 7,8 až 8,2.The process according to the invention is preferably carried out by adjusting the aqueous crude insulin concentrate to pH 7.8-8.2 by addition of an alkali metal hydroxide or ammonium hydroxide.
Měrná vodivost roztoku se zvýší způsobem podle vynálezu na hodnotu 60 až 90 mS/cm přídavkem sodných nebo amonných solí, zejména síranů, chloridů, fosfátů nebo jejich směsí, popřípadě přídavkem vysoleného surového insulinu.The specific conductivity of the solution is increased by the method according to the invention to a value of 60 to 90 mS / cm by the addition of sodium or ammonium salts, in particular sulfates, chlorides, phosphates or mixtures thereof, optionally by addition of salted crude insulin.
Způsobem podle vynálezu se pevná fáze promývá alkanolem s 1 až 3 atomy uhlíku nebo acetonem, případně jejich směsí.According to the process of the invention, the solid phase is washed with a C 1 -C 3 alkanol or acetone or mixtures thereof.
Způsobem podle vynálezu se ze získané pevné fáze připraví čistý Insulin.According to the process of the invention, pure Insulin is prepared from the solid phase obtained.
Způsob podle vynálezu se provádí tak, že se vodný roztok insulinu o koncentraci větší než 100 ^íg/cm3 zbaví hrubě dispergovaných částic, případně se vyčeří zcela, a to filtrací či centrifugách Potom se podrobí úpravě pH na hodnotu 7,8 až 8,2 pomocí hydroxidu alkalického kovu nebo hydroxidu amonného. Měrná vodivost roztoku se zvýší na hodnotu 60 až 90 mS/cm přídavkem soli alkalického kovu nebo soli amonné, kde aniontem může být síran, fosfát anebo chlorid.The process according to the invention is carried out in such a way that the aqueous insulin solution at a concentration of more than 100 µg / cm 3 is freed of coarse-dispersed particles or clarified completely by filtration or centrifuging. 2 with an alkali metal or ammonium hydroxide. The specific conductivity of the solution is increased to 60-90 mS / cm by addition of an alkali metal or ammonium salt, wherein the anion may be sulfate, phosphate or chloride.
Pro průmyslové využití je výhodné používat při všech úpravách ionty téhož druhu. Pevná fáze obsahující insulin se z roztoku vyloučí zpravidla do 40 hodin. Potom se separuje například tak, že se ponechá 8 až 14 hodin sedimentovat, supernatant se odsaje a sediment se zbaví zbytků matečného louhu vakuovou filtrací na frltě č. 4. Z pevné fáze se odstraní rezidua nepolárních látek opakovanou extrakcí acetonem a potom se dosuší promytím etherem, Po rozpuštění a odfiltrování halastních látek nerozpustných při pH 2,0 až 2,8 je insulin krystalizován v přítomnosti zinečnatých iontů buď přímo, anebo po předchozím chromatografickém přečištění.For industrial use it is advantageous to use ions of the same kind in all treatments. The insulin-containing solid phase usually precipitates out of solution within 40 hours. It is then separated, for example, by allowing it to settle for 8 to 14 hours, the supernatant is filtered off with suction and the residue is freed from the mother liquor by vacuum filtration on fraction # 4. Residues of non-polar substances are removed from the solid phase by repeated extraction with acetone. After dissolution and filtration of halastic substances insoluble at pH 2.0 to 2.8, insulin is crystallized in the presence of zinc ions either directly or after previous chromatographic purification.
Způsob podle vynálezu lze s výhodou použít při čištění surového vysoleného insulinuThe process of the invention can advantageously be used in the purification of crude desalinated insulin
S (vysoleniny) vg finální části výroby. Postup umožňuje rychlou izolací insulinu z roztoků obsahujících značné množství průvodních látek, jako jsou například krevní barviva, zbytky látek lipidícké povahy, aciproteiny, bílkovinné příměsi o molekulové hmotnosti větší nc-ž asi 20 000 apod., čímž přináší zjednodušení, případně vynechání některých předřazených či následných čisticích operací.S (salting out) in g final part of production. The process allows for the rapid isolation of insulin from solutions containing a considerable amount of concomitant substances such as blood dyes, lipid residues, aciproteins, protein impurities greater than about 20,000 molecular weight, etc., thereby simplifying or omitting some of the precursors. subsequent cleaning operations.
•Způsob podle vynálezu dále umožňuje přípravu insulinu o vyšší čistotě přímo bez izolace krystalického Zn-insulinu před chromatograíii. Tím se raprodukové.telně získává již z vysoleného meziproduktu relativně vysoce čistý insulin, v průmyslovém měřítku zpracovatelný na finální substanci s minimálními ztrátami, cež se projevuje významným zvýšením výtěžku žádaného produktu při sončnsném snížení nároků -na pracnost, zařízení a spotřebu surovin i energií.The process of the invention further allows the preparation of higher purity insulin directly without isolation of crystalline Zn-insulin prior to chromatography. As a result, relatively high purity insulin, which can be processed on an industrial scale to a final substance with minimal losses, is obtained from the salted intermediate product, which results in a significant increase in the yield of the desired product while reducing the labor, equipment and raw material and energy consumption.
Autory vynálezu bylo prokázáno, že postupem podlí; vynálezu dojde k zvýšení výtěžku insulinu, o 4 až 20 %.It has been shown by the inventors that according to the process; According to the invention, the yield of insulin is increased by 4 to 20%.
Následující příklady provedení způsob podle vynálezu pouze dokládají, ale neomezují.The following examples illustrate the process according to the invention but do not limit it.
Příklady provedeníExamples
Příklad 1 .35,9 g vysoleniny, pocházející z 10 0 kg vepřového pankreatu, vysolené pomocí chloridu sodného, bylo rozpuštěno v 100 cras destilované vody při pH 6,9 nastaveném pomocí 5 M hydroxidu amonného. Hodnota měrné vodivosti byla upravena přídavkem chloridu sodného na 85 mS/cm a· konečná hodnota pil byla. nastavena na 7,7. Po třech hodinách míchání při teplotě 16 až 18 °C byla vyloučená pevná fúze odfiltrována, třikrát rozmíchána s celkem 300 cm3 ethanolu, který byl vždy po pěti minutách míchání odsát.EXAMPLE 1 35.9 g of saline originating from 10 kg of pork pancreas salted with sodium chloride was dissolved in 100 cra of distilled water at pH 6.9 adjusted with 5 M ammonium hydroxide. The specific conductivity value was adjusted to 85 mS / cm by the addition of sodium chloride and the final pH value was. set to 7.7. After stirring at 16-18 ° C for three hours, the precipitated solid fusion was filtered off, stirred three times with a total of 300 cm 3 of ethanol, which was sucked off after five minutes of stirring.
Čistá sraženina, lu/la rozpuštěna v 10,0 cm3 destilované vody při pil 2,1 nastaveném pomocí 1,5 M kyseliny chlorovodíkové a roztok byl podroben gelové filtraci na sloupci 5 X 100 cm polydex trámového molekulového síta při eluci 0,01 M kyselinou chlorovodíkovou. Z eluátu byl nejprve vysrážen amorfní insulin 5 % obj. přídavkem, 10' % roztoku octanu zinečnatého a 10 % obj. acetonu při pH 6,4.Pure precipitate, 1u / l dissolved in 10.0 cm 3 of distilled water at pH 2.1 adjusted with 1.5 M hydrochloric acid, and the solution was subjected to gel filtration on a 5 X 100 cm polydex beam molecular sieve column eluting with 0.01 M hydrochloric acid. Amorphous insulin was first precipitated from the eluate with 5% v / v addition, 10% zinc acetate solution and 10% v / v acetone at pH 6.4.
Amorfní insulin byl po odstředění rozpuštěn v roztoku 1 g kyseliny citrónové v 60 cm3 destilované vody. Po přídavku 1,6 cm3 '5 % roztoku chloridu zinečnatého a 12 cm3 acetonu byla provedena krystahza.ee úpravou pH na 5,8 pomocí 5 M hydroxidu amonného. Vyloučený krystalický insulin byl separován filtrací, odvodněn promytím acetonem s etherem a dosušen v exsikáloru nad •oxidem fosforečným. Bylo izolováno 1,1370 gramu insulinu o biologické aktivitě 24,89 j/mg.Amorphous insulin was dissolved in a solution of 1 g of citric acid in 60 cm 3 of distilled water after centrifugation. After addition of 1.6 cm 3 of 5% zinc chloride solution and 12 cm 3 of acetone, crystallization was performed by adjusting the pH to 5.8 with 5 M ammonium hydroxide. The precipitated crystalline insulin was separated by filtration, dewatered by washing with acetone with ether and dried in a desiccator over phosphorus pentoxide. 1.1370 grams of insulin having a biological activity of 24.89 j / mg was isolated.
Příklad 2Example 2
Postupem podle příkladu 1 bylo zpracováno 38,2 g vysoleniny pocházející z 10,0 kg vepřové;.; o pankreatu a měrná vodivost roztoku byla nastavena na 70 mS/cm přídavkem 14,6 g vysoleniny pocházející z 3,8 kg vepřového pankreatu, přičemž byla průběžně udržována hodnota pH 6,7 až 8,1 pomocí 5 M hydroxidu amonného. Konečná hodnota píl byla nastavena na 8,0. Pevná fáze byla vyloučena po 30 minutách a po rozpuštění a filtraci běžným způsobem zkrystalizována v citrátovém pufru. na Zn-krystalický insulin. Bylo Izolováno 1,7931 g Insulinu o biologické účinnosti 23,92 j/mg.According to the procedure of Example 1, 38.2 g of saline coming from 10.0 kg of pork were treated. The pancreatic density and specific conductivity of the solution were adjusted to 70 mS / cm by adding 14.6 g of saline derived from 3.8 kg of pork pancreas while maintaining a pH of 6.7-8.1 with 5 M ammonium hydroxide. The final saw value was set to 8.0. The solid phase precipitated after 30 minutes and crystallized in citrate buffer after dissolution and filtration by conventional means. to Zn-crystalline insulin. 1.7931 g of Insulin having a biological activity of 23.92 J / mg were isolated.
Příklad 3Example 3
50,2 g vysoleniny pocházející z 10 g hovězího pankreatu vysolené síranem amonným z hrubě předčištěného vodného odparku se zbytky balastních látek bílkovinné a lipidícké povahy bylo rozpuštěno v 1 000 cm3 demineralizované vody při pH 8,0 upraveném pomocí 5 M hydroxidu sodného. Po filtraci byla hodnota měrné vodivosti roztoku upravena přídavkem chloridu sodného na 63 mS/cm. Po 40 hodinách míchání byla vyloučena pevná fáze ponechána 5 hodin sedimentovat, matečný louh byl vakuově odsků:, sediment se zbytky matečného· louhu byl oddělen na fritě č. 4 a dále zpracován jako v příkladě 1 s tím, že k extrakci balastních látek byl místo ethanolu použit ve stejném objemu aceton. Bylo izolováno 0,9803 g insulinu o biologické aktivitě 26,43 j/mg.50.2 g of the saline resulting from 10 g of bovine pancreas salted with ammonium sulfate from a coarse pre-treated aqueous evaporator with protein and lipid ballast residues were dissolved in 1,000 cm 3 of demineralized water at pH 8.0 adjusted with 5 M sodium hydroxide. After filtration, the specific conductivity of the solution was adjusted to 63 mS / cm by addition of sodium chloride. After 40 hours of stirring, the solid phase was allowed to settle for 5 hours, the mother liquor was vacuum decanted, the sediment with mother liquor residues was separated on frit # 4 and further processed as in Example 1, with the exception of ballast extraction instead of of ethanol used in an equal volume of acetone. 0.9803 g of insulin having a biological activity of 26.43 j / mg was isolated.
P ř í k 1 a d 4Example 1 a d 4
Stejným postupem jako v příkladě 3 bylo zpracováno 50,2 g vysoleniny a hodnota měrné vodivosti roztoku 90 mS/cm byla nastavena pomocí síranu sodného. Bylo izolováno 0,9956 g insulinu o biologické aktivitě 25,04 j/mg.In the same manner as in Example 3, 50.2 g of saline was treated and the specific conductivity of the 90 mS / cm solution was adjusted with sodium sulfate. 0.9956 g of insulin having a biological activity of 25.04 J / mg was isolated.
P ř í k 1 a d 5Example 1 a d 5
Podle příkladu 3 bylo zpracováno 50,2 g vysoleniny e hodnota měrné vodivosti roztoku 100 mS/cm byla nastavena pomocí síranu amonného. Bylo izolováno 0,9495 g Insulinu o· biologické aktivitě 25,51 j/mg.According to Example 3, 50.2 g of saline was treated and the specific conductivity value of the 100 mS / cm solution was adjusted with ammonium sulfate. 0.9495 g of Insulin having a biological activity of 25.51 J / mg were isolated.
P ř í kladeExample
3,2,1 g vysoleniny pocházející ze směsi 7 kg vepřového a 3 kg hovězího pankreatu, vysolené chloridem sodným bylo rozpuštěno 1 500 cm3 destilované vody při pH 2,3 nastaveném přídavky kyseliny octové. Po filtraci byla nastavena hodnota pH 7,9 pomocí 5 M hydroxidu sodného a měrná vodivost roztoku 75 mS/cní pomocí chloridu sod7 ného. Po 60 hod. míchání byla vyloučená ipevná fáze ponechána sedimentovat 5 hodin. Sediment byl zbaven zbytků kapalné fáze filtrací na fritě č. 4 a přečištěn pro-mytím 3 X 150 -cm3 methanolu. Po dosušení etherem a v exsikátoru nad oxidem fosforečným zpracován dále jako v příkladě 1. Bylo izolováno 1,10123 g insulinu o biologické účinnosti '25,51 j/mg.3.2.1 g of saline coming from a mixture of 7 kg pork and 3 kg bovine pancreas salted with sodium chloride was dissolved with 1500 cm 3 of distilled water at pH 2.3 adjusted by the addition of acetic acid. After filtration, the pH was adjusted to 7.9 with 5 M sodium hydroxide and the specific conductivity of the solution was 75 mS / c with sodium chloride. After stirring for 60 hours, the precipitated solid phase was allowed to sediment for 5 hours. The sediment was stripped of liquid phase by filtration on frit # 4 and purified by washing with 3 X 150-cm 3 methanol. After drying with ether and in a desiccator over phosphorus pentoxide, it was further processed as in Example 1. 1.10123 g of insulin having a biological activity of 25.51 g / mg were isolated.
P ř í k 1 a d 7Example 1 a d 7
Podle postupu v příkladě 6 bylo zpracováno 32,1 g vysoleniny a při jejím rozpouštění bylo nastaveno pH 2,2 pomocí 1 M kyseliny sírové, měrná vodivost 58 mS/c-m byla upravena přídavkem síranu amonného a k extrakci balastnich látek ze sedimentu bylo použito 220 cm3 ethanolu. Bylo- izolováno 1,01-77 g insulinu o biologické účinnosti 24,83 j/mg.According to the procedure of Example 6, 32.1 g of saline were treated and adjusted to pH 2.2 with 1 M sulfuric acid, the specific conductivity of 58 mS / cm was adjusted by the addition of ammonium sulfate, and 220 cm 3 were used to extract ballasts from the sediment. ethanol. 1.01-77 g of insulin having a biological activity of 24.83 J / mg were isolated.
Příklad 8Example 8
Podle postupu v příkladě 6 bylo zpracováno 32,1 g vysoleniny a při jejím rozpuštění bylo nastaveno pH 2,7 pomocí 1,5 M kyseliny chlorovodíkové a hodnota měrné vodivosti 95 mS/cm pomocí síranu sodného. Konečná hodnota -pH 8,5 byla nastavena pomocí hydroxidu draselného a pevná fáze byla oddělena centrifugaci. Bylo izolováno 1,0027 g insulinu o účinnosti 23,94 j/mg. Příklad 9According to the procedure of Example 6, 32.1 g of saline was treated and dissolved at pH 2.7 with 1.5 M hydrochloric acid and a specific conductivity of 95 mS / cm with sodium sulfate. The final -pH value of 8.5 was adjusted with potassium hydroxide and the solid phase was separated by centrifugation. 1.0027 g of insulin with an efficiency of 23.94 J / mg was isolated. Example 9
Bylo zpracováno 5,0 1 vodného filtrovaného odparku o pH 2,3 pocházejících -z 10,0 vepřového pankreatu. Pomoci 5 M hydroxidu sodného byl-a upravena hodnota pH 8,1 a hodnota měrné vodivosti 88 miS/cm byla upravena přídavkem chloridu sodného. Po 120 hodinách byla pevná fáze ponechána 5 hodin sedimentovat. Asi 9/10 kapalné fáze nad sedimentem bylo odtaženo a pevná fáze byla dosušena filtrací na fritě, promývána 5 X 200 cm3 acetonem, dosušena etherem a po rozpuštění a filtraci podrobena gel·,-vé filtraci na sloupci polydextranového gelu a potom byl insulin běžným způsobem zkrystalizová-n v přítomnosti zinečnatých iontů. Byl-o izolováno 0,8394 g insulinu v aktivů ě 24,01 j/mg.A 5.0 L aqueous filtered residue of pH 2.3 was obtained from 10.0 pork pancreas. A pH of 8.1 was adjusted with 5 M sodium hydroxide, and a specific conductivity of 88 mS / cm was adjusted by the addition of sodium chloride. After 120 hours, the solid phase was allowed to sediment for 5 hours. About 9/10 of the liquid phase above the sediment was drawn off and the solid was dried by frit filtration, washed with 5 X 200 cm 3 acetone, dried with ether, and after dissolution and filtration subjected to gel filtration on a polydextran gel column and then insulin was conventional. by crystallization in the presence of zinc ions. 0.8394 g of insulin in active substances of 24.01 J / mg was isolated.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS87657A CS261994B1 (en) | 1987-02-03 | 1987-02-03 | Process for the separation of insuline from water solutions |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS87657A CS261994B1 (en) | 1987-02-03 | 1987-02-03 | Process for the separation of insuline from water solutions |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS65787A1 CS65787A1 (en) | 1988-07-15 |
| CS261994B1 true CS261994B1 (en) | 1989-02-10 |
Family
ID=5339094
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS87657A CS261994B1 (en) | 1987-02-03 | 1987-02-03 | Process for the separation of insuline from water solutions |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS261994B1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2453331C1 (en) * | 2011-06-29 | 2012-06-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Завод Медсинтез" | Method for preparing high-purity crystalline insulin of any origin |
-
1987
- 1987-02-03 CS CS87657A patent/CS261994B1/en unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2453331C1 (en) * | 2011-06-29 | 2012-06-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Завод Медсинтез" | Method for preparing high-purity crystalline insulin of any origin |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS65787A1 (en) | 1988-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4683293A (en) | Purification of pichia produced lipophilic proteins | |
| US3907676A (en) | Process for purifying insulin | |
| CN112724241A (en) | Purification method of abamectin | |
| CA2076067C (en) | Vancomycin precipitation process | |
| JPS61236796A (en) | Improved purification of proinsulin substance | |
| US5061627A (en) | Method for preparing enzymes from crustaceans | |
| CS261994B1 (en) | Process for the separation of insuline from water solutions | |
| CA2326374C (en) | Process for the recovery and purification of a recombinant protein from a cell | |
| HAGIHARA et al. | CRYSTALLINE CYTOCHROME C II. CRYSTALLIZATION OF PIGEON CYTOCHROME C AND A COMPARISON OF TWO CRYSTALLIZATION METHODS | |
| US2595278A (en) | Preparation of insulin from pancreas glands | |
| US4014994A (en) | Process for the recovery and purification of partricin | |
| EP0089218B1 (en) | A process for purifying human chorionic gonadotropin | |
| JPS61236797A (en) | Improved purification of growth hormone substance | |
| US3875138A (en) | Process for recovering glucagon | |
| US2695861A (en) | Preparation of insulin | |
| US3872075A (en) | Salts of amino-acids with polysulfuric esters of natural gly-copeptides and process for preparing same | |
| EP0000439B1 (en) | Method of purifying an insulin-containing aqueous ethanolic raw extract from pancreas glands | |
| US3262854A (en) | Method for the recovery of heparin | |
| CS275737B6 (en) | Process for obtaining insulin substance from extracts | |
| KR880001120B1 (en) | Process for purifying elastase | |
| DE2757377A1 (en) | PROCEDURE FOR STABILIZING, CONCENTRATING AND PURIFYING INSULIN | |
| IE47041B1 (en) | Process for the recovery of heparin | |
| US2085768A (en) | Method of separating and isolating the thyreotropic and the gonadotropic hormone of the anterior lobe of the hypophysis | |
| SU654612A1 (en) | Method isolating c cytochrome | |
| HU188425B (en) | Process for the treatment of fermantation liquors containing vitamine b down 12 and other corrinoids and for preparing vitamine b down 12 concentrates |