CS221928B2 - Quick-test for evidence of the ascorbic acid - Google Patents

Description

Vynález se týká stabilního rychlotestu pro semikvwatitativní důkaz kyseliny askorbové v nápojích a v tělních tekutinách. ·

Především v ročních obdobích, ve kterých vlieoi počasí dochází k mnoha. onemocněním nachlazením, se poddání k terapeutiktym účelům a k profylaxi vysoké dávky vi.ai^minu C. Zbytkové minžství kyseliny askorbové, které tělo nestačí zpracovat lákkovou přeměnou, se vylučuje především mooč| při tom se vyskktují často koncentrace 20 mg/dl a více. Koncentrace kyseliny askortrové v moči 20 je přibližně hran.ční konneenrací, od které jsou důkazové reakce jirých, pro dia/nosu důležitých parametrů, jako je například glukosa, krev a podobně, kyselinou askor^bovou tak silně tušeny, Se se nemůže vyloučit chybná dia/nosa. Pro lékaře má tedy značný význam, aby byH informováni o přítomnoosi a mmnossví této'red redukující substance.

Také v nápojovém průmyslu je důležité vědět, kolik kyseliny askorbové je obsaženo v ovocných Slávách, vínech a podobně. Obsah kyseliny askorbové je někdy základním kri-é^rem kvalty produktu.

K důkazu kyseliny askorbové jsou známé různé chemické způsoby na mokré bázi, (Ro^ps ChemieeLeeikon, 7. vydání, Franckh^-sche Verla/sbuchhandlun/, Stuttgart 1972, str. 3 835), které jsou například založeny na redukci určiéého barviva (odbarvování dichlorfenolindofenžlu-Tiliϊamžia činidla, methylenové modi, jodu), chroτrtolгaficУCch postupech na tenké vrstvě nebo na papíře, nebo na speciálních reakcích, jako je například de^áro/mace na kyselinu dlhydrottkorbžiou a převedení na barevný osazon s 2,4-dinitooeiyyltddtaiieer.

Chemické způsoby na mokré cestě však nejsou vždy vzhledem k nutnému aparaturnímu vybavení a vzhledem k časovým důvodům vždy osvědčené a jsou vytlačovány obzvláště ^ΕΐΗ^ϋϋίmi a tlIIlikViaiitatiiníri vzorky rtchLžtestů.

Dosud známé rycht-otesty ke stanovení CyseHny askorbové jsou založeny v . podstatě na dvou již znáních .chemických způsobech na mokré cestě:

a) Odbarvování uriiééhž barviva redukcí (DE-OS 28 35 743)

b) Vznik zabarvení redukcí fosfomolybdátu na molybdenovou modř (DE-AS 23 09 794).

¾rtelotl8ty, které jsou založeny na odbarvovací reakci m^P tu principiální., nevýhodu, že rlproduklvatllné výsledky testu se získaj pouze tehdy, když se barvivo exaktně dávkuje a je absolutně statblní. Je zřejmé, že výroba rlprlduУovatllnCch ša^ž takových testovacích pásků bude klást značné nároky na kontrolu krsKty po dokojnóenn. Dále га^Р tyto rtchlžtestt tu nevýhodu, že silnější změr^y koncentrace ve spodním koncentračním rozmezí substrátu způsobují relat^ně menší změny koncentrace barviva.

V bodovém testu popsaném v Or/. Andysis, 1960, str. 405, je vy-užta redukce posfomolybdenanu amornného. Tento se však v praxi neosvědčí, nebol se musí vyrábět zdlouhavou dvojnásobnou impn/nací a na druhé stmaná je stabilní pouze po .dobu jednoho dne. Kromě toho je zapotřebí vzorky před zkouškou okyselí, nebol test je v neutrálním a v alkaícckém prostředí rušen jnými lá-tkami.

Jako zlepšení tohoto testu byl v DE-AS 2 309 794 navržen г^МоИз!, sestáv^ící se směni kyseliny 2,18-fo8lorrlotybdenové, kyseliny 2,24-fo8lorrolybdlnlié, neutrálního dusičnanu a or/anické kyseliny, výhodně kyseliny malinové. Tento sám o sobě pouužtelný rtchlžtest má však ještě následníuící nevýhody:

- Pioužt^íí směai dvou chemicky velmi podobných hetlrlkyttlin způsobuje značné nároky na Ушtrolu kvalty,

- j iko výhodná uváděná kyseliny a mnoho ostatních or/anických ' kyseHn má tu vlast nost, že při delším skladování při teplotě místnosti v uzavřené nádobě z testovacích substancí vysublimují. To má za následek, že v kombinovaných proužcích jsou negativně ovlivňovány během transportu a skladování. Tak jsou například změněny údaje pH odpovídajícími retenčními papírky.

Úkolem předloženého vynálezu tedy je nalézt takový rychlotest pro důkaz kyseliny askqrbové, který by neměl výše uvedené nevýhody, to znamená, který

- pracuje na principu zbarvení

- srovnatelně dokáže kyselinu askorbovou v ovocných šťávách (20 až 300 mg %) a v tělních tekutinách (0 až 50 mg %)

- má jednoduchou a levnou výrobu a kontrolu kvality a

- je vhodný jbaké pro přídavek do vícenásobných testů, obzvláště společně s testem hodnoty pH.

Nyní se s překvapením zjistilo, Že se dají získat rychlotesty splňující výše uvedené požadavky, které reagují za tvorby svítivě modrého, dobře odstupňovaného zbarvení, když se použijí následující součásti:

- alkalická sjíl kyseliny 2,18-fosformolybdenové

- alifatická hydroxykarboxylová kyselina, popřípadě ve směsi se svojí alkalickou solí

- chlorečnan alkalického kovu.

Alkalické soli kyseliny 2,18-fosformolybdenové jsou dobře známé sloučeniny (A. Rosenheim, A. Traube, Z. anorg. Chem. 65. 96 - 101 /1910/). Pod pojmem alifatické hydroxykarboxylové kyseliny se rozumí takové kyseliny, které obsahují vedle karboxylová skupiny nebo karboxylových skupin ještě jednu nebo více hydroxylových skupin v molekule. Bylo zjištěno, že takové sloučeniny ani při delším skladování v uzavřené nádobě nesublimují a tak neovlivňují jiné oblasti testování.

Obzvláště výhodné hydroxykarboxylová kyseliny jsou běžné a levné kyseliny jablečná, citrónová a vinná.

Podstata rychlotestů к důkazu kyseliny askorbové, sestávajících ze savého nosiče, který je impregnován fosfomolybdátem a organickou kyselinou, přičemž jako fosfomolybdát obsahuje alkalickou sůl kyseliny 2,18-fosfomolybdenové a jako organickou kyselinu obsahuje alifatickou hydroxykarboxylovou kyselinu, spočívá podle vynálezu v tom, že jako stabilizátor obsahují chlorečnany alkalických kovů, například chlorečnan sodný. Tyto chlorečnany jsou známé, běžně se vyskytující sloučeniny. Chlorečnany alkalických kovů slouží ke stabilizaci testovacího papírku, neboť modrání papírku vlivem redukujících součástí se během skladování snižuje. Jako překvapující je $řeba vidět, že silné oxidační činidlo -chlorečnan sice snižuje redukci molybdátu při skladování, ovšem analogickou redukci kyselinou askorbovou v testu neovlivňuje.

Podstata způsobu podle předloženého vynálezu spočívá v tom, že se savý nosič sytí vodným vodným roztokem

3,0 až 9,0 g/1 10,0 až 90,0 g/1 3,0 až 6,0 g/1

alkalické soli kyseliny 2,18-fosfomolybdenové, hydroxykarboxylová kyseliny a její alkalické soli, chlorečnanu alkalického kovu

a alkalickým hydroxidem se upraví hodnota pH do rozmezí 2,5 až 5,0, načež se nosič vysuší.

Roztok k sycení může obsahovat ještě a vodou mísitelné rozpouštědlo, například alkohol s 1 až 4 uhlíkovými atomy. samozřejmě se může postupovat taká tak, že se použije Kydroxykarboxylová kyselina ve směsi 8 odpovídající alkalickou s^lzí, přičemž poměr míšení . se volí tak, aby se dosáhlo hodnoty pH impregnačního roztoku v rozmezí 2,5 až 5,0. Může se pouuit také směs výše uváděných kyselin.

Uvedeným způsobem připrveeiým impregnačním rozookem se běžným způsobem sytí filtaiiní papóry. Po vysušení se retenční pappr rozřeže a dále se zpracuje napH^^ nalepením na držadlo z umělé hmoty nebo sítku podle DA8 21 18 455 ' na jednoH^é nebo kombinované testovací proužky.

Pomocí testovacích papírků podle vynálezu se stanovuje obsah kyseliny «korbové v kapalinách bučí za pvmovi barevné srovnávací tabulky nebo pomocí remisních fotometrických způsobů.

Předložený vynález je blíže objasněn následujícími příklady.

Příklad!

g sodné soH kyseliny 2,18-fosVomvlybalnové, 4 g chloreinanu sodného, 40 g kyseliny citrónové a 13,5 g ^И^Шипю^гё^ se rozpustí ve sitóěi 600 ml meUihlalkoholu a 380 ml vody. Tímto roztokem, který má hodnotu pH 3,6 se impregnuje pa^r, například typu 2668 fimy Β^ΙθΙ^ιγ & ichuui a potom se vysuší po dobu jedné hodiny při teplotě ⁶⁰ °C. Z ^tao vyro^ben^ého retenčního ^papíru se nařetau kousky o íeliklsSi 6 x 6 mm a tyto se zaisují meei _podložku z umělé hmoty a nylonovou sítku podle DE-Aá 2 118 455· Tyto testovací proužky dáv^í v .mooč s kyselinou «korbovou v nejaйlelitější oblati konceenrací 0 až 40 mg kyseliny «korbové na jeden dl moH velmi dobře odstupňované zbarvení po reakci od světle šedomodré po tmavě mo0dгVialoíou.

Takto vyrobený γι^Ι^μΙ je vhodný také k slmikkírillatívníπu důkazu kyseH-ny «korbové v ovocných Slávách nebo jiiých nápe^ch, př^emž před stmovením se popřípadě musí zředit vodou. Obbelkiíti vyhodnocení trakčního zbarvení se může provést pomoci běžného γ^ιι^^^ fotometru. V násll<iajíií tabulce jsou uvedeny hodnoty гиш^ a srovnání s okem zji^Henými rozdíly, přičemž hodnoty rumise byly měřeny spektrálním foonteim DMR 21 s reemisním nástavcem ZR 21 ftray Zeiss.

Konncetr. kyseliny «korbové v mg %	% rumise při 640 nm	R^í^Icí^j^zl zbarveni
0	89	bledě modrá
5	36	světle zelená
10	26	zelenomodrá
20	19	modrá
40	12	mo0dtVialOíá
100	8	č lгnomoVdгVialová

Příklad 2

6,5 g sodné soU kyseHny 2,18-fosfomnlybdenové se rozp^sí společně se 4 g chloreč.-. nanu sodného, a 45 gkyseliny jablečné nebo vinné ve vodě a hodnota pH tohoto roztoku se nastav pomocí 10 N hydroxidu sodného na 2,5 až 5,0. Daaší zpracování na lesllírcí papírek se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 1. Funkce a ^«Ιπο^Ι vyrobených tlstvíacích proužků v<apooííiarí produktu posanému v 1»

Příklad 3

Reagenční papírky podle příkladu 1 nebo 2 se zpracují společně s reagenčními papírky pro důkaz dusitanů, hodnoty pH, glukózy a ketonů, připravených o sobě známými, způsoby, na vícenásobné testovací proužky. Tyto vícenásobně testy se skladují v uzavřené nádobě po dobu někooika týdnů.

Pro srovnávací pokus se připraví reagenčni pap^y podle příkladu 1, jejichž složení je pozměněno v tom smslu, že namísto kyseliny citóónové a litbuumcitrátu obsahuui stejná mooství kyseliny jantarové, popřípadě kyseliny malonové a hydroxid lítný k nastavení pH na hodnotu 3,6. Takto, připravené papírky se zpracuuí výše popsaným způsobem na vícenásobné testy a rovněž se po dobu někooika týdnů skladní.

Když se zkouuejí vícenásobné testovací proužky, které obsaahuí test na kyselinu askorbovou podle předloženého vynálezu při určování pH moči, získají se správné výsledky. Když se však zkou^eí vícenásobné testovací proužky, které obsaahuí testovací pappr na kyselinu askorbovou, připravené s obsahem kyseliny jantarové nebo·kyseliny malonové, najměi se kyseeejší hodnoty pH.

Hejně óegaaivóí vliv na hodnotu pH se pozoruje u papírků podle DE-Ao 2 309 794 s obsahem natr^m^-rosío-l e-molybdátu, óatrUuoSčsfč-12-Očlybdátu, dusičnanu sodného a kyseeiny malonové.

Claims (3)

1. RychUčtjst k důkazu kyseliny askorbové, sestávající ze savého nosiče, který je impregnován fosfomoly beánem a organickou kyselinou, př^emž jako fosfomolybdát obsahuje alkalickou sůl kyseliny 2,18-fosoomolybdenové a jako organickou kyselinu obsahuje alifatickou Uydrčxykarboxylčvou kyselinu, vyznačený tím, že jako steablizátor obsahuje chlor jinan alkaicckého kovu, například chlorečnan sodný.

2. Způsob výroby rych-otestu podle bodu 1, vyznačený tím, že se savý nosič sytí vodným roztokem.

3,0 až 9,0 g/1 10,0 až 90,0 g/1 3,0 až 6,0 g/1 alkalické soU 2,1 &-f^c^sso^mo]^y^b^deno^(á, UydrčxyCarboxylové kyseliny'a její alkalické soli a chlorečoaóu alkalického kovu

a slkal^^m hydroxidem se upraví hodnota pH do rozmezí 2,5 až 5,0, načež se nosič vysuší.

3. Způsob podle bodu 2, vyznačený tím, že roztok k sycení obsahuje ještě s vodou msitelné rozpouštědlo, výhodně alkohol s 1 až 4 uhlíkovými atomy.