CS205040B2 - Method of production of the water soluble,injected cross screened orgothein - Google Patents
Method of production of the water soluble,injected cross screened orgothein Download PDFInfo
- Publication number
- CS205040B2 CS205040B2 CS765858A CS585876A CS205040B2 CS 205040 B2 CS205040 B2 CS 205040B2 CS 765858 A CS765858 A CS 765858A CS 585876 A CS585876 A CS 585876A CS 205040 B2 CS205040 B2 CS 205040B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- orgotein
- cross
- linked
- serum albumin
- molecule
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 2
- TUGDLVFMIQZYPA-UHFFFAOYSA-N tetracopper;tetrazinc Chemical compound [Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2] TUGDLVFMIQZYPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 110
- 229960004534 orgotein Drugs 0.000 claims abstract description 106
- 108010070915 orgotein Proteins 0.000 claims abstract description 105
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 15
- XUGUHTGSMPZQIW-UHFFFAOYSA-N [[4-(4-diazonioiminocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)cyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]hydrazinylidene]azanide Chemical compound C1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 XUGUHTGSMPZQIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DAUMUVRLMYMPLB-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzene-1,3-disulfonyl chloride Chemical compound OC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1S(Cl)(=O)=O DAUMUVRLMYMPLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 claims description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 claims description 3
- 244000186140 Asperula odorata Species 0.000 claims description 2
- ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N Dialdehyde 11678 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1[C@H](C[C@H](/C(=C/O)C(=O)OC)[C@@H](C=C)C=O)NCC2 ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N 0.000 claims description 2
- 235000008526 Galium odoratum Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000007329 Woodward reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 125000000962 organic group Chemical group 0.000 claims description 2
- KHAWDEWNXJIVCJ-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-4-(4-fluoro-3-nitrophenyl)sulfonyl-2-nitrobenzene Chemical compound C1=C(F)C([N+](=O)[O-])=CC(S(=O)(=O)C=2C=C(C(F)=CC=2)[N+]([O-])=O)=C1 KHAWDEWNXJIVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 19
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 abstract description 19
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 5
- ILKCDNKCNSNFMP-UHFFFAOYSA-N dimethyl octanediimidate;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.COC(=N)CCCCCCC(=N)OC ILKCDNKCNSNFMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 abstract description 2
- YUJSWFZLUCHGFO-UHFFFAOYSA-N 4-(4-azidophenyl)aniline Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 YUJSWFZLUCHGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 15
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 6
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 206010058679 Skin oedema Diseases 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 2
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 2
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 2
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 2
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 description 2
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- FRTGEIHSCHXMTI-UHFFFAOYSA-N dimethyl octanediimidate Chemical compound COC(=N)CCCCCCC(=N)OC FRTGEIHSCHXMTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 2
- MWOOKDULMBMMPN-UHFFFAOYSA-N 3-(2-ethyl-1,2-oxazol-2-ium-5-yl)benzenesulfonate Chemical compound O1[N+](CC)=CC=C1C1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 MWOOKDULMBMMPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUAXWVDEYJEWRY-UHFFFAOYSA-N 4-(4-aminophenyl)aniline;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 RUAXWVDEYJEWRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 206010006811 Bursitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N N-[1-oxo-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propan-2-yl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(C(C)NC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZTHIGRZJZPRDV-LBPRGKRZSA-N N-acetyl-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 DZTHIGRZJZPRDV-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical group [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 206010048873 Traumatic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000001886 ciliary effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 201000003146 cystitis Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- ZLFRJHOBQVVTOJ-UHFFFAOYSA-N dimethyl hexanediimidate Chemical compound COC(=N)CCCCC(=N)OC ZLFRJHOBQVVTOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000007323 disproportionation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 108010058237 plasma protein fraction Proteins 0.000 description 1
- 229940081857 plasma protein fraction Drugs 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 229960005480 sodium caprylate Drugs 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0089—Oxidoreductases (1.) acting on superoxide as acceptor (1.15)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Vynález se týká způsobů výroby vodorozpustného, injikovatelného, příčně zesítěného orgoteinu o molekulové hmotnosti až 500 000.
jako orgotein. se označují členy skupiny vodorozpustných analogů bíikovin v prakticky čisté injekční formě, to jest prakticky neobsahující jiné bílkoviny, které je doprovázejí nebo jsou s nimi sdruženy ve zdrojích jejich výskytu. V patentovém spisu US
758 682 se popisují farmaceutické prostředky obsahující orgotein. Různá použití orgoteinu jsou uvedena v patentových spisech US 3 637 441, 3 773 923, 3 773 929 a 3 781 414.
Orgoteinové metaloproteiny jsou členy skupiny analogů bílkovin, mající charakteristickou kombinaci fyzikálních, chemických, biologických a farmakodynamíckých vlastností. Každý z těchto analogů je fyzikálně charakterizován tím. že je izolovanou, prakticky čistou formou globurální, ve vodě a v pufru rozpustné bílkoviny, mající vysoce kompaktní přirozenou stavbu, která —- ačkoliv je citlivá vůči teplu — je stálá při zahřívání při teplotě 65 °C při pH 4 až po několik minut. Chemicky se každý z těchto analogů vyznačuje tím, že obsahuje pouze 0 až 2 bílkovinové aminokyseliny, malé procento uhlohydrátů, žádné tuky, 0,1 až 1,0% kovu, v důsledku obsahu 1 až 5 gramatomů/mol nejméně jednoho chelatovaného dvojmocného kovu majícího průměr iontu v rozmezí 0,60 až 1,00 A, a prakticky žádné chelatované jednomocné kovy nebo ty kovy, které jsou buněčnými jedy.
V roce 1969 bylo zjištěno, že analogy orgoteinových bílkovin z hovězího skotu jsou enzym, který má schopnost katalyzovat rozpad superox-dových zbytků disproporcionací v molekulární kyslík a peroxid vodíku. Tyto bílkoviny byly vzhledem k této enzymatické aktivitě nazvány McCordem, J. M., a Fridovichem I., J. Biol. Chem., 244, str. 6049 až 6055 (1939) superoxidovou dismutázou (SOD),
Ze studia orgoteinu, značeného izotopem 99 technicia, vyplynulo, že organotein zůstává pouze krátce v krvi po intravenózní aplikac'. Například bylo zjištěno, že do 15 minut po intravenózní aplikaci značeného orgoteinu je prakticky veškerá radioaktivita zkoncentrována v ledvinách. К podobnému, ačkoliv méně výraznému shromažďování orgoteinu v ledvinách rovněž dochází po subkutánní injekci. V klinických případech, kdy je žádoucí větší počet injekcí orgoteinu, například při revmatické arthritidě a jiných chronických zánětlivých procesech, je žádoucí udržet -orgotein v tělesných tekutinách co nejdéle.
Nyní ' bylo zjištěno, že orgotein, příčně vázaný sám se sebou nebo se sérovou nebo tkáňovou bílkovinou, má mnohem delší, například trojnásobný ' až desetinásobný poločas v séru než samotný orgotein.
Vynález se proto týká- vodorozpustného, injikovatelného, příčně zesítěného· orgoteinu. Rovněž se týká vodorozpustného, injikovatelného orgoteinu, příčně vázaného na injekční sérovou nebo tkáňovou bílkovinu. Dále se vynález -týká farmaceutických prostředků vhodných pro parenterální podání a obsahujících ve směsi s farmaceuticky nezávadným nosičem zesítěný orgotein nebo orgotein příčně vázaný k sérové nebo tkáňové bílkovině.
Předmětem vynálezu pak je způsob výroby vodorozpustného, injikovatelného, příčně zesítěného orgoteinu o molekulové hmotnosti až 500 000, při němž se molekula orgoteinu, například z hovězího skotu, příčně váže nejméně jednou organickou skupinou tvořící můstek alespoň s jednou molekulou - vodorozpustné, injikovatelné, ' neantigenní bílkoviny, kterýžto způsob se vyznačuje tím, že se samotný orgotein nebo směs orgoteinu s jinou vodorozpustnou, injikovatelnou, neantigenní bílkovinou nechá ve vodném prostředí . při teplotě ' v rozmezí od teploty mrznutí prostředí do 80 °C reagovat s diisokyanátem, diisothlokyanátem, diimidoesterem, diesterem bis(p-nitrofenyl)dikyseliny, dialdehydem, l,5-difluor-2,4-dinitrobenzenem, p,p‘-difluor-m.m‘-dinitrodifenylsulfonem, dimethyladiplmátem, fenol-2,4-disulfonylchloridem, formaldehydem, Woodwardsovým činidlem K, bisdiazobenzidinem nebo jiným podobným difunkčním činidlem pro příčné zesítění bílkovin, čímž se alespoň dvě molekuly orgoteinu nebo- alespoň jedna -molekula orgoteinu alespoň s jednou molekulou uvedené jiné neantigenní bílkoviny - spolu sváží rntermolekulární organickou -skupinou- vytvářející můstek, tvořenou zesíťujícím činidlem.
S překvapením bylo zjištěno, že značně zvětšená - molekulová hmotnost, vyplývající ze zesítění, nemá nepříznivý vliv na farmakodynamickou účinnost orgoteinu, včetně jeho' protizánětlivé účinnosti.
Výrazem „příčně- vázaný“, popřípadě „zesítěný“ se zde rozumí, že molekula orgoteinu je vázána alespoň -k jedné další molekule -orgoteinu nebo alespoň k jedné molekule injikovatelné sérové nebo tkáňové bílkoviny nejméně jednou skupinou vytvářející můstky. Přesný počet skupin vytvářejících' -můstky není rozhodujícím -činitelem, pokud je zachována rozpustnost ve vodě. Výhodně je orgotein příčně vázán - průměrně 1 až - 5 -skupinami vytvářejícími můstky, zejména pak jednou skupinou.
Přesná - chemická povaha skupin vytvářejících můstky není důležitá -a -může být nefunkční; obvykle však ' obsahuje nejméně jeden zbytek funkčních ' skupin -přítomných v zesíťujícím -činidle, jako je například karbonyl. S výhodou má skupina - vytvářející můstky přímý řetězec a má molekulovou hmotu menší než asi 200. Zejména výhodné jsou skupiny vytvářející můstky, které jsou uhlovodíkové, s výjimkou dvou zbytků obou funkčních skupin zesíťujícího činidla v polohách a a ω, které reagovaly s bílkovinou k vytvoření zesítění.
Pro příčné zesítění -orgoteinu samého se sebou nebo -se sérovým albuminem je vhodná široká paleta zesíťujících činidel. Tato činidla jsou popsána například v dílech „Methods in Enzymology“, sv. XI, str. 617 až 640 (1967) od Finn Wolda (vydavatelství C. H. W. Hirs) nebo „Chemical Modification of Proteins“, - -str. 39 -až 42 (1971) od G. E. Meanse -a R. E. Feeney-a.
Jak již bylo výše uvedeno, je možno jako vhodných zesíťujících činidel použít:
diisokyamáty:
O=C=N— (CH2)„—N=C=O η — 1 až 8
ortho, -meta, para
djisothjokyanáty:
(odpovídající výše uvedeným) diimidoestery:
N1H NH2
11' II
ROG— (CH2)„COR
R = methyl, ethyl η — 1 až 8 diestery bis (p-nitrof enyl) dikyseliny:
1 Ib =1 až 6; X= ~~^O)~ dialdehydy:
. HOC — (CHžJn—coh, kde n — 1 . až 6, zejména glutaraldehyd.
Dalšími těmito činidly jsou 1,5-diíluor-2,4-dinitrobenzen, p,p‘-difluor-m,m‘-dimtrodifenylsulfon, dimethyladipimidát, · fenol-2,4-disulfonylchlorid, formaldehyd, Woodwardovo činidlo K a bisdiazobenzidin.
K získání orgoteinu příčně vázaného s bílkovinou je možno použít kterékoliv injekční sérové nebo tkáňové bílkoviny, která je neantigenní a injiktovatelná. Protože antigenicita zčásti závisí na druhu zvířete, z něhož se bílkovina získává, tj. bílkovina získaná z jiného druhu, než je příjemce, může být antigenní . v různém stupni; protože lidé tvoří přednostní skupinu pacientů pro léčbu orgoteinem, jsou výhodnými bílkovinami lidské bílkoviny. Avšak i bílkoviny z jiných druhů savců, například z koně, krávy, psa, kočky atd., jsou vhodné pro výrobu přípravků zahrnujících orgotein . příčně vázaný s bílkovinou, které jsou . obzvláště výhodné pro léčení těchto zvířat. Ačkoliv jako výchozí látka je výhodná . bílkovina od téhož druhu jako je pacient, není nezbytně nutné použít bílkoviny od téhož druhu jako je pacient, poněvadž antigenní . odezva obvykle bývá ve snesitelných . mezích.
Výhodnými skupinami injekčních . proteinů jsou injekční rozpustné globulinové a albuminové bílkoviny. Z těchto je obzvláště výhodný sérový albumin.
Příkladem · lidského albuminu vhodného jako výchozí látka pro získání orgoteinu zesíleného s albuminem způsobem podle vynálezu jsou stabilní proteinové frakce lidské krevní plazmy. Stabilními proteinovými frakcemi plazmy jsou ony frakce, které přežijí při teplotě až 60 °C po dobu až 10 hodin a typicky -sej^ttá^vají převážně z albuminu a · malých množství a- a /Sglobuiinů.
Výhodnou skupinu těchto výchozích látek tvoří nehomogenní proteinová frakce plazmy, například frakce získaná ze supernatantu IV-1 srážením ethanolem (Cohnmetoda 6), kterážto proteinová frakce se rekonstituje na . 5% roztok (obsahující chlorid sodný a stabilizátor, například acetyltryptofan a/nebo natriumkaprylát) a pak zahřívá při teplotě 60 °C po 10 hodin ke zničení viru hepatitidy. Tato stabilní · proteinová frakce plazmy je popsána v japonském patentovém spisu 265 704 a patentovém spisu US 2 958 628. Jinou skupinu výchozích látek, které je rovněž možno použít, jsou roztoky . proteinových frakcí plazmy, které byly zahřívány při . teplotě přibližně 60 °C po kratší dobu, například po dobu 2 až . 10 hodin.
Jinou vhodnou výchozí . látkou je rozpustný albumin, získaný extrakcí lidské . placenty 1% . roztokem soli a výhodně pak zahřívaný, jak . výše popsáno. Další . popis těchto výchozích látek je uveden v patentovém spisu US 3 876 775.
Protože se pravděpodobnost antigenních účinků zvyšuje se . vzrůstající molekulovou hmotností, mají . zesítené . orgoteiny molekulovou. hmotnost . s výhodou do. 500 000, . zejména do 200 000 a obzvláště do . 100 000. Jsoli-И dvě molekuly orgoteinu spolu příčně vázány, . je . molekulová hmotnost zesítěného produktu přibližně 65 000. Jsou--i . spolu příčně vázány .· tři molekuly orgoteinu nebo 1 molekula orgoteinu a 1 molekula sérového albuminu, činí molekulová hmotnost zesíteného produktu přibližně 98 000. Jsou-li dvě molekuly orgoteinu příčně vázány s jedinou molekulou .sérového albuminu, činí molekulová hmotnost . přibližně 131 000. Ve všech případech závisí přesná hodnota '· na molekulových hmotnostech albuminu . a zbytku zesnujícího . ' činidla vytvářejícího příčné můstky.
Molekulový poměr orgoteinu k jiné injekční sérové nebo . tkáňové . bílkovině .. se může určit .stanovením . přibližné molekulové hmoty gelovou chromatografií nebo jinou - známou . metodou pro stanovení molekulové hmoty .. bílkovin a . stanovením .obsahu chelatované mědi a/nebo zinku, poněvadž orgotein je jediný . mezi bílkovinami, který obsahuje oba tyto kovy.
Farmaceutické prostředky obsahují zesílený orgotein vyrobený způsobem podle . vynálezu a farmaceuticky vhodný nosič. Forma a druh tohoto nosiče je samozřejmě dána způsobem aplikace.
Farmaceutický .prostředek má s výhodou podobu ' .sterilního injekčního preparátu, například sterilního injekčního vodného. roztoku. Roztok může být formulován známým způsobem za použití výše uvedených nosičů. Sterilním injekčním preparátem může rovněž být sterilní injekční roztok nebo . suspenze v netoxickém, parenterálně vhodném ředidle nebo rozpouštědle, například v 1,3-butandiolu.
Prostředky podle vynálezu obsahují účinné množství jednotkové dávky zesítěného orgoteinu . podle vynálezu; .například je .zesítěný orgotein přítomen v koncentraci, která je schopna vyvolat požadovanou jednotku, aplikuje-li se jednotková dávka . prostředku způsobem vhodným pro použitý farmaceutický nosič. Například kapalné prostředky, jak topické, tak injekční, obvykle -obsahují . asi 0,5 až 20 .mg zesítěného orgoteinu v . 0,25 až 10 ml, s výhodou 0,5 až 5 ml, s výjimkou infúzních roztoků, které mohou být též zředěnější, například mohou obsahovat 0,5 až. 20 mg zesítěného orgoteinu na 50 až 1000 ml, s výhodou 100 až . 500 mililitrů infúzního roztoku. Tablety, tobolky a čípky obvykle obsahují 0,1 až 25 mg, s výhodou 1 až 10 mg příčně vázaného orgoteinu v jedné aplikační . jednotce.
Zesítěný orgotein se obvykle podává nakapáním nebo injekcí, napiříklaď intramus205040 kulárně, subkutánně, intravenózně nebo intradermálně. Výhodná je intramuskulární cesta, s výjimkou při šoku, kdy se někdy dává přednost intravenozní aplikaci vzhledem к rychlejšímu vyvolání účinku, a při některých lokalizovaných poruchách, například při záření a některých cystitidách, kdy často bývá účinnější lokální injekce, nakapání a/nebo infúze. Individuální dávky obvykle bývají v rozmezí 0,5 až 20 mg. Výhodným rozmezím u člověka je asi 0,5 až 8 mg; u koní asi 5,0 až 10,0 mg. Přesná dávka není rozhodujícím činitelem a závisí na druhu choroby a vážnosti případu.
Zesítěný orgotein je podobně jako orgotein účinný pro léčení širokého spektra zánětlivých procesů, včetně těch, u nichž syntetická protizánětlivá činidla mají omezitelnou použitelnost, například pro toxické vedlejší účinky při déle trvajícím používání.
Zejména je zesítěný orgotein účinný pro zlepšení zánětlivých procesů a pro zmírnění jejích účinků, například v těch případech, kdy jsou postiženy močové cesty a klouby u savců. Je vhodný pro zmírnění symptomů a strukturních deformací, spojených s posttraumatickou artritidou, a revmatických chorob, jako je bursitida, tendonitida, osteoartritida apod.
Další podrobnosti, týkající se izolování výchozích analogů orgoteinu a použití zesítěného orgoteinu podle vynálezu, včetně způsobů aplikace, dávkovačích forem, dávkovacího režimu a zánětlivých a jiných procesů, které je možno léčit zesítěným orgoteinem, jsou uvedeny v patentovém spisu US 3 758 682.
Na základě předchozího popisu bude odborník bez jakéhokoliv dalšího podrobnějšího výkladu jistě schopen využít vynálezu v maximální míře. Dále uvedené příklady provedení slouží proto pouze к bližšímu objasnění, aniž se vynález na ně omezuje.
Příklad 1
Orgotein z hovězího skotu, zesítěný glutaraldehydem
Reakce 0,34 mg (1,7 mg/ml) orgoteinu z hovězího skotu s 0,2 mg glutaraldehydu (0,1 procenta) ve 0,2 ml 0,01 M roztoku chloridu sodného a 0,01 M fosforečnanového tlumivého roztoku o pH 7,5 je skončena do 15 minut při teplotě místnosti; získá se směs elektroforeticky více anodických (pásy 1 až 6) složek superoxidové dismutázy (SOD). Produkt je směsí nezměněného orgoteinu a orgoteinu příčně vázaného aminoskupinami к jedné nebo dvěma dalším molekulám orgoteinu, mající molekulový objem odpovídající molekulové hmotnosti asi od 30 000 (nezměněný orgotein) asi do 100 000. Orgotein a příčně vázány dimer a trimer orgoteinu se oddělí gelovou chromatografií (Sephadex G-200 nebo BioGel A 0,5).
Postupem podle příkladu 1 za použití příslušných analogů orgoteinu z člověka, ovce, koně, vepře, psa, králíka, morčete a kuřete jako výchozí bílkoviny se získají zesítěné produkty těchto analogů, u nichž jsou 2 nebo 3 molekuly orgoteinu spolu vázány můstky, tvořenými zbytky glutaraldehydu. Tyto dimerní a trimerní zesítěné produkty se snadno izolují gelovou chromatografií za použití Sephadexu G-200.
Příklad 2
Orgotein z hovězího skotu, příčně vázáný к sérovému albuminu z hovězího skotu můstky tvořenými zbytky glutaraldehydu
Postupem podle příkladu 1 se orgotein z hovězího skotu příčně váže na krystalický sérový albumin z hovězího skotu reakcí směsi 1 mg orgoteinu (1,7 mg/ml), 2 mg sérového albuminu z hovězího skotu (BSA,
3,3 mg/ml) a 0,6 mg glutaraldehydu (0,1 procenta) v 0,6 ml 0,01 M roztoku chloridu sodného a 0,01M fosforečnanového tlumivého roztoku o pH 7,5. Elektroforézou reakční směsi se zjistí tytéž víceanodické (SOD) aktivní pásy jako v příkladu 1, to jest orgotein příčně vázaný sám к sobě, plus SOD aktivní pás, pohybující se při elektroforéze se sérovým albuminem z hovězího skotu (BSA), to jest orgotein příčně vázaný к sérovému albuminu hovězího skotu.
Gelovou chromatografií (BioGel A 0;5] se zjistí, že aktivní složka superoxidové dismutázy (SOD) pohybující se elektroforeticky se sérovým albuminem z hovězího skotu (BSA) má molekulový objem mezi objemem sérového albuminu z hovězího skotu (BSA] ia objemem katalázy (molekulová hmotnost 100 000 až 200 030], kteroužto s’ožkou je orgotein příčně vázaný s jednou molekulou sérového albuminu z hovězího skotu (BSA) a orgotein příčně vázaný s dvěma molekulami sérového albuminu z hovězího skotu (BSA), a že glutaraldehyd-orgoteinové pásy, víceanodické než orgotein, mají molekulový objem až několikrát větší než objem přírodního orgoteinu a odpovídají zesítěným orgoteinům připraveným v příkladu 1. Jednotlivé zesítěné složky se izolují gelovou chromatografií, jak výše popsáno.
Glutaraldehydové koncentrace nad 0,5 % skýtají heterogennější proteinové složky a nižší celkovou aktivitu superoxidové dismutázy, pravděpodobně následkem vyšší polymerace a/nebo mez molekulových reakcí.
Stejným postupem, jako byl v tomto příkladu výše popsán, avšak za nahrazení sérového albuminu z hovězího skotu (BSA) sérovým albuminem z člověka, ovce, vepře, psa, králíka, morčete a kuřete, například výše zmíněným tepelně stálým sérovým albuminem z člověka, se získá analog organoteinu z hovězího skotu příčně vázaný к po205040 užitému sérovému albuminu. Podobným postupem je ' možno analog lidského, hovězího ' nebo jiného· ' orgoteinu příčně vázat s lidským globulinem, například gama-globulinem.
P ř í k 1 a d 3
Orgotein zesítěný bis-diazobenzidinem
Diazoniové soli reagují se zbytky tyrosinu, histidinu a · lysinu, takže je možno bifunkční diazoniové soli použít k zesítění skupin v postranních řetězcích bez valného rozlišení.
Bis-diazobenzidin se připraví diazotací 33 miligramů dihydrochloridu benzidinu v 10 mililitrech 0,15 M kyseliny chlorovodíkové při teplotě 0 °C 25 mg dusitanu sodného po · 15 minut. Hodnota pH reakční směsi se zvýší na 7 až 8 přídavkem 6 N louhu sodného· a zředění tohoto 10“2 m roztoku se za rychlého míchání při teplotě 4 °C přidají ke 2,5 miligramu na ml orgoteinu v 0,025 M roztoku fosforečnanu o pH 7,5.
Při pH 7,5, 2 X 10 “1 M bisdiazobenzidin se orgotein-benzidinový roztok pomalu zbarví červenohnědě.
Gelovou filtrací zreagované · směsi o pH 7,5, obsahující 2 X 104 M bis-diazobenzidin, · sloupcem tvořeným 35 ml Bio-Gelu A 0,5 se získá řada bílkovinných frakcí o molekulové hmotě 3 X 10~4 až po prázdný objem (molekulová hmotnost vyšší než 5 X X 105j. Většina žluté barvy projde v prázdném objemu. Elektroforéza ukazuje zvýšení elektroforetické pohyblivosti a snížení aktivity superoxidové dismutázy ·(SOD) se zvětšujícím · se molekulovým objemem. Bílkovina v oblasti molekulové hmotnosti 3 X X 104 · má strukturu pásů (pásy 1 až 8) podobnou mírně· modifikované přírodní bílkovině, avšak složky o vyšším molekulovém objemu jsou elek-troforeticky heterogenní. Zesítěný produkt je směsí zesítěných orgoteinů, sestávajících ze dvou až asi dese-ti molekul orgoteinu, spojených můstky tvořenými p,p‘-aminobifenylovými skupinami.
Při vysokém pH (9,2) a při koncentracích bisdiazobenzídinu nad 2 X 10“4 M · se orgotein vylučuje jako hnědavá sraženina. Podobně se vysráží většina bílkoviny · při pH
7,5 a koncentraci bis-diazobenzidinu 5,5 X X 10“3M.
Tedy bis-diazobenzidin snadno polymeruje orgotein i při nízkém (méně než trojnásobném) molárním nadbytku. Avšak vyšší nadbytky způsobují vysrážení a ztrátu aktivity superoxidové dismutázy (SOD).
Postupem podle příkladu 3, avšak za nahrazení orgoteinu z hovězího skotu jiným analogem orgoteinu, například lidským nebo jiným analogem, uvedeným v příkladech a 2, se získají příslušné analogy zesítěné bis-diazobenzidinovým zbytkem.
P ř í k · 1 ad 4
Orgotein zesítěný dihydrochloridem dimethylsuberimidátu
Orgotein z hovězího skotu se polymeruje dimethylsuberimidátem ' za podmínek podobných podmínkám použitým Bartholeynsem a Moorem [Science, 186, str. 444 až 445 (1974)] u ribunokleázy.
Rozsah výsledné polymerace, jak zjištěno chromatograficky · na gelu, kolísá od dimerace výše. Zvýšením koncentrace bílkoviny a koncentrace pufru vzroste průměrný rozsah polymerace.
Reakční produkt je tedy směsí zesítěných orgoteinů, sestávající ze dvou až asi še-sti molekul orgoteinu, spojených můstky tvo. . + řenými skupinami —NH—(NH2-)C— — (CH2)6—C.(=NH2)—NH—, kterážto · směs se může rozložit chromatograficky na gelu, jak výše popsáno.
5,5 mg orgoteinu z hovězího skotu se · . v
9,5 ml 0,1 M fosfoeečnanového tlumivého roztoku o pH 10 nechá reagovat po · · 1 hodinu při teplotě místnosti s 0,5 mg dihydrochloridu dimethylsuberimidátu. pH . reakční směsi se udržuje v rozmezí 9,8 až 10,0 0,1 M roztokem hydroxidu sodného. Reakční směs se eluuje ve sloupci tvořeném· 35 ml Bio-Gelu A 0,5, . 0,1 M roztokem NHiOAc .o pH 8, aby se reakce po 1 hodině přerušila a bílkoviny se rozdělily podle velikosti. Většina bílkovin stále eluuje s přírodním orgoteinem, ačkoliv podle elektroforézní analýzy jde o směs aktivních pásů superoxidové dismutázy (SOD) (od —4 do +3). Zbytek bílkovin (asi 1/4 z celkového množství) eluuje v zónách vyšších .molekulových hmot, příslušejících převážně dimeru. Po elektroforéze tvoří bílkovina o' vyšší molekulové hmotnosti -skvrnu v zóně 1 až 3.
P ř í k I a d 5
Orgotein zesítěný dihydrochloridem · dimethylsuberimidátu •Podobným způsobem jako v příkladu 4 se 20 mg orgoteinu z hovězího skotu nechá reagovat s 0,5 mg dichloroidu dimethylsuberimidátu v 0,5 ml · 0,5 M roztoku Na2HPOd, upraveného na pH 10 0,1 M roztokem hydroxidu sodného. Po 1 hodině při teplotě místnosti se reakce přeruší přidáním 50 λ 6 N roztoku NHéOAc. Podle chromatografické analýzy na gelu obsahuje reakční směs malé množství nezpolymerovaného orgoteinu a · polymery · orgoteinu jsou převážně trimery a tetramery, jak popsáno v příkladu 4.
Postupem podle příkladů 4 a 5, avšak za použití příslušných analogů orgoteinu z člověka, ovce, koně, vepře, psa, králíka, mor205040 čete a kuřete jako výchozí bílkoviny, se získají zesítěné produkty těchto analogů, u nichž je 5 nebo 6 molekul orgoteinu spolu spojeno můstky, tvořenými zbytky suberimidátu. Tyto dimerní, trimerní, tetramerní, pentamerní a hexamerní zesítěné produkty se snadno izolují chromatograficky na gelu použitím Sephadexu G-200.
Předchozí příklady je možno opakovat s podobnými výsledky, nahradí-li se reakční složky a/nebo provozní podmínky pouužité v předchozích příkladech genericky nebo specificky popsanými reakčními složkami a/nebo provozními podmínkami podle vynálezu.
Z předchozího popisu může odborník snadno stanovit charakteristické rysy vynálezu, může provést, aniž přestoupí rámec a rozsah vynálezu, různé změny a úpravy vynálezu, aby jej přizpůsobil různému použití a podmínkám.
Protizánětlivá účinnost příčně zesítěných derivátů orgoteinu byla zkoumána na zvířatech. Téměř ve všech případech byla zánětlivost u pokusných zvířat, jimž byly injikovány deriváty příčně zesítěného orgoteinu, podstatně nižší než u kontrolních zvířat, jimž byl vstříknut fyziologický roztok soli. Výsledky pokusů, provedených za použití příčně zesítěných derivátů orgoteinu s různými zesíťujícími činidly, jsou uvedeny v následující tabulce:
Tabulka
Protizánětlivá účinnost příčně zesítěných derivátů orgoteinu
| druh zánětu | dávka mg/kg inhibice” zánětu ('%) | 2P<2’ | ||
| polyorgotein, příčně | zesítěný | glutaraldehydem | ||
| absces3’ | 8 | 28 | 0,001 | |
| absces3’ | 8 | 30 | 0,001 | |
| absces3' | 8 | 29 | 0,001 | |
| edém tlapy | 1 | 25 | 0,005 | |
| edém tlapy4’ | 3 | 32 | 0,001 | |
| edém tlapy4’ | 1 | 13 | 0,2 | |
| edém tlapy4’ | 10 | 51 | 0,001 | |
| edém kůže (Ungar)5’ | 0,04 | 18 | 0,3 | |
| edém kůže (Ungar)5’ | 0,4 | 36 | 0,02 | |
| edém kůže (Ungar)5’ | 0,4 | 35 | 0,01 | |
| BSA — orgotein, příčně zesítěný glutaraldehydem | ||||
| absces 3) | 8 | 36 | 0,001 | |
| absces 31 | 8 | 23 | 0,001 | |
| absces 31 | 8 | 22 | 0,001 | |
| absces 31 | 8 | 29 | 0,001 | |
| Polyorgotein, příčně | zesítěný | bisdiazobenzi dinem | ||
| edém tlapy4’ | 0,9 | 53 | 0,01 |
” procento inhibice zánětu ve srovnání se skupinou kontrolních zvířat, jimž byl vstříknut fyziologický roztok soli;
21 pravděpodobnost, že rozdíl oproti kontrolní skupině nesouvisí s aplikovanou látkou, na bázi t-testu (Student);
3’ absces u myši, vyvolaný karagenem;
4) edém tlapy u myši, vyvolaný karagenem;
51 edém kůže u krysy, vyvolaný protikrysím séreim (Ungar).
Claims (6)
- PŘEDMĚT vynálezu1. Způsob výroby vodorozpustného, injikovatelného, příčně zesítěného orgoteinu o molekulové hmotnosti až 500 000, při němž se molekula orgoteinu, například z hovězího skotu, příčně váže nejméně jednou organickou skupinou tvořící můstek alespoň s jednou molekulou vodorozpustné, injikovatelné, neantigenní bílkoviny, vyznačující se tím, že se samotný orgotein nebo směs orgoteinu s jinou vodorozpustnou, injikovatelnou, neantigenní bílkovinou nechá ve vodném prostředí při teplotě v rozmezí od teploty mrznutí prostředí do 80 °C reagovat s diisokyanátem, diisothiokyanátem, diimidoesterem, esterem bis(p-nitrofenyl]dikyseliny, dialdehydem, l,5-difluor-2,4-dinítrobenzenem, p,p‘-difluor-jm,m‘-dinitrodifenylsulfonem, dimethyladipimátem, fenol-2,4-disulfonylchloridem, formaldehydem,Woodwardsovým činidlem K, bisdiazobenzidinem nebo jiným podobným difunkčním činidlem pro ipříčné zesítění bílkovin, čímž se alespoň dvě molekuly orgoteinu nebo alespoň jedna molekula orgoteinu alespoň s jednou molekulou uvedené jiné neantigenní bílkoviny spolu sváží intermolekulární organickou skupinou vytvářející můstek, tvořenou zesíťujícím činidlem.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako neantigenní bílkoviny použije orgoteinu.
- 3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se orgotein zesítí za vzniku 1 až 3 zesítěných molekul orgoteinu.
- 4. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se orgotein příčně váže s molekulami globulinu nebo albuminu.
- 5. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se orgotein příčně váže se sérovým albuminem.
- 6. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se orgotein příčně váže s albuminem z lidského séra.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/611,658 US4009267A (en) | 1975-09-09 | 1975-09-09 | Cross-linked orgotein |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS205040B2 true CS205040B2 (en) | 1981-04-30 |
Family
ID=24449918
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS765858A CS205040B2 (en) | 1975-09-09 | 1976-09-09 | Method of production of the water soluble,injected cross screened orgothein |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4009267A (cs) |
| JP (1) | JPS5233980A (cs) |
| AT (1) | AT349034B (cs) |
| BE (1) | BE845542A (cs) |
| CA (1) | CA1059911A (cs) |
| CS (1) | CS205040B2 (cs) |
| DD (1) | DD128696A5 (cs) |
| DE (1) | DE2637779A1 (cs) |
| DK (1) | DK396476A (cs) |
| FI (1) | FI57761C (cs) |
| FR (1) | FR2323396A1 (cs) |
| GB (1) | GB1514049A (cs) |
| IE (1) | IE43719B1 (cs) |
| IL (1) | IL50288A (cs) |
| NL (1) | NL7609878A (cs) |
| NO (1) | NO763076L (cs) |
| SE (1) | SE7609979L (cs) |
| ZA (1) | ZA765348B (cs) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2449885C3 (de) * | 1974-10-21 | 1980-04-30 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung von chemisch modifizierten haltbaren Hämoglobinpräparaten sowie das nach diesem Verfahren hergestellte modifizierte Hämoglobinpräparat |
| IL47468A (en) * | 1975-06-12 | 1979-05-31 | Rehovot Res Prod | Process for the cross-linking of proteins using water soluble cross-linking agents |
| CA1146581A (en) * | 1977-12-16 | 1983-05-17 | Pieter A. Verbrugge | Intermediates in the preparation of cyclopropylcarboxylate esters and process for their manufacture |
| US4199502A (en) * | 1978-08-04 | 1980-04-22 | Warner-Lambert Company | Removal of heparin from blood plasma samples using an insoluble protamine reaction product |
| US4473495A (en) * | 1983-07-28 | 1984-09-25 | Northwestern University | Albumin-solubilized hymenoptera venoms for vaccine use |
| US20030069174A1 (en) * | 1997-03-10 | 2003-04-10 | Ludwig Pichler | Use of human alpha1-acid glycoprotein for producing a pharmaceutical preparation |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3687927A (en) * | 1971-06-07 | 1972-08-29 | Diagnostic Data Inc | Orgotein isolation process employing single ion exchange resin having both acidic and basic groups |
| US3758682A (en) * | 1972-03-23 | 1973-09-11 | Diagnostics Data Inc | Pharmaceutical compositions comprising orgotein and their use |
| US3813289A (en) * | 1972-07-19 | 1974-05-28 | Diagnostic Data Inc | Orgotein from red blood cells |
| US3925344A (en) * | 1973-04-11 | 1975-12-09 | Community Blood Council | Plasma protein substitute |
-
1975
- 1975-09-09 US US05/611,658 patent/US4009267A/en not_active Expired - Lifetime
-
1976
- 1976-08-17 IL IL50288A patent/IL50288A/xx unknown
- 1976-08-20 FR FR7625355A patent/FR2323396A1/fr active Granted
- 1976-08-21 DE DE19762637779 patent/DE2637779A1/de not_active Ceased
- 1976-08-26 AT AT635976A patent/AT349034B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-08-26 BE BE170097A patent/BE845542A/xx unknown
- 1976-09-02 DK DK396476A patent/DK396476A/da not_active Application Discontinuation
- 1976-09-06 NL NL7609878A patent/NL7609878A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-09-07 FI FI762567A patent/FI57761C/fi not_active IP Right Cessation
- 1976-09-07 CA CA260,687A patent/CA1059911A/en not_active Expired
- 1976-09-07 DD DD7600194661A patent/DD128696A5/xx unknown
- 1976-09-08 IE IE2000/76A patent/IE43719B1/en unknown
- 1976-09-08 ZA ZA765348A patent/ZA765348B/xx unknown
- 1976-09-08 NO NO763076A patent/NO763076L/no unknown
- 1976-09-09 SE SE7609979A patent/SE7609979L/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-09-09 JP JP51108655A patent/JPS5233980A/ja active Pending
- 1976-09-09 CS CS765858A patent/CS205040B2/cs unknown
- 1976-09-09 GB GB37430/76A patent/GB1514049A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NL7609878A (nl) | 1977-03-11 |
| FR2323396B1 (cs) | 1979-09-28 |
| US4009267A (en) | 1977-02-22 |
| ATA635976A (de) | 1978-08-15 |
| DK396476A (da) | 1977-03-10 |
| IE43719L (en) | 1977-03-09 |
| GB1514049A (en) | 1978-06-14 |
| DD128696A5 (de) | 1977-12-07 |
| AT349034B (de) | 1979-03-12 |
| FI57761C (fi) | 1980-10-10 |
| FR2323396A1 (fr) | 1977-04-08 |
| IL50288A0 (en) | 1976-10-31 |
| FI57761B (fi) | 1980-06-30 |
| DE2637779A1 (de) | 1977-03-17 |
| FI762567A (cs) | 1977-03-10 |
| IL50288A (en) | 1979-09-30 |
| SE7609979L (sv) | 1977-03-10 |
| IE43719B1 (en) | 1981-05-06 |
| NO763076L (cs) | 1977-03-10 |
| BE845542A (fr) | 1977-02-28 |
| ZA765348B (en) | 1977-09-28 |
| CA1059911A (en) | 1979-08-07 |
| JPS5233980A (en) | 1977-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK166966B1 (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af immunoenzymatiske konjugater | |
| Rao et al. | α-Crystallin, a molecular chaperone, forms a stable complex with carbonic anhydrase upon heat denaturation | |
| SU1329604A3 (ru) | Способ получени конъюгированного соединени ,специфичного по отношению к клеткам меланомы | |
| Cannon et al. | The mitochondrial ATPase of brown adipose tissue Purification and comparison with the mitochondrial ATPase from beef heart | |
| CN1328285C (zh) | 干细胞增殖抑制因子及其应用 | |
| JP2648951B2 (ja) | 人体のソマトメジン担体蛋白質サブユニットとこれらの製法 | |
| JPS58500482A (ja) | 治療上活性な化合物およびそれを含有する薬学的組成物 | |
| KR19990063648A (ko) | 글루타민산 데카복실라제에 대한 항체와 폴리(에틸렌 글리콜)공액물을 섬세포에 제공하는 방법 | |
| Vogel et al. | Induction of immune cytolysis: tumor-cell killing by complement is initiated by covalent complex of monoclonal antibody and stable C3/C5 convertase. | |
| CZ341096A3 (en) | Enhanced composition of copolymer-1 | |
| EP0015059A2 (en) | Immunochemical conjugates: method and composition | |
| CS208147B2 (en) | Method of making the stabile low antigennous or the antigene of the plain insuline preparation of the protracted effect | |
| EP0516704A1 (en) | NEW INSULIN-BASED COMPOSITIONS. | |
| JPH04503154A (ja) | 変型ヒト成長ホルモン | |
| KR20200018488A (ko) | 고암모니아혈증을 치료하기 위한 글루타민 합성효소의 용도 | |
| IBRAHIM et al. | Reproductive tract secretions and bull spermatozoa contain different clusterin isoforms that cluster cells and inhibit complement‐induced cytolysis | |
| CS205040B2 (en) | Method of production of the water soluble,injected cross screened orgothein | |
| Newton et al. | The fate of intravenously administered radiolabeled gastrin | |
| Brandt et al. | Heat denaturation of human serum albumin. Migration of bound fatty acids | |
| Hallquist et al. | Lipopolysaccharide regulates cysteine-rich intestinal protein, a zinc-finger protein, in immune cells and plasma | |
| Macbeth et al. | The effect of transplantable tumors on the seromucoid fraction of rat serum | |
| JP2018508580A (ja) | ペグ化ｉｌ−１１の組成物および方法 | |
| JPH01502640A (ja) | ウシ成長ホルモン類似体 | |
| PT90019B (pt) | Processo para a preparacao e purificacao de factor de choque termico humano | |
| Cunningham et al. | Development of a radioimmunoassay for neurone specific enolase (NSE) and its application in the study of patients receiving intra hepatic arterial streptozotocin and floxuridine |