CN87108160A

CN87108160A - 制备和应用具有活性羰基的唾液酸衍生物的方法

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Publication number: CN87108160A
Application number: CN198787108160A
Authority: CN
Inventors: 吉村昌治; 柴山庄平; 沼田昌明; 伊藤正善; 志鸟善保; 小川智也
Original assignee: KANTO ISHI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: KANTO ISHI PHARMACEUTICAL CO Ltd; Mect Corp
Priority date: 1986-12-29
Filing date: 1987-12-28
Publication date: 1988-09-14
Also published as: AU8305587A; FI875738A0; US4918177A; NO166792B; NO166792C; IL84985A; FI875738L; EP0273388A2; JPS63264493A; KR950007923B1; NO875432D0; DK682287D0; NO875432L; EP0273388A3; IL84985A0; NZ223043A; AU606909B2; DK682287A; USRE34091E; KR880007570A

Abstract

具有活性羰基的式(I)唾液酸衍生物的制备方法。式I中R¹为氢或乙酰基；R²为氢、金属或低级烷基；R³为氢、羟基或从活性酯的醇部分去氢后得到的残基；Ac为乙酰基；n为1-20。式(I)的唾液酸衍生物可用做制备各种分子中带有唾液酸的复合物的原料；由于在分子中而具有活性羰基，因而具有很高的反应活性。

Description

本发明涉及一种新的唾液酸衍生物，更确切地说是涉及分子中具有活性羰基的唾液酸衍生物。本发明还涉及用这种新唾液酸衍生物制成的生理活性物质的生物半寿期延长剂、一种新的亲和层析用偶联胶的粘合剂以及该新唾液酸衍生物与诸如一种氨基酸和一种蛋白质结合组成的唾液酸衍生物。

人们已经知道，诸如N-乙酰神经氨酸的神经氨酸衍生物，即唾液酸衍生物在动物界或在某些细菌细胞表面是以唾液酸-复合物（糖蛋白、糖脂、低聚糖和多糖）的形式存在。

近年来，上述唾液酸衍生物被认为在神经功能、癌症、炎症、免疫、病毒感染、分化和激素受体等医药领域是一种重要化合物，它作为位于细胞表面的具有特殊活性的分子引起了人们的注意。

然而，关于唾液衍生物在前述唾液酸复合体中的作用机制问题，虽然已有多种理论见解，但仍存在不少疑点，所以，这些理论见解目前仍不过是某种猜测。

此外，尽管有很多天然有机物化学家研究唾液酸衍生物，并且已合成出许多结构简单的这类衍生物，但仍未发现具有突出生理活性的唾液酸衍生物。

本发明的一个目的是提供一种式（Ⅰ）所示的新唾液酸衍生物：

式中R¹代表氢或乙酰基;R²代表氢、金属或低级烷基;R³代表氢、羟基或一个从活性酯的醇部分除去氢后得到的残基;Ac代表乙酰基;n是1～20）。

本发明的另一个目的是提供各种生理活性物质的生物半寿期延长制;这种半寿期延长剂是利用式（Ⅰ）表示的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物所具有的活性羰基的高反应特性制成的。

本发明再一个目的是提供利用式（Ⅰ）所示的唾液酸衍生物所具有的活性羰基的的高反应特性制成的亲和层析偶联胶粘合剂。

本发明再一个目的是提供式（Ⅱ）所示的新的唾液酸衍生物：

（式中R¹代表氢或乙酰基;R²代表氢、钠或低碳烷基;Ac代表乙酰基;X代表从含氨基化合物中除去m个氨基后得到的残基;m是1～60，而n是1～20）。

通过下面的详细说明以及实施例，可以对本发明的上述及其他目的及本发明的新特征有更清楚的认识。

更具体地说，以上式（Ⅰ）所示的唾液酸衍生物，相当于在以下式（Ⅰa）的N-乙酰神经氨酸或以下式（Ⅰb）的N-乙酰神经氨酸衍生物的C-2位COOH基的位置上引入一个其末端有一个活性羰基的取代基，如-O（CH₂）nCOOH、-O（CH₂）n的酯或-O（CH₂）nCHO，并进一步在其C-2位OH基的位置上引入-COOH、-COOH的酯或-COOH的金属盐而得到的唾液酸衍生物。

用以下式（Ⅰc）所示的2-氯-4，7，8，9-四-O-乙酰-5-N-乙酰神经氨酸烷基酯作原料可以有效地制备式（Ⅰ）的唾液酸衍生物：

（式中R⁷代表一个低级烷基，Ac代表乙酰）。

制备式（Ⅰc）化合物的一个实例如下：用常规方法先将5-N-乙酰神经氨酸C-2位置的COOH基酯化，然后在用常规方法将4，7，8，9位O-乙酰化后，用氯取代C-2位置上的OH基，得到以上式（Ⅰc）所示的2-氯-4，7，8，9-四-O-乙酰-5-N-乙酰神经氨酸烷基酯。这时用来进行酯化的醇优选分子中没有不饱和键的低级醇，更好是甲醇。

然后用分子中有一个双键的不饱和醇取代氯，从而在上述N-乙酰神经氨酸酯的C-2位上引入一个不饱和烷氧基，即R⁸＝CH-（CH₂）n-O-（其中R⁸代表亚烷基）。n最好为1～20。

该取代反应的细节将在下面的实施例4中叙述。但一般来说，使上述N-乙酰神经氨酸酯在象四氢呋喃等极性溶剂中以及在象氩气等惰性气氛中与式为R⁸＝CH-（CH₂）n-OH的不饱和醇反应（其中R⁸代表亚烷基），可得到以下式（Ⅰd）所示的化合物。

（式中R⁷代表低级烷基;R⁸代表亚烷基，Ac代表乙酰基）。

再氧化这样引入的不饱和烷氧基，即R⁸＝CH-（CH₂）n-O-（R⁸代表亚烷基），可得到式（Ⅰe）所示的化合物。

（式中R⁷代表低级烷基）。

该氧化反应的细节将在实施例1中叙述。一般说来，将上面的式（Ⅰd）化合物溶于如二氯甲烷等极性溶剂中，再在冷却条件下引入臭氧的氧来氧化不饱和烷氧基的双键部分。

除去臭氧后，将乙酸和锌粉加到反应混合物中，在室温下反应，得到所需化合物。

另外，式（Ⅰe）化合物的烷氧基的末端所引入的醛基用高锰取钾等氧化时，很容易转变成羧基，从而得到式（Ⅰf）所示的化合物：

（式中R⁷代表低级烷基，Ac代表乙酰）。

用高锰取钾氧化上面的式（Ⅰd）化合物时，可以直接生成化合物（Ⅰf），而不经过上面的化合物（Ⅰe）。这些氧化反应的细节将在下面的实施例2中叙述。

此外，使上述式（Ⅰf）化合物与分子中具有羟基和活性羰基的化合物如N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺或N-羟基邻苯二甲酰亚胺进行酯化反应，可以得到具有活性羰基的其它唾液酸衍生物。

例如，当按照常规方法使式（Ⅰf）化合物与N-羟基琥珀酰亚胺进行酯化反应时，可得到式（Ⅰg）所示的化合物：

（式中R⁷代表低级烷基，Ac代表乙酰基）。

由于本发明的式（Ⅰ）唾液酸衍生物具有一个羰基，如：分子中的羧基或醛基，所以它对其它具有能与这些基团反应的官能团的化合物（如含氨基化合物）表现出很高的反应活性，因此作为合成各种唾液酸衍生物的原料或中间体，它是极为有用的一种化合物。

例如，当动物或人服用作为营养物的氨基酸或服用作为药物的胰岛素、生长激素、干扰素或免疫原时，如果服用的是这些物质与式（Ⅰ）的唾液酸衍生物结合所成的复合物的话，那么生理活性物质固有的生物学反应就会被这些式（Ⅰ）的唾液酸衍生物抑制或延迟。因而，在体内，上述生理活性物质的持续效应就会提高。小剂量服药也会得到可观的效果。也就是说，式（Ⅰ）的唾液酸衍生物作为上述各种生理活性物质的生物半寿期的延长剂是很有用的。

此外，当式（Ⅰ）的唾液酸衍生物和一种凝胶支持物基质彼此通过含氨基化合物组成的间隔物相结合时，就可得到式（Ⅲ）所示的用于亲和层析的偶联胶。

（式中R¹代表氢或乙酰基;R²代表氢、金属或低级烷基;Sp代表从含氨基化合物中除去k个末端氨基后得到的残基;Mx代表凝胶支持物;Ac代表乙酰基;n是1～20而k≥1）。

洗掉未结合物质后，上述用于亲和层析的偶联胶可洗脱出可有选择地保持其活性的目的物，这是因为固定在末端的唾液酸衍生物对特定的目的物例如抗原可显示特异的结合作用。因此，它可以用来纯化能识别唾液酸或其衍生物例如上述抗原等的物质。

上述含氨基化合物组成的间隔物的例子有：末端具有氨基的化合物，例如H₂N-（CH₂）₆-NH₂和HO-CH₂-CH（OH）-CH₂-NH--（CH₂）₆-NH₂。

凝胶支持物基质举例有琼脂糖等物质。

因此，式（Ⅰ）所示的唾液酸衍生物是用于亲和层析偶联胶的前述粘合剂的有用化合物。

在式（Ⅰ）所示化合物中，特别优选的用于上述粘合剂的唾液酸衍生物举例有：其结构中活性酯的醇部分是N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺、N-羟基邻苯二甲酰亚胺、N-羟基苯并三唑、对硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚、2，4，5-三氯苯酚和五氯苯酚。

以上式（Ⅱ）表示的唾液酸衍生物，更确切地说是那些式（Ⅰ）所示的唾液酸衍生物与一种含氨基化合物通过一个胺基键彼此结合的化合物。

上述含氨基化合物的例子有各种具有生理活性的物质，包括：低分子量化合物，例如低级胺、氨基酸等，以及高分子量化合物，例如肽、蛋白或结合有一个辅基和一个蛋白质的结合蛋白。

可用以上式（Ⅰ）的唾液酸衍生物作为原料有效地制备式（Ⅱ）的唾液酸衍生物。使用氨基酸或其衍生物作为含氨基化合物的制备方法见后面的实施例8到12、15和18;使用一种蛋白质作为含氨基化合物的制备方法见后面的实施例13、14和17。

当含氨基化合物是低级胺时，可用已知缩合反应制备之。

由于式（Ⅰ）的唾液酸衍生物的存在，式Ⅱ的唾液酸衍生物预期具有抑制或延迟结合有式（Ⅰ）的唾液酸衍生物的含氨基化合物的生物学反应的作用。因此，如果想在体内维持由该含氨基化合物组成的生理活性物质的生理活性，就可以服用以式（Ⅱ）的唾液酸衍生物形式存在的这种生理活性物质来达到目的。

现用以下实施例进一步说明本发明的优选实施方案，但这些例子并不限制本发明。

实施例1

甲酰甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷的合成

制备方法1

将1克（1.8814毫摩尔）2-丙烯基5-C-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷溶解在100毫升二氯甲烷中。在-78℃冷却条件下，在混合液中通臭氧2.5小时，再在室温下将氮气通入反应混合液以排出过剩臭氧。加入60毫升乙酸和1.2克锌粉，在室温下搅拌混合物43小时。将反应悬液抽滤，减压蒸发所得滤液，得到2.28克残留物。再将残留物溶于少量氯仿中，用硅胶柱色谱法处理（Wako gel C-300，230克）。用50毫升氯仿和氯仿∶乙醇（20∶1）混合液展开，分级收集。蒸馏出含有所需化合物（由薄层色谱检测出）的级分（fractions）中的溶剂，得900毫克白色粉末（产率90%）。

制备方法2

将3克（5.6442毫摩尔）2-丙烯基5-C-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷溶于300毫升甲醇中，在-76℃冷却下通臭氧3小时后，加入8毫升甲硫醚，将混合物在室温下搅拌过夜。蒸馏混合物，将乙酸乙酯加入残留物中。用水洗混合物，再用饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，再蒸出溶剂（粗产量＝2.903克）。

所得产物的硅胶薄层色谱的Rf值为0.48（展开剂为氯仿∶甲醇＝10∶1）。其核磁共振¹H-NMR（500MHz，CDCl₃，TMS）测定值都与以上制备方法1所得产物相符合。

〔该产物的物理性质〕

元素分析：C₂₂H₃₁NO₁₄·17/20H₂O＝548.80（分子量为533.49）

计算值：C：48.15，H：6.01，N：2.55

测定值：C：48.16，H：5.82，N：2.49

结构式：

[α]^23.7 _D-11.23°（C＝0.5，甲醇）

IR ν^KBr _maxcm^-1：3400（-NH-），

1740（-COOCH₃，-CHO），

1660（-CONH），

1540（-CONH，amide Ⅱ）

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

1.895（3H，s，-NHCOCH₃），

2.048;2.144;2.148（12H，all s，-OCOCH₃x4），

2.699（1H，dd，J_3ax.3eq＝12.8Hz，J_3eq.4＝4.9Hz，H_3eq），

3.814（3H，s，-COOCH₃），

4.038 to 4.089（3H，m，H-5，H-6，H-9′），

4.167（1H，dd，J＝18.0Hz，J＝0.6Hz，

），

4.248（1H，dd，J_9.9′＝12.5Hz，J_8.9＝2.4Hz，H-9），

4.372（1H，dd，J＝18.0Hz，J＝0.6Hz，

），

4.949（1H，ddd，J_3ax.4＝12.2Hz，J_4.5＝9.8Hz，J_3eq.4＝4.9Hz，H-4），

5.155 to 5.132（1H，m，-NHCOCH₃），

5.307（1H，dd，J_7.8＝8.9Hz，J_6.7＝1.5Hz，H-7），

5.351（1H，ddd，J_7.8＝8.9Hz，J_8.9′＝5.5Hz，J_8.9＝2.4Hz，H-8），

9.630（1H，t，J＝0.6Hz，-CHO）

实施例2

羟甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷的合成

制备方法1

将60毫克（0.38毫摩尔）高锰酸钾和141毫克（0.38毫摩尔）二环己基-18-冠醚-6在2毫升无水苯中的溶液搅拌30分钟，再加入100毫克（0.19毫摩尔）2-丙烯基5-C-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷，在室温下搅拌混合物24小时。向反应混合物中加入5毫升饱和碳酸氢钠水溶液将其碱化。然后过滤混合物。水洗滤液。用苯进一步洗从苯层分离出的水层，将所得水层用稀盐酸调PH至2，用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥。滤出干燥剂，减压蒸除滤液中的溶剂，得到120毫克残留物。

将残留物溶于少量氯仿中，用硅胶柱色谱法（Wako gel C-30，12克）处理。用氯仿∶乙醇（8∶1）混合液展开，分级收集。

蒸去含有所需化合物（由薄层色谱检测出）的级分中的溶剂，真空干燥残留物，得到52毫克白色粉末（产率为50.5%）。

制备方法2

将158毫克（1毫摩尔）高锰酸钾和372.5毫克（1毫摩尔）二环己基-18-冠醚-6在5毫升无水苯中的溶液在室温下搅拌一小时后，于其中加入267毫克（0.5毫摩尔）甲酰甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷，室温下搅拌混合物24小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液将其碱化，过滤混合物。水洗滤液。用苯再洗从苯层分离出的水层。用稀盐酸将水层PH调至3，用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥之。过滤除去干燥剂，减压蒸去滤液中的溶剂，得到320毫克残留物。

将残留物溶于少量氯仿中，再用硅胶柱色谱法（Wako gel C-30，0.32克）处理所得溶液。用氯仿/乙醇（10∶1）混液展开。分级收集。

蒸去含有薄层色谱检出的所需化合物的级分中的溶剂，真空干燥残留物，得到210毫克白色粉末（产率＝56.4%）。

该产物与以上制备方法1所得产品的仪器分析结果完全一致。

制备方法3

将2.6克（5.6442毫摩尔）实施例1所得产物溶于5毫升乙腈中，并加入160毫克磷酸二氢钠二水合物溶于2毫升水中的溶液，在5℃冷却条件下再加入0.5毫升35%的过氧化氢，此后逐滴加入800毫克亚氯酸钠溶于7毫升水中的溶液（PH＝4到3）。3小时后向反应混合物中加入少量亚硫酸钠，室温下搅拌混合物过夜。加稀盐酸将反应混合物的PH调至3到2，然后用氯仿萃取，用水洗，再用饱和食盐水洗，用无水硫酸镁干燥，然后蒸出溶剂（产量＝2.572克）。

硅胶薄层色谱Rf值为0.15（氯仿∶甲醇＝10∶1）核磁共振¹H-NMR（500MHz，CDCl₃，TMS）测定值与以上制备方法1所得产品完全一致。

〔该产品的物理性质〕

元素分析：C₂₂H₃₁NO₁₅·1/5H₂O＝553.09（分子量为549.48）

计算值：C：47.78，H：5.72，N：2.53

测定值：C：47.74，H：5.91，N：2.05

结构式：

IRν^KBr _maxcm^-1：3400（-NH-），

1740（-COOCH₃，-COOH），

1640（-CONH），

1550（-CONH，amide Ⅱ）

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

1.900（3H，s，CH₃CONH-），

2.033（1H，dd，J_3ax.3eq＝13.1Hz，J_3ax.4＝11.6Hz，H_3ax），

2.045;2.049;2.145（12H，all s，-OCOCH₃x4），

2.714（1H，dd，J_3ax.3eq＝13.1Hz，J_3eq.4＝4.7Hz，H_3eq），

3.816（3H，s，-COOCH₃），

4.00 to 4.06（2H，m，H-6，H-5），

4.082（1H，dd，J_9.9′＝12.1Hz，J_8.9′＝5.9Hz，H-9′），

4.291（1H，dd，J_9.9′＝12.1Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-9），

4.258（1H，d，J＝16.6Hz，

），

4.366（1H，d，J＝16.6Hz，

），

4.975（1H，ddd，J_3ax.4＝11.6Hz，J_4.5＝10.1Hz，J_3eq.4＝4.7Hz，H-4），

5.302（1H，dd，J_7.8＝8.6Hz，J_6.7＝1.4Hz，H-7），

5.347 to 5.376（1H，m，-NHCOCH₃），

5.385（1H，ddd，J_7.8＝8.6Hz，J_8.9＝5.9Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-8），

实施例3

羧甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷的合成

在冰冷却条件下，将把27毫克（1.152毫摩尔）金属钠溶于10毫升无水甲醇中所制得的溶液加到633毫克（1.152毫摩尔）羧甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷在10毫升无水甲醇中的溶液内，将混合物搅拌3小时。然后用Dowex 50 W-X8树脂（H⁺型）中和混合物。将该树脂滤出，将残留物冷凝干燥，得到417毫克无定形固体（产率为95%）。

〔该产物的物理性质〕

结构式

IRν^KBr _maxcm^-1：3400（-OH），

1740（-COOCH₃，-COOH），

1640（-CONH），

1550（-CONH-）

¹H-NMR^ppm _400MHz（DMSO-d₆，TMS）

1.847（3H，s，-NHCOCH₃），

3.684（3H，s，-COOCH₃），

4.162（1H，d，J＝16.5Hz，

），

4.218（1H，d，J＝16.5Hz，），

实施例4

9-十八碳烯基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷的合成

将1克（1.9611毫摩尔2-氯-4，7，8，9-四-O-乙酰-β-D-N-乙酰神经氨酸甲酯、421毫克（1.5689毫摩尔）油醇与1克4A分子筛悬浮于20毫升四氢呋喃中。在氩气氛中，在室温下搅拌悬浮液30分钟。然后，将620毫克（2.5306毫摩尔）水杨酸银加入其中，继续搅拌混合物20小时。将反应混悬液通过硅藻土过滤，再用乙酸乙酯洗。合并滤液和洗出液，减压蒸去溶剂，得1.75克残留物。

将残留物溶于氯仿，用硅胶柱色谱（Wako胶C-300，200克）方法处理。用乙醚二氯仿∶甲苯∶甲醇＝10∶5∶5∶1的混合溶液展开，收集各谱带（fractions）。蒸去含有通过薄层色谱分析所获标题化合物的谱带中的溶剂，真空干燥残留物，得1.22克白色粉末（产率＝83.6%）。

〔产品的物理性质〕

元素分析：C₃₈H₆₃NO₁₃·4/5H₂O＝756.33（分子量741.91）

计算值：C：60.35，H：8.61，N：1.85

实验值：C：60.28，H：8.20，N：2.03

结构式：

IRν^KBr _maxcm^-1：3420（-NH-），

1750（-COOCH₃），

1650（-CONH-），

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

0.882（3H，t，J＝6.8Hz，-CH₃），

1.885（3H，s，CH₃CONH-），

2.028;2.043;2.138;2.148（12H，all s，-OCOCH₃x4），

2.583（1H，dd，J_3ax.3eq＝12.9Hz，J_3eq.4＝4.5Hz，H_3eq），

3.201（1H，dt，J＝9.1Hz，J＝6.4Hz，

），

3.750（1H，dt，J＝9.1Hz，J＝6.4Hz，

），

3.792（3H，s，-COOCH₃），

4.027 to 4.098（2H，m，H-5，H-6），

4.112（1H，dd，J_9.9′＝12.5Hz，J_8.9′＝5.6Hz，H-9′），

4.312（1H，dd，J_9.9′＝12.5Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-9），

4.842（1H，ddd，J_3ax.4＝12.9Hz，J_4.5＝9.7Hz，J_3eq.4＝4.5Hz，H-4），

5.148（1H，m，J_NH.H＝9.3Hz，-NHCOCH₃），

5.300 to 5.370（3H，m，H-7，CH₂CH＝CHCH₂-），

5.397（1H，ddd，J_7.8＝8.2Hz，J_8.9′＝5.6Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-8），

实施例5

8-甲酰辛基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷的合成

将2.14克（2.8844毫摩尔）9-十八碳烯基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷溶解于100毫升二氯甲烷中。在-78℃，冷却下于溶液中通臭氧3小时后，通入氮气使温度回升至室温并去除过量的臭氧。再加入100毫升乙酸和2克锌粉，于室温搅拌混合物42小时。对反应混悬液进行吸滤，减压蒸馏滤液，得2.71克残留物。此残留物用少量氯仿∶乙酸乙酯∶甲苯∶乙醇的混合溶液展开。收集各谱带。蒸去含有通过薄层色谱分析所获得的标题化合物的谱带中的溶剂，得到1.49克白色粉末（产率＝81.9%）

〔产品的物理性质〕

元素分析：C₂₉H₄₅NO₁₄·9/10 H₂O＝647.89（分子量631.67）

计算值：C：53.76，H：7.28，N：2.16

实验值：C：53.71，H：7.13，N：2.49

结构式：

IRν^KBr _maxcm^-1：3450（-NH-），

2930（-CH₂-），

1740（-COOCH₃，-CHO），

1660（-CONH-），

1550（-CONH，amide Ⅱ），

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

1.884（3H，s，CH₃CONH-），

1.949（1H，t，J＝12.8Hz，H_3ax），

2.025;2.045;2.136;2.148（12H，all s，-OCOCH₃x4），

2.343（2H，t，J＝7.3Hz，-CH₂CH₂CHO），

2.577（1H，dd，J_3ax.3eq＝12.8Hz，J_3eq.4＝4.6Hz，H_3eq），

3.219（1H，dt，J＝9.3Hz，J＝6.5Hz，

），

3.747（1H，dt，J＝9.3Hz，J＝6.5Hz，），

3.792（3H，s，-COOCH₃），

4.28 to 4.14（2H，m，H-5，H-6），

4.111（1H，dd，J_9.9′＝12.4Hz，J_8.9′＝5.5Hz，H-9′），

4.313（1H，dd，J_9.9′＝12.4Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-9），

4.839（1H，ddd，J_3ax.4＝12.4Hz，J_4.5＝9.9Hz，J_3eq.4＝4.6Hz，H-4），

5.169（1H，d，J＝9.6Hz，-CONH-），

5.329（1H，dd，J_7.8＝8.3Hz，J_6.7＝1.7Hz，H-7），

5.391（1H，ddd，J_7.8＝8.3Hz，J_8.9′＝5.5Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-8），

实施例6

8-羧基辛基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷的合成

将110毫克（0.699毫摩尔）高锰酸钾和196毫克（0.5256毫摩尔）二环己基-18-冠醚-6溶于5毫升无水苯中的溶液于室温搅拌1小时后，将166毫克（0.2628毫摩尔）8-甲酰辛基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷加到该溶液中，并于室温搅拌混合物20小时。然后加入30毫升饱和碳酸氢钠水溶液，使成碱性，过滤混合物，用水洗滤液。从苯层中分离出水层，此水层进一步用苯洗。用稀盐酸调节所得水层的pH至3，用乙酸乙酯提取，再用硫酸镁干燥，过滤，减压蒸去滤液中的溶剂，得到250毫克残留物。

将此残溜留物溶于氯仿，用于硅胶柱色谱（Wako胶C-30，21克）法处理。用氯仿∶乙酸乙酯∶甲苯∶乙醇＝10∶5∶5∶2的混合溶液展开，收集各谱带。

蒸去含有通过薄层色谱分析所获标题化合物的谱带中的溶剂，真空干燥残留物，得到128毫克白色粉末（产率＝75.3%）。

〔产品的物理性质〕

元素分析：C₂₉H₄₅NO₁₅＝647.67

计算值：C：53.78，H：7.00，N：2.16

实验值：C：53.67，H：7.06，N：2.03

结构式：

IRν^KBr _maxcm^-1：3400（-NH-，-COOH），

1750（-COOCH₃，-COOH），

1660（-CONH-），

1550（-CONH，amide Ⅱ）

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

1.883（3H，s，-NHCOCH₃），

2.025，2.043，2.134，2.146（12H，all s，-OCOCH₃x4），

1.953（1H，t，J＝12.6Hz，H_3ax），

2.340（2H，t，J＝7.4Hz，-CH₂COOH），

2.574（1H，dd，J_3ax.3eq＝12.8Hz，J_3eq.4＝4.7Hz，H_3eq），

3.211（1H，dt，J＝9.3Hz，J＝6.4Hz，

），

3.744（1H，dt，J＝9.3Hz，J＝6.4Hz，

），

3.789（3H，s，-COOCH₃），

4.008 to 4.108（2H，m，H-6，H-5），

4.109（1H，dd，J_9.9′＝12.5Hz，J_8.9′＝5.5Hz，H-9′），

4.312（1H，dd，J_9.9′＝12.5Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-9），

4.836（1H，ddd，J_3ax.4＝12.6Hz，J_4.5＝9.7Hz，J_3eq.4＝4.7Hz，H-4），

5.234（1H，d，J_NHCH＝9.3Hz，-CONH-）

5.327（1H，d，J_7.8＝8.2Hz，J_6.7＝1.7Hz，H-7），

5.388（1H，ddd，J_7.8＝8.2Hz，J_8.9′＝5.5Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-8），

实施例7

8-羧基辛基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷的合成

将100毫克（0.145毫摩尔）8-羧基辛基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷溶解于10毫升无水甲醇中。在冰冷却下向溶液内加入4.6毫克（0.2毫摩尔）的金属钠，于室温搅拌混合物6小时。再用Dowex 50 W-X8（H型）树脂中和混合物。然后滤除树脂，将滤液浓缩至干，得到70毫克残留物（产率＝95%）。

〔产品的物理性质〕

结构式

IRν^KBr _maxcm^-1：3400（-OH），

1740（-COOCH₃，-COOH），

1650（-CONH），

1570（-CONH，amide Ⅱ）

¹H-NMR^ppm _500MHz（CD₃OD，TMS）

1.989（3H，s，-NHCOCH₃），

2.262（2H，t，J＝7.7Hz，-CH₂COOH），

2.668（1H，dd，J＝4.4Hz，12.8Hz，H_3eq），

3.830（3H，s，-COOCH₃），

实施例8

N-〔（5-C-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯）氧基乙酰〕-L-丙氨酸甲酯的合成

制备方法1

将256毫克（0.4659毫摩尔）羧甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷、65毫克（0.4659毫摩尔）L-丙氨酸甲酯盐酸盐、107毫克（0.5691毫摩尔）WSC〔即1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺盐酸盐〕和83毫克（0.4659毫摩尔）HONB（即N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺）溶于8毫升二甲基甲酰胺中，再于所得溶液内加入47毫克（0.4659毫摩尔）N-甲基吗啉。将混合物在冰冷却下搅拌1小时，然后在室温搅拌24小时。

对反应混合物进行吸滤，减压蒸去滤液中的溶剂，得到690毫克油状产物。

将此油状产物溶于少量甲醇中，用Sephadex LH色谱柱（2×40厘米）进行处理，用甲醇展开，收集各谱带。

将含有通过薄层色谱分析所得的标题化合物的谱带中的溶剂蒸发除去，真空干燥残留物，得到215毫克白色粉末（产率＝72.6%）。

制备方法2

将36毫克（56微摩尔）由后面的实施例16获得的产品和13毫克（73微摩尔）L-丙氨酸甲酯盐酸盐溶于3毫升二甲基甲酰胺中，溶液中加入0.5毫升N-甲基吗啉，室温下搅拌混合物过夜。蒸去反应混合物中的溶剂，用乙酸乙酯提取残留物，再用水洗，然后用饱合食盐水洗，用无水硫酸镁干燥，再除去溶剂。所得残留物用Sephadex HL-20柱色谱纯化（用甲醇洗脱）（产量＝18.5毫克，产率＝51.7%）。

本产品在硅胶薄层色谱上的Rf＝0.96（氯仿∶甲醇＝10∶1），其¹H-NMR（500MHz，CDCl₃，TMS）的测定值与上述制备方法，所得产品一致。

制备方法3

将82.0毫克（0.176毫摩尔）在后面的实施例12中获得的产品溶于1毫升吡啶/1毫升乙酸酐中，室温搅拌混合物过夜。对反应混合物进行蒸馏，残留物用硅胶柱色谱纯化（C-300，20克，氯仿∶甲醇＝5∶1）（产量＝62毫克，产率＝56%）。

在产品在硅胶薄层色谱上的Rf＝0.96（氯仿∶甲醇＝10∶1），其¹H-NMR（500MHz，CDCl₃，TMS）的测定值与以上制备方法1所得产品一致。

〔产品的物理性质〕

元素分析：C₂₆H₃₈N₂O₁₆·1/5 H₂O＝638.19（分子量634.59）

计算值：C：48.93，H：6.06，N：4.39

实验值：C：48.88，H：5.99，N：4.21

结构式：

（式中-R₄代表

）

IRν^KBr _maxcm^-1：3400（-NH-），

1750（-COOCH₃），

1670（-CONH-），

1540（-CONH，amide Ⅱ），

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

1.441（3H，d，J＝7.2Hz，），

1.898（3H，s，-NHCOCH₃），

2.039，2.042，2.120，2.128（12H，all s，-OCOCH₃x4），

2.050（1H，dd，J_3ax.3eq＝13.0Hz，J_3eq.4＝11.5Hz，H_3ax），

2.673（1H，dd，J_3ax.3eq＝13.0Hz，J_3eq.4＝4.8Hz，H_3eq），

3.765（3H，s，COOCH₃，alanine），

3.822（3H，s，2-COOCH₃）

4.001（1H，d，J＝15.2Hz，

），

4.012 to 4.086（1H，m，H-5），

4.095（1H，dd，J_9.9′＝12.5Hz，J_8.9′＝5.7Hz，H-9′），

4.187（1H，dd，J_5.6＝10.8Hz，J_6.7＝2.0Hz，H-6），

4.268（1H，dd，J_9.9′＝12.5Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-9），

4.286（1H，d，J＝15.2Hz，

），

4.633（1H，q，J＝7.3Hz，

），

5.007（1H，ddd，J_3ax.4＝11.5Hz，J_4.5＝10.5Hz，J_3eq.4＝4.8Hz，H-4），

5.243（1H，d，J＝5.2Hz，-CONH-），

5.300（1H，dd，J_8.7＝8.2Hz，J_6.7＝2.0Hz，H-7），

5.372（1H，ddd，J_8.7＝8.2Hz，J_8.9′＝5.7Hz，J_8.9＝2.6Hz，H-8），

5.305（1H，d，J＝6.1Hz，-CONH-）

实施例9

Nα-CBZ-Nε-〔（5-C-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯）氧基乙酰〕-L-赖氨酸甲酯的合成

将275毫克（0.5毫摩尔）羧甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰α-D-甘油-D-半乳-吡喃壬糖酮甲酯苷、165.4毫克（0.5毫摩尔）N-α-CBZ-L-赖氨酸甲酯盐酸盐（CBZ代表苄氧羰基，下文意义相同）、115毫克（0.6毫摩尔）WSC〔1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺盐酸盐〕和89.6毫克（0.5毫摩尔）HONB（N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺）溶于10毫升二甲基甲酰胺中，再加入50.6毫克（0.5毫摩尔）N-甲基吗啉，吸滤混合液，蒸去滤液中的溶剂，得到1.2167克油状产物。将油状产物溶于少量甲醇中，用于Sephadex LH-20色谱柱上（2×40厘米），用甲醇展开，收集各谱带，蒸除含有由薄层色谱分析获得的标题化合物的谱带中的溶剂，得到341毫克白色粉末（产率＝82.6%）。

〔产品的物理性质〕

元素分析：C₃₇H₅₁N₃O₁₈＝825.82

计算值：C：53.81，H：6.22，N：5.09

实验值：C：53.81，H：6.12，N：5.06

结构式：

（式中-R⁵代表

）

IRν^KBr _maxcm^-1：3400（-NH-），

1750（-COOCH₃，-NHOCOCH₂-），

1670（-CONH-），

1540（-CONH，amide Ⅱ），

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

1.890（3H，s，-NHCOCH₃），

2.014（1H，dd，J_3ax.3eq＝12.9Hz，J_3ax.4＝11.7Hz，H_3ax），

2.032;2.035;2.115;2.127（12H，all s，-OCOCH₃x4），

2.630（1H，dd，J_3ax.3eq＝12.9Hz，J_3eq.4＝4.8Hz，H_3eq），

3.743（3H，s，-COOCH₃，lysine），

3.803（3H，s，2-COOCH₃），

3.988（1H，d，J＝15Hz，

），

4.067（1H，dd，J_9.9′＝12.3Hz，J_8.9′＝5.7Hz，H-9′），

4.138（1H，dd，J_5.6＝10.8Hz，J_6.7＝1.8Hz，H-6），

4.202（1H，d，J＝15Hz，

），

4.272（1H，dd，J_9.9′＝12.3Hz，J_8.9＝2.5Hz，H-9），

4.363（1H，m，

），

4.956（1H，ddd，J_3ax.4＝11.7Hz，J_4.5＝9.8Hz，J_3eq.4＝4.8Hz，H-4），

5.108（2H，s，-COOCH₂-φ），

5.297（1H，dd，J_7.8＝8.3Hz，J_6.7＝1.8Hz，H-7），

5.325（1H，ddd，J_8.9＝2.5Hz，J_8.9′＝5.7Hz，J_7.8＝8.3Hz，H-8），

7.31 to 7.36（5H，m，苯基-H）

实施例10

N（9-〔（5-C-乙酰胺-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮甲酯）氧基〕壬酰）-L-丙氨酸甲酯的合成

将250毫克（0.44毫摩尔）8-羧辛基5-C-乙酰胺基-3.5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷、65毫克（0.466毫摩尔）L-丙氨酸甲酯盐酸盐、107毫克（0.466毫摩尔）WSC和83毫克（0.466毫摩尔）HONB溶于10毫升二甲基甲酰胺中，再加入47毫克（0.466毫摩尔）N-甲基吗啉，于室温搅拌混合物一天一夜。用乙酸乙酯提取反应混合物，用水洗提取物，再用饱和食盐水洗。用无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，用硅胶色谱柱（Wako胶C-300，50克，乙酸乙酯）纯化所得的残留物，得到249毫克油状产品（产率＝86.8%）。

〔产品的物理性质〕

结构式：

（式中-R⁴代表

）

IRν^KBr _maxcm^-1：3300（-NH-），

1750（-COOCH₃），

1660（-CONH-），

1540（-CONH，酰胺Ⅱ），

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

1.400（3H，d，J＝7.0Hz，

），

1.882，2.026，2.043，2.137，2.146

（15H，all s，-OCOCH₃x5），

1.95（1H，t，J＝12.8Hz，H_3ax），

2.58（1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H_3eq），

3.75（3H，s，-COOCH₃，丙氨酸），

3.79（3H，s，2-COOCH₃），

4.61（1H，m，

），

4.84（1H，ddd，J＝4.8，10.0，12.8Hz，H-4）

实施例11

Nα-CBZ-Nε-（9-〔（5-C-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯）氧基〕壬酰）-L-赖氨酸甲酯的合成

将67毫克（0.1034毫摩尔）8-羟辛基5-C-乙酰胺基-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷、34毫克（0.1034毫摩尔）N-α-CBZ-L-赖氨酸甲酯盐酸盐、24毫克（0.1241毫摩尔）WSC和19毫克（0.1034毫摩尔）HONB溶于2毫升二甲基甲酰胺中，再加入10.5毫克（0.1034毫摩尔）N-甲基吗啉，室温搅拌混合液20小时。吸滤反应混合物，减压蒸去滤液中的溶剂，得170毫克油状产物。

将此油状产物溶于少量甲醇中，用于Sephadex LH-20色谱柱上（2×40厘米），用甲醇展开，收集各谱带。

将含有由薄层色谱分析获得的标题化合物的谱带中的溶剂蒸去，得61毫克白色粉末（产率＝67%）。

〔产品的物理性质〕

结构式：

（式中-R⁵代表

）

¹H-NMR^ppm _400MHz（CDCl₃，TMS）

1.871（3H，s，-NHCOCH₃），

1.939（1H，dd，J_3ax.3eq＝12.7Hz，J_3ax.4＝12.3Hz，H_3ax），

2.018，2.035，2.127，2.140（12H，皆为s，-OCOCH₃x4），

2.576（1H，dD，J_3ax.3eq＝12.7Hz，J_3eq.4＝4.5Hz，H_3eq），

3.738（3H，s，-COOCH₃，lysine），

3.786（3H，s，2-COOCH₃），

4.311（1H，dd，J_9.9′＝12.5Hz，J_8.9＝2.5Hz，H-9），

4.32 to 4.40（1H，m，

），

4.836（1H，ddd，J_3ax.4＝12.3Hz，J_4.5＝9.7Hz，J_3eq.4＝4.5Hz，H-4），

5.106（2H，s，φ-CH₂OCO-），

5.322（1H，dd，J_7.8＝8.2Hz，J_6.7＝1.7Hz，H-7），

5.385（1H，ddd，J_7.8＝8.2Hz，J_8.9′＝5.6Hz，J_8.9＝2.5Hz，H-8），

7.31 to 7.36（5H，m，苯基-H）

实施例12

N-〔（5-C-乙酰胺基-3.5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯）氧基乙酰〕-L-丙氨酸甲酯的合成

制备方法1

将100毫克（262微摩尔）羧甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷、25.4毫克（262微摩尔）的L-丙氨酸甲酯盐酸盐、41.8毫克（314微摩尔）WSC和32.4毫克（262微摩尔）HONB溶于10毫升二甲基甲酰胺中，在搅拌及水冷却下加入18.4毫克（262微摩尔）N-甲基吗啉，再于室温搅拌混合物一天一夜。

蒸馏反应混合物，通过硅胶色谱柱（C-300，20克，氯仿∶甲醇＝5∶1）纯化残留物。然后通过Dowex 50W-X8再次纯化，得到75毫克油状产品（产率＝61.4%）。

硅胶薄层色谱：Rf＝0.55（丁醇∶乙醇∶水＝2∶1∶1）

制备方法2

将50毫克（1.1毫摩尔）在后面的实施例18的制备方法1中获得的产品溶于0.5毫升二甲亚砜中，再加入过量的碘甲烷，于室温搅拌混合物1.5小时，用硅胶色谱柱（C-300，10克，氯仿∶甲醇＝5∶1）纯化反应混合物，在硅胶薄层色谱比移值Rf＝0.27/0.17的谱带中，标题物质从Rf＝0.17的谱带中得到。其¹H-NMR测定数据（500MHz，CDCl₃，TMS）与以上制备方法1所得物质一致。

〔产品的物理性质〕

结构式

（式中-R⁴代表）

IRν^KBr _maxcm^-1：3400（-NH-，-OH），

1740（-COOCH₃），

1660（-CONH-），

1540（-CONH，酰胺Ⅱ），

¹H-NMR^ppm _500MHz（CD₃OD，TMS）

1.414（3H，d，J＝7.3Hz，-CH₃），

1.850（1H，dd，J＝11.3，12.8Hz，H_3ax），

2.008（3H，s，-NHCOCH₃），

2.742（3H，dd，J＝4.7，12.9Hz，H_3eq），

3.731（3H，s，-COOCH₃，丙氨酸），

3.832（3H，s，2-COOCH₃），

4.117（1H，d，J＝15.4Hz，

），

4.286（1H，d，J＝15.4Hz，

），

4.448（1H，q，J＝7.3Hz，），

实施例13

N-〔（5-C-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮甲酯）氧基乙酰基〕-牛血清白蛋白的合成

制备方法1

将259毫克（0.4714毫摩尔）羧甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷、108毫克（0.5657毫摩尔）WSC和85毫克（0.4717毫摩尔）HONB溶于5毫升水∶二氧杂环己烷＝1∶1的混合液中，再加入48毫升N-甲基吗啉，于室温搅拌混合物1小时。然后在6℃冷却下，将521毫克（7.86微摩尔）的BSA（牛血清白蛋白）在10毫升水中的溶液加入其中，搅拌混合物24小时。吸滤反应混合物，减压冷凝滤液，再用100毫升水稀释并透析，冷冻干燥残液，得170毫克无色非晶形结晶。

制备方法2

将210毫克（327微摩尔）在后面的实施例16中获得的产品溶于1毫升二甲基甲酰胺中;另将203.8毫克BSA溶于12.9毫升的磷酸缓冲液（PH＝7.5）中。将前一溶液于4℃冷却下边搅拌边一点一点地加到后一溶液中。于4℃冷却下搅拌混合物过夜。透析反应混合物，冷冻干燥，得到与以上制备方法1一样的物质（产量＝94毫克）

〔产品的物理性质〕

结构式

IRν^KBr _maxcm^-1：1740（-COOCH₃）

¹H-NMR^ppm _500MHz（D₂O，TSP）

1.970（s，-NHCOCH₃），

2.100，2.136，2.208，2.242（all s，-OCOCH₃x4），

3.919（s，-COOCH₃），

实施例14

〔（5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯）氧基乙酰〕-牛血清白蛋白的合成

将130毫克（0.3431毫摩尔）羧甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷、104毫克（0.543毫摩尔）WSC和81毫克（0.453毫摩尔）HONB溶于20毫升二甲基甲酰胺∶水＝1∶1的混合液中，再加入10毫升含有46毫克（0.453毫摩尔）N-甲基吗啉和470毫克（7.093微摩尔）BSA的水溶液，于室温搅拌混合物24小时。过滤反应混合物，透析滤液。冷冻干燥残留物，得到580毫克无色非晶形结晶。

〔产品的物理性质〕

结构式

实施例15

N-〔（5-C-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮甲酯）氧基乙酰〕-D-丙氨酸甲酯的合成

将200毫克（364微摩尔）在实施例2中得到的产品、50.6毫克（364微摩尔）L-丙氨酸甲酯盐酸盐、107毫克（466微摩尔）WSC和283毫克（466微摩尔）HONB溶于5毫升二甲基甲酰胺中，再加入47毫克（466微摩尔N-甲基吗啉于室温搅拌混合物过夜。蒸馏反应混合物，通过硅胶色谱柱（C-300，30克，氯仿∶甲醇＝20∶1）纯化残留物，得到125毫克产品（产率＝54%）。

硅胶薄层色谱：Rf＝0.79（氯仿∶甲醇＝10∶1）

〔产品的物理性质〕

结构式

（其中-R⁴代表）

¹H-NMR^ppm _500MHz（CDCl₃，TMS）δ

1.460（3H，d，J＝7.3Hz，-CH-CH₃），

1.895（3H，s，-NHCOCH₃），

2.039;2.041;2.123，2.129（12H，all s，-OCOCH₃x4），

2.680（1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H_3eq），

3.760（3H，s，-COOCH₃，alanine），

3.825（3H，s，2-COOCH₃），

3.995（2H，d，J＝15.4Hz，

），

4.177（2H，d，J＝15.4Hz，

），

4.641（1H，m，

），

4.946（1H，m，4H），

5.378（1H，m，8H）

实施例16

（琥珀酰亚胺基氧羰基）甲基5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯苷的合成

将101.4毫克（185微摩尔）实施例2中制得的产品和232毫克（896微摩尔碳酸二琥珀酰亚胺基酯（N，N′-disuccinimido carbonate）（DSC）溶于15毫升乙腈中，然后再加入320毫升无水吡啶，于室温搅拌混合物过夜。蒸馏反应混合物，然后加入乙酸乙酯。用水洗乙酸乙酯层，再用饱合食盐水洗，用无水硫酸镁干燥，蒸除溶剂，得到210毫克产品。

硅胶薄层色谱：Rf＝0.477（氯仿∶甲醇＝10∶1）

〔产品的物理性质〕

结构式

¹H-NMR^ppm _500MHz（CDCl₃，TMS）δ

1.885;2.035;2.049，2.147，2.162

（15H，all s，-OCOCH₃x5），

2.708（1H，dd，J＝4.6，13.0Hz，H_3eq），

2.824 to 2.869（4H，m，-CO-CH₂-CH₂-CO-），

3.816（3H，s，-COCH₃），

4.993（1H，m，4H），

4.605（1H，d，J＝17.2Hz，

），

4.708（1H，d，J＝17.2Hz，

），

实施例17

〔（5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸钠）氧基乙酰〕-牛血清白蛋白的合成

在1毫升水中溶解25毫克在实施例13，制备方法2中得到的产物，并加入1.92微升0.769N的NaOH水溶液。混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物透析并冻干层，得到11毫克产物。

结构式

m＝6（平均值）

用高效液相色谱法测定该唾酸：

向5毫克上述产物中加入1毫升0.1M硫酸，混合物在80℃加热、搅拌1小时。将反应混合物离心分离。将20微升上清液注入高效液相色谱柱进行分析。结果是，每分子BSA平均结合6个唾液酸残基（m＝6）。

（高效液相色谱柱条件）

柱 HPX-87H，300毫米×7.8毫米（可由Biorad公司购得）

流速 0.9毫升/分

柱温 42℃

洗脱剂 0.01N硫酸

检测器 UV206毫微米

实施例18

N〔（5-C-乙酰胺基-3，5-二脱氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸钠）氧基乙酰〕-L-丙氨酸钠的合成

制备方法1

在7毫升含有四氢呋喃∶甲醇＝5∶2的溶液中溶入150毫克（204微摩尔）实施例8中制得的产物，再加入1.23毫升（1.23毫摩尔）1N Na OH水溶液。混合物室温搅拌过夜。

反应混合物用Dowex 50W-X80树脂中和，蒸去溶剂，得101毫克残余物。

根据硅胶薄层色谱（氯仿∶甲醇∶乙酸＝5∶3∶0.5）分析，所得产物是Rf分别为0.056和0.042（目标化合物）的两种化合物的1∶1混合物。

制备方法2

在5毫升四氢呋喃中溶入200毫克实施例8中制得的产物，再加入1.4毫升1N Na OH水溶液。混合物在室温搅拌1小时。然后加入2毫升水，混合物继续搅拌30分钟。使反应混合物通过Sephadex HL-20（用甲醇洗脱）进行提纯，得到261毫克产品。

根据硅胶薄层色谱（氯仿∶甲醇∶乙酸＝5∶3∶0.5）分析，此产品是Rf分别为0.056和0.042（目标化合物）的两种化合物的1∶10混合物。

结构式

Claims

1、制备具有一个活性羰基的一种唾液酸衍生物的方法，该衍生物的结构式如下：

(式中R¹代表氢或乙酰，R²代表氢、金属或低级烷基，R³代表氢、羟基或从一个活性酯的醇部分去除氢原子后得到的残基，Ac代表乙酰，n为1～20)

该方法包括以下步骤：

(a)在一种惰性气氛中，使式(Ⅴ)的2-氯-4，7，8，9-四-O-乙酰-5-N-乙酰神经氨酸酯

(式中R⁷代表低级烷基，Ac代表乙酰)

在四氢呋喃中与式为R⁸=CH-(CH₂)n-OH(式中R⁸代表亚烷基，n为1～20)的不饱和醇反应，得到式[Ⅵ]代表的一种化合物：

(式中R⁷代表低级烷基，R⁸代表亚烷基，Ac代表乙酰)

以及(b)(i)将式[Ⅵ]化合物的末端不饱和基团-CH=R⁸氧化，或(ii)将(i)的氧化所产生的-COOH基酯化，得到上述式(Ⅰ)的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物。

2、制备权利要求1的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅰa]化合物：

（式中Ac代表乙酰）。

3、制备权利要求1的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅰb]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

4、制备权利要求1的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物的方法，其中给化合物是式[Ⅰc]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

5、制备权利要求1的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅰd]化合物：

6、制备权利要求1的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物的方法，其中给化合物是式[Ⅰe]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

7、制备权利要求1的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅰf]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

8、制备权利要求1的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物的方法，其中活性酯的醇部分选自N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺、N-羟基邻苯二甲酰亚胺、N-羟基苯并三唑、对硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚、2，4，5-三氯苯酚和五氯苯酚。

9、生理活性物质的生物半寿期延长剂，其中含有式[Ⅰ]的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物：

（式中R¹为氢或乙酰，R²为氢、金属或低级烷基，R³为氢、羟基或从活性酯的醇部分中去除氢后得到的残基，Ac为乙酰，n为1～20）。

10、根据权利要求9的生理活性物质的生物半寿期延长剂，其中该化合物为式[Ⅰh]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

11、根据权利要求9的生理活性物质的生物半寿期延长剂，其中该化合物为式[Ⅰi]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

12、根据权利要求9的生理活性物质的生物半寿期延长剂，其中该化合物为式[Ⅰj]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

13、根据权利要求9的生理活性物质的生物半寿期延长剂，其中该化合物为式[Ⅰk]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

14、根据权利要求9的生理活性物质的生物半寿期延长剂，其中该化合物为式[Ⅰl]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

15、根据权利要求9的生理活性物质的生物半寿期延长剂，其中该化合物为式[Ⅰm]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

16、根据权利要求9的生理活性物质的生物半寿期延长剂，其中活性酯的醇部分是选自N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺、N-羟基邻苯二甲酰亚胺、N-羟基苯并三唑、对硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚、2，4，5-三氯苯酚和五氯苯酚。

17、一种亲和层析偶联胶的粘合剂，其中含有式[Ⅰ]的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物：

（式中R¹为氢或乙酰，R²为氢、金属或低级烷基，R³为氢、羟基或从一个活性酯的醇部分去除氢后得到的残基，Ac为乙酰，n为1～20）。

18、根据权利要求17的亲和层析偶联胶粘合剂，其中该化合物为式[Ⅰh]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

19、根据权利要求17的亲和层析偶联胶粘合剂，其中该化合物为式[Ⅰi]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

20、根据权利要求17的亲和层析偶联胶粘合剂，其中该化合物为式[Ⅰj]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

21、根据权利要求17的亲和层析偶联胶粘合剂，其中该化合物为式[Ⅰk]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

22、根据权利要求17的亲和层析偶联胶粘合剂，其中该化合物为式[Ⅰl]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

23、根据权利要求17的亲和层析偶联胶粘合剂，其中该化合物为式[Ⅰm]化合物：

（式中Ac为乙酰）。

24、根据权利要求17的亲和层析偶联胶粘合剂，活性酯的醇部分选自N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺、N-羟基邻苯二甲酰亚胺、N-羟基苯并三唑、对硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚、2，4，5-三氯苯酚和五氯苯酚。

25、制备式[Ⅱ]的唾液酸衍生物的方法：

（式中R¹为氢或乙酰，R²为氢、钠或低级烷基，Ac为乙酰，X为从一种含氨基化合物中除去m个氨基后得到的残基，m为1～60，n为1～20）

该方法包括以下步骤：

（a）在惰性气氛中，使式（Ⅴ）的2-氯-4，7，8，9-四-O-乙酰-5-N-乙酰神经氨酸酯

（式中R⁷为低级烷基，Ac为乙酰）

在四氢呋喃中与式为R⁸＝CH-（CH₂）n-OH（式中R⁸代表亚烷基，n为1～20）的不饱和醇反应，得到式[Ⅵ]代表的一种化合物：

（式中R⁷为低级烷基，R⁸为亚烷基，Ac为乙酰）

以及（b）将N-甲基吗啉加到含有式[Ⅷ]化合物：

（式中R⁷为低级烷基，Ac为乙酰）

以及1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺和N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺的二甲基甲酰胺溶液中，使它们进行反应，生成上面式[Ⅱ]的具有一个活性羰基的唾液酸衍生物。

26、根据权利要求25的制备唾液酸衍不物的方法，其中X是从一个氨基酸或其衍生物中去除一个氨基后得到的残基。

27、根据权利要求26的制备唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅱa]化合物：

（式中-R⁴为

，Ac为乙酰）。

28、根据权利要求26的制备唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅱb]化合物：

（式中-R⁵为

，Ac为乙酰，CBZ为苄氧羰基）。

29、根据权利要求26的制备唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅱc]化合物：

（式中-R⁴为，Ac为乙酰）。

30、根据权利要求26的制备唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅱd]化合物：

（式中-R⁵为，Ac为乙酰，CBZ为苄氧羰基）。

31、根据权利要求26的制备唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅱe]化合物：

（式中-R⁴为

，Ac为乙酰）。

32、根据权利要求26的制备唾液酸衍生物的方法，其中该化合物是式[Ⅱf]化合物：

（式中-R⁶为

，Ac为乙酰）。

33、根据权利要求26的制备唾液酸衍生物的方法，其中X是从肽或蛋白质，或从与上述肽或蛋白质和辅基相结合的结合蛋白质中除去1～60个氨基后得到的残基。

34、根据权利要求33的制备唾液酸衍生物的方法，其中该化合物为式[Ⅱg]化合物：

（式中Ac为乙酰，BSA为牛血清白蛋白）。

35、根据权利要求33的制备唾液酸衍不物的方法，其中该化合物为式[Ⅱh]化合物：

（式中Ac为乙酰，BSA为牛血清白蛋白）。

36、根据权利要求33的制备唾液酸衍不物的方法，其中该化合物为式[Ⅱi]化合物：

（式中Ac为乙酰，BSA为牛血清白蛋白）。