CN1964985A - 3－β－D－呋喃核糖基噻唑并[4,5－d]嘧啶核苷类及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及具有免疫调节活性的3－β－D－呋喃核糖基噻唑并[4，5－d]嘧啶核苷类和含有这类化合物的药物组合物。本发明还涉及这类化合物和组合物的治疗或预防应用，以及涉及通过给予有效量的这类化合物治疗本文所述疾病和病症的方法。

Description

3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶核苷类及其应用

本申请作为PCT国际申请以Devron R.Averett、stephen E.Webber、Joseph R.Lennox、Erik J.Rueden和David L.Clark的名义提交，他们均为2004年6月7日在美国的公民和常住居民。

发明领域

本发明涉及具有免疫调节活性的3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶核苷类和含有这类化合物的药物组合物。本发明还涉及这类化合物和组合物的治疗或预防应用，并且涉及通过给予有效量的这类化合物治疗本文所述的疾病和病症的方法。

发明背景

最近几十年来，在研究D-和L-嘌呤核苷类似物的可能治疗应用方面已经做出了大量努力。许多核苷类似物目前作为抗病毒药销售，包括HIV逆转录酶抑制剂(AZT、ddI、ddC、d4T和3TC)。

在寻找免疫调节剂的过程中也已经研究了多种D-和L-嘌呤核苷类似物。已经证实在7-和/或8-位上具有取代基的鸟苷类似物可刺激免疫系统。参见Reitz等人，J.Med.Chem.，37，3561-78(1994)；Michael等人，J.Med.Chem.，36，3431-36(1993)。在其它研究方面，Krenitsky等人的US 5,821,236公开了可用于肿瘤治疗的阿拉伯呋喃糖基嘌呤衍生物的6-烷氧基衍生物。Krenitsky等人的US 5,539,098中还报道了水痘-带状疱疹病毒抑制剂，包括2-氨基-6-甲氧基-9-(β-D-阿拉伯呋喃糖基)-9H-嘌呤的5′-O-丙酰基和5′-O-丁酰基酯类。已经证实7-去氮杂鸟苷和类似物在小鼠中对多种RNA病毒表现出抗病毒活性，虽然该化合物在细胞培养中缺乏抗病毒性质。3-去氮杂鸟嘌呤核苷和核苷酸也对某些DNA和RNA病毒表现出了显著的广谱抗病毒活性。Revankar等人，J.Med.Chem.，27，1489-96(1984)。某些7-和9-去氮杂鸟嘌呤C-核苷类表现出对抗塞姆利基森林病毒的致命攻击的能力。Girgis等人，J.Med.Chem.，33，2750-55(1990)。Robins等人的US4,328,336中将所选择的6-亚磺酰胺和6-磺酰胺嘌呤核苷类公开为表现出显著的抗肿瘤活性。

Robins等人的US 5,041,542中将某些嘧啶并[4，5-d]嘧啶核苷类公开为在对抗BDF1小鼠的L1210的治疗中有效。由于它们的作用，这些特定的核苷类被提示作为免疫调节剂。参见Bonnet等人，J.Med.Chem.，36，635-53(1993)。同样，Wang等人(WIPO国际公开号WO 98/16184)报道了嘌呤L-核苷化合物及其类似物用于治疗感染、侵袭、肿瘤、自身免疫性疾病或用于调节免疫系统的多个方面。此外，Robins等人的US 5,041,426和US 4,880,784公开了表现出显著的免疫活性、包括鼠脾细胞增殖和对塞姆利基森林病毒的体内活性的3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶类。

免疫调节的一种可能的目标包括刺激或抑制Th1和Th2淋巴因子。I型(Th1)细胞产生白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)，它们主要导致细胞介导的免疫，例如迟发型超敏反应和抗病毒免疫。2型(Th2)细胞产生白细胞介素IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10和IL-13，主要在辅助体液免疫应答中有涉及，例如在对变应原的应答中所观察到的那些。例如参见Mosmann，Annu.Rev.Immunol，7，145-73(1989)。已经证实D-鸟苷类似物可在体外(Goodman，Int.J.Immunopharmacol，10，579-88(1988)；Goodman的US 4,746,651)和体内(Smee等人，Antiviral Res.，15，229(1991)；Smee等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy，33，1487-92(1989))引发对淋巴因子IL-1、IL-6、INFα和TNFα(间接)的不同作用。然而，D-鸟苷类似物如7-硫代-8-氧代鸟苷在T细胞中直接调节1型或2型细胞因子的能力无效或尚未描述。

此外，已知口服给予许多嘌呤核苷类似物因吸收差、溶解度低或在消化道中由于酸性或碱性条件或酶的作用被降解和/或这些现象的组合而面临困难。因此，对用于调节免疫系统的多个方面的具有改善的口服利用度、耐受性和施用的嘌呤核苷类似物仍然存在需求。

发明概述

本发明通过如下发现解决了这种需求：3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶核苷类、其可药用的前药、具有药物活性的代谢物、可药用盐和可药用溶剂化物(这类化合物、前药、代谢物、盐和溶剂化物共同称作“物质”)，它们可用作免疫调节剂。

在另一实施方案中，本发明囊括在需要其的患者中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括对该患者给予治疗或预防有效量的3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶核苷。

在通常的方面，本发明涉及式I化合物：

其中：

R^1a、R^1b和R^1c独立地为H、-C(O)R³、外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CH₂NHR⁴、-C(O)CH(C_1-6烷基)NHR⁴，或者R^1b和R^1c共同为-C(O)-，它与氧原子一起形成5-元碳酸酯环；

R²为H、OR⁵或N(R⁶)₂；

R³为C_1-18烷基；

R⁴为H、-C(O)CH(C_1-6烷基)NH₂或-C(O)CH(CH₂-芳基)NH₂；

R⁵独立地为H、C_1-6烷基、C_3-7链烯基、C_3-7炔基、-(CR⁷R⁸)_t(C₆-C₁₀芳基)、-(CR⁷R⁸)_t(C₃-C₁₀环烷基)、-(CR⁷R⁸)_t(C₄-C₁₀杂环)、-(CR⁷R⁸)_t＞1OH、-(CR⁷R⁸)_t＞0CO₂C_1-18烷基和-(CR⁷R⁸)_t＞0N(R⁹)CO₂C_1-18烷基和SO₂(芳基)，其中t为0-6的整数，另有说明除外，且其中上述基团的烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基和杂环部分任选被取代基取代，所述的取代基独立地选自卤素、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、羟基、C₁-C₆烷氧基、-NH₂、-NH-烷基、-N(烷基)₂、-NH-芳基、-N(烷基)(芳基)、-N(芳基)₂、-NHCHO、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-N(烷基)C(O)H、-N(烷基)C(O)烷基、-N(芳基)C(O)H、-N(芳基)C(O)烷基、-NHCO₂烷基、-N(烷基)CO₂烷基、-NHC(O)NH₂、-N(烷基)C(O)NH₂、-NHC(O)NH-烷基、-NHC(O)N(烷基)₂、-N(烷基)C(O)NH-烷基、-N(烷基)C(O)N(烷基)₂、-NHSO₂-烷基、-N(烷基)SO₂-烷基、-C(O)烷基、-C(O)芳基、-OC(O)烷基、-OC(O)芳基、-CO₂-烷基、-CO₂-芳基、-CO₂H、-C(O)NH₂、-C(O)NH-烷基、-C(O)N(烷基)₂、-C(O)NH-芳基、-C(O)N(芳基)₂、-C(O)N(烷基)(芳基)、-S(O)烷基、-S(O)芳基、-SO₂烷基、-SO₂芳基、-SO₂NH₂、-SO₂NH-烷基和-SO₂N(烷基)₂；

R⁶独立地为H、C₁-C₆烷基、C₃-C₁₀环烷基或与氮一起形成5-或6-元杂环；

R⁷和R⁸独立地为H、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基或C₂-C₆炔基；且R⁹为H、C_1-6烷基或-CH₂-芳基。

在一项实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中R²是H或OR⁵，条件是R⁵不为-CH₃，并且进一步的条件是当R²为H时，R^1a、R^1b和R^1c不为H。

在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中R^1a、R^1b和R^1c独立地为H、-C(O)R³、外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CH(C_1-6烷基)NH₂；R²为OR⁵；R³为C_1-18烷基；R⁵独立地为C_1-6烷基、C_3-7链烯基、C_3-7炔基、-(CR⁷R⁸)_t(C₆-C₁₀芳基)、-(CR⁷R⁸)_t(C₄-C₁₀杂环)和-(CR⁷R⁸)_t＞0N(R⁹)CO₂C_1-18烷基，其中t为0-4的整数，另有说明除外，且其中上述基团的烷基、链烯基、芳基和杂环部分任选被1-3个取代基取代，所述的取代基独立地选自卤素、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、羟基、C₁-C₆烷氧基、-CO₂-烷基、-CO₂-芳基、-OC(O)烷基和-OC(O)芳基；R⁷和R⁸独立地为H、C₁-C₆烷基或C₂-C₆链烯基；且R⁹为H、-CH₃或-CH₂CH₃。

在本发明的另一项优选的实施方案中，本发明的化合物选自：

在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中R²为H，其中R^1a、R^1b和R^1c中至少一个不为H。

在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中R^1a、R^1b和R^1c独立地为H、-C(O)R³、外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CH(C_1-6烷基)NH₂；R²为H；且R³为C_1-18烷基，其中R^1a、R^1b和R^1c中至少一个不为H。

在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中R^1a、R^1b和R^1c独立地为H、-C(O)R³、外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CH(CH(CH₃)₂)NH₂；R²为H；且R³为CH₃，其中R^1a、R^1b和R^1c中至少一个不为H。

在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中R^1a、R^1b和R^1c独立地为H或-C(O)R³；其中R²为H；且R³为CH₃，其中R^1a、R^1b和R^1c中至少一个不为H。

在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中R^1a为H且R^1b和R^1c为-C(O)R³；R²为H；且R³为CH₃。

在另一实施方案中，本发明的化合物选自：

在另一实施方案中，本发明的化合物为：

本发明还涉及式I化合物、前药或代谢物的可药用前药、具有药物活性的代谢物、可药用盐和可药用溶剂化物。还描述了制备式I化合物的有利方法。

式I化合物可用于免疫系统增强剂，具有某些免疫系统性质，包括调节、促有丝分裂性(mitogenicity)、增强和/或强化，或者它们是具有这些性质的化合物的中间体。预期这些化合物至少对宿主免疫系统的天然杀伤细胞、巨噬细胞和淋巴细胞表现出作用。由于这些特性，它们可用作抗病毒药和抗肿瘤药或者可用作抗病毒和抗肿瘤药的中间体。它们可以通过用作适宜的药物组合物的活性成分用于治疗受侵害的宿主。

在本发明的一个方面，式I化合物通过对哺乳动物给予治疗有效量的化合物来用于治疗哺乳动物、包括人的全范围的病毒性疾病。可考虑用式I化合物治疗的病毒性疾病包括因RNA和DNA病毒导致的急性和慢性感染。不以任何方式限定可以治疗的病毒感染的范围，式I化合物可特别用于治疗因下列病毒导致的感染：腺病毒；巨细胞病毒；甲型肝炎病毒(HAV)；乙型肝炎病毒(HBV)；黄病毒，包括黄病毒；和丙型肝炎病毒(HCV)；1和2型单纯疱疹；带状疱疹；人疱疹病毒6；人免疫缺陷病毒(HIV)；人乳头瘤病毒(HPV)；甲型流感病毒；乙型流感病毒；麻疹；副流感病毒；脊髓灰质炎病毒；痘病毒(包括天花和猴痘病毒)；鼻病毒；呼吸道合胞病毒(RSV)；多个家族的导致出血热的病毒，包括沙粒病毒(LCM、胡宁病毒、Machup病毒、Guanarito病毒和拉沙热)；布亚病毒(Hanta病毒和裂谷热)和纤丝病毒(埃博拉病毒和马尔堡病毒)；一系列脑炎病毒，包括西尼罗河病毒、LaCrosse病毒、加利福尼亚脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、日本脑炎病毒、Kysanur森林病毒和蜱媒病毒，例如克里米亚-刚果出血热病毒。

在本发明的另一方面，式I化合物通过给哺乳动物施用治疗有效量的化合物而用于治疗哺乳动物的细菌、真菌和原生动物感染。全范围的病原微生物被认为可用本发明的化合物治疗，非限制性地包括对抗生素有耐受性的那些生物体。本发明的特定应用是：式I化合物激活免疫系统旁路抗性(bypasses resistance)机制中的多种成分(通常被发现降低对抗生素的敏感性)的能力，以及由此通过式I化合物治疗哺乳动物中因这类耐药性微生物导致的感染。

在本发明的另一方面，式I化合物用于通过给哺乳动物施用治疗有效量的化合物来治疗哺乳动物的肿瘤。可治疗的肿瘤或癌包括由病毒导致的那些，其作用可包括抑制病毒感染的细胞转化成肿瘤状态，抑制病毒从转化细胞至其它正常细胞的扩散和/或阻止病毒转化细胞的生长。式I化合物预期可用于对抗宽范围的肿瘤，包括但不限于癌、肉瘤和白血病。在这一类别中还包括乳癌、结肠癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胃癌和胰腺癌以及成淋巴细胞性白血病和髓细胞性白血病。

在本发明的另一方面，治疗哺乳动物的方法包括给予治疗和/或预防有效量的含有本发明化合物的药物。在该方面，作用可以涉及调节哺乳动物免疫系统的某些部分，尤其是调节Th1和Th2的细胞因子活性，包括但不限于白细胞介素家族(如IL-1至IL-12)和其它细胞因子如TNFa和干扰素(包括干扰素α、干扰素θ和干扰素γ)及其下游效应物。当出现Th1和Th2细胞因子的调节时，认为调节可以包括刺激Th1和Th2两者、抑制Th1和Th2两者、刺激Th1或Th2之一且抑制另一个，或者是双模式调节，其中在高浓度下发生对Th1/Th2水平的一种作用(例如泛发性抑制)，而在低浓度下发生另一种作用(例如刺激Th1或Th2之一且抑制另一个)。

在本发明的另一方面，含有式I化合物的药物组合物以治疗有效剂量施用于正在接受不包括在式I中的抗感染药的哺乳动物。在本发明的优选方面，含有式I化合物的药物组合物以治疗有效剂量与对传染原直接起作用以抑制该传染原生长或杀伤它的抗感染药一起施用。

在另一方面，本发明包括在需要其的哺乳动物、优选需要其的人中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法。

在另一方面，本发明包括在需要其的患者中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括对该患者给予治疗或预防有效量的式I化合物和可药用赋形剂、载体或溶媒。

在另一方面，本发明包括在需要其的患者中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括对该患者给予治疗或预防有效量的式I化合物和额外的治疗剂、优选额外的抗病毒药。

在本发明的优选方面，包含治疗有效量的式I化合物的药物组合物提供了改善的口服利用度和作为免疫调节剂的施用。在本发明的另一个优选方面，包含治疗有效量的式I化合物的药物组合物在药物通过衬在胃上的淋巴组织时提供了对活性结构的掩蔽作用，由此使得该组织的活化减少到最低限度并且允许改善口服耐受性。

附图简述

附图1是艾沙托立宾(1)和干扰素α在小鼠体内的血浆水平的图示。

附图2是接受艾沙托立宾(1)的HCV感染患者体内的病毒载量改变的图示。

发明详述和优选实施方案

如果在本说明书中使用下列术语，那么它们按照如下定义使用：

术语“包含”和“包括”在本文中使用时为开放式非限制性的含义。

术语“核苷”指由与杂环的特定位置或与嘌呤(9-位)或嘧啶(1-位)的天然位置或与类似物上的等同位置连接的任意戊糖或被修饰的戊糖部分组成的化合物。

术语“嘌呤”指含氮的双环杂环。

术语“嘧啶”指含氮的单环杂环。

术语“D-核苷”指具有D-核糖糖部分的核苷化合物(例如腺苷)。

术语“L-核苷”指具有L-核糖糖部分的核苷化合物。

除非另有说明，本文所用的术语“烷基”包括具有直链、支链或环状部分(包括稠合和桥连双环和螺环部分)或上述部分的组合的饱和单价烃基。就具有环状部分的烷基而言，基团必须具有至少三个碳原子。

除非另有说明，本文所用的术语“链烯基”包括具有至少一条碳-碳双键的烷基部分，其中烷基如上文定义，包括所述链烯基部分的E和Z异构体。

除非另有说明，本文所用的术语“炔基”包括具有至少一条碳-碳三键的烷基部分，其中烷基如上文定义。

除非另有说明，本文所用的术语“烷氧基”包括O-烷基，其中烷基如上文定义。

术语“Me”指甲基，“Et”指乙基且“Ac”指乙酰基。

除非另有说明，本文所用的术语“环烷基”指含有总计3-10个碳原子、优选5-8个环碳原子的本文所指的非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、螺状或未稠合的双环或三环烃。示例性的环烷基包括具有3-7个、优选3-6个碳原子的单环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。环烷基的解释性实例来源于但不限于如下基团：

除非另有说明，本文所用的术语“芳基”包括通过除去一个氢来源于芳族烃的有机基团，例如苯基或萘基。

除非另有说明，本文所用的术语“4-10元杂环”包括含有1-4个各自选自O、S和N的杂原子的芳族和非芳族杂环基，其中各杂环基在其环系中具有4-10个原子，并且条件是所述基团的环不含两个相邻的O或S原子。非芳族杂环基包括在其环系中仅具有4个原子的基团，但芳族杂环基在其环系中必须具有至少5个原子。杂环基包括苯并稠合环系。4元杂环基的实例为氮杂环丁基(来源于氮杂环丁烷)。5元杂环基的实例为噻唑基，10元杂环基的实例为喹啉基。非芳族杂环基的实例为吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶子基、吗啉代基、硫吗啉代基、噻烷基、哌嗪基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、高哌啶基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧杂氮杂基、二氮杂基、硫杂氮杂基、1，2，3，6-四氢吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二烷基、1，3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫杂环戊基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己烷基、3-氮杂双环[4.1.0]庚烷基、3H-吲哚基和喹嗪基。芳族杂环基的实例为吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异唑基、噻唑基、唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、喋啶基、嘌呤基、二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。如果可能，如来源于上文所列基团的前述基团可以为C-连接的或N-连接的。例如，来源于吡咯的基团可以为吡咯-1-基(N-连接的)或吡咯-3-基(C-连接的)。此外，来源于咪唑的基团可以为咪唑-1-基(N-连接的)或咪唑-3-基(C-连接的)。4-10元杂环可以任选在每个环的任意环碳、硫或氮原子上被1-2个氧代基取代。其中2个环碳原子被氧代部分取代的杂环基为1，1-二氧代-硫吗啉基。4-10元杂环的其它解释性实例来源于但不限于如下化合物：

在式I化合物中，如果使用例如(CR⁷R⁸)_t这类术语，那么R⁷和R⁸可以各自随t大于1的重复而不同。例如，如果t为2，那么术语(CR⁷R⁸)_t可以等于-CH₂CH₂-或-CH(CH₃)C(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)-或任意数目的落入R⁷和R⁸定义范围内的类似部分。

术语“免疫调节剂”指能够通过刺激或抑制修饰正常或异常免疫系统的天然或合成产物。

术语“预防”指本发明的化合物或组合物在诊断为患有所述疾病或处于发生这类疾病的危险中的患者中预防的本文确定的疾病的能力。该术语还包括在已经患有这类疾病或具有其症状的患者中预防疾病进一步发展。

术语“患者”或“受治疗者”指动物(例如牛、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、犬、小鼠、大鼠、兔、豚鼠等)或哺乳动物，包括嵌合和转基因动物和哺乳动物。在治疗或预防HCV感染中，术语“患者”或“受治疗者”优选指猴或人，更优选人。在具体的实施方案中，患者或受治疗者感染或接触了丙型肝炎病毒。在某些实施方案中，患者为人类婴儿(年龄0-2岁)、儿童(年龄2-17岁)、青少年(年龄12-17岁)、成年(年龄18岁及以上)或老年(年龄在70岁及以上)患者。此外，患者包括免疫受损的的患者，例如HIV阳性患者、癌症患者、进行免疫疗法或化疗的患者。在具体的实施方案中，患者为健康个体，即未显示出其它病毒感染症状的患者。

术语“治疗有效量”指足以在治疗或预防病毒性疾病中提供益处、延缓与病毒感染相关的症状或病毒诱导的疾病或使其最小化或者治愈或改善疾病或感染或其原因的本发明化合物的量。具体而言，治疗有效量指足以在体内提供治疗益处的量。当与本发明化合物的量相关使用时，该术语优选包括改善总体疗法、减轻或避免疾病的症状或原因或者增强另一种治疗剂的治疗功效或与之起协同作用的无毒性的量。

术语“预防有效量”指足以产生对病毒感染的感染、复发或扩散的预防作用的本发明化合物或其它活性成分的量。预防有效量可以指足以预防初期感染或者感染复发或扩散或者与感染相关的疾病的量。当与本发明化合物的量相关使用时，该术语优选包括改善总体预防或者增强另一种预防剂或治疗剂的预防功效或与之起协同作用的无毒性的量。

术语“组合”指一种以上的预防剂和/或治疗剂同时或依次以其各自的作用叠加或协同的方式应用。

术语“治疗”指：

(i)在对疾病、病症和/或疾患易感但尚未被诊断患有它们的动物中预防疾病、病症或疾患的发生；

(ii)抑制疾病、病症或疾患，即阻止其发展；和

(iii)缓解疾病、病症或疾患，即使得疾病、病症和/或疾患减退。

术语“α”和“β”表示在所绘化学结构的不对称碳原子上的取代基的具体立体化学构型。本文所述的化合物均为D-呋喃糖基构型。

本发明的化合物可以表现出互变异构现象。尽管式I不能清楚地描绘所有可能的互变异构形式，但是应当理解，式I意欲表示所示化合物的任意互变异构形式且不仅限于结构式所表示的具体化合物形式。例如，对式I而言可以理解，无论是否以烯醇或酮基形式表示取代基，它们均代表同一化合物(如下实例中所示)。

本发明化合物中的某些可以作为单一立体异构体(即基本上不合其它立体异构体)、外消旋物和/或对映异构体和/或非对映异构体的混合物存在。所有这类单一立体异构体、外消旋物及其混合物均属于本发明的范围。优选以旋光纯的形式使用具有旋光活性的本发明化合物。

正如本领域技术人员通常所理解的，具有一个手性中心(即一个不对称碳原子)的旋光纯化合物为基本上由两种可能的对映异构体之一组成(即对映异构纯)的化合物，具有一个以上手性中心的旋光纯化合物为既是非对映异构纯又是对映异构纯的化合物。优选本发明的化合物以至少90％旋光纯的形式使用，即含有至少90％单一异构体(80％对映异构过量(“e.e.”)或非对映异构过量(“d.e.”))、更优选至少95％(90％e.e.或d.e.)、甚至更优选至少97.5％(95％e.e.或d.e.)和最优选至少99％(98％e.e.或d.e.)的形式。

另外，式I意欲包括所示结构的溶剂化和非溶剂化形式。例如，式I包括水合物和非水合物形式的具有所示结构的化合物。溶剂化物的其它实例包括与异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸或乙醇胺组合的结构。

除式I化合物外，本发明还包括这类化合物和代谢物的可药用前药、具有药物活性的代谢物和可药用盐。

“可药用前药”是如下定义的化合物：其可以在生理条件下或通过溶剂解转化为特定化合物或该化合物的可药用盐，然后表现出其药理作用。通常而言，制备前药的目的是：改善化学稳定性，改善患者的可接受性和依从性，改善生物利用度，延长作用持续时间，改善器官选择性，改善配制性(例如增加水溶性)和/或减少副作用(例如毒性)。前药可采用本领域已知的方法由式I化合物容易地制备，例如Burger’s Medicinal Chemistry andDrug Chemistry，1，172-178，949-982(1995)中所述的方法。另参见Bertolini等人，J.Med.Chem.，40，2011-2016(1997)；Shan等人，J.Pharm.Sci.，86(7)，765-767；Bagshawe，Drug Dev.Res.，34，220-230(1995)；Bodor，Advances inDrug Res.，13，224-331(1984)；Bundgaard，Design of Prodrugs(Elsevier出版社1985)；Larsen，Design and Application of Prodrugs，Drug Design andDevelopment(Krogsgaard-Larsen等人编辑，Harwood学术出版社，1991)；Dear等人，J.Chromatogr.B，748，281-293(2000)；Spraul等人，J.Pharmaceutical & Biomedical Analysis，10，601-605(1992)；和Prox等人，Xenobiol.，3，103-112(1992)。

“具有药物活性的代谢物”意欲指通过特定化合物或其盐在体内通过代谢产生的具有药物活性的产物。进入体内后，大部分药物是可以改变其物理特性和生物作用的化学反应的底物。这些代谢转化(通常影响式I化合物的极性)改变药物在体内分布和从体内排泄的方式。然而，在某些情况下，药物代谢是治疗作用所需要的。例如，抗代谢物类的抗癌药在转运入癌细胞后必须转化为其活性形式。

由于大部分药物进行某一类型的代谢转化，所以在药物代谢中起作用的生化反应可以是大量的和不同的。药物代谢的主要部位是肝脏，虽然其它组织也可以参与。

多数这些转化的特性特征在于代谢产物或“代谢物”的极性比母体药物高，虽然极性药物有时确实产生极性较低的产物。具有高脂/水分配系数的物质(易于通过膜)也易于从肾小管尿液中通过肾小管细胞扩散返回至血浆中。因此，这类物质趋向于具有低的肾清除率和在体内的长期滞留。如果药物被代谢成极性较高的化合物(即具有较低分配系数的化合物)，那么其肾小管重吸收将显著减少。而且，近肾小管和肝实质细胞中的阴离子和阳离子的特定分泌机制影响高极性物质。

作为具体实例，非那西丁(乙酰氧乙苯胺)和乙酰苯胺均为温和的止痛和解热剂，但是在体内被转化成极性更高和更有效的代谢物——对羟基乙酰苯胺(对乙酰氨基酚)，它在当今广泛使用。当对人给予乙酰苯胺时，随后的代谢物在血浆中依次达到峰值并衰退。在第1个小时期间，乙酰苯胺为主要的血浆成分。在第2个小时中，乙酰苯胺水平下降，代谢物对乙酰氨基酚的浓度达到峰值。最后，在数小时后，主要的血浆成分为另一种代谢物，它为惰性的并且可以从体内排泄。因此，一种或多种代谢物及药物本身的血浆浓度具有药理学重要性。

“可药用盐”意欲指这样的盐，其保持特定化合物的游离酸和碱的生物有效性，并且既非生物学也非其它方面所不期望的。本发明的化合物可具有足够的酸性、足够的碱性或具有这两种官能团，因此可以与许多无机或有机碱和无机和有机酸中的任一种反应形成可药用盐。示例性的可药用盐包括通过使本发明化合物与矿物或有机酸或者无机碱反应制备的盐，例如包括如下的盐：硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。

如果本发明的化合物为碱，那么可以通过本领域中可利用的任意适宜的方法制备所需的可药用盐，例如用无机酸或有机酸处理游离碱，所述的无机酸例如是盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述的有机酸例如是乙酸；马来酸；琥珀酸；扁桃酸；富马酸；丙二酸；丙酮酸；草酸；乙醇酸；水杨酸；pyranosidyl acid，例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸；α-羟基酸，例如柠檬酸或酒石酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；芳香酸，例如苯甲酸或肉桂酸；磺酸，例如对甲苯磺酸或乙磺酸等。

如果本发明的化合物为酸，那么可以通过任意适宜的方法制备所需的可药用盐，例如用无机或有机碱处理游离酸，所述的碱例如是(伯、仲或叔)胺、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等。适宜盐的示例性实例包括来源于氨基酸(如甘氨酸和精氨酸)、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及环胺(如哌啶、吗啉和哌嗪)的有机盐和来源于钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。

就固态物质而言，本领域技术人员可以理解，本发明的化合物和盐可以以不同晶形或多晶型形式存在，它们均落入本发明的范围和具体结构式。治疗和预防丙型肝炎病毒感染的方法

本发明提供了在需要其的患者中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法。

本发明进一步提供了将治疗有效量的式I化合物或这类化合物的组合在治疗和/或预防丙型肝炎病毒感染中导入患者血流的方法。

然而，本发明的式I化合物或其可药用盐、溶剂化物或水合物在急性或长期治疗或预防感染中的预防或治疗剂量的量值将随感染的性质和严重度以及活性成分的施用途径而改变。剂量和在某些情况下剂量频率也将根据所治疗的感染、个体患者的年龄、体重和响应而改变。适宜的剂量方案可由本领域技术人员根据应考虑的这类因素进行选择。

本发明的方法特别适于人类患者。具体而言，本发明的方法和剂量可用于免疫受损的的患者，包括但不限于癌症患者、HIV感染患者和患有免疫变性疾病(immunodegenerative disease)的患者。此外，该方法可用于目前处于缓和状态中的免疫受损的患者。本发明的方法和剂量还可用于进行其它抗病毒治疗的患者。本发明的预防方法可特别用于处于病毒感染风险中的患者。这些患者包括但不限于：卫生保健工作者，例如医师、护士、疗养所给予者；军队人员；教师；儿童保育工作者；在外国地域、特别是第三世界地域旅行或生活的患者，包括社会援助工作者、传教士和外交人员。最后，这些方法和组合物包括对难治疗的患者或者对治疗有抗性的患者(例如对逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂等有抗性)的治疗。

剂量

本发明化合物的毒性和功效可以通过标准药物操作在细胞培养物或实验动物中测定，例如测定LD₅₀(使50％群体致死的剂量)和ED₅₀(在50％群体中产生治疗有效性的剂量)。毒性与治疗作用之间的剂量比为治疗指数，其可表示为比值LD₅₀/ED₅₀。

获自细胞培养物试验和动物研究的数据可用于确定化合物用于人的剂量范围。这类化合物的剂量优选在包括几乎没有或无毒性的ED₅₀在内的循环浓度范围内。剂量可在这一范围内改变，这取决于所用剂型和所采用的施用途径。就用于本发明方法的任意化合物而言，最初可以根据细胞培养物试验估计治疗有效剂量。剂量可使用动物模型确定，以获得包括如细胞培养物中测定的IC₅₀(即获得症状的半数最大抑制的测试化合物浓度)在内的循环血浆浓度范围；或者，式I化合物的剂量可以使用动物模型确定，以获得相应于获得固定量值的响应所需的浓度的化合物循环血浆浓度范围。这类信息可用于更精确地确定在人体中的有用剂量。例如，血浆水平可通过高效液相色谱法测定。

在用于人之前，本发明的方案和组合物优选体外测试、然后体内测试预期的治疗或预防活性。例如，可用于测定是否需要给予特定治疗方案的体外试验包括体外细胞培养物试验，其中使对式I化合物的作用有响应的细胞与配体接触并通过适宜技术测定响应量值。然后在式I化合物功效和式I化合物前药的转化程度方面对式I化合物的评估进行评价。在人体测试之前，用于本发明方法的化合物可在适宜的动物模型系统中进行测试，所述模型系统包括但不限于大鼠、小鼠、鸡、牛、猴、兔、仓鼠等。然后将这些化合物用于适宜的临床试验。

本发明的式I化合物的前药或其可药用盐、溶剂化物或水合物在急性或长期治疗或预防感染或病患中的预防或治疗剂量的量值将随感染的性质和严重度以及活性成分的施用途径而改变。该剂量且可能是剂量频率还可以根据所治疗的感染、个体患者的年龄、体重和响应而改变。适宜的施用方案可由本领域技术人员根据应考虑的这类因素容易地进行选择。在一项实施方案中，所施用剂量取决于所用的具体化合物以及患者的体重和状况。此外，剂量对不同的具体式I化合物而言可能是不同的；适宜剂量可基于上述体外测定、特别是通过使用式I化合物所涉及的艾沙托立宾(1)的这类测定以及基于动物研究来预测，以便较小剂量将适于这样的式I化合物：当在本文所述或引用的系统中测定时以低于其它式I化合物的浓度显示出有效性。通常而言，日剂量为约0.001-100mg/kg、优选约1-25mg/kg、更优选约5-15mg/kg。对于受丙型肝炎病毒感染的人的治疗而言，以每天约1-4次施用约0.1mg至约15g/天、优选100mg至12g/天、更优选100mg至8000mg/天。

在优选的实施方案中，对化合物如3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶类的前药而言，以每天约1-4次施用200mg-8000mg/天。另外，作为单一活性剂或与其它治疗剂的组合而言，推荐日剂量可以循环施用。在一项实施方案中，日剂量以单一剂量或等分剂量施用。在相关的实施方案中，推荐日剂量可以以每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次施用。

在优选的实施方案中，施用本发明的化合物以提供化合物在患者体内的全身分布。在相关的实施方案中，施用本发明的化合物以在体内产生全身作用。

在另一实施方案中，本发明的化合物经口服、粘膜(包括舌下、口含、直肠、鼻或阴道)、胃肠道外(包括皮下、肌内、快速浓注、动脉内或静脉内)、透皮或局部给药进行施用。在具体的实施方案中，本发明的化合物经粘膜(包括舌下、口含、直肠、鼻或阴道)、胃肠道外(包括皮下、肌内、快速浓注、动脉内或静脉内)、透皮或局部给药进行施用。在另一项具体实施方案中，本发明的化合物经口服给药进行施用。在另一项具体实施方案中，本发明的化合物不通过口服给药进行施用。

正如本领域技术人员易于得知的，不同的治疗有效量可以应用于不同的感染。类似地，上述剂量和剂量频率方案还包括足以治疗或预防这类感染但不足以导致与常规疗法相关的不良作用或者足以减轻所述不良反应的量。

组合疗法

本发明的具体方法进一步包括给予额外的治疗剂(即非本发明化合物的治疗剂)。在本发明的某些实施方案中，可以将本发明的化合物与至少一种其它治疗剂组合使用。治疗剂包括但不限于抗生素、止吐药、抗抑郁药和抗真菌剂、抗炎剂、抗病毒剂、抗癌剂、免疫调节剂、β-干扰素、烷化剂、激素或细胞因子。在优选的实施方案中，本发明包括施用HCV特异性或显示出抗-HCV活性的额外的治疗剂。

可以将本发明的式I化合物与抗生素组合施用或配制。例如，可以将它们与下列抗生素一起配制：大环内酯(例如妥布霉素(Tobi))、头孢菌素(例如头孢氨苄(Keflex)、头孢拉定(Velosef)、头孢呋辛(Ceftin)、头孢丙烯(Cefzil)、头孢克洛(Ceclor)、头孢克肟(Suprax)或头孢羟氨苄(Duricef))、克拉霉素(例如克拉霉素(Biaxin))、红霉素(例如红霉素(EMycin))、青霉素(例如青霉素V(V-Cillin K或Pen Vee K))或喹诺酮(例如氧氟沙星(Floxin)、环丙沙星(Cipro)或诺氟沙星(Noroxin))、氨基糖苷类抗生素(例如安普霉素、阿贝卡星、班贝霉素、布替罗星、地贝卡星、新霉素、十一烯酸新霉素、奈替米星、巴龙霉素、核糖霉素、西索米星和大观霉素)、amphenicol抗生素(例如叠氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素)、安沙霉素抗生素(例如利福米特和利福平)、carbacephems(例如氯碳头孢)、卡巴培喃类(例如比阿培南和亚胺培南)、头孢菌素类(例如头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢孟多、头孢曲秦、头孢西酮、头孢唑兰、头孢咪唑、头孢匹胺和头孢匹罗)、头孢霉素(例如头孢拉宗、头孢美唑和头孢米诺)、单菌霉素(例如氨曲南、卡芦莫南和替吉莫南)、氧头孢烯类(例如氟氧头孢和拉氧头孢)、青霉素类(例如氮脒青霉素、氮脒青霉素匹酯、阿莫西林、巴氨西林、benzylpenicillinic acid、苄青霉素钠、依匹西林、芬贝西林、氟氯西林、培那西林、氢碘酸喷沙西林、o-苄乙苄胺青霉素(penicillino-benethamine)、青霉素O、青霉素V、苄星青霉素V、海巴明青霉素V、青哌环素和phencihicillin potassium)、林可酰胺类抗生素(例如克林霉素和林可霉素)、安福霉素、杆菌肽、卷曲霉素、多粘菌素E、持久霉素、恩维霉素、四环素类(例如阿哌环素、金霉素、氯莫环素和地美环素)、2，4-二氨基嘧啶类(例如溴莫普林)、硝基呋喃类(例如呋喃他酮和呋唑氯铵)、喹诺酮类及其类似物(例如西诺沙星、克林沙星、氟甲喹和格帕沙星)、磺胺类(例如醋磺胺甲氧吡嗪(acetyl sulfamethoxypyrazine)、苄磺胺、诺丙磺胺、酞磺醋胺、磺胺柯定和磺胺西汀)、砜类(例如地百里砜、葡胺苯砜钠和苯丙砜)、环丝氨酸、莫匹罗星和抗结核菌素(tuberin)。

还可以将本发明的式I化合物与止吐药组合施用或配制。适宜的止吐药包括但不限于甲氧氯普胺(metoclopromide)、多潘立酮、丙氯拉嗪、异丙嗪、氯丙嗪、曲美苄胺、昂丹司琼、格拉司琼、羟嗪、乙酰亮氨酸(acethylleucine)单乙醇胺、阿立必利、阿扎司琼、苯喹胺、氨醇醋茶碱、溴必利、布克力嗪、氯波必利、赛克力嗪、茶苯海明、地芬尼多、多拉司琼、美克洛嗪、美沙拉妥、美托哌丙嗪、大麻隆、奥昔喷地(oxyperndyl)、匹哌马嗪、东莨菪碱、舒必利、四氢大麻酚、硫乙拉嗪、硫丙拉嗪、托烷司琼及它们的混合物。

可以将本发明的式I化合物与抗抑郁药组合施用或配制。适宜的抗抑郁药包括但不限于苯奈达林、卡罗沙酮、西酞普兰、二甲沙生、芬咖明、吲达品、盐酸茚洛秦、奈福泮、诺米芬辛、羟色氨酸、奥昔哌汀、帕罗西汀、舍曲林、胺苯硫酮、曲唑酮、苯酰甲苄肼、异丙氯肼、异丙异烟肼、异卡波肼、尼亚拉胺、奥他莫辛、苯乙肼、可替宁、罗利普令、咯利普兰、马普替林、美曲吲哚、米安色林、mirtazepine、阿地唑仑、阿米替林、氧阿米替林、阿莫沙平、布替林、氯米帕明、地美替林、地昔帕明、二苯西平、二甲他林、二苯噻庚英、多塞平、三氟丙嗪、丙米嗪、N-氧化丙咪嗪、伊普吲哚、洛非帕明、美利曲辛、美他帕明、去甲替林、肟替林、奥匹哌醇、苯噻啶、丙吡西平、普罗替林、奎纽帕明、噻奈普汀、曲米帕明、阿屈非尼、贝那替秦、安非他酮、布他西丁、地奥沙屈、度洛西汀、依托哌酮、非巴氨酯、非莫西汀、芬戊二醇、氟西汀、氟伏沙明、血卟啉、金丝桃素、左芬氟拉明、美地沙明、米那普仑、米那普令、吗氯贝胺、奈法唑酮、奥沙氟生、吡贝拉林、普罗林坦、吡琥胺酯、利坦色林、罗克吲哚、氯化铷、舒必利、坦度螺酮、托扎啉酮、托芬那辛、托洛沙酮、反苯环丙胺、L-色氨酸、文拉法辛、维洛沙秦和齐美定。

可以将本发明的式I化合物与抗真菌药组合施用或配制。适宜的抗真菌药包括但不限于两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟康唑、鞘内、氟胞嘧啶、咪康唑、布康唑、克霉唑、制霉菌素、特康唑、噻康唑、环吡酮、益康唑、氯丙炔碘(haloprogrin)、萘替芬、特比萘芬、十一烯酸酯和灰黄霉素(griseofuldin)。

可以将本发明的式I化合物与抗炎剂组合施用或配制。有用的抗炎剂包括但不限于：非甾体抗炎剂，例如水杨酸、乙酰水杨酸、水杨酸甲酯、二氟尼柳、双水杨酯、奥沙拉秦、柳氮磺吡啶、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、甲芬那酸、甲氧胺苯酸钠、托美丁、酮咯酸、双氯非那胺、布洛芬、萘普生、萘普生钠、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦、吡罗昔康、美洛昔康、安吡昔康、屈昔康、吡伏昔康(pivoxicam)、替诺昔康、萘丁美酮(nabumetome)、保泰松、羟基保泰松、安替比林、氨基比林、阿扎丙宗和尼美舒利；白细胞三烯拮抗剂，包括但不限于齐留通、金硫葡糖、硫代苹果酸金钠和金诺芬；类固醇类，包括但不限于：二丙酸阿氯米松、安西奈德、二丙酸倍氯米松、倍他米松、苯甲酸倍他米松、二丙酸倍他米松、倍他米松磷酸钠、戊酸倍他米松、丙酸氯倍他索、氯可托龙戊酸酯、氢化可的松、氢化可的松衍生物、地奈德、去羟米松、地塞米松、氟尼缩松、flucoxinolide、氟羟可舒松、哈西奈德(halcinocide)、甲羟松、甲泼尼龙、醋酸甲泼尼龙、甲泼尼龙琥珀酸钠、糠酸莫米松、醋酸对氟米松、泼尼松龙、醋酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松龙叔丁乙酯、泼尼松、曲安西龙、曲安奈德、双醋曲安西龙和己曲安奈德；和其它抗炎剂，包括但不限于甲氨蝶呤、秋水仙碱、别嘌醇、丙磺舒、磺吡酮和苯溴马隆。

可以将本发明的式I化合物与其它抗病毒药组合施用或配制。有用的抗病毒药包括但不限于蛋白酶抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂、非核苷逆转录酶抑制剂和核苷类似物。抗病毒药包括但不限于齐多夫定、阿昔洛韦、更昔洛韦(gangcyclovir)、阿糖腺苷、碘苷、曲氟尿苷、左旋韦林(levovirin)、viramidine和利巴韦林，以及膦甲酸、金刚烷胺、金刚乙胺、沙奎那韦、茚地那韦、安泼那韦、洛匹那韦、利托那韦、α-干扰素；β-干扰素；阿德福韦、克来夫定(clevadine)、恩替卡韦、普来可那立。

可以将本发明的式I化合物与免疫调节剂组合施用或配制。免疫调节剂包括但不限于甲氨蝶呤(methothrexate)、来氟米特、环磷酰胺、环孢素A、麦考酚酸吗乙酯、雷帕霉素(西罗莫司)、咪唑立宾、脱氧精胍菌素、布喹那、malononitriloamindes(例如leflunamide)、T细胞受体调节剂和细胞因子受体调节剂、肽模拟物和抗体(例如人、人源化、嵌合、单克隆、多克隆、Fvs、ScFvs、Fab或F(ab)2片段或表位结合片段)、核酸分子(例如反义核酸分子和三重螺旋)、小分子、有机化合物和无机化合物。T细胞受体调节剂的实例包括但不限于抗-T细胞受体抗体(例如抗-CD4抗体(例如cM-T412(Boeringer)、IDEC-CE9.1(IDEC和SKB)、mAB 4162W94、Orthoclone和OKTcdr4a(Janssen-Cilag))、抗-CD3抗体(例如Nuvion(Product Design Labs)、OKT3(Johnson & Johnson)或Rituxan(IDEC))、抗-CD5抗体(例如抗-CD5蓖麻毒蛋白-连接的免疫缀合物)、抗-CD7抗体(例如CHH-380(Novartis))、抗-CD8抗体、抗-CD40配体单克隆抗体(例如IDEC-131(IDEC))、抗-CD52抗体(例如CAMPATH 1H(Ilex))、抗-CD2抗体、抗-CD 11a抗体(例如Xanelim(Genentech))和抗-B7抗体(例如IDEC-114(IDEC))和CTLA4-免疫球蛋白。细胞因子受体调节剂的实例包括但不限于可溶性细胞因子受体(例如TNF-α受体胞外结构域或其片段、IL-1β受体胞外结构域或其片段和IL-6受体胞外结构域或其片段)、细胞因子或其片段(例如白细胞介素(IL)-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15、TNF-α、干扰素(IFN)-α、IFN-β、IFN-γ和GM-CSF)、抗-细胞因子受体抗体(例如抗-IFN受体抗体、抗-IL-2受体抗体(例如Zenapax(Protein Design Labs))、抗-IL-4受体抗体、抗-IL-6受体抗体、抗-IL-10受体抗体和抗-IL-12受体抗体)、抗-细胞因子抗体(例如抗-IFN抗体、抗-TNF-α抗体、抗-IL-1β抗体、抗-IL-6抗体、抗-IL-8抗体(例如ABX-IL-8(Abgenix))和抗-IL-12抗体)。

可以将本发明的式I化合物与抑制病毒酶的物质组合施用或配制，包括但不限于HCV蛋白酶抑制剂，例如BILN 2061；和NS5b聚合酶抑制剂，例如NM107及其前药NM283(Idenix Pharmaceuticals，Inc.，Cambridge，MA)。

可以将本发明的式I化合物与抑制HCV聚合酶的物质如Wu，CurrDrug Targest Infect Disord.2003；3(3)：207-19中所述的那些或者与抑制病毒的解旋功能的化合物如Bretner M等人，Nucleosides Nucleotides NucleicAcids 2003；22(5-8)：1531中所述的那些或者与其它HCV特异性靶点抑制剂如Zhang X.IDrugs.2002；5(2)：154-8中所述的那些组合施用或配制。

可以将本发明的式I化合物与抑制病毒复制的物质组合施用或配制。

可以将本发明的式I化合物与细胞因子组合施用或配制。细胞因子的实例包括但不限于白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-7(IL-7)、白细胞介素-9(IL-9)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素15(IL-15)、白细胞介素18(IL-18)、血小板衍生生长因子(PDGF)、促红细胞生成素(Epo)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、催乳素和干扰素(IFN)如IFN-α和IFN-γ)。

可以将本发明的式I化合物与激素组合施用或配制。激素的实例包括但不限于促黄体激素释放激素(LHRH)、生长激素(GH)、生长激素释放激素、ACTH、促生长素抑制素、促生长素、生长调节素、甲状旁腺激素、下丘脑释放因子、胰岛素、胰高血糖素、脑啡肽、加压素、降钙素、肝素、低分子量肝素、类肝素、合成和天然阿片样物质、胰岛素促甲状腺素(insulinthyroid stimulating hormones)和内啡肽。

可以将本发明的式I化合物与β-干扰素组合施用或配制，包括但不限于干扰素β-1a、干扰素β-1b。

还可以将本发明的式I化合物与α-干扰素组合施用或配制，包括但不限于干扰素α-1、干扰素α-2a(referon)、干扰素α-2b、内含子、Peg-内含子、Pegasys、共有干扰素(consensus interferon)(干复津)和albuferon。

可以将本发明的式I化合物与吸收促进剂、特别是那些靶向于淋巴系统的那些组合施用或配制，包括但不限于：甘氨胆酸钠；癸酸钠；N-月桂基- -D-麦芽糖吡喃糖苷(maltopyranoside)；EDTA；混合微胶粒；和Muranishi Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.，7-1-33中报道的那些，该文献全文引入本文作为参考。还可以使用其它已知的吸收促进剂。因此，本发明还包括含有一种或多种本发明的式I化合物和一种或多种吸收促进剂的药物组合物。

可以将本发明的式I化合物与烷化剂组合施用或配制。烷化剂的实例包括但不限于氮芥、氮丙啶类、甲蜜胺类、磺酸烷基酯类、亚硝基脲类、三氮烯类、氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、塞替派、白消安、卡莫司汀、链佐星、达卡巴嗪和替莫唑胺。

本发明的化合物和其它治疗剂可以叠加或更优选协同起作用。在优选的实施方案中，将包含本发明化合物的组合物与其它治疗剂的施用同时给予，所述的其它治疗剂可以为同一组合物的一部分或在不同于包含本发明化合物的组合物的组合物中。在另一实施方案中，本发明的化合物在施用其它治疗剂之前或随后给予。在单独的实施方案中，将本发明的化合物适用于以前未接受或者未同时接受其它治疗剂、特别是抗病毒剂治疗的患者。

在一项实施方案中，本发明的方法包括施用一种或多种本发明的式I化合物而不施用额外的治疗剂。

药物组合物和剂型

包含本发明的式I化合物或其可药用盐或水合物的药物组合物和单一单位剂型也包括在本发明中。本发明的各剂型可以适合于经口服、粘膜(包括舌下、口含、直肠、鼻或阴道)、胃肠道外(包括皮下、肌内、快速浓注、动脉内或静脉内)、透皮或局部给药进行施用。本发明的药物组合物和剂型通常还包含一种或多种可药用赋形剂。还考虑无菌剂型。

在供选择的实施方案中，该实施方案所囊括的药物组合物包括本发明的式I化合物或其可药用盐或水合物以及至少一种额外的治疗剂。额外的治疗剂的实例包括但不限于上述5.2.2部分中列出的那些。

本发明的剂型的组成、形状和类型通常根据其应用而改变。例如，用于急性治疗疾病或相关疾病的剂型可以含有的一种或多种活性成分的量高于长期治疗相同疾病时所用剂型所含的量。类似地，胃肠道外剂型可以含有的一种或多种活性成分的量少于用于治疗相同疾病或病症的口服剂型所含的量。本发明所囊括的具体剂型可以彼此改变的这些和其它方式对本领域技术人员而言是显而易见的。例如参见Remington′s PharmaceuticalSciences，第18版，Mack出版社，Easton PA(1990)。剂型的实例包括但不限于：片剂；胶囊形片剂；胶囊，例如弹性软明胶胶囊；扁囊剂；糖锭；锭剂；分散剂；栓剂；软膏；泥敷剂(泥罨剂)；糊剂；粉剂；敷料；霜剂；膏药；溶液；贴剂；气雾剂(如鼻喷雾剂或吸入剂)；凝胶；适于对患者经口或粘膜施用的液体剂型，包括混悬液(如水性或非水性液体混悬剂、水包油型乳剂或油包水型液体乳剂)、溶液和酏剂；适于对患者经胃肠道外施用的液体剂型；以及可重构以提供适于对患者经胃肠道外施用的液体剂型的无菌固体(例如结晶或无定形固体)。

典型的药物组合物和剂型包含一种或多种载体、赋形剂或稀释剂。适宜的赋形剂是药学领域的技术人员众所周知的，本文提供了适宜赋形剂的非限制性实例。具体赋形剂是否适于掺入药物组合物或剂型取决于本领域众所周知的多种因素，包括但不限于剂型施用于患者的途径。例如，口服剂型如片剂可含有不适合于胃肠道外剂型使用的赋形剂。具体赋形剂的适宜性还可取决于剂型中的具体活性成分。

本发明进一步囊括含有活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可促进某些化合物的降解。例如，添加水(例如5％)作为模拟长期贮存的方式以确定例如贮存期或者制剂随时间的稳定性的特性在药物领域广泛接受的。例如参见Jens T.Carstensen，Drug Stability：Principles & Practice，第2版，Marcel Dekker，NY，NY，1995，第379-80页。实际上，水和加热可加速某些化合物的分解。因此，水对制剂的影响可能具有重要意义，因为含水量和/或湿度是制剂的制备、操作、包装、贮存、运输和使用过程中通常遇到的。

可以采用无水或低含水量的成分和低含水量或低湿度的条件制备本发明的无水药物组合物和剂型。

应制备和贮存无水药物组合物以维持其无水性质。因此，无水组合物优选采用已知防止接触水的材料进行包装，以它们可被包括在适宜的配制药盒中。适宜包装的实例包括但不限于密封的箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包和窄条包(strip packs)。

本发明进一步囊括含有一种或多种降低活性成分分解速率的化合物的药物组合物和剂型。这类化合物(本文称为“稳定剂”)包括但不限于抗氧化剂(如抗坏血酸)、pH缓冲剂或盐缓冲剂。

正如赋形剂的用量和类型一样，剂型中活性成分的量和具体类型可根据各因素(例如但不限于对患者施用的途径)而改变。然而，本发明的典型剂型包含0.1mg-1500mg/单位的本发明的式I化合物或其可药用盐或水合物以提供约0.01-200mg/kg/天的剂量。

口服剂型

可以将适合于口服施用的本发明的药物组合物制成分散的剂型，例如但不限于片剂(例如咀嚼片)、胶囊形片剂、胶囊和液体(例如矫味糖浆剂)。这类剂型含有预定量的活性成分，可以通过本领域技术人员众所周知的制药方法制备。通常参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack出版社，Easton PA(1990)。

按照常规制药配料技术，通过将活性成分与至少一种赋形剂密切混和来制备本发明的典型口服剂型。赋形剂可以采用各种形式，这取决于所需施用的制剂形式。例如，适用于口服液体或气雾剂剂型的赋形剂包括但不限于水、乙二醇、油、醇类、矫味剂、防腐剂和着色剂。适用于固体口服剂型(例如粉剂、片剂、胶囊和胶囊形片剂)的赋形剂的实例包括但不限于淀粉、糖类、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。

片剂和胶囊因其易于施用而代表了最有利的口服单位剂型，在这种情况下使用固体赋形剂。如果需要的化，可以通过标准的水性或非水性技术给片剂包衣。可以通过任意制药方法制备这类剂型。通常而言，药物组合物和剂型如下制备：均匀紧密地混合活性成分与液体载体、固体载体细粉或它们两者，然后如果必要的话使产物形成所需形式。

例如，片剂可通过压制或模制来制备。压制片可通过在适宜机器中压制自由流动形式(如粉末或颗粒)的任选混合有赋形剂的活性成分来制备。模制片可通过在适宜机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物混合物来制备。可用于本发明的口服剂型的赋形剂实例包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适用于药物组合物和剂型的粘合剂包括但不限于玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉；明胶；天然和合成树胶，例如阿拉伯胶；海藻酸钠、海藻酸、其它海藻酸盐；西黄蓍胶粉末；瓜尔胶；纤维素及其衍生物(例如乙基纤维素、乙酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶凝淀粉、羟丙基甲基纤维素(例如Nos.2208、2906、2910)、微晶纤维素及它们的混合物。

适用于本文公开的药物组合物和剂型的填充剂实例包括但不限于滑石粉、碳酸钙(例如颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉状纤维素、葡聚糖结合剂(dextrates)、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预胶凝淀粉及它们的混合物。本发明的药物组合物中的粘合剂或填充剂通常占药物组合物或剂型的约50至约99％重量。

微晶纤维素的适宜形式包括但不限于作为AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105销售的材料(购自FMC Corporation，American Viscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA)及它们的混合物。具体的粘合剂是作为AVICEL RC-581销售的微晶纤维素与羧甲基纤维素钠的混合物。适宜的无水或低含水量赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103^TM和Starch 1500LM。

崩解剂用于本发明的组合物以提供当接触水性环境时崩解的片剂。含有过多崩解剂的片剂在贮存过程中可能崩解，而含有过少崩解剂的片剂可能不以所需的速率崩解或在所需条件下不崩解。因此，应当使用既不过多也不过少(过多或过少将不利地改变活性成分的释放)的足量崩解剂来形成本发明的固体口服剂型。崩解剂的用量基于制剂类型而改变，其用量对本领域技术人员而言是易于获知的。典型的药物组合物包含约0.5至约15％重量的崩解剂，特别是约1至约5％重量的崩解剂。

可用于本发明的药物组合物和剂型的崩解剂包括但不限于琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、聚克立林钾(polacrilin potassium)、淀粉羟乙酸钠、马铃薯或木薯淀粉、预胶凝淀粉、其它淀粉、粘土(clays)、其它藻胶、其它纤维素、树胶及它们的混合物。

可用于本发明的药物组合物和剂型的润滑剂包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其它二醇类、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石粉、氢化植物油(例如花生油、棉子油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂及它们的混合物。额外的润滑剂包括例如syloid硅胶(AEROSIL 200，W.R.Grace Co.制备，Baltimore，MD)、合成二氧化硅的凝固气雾剂(Degussa Co.销售，Plano，TX)、CAB-O-SIL(致热二氧化硅产品，Cabot Co.销售，Boston，MA)及它们的混合物。如果全然使用，那么润滑剂通常以少于约1％重量(以它们所掺入的药物组合物或剂型计算)的量使用。

缓释剂型

可以通过本领域技术人员众所周知的控释方式或递送装置施用本发明的活性成分。其实例包括但不限于下列文献中描述的那些：US 3,845,770、US 3,916,899、US 3,536,809、US 3,598,123、US 4,008,719、US 5,674,533、US 5,059,595、US 5,591,767、US 5,120,548、US 5,073,543、US 5,639,476、US 5,354,556和US 5,733,566，上述各文献引入本文作为参考。采用例如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、可渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或它们的组合，这类剂型可缓释或控释一种或多种活性成分，从而以不同比例提供所需的释放特性。可容易地选择本领域技术人员公知的适宜控释制剂，包括本文所述的那些，来用于本发明的活性成分。由此，本发明囊括适于口服施用的单一单位剂型，例如但不限于适于控释的片剂、胶囊、软胶囊和胶囊形片剂。

所有控释药物产品均具有一个共同的目标——改善药物疗法使其优于非控释副本所获得的疗法。理想的情况是，最优化设计的控释制剂在医学治疗中的应用的特征在于：使用最少量的药物物质在最短时间内治愈或控制病情。控释制剂的优点包括药物活性延长、剂量频率减少并且患者依从性增加。此外，控释制剂可用于影响起效时间或其它特性如血药浓度，由此可影响副作用(如不良作用)的发生。

设计大多数控释制剂的目的在于：最初释放迅速产生所需治疗作用的量的药物(活性成分)，并且逐渐和持续释放其它量的药物以在延长时期内维持治疗或预防作用水平。为了在体内维持这种恒定的药物水平，药物必须从剂型中以替换从体内代谢和排泄的药物量的速率释放。可以通过多种条件刺激活性成分的控制释放，包括但不限于pH、温度、酶、水或其它生理条件或化合物。

胃肠道外剂型

可以通过多种途径施用胃肠道外剂型，包括但不限于皮下、静脉内(包括快速浓注)、肌内和动脉内。因为胃肠道外剂型的施用通常绕过患者对污染物的天然防御，所以它们优选为无菌的或能够在对患者施用前灭菌。胃肠道外剂型的实例包括但不限于即可注射的溶液、即可溶于或混悬于可药用注射用溶媒中的干燥和/或冷冻干燥产品(可重构粉末)、即可注射的混悬液和乳剂。

可用于提供本发明的胃肠道外剂型的适宜溶媒是本领域技术人员众所周知的。其实例包括但不限于：注射用水(USP)；水性溶媒，例如但不限于氯化钠注射液、Ringer’s注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖及氯化钠注射液和乳酸盐Ringer’s注射液；水溶混性溶媒，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水性溶媒，例如但不限于玉米油、棉子油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。还可以将增加本文公开的一种或多种活性成分的溶解度的化合物掺入本发明的胃肠道外剂型中。

透皮剂型

透皮剂型包括“储库型”或“基质型”贴剂，它们可以应用于皮肤，佩戴特定时间期限以允许透入所需量的活性成分。

可用于提供本发明所囊括的透皮和局部剂型的适宜赋形剂(例如载体和稀释剂)和其它材料是药学领域的技术人员众所周知的，其取决于指定药物组合物或剂型所应用的具体组织。考虑到这样的事实，典型的赋形剂包括但不限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁-1，3-二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及它们的混合物。根据所治疗的具体组织，可以在使用本发明的活性成分进行治疗之前、同时或之后使用额外的组分。例如，渗透促进剂可用于帮助递送活性成分至组织。适宜的渗透促进剂包括但不限于：丙酮；各种醇类，例如乙醇、油基和四氢呋喃基；烷基亚砜类，例如二甲亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮类，例如聚乙烯吡咯烷酮；Kollidon grades(聚维酮、聚乙烯吡咯酮)；脲；和各种水溶性或不溶性糖酯类，例如吐温80(聚山梨酯80)和司盘60(脱水山梨醇单硬脂酸酯)。

还可以调节药物组合物或剂型的pH或者药物组合物或剂型所应用的组织的pH以改善一种或多种活性成分的递送。类似地，可以调节溶剂载体的极性、其离子强度或张力以改善递送。还可以将例如硬脂酸酯(盐)的化合物加入到药物组合物或剂型中以有利地改变一种或多种活性成分的亲水性或亲脂性，从而改善递送。在此方面，硬脂酸酯(盐)可用作制剂的脂质载体，用作乳化剂或表面活性剂，以及用作递送促进剂或渗透促进剂。活性成分的不同的盐、水合物或溶剂化物可用于进一步调节所得组合物的特性。

局部用剂型

本发明的局部用剂型包括但不限于霜剂、洗剂、软膏、凝胶、溶液、乳剂、混悬剂或本领域技术人员公知的其它剂型。例如参见Remington′sPharmaceutical Sciences，第18版，Mack出版公司，Easton PA(1990)；和Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms，第4版，Lea & Febiger，费城(1985)。

可用于提供本发明所囊括的透皮和局部剂型的适宜赋形剂(例如载体和稀释剂)和其它材料是药学领域的技术人员众所周知的，其取决于指定药物组合物或剂型所应用的具体组织。考虑到这样的事实，典型的赋形剂包括但不限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁-1，3-二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及它们的混合物。

根据所治疗的具体组织，可以在使用本发明的活性成分进行治疗之前、同时或之后使用额外的组分。例如，渗透促进剂可用于帮助递送活性成分至组织。适宜的渗透促进剂包括但不限于：丙酮；各种醇类，例如乙醇、油基和四氢呋喃基；烷基亚砜类，例如二甲亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮类，例如聚乙烯吡咯烷酮；Kollidon grades(聚维酮、聚乙烯吡咯酮)；脲；和各种水溶性或不溶性糖酯类，例如吐温80(聚山梨酯80)和司盘60(脱水山梨醇单硬脂酸酯)。

粘膜剂型

本发明的粘膜剂型包括但不限于眼用溶液、喷雾剂和气雾剂或者本领域技术人员公知的其它剂型。例如参见Remington′s PharmaceuticalSciences，第18版，Mack出版公司，Easton PA(1990)；和Introduction toPharmaceutical Dosage Forms，第4版，Lea & Febiger，费城(1985)。可以将适于治疗口腔内粘膜组织的剂型配制成漱口剂或口腔凝胶。在一项实施方案中，气雾剂包含载体。在另一实施方案中，气雾剂不含载体。

还可以将本发明的式I化合物通过吸入直接施用于肺。就吸入施用而言，可以通过许多不同装置将式I化合物便利地递送至肺。例如，采用含有适宜的低沸点抛射剂(如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适宜的气体)的容器的计量吸入器(“MDI”)可用于将式I化合物直接递送至肺。MDI装置购自多个供应商，例如3M Corporation、Aventis、Boehringer Ingleheim、Forest Laboratories、Glaxo-Wellcome、ScheringPlough和Vectura。

或者，可以采用干粉吸入器(DPI)装置将式I化合物施用至肺(例如参见Raleigh等人，Proc.Amer.Assoc.Cancer Research Annual Meeting，1999，40，397，该文献引入本文作为参考)。DPI装置通常采用例如如下的机制：气体以在容器内产生干粉雾，其然后可被患者吸入。DPI装置也是本领域众所周知的，可以购自许多销售商，包括例如Fisons、Glaxo-Wellcome、Inhale Therapeutic Systems、ML Laboratories、Qdose和Vectura。普及的变化形式为多剂量DPI(“MDDPI”)系统，它能够递送一次以上的治疗剂量。MDDPI装置可购自例如AstraZeneca、GlaxoWellcome、IVAX、ScheringPlough、SkyePharma和Vectura的公司。例如，用于吸入器和吹入器的明胶胶囊和药筒可配制成用于这些系统的含有化合物与适宜粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

可用于将式I化合物递送至肺的其它类型的装置为液体喷雾装置，例如由Aradigm公司提供。液体喷雾系统使用极小的喷嘴以雾化液体药物制剂，然后可以使其直接吸入肺。

在优选的实施方案中，喷雾器装置用于将式I化合物递送至肺。喷雾器通过使用例如超声能来形成易于被吸入的细颗粒来由液体药物制剂产生气雾剂(例如参见Verschoyle等人，British J.Cancer，1999，80，SuppI 2，96，该文献引入本文作为参考)。喷雾器的实例包括由Sheffield/SystemicPulmonary Delivery Ltd.(参见Armer等人，US 5,954,047；van der Linden等人，US 5,950,619；van der Linden等人，US 5,970,974，该文献引入本文作为参考5,970,974，这些文献引入本文作为参考)、Aventis和BatellePulmonary Therapeutics提供的装置。

在特别优选的实施方案中，电流动力学(electrohydrodynamic，“EHD”)气雾剂装置用于将式I化合物递送至肺。EHD气雾剂装置使用电能来雾化液体药物溶液或混悬液(例如参见Noakes等人，US 4,765,539；Coffee，US4,962,885；Coffee，PCT申请WO 94/12285；Coffee，PCT申请WO 94/14543；Coffee，PCT申请WO 95/26234，Coffee，PCT申请WO 95/26235，Coffee，PCT申请WO 95/32807，这些文献引入本文作为参考)。式I化合物制剂的电化学特性可以是采用EHD气雾剂装置将该药物递送至肺时最优化的重要参数，这类最优化由本领域技术人员按照常规进行。EHD气雾剂装置可以以比现有肺递送技术更有效的方式将药物递送至肺。肺内递送式I化合物的其它方法是本领域技术人员公知的，属于本发明的范围。

适用于喷雾器和液体喷雾装置和EHD气雾剂装置的液体药物制剂通常包含式I化合物与可药用载体。优选可药用载体为液体，例如醇、水、聚乙二醇或全氟化碳。任选可以加入其它物质以改变式I化合物的溶液或混悬液的气雾剂特性。优选该物质为液体，例如醇、乙二醇、聚乙二醇或脂肪酸。配制适用于气雾剂装置的液体药物溶液或混悬液的其它方法是本领域技术人员所公知的(例如参见Biesalski，US 5,112,598；Biesalski，US 5,556,611，这些文献引入本文作为参考)。还可以将式I化合物配制成直肠或阴道组合物，例如栓剂或滞留型灌肠剂，例如含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯类的那些。

除上述制剂外，还可以将式I化合物配制成储库制剂。这类长效制剂可通过植入(例如经皮下或肌内)或通过肌内注射给予。因此，例如，化合物可以用适宜的聚合材料或疏水性材料(例如作为可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂来配制，或者作为微溶性衍生物、例如作为微溶性盐来配制。

或者，可以使用其它药物递送系统。脂质体和乳剂为可用于递送式I化合物的众所周知的递送载体实例。还可以使用某些有机溶剂如二甲亚砜，然而通常以毒性较大为代价。还可以使用控释系统递送式I化合物。在一项实施方案中，可以使用泵(Sefton，CRC Crit.Ref Biomed Eng.，1987，14，201；Buchwald等人，Surgery，1980，88，507；Saudek等人，N Engl.J.Med.，1989，321，574)。在另一实施方案中，可以使用聚合材料(参见Medical Applicationsof Controlled Release，Langer和Wise(编辑)，CRC Pres.，Boca Raton，Fla.(1974)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design andPerformance，Smolen和Ball(编辑)，Wiley，纽约(1984)；Ranger和Peppas，J.Macronzol.Sci.Rev.Macromol Chem.，1983，23，61；另参见Levy等人，Science，1985，228，190；During等人，Ann.Neurol.，1989，25，351；Howard等人，1989，J.Neurosurg.71，105)。在另一实施方案中，可以将控释系统置于本发明化合物靶点例如肺的附近，由此仅需要全身剂量的一部分(例如参见Goodson在Medical Applications of Controlled Release，见上文，第2卷，笫115页(1984))。可以使用其它控释系统(例如参见Langer，Science，1990，249，1527)。

可用于提供本发明所囊括的粘膜剂型的适宜赋形剂(例如载体和稀释剂)和其它材料是药学领域的技术人员众所周知的，其取决于指定药物组合物或剂型所施用的具体部分和方法。考虑到这样的事实，典型的赋形剂包括但不限于水、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁-1，3-二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及它们的混合物，它们是无毒的和可药用的。这类额外成分的实例是本领域众所周知的，例如参见Remington′sPharmaceutical Sciences，第18版，Mack出版社，Easton PA(1990)。

还可以调节药物组合物或剂型的pH或者药物组合物或剂型所应用的组织的pH以改善一种或多种活性成分的递送。类似地，可以调节溶剂载体的极性、其离子强度或张力以改善递送。还可以将例如硬脂酸酯(盐)的化合物加入到药物组合物或剂型中以有利地改变一种或多种活性成分的亲水性或亲脂性，从而改善递送。在此方面，硬脂酸酯(盐)可用作制剂的脂质载体，用作乳化剂或表面活性剂，以及用作递送促进剂或渗透促进剂。活性成分的不同的盐、水合物或溶剂化物可用于进一步调节所得组合物的特性。

药盒

本发明提供了药包或药盒，其包括一个或多个含有可用于治疗或预防丙型肝炎病毒感染的式I化合物的容器。在其它实施方案中，本发明提供了药包或药盒，其包括一个或多个含有可用于治疗或预防丙型肝炎病毒感染的式I化合物的容器和一个或多个含有额外治疗剂的容器，所述的额外治疗剂包括但不限于上文5.2.2部分中所列的那些，特别是抗病毒药、干扰素、抑制病毒酶的物质或抑制病毒复制的物质，优选额外的治疗剂为HCV特异性的或表现出抗-HCV活性。

本发明还提供了药包或药盒，其包括一个或多个含有一种或多种本发明药物组合物的成分的容器。任选与这类容器一起的是由调控药物或生物产品的生产、使用或销售的政府机构开据的形式的通知，该通知反映出得到了对人体施用而言的制备、使用或销售机构的许可。

本发明的物质可采用如下所述的反应途径和合成流程、使用本领域公知的通常技术、应用易于获得的原料来制备。通过本领域技术人员显而易见的变型可以成功地进行本发明的非示例化合物的合成，例如通过适当保护的干扰基团，通过改变为本领域公知的其它适宜试剂，或者通过对反应条件作常规的变通。或者，本文公开的或本领域通常公知的其它反应将被认为具有制备本发明其它化合物的可应用性。

化合物的制备

在下述合成流程中，除非另有说明，所有温度以摄氏度表示，所有份数和百分比按重量计。试剂购自商品供应商如Aldrich Chemical Company或Lancaster Synthesis Ltd.，并且除非另有说明，未经进一步纯化使用。四氢呋喃(THF)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)购自Aldrich，为Sure Seal瓶包装，获得即可使用。除非另有说明，在干燥氮气环境中蒸馏以下溶剂和试剂。THF和Et₂O从Na-二苯甲酮羰自由基(ketyl)中蒸馏；CH₂Cl₂、二异丙胺、吡啶和Et₃N从CaH₂中蒸馏；MeCN首先从P₂O₅、然后从CaH₂中蒸馏；MeOH从Mg中蒸馏；PhMe、EtOAc和i-PrOAc从CaH₂中蒸馏；TFAA在干燥氩气环境中通过简单常压蒸馏纯化。

下述反应通常在环境温度下和氩气正压力中(另有说明除外)在无水溶剂中进行，反应烧瓶配有橡胶隔片以通过注射器加入底物和试剂。玻璃器皿用烘箱烘干和/或加热干燥。通过TLC检测反应，根据原料消耗判断反应终止。使用铝支持的二氧化硅60 F₂₅₄ 0.2mm平板(EM Science)进行分析型薄层色谱法(TLC)，使用UV光(254nm)随后与市售乙醇磷钼酸一起加热来显色。使用铝支持的二氧化硅60 F₂₅₄ 1.0mm平板(EM Science)进行制备型薄层色谱法(TLC)，使用UV光(254nm)显色。

除非另有说明，通常如下进行后处理：用反应溶剂或萃取溶剂使反应体积加倍，然后用以萃取体积计25％体积的所示水性溶液洗涤。用无水Na₂SO₄和/或Mg₂SO₄干燥产物溶液，此后过滤并在减压下在旋转蒸发仪上蒸发溶剂，标为真空除去溶剂。使用230-400目硅胶或50-200目中性氧化铝在正压下进行柱色谱法。在实施例所示的压力或环境压力下进行氢解。

采用在400MHz下操作的Varian Mercury-VX400仪器上记录¹H-NMR谱，在75MHz操作下记录¹³C-NMR谱。NMR谱采用CDCl₃溶液获得(以ppm报道)，采用氯仿(7.27ppm和77.00ppm)作为参比标准品，适宜时可采用CD₃OD(3.4和4.8ppm和49.3ppm)、DMSO-d₆或内标四甲基硅烷(0.00ppm)。需要时可使用其它NMR溶剂。当报道峰的多样性时，使用下列缩写：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)，m(多重峰)、br(宽峰)、dd(双二重峰)、dt(双三重峰)。当给出偶合常数时以赫兹(Hz)报道。

红外(IR)光谱在FT-IR光谱仪上作为净油、KBr片或作为CDCl₃溶液记录，当给出时以波数报道(cm^-1)。所报道的质谱为通过AnadysPharmaceuticals，Inc.的分析化学部门进行的(+)-ES LC/MS。元素分析由在Norcross，GA.的Atlantic Microlab，Inc.进行。使用开放式毛细管仪测定熔点(mp)且未经校准。

所述合成途径和实验操作使用许多常用的化学缩写：THF(四氢呋喃)、DMF (N，N-二甲基甲酰胺)、EtOAc(乙酸乙酯)、DMSO(二甲亚砜)、DMAP(4-二甲氨基吡啶)、DBU(1，8-二氮杂环[5.4.0]十一碳-7-烯)、DCM(4-(二氰基亚甲基)-2-甲基-6-(4-二甲氨基-苯乙烯基)-4H-吡喃)、MCPBA(3-氯过苯甲酸)、EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)、HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐)、HOBT(1-羟基苯并三唑水合物)、TFAA(三氟乙酸酐)、pyBOP(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基磷六氟磷酸盐)、DIEA(二异丙基乙胺)、BOC(叔丁氧羰基)、2，2-DMP(2，2-二甲氧基丙烷)、IPA(异丙醇)、TEA(三乙胺)、DCE(1，2-二氯乙烷)、PPTS(对甲苯磺酸吡啶)、DEAD(氮杂二甲酸二乙酯)、PS(聚合物支持的)、HF(氟化氢)、MeCN(乙腈)、MeOH(甲醇)、Val(缬氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、HPLC(高压液相色谱法)、TLC(薄层色谱法)等。

流程1表示制备5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮的5′-氨基酸酯的通用操作。

流程1

a)2，2-二甲氧基丙烷，丙酮，DMSO，MeSO₃H，0℃

b)BOC-NHCHR⁴CO₂H，EDC，DMAP，PhMe，0℃-rt

c)无水HCl，iPrOAc，iPrOH

在典型的合成途径中，首先保护5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮的β-D-核糖部分的2′，3′-羟基，优选如2中所示用丙酮化合物进行保护。然后使游离的5′-羟基用N-被保护的氨基酸进行各种酯化法，形成IIa。然后使氨基酸酯的氮和核糖单元的2′，3′-羟基接受各种脱保护条件，优选同时进行，随后使氨基酸酯的游离胺形成盐，如II中所解释的。

实施例1：5-氨基-3-(5′-O-L-缬氨酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮二盐酸盐(3)

步骤1：5-氨基-3-(2′，3′-O-异亚丙基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮的制备

于室温向250mL Morton烧瓶中所含有的1(5.37g，17.0mmol，按照US 5,041,426(实施例2)中给定的操作来制备，该文献全文引入作为参考)在丙酮(40mL)中的不均匀混合物中依次加入2，2-DMP(6.26mL，50.9mmol)、DMSO(6.6mL)和MeSO₃H(220μL，3.39mmol)。剧烈搅拌该反应混合物，随二醇消耗变均匀和呈现金黄色。6小时后TLC分析(SiO₂，10％MeOH-CHCl₃)显示反应完全。使用有槽纹的Whatman 1型滤纸通过重力过滤除去未溶解的固体。此后将滤液倾入10倍体积的冰水(～400mL)，得到立即沉淀的白色固体。在短暂搅拌后，加入溶于水(10mL)的NaHCO₃(285mg，3.39mmol)以中和MeSO₃H。在Morton反应器中持续剧烈搅拌15分钟，然后通过粗的烧结玻璃漏斗过滤该混合物。用冰水(100mL)洗涤固体物质，风干，然后在65℃下和高真空中进一步干燥，得到5.36g(88％)丙酮化合物2，为白色固体：

mp 280-81℃；¹H(DMSO-d₆)δ1.28(s，3H)，1.47(s，3H)，3.43-3.55(m，2H)，3.95-3.99(m，1H)，4.77-4.80(m，1H)，4.88-4.91(m，1H)，5.24-5.26(m，1H)，5.99(s，1H)，6.97(br s，2H)，11.25(s，1H).

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-5’-N-叔丁氧羰基-L-缬氨酰基)-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(4)的制备

向0℃下的N-丁氧羰基-(L)-缬氨酸(671mg，2.8lmmol)在THF(9mL)中的溶液中加入EDC(588mg，3.07mmol)。将所得均匀混合物于0℃搅拌45分钟，此时该体系变得不均匀，一次性加入来自上述步骤1的固体丙酮化合物2(1.00g，2.81mmol)。随后加入固体DMAP(522mg，4.27mmol)。使该反应混合物达到室温，另外搅拌5小时，此时将其在25℃下通过旋转蒸发仪浓缩至得到黄色浆状物。将残余物溶于EtOAc(50mL)，使用1N HCl(10mL)进行分配，随后用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)中和酸。用EtOAc(2×50mL)进一步萃取酸性水相，然后使用碱性水相进行分配。用Na₂SO₄干燥所合并的有机相，通过短SiO₂垫过滤，浓缩，得到1.480g(96％)Boc-保护的氨基酸酯4，为泡沫：mp 158℃(分解)；

¹H(CDCl₃)δ0.86(d，J＝7.0，3H)，0.95(d，J＝7.0，3H)，1.35(s，3H)，1.44(s，9H)，1.56(s，3H)，1.75(br s，1H)，2.08-2.19(m，1H)，4.20-4.24(m，2H)，4.30-4.37(m，1H)，4.56(dd，J＝11.0，5.9，1H)，4.96(dd，J＝6.2，3.7，1H)，5.11(br d，J＝8.8，1H)，5.29(br d，J＝6.6，1H)，5.88(br s，2H)，6.23(s，1H).

步骤3：5-氨基-3-(5’-O-L-缬氨酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮二盐酸盐的制备(3)

使HCl气流通过浓H₂SO₄泡罩器，随后于0℃直接(通过烧结分散管)通入含有无水乙酸异丙酯(80mL)的250mL 3-颈Morton烧瓶，直到获得饱和溶液。向其中加入来自上述步骤2的Boc-氨基酸酯(5.53g，9.95mmol)在乙酸异丙酯(30mL)中的溶液，导致在5分钟内形成白色固体沉淀。向其中加入10％(v/v)IPA(11mL)。将反应混合物温热至室温，然后搅拌12小时。用无水甲苯(100mL)稀释不均匀的反应混合物。在N₂环境中使用中央孔烧结玻璃漏斗过滤，得到灰白色无定形固体。将该固体在无水THF中研磨，随后过滤，在65℃下真空干燥，得到3.677g(81％)标题化合物3，为白色固体：mp 166-68℃(分解)；

¹H(DMSO-d₆)δ0.90(d，J＝7.0，3H)，0.94(d， J＝7.0，3H)，2.14-2.18(m，1H)，3.83-3.85(m，1H)，3.96-4.00(m，1H)，4.23-4.28(m，2H)，4.42(dd，J＝11.7，3.4，1H)，4.75(dd，J＝10.3，5.5，1H)，5.81(d，J＝4.4，1H)，6.46(br s，3H)，7.23(br s，2H)，8.47(s，3H)，11.5(br s，1H).

元素分析C₁₅H₂₁N₅O₇S·2HCl：计算值：C，36.89；H，4.75；Cl，14.52；N，14.34；S，6.57；实测值：C，37.03：H，4.74；Cl，14.26；N，14.24；S，6.42.

实施例2：5-氨基-3-(5’-O-L-异亮氨酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮3/2盐酸盐(5)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-5’-N-叔丁氧羰基-L-异亮氨酰基)-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(6)的制备

按照与实施例1步骤2类似的方式，由5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮2和N-叔丁氧基-L-异亮氨酸7制备5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-5’-N-叔丁氧羰基-L-异亮氨酰基)-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮6，产率为93％，为灰白色泡沫：

¹HNMR(400MHz，d₆-DMSO)δ11.29(s，1H)，7.09(d，J＝8.0，1H)，7.02(br s，1H)，6.02(s，1H)，5.28(d，J＝6.2，1H)，5.06(br s，1H)，4.16-4.22(m，2H)，3.85(dd，J＝8.0，6.6，1H)，1.68(br s，1H)，1.47(s，3H)，1.34(s，9H)，1.29(s，3H)，0.71-0.89(m，5H).

步骤2：5-氨基-3-(5’-O-L-异亮氨酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮二盐酸盐(5)的制备

按照与实施例2步骤3类似的方式，由上述中间体制备标题化合物，为白色固体，产率为80％：mp 173-174℃(分解)；

¹HNMR(400 MHz，d₆-DMSO)δ11.41(br s，1H)，8.41(br s，3H)，7.15(br s，2H)，5.82(d，J＝4.8，1H)，4.50-5.00(m，2H)，4.40(dd，J＝11.7，3.3，1H)，4.21-4.30(m，2H)，3.91-4.0(m，2H)，1.84-1.91(m，1H)，1.37-1.44(m，1H)，1.19-1.27(m，1H)，0.80-0.87(m，6H).元素分析C₁₆H₂₃N₅O₇S·3/2HCl：计算值：C，39.69；H，5.10；N，14.47；Cl，10.98；S，6.62；实测值：C，39.05；H，5.13；N，13.73；C1，11.08；S，6.02.

实施例3：5-氨基-3-(5’-O-[α-L-叔丁基甘氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(8)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-5’-N-叔丁氧羰基-[α-L-叔丁基甘氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(9)的制备

按照与实施例1步骤2类似的方式，由5-氨基-3-(2，3-O-异亚丙基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶酮-2，7-二酮2和N-α-L-叔丁氧基甘氨酸制备5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-5’-N-叔丁氧羰基-[α-L-叔丁基甘氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮10，产率为66％，为灰白色泡沫：

¹H

NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ11.28(br s，1H)，6.70-7.40(m，3H)，6.02(s，1H)，5.30(d，J＝6.2，1H)，5.05(br s，1H)，4.17-4.24(m，3H)，3.77(d，J＝8.4，1H)，1.47(s，3H)，1.33(s，9H)，1.29(s，3H)，0.85(s，9H).

步骤2：5-氨基-3-(5’-O-[α-L-叔丁基甘氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2， 7-二酮(8)的制备

按照与实施例1步骤3类似的方式，由上述中间体制备标题化合物8，为白色固体，产率为80％：mp 202-203℃(分解)；

¹HNMR(400MHz，d₆-DMSO)δ11.35(br s，1H)，8.31(br s，3H)，7.08(br s，2H)，5.83(d，J＝4.0，1H)，5.45(br s，1H)，5.21(br s，1H)，4.77-4.82(m，1H)，4.42(dd，J＝11.4，2.6，1H)，4.23-4.28(m，1H)，3.96-4.04(m，1H)，3.74(s，1H)，0.97(s，9H).元素分析C₁₆H₂₃N₅O₇S·HCl：计算值：C，41.25；H，5.19；N，15.03；Cl，7.61；S，6.88；实测值：C，40.41；H，5.41；N，14.16；Cl，7.01；S，6.23.

实施例4：5-氨基-3-(5’-O-[α-L-N-甲基缬氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(11)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-5’-N-叔丁氧羰基-[α-L-N-甲基缬氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(12)的制备

按照与实施例1步骤2类似的方式，由5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮2和N-叔丁氧基-L-N-甲基缬氨酸13制备5-氨基-3-(2’，3’-O-异亚丙基-5’-N-叔丁氧羰基-[α-L-N-甲基缬氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮12，产率为63％，为灰白色泡沫：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)旋转异构的氨基甲酸酯δ11.28(br s，1H)，7.00(br s，2H)，6.02(s，1H)，5.27(d，J＝6.6，1H)，5.04(br s，1H)，4.14-4.28(m，3H)，3.91(d，J＝9.5，1H)，2.79(br s，3H)，2.09(br s，1H)，1.46(s，3H)，1.36(s，4.5H)，1.32(s，4.5H)，1.28(s，3H)，0.78-0.89(m，6H).

步骤2：5-氨基-3-(5’-O-[α-L-N-甲基缬氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(11)

按照与实施例1步骤3类似的方式，由上述中间体制备标题化合物11，为略微不纯的白色固体，产率为60％：mp＞180℃(分解)；

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ11.31(br s，1H)，9.05(br s，2H)，7.05(br s，2H)，5.83(d，J＝4.4，1H)，5.46(br s，1H)，5.21(br s，1H)，4.76-4.82(m，1H)，4.42-4.48(m，1H)，4.28-4.38(m，1H)，4.22-4.28(m，1H)，3.94-4.04(m，2H)，2.54(br s，3H)，2.23(br s，1H)，0.98(d，J＝7.0，3H)，0.88(d，J＝7.0，3H).

元素分析C₁₆H₂₃N₅O₇S·HCl：计算值：C，41.25；H，5.02；N，15.03；S，6.88；Cl，7.61；实测值：C，40.57；H，5.37；N，13.57；S，6.16；Cl，7.29.

流程2

流程2表示制备5-氨基-7-甲氧基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5d]嘧啶-2-酮类和5，7-二氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮类的通用操作。

实施例5：5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-7-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(14)

在氩气环境中将无水物1(2.0g，6.3mmol)溶于无水吡啶。将该溶液冷却至0℃，此时向该混合物中滴加TFAA(13.3g，63mmol)。5分钟后，将反应物置于60℃油浴中达1.5小时，通过TLC(SiO₂，20％MeOH-CHCl₃)监测吡啶阳离子的形成。将0.2 R_f原料转化成基线斑点，它在照射254nm UV光时显蓝色荧光。在转化成活化的中间体时，于0℃将新制成的甲醇钠(1.8gNa，78mmol，300ml甲醇)溶液加入到反应物中。将反应物温热至室温并反应2天。然后用1M NH₄Cl(100mL)使该混合物淬灭，用25％IPA-CHCl₃(5×100mL)萃取。通过硅胶塞过滤粗物质，然后浓缩，得到1.6g(75％)标题化合物14。通过制备型TLC(SiO₂；水，甲醇，乙酸乙酯，5∶10∶85)获得分析样品，为白色固体：mp＞160℃(分解)；

[M+H]⁺330.9，[2M+H]⁺661.1，[3M+H]⁺991.0；R_f＝0.6(20％MeOH-CHCl₃)；mp 200.4℃-200.9℃；¹HNMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.92(s，2H)，5.86(d，J＝5.2，1H)，5.28(d，J＝5.6，1H)，4.96(d，J＝5.2，1H)，4.78(dd，J＝10.8，5.6，1H)，4.67(t，J＝6.0，1H)，4.07-4.10(m，1H)，3.91(s，3H)，3.70-3.80(m，1H)，3.55-3.60(m，1H)，3.40-3.45(m，1H).

元素分析C₁₁H₁₄N₄O₆S：计算值：C，40.00；H，4.27；N，16.96；S，9.71；

实测值：C，40.07；H，4.43；N，16.71；S，9.53.

实施例6：5，7-二氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(15)

在氩气环境中将无水物1(0.3g，0.9mmol)溶于无水吡啶。将溶液冷却至0℃，此时向该混合物中滴加TFAA(1.2mL，9.5mmol)。5分钟后，将反应物置于60℃油浴中达1.5小时，通过TLC(20％MeOH-CHCl₃)监测吡啶阳离子的形成。将0.2 R_f原料转化成基线斑点，它在照射254nm UV光时显蓝色荧光。在转化成活化的中间体时，将反应烧瓶置于油浴中。在使温度达到平衡后，滴加30％NH₃水溶液(25mL)至放热停止，加入剩余部分。在数分钟内形成产物，如分析型TLC R_f 0.25(SiO₂，20％MeOH-CHCl₃)所示。将烧瓶历经30分钟温热至室温，然后在旋转真空中使该水溶液脱气，然后用25％IPA-CHCl₃(5×100mL)萃取。使产物进行快速色谱法(SiO₂，10％MeOH-CHCl₃)，产生55mg(17％)略微不纯的标题化合物15。通过制备型TLC(SiO₂；水-MeOH-EtOAc，5∶10∶85)获得分析样品，为白色固体：mp＞155℃(分解)；

[M+H]⁺316.0；R_f＝0.25(SiO₂，20％MeOH-CHCl₃)；¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.76(s，2H)，6.14(s，2H)，5.85(d，J＝5.2，1H)，5.22(d，J＝4.8，1H)，4.92(d，J＝2.8，1H)，4.70-4.83(m，2H)，4.05-4.10(m，1H)，3.65-3.80(m，1H)，3.52-3.62(m，1H)3.40-3.50(m，1H).元素分析C₁₀H₁₃N₅O₅S·1/2H₂O：计算值：C，37.03；H，4.35；N，21.59；S，9.89；实测值：C，37.27；H，4.32；N，20.43；S，10.11.

流程3

步骤1：5-乙酰氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7(6H)-二酮(16)的制备

将无水物1(8.0g，39.5mmol)溶于无水吡啶(65mL)。依次加入DMAP(3.1g，25.3mmol)和乙酸酐(19.1mL 202.4mmol)。使反应于室温进行2小时，此时用饱和NaHCO₃(100mL)使反应淬灭，用DCM(3×200mL)萃取。浓缩有机相，然后与乙醚一起研磨。该步骤产生12.5g(103％)略微不纯的5-乙酰氨基-3-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7(6H)-二酮16，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ12.23(s，1H)，11.85(s，1H)，5.97(m，2H)，5.48(t，J＝6，1H)，4.35-4.40(m，1H)，4.25-4.31(m，1H)，4.08-4.18(m，1H)，2.49(s，3H)，2.07(s，3H)，2.01(s，3H)，2.00(s，3H).

步骤2：5-乙酰氨基-7-(2，4，6-三异丙基-苯磺酰氧基)-3-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(17)的制备

在环境温度下将来自上述步骤1的中间体(500mg，0.98mmol)溶于DCM(15mL)。向该溶液中加入DMAP(7.3mg，0.06mmol)和TEA(16ml，11mmol)，随后加入2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(454mg，1.5mmol)。1小时后反应完全，浓缩粗混合物，然后通过快速色谱法纯化(SiO₂，10％EtOAc-CHCl₃)，得到690mg(92％)5-乙酰氨基-7-(2，4，6-三异丙基-苯磺酰氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮，为起泡的白色固体17：

74.5-76.3℃；R_f＝0.7(SiO₂，20％EtOAc-CHCl₃)；¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ10.83(s，1H)，7.39(s，2H)，6.03(d，J＝4.0，1H)，5.91-5.96(m，1H)，5.69(t，J＝6.4，1H)，4.30-4.70(m，1H)，4.22-4.26(m，1H)，4.16-4.20(m，1H)，3.90-4.00(m，2H)，2.97-3.01(m，1H)，2.07(s，3H)，2.06(s，3H)，2.04(s，3H)，1.88(s，3H)，1.17-1.25(m，18H).

步骤3：5-乙酰氨基-7-甲基氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(19)的制备

在环境温度下将来自上述步骤2的中间体(1.7g，2.27mmol)溶于二烷(20mL)。向其中加入2.0M在甲醇中的甲胺溶液(3.4mL，6.8mmol)。2小时后，原料完全消耗。浓缩该反应混合物，然后通过快速色谱法纯化(SiO₂，梯度洗脱，20-80％EtOAc-CHCl₃)，得到945mg(83％)纯的标题化合物，为黄色油状物：

[M+H]⁺498.2，[2M+H]⁺995.4；R_f＝0.55(10％CH₃OH-CHCl₃)；¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ10.13(s，1H)，7.70(d，J＝4.41，1H)，5.95-6.02(m，2H)，5.69(s，1H)，4.35-4.39(m，1H)，4.16-4.23(m，2H)，2.90(d，J＝4.8，3H)，2.20(s，3H)，2.07(s，3H)，2.02(s，3H)，2.00(s，3H).

步骤4：5-氨基-7-甲基氨基-3-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(18)的制备

将来自上述步骤3的中间体(420mg，0.85mmol)溶于二烷(4mL)，向该溶液中加入1 M LiOH(8.5mL，8.5mmol)。历经40分钟除去O-乙酰基，在R_f＝0.15得到中间体(SiO₂，5％MeOH-EtOAc)。2小时后，除去N-乙酰基，如TLC R_f＝0.20所示(SiO₂，5％MeOH-EtOAc)。用化学计算量的乙酸中和反应混合物，用25％IPA-CHCl₃萃取，然后浓缩，得到195mg(70％)18。通过制备型TLC(SiO₂；水-MeOH-EtOAc，10∶20∶70)获得标题化合物18的分析样品，为白色固体：

[M+H]⁺330.0；R_f＝0.20(5％MeOH-EtOAc)；mp＞108℃；¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.06(d，J＝3.6，1H)，6.24(s，2H)，5.85(d，J＝5.2，1H)，5.22(d，J＝4.8，1H)，4.93(d，J＝5.2，1H)，4.70-4.80(m，2H)，4.07(d，J＝4.8，1H)，3.75(d，J＝4.4，1H)，3.5-3.6(m，1H)，3.40-3.50(m，1H)，2.82(d，J＝4.4，3H).

实施例8：5-氨基-7-二甲氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(20)

步骤1：5-乙酰氨基-7-二甲氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备

按照与实施例7步骤2类似的方式生产5-乙酰氨基-7-二甲氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮，产率为80％，为黄色油状物：M⁺511.14；R_f＝0.70(SiO₂，10％MeOH-CHCl₃)；

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ10.15(s，1H)，6.10-6.15(m，1H)，5.98-6.09(m，1H)，5.5.66-5.70(m，1H)，4.35-4.40(m，1H)，4.22-4.27(m，1H)，4.14-4.08(m，1H)，3.18(s，6H)，2.19(s，3H)，2.08(s，3H)，2.06(s，3H)，1.99(s，3H).

步骤2：5-氨基-7-二甲氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(20)的制备

按照与实施例7步骤3类似的方式生产标题化合物20，产率为82％。通过制备型TLC(SiO₂；水-MeOH-EtOAc，10∶20∶70)获得分析样品，为白色固体：

[M+H]⁺344.0；[2M+H]⁺687.4；mp＞112℃；R_f＝0.20(5％MeOH-EtOAe)；¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.27(s，2H)，5.91(d，J＝4.8，1H)，5.22(d，J＝6.0，1H)，4.93(d，J＝5.2，1H)，4.71-4.76(m，2H)，4.07-4.09(m，1H)，3.7-3.8(m，1H)，3.5-3.6(m，1H)，3.5-3.6(m，1H)，3.09(s，6H).元素分析C₁₂H₁₇N₅O₅S：计算值：C，41.98；H，4.99；N，20.40；实测值：C，4132；H，5.14；N，18.59.

实施例9：5-氨基-7-环丙氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮一盐酸盐(21)

步骤1：5-乙酰氨基-7-环丙氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备

按照与实施例3步骤2类似的方式生产5-乙酰氨基-7-环丙氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮，产率为80％，为黄色油状物：R_f＝0.45(SiO₂，75％EtOAc-CHCl₃)；

¹H NMR(400MHz，D₆-DMSO)δ10.11(s，1H)，7.87(d，J＝2.8，1H)，5.98-6.01(m，1H)，5.70-5.76(s，1H)，4.32-4.39(m，1H)，4.16-4.30(m，2H)，3.85(s，1H)，2.87(s，1H)，2.25(s，3H)，2.07(s，3H)，2.06(s，3H)，1.98(s，3H)，0.73-0.76(m，2H)，0.57-0.60(m，2H).

步骤2：5-氨基-7-环丙氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备

按照与实施例7步骤3类似的方式生产5-氨基-7-环丙氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮，产率为79％。通过制备型TLC(SiO₂；水-MeOH-EtOAc，10∶20∶70)获得分析样品，为白色固体：

R_f＝0.20(5％MeOH-EtOAc)；mp＞100℃；[M+H]⁺356.0；¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ7.24(s，1H)，6.28(s，2H)，5.86(d，J＝5.6，1H)，5.22(d，J＝6，1H)，4.92(d，J＝5.2，1H)，4.70-4.80(m，2H)，4.05-4.10(m，1H)，3.7-3.8(m，1H)，3.5-3.6(m，1H)，3.45-3.50(m，1H)，2.8(s，1H)，0.68-0.70(m，2H)，0.54-0.57(m，2H).

步骤3：5-氨基-7-环丙氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮盐酸盐(21)的制备

通过将上述步骤2中制备的固体物质加入到剧烈搅拌的HCl在二烷中的4M溶液制备标题化合物，得到白色固态的标题化合物：mp＞99℃

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.25(d，1H，J＝2.8，1H)，6.23(s，2H)，5.87(d，J＝5.2，1H)，5.21(bs，1H)，4.98(bs，1H)，4.73-4.79(m，2H)，4.09(t，J＝5.6，1H)，3.72-3.79(m，1H)，3.55-3.60(m，1H)，3.45-3.37(m，1H)，2.75-2.82(m，1H)，0.72-0.79(m，2H)，0.55-0.63(m，2H).

元素分析C₁₃H₁₇N₅O₅S·HCl：计算值：C，39.85；H，4.63；N，17.87；Cl，9.05；

实测值：C，39.66；H，4.85；N，16.57；Cl，8.13.

实施例10：5-氨基-7-环戊氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(22)

步骤1：5-乙酰氨基-7-吡咯烷子基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备

按照与实施例7步骤2类似的方式生产5-乙酰氨基-7-吡咯烷子基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮，产率为70％。通过制备型TLC(SiO₂；水-MeOH-EtOAc，10∶20∶70)获得分析样品，为白色固体：mp＞108℃(分解)；R_f＝0.80(10％水和20％甲醇，在乙酸乙酯中)；

[M+H]⁺384.0；¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.00(d，J＝7.2，1H)，6.17(s，2H)，5.18(d，J＝5.2，1H)，5.21(d，J＝5.6，1H)，4.92(d，J＝5.6，1H)，4.74-4.80(m，2H)，4.30-4.35(m，1H)，4.05-4.10(m，1H)，3.70-3.80(m，1H)，3.55-3.60(m，1H)，3.30-3.45(m，1H)，1.40-2.0(m，8H).

步骤2：5-氨基-7-环戊氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备

按照与实施例7步骤3类似的方式生产标题化合物22，产率为70％。通过制备型TLC(SiO₂；水-MeOH-EtOAc，10∶20∶70)获得分析样品，为白色固体：mp＞108℃(分解)；R_f＝0.80(10％水和20％甲醇，在乙酸乙酯中)；

[M+H]⁺384.0；¹H NMR

(400MHz，d₆-DMSO)δ7.00(d，J＝7.2，1H)，6.17(s，2H)，5.18(d，J＝5.2，1H)，5.21(d，J＝5.6，1H)，4.92(d，J＝5.6，1H)，4.74-4.80(m，2H)，4.30-4.35(m，1H)，4.05-4.10(m，1H)，3.70-3.80(m，1H)，3.55-3.60(m，1H)，3.30-3.45(m，1H)，1.40-2.0(m，8H).

实施例11：5-氨基-7-吡咯烷子基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(23)

步骤1)：5-乙酰氨基-7-吡咯烷子基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备

按照与实施例7步骤2类似的方式生产5-乙酰氨基-7-吡咯烷子基-3-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮，产率为79％，为黄色油状物：

[M+H]⁺538.1；R_f＝0.80(SiO₂，水-MeOH-EtOAc，10∶20∶70)；¹H(400MHz，D₆-DMSO)δ10.04(s，1H)，5.97-6.02(m，2H)，5.68(s，1H)，4.38(dd，J＝11.6，3.6，1H)，4.15-4.23(m，2H)，3.58(s，4H)，2.23(s，3H)，2.08(s，3H)，2.05(s，3H)，1.98(s，3H)，1.89(s，4H).

步骤2：5-氨基-7-吡咯烷子基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备

按照与实施例7步骤3类似的方式生产标题化合物23，产率为81％。通过制备型TLC(SiO₂；水-MeOH-EtOAc，10∶20∶70)获得分析样品，为白色固体：mp＞112.4℃(分解)；

[M+H]⁺370.3；¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.22(s，2H)，5.90(d，J＝4.8，1H)，5.23(d，J＝5.2，1H)，4.94(d，J＝4.4，1H)，4.68-4.75(m，2H)，4.08(d，J＝4.8，1H)，3.71-3.76(m，1H)，3.55(bs，5H)，3.38-3.54(m，1H)，1.87(s，4H).

流程4

a)2，2-二甲氧基丙烷，丙酮，DMSO，MeSO₃H，0℃

b)BOC-L-缬氨酸EDC，DMAP，PhMe，0℃-rt

c)无水HCl，/PrOAc，/PrOH

实施例12：5-氨基-7-环戊氨基-3-(5′-O-L-缬氨酰基)-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮盐酸盐(24)

在剧烈搅拌下，在0℃下将中间体B溶于无水氯化氢在乙酸异丙酯中的溶液，将其温热至室温。向不均匀混合物中再加入乙酸异丙酯。将反应混合物另外搅拌12小时。加入甲苯，过滤产物并真空干燥，得到所需的二-HCl盐24。

如下制备中间体：

5-氨基-7-环戊氨基-3-(2′，3 ′-O-异亚丙基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(A)

按照Kini等所述的操作如下制备化合物A：在0℃下搅拌5-氨基-7-环戊氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮22与丙酮、DMSO、甲磺酸和过量二甲氧基丙烷的混合物，直到原料完全消耗。将反应混合物加入到冰水中，用饱和NaHCO₃中和至pH 7，用EtOAc萃取。浓缩有机层，进行二氧化硅柱色谱法，得到2′，3′-被保护的二醇产物。

5-氨基-7-环戊氨基-3-(5′-O-(N-(叔丁氧羰基)-L-缬氨酰基)-2′，3′-O-异亚丙基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(B)

向0℃下的N-(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸在THF中的1.0当量溶液中加入1.1当量的EDC。搅拌30分钟后，加入1.0当量的5-氨基-7-环戊基-3-(2′，3′-O-异亚丙基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮A和1.5当量的DMAP。将反应混合物温热至室温，搅拌5小时，浓缩。将残余物溶于EtOAc，用1N HCl进行分配，用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)中和。用EtOAc进一步萃取水相。用Na₂SO₄干燥所合并的有机相，过滤，真空蒸发，得到中间体B，将其通过二氧化硅柱色谱法纯化。

流程5a-5c

流程5a-c表示制备5-氨基-7-烷氧基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮类的通用操作。

流程5a

a)Ac₂O，Et₃N，MeCN

b)聚合物支持的PPh₃，R⁵OH，偶氮二甲酸二乙酯，THF，0℃-rt

c)K₂CO₃，MeOH

流程5b

a)Ac₂O，Et₃N，MeCN

b)聚合物支持的PPh₃，R⁵OH，偶氮二甲酸二乙酯，THF，0℃-rt

c)K₂CO₃，MeOH

流程5c

a)Et₃SiCl，咪唑，DMAP，DMF

b)聚合物支持的PPh₃，R⁵OH，偶氮二甲酸二乙酯，THF，0℃-rt

c)HF，MeCN或HF-pyr，THF

在典型合成途径中，首先使5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮的β-D-核糖部分的2’，3’，5’-羟基和/或5-氨基被保护，优选用甲硅烷基或酰基保护，如16、25和26所示。然后使7-位羰基用各种醇进行各种烷基化方法，形成IVa、IVb和IVc。然后使核糖单元的2’，3’，5’-羟基和/或5-氨基的氮接受适宜的脱保护条件，产生V。如果需要的话，可以进一步对V进行适当修饰。

流程6a-6e

流程6a-6e制备表示5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的通用操作。

流程6a

a)P₂S₅，pyr.

b)Ni，丙酮，回流

c)K₂CO₃，MeOH

d)candida antarctica脂酶，pH7，丙酮

流程6b

a)POCl₃，NEt₃，CHCl₃，回流

b)Zn-Cu，AcOH，80℃

c)K₂CO₃，MeOH

d)candida antarctica脂酶，pH7，丙酮

流程6c

a)POCl₃，NEt₃，CHCl₃，60℃

b)10％Pd/C，H₂，250 psi，NaOAc，EtOH

c)K₂CO₃，MeOH

流程6d

a)SOCl₂，DMF，CHCl₃，80℃或SOBr₂，DMF，CHCl₃，甲苯110℃

b)Zn，AcOH

c)K₂CO₃，MeOH

流程6e

a)POCl₃，DMF，100℃

b)胍-HCl，K₂CO₃，NaHCO₃，DMF，110℃

c)1，2，3，5-四-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖，催化剂，双(4-硝基苯基)磷酸酯160℃

d)K₂CO₃，MeOH

e)candida antarctica酯酮，pH7，丙酮

在其它典型合成途径中，可以使在β-D-核糖的2’，3’，5’-羟基和/或5-氨基上被保护、优选如16和25中所示被酰基保护的5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮1接触各种条件以将7-位的C-7羰基转化为多种对还原敏感的基团(包括但不限于巯基和卤素)。在均相或非均相反应条件下还原后，核糖单元的2’，3’，5’-羟基和/或5-氨基的氮接受适宜的脱保护条件，产生79。如果需要的话，可以进一步对化合物79进行适当修饰。在供选择的方法中，合成5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮，并在各种糖基化条件下进一步接触适宜的β-D-核糖衍生物。

流程7表示制备5-氨基-7取代的和7-未被取代的-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的酯类的通用操作。

流程7

a)^tBuMe₂SiCl，咪唑，DMF

b)酸酐，Et₃N，CH₃CN

c)HF吡啶或nBu₄NF

在典型合成途径中，首先选择性保护5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶的β-D-核糖部分的5′-羟基，优选用适宜的甲硅烷基进行，如VII中所示。然后使2’-和3’-羟基进行各种酯化方法，形成VIII。随后使核糖单元的5’-羟基接受适宜的脱保护条件，产生IX。如果需要的话，可以进一步适当修饰IX。

流程8表示酯化5-氨基-3-(5’-O-氨基酸酯)-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮类的通用操作。

流程8

a)碳酸二叔丁酯，Et₃N，CH₃CN，酸酐

b)HCl，二烷

在典型合成途径中，首先选择性保护式II的5’-氨基酸酯的N-末端胺，优选用适宜的烷氧羰基进行，随后酯化2’-和3’-羟基，如XI中所示。然后使N-末端胺接受适宜的脱保护条件，产生XII。

流程9表示用N-末端被保护的肽在5’-羟基上酯化5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮类的通用操作。

流程9

a)BOCNHCH(R⁴)C(O)NHCH(R⁴)CO₂H，EDC，DMAP，吡啶，DCE，0℃-rt

b) HCl，iPrOAc

在典型合成途径中，用N-被保护的末端胺(优选适宜的烷氧羰基)肽使得5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶的2’，3’-羟基被保护的β-D-核糖部分的5′-羟基(例如2)被酯化，形成5’-氨基酸酯XIII。然后使N-末端胺和2’，3’-羟基同时接受适宜的脱保护条件，产生XIV。

流程10表示制备5-氨基-7-取代的和7-未被取代的-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的5’-酯类的通常操作。

流程10

a)ArCHO，H₂SO₄，THF

b)酸酐，Et₃N，CH₃CN

c)PPTS，CH₃OH

在典型合成途径中，使5’-羟基被保护的5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶(如VII中)的2’-和3’-羟基被保护。理想的是，在如XV中所示保护2’-和3’-羟基的条件下使游离5’-羟基脱保护。然后使核糖单元的5’-羟基接受采用适宜羧酸或其衍生物的各种酯化条件，产生XVI。然后使核糖单元的2’，3’-羟基接受适宜的脱保护条件，产生XVII。如果需要的话，可以进一步适当修饰XVII。

实施例13：5-氨基-7-异丙氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(28)

步骤1：5-乙酰氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(16)的制备

将无水物1(8.17g，25.7mmol)和DMAP(3.13g，25.7mmol)混悬于无水乙腈(125ml)中。向该混悬液中缓慢加入乙酸酐(24.5ml，257mmol)。给反应烧瓶安装水冷却回流冷凝器，回流4.5小时。然后将反应混合物倾入600ml水。使固体沉淀1小时。收集固体，干燥，在乙醚(80ml)中研磨18小时。产生10.3g(82.5％)化合物16，为黄褐色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ12.19(s，1H)，11.81(s，1H)，5.95(m，2H)，5.49(m，1H)，4.38(m，1H)，4.25(m，1H)，4.07(m，1H)，2.20(s，3H)，2.06(s，3H)，2.05(s，3H)，2.00(s，3H)；MS(+)-ES [M+H]⁺m/z485.R_f＝0.45(75％乙酸乙酯-CHCl₃).元素分析C₁₈H₂₀N₄O₁₀S：

计算值：C，44.63；H，4.16；N，11.57；S，6.62.实测值：C，44.40；H，4.18；N，11.58；S，6.56.

步骤2：5-乙酰氨基-7-异丙氧基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(27)的制备

将化合物16(650mg，1.34mmol)和Argonaut PS-三苯膦树脂(4.02mmol，1.86g)置于火焰干燥的烧瓶中的干燥氮气环境中，然后加入无水THF(20ml)。然后在冰浴中将烧瓶冷却至0℃。加入异丙醇(IPA)(0.20ml，2.68mmol)，随后滴加偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)(0.366ml，2.0mmol)。从冰浴中除去烧瓶，温热至环境温度。通过TLC监测反应混合物至化合物16消失。在16完全消耗时，过滤出固体支持的物质。通过快速色谱法纯化粗反应混合物，使用15-60％在氯仿中的乙酸乙酯梯度。除去溶剂，得到460mg(64.9％)27，为白色泡沫：MS(+)-ES [M+H]⁺m/z 527。R_f＝0.7(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤3：5-氨基-7-异丙氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(28)的制备

在干燥氮气环境中将化合物27(600mg，1.14mmol)溶于甲醇(15ml)。加入K₂CO₃(31.5mg，0.2mmol)，将混合物搅拌18小时，通过TLC(1∶1 THF∶氯仿)定期监测。真空浓缩该反应混合物，通过快速柱色谱法纯化(3％甲醇的氯仿溶液)。将分离的固体与乙醚一起研磨，得到210mg(51％)纯的28，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.83(s，2H)，5.86(d，J＝5.2Hz，1H)，5.34(m，1H)，5.26(d，J＝5.6Hz，2H)，4.95(d，J＝5.6Hz，1H)，4.77(m，1H)，4.67(m，1H)，4.09(m，1H)，3.75(m，1H)，3.58(m，1H)，3.43(m，1H)，1.29(d，J＝6.4Hz，6H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z359，[2M+H]⁺ m/z 717.3.R_f＝0.2(50％THF-CHCl₃).

元素分析C₁₃H₁₈N₄O₁₆S：计算值：C，43.57；H，5.06；N，15.63；S，8.95.

实测值：C，43.39；H，5.07；N，15.45；S，8.82.

实施例14：5-氨基-7-乙氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(30)

步骤1：5-乙酰氨基-7-乙氧基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(29)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和乙醇制备29，产率为72％，为白色泡沫：MS(+)-ES[M+H]⁺ m/z 513.R_f＝0.45(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：5-氨基-7-乙氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(30)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由29制备标题化合物，产率为65％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.87(s，2H)，5.85(d，J＝4.8Hz，1H)，5.27(d，J＝5.6Hz，1H)，4.96(d，J＝5.2Hz，1H)，4.78(m，1H)，4.66(m，1H)，4.36(m，2H)，4.09(m，1H)，3.74(m，1H)，3.58(m，1H)，3.40(m，1H)，1.29(m，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z445，[2M+H]⁺m/z689.R_f＝0.2(50％THF-CHCl₃).元素分析C₁₂H₁₆N₄O₆S·0.25 H₂O：计算值：C，41.31；H，4.77；N，16.06；S，9.19.实测值：C，41.24；H，4.71；N，15.89；S，9.06.

实施例15：5-氨基-7-苄氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(32)

步骤1：5-乙酰氨基-7-苄氧基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(31)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和苄醇制备31，产率为77％，为白色泡沫：MS(+)-ES[M+H]⁺ 575.R_f＝0.55(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：5-氨基-7-苄氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(32)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由31制备标题化合物，产率为62％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.39(bm，5H)，6.95(s，2H)，5.86(d，J＝4.8Hz，1H)，5.43(s，2H)，5.28(d，J＝5.2Hz，1H)，4.96(d，J＝5.2Hz，1H)，4.80(m，1H)，4.66(m，1H)，4.09(m，1H)，3.76(m，1H)，3.42(m，1H)；MS(+)-ES[M+H]⁺407，[2M+H]813.R_f＝0.15(50％THF-CHCl₃).

元素分析C₁₇H₁₈N₄O₁₆S：计算值：C，50.24；H，4.46；N，13.79；S，7.89.

实测值：C，49.97；H，4.55；N，13.44；S，7.70.

实施例16：5-氨基-7-(4-甲氧基-苄氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(34)

步骤1：5-乙酰氨基-7-(4-甲氧基-苄氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和4-甲氧基-苄醇获得33，产率为72％，为白色泡沫：[M+H]⁺605.R_f＝0.5(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：5-氨基-7-(4-甲氧基-苄氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(34)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由33制备标题化合物，产率为68％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.38(dd，J＝8，4，2.0Hz，2H)，6.93(s，2H)，6.91(dd，J＝6.8，2.0Hz，2H)，5.85(d，J＝5.2Hz，1H)，5.35(s，2H)，5.27(d，J＝5.6Hz，1H)，4.96(d，J＝5.2，1H)，4.78(m，2H)，4.65(m，1H)，4.09(m，1H)，3.75(m，1H)，3.74(m，3H)，3.55(m，1H)，3.41(m，1H)；MS(+)-ES[M+H]⁺437，[2M+H]⁺873.R_f＝0.3(50％THF-CHCl₃).元素分析C₁₈H₂₀N₄O₇S·1.0 H₂O：计算值：C，47.57；H，4.88；N，12.33；S，7.06.实测值：C，47.28；H，4.91；N，12.36；S，7.10.

实施例17：7-烯丙氧基-5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(36)

步骤1：5-乙酰氨基-7-烯丙氧基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(35)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和烯丙醇制备35，产率为73％，为白色泡沫：[M+H]⁺525.R_f＝0.6(75％乙酸乙酯/CHCl₃)。

步骤2：7-烯丙氧基-5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(36)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由35制备标题化合物，产率为69％，为白色泡沫。

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.90(s，2H)，6.04(m，1H)，5.86(d，J＝8.0Hz，1H)，5.26(m，2H)，4.96(d，J＝5.6Hz，1H)，4.86(m，1H)，4.79(m，2H)，4.66(m，1H)，4.08(m，1H)，3.76(m，1H)，3.58(m，1H)，3.45(m，1H)；MS(+)-ES[M+H]⁺357，[2M+H]⁺71 3.R_f＝0.3(50％THF-CHCl₃).

元素分析C₁₃H₁₆N₄O₆S：计算值：C，43.82；H，4.53；N，15.72；S，9.00.

实测值：C，43.65；H，4.65；N，15.64；S，8.96.

实施例18：5-氨基-7-(3-甲基-丁-2-烯氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(38)

步骤1：5-乙酰氨基-7-(3-甲基-丁-2-烯氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(37)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和3-甲基-丁-2-烯-1-醇制备37，产率为76％，为白色泡沫：MS(+)-ES[M+H]⁺553.R_f＝0.8(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：5-氨基-7-(3-甲基-丁-2-烯氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(38)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由37制备标题化合物，产率为68％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.86(s，1H)，5.85(d，J＝4.8Hz，1H)，5.41(m，1H)，5.27(d，J＝5.6Hz，1H)，4.96(d，J＝5.2Hz，1H)，4.86(d，J＝6.8Hz，1H)，4.78(m，1H)，4.66(m，1H)，4.08(m，1H)，3.75(m，1H)，3.56(m，1H)，3.41(m，2H)，1.73(s，3H)，1.70(s，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺385.R_f＝0.35(50％THF-CHCl₃).元素分析C₁₅H₂₀N₄O₆S：计算值：C，46.87；H，5.24；N，14.57；S，8.34.实测值：C，46.86；H，5.24；N，14.62；S，8.34.

实施例19：5-氨基-7-(丙-2-炔基氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(40)

步骤1：5-乙酰氨基-7-(丙-2-炔基氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-3-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶2-酮(39)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和炔丙醇制备39，产率为62％，为白色泡沫：MS(+)-ES[M+H]⁺523.R_f＝0.7(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：5-氨基-7-(丙-2-炔基氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(40)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由39制备标题化合物，产率为68％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.99(s，2H)，5.86(d，J＝5.2Hz，1H)，5.29(d，J＝5.6Hz，1H)，5.04(s，2H)，4.97(d，J＝5.6Hz，1H)，4.78(m，1H)，4.65(m，2H)，4.08(m，1H)，3.76(m，1H)，3.58(m，1H)，3.28(m，1H)；MS(+)-ES[M+H]⁺355.R_f＝0.25(50％THF-CHCl₃).元素分析C₁₃H₁₄N₄O₆S·0.5 H₂O：计算值：C，42.97；H，4.16；N，15.42；S，9.82；；实测值：C，43.22；H，4.27；N，14.80；S，8.47.

实施例20：(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基)-乙酸甲酯(42)

步骤1：[5-乙酰氨基-2-氧代-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-3-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基]-乙酸甲酯(41)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和羟基-乙酸甲酯制备41，产率为58％，为白色泡沫：MS(+)-ES[M+H]⁺556.R_f＝0.45(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：(5-氨基2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基)-乙酸甲酯(42)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由41制备标题化合物，产率为57％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.93(s，3H)，5.86(d，J＝5.6Hz，1H)，5.28(m，1H)，4.99(s，2H)，4.95(s，1H)，4.80(m，1H)，4.65(m，1H)，4.09(m，1H)，3.76(m，1H)，3.67(s，3H)，3.55(m，1H)，3.42(m，1H)；MS(+)-ES[M+H]⁺389，[2M+H]⁺777.3.R_f＝0.15(75％THF-CHCl₃).

元素分析C₁₃H₁₆N₄O₈S：计算值：C，40.21；H，4.15；N，14.43；S，8.26.实测值：C，40.07；H，4.25；N，14.20；S，8.11.

实施例21：2-(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基)-丙酸甲酯(44)

步骤1：2-[5-乙酰氨基-2-氧代-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-3-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基]-丙酸甲酯(43)

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和(±)-2-羟基-丙酸甲酯制备43，产率为55％，为白色固体：MS(+)-ES[M+H]⁺571。R_f＝0.4(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：2-(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶7-基氧基)-丙酸甲酯(44)

按照与实施例13步骤3类似的方式，由43制备标题化合物，产率为63％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.88(s，2H)，5.84(d，J＝4.0Hz，1H)，5.39(m，1H)，5.29(d，J＝5.6Hz，1H)，4.97(d，J＝5.6Hz，1H)，4.80(m，1H)，4.66(m，1H)，4.10(m，1H)，3.76(m，1H)，3.66(s，3H)，3.56(m，1H)，3.43(m，1H)，1.51(d，J＝6.8Hz，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺403，[2M+H]⁺805.R_f＝0.15(50％THF-CHCl₃).元素分析C₁₄H₁₈N₄O₈S：计算值：C，41.79；H，4.51；N，13.92；S，7.97.实测值：C，41.77；H，4.50；N，13.88；S，7.94.

实施例22：5-氨基-7-甲氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(14)

步骤1：5-乙酰氨基-7-甲氧基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(45)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和甲醇制备45，产率为65％，为白色泡沫：MS(+)-ES[M+H]⁺499。R_f＝0.5(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：5-氨基-7-甲氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(14)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由45制备标题化合物，产率为78％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.9](s，2H)，5.86(d，J＝5.2Hz，1H)，5.28(d，J＝5.2Hz，1H)，4.96(d，J＝5.2Hz，1H)，4.77(m，1H)，4.66(m，1H)，4.09(m，1H)，3.90(s，3H)，3.75(m，1H)，3.56(m，1H)，3.43(m，1H)；MS(+)-ES[M+H]⁺331.R_f＝0.2(50％THF-CHCl₃)元素分析

C₁₁H₁₄N₄O₆S·0.25 H₂O：计算值：C，39.46；H，4.37；N，16.73；S，9.58.实测值：C，39.59；H，4.17；N，16.55；S，9.52.

实施例23：5-氨基-7-丙氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(47)

步骤1：5-乙酰氨基-7-丙氧基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(46)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和正丙醇制备46，产率为65％，为白色泡沫：MS(+)-ES[M+H]⁺527。R_f＝0.55(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：5-氨基-7-丙氧基-3-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(47)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由47制备标题化合物，产率为70％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.87(s，2H)，5.85(J＝5.2Hz，1H)，5.28(d，J＝5.6Hz，1H)，4.96(d，J＝1.2Hz，1H)，4.80(m，1H)，4.66(m，1H)，4.29(m，2H)，4.08(m，1H)，3.75(m，1H)，3.56(m，1H)，3.42(m，1H)，1.71(m，2H)，0.92(m，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺359.R_f＝0.3(50％THF-CHCl₃).元素分析C₁₃H₁₈N₄O₆S：计算值：C，43.57；H，5.06；N，15.63；S，8.95.实测值：C，43.77；H，5.29；N，15.39；S，8.81.

实施例24：5-氨基-7-丁氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(49)

步骤1：5-乙酰氨基-7-丁氧基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(48)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和正丁醇制备48，产率为64％，为白色糊状物：MS(+)-ES[M+H]⁺541。R_f＝0.65(75％乙酸乙酯-CHCl₃)。

步骤2：5-氨基-7-丁氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(49)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由48制备标题化合物，产率为72％，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.87(s，2H)，5.85(d，J＝4.8Hz，1H)，5.28(d，J＝5.2Hz，1H)，4.95(d，J＝5.6Hz，1H)，4.77(m，1H)，4.34(m，1H)，4.07(m，1H)，3.74(m，1H)，3.58(m，1H)，3.41(m，1H)，1.63(m，2H)，1.31(m，2H)，0.92(m，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺373.R_f＝0.25(50％THF-CHCl₃).元素分析C₁₄H₂₀N₄O₆S：计算值：C，45.15；H，5.41；N，15.04；S，8.61.实测值：C，44.79；H，5.34；N，15.02；S，8.60.

实施例25：5-氨基-7-(4-氟苄氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(51)

步骤1：5-乙酰氨基-7-(4-氟苄氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(50)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和4-氟苄醇制备50。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.20(m，1H)，7.44(m，1H)，7.06(m，1H)，6.10(d，J＝3.2Hz，1H)，6.02(dd，J＝3.0，6.0Hz，1H)，5.92(t，J＝5.0Hz，1H)，5.48(s，2H)，4.51(dd，J＝4.0，6.0Hz，1H)，4.34(m，1)，4.23(dd，J＝4.0，8.0Hz，1H)，2.44(s，3H)，2.13(s，3H)，2.11(s，3H)，2.04(s，3H).

步骤2：5-氨基-7-(4-氟苄氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(51)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由50制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.50(m，2H)，7.19(m，2H)，6.96(s，2H)，5.86(d，J＝4.8Hz，1H)，5.41(s，2H)，5.28(d，J＝5.6Hz，1H)，4.96(d，J＝5.6Hz，1H)，4.78(q，J＝5.2Hz，1H)，4.66(t，J＝6.0Hz，1H)，4.09(q，J＝5.2Hz，1H)，3.75(q，J＝4.8Hz，1H)，3.57(m，1H)，3.42(m，1H).

实施例26：5-氨基-7-(3-羟基-1-丙氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(53)

步骤1：5-乙酰氨基-7-(3-乙酰氧基-1-丙氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(52)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和1，3-丙二醇单乙酸酯(Dittmer，JACS，79，4431-35)(1957))制备52。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ8.17(s，1H)，6.10(d，J＝3.2Hz，1H)，6.02(dd，J＝2.8，6.0Hz，1H)，5.89(t，J＝6.8Hz，1H)，4.56-4.89(m，3H)，4.34(m，1H)，4.26-4.20(m，3H)，2.46(s，3H)，2.15(m，2H)，2.13(s，3H)，2.11(s，3H)，2.07(s，3H)，2.06(s，3H).

步骤2：5-氨基-7-(3-羟基-1-丙氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(53)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由52制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.87(s，2)，5.86(d，J＝5.2Hz，1H)，5.28(d，J＝5.6Hz，1H)，4.96(d，J＝5.2Hz，1H)，4.78(q，J＝5.6Hz，1H)，4.67(t，J＝5.6Hz，1H)，4.53(t，J＝5.2Hz，1H)，4.40(t，J＝6.8Hz，2H)，4.09(q，J＝5.2Hz，1H)，3.75(q，J＝4.8Hz，1H)，3.57(m，1H)，3.50(q，J＝6.4Hz，2H)，3.42(m，1H)，1.83(m，2H).

实施例27：5-氨基-7-(4-羟基-1-丁氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(55)

步骤1：5-乙酰氨基-7-(4-乙酰氧基-1-丁氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(54)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和1，4-丁二醇单乙酸酯(Clarke，Tet.Lett.，43(27)，4761-64(2002))制备54。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.15(s，1H)，6.10(d，J＝3.2Hz，1H)，6.02(dd，J＝3.2，6.4Hz，1H)，5.89(t，J＝6.4Hz，1H)，4.50(m，3H)，4.32(m，1H)，4.24(dd，J＝6.4，12.0Hz，1H)，4.13(t，J＝6.4Hz，1H)，2.45(s，3H)，2.13(s，3H)，2.10(s，3H)，2.06(s，3H)，2.05(s，3H)，1.88(s，3H)，1.78(m，2H).

步骤2：5-氨基-7-(4-羟基-1-丁氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(55)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由54制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.87(s，2H)，5.85(d，J＝5.2Hz，1H)，5.29(s，1H)，4.98(s，1H)，4.79(t，J＝5.2Hz，1H)，4.67(s，1H)，4.43(t，J＝4.8Hz，1H)，4.35(t，J＝6.8Hz，2H)，4.09(t，J＝5.2Hz，1H)，3.75(q，J＝4.8Hz，1H)，3.57(m，1H)，3.42(m，3H)，1.72(m，2H)，1.50(m，2H).

实施例28：(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-乙基-氨基甲酸乙酯(58)

步骤1：N-乙基-N-(羟甲基)尿烷(56)的制备

在Kelper，JOC，52，453-55(1987)报道的通常实验条件下，向N-乙基尿烷(2.04mL，17.1mmol)和37％福尔马林水溶液(1.28mL，17.1mmol)的混合物中一次性加入Ba(OH)₂(46.0mg，266μmol)在水(480μL)中的浆状物，同时搅拌。该混合物变冷却，逐渐形成浑浊溶液。将混合物于室温搅拌，通过TLC分析监测N-乙基尿烷的消失。2小时后，通过添加固体CO₂使反应物淬灭，搅拌30分钟，过滤除去所沉淀的碳酸钡。真空除去溶剂，得到油性残余物。通过与苯(3×100mL)共沸蒸馏除去痕量的水，得到56，为澄清油状物(2.50g，定量)：

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ4.88(d，J＝7.6Hz，1H)，4.79(d，J＝7.6Hz，2H)，4.18(q，J＝7.6Hz，2H)，3.40(q，J＝6.4Hz，2H)，1.30(t，J＝7.6Hz，3H)，1.19(t，J＝7.6Hz，3H).

步骤2：5-乙酰氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-乙基-氨基甲酸乙酯(57)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和56制备化合物57，为白色固体，产率为24％：R_f＝0.4(33％EtOAc-CHCl₃)

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ11.49(br s，1H)，6.08(d，J＝4.0Hz，1H)，5.75(t，J＝6.0Hz，1H)，5.53(s，2H)，4.49(dd，J＝13.5，8.4Hz，1H)，4.30(m，5H)，3.62(q，J＝7.2Hz，2H)，2.30(s，3H)，2.12(s，3H)，2.09(s，3H)，2.08(s，3H)，1.36(t，J＝6.8Hz，3H)，1.20(t，J＝6.8Hz，3H)；[M+H]⁺614.2.

步骤3：(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-乙基-氨基甲酸乙酯(58)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由57制备标题化合物，为白色固体，产率为30％：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.89(br s，2H)，5.82(d，J＝4.8Hz，1H)，5.49(m，3H)，5.32(d，J＝5.2Hz，1H)，5.01(d，J＝5.6Hz，1H)，4.82(q，J＝5.6Hz，1H)，4.69(t，J＝5.6Hz，1H)，4.20(q，J＝7.2Hz，2H)，4.11(q，J＝5.6Hz，2H)，3.78(q，J＝5.2Hz，1H)，3.60(m，1H)，3.45(m，1H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H)，1.09(t，J＝6.0Hz，3H)；[M+H]⁺446.3.

实施例29：(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-甲基-氨基甲酸乙酯(61)

步骤1：N-甲基-N-(羟甲基)尿烷(59)的制备

按照与实施例28步骤1类似的方式，由N-甲基尿烷和福尔马林制备化合物59，为浓稠油状物，产率定量：

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ5.02(d，J＝7.6Hz，1H)，4.79(d，J＝7.6Hz，2H)，4.18(q，J＝4.4Hz，2H)，3.01(s，3H)，1.30(t，J＝7.6Hz，3H).

步骤2：(5-氨基-2-氧代-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-甲基-氨基甲酸乙酯(60)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由16和59制备化合物60，为白色固体，产率为24％：

R_f＝0.4(33％EtOAc-CHCl₃)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ11.49(br s，1H)，6.08(d，J＝4.0Hz，1H)，5.75(t，J＝6.0Hz，1H)，5.53(s，2H)，4.49(dd，J＝13.5，8.4Hz，1H)，4.30(m，5H)，3.62(q，J＝7.2Hz，2H)，2.30(s，3H)，2.12(s，3H)，2.09(s，3H)，2.08(s，3H)，1.36(t，J＝6.8Hz，3H)，1.20(t，J＝6.8Hz，3H)；[M+H]⁺614.2.

步骤3：(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-甲基-氨基甲酸乙酯(61)的制备

按照与实施例13步骤3类似的方式，由60制备标题化合物，为白色固体，产率为20％：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.86(br s，2H)，5.82(d，J＝4.8Hz，1H)，5.47(s，2H)，5.31(d，J＝5.2Hz，1H)，5.00(d，J＝5.6Hz，1H)，4.82(q，J＝5.2Hz，1H)，4.67(q，J＝5.6Hz，1H)，4.18(q，J＝6.4Hz，2H)，4.12(m，1H)，3.78(q，J＝6.0Hz，1H)，3.60(m，1H)，3.47(m，1H)，3.30(s，3H)，1.27(t，J＝6.8Hz，3H)；[M+H]⁺432.3.

实施例30：5-氨基-7-环丙基甲氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(63)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(25)的制备

向0℃的1(5.00g，15.8mmol)在乙腈(160mL)中的混悬液中依次加入Et₃N(11.0mL，79.0mmol)/DMAP(195mg，1.59mmol)和Ac₂O(4.47mL，47.4mmol)。于室温将反应混合物搅拌2小时，此时将其浓缩至棕色浆状。通过快速柱色谱法纯化残余物(二氧化硅，MeOH/CHCl₃＝1-10％)，得到6.22g(89％)三乙酸酯25，为白色固体：mp 198-199℃；

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.34(s，1H)，7.02(br s，2H)，5.90(m，2H)，5.51(t，J＝6.0Hz，1H)，4.36(dd，J＝12.4，3.2Hz，1H)，4.21(m，1H)，4.08(q，J＝6.0Hz，1H)，2.06(s，3H)，2.06(s，3H)，2.00(s，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z 443.3.

步骤2：5-氨基-7-环丙基甲氧基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(62)的制备

于0℃向上述三乙酸酯25(1.49g，3.37mmol)、Argonaut聚合物支持的-三苯膦树脂(5.98g，10.1mmol)和环丙基甲基甲醇(546uL，6.74mmol)在THF(70mL)中的不均匀混合物中加入DEAD(742uL，4.72mmol)。将反应混合物温热至室温，搅拌16小时，然后通过短SiO₂垫过滤。对浓缩的滤液进行色谱法(SiO₂，梯度洗脱，0-5％EtOAc-CHCl₃)，得到680mg(42％)白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ6.95(s，2H)，5.99(d，J＝4.0Hz，1H)，5.91(dd，J＝6.2，4.0Hz，1H)，5.55(dd，J＝6.6，6.2Hz，1H)，4.37(dd，J＝12.1，3.7Hz，1H)，4.22-4.26(m，1H)，4.19(d，J＝7.0Hz，2H)，4.09(dd，J＝11.7，5.9Hz，1H)，2.07(s，3H)，2.06(s，3H)，1.99(s，3H)，1.20-1.26(m，1H)，0.53-0.58(m，2H)，0.31-0.35(m，2H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z497.

元素分析C₂₀H₂₄N₄O₉S：计算值：C，48.38；H，4.87；N，11.28；S，6.46.

实测值：C，48.53；H，4.99；N，11.27；S，6.18.

步骤3：5-氨基-7-环丙基甲氧基-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备(63)

于室温向62(570mg，1.18mmol)在MeOH中的混悬液中加入K₂CO₃(50mg，0.36mmol)。将反应混合物搅拌1小时，浓缩，分配在20％IPA-CHCl₃与水之间，然后与Et₂O一起研磨，得到128mg(29％)63，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ6.86(s，2H)，5.85(d，J＝5.1Hz，1H)，5.27(d，J＝5.5Hz，1H)，4.96(d，J＝5.5Hz，1H)，4.77(q，J＝5.5Hz，1H)，4.66(t，J＝5.9Hz，1H)，4.18(dd，J＝7.3，1.1Hz，1H)，4.09(q，J＝5.5Hz，1H)，3.75(q，J＝5.1Hz，1H)，3.39-3.60(m，2H)，1.20-1.27(m，1H)，0.53-0.57(m，2H)，0.31-0.34(m，2H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z371.

元素分析C₁₄H₁₈N₄O₆S：计算值：C，45.40；H，4.90；N，15.13；S，8.66.实测值：C，44.98；H，4.92；N，14.92；S，8.49.

实施例31：5-氨基-7-(3-苯基-烯丙氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(66)

步骤1：5-氨基-7-(3-苯基-烯丙氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(64)的制备

按照与实施例25的步骤2类似的方式，由25和肉桂醇制备化合物64，产率为69％：MS(+)-ES[M+H]⁺m/z 601。

步骤2：5-氨基-7-(3-苯基-烯丙氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备(65)

按照与实施例25的步骤3类似的方式，由64制备标题化合物，产率为19％，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ7.46(d，J＝7.0Hz，1H)，7.34(t，J＝7.3Hz，1H)，7.23-7.27(m，1H)，6.93(s，2H)，6.74(d，J＝16.1Hz，1H)，6.45-6.53(m，1H)，5.86(d，J＝5.1Hz，1H)，5.28(d，J＝5.5Hz，1H)，5.04(d，J＝6.2Hz，1H)，4.96(d，J＝5.5Hz，1H)，4.79(q，J＝5.5Hz，1H)，4.67(t，J＝5.5Hz，1H)，4.09(q，J＝5.1Hz，1H)，3.76(q，J＝4.8Hz，1H)，3.30-3.60(m，2H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z433.元素分析C₁₉H₂₀N₄O₆S：计算值：C，52.77；H，4.66；N，12.96；S，7.41.实测值：C，52.28；H，4.66；N，12.66；S，7.27.

实施例32：5-氨基-7-(5-甲基-2-氧代-[1，3]间二氧杂环戊烯-4-基甲氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(66)

向0℃的三乙酸酯25(1.55g，3.50mmol)在THF(50mL)中的溶液中加入聚合物支持的-三苯膦(4.95g，10.50mmol，Argonaut)。向该混合物中加入按照Alepegiani，Syn.Comm.，22(9)，1277-82(1992)的操作制备的4-羟甲基-5-甲基-[1，3]二氧杂环戊二烯-2-酮(0.91g，7.00mmol)。然后滴加偶氮二甲酸二乙酯(0.73ml，4.60mmol)。将所得混合物于室温搅拌48小时，过滤，用MeOH和CHCl₃洗涤。浓缩滤液，通过快速柱色谱法纯化(二氧化硅，丙酮/CHCl₃＝10-20％)，得到二氧杂环戊二烯酮衍生物66(1.38g，71％)，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)66；δ7.06(s，2H)，6.00(d，J＝4.0Hz，1H)，5.92(dd，J＝6.6，4.4Hz，1H)，5.56(t，J＝6.4Hz，1H)，5.30(s，2H)，4.38(dd，J＝11.6，3.6Hz，1H)，4.25(t，J＝3.6Hz，1H)，4.10(q，J＝6.0Hz，1H)，2.23(s，3H)，2.08(s，3H)，2.07(s，3H)，2.00(s，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z555.3.元素分析C₂₁H₂₂N₄O₁₂S·Me₂CO：计算值：C，47.06；H，4.61；N，9.15；S，5.23.实测值：C，47.25；H，4.37；N，9.53；S，5.52.

实施例33：(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-氨基甲酸乙酯(68)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-三乙基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(26)的制备

向室温下的1(1.00g，3.16mmol)在DMF(20mL)中的混悬液中依次加入咪唑(753mg，11.06mmol)、DMAP(39mg，0.32mmol)和氯三乙基硅烷(1.64mL，9.80mmol)。将反应混合物于室温搅拌2小时，此时用饱和NaHCO₃溶液(20mL)使其淬灭。用CHCl₃(3×20mL)萃取该混合物，用MgSO₄干燥，浓缩。通过快速柱色谱法纯化残余物(二氧化硅，MeOH/CHCl₃＝1-5％)，得到1.91g(92％)化合物26，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ5.99(s，1H)，5.62(br s，2H)，5.19(dd，J＝4.4，6.0Hz，1H)，4.35(dd，J＝2.8，4.4Hz，1H)，3.99(m，1H)，3.77(dd，J＝7.6，10.8Hz，1H)，3.68(dd，J＝4.8，10.4Hz，1H)，1.10(t，J＝7.1Hz，3H)，0.96(t，J＝7.1Hz，3H)，0.89(t，J＝7.1Hz，3H)，0.68(q，J＝7.1Hz，2H)，0.61(q，J＝7.1Hz，2H)，0.54(m，2H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z660.0.

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-三乙基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-氨基甲酸乙酯(67)的制备

按照与实施例13的步骤2类似的方式，由26和N-乙基尿烷制备化合物67，为白色固体，产率为31％：

[M+H]⁺760.5；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ6.43(br s，2H)，6.09(t，J＝7.6Hz，1H)，5.94(d，J＝6.0Hz，1H)，5.31(d，J＝4.8Hz，2H)，5.19(dd，J＝6.0，4.8Hz，1H)，4.35(dd，J＝4.8，2.8Hz，1H)，4.19(q，J＝6.4Hz，2H)，3.98(m，1H)，3.76(dd，J＝10.8，7.6Hz，1H)，3.68(dd，J＝10.4，4.8Hz，1H)，1.29(t，J＝6.8Hz，3H)，1.02(t，J＝8.0Hz，3H)，0.96(t，J＝7.6Hz，3H)，0.90(t，J＝8.0Hz，3H)，0.69(q，J＝8.0Hz，2H)，0.61(q，J＝8.0Hz，2H)，0.55(m，2H)；[M+H]⁺760.5.

步骤3：(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基甲基)-氨基甲酸乙酯(68)的制备

将67(244mg，321μmol)、5M HF的吡啶溶液(321μL，1.60mmol)和THF(3.20mL)的溶液于室温搅拌5小时。真空除去溶剂，得到残余物，通过快速色谱法纯化(SiO₂，10％MeOH-CHCl₃)，得到68(119mg，90％)，为白色固体：

¹HNMR(400MHz，d₆-DMSO)δ8.43(br s，1H)，7.76(br s，2H)，5.82(d，J＝5.2 Hz，1H)，5.78(s，2H)，5.32(d，J＝5.6Hz，1H)，5.24(dd，J＝6.0，4.8Hz，1H)，5.00(d，J＝5.6Hz，1H)，4.82(q，J＝5.6Hz，1H)，4.68(t，J＝6.0，1H)，4.11(q，J＝5.2Hz，1H)，4.09(q，J＝7.2Hz，2H)，3.78(q，J＝5.6Hz，1H)，3.60(m，1H)，3.46(m，1H)，1.21(t，J＝7.2Hz，3H)；[M+H]⁺418.2.

实施例34：5-氨基-7-(5-甲基-2-氧代-[1，3]间二氧杂环戊烯-4-基甲氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(70)

步骤1：5-氨基-7-(5-甲基-2-氧代-[1，3]间二氧杂环戊烯-4-基甲氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-三乙基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(69)的制备

按照与实施例32类似的方式，由26和4-羟甲基-5-甲基-[1，3]二氧杂环戊二烯-2-酮制备化合物69，为白色固体，产率为45％：

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ6.06(d，J＝6.0Hz，1H)，5.21(dd，J＝6.0，4.8Hz，1H)，5.18(d，J＝3.2Hz，2H)，4.94(br s，2H)，4.38(dd，J＝4.8，2.8Hz，1H)，4.00(m，1H)，3.79(dd，J＝11.2，8.0Hz，1H)，3.69(dd，J＝10.8，5.2Hz，1H)，2.23(s，3H)，1.02(t，J＝8.0Hz，3H)，0.96(t，J＝7.6Hz，3H)，0.89(t，J＝8.4Hz，3H)，0.70(q，J＝7.6Hz，2H)，0.61(q，J＝8.0Hz，2H)，0.53(m，2H)；[M+H]⁺771.5.

步骤2：5-氨基-7-(5-甲基-2-氧代-[1，3]间二氧杂环戊烯-4-基甲氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(70)的制备

按照与实施例33的步骤3类似的方式，由69制备标题化合物，为白色固体，产率为89％：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ7.03(br s，2H)，5.90(d，J＝5.2Hz，1H)，5.33(s，2H)，5.02(d，J＝4.8Hz，1H)，4.83(q，J＝5.6Hz，1H)，4.71(t，J＝6.0Hz，1H)，4.14(q，J＝5.2Hz，1H)，3.80(q，J＝4.8Hz，1H)，3.62(m，1H)，3.47(m，1H)，2.27(s，3H)；[M+H]⁺429.2.

实施例35：4-(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基)-丁酸叔丁酯(72)

步骤1：4-(5-氨基-2-氧代-3-(2’，3’，5’-三-O-三乙基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基)-丁酸叔丁酯(71)的制备

按照与实施例13的步骤2类似的方式，由26和4-羟基-丁酸叔丁酯(Lui，JOC，68(17)，6679-6684(2003))制备化合物71，为白色固体，产率为92％：

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ6.06(d，J＝6.4Hz，1H)，5.22(dd，J＝6.0，4.8Hz，1H)，4.98(br s，2H)，4.42(t，J＝6.0Hz，2H)，4.38(dd，J＝6.0，4.8Hz，1H)，4.00(m，1H)，3.80(dd，J＝10.8，7.6Hz，1H)，3.69(dd，J＝10.8，5.2Hz，1H)，2.38(t，J＝7.2Hz，2H)，2.06(五重峰，J＝7.2Hz，3H)，1.47(s，9H)，1.02(t，J＝8.0Hz，3H)，0.96(t，J＝8.0Hz，3H)，0.88(t，J＝8.0Hz，3H)，0.70(q，J＝7.6Hz，2H)，0.61(q，J＝8.0Hz，2H)，0.53(m，2H)；[M+H]⁺801.5.

步骤2：4-(5-氨基-2-氧代-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氧基)-丁酸叔丁酯(72)的制备

按照与实施例33的步骤3类似的方式，由71制备标题化合物，为白色固体，产率为66％：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.93(br s，2H)，5.90(d，J＝4.8Hz，1H)，5.32(d，J＝5.6Hz，1H)，5.10(d，J＝5.6Hz，1H)，4.83(q，J＝5.6Hz，1H)，4.71(t，J＝5.6Hz，1H)，4.38(t，J＝6.4Hz，2H)，4.13(q，J＝5.6Hz，1H)，3.80(q，J＝5.6Hz，1H)，3.62(m，1H)，3.47(m，1H)，2.35(t，J＝7.6Hz，2H)，1.96(quint，J＝6.8Hz，2H)，1.44(s，9H)；[M+H]⁺459.3.

实施例36：5-氨基-7-(4-乙酰氧基-1-丁氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(74)

步骤1：5-氨基-7-(4-乙酰氧基-1-丁氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-三乙基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(73)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由26和1，4-丁二醇单乙酸酯制备73，为白色固体，产率为81％：

：¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ6.06(d，J＝6.0Hz，1H)，5.23(dd，J＝5.6，5.2Hz，1H)，4.93(br s，2H)，4.41(t，J＝6.4Hz，2H)，4.37(dd，J＝4.8，2.8Hz，1H)，4.14(t，J＝6.4Hz，2H)，4.00(m，1H)，3.80(dd，J＝11.2，7.6Hz，1H)，3.69(dd，J＝10.8，4.8Hz，1H)，2.07(s，3H)，1.85(m，2H)，1.78(m，2H)，1.02(t，J＝7.6Hz，3H)，0.96(t，J＝8.0Hz，3H)，0.88(t，J＝7.6Hz，3H)，0.70(q，J＝7.6Hz，2H)，0.61(q，J＝8.0Hz，2H)，0.56(m，2H)；[M+H]⁺773.5.

步骤2：5-氨基-7-(4-乙酰氧基-1-丁氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(74)的制备

将73(188mg，243μmol)和1M HF的乙腈溶液(1.22mL，1.22mmol)的溶液于室温搅拌18小时。真空除去溶剂得到残余物，将其通过快速色谱法纯化(SiO₂，10％MeOH-CHCl₃)，得到74(91.1mg，88％)，为白色固体：

¹HNMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.93(br s，2H)，5.90(d，J＝5.2Hz，1H)，5.32(d，J＝5.6Hz，1H)，5.01(d，J＝5.6Hz，1H)，4.83(q，J＝5.6Hz，1H)，4.71(t，J＝6.0Hz，1H)，4.41(t，J＝6.0Hz，2H)，4.14(q，J＝4.8Hz，1H)，4.07(t，J＝6.4Hz，1H)，3.80(q，J＝6.0Hz，1H)，3.62(m，1H)，3.47(m，1H)，2.04(s，3H)，1.80(m，2H)，1.71(m，2H)；[M+H]⁺431.3.

实施例37：5-氨基-7-(4-乙酰氧基-1-丙氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(76)

步骤1：5-氨基-7-(4-乙酰氧基-1-丙氧基)-3-(2’，3’，5’-三-O-三乙基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(75)的制备

按照与实施例13步骤2类似的方式，由26和1，3-丙二醇单乙酸酯制备75，为白色固体，产率为70％：

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ6.06(d，J＝6.4Hz，1H)，5.23(dd，J＝6.4，4.8Hz，1H)，4.93(br s，2H)，446(t，J＝6.4Hz，2H)，4.38(dd，J＝4.4，2.4Hz，1H)，4.22(t，J＝6.4Hz，2H)，4.00(m，1H)，3.80(dd，J＝10.8，7.6Hz，1H)，3.69(dd，J＝10.8，5.2Hz，1H)，2.12(五重峰，J＝6.4Hz，2H)，2.08(s，3H)，1.02(t，J＝8.0Hz，3H)，0.96(t，J＝8.0Hz，3H)，0.88(t，J＝8.0Hz，3H)，0.70(q，J＝8.4Hz，2H)，0.61(q，J＝8.4Hz，2H)，0.54(m，2H)；[M+H]⁺759.5.

步骤2：5-氨基-7-(4-乙酰氧基-1-丙氧基)-3-β-D-呋喃核糖基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(76)的制备

按照与实施例36步骤2类似的方式，由75制备76，为白色固体，产率为92％：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ6.94(br s，2H)，5.90(d，J＝5.2Hz，1H)，5.32(d，J＝4.8Hz，1H)，5.00(d，J＝4.8Hz，1H)，4.83(q，J＝4.8Hz，1H)，4.71(t，J＝6.0Hz，1H)，4.46(t，J＝6.4Hz，2H)，4.14(t，J＝6.4Hz，2H)，3.80(q，J＝5.2Hz，1H)，3.62(dd，J＝11.2，8.0Hz，1H)，3.47(dd，J＝11.2，6.0Hz，1H)，2.06(五重峰J＝6.4Hz，2H)，2.04(s，3H)；[M+H]⁺417.2.

实施例38：5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)

步骤1：5-氨基-7-硫代-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶2-酮(77)的制备

于室温向25(1g，2.26mmol)在吡啶(50mL)中的溶液中加入P₂S₅(2.13g，4.79mmol)。将溶液缓慢回流(浴温130-140℃)29小时。将反应混合物真空蒸发至干。通过在60℃下添加H₂O(40mL)分解过量的P₂S₅。将混合物在60℃下搅拌1小时，然后冷却至室温。用CHCl₃(3×40mL)萃取该混合物。蒸发所干燥(MgSO₄)的有机层，得到浆状物，将其通过快速柱色谱法纯化(二氧化硅，丙酮/CHCl₃＝15％)，得到0.93g(90％)77，为黄色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ12.50(s，1H)，7.35(br s，2H)，5.89(m，2H)，5.51(t，J＝6.4Hz，1H)，4.36(dd，J＝12.0，4.0Hz，1H)，4.24(m，1H)，4.10(q，J＝6.0Hz，1H)，2.07(s，3H)，2.06(s，3H)，2.01(s，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z459.3.

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(78)的制备

将Raney^2800镍(3大匙，预先用H₂O、MeOH和丙酮洗涤)在丙酮(50mL)中的混悬液在回流状态下搅拌1小时。随后在回流状态下将三乙酸酯77(0.93g，2.03mmol)加入上述混悬液。将混合物搅拌5分钟，历经30分钟冷却至室温。通过向混合物中通入2小时H₂S(g)使反应淬灭。将所得混合物通过短Celite^垫过滤，用EtOH洗涤。浓缩滤液，通过快速柱色谱法纯化(二氧化硅，MeOH/CHCl₃＝1-2％)，得到0.52g(60％)78，为白色固体：

mp121-123℃；¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ8.38(s，1H)，6.93(s，2H)，6.03(d，J＝3.6Hz，1H)，5.93(dd，J＝6.4，3.6Hz，1H)，5.58(t，J＝6.0Hz，1H)，4.38(dd，J＝11.6，3.6Hz，1H)，4.26(m，1H)，4.11(q，J＝6.0Hz，1H)，2.08(s，3H)，2.07(s，3H)，2.00(s，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z427.2.元素分析C₁₆H₁₈N₄O₈S·0.5 CH₃OH·0.25 H₂O：

计算值：C，44.34；H，4.62；N，12.54；S 7.17.实测值：C，44.54；H，4.88；N，12.16；S，7.17.

步骤3：5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)的制备

向78(0.52g，1.22mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入K₂CO₃(25mg，0.18mmol)。将反应物于室温搅拌过夜，然后用AcOH(21μL，0.36mmol)中和。将所得混合物于室温另外搅拌30分钟，浓缩，与H₂O(2ml)一起研磨，得到0.33g的化合物79(89％)，为白色固体：mp 220℃(分解)；

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ8.34(s，1H)，6.85(s，2H)，5.90(d，J＝4.8Hz，1H)，5.31(d，J＝5.6Hz，1H)，4.98(d，J＝5.6Hz，1H)，4.81(q，J＝5.2Hz，1H)，4.67(t，J＝6.0Hz，1H)，4.11(q，J＝5.2Hz，1H)，3.77(dd，J＝10.8，4.8Hz，1H)，3.58(m，1H)，3.44(m，1H)；MS㈩-ES[M+H]⁺m/z301.1.元素分析C₁₀H₁₂N₄O₅S·0.3H₂O计算值：

C，39.29；H，4.15；N，18.33；S 10.49.实测值：C，39.51；H，4.18；N，17.95；S，10.27.

实施例39：5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)

供选择合成途径A

步骤1：5-氨基-7-氯-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(80)的制备

向25(0.84g，1.90mmol)在CHCl₃(9mL)中的溶液中加入三乙胺(0.50mL，3.59mmol)和POCl₃(1.60mL，17.1mmol)。在回流状态下加热16小时后，将反应混合物冷却至室温，倾入冰和饱和NaHCO₃水溶液(150mL)。用CH₂Cl₂(3×75mL)萃取所得混合物，干燥所合并的有机层(MgSO₄)。浓缩，随后进行快速色谱法(9:1/CH₂Cl₂:EtOAc)，得到708mg(87％)产物，为白色固体，m.p.101-103℃。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ6.10(d，J＝2.8Hz，1H)，6.01(dd，J＝5.6，3.2Hz，1H)，5.92(t，J＝6.0Hz，1H)，5.42(s，2)，4.97(dd，J＝11.6，3.6Hz，1H)，4.32(m，1)，4.21(dd，J＝12.0，5.2Hz，1H)，2.12(s，6H)，2.06(s，3H).

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(78)的制备

向火焰干燥的圆底烧瓶中加入80(4.37g，9.48mmol)和冰醋酸(61mL)。用隔片密封烧瓶，充氮气。加入锌-酮偶联物(6.07g，Aldrich)，将反应物于室温搅拌21小时。然后将反应物于80℃加热1小时。将反应混合物冷却至室温，通过Celite^垫过滤，用EtOAc(200mL)洗涤，真空浓缩。用CH₂Cl₂(250mL)稀释所得白色固体(残余物)，用0.5 M NaOH(500mL)稀释。用CH₂Cl₂(2×150mL)萃取水层，干燥所合并的有机层(MgSO₄)，过滤，浓缩。通过快速色谱法纯化(SiO₂，5％丙酮-CH₂Cl₂)，得到78(3.64g，90％)，为白色粉末，其所有方面均与实施例38步骤2中分离的物质相同。

步骤3：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)的制备

如实施例38步骤3中所述制备标题化合物。

实施例40：5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)供选择合成途径B

步骤1：5-乙酰氨基-7-氯-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(81)的制备

于室温和氮气环境中历经30分钟将磷酰氯(6.42mL，70.2mmol)滴加到16(3.40g，7.02mmol)、三乙胺(1.96mL，14.04mmol)和氯仿(14mL)的溶液中。然后将反应混合物于70℃加热30小时。将混合物冷却至环境温度，历经2小时滴加到0℃的饱和NaHCO₃水溶液(500mL)中，另外搅拌1小时。分离各层，水层再用二氯甲烷(2×100mL)萃取，干燥所合并的有机层(MgSO₄)，过滤，浓缩，得到黄色固体。通过快速色谱法进行纯化(SiO₂，5％丙酮-CHCl₃)，得到81(3.17g，90％)，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ11.08(s，1H)，6.09(d，J＝4.0Hz，1H)，5.99(dd，J＝6.0，4.0Hz，1H)，5.76(t，J＝6.8Hz，1H)，4.41(dd，J＝11.2，3.2Hz，1H)，4.32(td，J＝7.2，3.2Hz，1H)，4.24(dd，J＝11.6，6.8Hz，1H)，2.18(s，3H)，2.12(s，3H)，2.11(s，3H)，2.03(s，3H)；[M+H]⁺503.3.

步骤2：5-乙酰氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(82)的制备

在氮气环境中将10％披钯炭(862mg)加入到81(2.07mg，4.12mmol)、乙酸钠(675mg，8.23mmol)和无水乙醇(100mL)的溶液中。在高压气体贮罐中的250-300 psi H₂(g)下将混合物搅拌48小时。将混合物通过Celite^过滤，用乙酸乙酯(200mL)洗涤，浓缩，得到黄色固体。用H₂O(200mL)稀释该混合物，用CH₂Cl₂(3×100mL)萃取。干燥所合并的有机层(MgSO₄)，过滤，浓缩。通过快速色谱法纯化残余物(SiO₂，10％丙酮-CHCl₃)，得到82(1.74g，90％)，为白色粉末：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ10.78(s，1H)，8.82(s，1H)，6.10(d，J＝4.0Hz，1H)，6.04(dd，J＝6.0，4.0Hz，1H)，5.77(t，J＝6.0Hz，1H)，4.41(dd，J＝11.6，3.2 Hz，1H)，4.30(m，1H)，4.23(dd，J＝12.0，6.8Hz，1H)，2.20(s，3H)，2.12(s，3H)，2.10(s，3H)，2.03(s，3H)；[M+H]⁺469.4.

步骤3：5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)的制备按照与实施例13步骤3类似的方式由82制备标题化合物。

实施例41：5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)供选择合成途径C

步骤1：N’-(7-氯-2-氧代-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)-N，N-二甲基-甲脒(83a)的制备

于室温和N₂环境中历经1小时将亚硫酰氯(2.58mL，35.4mmol)滴加到16(500mg，1.03mmol)和DMF(1.29mL，16.7mmol)在CHCl₃(28mL)中的混合物中。将反应混合物于60℃加热23小时。将混合物小心倾入冰冷的饱和NaHCO₃溶液，搅拌30分钟。分离各层，用CH₂Cl₂(2×80mL)萃取水层，用MgSO₄干燥所合并的有机层，过滤，浓缩，得到83a(519mg，定量)，为白色泡沫：

¹HNMR(400MHz，d₆-DMSO)δ8.65(s，1H)，6.14(d，J＝4.0Hz，1H)，5.97(dd，J＝6.4，3.6Hz，1H)，5.62(t，J＝6.8Hz，1H)，4.43(dd，J＝12.0，3.6Hz，1H)，4.32(m，1H)，4.16(dd，J＝12.0，5.2Hz，1H)，3.23(s，3H)，3.11(s，3H)，2.13(s，3H)，2.12(s，3H)，2.02(s，3H)；[M+H]⁺516.1.

步骤1a：N’-(7-溴-2-氧代-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)-N，N-二甲基-甲脒(83b)的制备

于室温和N₂环境中历经1小时将亚硫酰溴(11.2mL，145mmol)滴加到16(2.34g，4.83mmol)、DMF(5.61mL，72.5mmol)、CHCl₃(50mL)和甲苯(55mL)的混合物中。将反应混合物于110℃加热20小时。将混合物小心倾入冰冷的饱和NaHCO₃溶液，搅拌1小时。分离各层，用CH₂Cl₂(2×80mL)萃取水层，用MgSO₄干燥所合并的有机层，过滤，浓缩，得到黄色残余物。通过快速色谱法纯化产物(SiO₂，20％丙酮-CHCl₃)，得到83b(1.53g，57％)，为白色泡沫：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ8.64(s，1H)，6.12(d，J＝3.2Hz，1H)，5.96(dd，J＝6.4，3.2Hz，1H)，5.61(t，J＝6.8Hz，1H)，4.42(dd，J＝8.8，3.2Hz，1H)，4.31(m，1H)，4.16(dd，J＝12.4，5.6Hz，1H，3.23(s，3H)，3.11(s，3H)，2.13(s，3H)，2.12(s，3H)，2.02(s，3H)；[M+H]⁺560.2.

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(78)的制备

向火焰干燥的圆底烧瓶中加入83a(1.08g，2.11mmol)和冰醋酸(21mL)。用隔片密封烧瓶，充氮气。加入锌粉(1.38g，21.1mmol)，将反应物于80℃加热48小时。将反应混合物冷却至室温，通过Celite^垫过滤，用EtOAc(100mL)洗涤，真空浓缩。用CH₂Cl₂(100mL)稀释所得白色固体(残余物)，用饱和NaHCO₃水溶液(500mL)洗涤。用CH₂Cl₂(2×50mL)萃取水层，干燥所合并的有机层(MgSO₄)，过滤，浓缩。通过快速色谱法纯化(SiO₂，5％丙酮-CH₂Cl₂)，得到78(464mg，52％)，为白色粉末，其所有方面均与实施例38步骤2中分离的物质相同。

步骤3：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)的制备

如实施例38步骤3中所述制备标题化合物。

实施例42：5-氨基-3-β-D-呋喃核糖基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(79)供选择合成途径D

步骤1：4-氯-2-氧代-2，3-二氢-噻唑-5-甲醛(85)的制备

化合物85，最初由Baranov等人，Chem.Het.Compounds(Engl.Trsl.)，1975，11，第73页合成，采用所报道操作的变通方法来制备。将市售2，4-噻唑烷二酮84(25.0g，213mmol)混悬于用冷却用冰浴冷却至0℃的POCl₃(59ml，641mmol)中。历经15分钟将DMF(24.8mL，320mmol)滴加到反应物中。将反应物于90℃加热2小时，然后于115℃加热20分钟。20分钟后，将反应物冷却至90℃，再维持1小时。1小时后，将混合物于115℃加热15分钟。将热的反应混合物倾入1L水中，同时剧烈搅拌。10分钟后，过滤混合物。用乙醚(600mL)将水相萃取5次，分离有机相，真空浓缩。将固体残余物溶于少量体积的饱和NaHCO₃水溶液。用6M HCl将混合物小心酸化至pH＝2，约30分钟后形成沉淀。过滤得到20.9gm的化合物85，产率为62％：Rf＝0.3(2％H₂O，8％甲醇，90％乙酸乙酯)；

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.79(s，1H)，8.95(s，1H)；MS(+)-ES[M+H]⁺164.

步骤2：5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(86)的制备

将化合物85(1.22g，7.47mmol)、胍盐酸盐(2.13g，22.4mmol)、K₂CO₃(1.03g，7.47mmol)和NaHCO₃(1.88g，22.3mmol)混悬于DMF中，于110℃加热2天。在通过TLC测定原料消耗完全时，真空除去溶剂。将固体残余物与水一起研磨。通过HPLC(ODS-A C18；3-97％CH₃CN/H₂O梯度；1.0mL/分钟)获得86的分析纯样品。黄褐色固体：HPLC R_t＝1.63分钟；R_f＝0.45(2％H₂O，8％甲醇，90％乙酸乙酯)：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ8.11(s，1H)，6.67(s，2H)；MS(+)-ES[M+H]⁺169；元素分析C₅H₄N₄OS·0.1 CH₃CN·0.1 H₂O：计算值：C，35.88；H，2.61；N，32.99；S，18.42.实测值：C，35.96；H，2.75；N，32.56；S，18.42.

步骤3：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的制备(79)

将化合物86(62mg，0.4mmol)、1，2，3，5-四-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖四乙酸酯(128mg，0.4mmol)和催化剂双(对-硝基苯基)磷酸氢酯(13mg，0.04mmol)混合物混合，置于500ml烧瓶中。将反应容器小心放入真空(～5.0mmHg)，放入于150℃加热的油浴中达10分钟。冷却至室温后，用乙酸乙酯洗涤固体。通过快速色谱法纯化粗产物(二氧化硅，5-35％乙酸乙酯在氯仿中的梯度)，得到68mg的化合物79(40％)，为白色固体，为白色粉末，其所有方面均与实施例38步骤2中分离的物质相同。

实施例43：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(89)

步骤1：5-氨基-3-(5’-O-叔丁基-二甲基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(87)的制备

向79(0.68g，2.28mmol)在DMF(10mL)中的溶液中依次加入咪唑(0.54g，7.93mmol)和叔丁基二甲基硅烷基氯(0.68g，4.56mmol)。将反应混合物于室温搅拌2小时，此时将其浓缩，通过快速柱色谱法纯化(二氧化硅，MeOH/CHCl₃；梯度＝5-20％)，得到0.49g(52％)87，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ8.33(s，1H)，6.87(s，2H)，5.90(d，J＝4.0Hz，1H)，5.33(d，J＝5.6Hz，1H)，5.00(d，J＝5.2Hz，1H)，4.79(q，J＝5.2Hz，1H)，4.16(q，J＝5.2Hz，1H)，3.77(m，2H)，3.64(dd，J＝12.0，7.2Hz，1H)，0.84(s，9H)，0.00(s，6H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z415.4.

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’-二O-乙酰基，5’-O-叔丁基-二甲基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(88)的制备

向0℃的87(0.20g，0.48mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中依次加入Et₃N(0.26mL，1.86mmol)和Ac₂O(91μL，0.96mmol)。将反应混合物于室温搅拌24小时，此时将其浓缩，通过快速柱色谱法纯化(二氧化硅，丙酮/CHCl₃：梯度＝5-10％)，得到0.22g(92％)的88，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ8.36(s，1H)，6.90(s，2H)，6.00(m，2H)，5.57(t，J＝6.0Hz，1H)，4.07(q，J＝5.2Hz，1H)，3.77(m，2H)，2.07(s，3H)，2.06(s，3H)，0.83(s，9H)，0.00(d，J＝2.4Hz，6H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z499.5.

步骤3：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(89)的制备

向在塑料管中的88(0.22g，0.44mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入HF/吡啶(0.70mL)。将反应物搅拌2小时，浓缩，通过快速柱色谱法纯化(二氧化硅，MeOH/CHCl₃：梯度＝5-10％)，得到0.17g(100％)标题化合物，为白色固体：

mp 109-111℃；¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ8.37(s，1H)，6.91(s，2H)，6.00(m，2H)，5.48(t，J＝6.0Hz，1H)，4.91(t，J＝6.0Hz，1H)，4.04(dd，J＝10.4，6.0Hz，1H)，3.64(m，1H)，3.52(m，1H)，2.08(s，3H)，2.05(s，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z385.3.元素分析C₁₄H₁₆N₄O₇S.0.5 CH₃OH.0.2 CHCl₃：计算值：C，41.61；H，4.32；N，13.21；S 7.56：

实测值：C，41.73；H，4.29；N，12.86；S，7.33.

实施例44：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(89)

供选择合成途径A

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(89)的制备

向78(500mg)在丙酮(5mL)中的澄清溶液中加入磷酸钠缓冲液(pH＝7.0，0.1M，25mL)，此时该溶液变浑浊(白色沉淀)。向该混合物中加入Candida antarctica脂酶树脂(250mg)，随后于室温将该混悬液轻微振摇10小时。过滤所得澄清混合物，真空除去有机溶剂。然后用乙酸乙酯(3×25mL)萃取水溶液，合并有机层，用MgSO₄干燥，浓缩。按照与实施例43步骤3所述类似的方式进一步纯化所得固体。

实施例45：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(92)

步骤1：5-氨基-3-(5’-O-叔丁基-二甲基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2， 7-二酮(90)的制备

向1(12.0g，37.9mmol)和咪唑(7.75g，114mmol)在DMF中的混合物中加入叔丁基二甲基硅烷基氯1(为在DMF(25mL)中的溶液)(5.72g，37.9mmol。TLC分析(20％MeOH-CHCl₃)显示反应进行至～60％完成。逐批加入叔丁基二甲基硅烷基氯(5.72g，37.9mmol)至反应完全，此时用MeOH(10mL)使反应淬灭，然后浓缩至棕色残余物。将残余物溶于EtOAc(800mL)，然后用水(3×200mL)洗涤。用无水Na₂SO₄-活性炭干燥有机相，然后通过SiO₂短垫过滤，得到溶液，将其浓缩，得到黄褐色固体。将粗产物与Et₂O一起研磨，得到90 12.41g(76％)，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.16(s，1H)，6.92(br s，2H)，5.77(d，J＝4.4Hz，1H)，5.27(d，J＝5.5Hz，1H)，4.95(d，J＝5.9Hz，1H)，4.73(dd，J＝9.9，5.1Hz，1H)，4.11(dd，J＝10.6，5.1Hz，1H)，3.70-3.76(m，2H)，3.59-3.64(m，1H)，0.84(s，9H)，0.0(s，6H).

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基，5’-O-叔丁基-二甲基硅烷基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(91)的制备

向二醇90(2.44g，5.67mmol)和Et₃N(2.37mL，17.0mmol)在MeCN(40mL)中的均匀溶液中依次加入Ac₂O(1.06mL，11.3mmol和DMAP(69mg，0.57mmol)。将反应混合物搅拌3小时，然后浓缩，进行色谱法(SiO₂，洗脱梯度，40-60％EtOAc-CHCl₃)，得到1.2g(41％)的91，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.25(s，1H)，7.96-8.00(m，1H)，7.54-7.57(m，2H)，7.24-7.28(m，2H)6.96(br s，2H)，6.12(s，1H)，5.96(s，1H)，5.39-5.41(m，1H)，5.01-5.04(m，1H)，4.12-4.17(m，1H)，3.48-3.59(m，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z515.

步骤3：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2， 7-二酮(92)的制备

向91(1.2g，2.3mmol)在THF(20mL)中的均匀溶液中加入1.0M在THF中的四丁基氟化铵(4.7mL，4.7mmol)。将反应混合物搅拌16小时，然后浓缩，进行色谱法，得到800mg(86％)的白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.25(s，1H)，6.97(br s，2H)，5.95(dd，J＝5.9，4.4Hz，1H)，5.89(d，J＝4.8Hz，1H)，5.41(t，J＝6.2Hz，1H)，4.90(t，J＝5.9Hz，1H)，4.00(q，J＝5.9Hz，1H)，3.48-3.64(m，2H)，2.06(s，3H)，2.04(s，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z401.

实施例46：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-5’-O-新戊酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(93)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-5’-O-新戊酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2， 7-二酮(93)的制备

按照与实施例30步骤1类似的方式，由92和新戊酸酐制备化合物93，产率为21％，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.27(s，1H)，6.98(br s，2H)，5.88-5.91(m，2H)，5.55(dd，J＝7.0，5.9Hz，1H)，4.29(dd，J＝12.1，4.0Hz，1H)，4.18-4.27(m，1H)，4.11(dd，J＝12.1，5.1Hz，1H)，2.06(s，3H)，2.05(s，3H)，1.13(s，9H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z485.元素分析C₁₉H₂₄N₄O₉S·0.75 H₂O：计算值：C，45.82；H，5.16；N，11.25；S，6.44.Found：C，45.93；H，5.20；N，11.29；S，6.44.

实施例47：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-5’-O-月桂酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(94)

步骤1：5-氨基-3-(2 ’，3’-二-O-乙酰基-5’-O-月桂酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮的制备(94)

按照与实施例30步骤1类似的方式，由92和月桂酸酐制备化合物94，产率为59％，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.26(s，1H)，6.97(br s，2H)，5.87-5.91(m，2H)，5.51(t，J＝6.4Hz，1H)，4.36(dd，J＝12.1，3.5Hz，1H)，4.18-4.22(m，1H)，4.08(dd，J＝12.1，5.9Hz，1H)，2.27(t，J＝7.3Hz，1H)，2.06(s，6H)，1.46-1.50(m，1H)，1.17-1.28(m，16H)，0.85(t，J＝6.0Hz，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z 583.元素分析C₂₆H₃₈N₄O₉S：计算值：C，52.55；H，6.49；N，9.25；S，5.29.实测值：C，52.58；H，6.57；N，9.49；S，5.38.

实施例48：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-丁酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(95)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-丁酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(95)的制备

按照与实施例30步骤1类似的方式，由1和丁酸酐制备化合物95。通过柱色谱法纯化(SiO₂，40％EtOAc-CHCl₃)，与Et₂O-己烷一起研磨，得到白色固体，产率为17％：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.27(s，1H)，6.97(br s，2H)，5.87-5.91(m，2H)，5.54(dd，J＝12.8，6.2Hz，1H)，4.37(dd，J＝12.1，3.7Hz，1H)，4.18-4.22(m，1H)，4.10(dd，J＝12.1，5.9Hz，1H)，2.25-2.38(m，6H)，1.47-1.59(m，6H)，0.84-0.91(m，9H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z527.元素分析C₂₂H₃₀N₄O₉S：计算值：C，50.18；H，5.74；N，10.64；S，6.09.实测值：C，50.18；H，5.64；N，10.56；S，6.02.

实施例49：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-辛酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(96)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-辛酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(96)的制备

按照与实施例30步骤1类似的方式，由1和辛酸酐制备化合物96，产率为30％，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.28(s，1H)，6.96(br s，2H)，5.87-5.92(m，2H)，5.35(dd，J＝12.8，6.2Hz，1H)，4.35(dd，J＝11.7，3.3Hz，1H)，4.17-4.21(m，1H)，4.09(dd，J＝11.7，5.9Hz，1H)，2.24-2.39(m，6H)，1.48-1.53(m，6H)，1.22-1.25(m，2H)，0.82-0.87(m，9H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z695.元素分析C₃₄H₅₄N₄O₉S：计算值：C，58.77；H，7.83；N，8.06；S，4.61.实测值：C，58.65；N，7.92；N，7.98；S，4.55.

实施例50：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-5’-O-L-缬氨酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(98)

步骤1：5-氨基-3-[2’，3’-二-O-乙酰基-5’-O-(N-叔丁氧羰基-L-缬氨酰基)]-β-D-呋喃核糖基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2， 7-二酮的制备(97)

向室温下的3(2.00g，4.09mmol)在MeCN(10mL)中的混悬液中加入Et₃N(1.14mL，8.19mmol)。将所得混合物搅拌30分钟，用二碳酸二叔丁基酯(894mg，4.09mmol)处理，然后搅拌16小时。向该混合物中依次加入Et₃N(1.40mL，10.0mmol)和Ac₂O(950uL，10.0mmol)。3小时后，浓缩该混合物，使其在EtOAc(200mL)与水(100mL)之间分配，用无水Na₂SO₄干燥，浓缩，然后进行色谱法(SiO₂，80％EtOAc-CHCl₃)，得到白色泡沫。将该泡沫在CHCl₃-Et₂O-己烷中研磨，得到1.38g二乙酸酯97，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.29(s，1H)，7.05(d，J＝8.1Hz，1H)，6.99(br s，2H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.50(s，1H)，4.34(dd，J＝11.0，2.2Hz，1H)，4.13-4.23(m，2H)，3.84(dd，J＝8.1，6.6Hz，1H)，2.06(s，3H)，2.06(s，3H)，1.97-2.03(m，1H)，1.35(s，9H)，0.82(d，J＝6.6Hz，6H)；MS(-)-ES[M-H]⁺m/z598.

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-乙酰基-5’-O-L-缬氨酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2， 7-二酮盐酸盐(98)的制备

向4M在二烷中的HCl(50mL)和i-PrOAc的混合物中加入固体97(1.35g，2.25mmol)。所得溶液在数分钟内形成不均匀混合物。1小时后，过滤该混悬液，用Et₂O洗涤，然后高真空干燥，得到0.66g(55％)白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.46(s，1H)，8.40(s，3H)，7.19(br s，2H)，4.46(dd，J＝12.5，3.7Hz，1H)，4.28-4.44(m，2H)，3.85(s，1H)，3.68(br s，1H)，2.13-2.24(m，1H)，2.08(s，3H)，2.06(s，3H)，0.95(d，J＝7.3Hz，3H)，0.91(d，J＝6.6Hz，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z498.元素分析C₁₉H₂₅N₅O₉S·1.0 HCl·1.0 H₂O：计算值：C，41.19；H，5.09；Cl，6.40；N，12.64；S，5.79.实测值：C，41.52；H，5.01；Cl，6.64；N，12.85；S，5.85.

实施例51：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-丁酰基-5’-O-L-缬氨酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(100)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-丁酰基-5’-N-叔丁氧羰基-L-缬氨酰基)-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2， 7-二酮(99)的制备

按照与实施例49步骤1类似的方式由3和丁酸酐制备99，为白色蜡样固体，产率为62％：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.27(s，1H)，7.05(d，J＝8.1Hz，1H)，6.97(br s，2H)，5.92(dd，J＝6.6，3.7Hz，1H)，5.88(d，J＝3.7Hz，1H)，4.35(dd，J＝11.7，2.9Hz，1H)，4.13-4.23(m，2H)，3.84(dd，J＝8.1，6.6Hz，1H)，2.24-2.39(m，4H)，1.98-2.03(m，1H)，1.46-1.59(m，4H)，1.35(s，9H)，0.85-0.91(m，12H)；MS(-)-ES[M-H]⁺m/z654.

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’-二-O-丁酰基-5’-O-L-缬氨酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(100)的制备

按照与实施例49的步骤2类似的方式制备标题化合物，产率为60％，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.48(s，1H)，8.42(s，3H)，7.19(br s，2H)，6.00(dd，J＝6.6，4.4Hz，1H)，5.92(d，J＝4.4Hz，1H)，5.57(dd，J＝12.5，5.9Hz，1H)，4.47(dd，J＝12.5，2.9Hz，1H)，4.35-4.40(m，1H)，4.27-4.31(m，1H)，3.83-3.85(m，1H)，2.28-2.40(m，4H)，2.14-2.25(m，1H)，1.46-1.60(m，4H)，0.83-0.96(m，12H)；MS(-)-ES[M-H]⁺m/z 554.

元素分析C₂₃H₃₃N₅O₉S·1.1 HCl·0.5 H₂O：计算值：C，45.68；H，5.85；Cl，6.45；N，11.58；S，5.30.实测值：C，45.34；H，5.70；Cl，6.59；N，11.62；S，5.42.

实施例52：5-氨基-3-(2’，3’-O-羰基-5’-O-L-缬氨酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(102)

步骤1：5-氨基-3-[2’，3’-O-羰基-5’-O-(N-叔丁氧羰基-L-缬氨酰基)-β-D-呋喃核糖基]]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(101)的制备

按照与实施例49步骤1类似的方式由3和三光气制备101，为白色固体，产率为54％：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.34(s，1H)，7.09(d，J＝8.1Hz，1H)，7.06(br s，2H)，6.12(s，1H)，5.83(d，J＝8.1，1H)，5.67-5.72(m，1H)，4.46-4.51(m，1H)，4.23-4.32(m，2H)，3.82(dd，J＝13.9，5.9Hz，1H)，1.94-1.99(m，1H)，1.34(s，9H)，0.81(d，J＝6.6Hz，6H)；MS(-)-ES[M-H]⁺m/z540.

步骤2：5-氨基-3-(2’，3’-O-羰基-5’-O-L-缬氨酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶2，7-二酮盐酸盐(102)的制备

按照与实施例49步骤2类似的方式制备102，产率为65％，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.51(s，1H)，8.36(s，3H)，7.25(br s，2H)，6.13(s，1H)，5.88(d，J＝7.3Hz，1H)，5.76-5.82(m，2H)，4.39(dd，J＝10.3，2.9Hz，1H)，3.86(s，1H)，3.41-3.54(m，1H)，2.01-2.32(m，1H)，0.91(d，J＝7.3Hz，3H)，0.85(d，J＝6.6Hz，3H)；MS(-)-ES[M-H]⁺m/z 440.

元素分析C₁₆H₁₉N₅O₈S·1.1 HCl·0.5 H₂O·0.75 Et₂O：计算值：C，40.21；H，4.22；Cl，7.42；N，14.66；S，6.71.实测值：C，41.48；H，5.08；Cl，7.16；N，12.75；S，5.79.

实施例53：5-氨基-3-(5’-O-(L-缬氨酰基-L-缬氨酰基)-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(104)

步骤1：5-氨基-3-[2 ’，3’-O-异亚丙基-5’-O-(N-叔丁氧羰基-L-缬氨酰基-L-缬氨酰基)-β-D-呋喃核糖基]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(103)的制备

向室温下的Boc-Val-Val-OH(3.00g，9.48mmol)和EDC(1.82g，9.48mmol)在DCE(22.5mL)中的不均匀混合物中加入吡啶(7.5mL)。在变均匀时，将混合物于室温搅拌1小时，然后冷却至0℃。向该溶液中依次加入2(3.07g，8.62mmol)和DMAP(1.16g，9.48mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后于室温搅拌16小时。将混合物蒸发至干，然后在EtOAc(200mL)与水(100mL)之间分配。用无水Na₂SO₄干燥有机相，浓缩，进行色谱法(SiO₂，60％EtOAc至CHCl₃-100％EtOAc梯度洗脱)，浓缩，得到粘稠固体。将该固体在Et₂O-CHCl₃中研磨，得到2.048g(36％)的103，为结晶固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.63(s，1H)，11.37(s，1H)，11.25(s，1H)，7.92(dd，J＝13.2，8.1Hz，1H)，6.98(br s，2H)，6.61(dd，J＝11.7，8.8Hz，1H)，6.01(s，1H)，5.23-5.27(m，1H)，5.05(br s，1H)，4.10-4.35(m，3H)，3.76-3.90(m，2H)，3.57-3.60(m，1H)，1.80-2.06(m，2H)，1.47(s，3H)，1.36(s，3H)，1.35(s，3H)，1.29(s，3H)，0.77-0.86(m，12H)；[M-H]⁺m/z 653.

步骤2：5-氨基-3-(5’-O-[L-缬氨酰基-L-缬氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(104)的制备

向4M在二烷中的HCl(50mL)和i-PrOAc的混合物中加入固体103(1.48g，2.26mmol)。所得溶液在数分钟内形成不均匀混合物。1小时后，过滤该混悬液，用Et₂O洗涤，然后高真空干燥，得到948mg(74％)的104，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.29(s，1H)，8.52(d，J＝7.7Hz，1H)，8.06(br s，3H)，7.03(br s，2H)，5.79(d，J＝4.0Hz，1H)，5.42(d，J＝5.5Hz，1H)，5.13(d，J＝5.9Hz，1H)，4.71(dd，J＝9.9，5.5Hz，1H)，4.35(dd，J＝11.7，3.3Hz，1H)，4.18-4.22(m，2H)，4.06(dd，J＝11.7，8.0Hz，1H)，3.88-3.92(m，1H)，3.69(s，1H)，2.02-2.13(m，2H)，0.87-0.92(m，12H)；MS(-)-ES[M-H]⁺m/z513.

实施例54：5-氨基-3-(5’-O-(L-苯丙氨酰基-L-缬氨酰基)-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(106)

步骤1：5-氨基-3-[2’，3’-O-异亚丙基-5’-O-(N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酰基-L-缬氨酰基)-β-D-呋喃核糖基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(105)的制备

按照与实施例52的步骤1类似的方式制备标题化合物，产率为64％，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.24(s，1H)，8.00-8.08(m，1H)，7.22-7.23(m，4H)，7.13-7.16(m，1H)，6.98(br s，2H)，6.83-6.87(m，1H)，6.02(d，J＝3.7Hz，1H)，5.25-5.28(m，1H)，5.06(s，1H)，4.12-4.34(m，4H)，2.88-2.94(m，1H)，2.66-2.75(m，1H)，1.97-2.04(m，1H)，1.46(d，J＝7.3Hz，2H)，1.17-1.28(m，14H)，0.77-0.85(m，6H)；MS(-)-ES[M-H]⁺m/z701.

步骤2：5-氨基-3-(5’-O-[L-苯丙氨酰基-L-缬氨酰基]-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(106)的制备

按照与实施例52的步骤2类似的方式制备标题化合物，产率为74％，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.32(s，1H)，8.72(d，J＝8.0Hz，1H)，8.16(br s，3H)，7.19-7.28(m，5H)，7.09(br s，2H)，5.79(d，J＝4.0Hz，1H)，5.20(br s，3H)，4.70(dd，J＝5.5，4.4Hz，1H)，4.36(dd，J＝11.7，3.3Hz，1H)，4.03-4.24(m，3H)，3.90-3.94(m，1H)，3.09(dd，J＝14.0，5.9Hz，1H)，2.92(dd，J＝14.0，7.7Hz，1H)，2.01-2.10(m，1H)，0.89(d，J＝6.6Hz，3H)，0.88(d，J＝6.6Hz，3H)；MS(-)-ESM⁺m/z 562.

实施例55：5-氨基-3-(5’-O-辛酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5d]嘧啶-2，7-二酮盐酸盐(109)

步骤1：5-氨基-3-[2’，3’-O-(4-氟亚苄基)-β-D-呋喃核糖基]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(107)的制备

向90(750mg，1.74mmol)和4-氟苯甲醛(1.86mL，17.4mmol)在THF中的均匀溶液中加入H₂SO₄(1滴)。将所得混合物搅拌16小时，此时形成沉淀。过滤，得到360mg(49％)的亚苄基乙缩醛107，为黄色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.24(s，1H)，7.96-8.00(m，1H)，7.54-7.57(m，2H)，7.24-7.28(m，2H)，6.96(br s，2H)，6.12(s，1H)，5.96(s，1H)，5.39-5.41(m，1H)，5.01-5.04(m，1H)，4.12-4.17(m，1H)，3.48-3.59(m，3H)；MS(+)-ES[M+H]+m/z 423.

步骤2：5-氨基-3-[2’，3’-O-(4-氟亚苄基)-5’-辛酰氧基-β-D-呋喃核糖基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，-二酮的制备(108)

向107(360mg，0.605mmol)、Et₃N(278uL，2.00mmol)和DMAP(5mg，0.04mmol)在MeCN(5mL)中的不均匀混合物中加入辛酸酐(180uL，0.605mmol)。将反应混合物搅拌16小时，此时将其浓缩，进行色谱法(SiO₂，洗脱梯度40-60％EtOAc-CHCl₃)，得到407mg(87％)108，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.28(s，1H)，7.56(dd，J＝8.4，6.2Hz，2H)，7.25(dd，J＝9.2，8.8Hz，2H)，7.00(br s，2H)，6.14(s，1H)，5.97(s，1H)，5.39(d，J＝7.0Hz，1H)，5.15-5.18(m，1H)，4.27-4.35(m，2H)，4.14(dd，J＝11.4，7.7Hz，1H)，2.26(t，J＝7.0Hz，2H)，1.45-1.47(m，2H)，1.20-1.23(m，8H)，0.82(t，J＝5.9Hz，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z549.

步骤4：5-氨基-3-(5’-O-辛酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮(109)的制备

将108(200mg，0.365mmol)和PPTS(5mg，0.02mmol)在MeOH(40mL)中的混合物于45℃加热20分钟，浓缩，进行HPLC纯化，得到69mg(43％)标题化合物，为白色固体：

¹H(400MHz，d₆-DMSO)δ11.18(s，1H)，6.93(br s，2H)，5.77(d，J＝4.0Hz，1H)，5.35(d，J＝5.3Hz，1H)，5.08(d，J＝6.0Hz，1H)，4.67 (dd，J＝9.9，5.3Hz，1H)，4.30(dd，J＝11.9，3.7Hz，1H)，4.21(dd，J＝12.1，6.4Hz，1H)，3.98(dd，J＝11.9，6.8Hz，1H)，3.84-3.88(m，1H)，2.27(t，J＝7.1Hz，2H)，1.47-.1.50(m，2H)，1.19-1.25(m，8H)，0.84(t，J＝6.8Hz，3H)；MS(+)-ES[M+H]⁺m/z443.元素分析C₁₈H₂₆N₄O₇S.1.0H₂O：计算值：C，46.71；H，5.78；N，11.47；S，6.56.实测值：C，46.62；H，6.09；N，12.01；S，6.89.

实施例56：甲苯-4-磺酸(5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-2，3-二氢-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)酯(110)

步骤1：5-氨基-3-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-(4-甲苯磺酰氧基)-2-酮(110)

将化合物25(250mg，0.56mmol)溶于CH₂Cl₂(10mL)，加入DMAP(3.4mg，0.028mmol)和TEA(0.24mL，1.70mmol)。每40分钟向该混合物中加入1/5当量的等分试样的对甲苯磺酰氯(21.5mg，113mmol)。通过TLC监测反应进程。3小时后，大多数原料被消耗。使粗反应混合物过二氧化硅填料，浓缩，采用25％在氯仿中的乙酸乙酯通过快速柱纯化。将产物溶于乙醚，添加己烷时沉淀出化合物16(190mg，0.32mmol)，为白色固体：

¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ8.00(d，J＝8.0Hz，2H)，7.47(d，J＝8.0Hz，2H)，7.35(s，2H)，5.97(d，J＝4.0Hz，1H)，5.86(m，1H)，5.52(m，1H)，4.35(m，1H)，4.24(m，1H)，4.08(m，1H)，2.43(s，3H)，2.05(s，3H)，2.04(s，3H)，1.97(s，3H)；MS㈩-ES[M+H]⁺597.R_f＝0.65(75％乙酸乙酯CHCl₃).元素分析C₂₃H₂₄N₄O₁₁S：计算值：C，46.30；H，4.05；N，9.39；S，10.75.实测值：C，46.54；H，4.27；N，9.19；S，10.44.

生物学测试

式I化合物在通过所选择途径施用时表现出有利的口服递送特性的能力以及诱导免疫应答的能力容易地在小鼠和比格犬(beagle dogs)实验中得以证实。可以将式I化合物的该测定结果与使用本说明书中所参考的文献(例如US 5,041,426和US 4,880,784)中所述的化合物进行类似实验所得的结果进行比较，以揭示式I化合物在药代动力学与药效学性质方面的优点。

小鼠中干扰素α(Mu-IFN-α)浓度

正常小鼠提供了用于评价本文所述的发明在1(艾沙托立宾)的口服递送方面提供实质改善的程度的有用系统。不仅人们可以测定口服施用所述前药所产生的艾沙托立宾血浆浓度，而且在小鼠中进行的深入细致的免疫学研究已经提供了适于测定干扰素α水平的试剂，干扰素α为反映艾沙托立宾的所需生物活性之一的有意义的细胞因子。

我们已经在一系列实验中使用了鼠系统，这些实验表明3、即1的5’-缬氨酸酯(缬氨酸-艾沙托立宾)诱导干扰素响应，该响应与施用艾沙托立宾自身所产生的响应相比有相当大的改善。

表1记录了在以50mg/kg水平经口服两次施用艾沙托立宾(配制为碳酸氢盐)的小鼠中对血浆中鼠干扰素α的分析结果。显然甚至在4小时间隔后重复剂量时仍然无法测定到干扰素。

表1

在间隔4小时两次口服50mg/kg剂量的艾沙托立宾后小鼠的干扰素α(Mu-IFN-α)的血浆浓度(Pg/mL)

时间，h	个体值	平均值	SD
				第一次给药
0.000.030.080.250.501.001.502.003.004.00	BQL50  BQL125  BQL50BQL25  BQL250  BQL25BQL25  BQL25   BQL25BQL50  BQL25   BQL25BQL25  BQL25   BQL25BQL25  BQL25   BQL25BQL100 BQL25   BQL25BQL25  BQL75   BQL25BQL25  BQL25   BQL25BQL25  BQL25   BQL25	0.000.000.000.000.000.000.000.000.000.00	0.000.000.000.000.000.000.000.000.000.00
				第二次给药
4.034.084.254.505.00	BQL25  BQL25   BQL25BQL25  BQL25   BQL25BQL25  BQL25   BQL25BQL50  BQL37.5 BQL50BQL50  BQL50   BQL50	0.000.000.000.000.00	0.000.000.000.000.00

5.506.007.008.00

BQL37.5 BQL37.5 BQL37.5BQL50   BQL41.3 BQL37.5BQL50   BQL50   BQL50BQL50   BQL25   BQL50

0.000.000.000.00

0.000.000.000.00

BQLⁿ-低于升高的定量限＜n pg/mL.

表2记录了在首先施用碳酸氢盐、4小时后以50mg/kg水平经口服施用艾沙托立宾(配制为碳酸氢盐)的小鼠中对血浆中鼠干扰素α的分析结果。报道来自4只小鼠、包括2只接受碳酸氢盐载体剂量的小鼠的血浆中的干扰素。在本实验中所报道的所有值均较低，并且所报道的干扰素水平对每个时间点评价的所有三只小鼠而言不是始终如一地报道，提示这些信号可能是在接近分析下限处的测定所产生的假象。

表2

一次载体剂量并在4小时后一次50mg/kg剂量的艾沙托立宾后小鼠的干扰素α(Mu-IFN-α)血浆浓度(pg/mL)

时间，h	个体值	平均值	SD
				第一次给药
0.000.030.080.250.501.001.502.003.004.00	BQL50  BQL100  BQL62.5BQL50  BQL50   BQL37.5BQL50  BQL50   BQL50BQL50  BQL62.5 BQL50BQL50  BQL50   BQL50BQL50  BQL50   BQL100BQL50  BQL100  BQL5034.9   BQL25   BQL25BQL25  BQL25   BQL25BQL25  35.4    BQL100	0.000.000.000.000.000.000.0011.60.0011.8	0.000.000.000.000.000.000.0020.150.0020.44
				第二次给药
4.034.084.254.50	BQL25  BQL25  BQL25BQL25  BQL25  BQL25BQL25  BQL25  BQL25BQL100 BQL25  133.2	0.000.000.0044.4	0.000.000.0076.90

5.005.506.007.008.00

74.9   BQL50  NRBQL250 BQL75  BQL25BQL25  BQL75  BQL75BQL50  BQL50  BQL25BQL25  BQL25  BQL25

37.50.000.000.000.00

52.960.000.000.000.00

BQLⁿ-低于升高的定量限＜n pg/mL。

NR-未报道

表3记录了在口服施用溶于碳酸氢盐中的缬氨酸-艾沙托立宾的小鼠中对血浆中的鼠干扰素α的分析结果，其中施用剂量基于摩尔相当于50/mg/kg艾沙托立宾。可以看出，在给药后1.0小时、1.5小时和2.0小时时可容易地测定到干扰素。在给定时间点在所有小鼠中均检测到干扰素，表明给予缬氨酸-艾沙托立宾后的作用的可靠性。因此，单次给予缬氨酸-艾沙托立宾优于单剂量或重复剂量的艾沙托立宾。

表3

单次73.0mg/kg剂量的缬氨酸-艾沙托立宾后小鼠的干扰素α(Mu-IFN-α)的血浆浓度(pg/mL)

时间，h	个体值	平均值	SD
				0.000.250.500.751.001.502.003.004.005.00	BQL    BQL125  BQL25BQL    BQL     BQLBQL25  BQL25   BQLBQL    BQL     BQL25173.2  125.1   89.0202.9  145.9   294.849.2   137.9   138.3BQL25  NR      NRBQL25  27.6    BQLBQL    BQL25   BQL25	0.000.000.000.00129.1214.5108.50.009.200.00	0.000.000.000.0042.2475.1351.330.0015.900.00

BQL-低于定量限＜12.5 pg/mL

BQLⁿ-低于升高的定量限＜n pg/mL

NR-未报道

还可以从可测定干扰素水平的发生率的观点考虑表1、2和3中的数据。在艾沙托立宾研究中所用的114只小鼠中仅有4只小鼠的血浆中检测到了干扰素，而在给予缬氨酸-艾沙托立宾的30只小鼠中有10只在其血浆中含有可检测到的干扰素。因此，该前药将表现出干扰素响应的小鼠比例由4％增至30％，平均响应和峰响应的量值均提高2倍。

在其它实验中，在通过静脉内途径给予艾沙托立宾的小鼠中测定艾沙托立宾和干扰素α的血浆水平，将这些水平与口服给予缬氨酸-艾沙托立宾后产生的艾沙托立宾和干扰素α水平进行比较。这些数据在图1中概括。在该图中可以看出，口服缬氨酸-艾沙托立宾(“val-isator”)(50mg/kg艾沙托立宾摩尔当量)诱导的干扰素α水平与静脉内施用25mg/kg艾沙托立宾(“isator”)所诱导的干扰素α水平相似。因此，口服缬氨酸-艾沙托立宾提供的艾沙托立宾和干扰素水平是静脉内施用艾沙托立宾自身后所观察到的水平的约50％。

比格犬

研究了前药(缬氨酸-艾沙托立宾，3)在口服施用于比格犬后对艾沙托立宾(1)全身暴露的作用。艾沙托立宾在碳酸氢钠溶液中制备。将缬氨酸-艾沙托立宾和艾沙托立宾制备成以下制剂(选择它们是为了确保溶解度)：

制剂1：在碳酸氢钠溶液中的艾沙托立宾，1和4mg/mL。

制剂2：在磷酸缓冲盐水中的缬氨酸-艾沙托立宾，1.62和6.48mg/mL，基于摩尔相当于1和4mg/mL艾沙托立宾。

在本研究开始时使用称重为15-27kg且约1-2岁的4只雄性和4只雌性成年比格犬。将动物分为两组，每组各2只雄性和2只雌性比格犬。在第1天和第8天通过管饲法给予测试物质，在施用之间允许7天的清除期。在给药前以及在每次给药后15分钟、30分钟、1、2、3、4、6、8和10小时将来自每只动物的血样(2mL)采集入肝素锂管。将血浆于-70℃下冷冻待分析。通过HPLC-MS/MS实验分析血浆中的艾沙托立宾。

表4和5概括了每只犬中来自艾沙托立宾或缬氨酸-艾沙托立宾的就艾沙托立宾而言的药物动力学参数。表6概括了对50mg/kg剂量的前药和碳酸氢盐溶液而言定义最大浓度(C_max)和总暴露(通过时间-浓度曲线下面积(AUC)测定)的关键药物动力学参数。对前药3而言，C_max比值为2.98±0.695，AUC比值为2.38±0.485。这些结果表明，在50mg/kg剂量时，前药缬氨酸-艾沙托立宾与碳酸氢盐溶液中的艾沙托立宾相比提供了显然较高的C_max和较高的生物利用度。

表7概括了10mg/kg剂量时前药与碳酸氢盐溶液的C_max和AUC的比值。对前药而言，C_max比值为2.24±0.249，AUC比值为1.82±0.529。这些结果表明，在10mg/kg剂量时，前药缬氨酸-艾沙托立宾与碳酸氢盐溶液中的艾沙托立宾相比提供了较高的C_max和较高的生物利用度。

因此，在10和50mg/kg两种剂量下与艾沙托立宾自身相比，在口服给予前药缬氨酸-艾沙托立宾后，口服给药后所获得的艾沙托立宾的最大浓度至少加倍并且艾沙托立宾全身暴露增加约约2-倍。

表4

给予50mg/kg的犬中艾沙托立宾的药物动力学参数

动物编号	给药期	1	2
				制剂	艾沙托立宾	缬氨酸-艾沙托立宾
	剂量，mg/kg摩尔当量的艾沙托立宾	50	50
				犬3517322	Cmax，ng/mLTmax，hAUC(0-inf)，ng·h/mLT1/2，h	3038.70.5015227.06.4	11741.50.5033038.12.4
犬3521451	Cmax，ng/mLTmax，hAUC(0-inf)，ng·h/mLT1/2，h	3354.01.009422.21.9	10652.11.0026552.71.6
				犬3528707	Cmax，ng/mLTmax，hAUC(0-inf)，ng·h/mLT1/2，h	8915.30.5029701.72.2	20340.60.5053273.02.3

犬3532828

Cmax，ng/mLTmax，hAUC(0-inf)，ng·h/mLT1/2，h

6134.70.5012069.71.4

15987.90.5032987.01.6

表5

给予10mg/kg的犬中艾沙托立宾的药物动力学参数

动物编号	给药期	1	2
				制剂	艾沙托立宾	缬氨酸-艾沙托立宾
	剂量，mg/kg摩尔当量的艾沙托立宾	10	10
				犬3524523	Cmax，ng/mLTmax，hAUC(0-inf)，ng·h/mLT1/2，h	4091.51.0013305.82.1	8594.60.5017166.21.7
犬3526402	Cmax，ng/mLTmax，hAUC(0-inf)，ng·h/mLT1/2，h	1859.51.005774.41.6	4047.01.0010548.92.2
				犬357450	Cmax，ng/mLTmax，hAUC(0-inf)，ng·h/mLT1/2，h	1620.30.504387.31.5	4228.71.0011158.02.3
犬354708	Cmax，ng/mLTmax，hAUC(0-inf)，ng·h/mLT1/2，h	2781.20.507522.11.6	5784.80.5012259.12.0

表6

给予50mg/kg的犬中艾沙托立宾的药物动力学参数比值

动物编号	制剂	艾沙托立宾	缬氨酸-艾沙托立宾
	犬3517322犬3521451犬3528707犬3532828	Cmax比值AUC比值Cmax比值AUC比值Cmax比值AUC比值Cmax比值AUC比值	1.001.001.001.001.001.001.001.00				3.862.173.182.822.281.792.612.73
				平均Cmax比值SD Cmax比值平均AUC比值SD AUC比值	N/AN/AN/AN/A	2.980.6952.380.485

表7

给予10mg/kg的犬中艾沙托立宾的药物动力学参数比值

动物编号	制剂	艾沙托立宾	缬氨酸-艾沙托立宾
	犬3524523犬3526402犬3527450犬355708	Cmax比值AUC比值Cmax比值AUC比值Cmax比值AUC比值Cmax比值AUC比值	1.001.001.001.001.001.001.001.00				2.101.292.182.202.612.542.081.63
				平均Cmax比值SD Cmax比值平均AUC比值SD AUC比值	N/AN/AN/AN/A	2.240.2491.820.529

出于若干原因优选前药。首先，易于配制前药以提供高比例的活性剂。这导致对于给定剂量的胶囊体积较小，其对口服产品而言是一个优点。其次，当物质通过衬在肠上的淋巴样组织时，前药提供了掩蔽活性结构的可能，其可使所述组织的激活最小并由此改善口服耐受性。最后，在所测试剂量下，缬氨酸-艾沙托立宾在口服施用后提供了较好地在生物学效应所期望的范围之内的艾沙托立宾血浆水平，而这对艾沙托立宾自身而言并非如此。

胃肠刺激性的降低

本发明的式I化合物还表现出令人意外的且显著降低的毒理学作用、特别是降低的GI刺激性。胃肠(“GI”)道衬有重要的免疫组织(例如派尔结等)。式I化合物当物质通过衬在肠上的淋巴样组织时提供了掩蔽活性结构的可能，其应当使得所述组织的激活最小并由此降低GI刺激性。

Robins等人已经证实，消除艾沙托立宾核苷的5’-羟基可以消除活性。参见Robins等人，Adv.Enzyme Regul.，29，97-121(1989)。不限于任何特定的理论，假定通过酯取代阻断该羟基位点可以类似地消除活性但允许在全身循环中转运，其中缬氨酸酯将被裂解并导致暴露于艾沙托立宾。

我们已经发现该假说得以成立。静脉内施用的艾沙托立宾和口服施用的艾沙托立宾和缬氨酸-艾沙托立宾的正式毒理学研究在比格犬中进行。口服施用的艾沙托立宾的毒理学结果来自ICN/Nucleic Acid ResearchInstitute进行的研究。

我们在犬中比较了1和3的口服毒理学以及1的静脉内毒理学。我们观察到，3的口服毒理学与1静脉内毒理学的相似性胜于与1的口服毒理学的相似性。具体而言，口服3的剂量限制性毒理学实际上与静脉内施用1的剂量限制性毒理学相似，其发生在与静脉内施用1后所观察的相似的血液暴露时。相反，口服1具有不同的限制性毒性(胃肠损伤)，该毒性在低于静脉内施用1或口服3的毒性剂量的剂量下被观察到。同样，在以低于口服3导致呕吐的剂量的剂量下口服1处理的犬中观察到了呕吐。参见表8。用于评价呕吐的其它系统也是已知的，例如在白鼬中，这些系统允许比较化合物的口服和静脉内施用。例如参见Strominger N.等人，BrainRes.Bull，5，445-451(2001)。

在每种情况中，将化合物作为溶液通过管饲法或通过静脉内输注施用。如毒理学研究中所惯用的，评价多个参数。在提供较高的艾沙托立宾可能暴露的研究中，通过LC/MS法评价艾沙托立宾的血浆浓度。将值得注意的GI结果分级，列于表8。

表8

给予艾沙托立宾或缬氨酸-艾沙托立宾后对犬的GI耐受性的影响

(通过毒理学研究中艾沙托立宾的全身暴露(AUC)进行分级)

		口服艾沙托立宾		静脉内艾沙托立宾		口服缬氨酸-艾沙托立宾
								相当于艾沙托立宾的应用剂量(mg/kg)	AUC0-24hrs(μg·hr/ml)	呕吐或稀粪	GI损伤或刺激	呕吐或稀粪	GI损伤或刺激	呕吐或稀粪	GI损伤或刺激
2.5	n.d	Neg.	Neg.
								5	n.d.	+	Neg.
10	n.d.	++	++
								8.1	11.4					Neg.	Neg.
16	15.6					Neg.	Neg.
								12.5	19.5			Neg.	Neg.
32	31.7					Neg.	Neg.
								25	42.8			Neg.	Neg.
64	71					Neg.	Neg.
								130	75.3					+	Neg.
50	87.8			+	Neg.
								260	127					++	Neg.
390	180					+++	Neg.
								100	209			++	Neg.

就口服给予的艾沙托立宾而言，主要结果与如GI刺激性所测定的GI耐受性有关。表8中所记录的临床信号为呕吐和/或稀粪。这些信号更频繁地出现在10mg/kg试验组中，在该剂量下在1只动物中记录到血粪。对GI道进行总体组织病理学评价，观察到在10mg/kg的8只犬中有4只的肠粘膜上出现多个散射的红色损伤，使用显微镜评价显示为细胞充血和出血，如进行性局部炎症过程可能预期的。GI作用确定NOVEL为5mg/kg。

静脉内给予艾沙托立宾导致作为犬中常见结果的呕吐和/或稀粪；这种影响在基本上高于口服给予艾沙托立宾的应用剂量下出现。在尸检或对组织的组织病理学评价中在GI道中未观察到损伤。GI毒性不影响NOAEL，其中NOAEL根据其它结果确定为12.5mg/kg。

口服给予缬氨酸-艾沙托立宾表现出的毒理学性质与静脉内给予艾沙托立宾相似。在较高的应用剂量下，观察到呕吐和稀粪。未发现GI损伤，虽然这是本研究的评价焦点。至于静脉内给予艾沙托立宾，NOAEL基于其它结果来确定。所观察到的毒性与艾沙托立宾全身暴露之间的对应性在本研究中具有重要性；对静脉内给予艾沙托立宾和口服给予缬氨酸-艾沙托立宾而言，用于观察呕吐和稀粪的艾沙托立宾AUC的阈值相似(表8)。

表8的数据表明，口服给予缬氨酸-艾沙托立宾提供了优于口服给予艾沙托立宾的改善的毒性性质，这与如下假说相一致：通过对核苷的羟基之一进行化学取代酯、优选通过在核苷5’-羟基位上化学取代酯，获得对艾沙托立宾活性的化学掩蔽。设计这种取代以在进入体内时可被裂解提供了对化合物有用活性的全身暴露，而没有来自GI道解剖结构的限制性GI毒性。这使得施用基本较高(基于摩尔)的剂量是可以接受的，其结果是与仅施用母体“未掩蔽”化合物相比时功效较高且副作用较少。

式I化合物口服施用后对1(艾沙托立宾)的全身暴露的评价

表9

当R²＝H时式I化合物的药物动力学参数

	药物动力学参数
				化合物	Caco2(nm/s)	猴肝细胞(％)	猴PK((ng/ml)*hr)/(mg/kg)
79	100	10	390
				89	200	45	560
78	600	20	630

Caco2试验

采用分化的和表达P-糖蛋白的Caco2细胞单层的体外药物转运试验广泛用于预测候选药物化合物通过肠上皮细胞屏障的吸收速率。例如参见Hilgers，A.R.等人，Pharm.Res.，20(8)，1149-55(2003年8月)。

使Caco-2细胞(获自ATCC)在可渗透膜上生长至汇合，所述膜位于允许穿过该膜的顶面和底外侧的室中。采用经上皮电阻评价所得细胞膜的完整性。向该膜的顶面加入已知浓度的测试化合物，通过采用HPLC或LC-MS/MS的分析评价膜底外侧的化合物的出现速率。Caco-2细胞中较高的转运速率与胃肠吸收改善有关。

在该系统中评价化合物79、89和78的目的是为了确定89和78是否以高于79的程度被转运。结果证实89和78表现出明显超过79的转运改善。

初级肝细胞

如果本发明的化合物意欲作为有效的前药使用，那么它们必须在体内转化为1。通常使用肝细胞来评价化合物在动物体内的转化程度，已知这类转化可以以反映整个动物代谢的方式随来自不同种属的肝细胞而改变。参见Seddon T.等人，Biochem Pharmacol.，38(10)，1657-65(1989年5月)。

短尾猴肝细胞购自商品供应商，在制备48小时内使用。在培养基中制备浓度为10μM/ml的化合物，在37℃下在含有1,000,000个存活肝细胞/ml的标准系统中孵育2小时。通过用LC-MS/MS测定1来评价孵育期结束时的转化程度。

在该系统中评价化合物79、89和78的目的是为了确定它们转化为1的程度。结果证实89和78比79更广泛地转化成1。

动物PK实验

通过本领域众所周知的方法评价本发明化合物在口服施用后将1递送至全身循环的能力。对于表9和10，通过将化合物溶于水性缓冲液(如pH3的PBS)或含有增溶剂(如Cremaphor、Tween80或PEG400)的溶液中，将各测试化合物配制成用于口服给药的溶液。通过口服管饲法将化合物溶液给予Sprague-Dawley大鼠或短尾猴，通常每次实验使用含3只动物的组。6-24小时内在若干时间点(通常使用6-12个时间点)从动物中采集血浆样品。采集后立即冷冻血浆样品，在用于生物分析的样品制备前即刻融化。

在口服或静脉内施用后采用类似操作获得化合物1的参比值。静脉内给予1导致大部分(＞75％)所给予的剂量作为完整的1在尿液中回收；因此，测定尿液中的1提供了方便的对1的全身暴露的测定。由于这一原因，在某些实验中，将给药后24小时内所收集尿液中1的量用于评价化合物。

生物分析

使用含有内标(通常为水粉蕈素)的乙腈(3∶1，乙腈-血浆比值)骤冷动物PK研究或体外研究中所收集的各样品的等分试样(通常为50μL)。将混悬液以14,000rpm离心5-10分钟。将所得上清液的等分试样转入干净小瓶中，在氮气下干燥。将干燥的样品重构，通过MRM(多重反应监测)法进行LC-MS/MS分析。通过使用动物血浆或细胞培养基将分析物的起始浓度标准品系列稀释来制备校准标准。如上文动物PK样品中所述，制备用于LC-MS/MS分析的校准标准。使用至少两套校准标准以批量方式进行LC-MS/MS分析，研究样品填入括号。将分析物和内标的LC-MS/MS痕量进行积分，采用它们的峰面积比值来计算在研究样品和校准标准中分析物的相对响应。采用曲线拟合法对来自校准标准的响应做出合并的校准曲线。采用拟合校准曲线来计算样品中分析物的量。校准曲线的有用动态范围为1-5ng/mL至2,000-10,000ng/mL。

PK计算

将口服给予已知剂量的化合物后1的血浆浓度-时间曲线用于计算1在全身循环中的AUC(曲线下面积)。根据1在化合物中的总理论含量(基于分子量)使AUC标准化。对于表8，将AUC进一步标准化为1mg/kg剂量。

由表8可以看出，AUC数据说明化合物89和78口服施用后将1递送至全身循环(增加44％-69％)的量高于79。

表10

当R²=OR⁵时式I化合物的药物动力学参数

SD大鼠，PO  SD大鼠，PO    短尾猴，PO

化合物

ANA245        ANA245        ANA245

编号

AUC(0-24h)    AUC(0—1h)    AUC(0-24h)

          IV给药               341                                   256           740

1

          PO给药               23                                                  15

_______

_______

14		16
					30		169；136	73	205
28		156		153
					62			34
63			46
					32		157
66			9
					38			6

40			14
					36			16
34			6
					66		130	81；60	127
68				27
					51			0
72				0
					70				0
61				104

化合物的抗病毒活性

根据本发明可以采用多种试验来测定本发明化合物的抗病毒活性的程度，例如细胞培养、动物模型和施用于人类受治疗者。本文所述的试验可用于检测病毒随时间的生长以确定病毒在本发明化合物存在下的生长特性。

在另一实施方案中，将病毒和本发明的化合物施用于易受病毒感染的动物受治疗者。可将感染的发病率、严重程度、病程长度、病毒载量和死亡率等与仅将病毒(无本发明化合物的存在)施用于受治疗者时所观察到的感染的发病率、严重程度、病程长度、病毒载量和死亡率等进行比较。本发明化合物的抗病毒活性通过通过在本发明化合物存在下感染的发病率、严重程度、病程长度、病毒载量和死亡率等的下降来证实。在特定的实施方案中，同时对动物受治疗者给予病毒和本发明的化合物。在另一项特定的实施方案中，在给予本发明化合物之前对动物给予病毒。在另一项特定的实施方案中，在给予病毒之前对动物受治疗者给予本发明的化合物。

在另一实施方案中，病毒的生长速率可如下测定：在有或无本发明化合物存在下的感染后的多个时间点从人或动物受治疗者取体液/临床样品(例如鼻抽吸物、咽喉拭子、痰、支气管-肺泡灌洗液、尿液、唾液、血或血清)，测定病毒水平。在特定的实施方案中，病毒生长速率如下评价：采用本领域众所周知的任意方法评价样品中的病毒在细胞培养物中生长、在允许的生长培养基中生长或者在受治疗者体内生长后的存在，所述方法例如但不限于免疫测定法(例如ELISA；对于有关ELISA的讨论参见例如Ausubel等人编辑，1994，Current Protocols in Molecular Biology，第I卷，John Wiley&Sons，Inc.，纽约，在11.2.1)、免疫荧光染色或采用免疫特异性地识别欲分析病毒的抗体或者检测病毒特应性核酸的免疫印迹分析(例如通过DNA印迹或RT-PCR分析等)。

在特定的实施方案中，病毒滴度可如下测定：从受感染的细胞或受感染的受治疗者中获得体液/临床样品，制备样品的系列稀释液，以允许出现单个斑块的病毒稀释度用病毒感染易受感染的细胞单层(例如初级细胞、转化的细胞系、患者组织样品等)。然后可以对斑块计数，病毒滴度以每毫升样品中斑块形成单位表示。

在一项特定的实施方案中，病毒在受治疗者中的生长速率可通过受治疗者中抗病毒的抗体的滴度来估计。抗体血清滴度可以通过本领域众所周知的任意方法来测定，例如但不限于，血清样品中抗体或抗体片段的量可以通过例如ELISA来定量。另外，式I化合物的体内活性可如下测定：将化合物直接施用于测试动物，收集体液(例如鼻抽吸物、咽喉拭子、痰、支气管-肺泡灌洗液、尿液、唾液、血或血清)，测试体液的抗病毒活性。

在用于检测病毒水平的样品为体液/临床样品(例如鼻抽吸物、咽喉拭子、痰、支气管-肺泡灌洗液、尿液、唾液、血或血清)的实施方案中，样品可以含有或不含有完整的细胞。来自受治疗者的含有完整细胞的样品可以直接处理，而不含有完整细胞的分离物可以首先在允许的细胞系(例如初级细胞、转化的细胞系、患者组织样品等)或生长培养基(例如LB肉汤/琼脂、YT肉汤/琼脂、血琼脂等)上培养，或者可以不进行该操作。细胞混悬液可如下使之澄清：于室温例如以300xg离心5分钟，随后在相同条件下使用PBS(pH 7.4，不含Ca⁺⁺和Mg⁺⁺)洗涤。可以将细胞沉淀物重新混悬于少量体积的PBS以供分析。可以将含有完整细胞的初级临床分离物与PBS混合并于室温以300xg离心5分钟。用无菌吸管尖端从界面上除去粘液，在相同条件下再用PBS洗涤细胞沉淀物一次。然后可以将沉淀物重新混悬于少量体积的PBS中以供分析。

在另一实施方案中，将本发明的化合物给予感染了病毒的人类受治疗者。可以将感染的发病率、严重程度、病程长度、病毒载量和死亡率等与在没有本发明化合物存在或有安慰剂存在下感染病毒的人类受治疗者中所观察到的感染的发病率、严重程度、病程长度、病毒载量和死亡率等进行比较。本发明化合物的抗病毒活性通过在本发明化合物的存在下感染的发病率、严重程度、病程长度、病毒载量和死亡率等的下降来证实。本领域中任意已知的方法可用于测定受治疗者的抗病毒活性，例如上文所述的那些。

另外，式I化合物的体内活性可如下测定：直接对动物或人类受治疗者给予式I化合物，采集体液/临床样品(例如鼻抽吸物、咽喉拭子、痰、支气管-肺泡灌洗液、尿液、唾液、血或血清)，测试体液/临床样品中的抗病毒活性(例如通过加入有病毒存在的培养物中的细胞中)。

附图2：每天一次IV给予艾沙托立宾的病毒载量改变

艾沙托立宾试验药物产品作为包含在50mL小瓶中的在无菌生理盐水中的1mg/mL溶液供应。每天一次以200、400、600或800mg/剂量静脉内输注艾沙托立宾，共计7天。所有剂量历经60分钟以恒定速率输注给予，除了800mg剂量历经80分钟给予。各剂量的流速如下：200mg剂量为3.33mL/分钟；400mg剂量为6.67mL/分钟；500mg剂量为8.33mL/分钟；或600mg和800mg剂量为10.0mL/分钟。

各剂量组(200mg、400mg、600mg和800mg/剂量)登记4至6名患者，每天一次接受静脉内输注，共计7天。在给药前，从每名患者抽取血样用于评价HCV病毒的基因型。

对这些每日(×7天)施用组而言，在基线(前-1或治疗前和第1天时取的2个治疗前测定值的平均值)以及在第2至第7天在首次每日静脉内输注艾沙托立宾开始之前每日一次测定血浆HCV RNA。通过分枝DNA法(Versant^TM v3.0 bDNA试验，Bayer Diagnostics)测定病毒载量。对于血浆HCV RNA，使用log-转化值估计来自治疗前基线的最大改变。

实施例：口服组合物

表11说明了含有100mg缬氨酸-艾沙托立宾的批量制剂和单剂量单位制剂。

表11：100mg片剂制剂

材料	重量百分比	量(mg/片)	量(kg/批量)
				缬氨酸-艾沙托立宾	40％	100.00	20.00
微晶纤维素，NF	53.5％	133.75	26.75
				普流罗尼F-68表面活性剂	4.0％	10.00	2.00
交联羧甲基纤维素钠A型，NF	2.0％	5.00	1.00
				硬脂酸镁，NF	0.5％	1.25	0.25
总计	100.0％	250.00mg	50.00kg

将微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和缬氨酸-艾沙托立宾组分过#30目筛(约430μ至约655μ)。将普流罗尼F-68(由Lenexa，KS的JRHBiosciences，Inc.生产)表面活性剂过#20目筛(约457μ至约1041μ)。将普流罗尼F-68表面活性剂和0.5kgs交联羧甲基纤维素钠装入16qt.双筒翻滚混合器(twin shell tumble blender)中并混合约5分钟。然后将混合料转入3立方英尺的双筒翻滚混合器中，加入微晶纤维素并混合约5分钟。加入化合物并另外混合25分钟。将预混合物通过具有锤磨机的滚筒压紧器，所述的锤磨机连接在滚筒压紧器的排出位置并返回至翻滚混合器。将剩余的交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁加入翻滚混合器中，混合约3分钟。在旋转式压片机上将最终混合物压制成250mg/片(200,000片批量容量)。

实施例：粘膜组合物

通过在配有高剪切混合器的密封不锈钢容器中合并艾沙托立宾和12.6kg部分的三氯一氟甲烷来制备浓缩物。混合进行约20分钟。然后在密封容器内如下制备批量混悬液：将所述浓缩物与平衡量的抛射剂在批量产品罐中合并，所述产品罐的温度控制为21至27℃，压力控制为2.8至4.0BAR。将具有计量阀的17ml气雾剂容器设计成提供100次本发明组合物的吸入。每个容器中的配料量如下：

缬氨酸-艾沙托立宾      0.0120g

三氯一氟甲烷           1.6960g

二氯二氟甲烷           3.7028g

二氯四氟乙烷           1.5766g

总计                   7.0000g

实施例：静脉内组合物

通过用适宜的液体介质、例如注射用水(WFI)或5％葡萄糖溶液重构本发明的化合物来制备静脉内制剂。可以通过用适量体积的液体介质重构适量的本发明化合物获得所需浓度的静脉内制剂。所需浓度的静脉内制剂为需要静脉内药物制剂的患者、优选哺乳动物、更优选人提供了治疗有效量的本发明化合物，维持了患者中本发明化合物的治疗有效水平。治疗有效的剂量取决于静脉内制剂递送至患者的速率以及静脉内制剂的浓度。例如，含有组合物的1支小瓶(例如每支小瓶50mg本发明的化合物)用5％葡萄糖溶液(每支小瓶14ml5％葡萄糖溶液)重构，产生总计25mL溶液。将重构的溶液掺入输液袋中的葡萄糖溶液，适量至50mL，得到适于静脉内输注施用的含有1mg/ml本发明化合物的溶液。本发明化合物在输液袋中的液体介质中的优选浓度为约0.001至约3mg/ml，优选约0.75至约1mg/ml。

可以理解上述描述其实质是示例性的和解释性的，用以解释本发明及其优选实施方案。通过常规的实验，本领域技术人员将认识到不背离本发明宗旨的明显变通和变型。因此，本发明不意欲通过上述描述而是通过随后的权利要求及其等同物来定义。

Claims (20)

1.式I化合物或其可药用盐或溶剂化物：

R^1a、R^1b和R^1c独立地为H、-C(O)R³、外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CH₂NHR⁴、-C(O)CH(C_1-6烷基)NHR⁴，或者R^1b和R^1c共同为-C(O)-，它与氧原子一起形成5-元碳酸酯环；

R²为H或OR⁵；

R³为C_1-18烷基；

R⁴为H、-C(O)CH(C_1-6烷基)NH₂或-C(O)CH(CH₂-芳基)NH₂；

R⁵独立地为H、C_1-6烷基、C_3-7链烯基、C_3-7炔基、-(CR⁷R⁸)_t(C₆-C₁₀芳基)、-(CR⁷R⁸)_t(C₃-C₁₀环烷基)、-(CR⁷R⁸)_t(C₄-C₁₀杂环)、-(CR⁷R⁸)_t＞1OH、-(CR⁷R⁸)_t＞0CO₂C_1-18烷基和-(CR⁷R⁸)_t＞0N(R⁹)CO₂C_1-18烷基和SO₂(芳基)，其中t为0-6的整数，另有说明除外，且其中上述基团的烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基和杂环部分任选被取代基取代，所述的取代基独立地选自卤素、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、羟基、C₁-C₆烷氧基、-NH₂、-NH-烷基、-N(烷基)₂、-NH-芳基、-N(烷基)(芳基)、-N(芳基)₂、-NHCHO、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-N(烷基)C(O)H、-N(烷基)C(O)烷基、-N(芳基)C(O)H、-N(芳基)C(O)烷基、-NHCO₂烷基、-N(烷基)CO₂烷基、-NHC(O)NH₂、-N(烷基)C(O)NH₂、-NHC(O)NH-烷基、-NHC(O)N(烷基)₂、-N(烷基)C(O)NH-烷基、-N(烷基)C(O)N(烷基)₂、-NHSO₂-烷基、-N(烷基)SO₂-烷基、-C(O)烷基、-C(O)芳基、-OC(O)烷基、-OC(O)芳基、-CO₂-烷基、-CO₂-芳基、-CO₂H、-C(O)NH₂、-C(O)NH-烷基、-C(O)N(烷基)₂、-C(O)NH-芳基、-C(O)N(芳基)₂、-C(O)N(烷基)(芳基)、-S(O)烷基、-S(O)芳基、-SO₂烷基、-SO₂芳基、-SO₂NH₂、-SO₂NH-烷基和-SO₂N(烷基)₂；

R⁷和R⁸独立地为H、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基或C₂-C₆炔基；且

R⁹为H、C_1-6烷基或-CH₂-芳基；

条件是R⁵不为-CH₃，并且进一步的条件是当R²为H时，R^1a、R^1b和R^1c中至少一个不为H。

2.权利要求1所述的化合物或可药用盐或溶剂化物，其中R²为OR⁵。

3.权利要求1所述的化合物或可药用盐或溶剂化物，其中：

R^1a、R^1b和R^1c独立地为H、-C(O)R³、外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CH(C_1-6烷基)NH₂；

R²为OR⁵；

R³为C_1-18烷基；

R⁵独立地为C_1-6烷基、C_3-7链烯基、C_3-7炔基、-(CR⁷R⁸)_t(C₆-C₁₀芳基)、-(CR⁷R⁸)_t(C₄-C₁₀杂环)和-(CR⁷R⁸)_t＞0N(R⁹)CO₂C_1-18烷基，其中t为0-4的整数，另有说明除外，且其中上述基团的烷基、链烯基、芳基和杂环部分任选被1-3个取代基取代，所述的取代基独立地选自卤素、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、羟基、C₁-C₆烷氧基、-CO₂-烷基、-CO₂-芳基、-OC(O)-烷基和-OC(O)芳基；

R⁷和R⁸独立地为H、C₁-C₆烷基或C₂-C₆链烯基；且

R⁹为H、-CH₃或-CH₂-CH₃。

4.权利要求2所述的化合物或可药用盐或溶剂化物，其中：

5.权利要求1所述的化合物或可药用盐或溶剂化物，其中R²为H。

6.权利要求5所述的化合物或可药用盐或溶剂化物，其中：

R^1a、R^1b和R^1c独立地为H、-C(O)R³、外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CH(C_1-6烷基)NH₂；且

R³为C_1-18烷基。

7.权利要求5所述的化合物或可药用盐或溶剂化物，其中：

R^1a、R^1b和R^1c独立地为H、-C(O)R³、外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CH(CH(CH₃)₂)NH₂；且

R³为CH₃。

8.权利要求5所述的化合物或可药用盐或溶剂化物，其中：

R^1a、R^1b和R^1c独立地为H或-C(O)R³；且

R³为CH₃。

9.权利要求5所述的化合物或可药用盐或溶剂化物，其中：

R^1a为H且R^1b和R^1c为-C(O)R³；且

R³为CH₃。

10.化合物或其可药用盐或溶剂化物，选自：

和

11.化合物或其可药用盐或溶剂化物，包括：

12.药物组合物，包含可药用载体和权利要求1的化合物或其可药用盐或溶剂化物。

13.权利要求12所述的药物组合物，其中化合物选自：

和

14.权利要求12所述的药物组合物，其中化合物为：

15.调节患者免疫细胞因子活性的方法，该方法包括：对该患者给予治疗或预防有效量的权利要求1的化合物或其可药用盐或溶剂化物。

16.权利要求15所述的方法，其中所述的化合物选自：

和

17.权利要求15所述的方法，其中所述的化合物为：

18.治疗患者丙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括：对该患者给予治疗或预防有效量的权利要求1的化合物或其可药用盐或溶剂化物。

19.权利要求18所述的方法，其中所述的化合物选自：

和

20.权利要求18所述的方法，其中所述的化合物为：

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