CN1868502A - 一种用于治疗类风湿性关节炎的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了药物组合物，尤其是一种中药组合物。该药物组合物是由丁公藤、羌活、独活、防己、延胡索、丹参等原料药，按照一定工艺制备而成。该药物组合物对类风湿性关节炎有较好的治疗效果。本发明还公开了该药物组合物的制备方法。

Description

一种用于治疗类风湿性关节炎的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种用于治疗风湿痹痛的药物组合物及其制备方法。

背景技术

类风湿性关节炎(简称RA)是一种严重影响人体健康的慢性自身免疫疾病，也是一种常见病，被视为影响人类健康的五大疾病(心血管病、关节炎病、阿尔茨海默病、癌症及爱滋病)之一。数以百万计的病人因为患此病而丧失生活和工作能力。据世界卫生组织提供的统计结果，全球约有1％的人患有类风湿性关节炎病，其中我国患者就达1000多万人。

目前的类风湿性关节炎的治疗手段较为有限，临床上用于治疗类风湿性关节炎的药物包括化学药和中成药，其中化学药主要包括三大类：一为非甾体抗炎药；二为肾上腺皮质激素；三为慢作用的抗风湿药。以上所述药物均有不同程度的副作用；中药在治疗风湿痹痛方面虽也有效果，但临床上用于治疗风湿痹痛的中成药中多数都含有马钱子，而马钱子有较大的毒性，不宜长时间服用。本发明的目的在于提供一种副作用小且在治疗类风湿性关节炎方面有较好疗效的中药组合物。通过药理药效和新药的临床研究验证，证明本发明的中药组合物对寒湿阻络型的风湿痹痛具有较好的临床疗效。本发明的中药组合物的胶囊已通过新药的临床验证，被国家批准为中药新药，通过国家相关卫生部门的审批。因本品在临床上疗效确切，所以市场上销路较好，取得了较好的经济效益和社会效益。到目前为止，本发明的药物组合物及其制剂并未有公开的相关的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种副作用小，可长期服用、疗效好的用于治疗风湿痹痛特别是寒湿阻络型类风湿性关节炎的中药组合物。

本发明人经反复研究，并通过动物和临床试验的反复验证，终于得出各原料药的配比范围及最佳配比，从而完成了本发明。

本发明的药物主要由以下几味药组成：丁公藤5-7份、羌活3-5份、独活5-7份、防己3-5份、延胡索3-5份、丹参3-5份。

本发明的药物优选组成比例为：丁公藤311份、羌活222份、独活311份、防己222份 延胡索222份、丹参222份。

本发明的目的还在于提供一种上述药物组合物的制备方法。

本发明的药物组合物可采用药剂学上常规方法制成各种口服制剂，如胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、浓缩丸、口服液，优选剂型为胶囊剂。

本发明的胶囊剂制备方法如下：

原料药加50％-90％乙醇加热提取2-3次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，并减压浓缩成稠膏，低温干燥成干浸膏，粉碎，得到药粉，然后将药粉填入囊壳，制成胶囊剂。

经过一步筛选，得到最优的前处理工艺为：原料药加70％乙醇加热提取3次，第1、2次各1.5小时，第3次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，并减压浓缩至60℃时相对密度为1.30-1.35稠膏，低温干燥成干浸膏，粉碎，得到药粉，并将药粉填入囊壳制成胶囊剂。

发明人还曾尝试在药粉中加入羧甲基淀粉钠以及适量硬脂酸镁和微粉硅胶，混合均匀后，压制成片；也可以加入适量糊精和蔗糖，压成颗粒剂。从实现结果可以判定，使用以上药粉，选择药剂学中常用的辅料，就可以制各种常用口服制剂；并且使用的辅料也并不局限于羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、微粉硅胶、糊精和蔗糖，只要能达到相同效果的，均在本发明保护范围内。

具体实施方式：

本发明药物具有祛风除湿、温经止痛，活血通络、免疫调节作用，在临床上用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎等疾病具有较好疗效。下面通过具体的实验例和临床病例来说明本发明的疗效。实验中所用药物藤络宁是按本发明最优配比和最佳制备方法制得。

祛风除湿作用

藤络宁对大鼠佐剂性关节炎的抗炎作用

试验药物

阿斯匹林：市售，本实验中作为阳性对照药，实验时用生盐水配成混悬液使用。厂家：Sigma公司；

卡介苗：上海生物制品研究所，50μg/支，实验时用石蜡油配成混悬液使用。批号930501；

液体石蜡油：医用，使用时高压灭菌，上海大场化工厂，批号830510。

受试药物

名称及性状  藤络宁，棕色粉末

提供单位  本校植化教研室

批号  930423

含量  1克粉末相当于5克原药材

溶剂及配制方法  用生理盐水配成不同浓度的混悬液

动物

SD大鼠，由上海市计划生育科学研究所动物中心提供。合格证号No.0000189。

体重  200～280g

性别  雄性

各组动物数  10支

试验方法选择  佐剂性关节炎法

试验主要步骤  大鼠40只，分为4组，每鼠右后足垫id福氏完全佐剂(灭活的卡介苗10mg/ml)0.5ml。各组致敏同时立即灌胃给药，连续给药7天，每日1次。用排水法在致敏前及致敏后(致敏后每隔1天)测量大鼠左右后足垫体积，测定至致敏后21天。

动物给药后反应

观察指标  以给药前后左、右足排水量的变化作为关节肿胀程度，计算并比较各组肿胀率，同时，注意大鼠尾部是否发生环状结节。

观察时间  致敏后21天

剂量设置  设2个剂量组，剂量分别为504(50.4％)和1008(10.08％)mg/kg。

给药方法

途径  ig，1ml/100g

给药次数  给药7天，每天1次

试验对照

空白对照  生理盐水

阳性对照  阿斯匹林100mg/Kg

试验结果  各组发生环状结节情况见表1。从实验结果可见，大鼠致炎后48小时右足的肿胀即达峰值，后在9天内逐渐好转，第11天又再度肿胀。从第7天开始其对侧足(即未注射佐剂的左足)开始肿胀。在第13天左右个别大鼠尾部出现突出“关节炎”小结节。在给药组，小剂量(540mg/Kg/日)，相当于人临床用量的9倍)对大鼠佐剂性关节炎原发病变有抑制作用，对多发性关节炎也有抑制作用；大剂量(1008mg/Kg/日，相当于人临床剂量的18倍)最为明显，自开始用药起即对大鼠佐剂关节炎的原发病变和多发性关节炎者有非常明显的抑制作用。表明随着藤络宁剂量的增加抑制作用表现得更为明显。与阿斯匹林相比，100mg/Kg/日的阿斯匹林的效果与1008mg/Kg/日的藤络宁作用相似。

                   表1  藤络宁对大鼠佐剂性关节炎环状结节的影响

组别	剂量(mg/Kg)	动物数	结节发生动物数	结节发生率(％)
					生理盐水阿斯匹林藤络宁藤络宁	10ml/Kg1005041008	10101010	6022	6002020

试验结论：藤络宁504mg/Kg/日(相当于人临床用量的9倍)即对大鼠佐剂性关节炎模型中的原发病变和继发性慢性关节炎表现有一定的抑制作用，并随剂量增加而抑制作用明显，最佳剂量为1008mg/Kg/日(相当于人临床用量的18倍)。

二、湿经止痛作用

1.用热板法测藤络宁对小鼠的镇痛作用

试验药物理  阿斯匹林：市售，本实验中作为阳性对照药，实验时用生理盐水配成混悬液使用。厂家：Sigma公司；

受试药物

名称及性状  藤络宁，棕色粉末

提供单位  本校植化教研室

批号  930423

含量  1克粉末相当于5克原药材

溶剂及配制方法  用生理盐水配成不同浓度的混悬液

动物

昆明种小鼠，由第二军医大学动物中心提供。动物合格证号28-49号。

体重  18-25g

各组动物数  10只

试验方法选择  热板法

试验主要步骤  将100多只小鼠逐只放至55？.5℃的热板上，以出现舐后足反应为观察指标，测定并记录每只小鼠的痛阈，在30秒内出现痛阈反应者选出备用，隔3分钟后用同样条件再测一次，与第一次测得的数值一起求平均值作为正常痛阈.选出50只合格小鼠，随机分5组，给药，测痛阈。

若放入热板后30秒钟仍无反应者，痛阈按60秒计算；若给药后痛阈值低于正常值，则痛阈提高百分率为0。用t检验检查组间差异的显著性。

动物给药反应

定量观察指标  出现舐足反应的时点

观察时点  给药后30′、60′、90′、120′和150′

剂量设置  共分2个剂量组，每组10只，分别灌服藤络宁1232(12.32％)和848(18.48％)mg/Kg。

给药方法

途径  ig，0.1ml/10g

给药次数  1次

试验对照

空白对照  生理盐水

阳性对照  阿斯匹林200mg/Kg

试验结果  结果见表2。结果表明藤络宁在人临床用量的22～33倍有不同程度的镇痛作用，与阿斯匹林相比，在小鼠灌服1232mg/Kg的藤络宁与灌服200mg/Kg的阿斯匹林镇痛效果相当。

表2  藤络宁对小鼠热板法的镇痛作用(热板法以痛阈提高百分率表示)(X±S)

组别	剂量mg/Kg	体重g	痛阈提高百分率(％)
								30′	60′	90′	120′	150′
			生理盐水阿斯匹林藤络宁藤络宁	10ml/Kg20012321848	20±320±220±220±2	19±11148±102**77±51**117±109**	19±10132±118*67±27**99±39**						16±10148±105**95±44**147±107**	13±8180±113136±106**122±106**	22±14159±115**109±80**176±105**

与对照组比较*P＜0.05  **P＜0.01

用醋酸扭体法测藤络宁对小鼠的镇痛作用

试验药物

冰醋酸：分析纯，上海试剂一厂，批号920723。

阿斯匹林：市售，本实验中作为阳性对照药，实验时用生理盐水配成混悬液使用。厂家：Sigma公司；

受试药物

名称及性状  藤络宁，棕色粉末

提供单位  本校植化教研室

批号  930423

含量  1克粉末相当于5克原药材

溶剂及配制方法  用生理盐水配成不同浓度的混悬液

动物

昆明种小鼠，由第二军医大学动物中心提供。合格证号28-49。

体重  18-25g

性别  雌雄兼有

各组动物数  12只，雌雄各半

试验方法的选择  醋酸扭体法

试验主要步骤  健康小鼠60只，随机分成5组，每组12只，雌雄各半。各组给药后45分钟，腹腔注射0.7％的醋酸10ml/kg，5分钟后开始记录10分钟内各鼠的扭体次数。用t检验检查组间差异的显著性。

动物给药后的反应，

定量观察指标  扭体次数。扭体反应的标准为腹部内凹，后腿伸张，臀部高起。

观察时间  10分钟

剂量设置  设2个剂量组，剂量分别为1232(12.32％)和2464(24.64％)mg/Kg。

给药方法

途径  ig，0.1ml/10g

给药次数  1次

试验对照

空白对照  生理盐水

阳性对照  阿期匹林200mg/Kg

试验结果：结果见表3。结果表明小鼠灌服藤络宁1232mg/Kg(相当于人临床用量的22倍)即可抑制小鼠腹腔注射醋酸产生的扭体反应，与阿斯匹林相比，约2464mg/Kg的藤络宁用量与100mg/Kg阿斯匹林产生的效应相当。

表3  藤络宁对小鼠腹腔注射0.7％醋酸产生扭体反应的抑制作用(X±S)

组别	剂量(mg/Kg)	体重(g)	扭体次数(次/只/10分钟)
				生理盐水阿斯匹林藤络宁藤络宁	10ml/Kg10012322464	22.2±1.122.1±0.922.4±1.222.7±1.6	27.75±7.9616.17±7.53**21.42±5.26*18.08±5.82**

与对照组相比*P＜0.05  **P＜0.01

试验结论  藤络宁对小鼠热板法及化学物质引起的疼痛都有明显的镇痛作用，但藤络宁所需镇痛剂量与阿斯匹林相比则要大得多，阿斯匹林200mg/Kg(相当于人临床解热镇痛剂量的8.9倍)即可发生明显的镇痛作用；而藤络宁1232mg/Kg(相当于人临床用量的22倍)对热板所致疼痛有镇痛作用，对化学刺激有显著的镇痛作用，并且呈剂量依赖性。

三、活血通络作用

1.藤络宁对二甲苯引起的鼠耳肿胀的影响

试验药物

阿斯匹林：市售，本实验中作为阳性对照药，实验时用生理盐水配成混悬液使用。厂家：Sigma公司；

二甲苯：分析纯，上海花桥化工厂，批号：910301。

受试药物

名称及性状  藤络宁，棕色粉末

提供单位  本校植化教研室

批号  930423

含量  1克粉末相当于5克原药材

溶剂及配制方法  用生理盐水配成不同浓度的混悬液

动物

昆明种小鼠，由第二军医大学动物中心提供。合格证号28-49。

体重  18-25g

性别  雄性

各组动物数  12只

试验方法选择  二甲苯法

试验主要步骤  健康小鼠48只，随机分成5组，每组12只。各组给药30分钟后，用100％二甲苯涂于小鼠右耳前后两侧，每鼠约0.02ml/耳。隔3.5小时，将小白鼠颈椎脱臼致死，自耳廓基线剪下两耳，用8mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，扭力天平称重。

动物给药后反应

观察指标  每鼠右耳片重量减去左耳片重即为肿胀度。

观察时间  3.5小时

剂量设置  设2个剂量组，藤络宁的给药量分别为1232(12.32％)和2464(24.64％)mg/Kg。

给药方法

途径  ig，0.1ml/10g

给药次数  1次

试验对照

空白对照  生理盐水

阳性对照  阿期匹林200mg/Kg

试验结果  结果见表4。结果表明藤络宁在相当于人临床用量的22倍时即对小鼠具有抗急性炎症作用，随着剂量的增加，作用增强。小鼠灌服1232mg/Kg的藤络宁与灌服200mg/Kg阿斯匹林产生作用相当。

表4  藤络宁对小鼠二甲苯致炎耳肿胀的作用(X±S)

组别	剂量(mg/Kg)	体重(g)	肿胀度(mg)
				生理盐水阿斯匹林藤络宁藤络宁	10ml/Kg20012322464	25.4±2.825.6±3.223.5±2.624.9±2.3	9.28±2.816.58±3.18*7.25±1.82*5.50±3.03**

与对照组比较*P＜0.05  **P＜0.01

试验结论：藤络宁1232mg/Kg(相当于人临床用量的22倍)对小鼠由二甲苯引起的急性炎症有明显的抗炎作用，并随着剂量的增加而增加。

2.藤络宁结大鼠肉芽肿的抑制作用

试验药物

阿斯匹林：市售，本实验中作为阳性对照药，实验时用生理盐水配成混悬液使用。厂家：Sigma公司；

安定注射液：10mg/2ml，上海海普药厂，批号：920806。

盐酸氯胺酮注射液：0.1g/2ml，上海第一制药厂，批号：901201。

受试药物

名称及性状  藤络宁，棕色粉末

提供单位  本校植化教研室

批号  930423

含量  1克粉末相当于5克原药材

溶剂及配制方法  用生理盐水配成不同浓度的混悬液

动物

SD大鼠，由上海市计划生育科学研究所动物中心提供。合格证号No.0000189。

体重  150～250g

性别  雄性

各组动物数  10只

试验方法选择  肉芽肿法

试验主要步骤  健康大鼠40只，随机分成4组，每组10只。安定(10mg/2ml)0.1ml加氯胺酮(100mg/2ml)腹腔注射麻醉后，无菌操作下，左右腋下各埋下一个20mg已消毒干燥的棉球(高压灭菌，加入氨苄青霉素1mg/0.1ml/个，50℃烘箱烤干)，肌肉注射青霉素10万单位。于当日大鼠苏醒后即开始各组给药，连续7天，第八天颈椎脱臼处死大鼠，剥取肉芽组织，分离脂肪组织，放在60℃烘箱内干燥至恒重，冷却后称重，减去原棉球重量，基差为肉芽肿重量。

动物给药后反应

观察指标  肉芽肿重量mg/100g体重值

观察时间  7天

剂量设置  设2个剂量组，藤络宁的给药量分别为1008(10.08％)和1344(13.44％)mg/Kg。

给药方法

途径  ig，1ml/100g

给药次数  每天1次，共给7天

试验对照

空白对照  生理盐水

阳性对照  阿期匹林100mg/Kg

试验结果：结果见表5。结果表明藤络宁自剂量1344mg/Kg/日(相当于人临床用量的24倍)起对棉球引起的大鼠肉芽肿有明显的抑制作用，并且随着剂量的增加，抵制作用增强。100mg/Kg/日的阿期匹林作用约与1200mg/Kg/日的藤络宁产生的效应类似。

表5  藤络宁对大鼠棉球肉芽肿的作用(X±S)

组别	剂量(mg/Kg)	体重(g)	肉芽肿重量(mg)：100g体重(g)
				生理盐水阿斯匹林藤络宁藤络宁	10ml/Kg10010081344	174.6±38.3204.3±29.0192.3±21.0272.9±20.0	101.8±40.968.3±21.7*70.5±20.4*55.4±13.0**

与对照组比较*P＜0.05  **P＜0.01

试验结论：藤络宁自剂量1008mg/Kg/日(相当于人临床用量的22倍)起对大鼠由棉球引起的慢性炎症有明显的抗炎作用，并且随着剂量的增加而增加。

四.免疫调节作用

1.藤络宁对小鼠产生IL-1的影响

试验药物

阿斯匹林  市售，本实验中作为阳性对照药，实验时用生理盐水配成混悬液使用。厂家：Sigma公司；

丙二醇：分析纯，上海化学试剂厂，批号：870711；

培养基：RPMI-1640，GIBCO，14072USA，内含15％小牛血清、巯基乙醇、Hepes等：

水解乳蛋白：上海医药公司，批号：921203；

脂多糖(LPS)：大肠杆菌111-B4，Sigma产品，批号：17F-4019；

刀豆球蛋白：Sigma产品

MTT：Fluka产品

受试药物

名称及性状  藤络宁，棕色粉末

提供单位  本校植化教研室

批号  930423

含量  1克粉末相当于5克原药材

溶剂及配制方法  用生理盐水配成不同浓度的混悬液

动物

昆明种小鼠，由第二军医大学动物中心提供。合格证号28-49。

体重  18-21g

性别  雌雄兼有

各组动物数  10只

试验方法选择  胸腺细胞增殖反应测定法

试验主要步骤  健康小鼠40只，雌雄不拘，随机分成4组，每组10只。各组连续给药7天，末次给药同时腹腔内注射0.5％水解蛋白1.5ml。24小时后处死动物，在无菌条件下用Hanks液洗出腹腔细胞，调整细胞浓度为2×10⁶/ml，在24孔细胞培养板上每孔加2ml细胞，37℃CO₂培养箱中培养2小时，吸出上清液，弃去未粘附细胞，粘壁细胞即为巨噬细胞单层，每孔加1mlRPMI-1640培养基，LPS10mg/ml，培养24小时后吸出上清液，以0.22μm微孔滤膜过滤。置-20℃冰箱保存。取同系小鼠3只，脱颈椎处死，无菌操作取胸腺剪碎后用不锈钢网过滤制备胸腺细胞，调细胞浓度为2×10⁷/ml，在96孔培养板中每加100μl细胞、ConA3μg/ml，每MTT 20μl/孔，37℃CO₂条件下5小时，吸去上清液，每孔加酸化异丙醇100μl。1小时后，用全自动酶标仪测定，并打出结果。

动物给药后反应

观察指标  OD值

剂量设置  设2个剂量组，藤络宁的给药量分别为1232(12.32％)和2464(24.64％)mg/Kg/日。

给药方法

途径  ig，0.1ml/10g

给药次数  给药7天，每天1次，

试验对照

空白对照  生理盐水

阳性对照  阿期匹林100mg/Kg

试验结果  结果见表6。结果表明一定剂量范围内藤络宁及阿期匹林均有不同程度的促进IL-1生成的作用。

表6  ig藤络宁对小鼠产生IL-1的影响

组别	剂量(mg/Kg)	动物数	OD值(X±S)
				生理盐水阿斯匹林藤络宁藤络宁	10ml/Kg10012322464	10101010	0.230±0.0270.449±0.065**0.324±0.044**0.366±0.056**

与对照相比**P＜0.01

试验结论：藤络宁及阿斯匹林均有不同程度的IL-1诱生作用，而IL-1是一种单核巨噬细胞来源的细胞因子，在免疫应答与炎症的分子调节网络中起着重要的作用。因此为藤络宁用于治疗类风湿关节提供了实验依据。

藤络宁胶囊治疗类风湿性关节炎临床总结

按《中药新药临床研究指导原则》的要求，藤络宁胶囊由山东中医药大学附属医院、南京中医药大学附属医院、南京军区总院、第二军医大学长海医院、上海光华医院4家医院以对照组的形式进行了寒湿阻络型类风湿性关节炎的临床验证，共观察临床病例450例，结果表明，本品治疗类风湿性关节炎的总有效率为86.67％，提示藤络宁胶囊对类风湿性关节炎特别是寒湿阻络型类风湿性关节炎有较好的临床疗效。安全性检测结果表明，治疗前后血、便常规和心、肝、肾功能检查均未提示本品对心、肝、肾功能有损害，提示本品是安全有效可靠的。

下面以实施例详细说明本发明的技术方案。

实施例1：胶囊剂

取原料：丁公藤311g  羌活222g  独活311g  防己222g  延胡索222g  丹参222g

原料用70％的乙醇加热回流提取三次，第一、二次各1.5小时，第三次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30-1.35(60℃)的清膏，低温干燥，粉碎，混匀，装入胶囊，即得。

实施例2：片剂

取原料：丁公藤500g  羌活300g  独活500g  防己300g  延胡索300g  丹参300g

原料用60％的乙醇加热回流提取二次，每次各1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30-1.35(60℃)的清膏，低温减压干燥成干浸膏，加入淀粉、糊精制粒，干燥，再加入羧甲基淀粉钠以及适量硬脂酸镁和微粉硅胶，混匀，压片，包衣，即得。

实施例3：颗粒剂

取原料：丁公藤700g  羌活500g  独活700g  防己500g  延胡索500g  丹参500g

原料用90％的乙醇加热回流提取三次，每次各1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃)的清膏，加入蔗糖粉1份、糊精0.7份，搅匀，制粒，干燥，即得。

Claims (10)

1.一种治疗风湿痹痛的药物，其特征在于它主要是由下列重量份的原料药制成：丁公藤5-7份、羌活3-5份、独活5-7份、防己3-5份、延胡索3-5份、丹参3-5份。

2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于各原料药的用量为：丁公藤311份、羌活222份、独活311份、防己222份延胡索222份、丹参222份。

3.根据权利要求1或2所述的药物，其特征在于其原料药中的延胡索为醋制的延胡索。

4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于采用制剂学上的常规方法制成常规剂型。

5.根据权利要求4所述的药物，其剂型为胶囊剂、片剂、浓缩丸、颗粒剂、口服液或滴丸。

6.根据权利要求5所述的药物，其剂型为胶囊剂。

7.根据权利要求1、2或3所述的药物的制备方法，其特征在于包含以下步骤：原料药加50％-90％乙醇加热提取2-3次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，并减压浓缩成稠膏，低温干燥成干浸膏，粉碎，得到药粉。

8.根据权利要求7所述的药物的制备方法，其特征在于包含以下步骤：原料药加70％乙醇加热提取3次，第1、2次各1.5小时，第3次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，并减压浓缩成稠膏，低温干燥成干浸膏，粉碎，得到药粉。

9.根据权利要求7或8所述的药物的制备方法，其特征在于将最后得到的药粉，加入药剂学上可用的辅料或者不加辅料，制成得需剂型。

10.权利要求1、2或3所述药物在制备用于治疗风湿痹痛疾病药物中的用途，主要治疗寒湿阻络型类风湿性关节炎。