CN1846725A - 甘草黄酮在制备治疗炎症性肠病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及甘草黄酮在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。甘草黄酮可通过抑制炎症反应及抗氧化作用达到抗炎症性肠病的作用。用甘草黄酮制备的抗炎症性肠病的药物对炎症性肠病具有疗效好，安全范围大等优点，可以作为抗人炎症性肠病的药物。
Description
技术领域
本发明涉及甘草黄酮在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。
背景技术
炎性肠病(Inflammatory bowel disease IBD)是一种困扰医生和科学家多年的顽疾，主要包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)和克隆氏病(Crohn’s disease，CD)两种，前者是一种慢性非特异性结肠炎症，重者发生溃疡甚至癌变，病变主要累及结肠粘膜及粘膜下层，临床主要表现为腹泻、腹痛和粘液脓血便，后者病变可累及到胃肠道各部位，是一种慢性肉芽舯性炎症，呈阶梯性分布，临床主要表现为腹泻、腹痛、瘘管和不同程度的全身症状。第十届欧洲胃肠病学年会上，欧洲克隆氏病与炎性肠病联合会主席RodMitchell指出，目前在欧洲有100万IBD患者，在西方国家大部分地区溃疡性结肠炎发病率稳定，最高到10例/10万人口。而克隆氏病的发病率在过去30年升高了600％，我国发病率也呈明显的上升趋势，此病症可导致患者发生结直肠癌的风险显著升高，严重威胁人类的健康。尽管研究多年，人类目前仍然无法完全治愈该病。
目前常用的治疗药物为：(1)氨基水杨酸类：早在40年代就开始于IBD的治疗，效果较好的是水杨酸偶氮磺胺吡啶，但可造成急慢性肾中毒，副反应多，长期用药忠者难以耐受；(2)皮质类固醇类：1955年，Truelove应用强的松龙治疗UC取得良效，至今皮质类固醇类仍为治疗IBD的主药，对控制发作特别有效，对中重度患者和活动期病例亦然，但有明显的副作用，不易长期使用，停药后易复发；(3)免疫抑制剂：临床应用免疫抑制剂始于1962年，目前已成为治疗IBD的一种重要方法，常用药物包括嘌呤类药物、氨甲蝶呤及环孢菌素等，但可产生包括过敏及抑制造血等严重的不良反应。可见，研制新的安全、有效药物，对人类最终攻克这一顽症，有着重要的意义。我国传统的天然药物历经数千年临床，为寻找有效药物提供了丰富的药源，因此从天然，传统药物中筛选治疗炎症性肠病的药物不仅是可行的，而且可填补我国在这一领域的空白。
甘草黄酮目前主要应用于食品添加剂、保健品、化妆品等领域，对人体的安全范围极大，近来研究发现，甘草黄酮还具有抗氧化、抗肿瘤、抗HIV、保肝、抗胃溃疡、抗心律失常、治疗糖尿病等作用，但甘草黄酮防治炎症性肠病(IBD)的作用未见报道。
发明内容
本发明针对上述问题提供甘草黄酮在制备抗炎症性肠病药物中的应用，用甘草黄酮制备的抗炎症性肠病的药物，具有疗效确切，副作用少等特点。
本发明提供的技术方案是：甘草黄酮在制备抗炎症性肠病药物中的应用。
本发明经口及静脉注射给予甘草黄酮，一天一次，10天后，可使炎症性小鼠结肠脏器指数、结肠损伤系数明显降低，结肠MPO活性明显升高，脂质过氧化产物MDA明显降低，SOD活性及GSH含量明显升高，表明甘草黄酮可治疗炎症性肠病。
本发明经口给予甘草黄酮390mg/kg，一天一次，10天后，结肠系数下降25％、炎症评分级别下降3倍，MPO活性升高1.74倍。
本发明经注射给予甘草黄酮390mg/kg，一天一次，l0天后，结肠系数下降50.8％、炎症评分级别下降2.7倍，MPO活性升高2.53倍。
附图说明
附图为本发明甘草黄酮处理10天对炎症性肠病小鼠结肠损伤的保护作用图。
具体实施方式
本发明通过以下实施例作进一步说明
中医药学在治疗慢性、疑难疾病方面常能发挥重要作用，疗效好、特别是毒副作用小等特点。本发明选择甘草提取物-甘草黄酮作为抗炎症性肠病的药物，通过建立炎症性肠病的动物模型，探讨甘草黄酮对炎症性肠病的影响及药物作用机制。旨在选择一种抗炎症性肠病疗效确切、毒性小的药物。
本发明通过建立炎症性肠病动物模型等技术揭示了甘草黄酮对炎症性肠病的作用及机制。
材料与方法
药品及试剂 甘草黄酮，由平罗县乐夏甘草制品公司提供；美莎拉秦缓释颗粒剂(艾迪莎)，由法国爱的发制药集团提供；MPO检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供。牛血清白蛋白、DTNB及GSH标准品均由sigma公司提供。TBA、邻苯三酚、乙酸、乙醚等试剂均为市售分析纯试剂。
动物 健康成熟雄性昆明小鼠45只，体重18～22g，雌雄各半，由武汉大学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(鄂)2003-2004。小鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。
仪器：TG328A型分析天平，紫外分光光度计，高速匀浆器等。
实验方法
动物分组与处理：昆明小鼠随机分组：正常对照组(CON)，模型组(Model)，艾迪莎阳性药物对照组(ADS)，甘草黄酮口服组(GCHTP)，甘草黄酮注射组(GCHT-INJ)。艾迪莎组小鼠灌肠给予艾迪莎600mg/Kg，一日一次； 甘草黄酮口服组小鼠分别经口给予甘草黄酮390mg/Kg，一日一次；甘草黄酮注射组小鼠腹腔注射给予甘草黄酮390mg/Kg，一日一次；正常对照组和模型组小鼠经口给予等量的生理盐水，一日一次。给药7天后，除正常对照组外，其余各组均采用乙酸刺激造结肠炎模型，小鼠于第6日给药后禁食，次日给药后，乙醚吸入麻醉，用聚乙烯管给小鼠直肠注入乙酸，注入前先排清肠内大便，将聚乙烯管插入小鼠肛门约1.5cm，注入0.1ml6％的乙酸，1min后用等张生理盐水冲洗两次，让动物保持平躺，自然苏醒。正常对照组直肠注入等体积的生理盐水。各组小鼠持续给药至第10天，末次给药后24h，颈椎脱臼处死，冰上解剖，取全段结肠，称重，计算结肠脏器指数，进行结肠损伤指数(CMDI)评分。取结肠组织用Tris缓冲液制成5％的匀浆液，供检测MPO、MDA、SOD、GSH。
检测指标
结肠损伤指数(CMDI)：取全段结肠，沿肠系膜剪开肠腔，肉眼观察腹腔粘连及结肠溃疡、充血情况，按表1进行结肠损伤指数(CMDI)评分。
髓过氧化物酶(MPO)准确称取组织重量，按重量体积比为1∶19加入Tris缓冲匀浆液，高速匀浆后反复冻融，制成5％的肠匀浆液，Lowry法检测蛋白量。按MPO检测试剂盒严格操作。
脂质过氧化物酶(MDA)采用TBA比色法检测肠匀浆中MDA含量。
超氧化物歧化酶(SOD)采用邻苯三酚法检测肠匀浆中SOD活力。
谷胱甘肽(GSH)按GSH检测试剂盒，检测肠匀浆中GSH的含量。
表1.结肠损伤指数(CMDI)评分标准
| 大体形态 | 评分 |
| 腹腔粘连： | |
| 无粘连 | 0 |
| 轻度粘连 | 1 |
| 重度粘连 | 2 |
| 结肠溃疡及炎症： | |
| 无明显异常 | 0 |
| 结肠充血，无溃疡 | 1 |
| 充血，无溃疡，肠壁明显增厚 | 2 |
| 溃疡1处，不伴有充血或肠壁增厚(表面坏死) | 3 |
| 肠壁有出血点 | 4 |
| 溃疡1处，伴充血、炎症 | 5 |
| 溃疡2处，伴充血、炎症 | 6 |
| 溃疡2处以上 | 7 |
| 穿孔一处 | 8 |
| 穿孔多于1处 | 9 |
| 动物死亡 | 10 |
两项分数相加为总得分。
实验结果
1.甘草黄酮对炎症性肠病小鼠结肠损伤的保护作用
由附图可见，甘草黄酮经口和注射给药均可明显的保护乙酸导致的小鼠结肠损伤，模型组可见重度粘连，溃疡多于2处以上，评分级别7.5；阳性对照组可见一处溃疡，未见粘连，轻度红肿，评分级别2.5级；甘草黄酮口服组、甘草黄酮注射组评分级别分别为2.5级、2.8级，表明甘草黄酮口服给药及注射给药对炎症性肠病有明显的保护作用。结果见附图。
2.甘草黄酮对炎症性肠病小鼠结肠脏器系数、损伤系数、MPO活性的影响
可见甘草黄酮能明显减轻炎症性肠病小鼠结肠水肿，口服组、注射组肠脏器系数分别下降25％、50.8％，与阳性对照药的16.7％相比，效果更好；炎症评分级别分别降低3倍、2.7倍，与阳性对照药相似；可使MPO活性明显升高，口服组、注射组与模型组相比分别升高1.74倍、2.53倍，较阳性对照药升高的0.47倍相比作用更显著，进一步表明甘草黄酮对炎症性肠病的有益作用，结果见表2。
表.2甘草黄酮对炎症性肠病小鼠结肠脏器系数、损伤系数、MPO活性的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | 结肠系数(g/100g) | 炎症评分(级别) | MPO(U/mg.pro.) |
| 正常对照组 | 0.73±0.03 | 0±0 | 3.37±0.31 |
| 模型组 | 1.75±0.35** | 7.5±0.7** | 1.33±0.83** |
| 甘草黄酮口服组 | 1.40±0.05▲▲ | 2.5±0.71▲▲ | 3.64±1.74▲▲ |
| 甘草黄酮注射组 | 1.16±0.11▲▲ | 2.8±0.18▲▲ | 4.69±1.83▲▲ |
| 阳性对照组 | 1.50±0.03▲▲ | 2.5±0.71▲▲ | 1.95±0.15▲▲ |
与正常组相比**P＜0.01；与模型组相比▲▲P＜0.01
3.甘草黄酮对炎症性肠病小鼠结肠MDA、GSH含量及SOD活性的影响
与正常组相比，模型组结肠组织中MDA的含量显著升高(P＜0.01)，GSH含量及SOD活性显著下降；与模型组相比，甘草黄酮均可有效改善上述指标，且较阳性对照药效果更好，结果见表3。
表3甘草黄酮对炎症性肠病小鼠结肠MDA、GSH含量及SOD活性的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | MDA(nmol/mgpro.) | GSH(mg/mgpro.) | SOD(U/mgpro.) |
| 正常对照组 | 10.58±2.74 | 0.58±0.12 | 707±105 |
| 模型组 | 26.2±5.5** | 0.16±0.09** | 309±68** |
| 甘草黄酮口服组 | 6.04±0.88▲▲ | 0.32±0.02▲▲ | 425±12▲▲ |
| 甘草黄酮注射组 | 4.56±0.77▲▲ | 0.36±0.04▲▲ | 363±56▲ |
| 阳性对照组 | 14.29±1.77▲▲ | 0.37±0.03▲▲ | 338±15▲ |
与正常组相比**P＜0.01；与模型组相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01
实验结论
甘草黄酮能有效保护炎症性肠病小鼠结肠损伤，其机制可能与增强组织抗氧化能力有关，与目前主要治疗炎症性肠病的药物—艾迪莎相比，疗效更为显著。甘草黄酮目前主要为食品添加剂，长期应用显示其安全性好，毒副作用低。
Claims (1)
1.甘草黄酮在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。
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|---|---|---|---|
| CN 200610018384 CN1846725A (zh) | 2006-02-20 | 2006-02-20 | 甘草黄酮在制备治疗炎症性肠病药物中的应用 |
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Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1846725A true CN1846725A (zh) | 2006-10-18 |
Family
ID=37076606
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| CN 200610018384 Pending CN1846725A (zh) | 2006-02-20 | 2006-02-20 | 甘草黄酮在制备治疗炎症性肠病药物中的应用 |
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1846725A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101524398B (zh) * | 2009-04-07 | 2011-09-28 | 浙江大学 | 甘草黄酮的药物用途 |
| CN102302483A (zh) * | 2011-07-08 | 2012-01-04 | 中国科学院生物物理研究所 | 黄酮类小分子药物在抗炎及相关疾病中的应用 |
-
2006
- 2006-02-20 CN CN 200610018384 patent/CN1846725A/zh active Pending
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