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CN1662251B - 佐剂增强的免疫应用 - Google Patents

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CN1662251B CN038144425A CN03814442A CN1662251B CN 1662251 B CN1662251 B CN 1662251B CN 038144425 A CN038144425 A CN 038144425A CN 03814442 A CN03814442 A CN 03814442A CN 1662251 B CN1662251 B CN 1662251B
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Abstract

本发明提供了用于治疗特征在于存在病原细胞群体的病症的改进的方法。按照所述改进的方法，对患病宿主给予细胞-靶向的配体-免疫原或配体-半抗原复合物以便将宿主免疫反应导向具有所述配体可接近结合位点的病原细胞。所述方法包括如下步骤，对宿主给予配体-免疫原或配体-半抗原结合物组合物，所述组合物包含配体和免疫原或半抗原的复合物，其中免疫原/半抗原被宿主的内源性抗体识别或直接被宿主的免疫细胞识别。对所述方法的改进包括如下步骤，使用Tn1-偏向性佐剂来增强对结合细胞的配体-免疫原或配体-半抗原结合物的免疫反应。

Description

佐剂增强的免疫应用
发明领域 
本发明涉及用于治疗特征在于存在病原细胞群体的病症的改进的方法。更具体的，对患病宿主给予细胞-靶向的配体-免疫原或配体-半抗原复合物从而将宿主的免疫反应导向病原细胞。对所述方法的改进包括使用将免疫反应偏向TH1反应的佐剂从而增强针对免疫原的免疫反应 
发明背景 
哺乳动物的免疫系统提供了识别和消除肿瘤细胞、其它病原细胞和侵入性外来病原体的方式。虽然免疫系统正常情况下提供强大的抵御防线，但仍存在癌细胞、其它病原细胞或感染因子避开宿主免疫反应而增殖或保持伴发的宿主致病性的很多情况。化学治疗剂和放射治疗已被发展用于消除复制的新生物。然而，大多数(若非全部)目前可用的化学治疗剂和放射疗法具有不良副作用，这是因为这些疗法不仅破坏癌细胞，还作用于正常宿主细胞，如造血系统的细胞。而且，在已经产生了宿主抗药性的情况下化学治疗剂具有有限的功效。 
外源病原体仍可通过避开活性免疫反应或在药物治疗或在其它健康问题抑制宿主免疫系统的情况下在宿主体内增殖。虽然已经发展了很多治疗化合物，但很多病原体本身即具有或已经转变为对所述疗法的抗性。由于癌细胞和感染性生物体对治疗剂产生抗性的能力以及目前可用的抗癌药物的不良副作用，故此迫切需要发展特异性针对病原细胞群体且对宿主的毒性降低的新疗法。 
研究人员已经开发了通过将细胞毒害化合物特异性靶向所述细胞破坏癌细胞的治疗方法。这些方法使用与配体结合的毒素，所述配体与癌细胞特异性表达或过表达的受体结合从而试图将对正常细胞的毒性降到最小。已经发展了使用该方法的特定免疫毒素，包括针对病原细胞上特异性受体的抗体，所述抗体与毒素例如蓖麻毒蛋白，假单胞菌外毒素，白喉毒素和肿瘤坏死因子偶联。这些免疫毒物靶向存在由抗体识别的特异性受体的肿瘤细胞(Olsnes，S.，Immunol.Today，10，pp.291-295，1989；Melby，E.L.，Cancer Res.，53(8)， pp.1755-1760，1993；Better，M.D.，PCT公开号WO 91/07418，1991年5月30日公开)。 
另一种选择性靶定宿主体内的癌细胞或外源病原体的群体的方法是增强针对病原细胞的宿主免疫反应，由此避免使用同样表现出非依赖性宿主毒性的化合物。一种已经报道的免疫疗法策略是将抗体(例如，遗传工程化的多用途抗体)与肿瘤细胞表面结合从而在细胞表面呈现抗体的恒定区由此通过多种免疫系统介导的过程诱导对肿瘤细胞的杀伤。(De Vita，V.T.，Biologic Therapy of Cancer，2d ed.Philadelphia，Lippincott，1995；Soulillou，J.P.，美国专利5,672,486)。然而，该方法由于难以确定肿瘤特异性抗原而变得繁复。另一种依赖宿主免疫能力的方法是将抗T细胞受体抗体或或抗-Fc受体抗体靶向肿瘤细胞表面以便促进免疫细胞与肿瘤的直接结合(Kranz，D.M.，美国专利5,547,668)。基于疫苗的方法也已有描述，所述方法基于包含与细胞因子融合的抗原的疫苗，其中细胞因子修饰了疫苗抗原的免疫原性，因此，激发了针对病原因子的免疫反应(Pillai，S.，PCT公开号WO 91/11146，1991年2月7日公开)。该方法依赖已报道的免疫反应的间接调节。杀伤不需要细胞的另一方法是采用IL-2或与抗原偶联的抗胸腺细胞球蛋白的Fab片段以便消除不需要的T细胞；然而，根据已经报道的实验数据，所述方法显示出仅能消除靶细胞群体的50％，且会导致体内的非特异性细胞杀伤(即，还杀死了50％的非T细胞的外周血淋巴细胞(Pouletty，P.，PCT公开号WO97/37690，1997年10月16日公开)。因此，非常需要治疗特征在于感染宿主体内存在病原细胞群体的病症的疗法。 
免疫系统可表现出特异性和非特异性免疫，而特异性免疫由表面上显示针对特异性抗原的受体的B和T淋巴细胞介导。特异性免疫反应包括体液免疫(即，产生抗体的B细胞活化)，和细胞介导的免疫(即，T细胞活化，所述T细胞如细胞毒性T淋巴细胞，辅助性T淋巴细胞，包括TH1和TH2细胞和抗原呈递细胞)。TH1反应引发固定抗体的补体、细胞毒性T淋巴细胞活化和强迟发型超敏反应并且伴随IL-2，IL-12，TNF，淋巴毒素和γ-干扰素的生成。TH2反应伴随IgE，和IL-4，IL-5，IL-6，以及IL-10的生成。特异性免疫反应不仅包含特异性，还具有记忆性因此先前接触抗原的免疫细胞能在将来接触该抗 原时对相同抗原作出快速反应。 
佐剂是能激发免疫功能(例如通过增强抗原的免疫免疫性)的，或在给予抗原时给予或在抗原前给予的化合物或物质。佐剂可具有非特异性作用(激发对多种抗原的免疫反应)，或具有特异性作用(即，以抗原特异性模式激发免疫反应)。强化特异性免疫的佐剂可通过激发细胞-介导的免疫反应或体液反应或二者并存而发挥作用。激发细胞介导的免疫反应的佐剂可将免疫反应偏向TH1或TH2反应。激发体液免疫反应的佐剂可诱导生成根据所使用的佐剂而不同的抗体同种型模式。在这点上，不同佐剂能激发产生1.)不同抗体同种型，2.)各同种型抗体的不同水平，和3.)能激发具有不同亲和性的抗体的生成，根据所使用的佐剂最终导致分散的抗体群体。 
皂苷是广泛分布于高等植物和棘皮动物门的某些海洋元脊椎动物中的糖苷化合物(ApSimon等，Stud.Org.Chem.17：273-286(1984))。皂苷包括连接于一个或多个线性或分支糖链的苷元，其分子量为600至2000道尔顿或更高。皂苷已知具有佐剂活性。 
皂树皂苷是具有密切关联的O-酰化三萜苷结构的家族，其可从皂树皂苷Molina树的树皮中分离。皂树皂苷的功能已经得到详细的描述，已知其具有佐剂活性。皂树皂苷能激发细胞介导的免疫反应和体液免疫反应。皂树皂苷的三萜基团上的醛基负责诱导细胞介导的免疫，而皂树皂苷的糖部分能增强体液免疫。皂树皂苷通常可诱导强TH1反应。 
发明概述 
本发明提供了针对消除宿主中病原细胞群体的方法的改进。所述方法基于通过增加病原细胞的抗原性从而增高对病原细胞群体的内源性免疫反应介导的消除从而增加宿主免疫系统对病原细胞群体的识别和反应。按照该方法，对宿主给予配体-免疫原或配体-半抗原结合物以便与肿瘤细胞或病原生物体的表面结合而且所述结合物“标记”带有免疫原或半抗原的靶细胞群体的细胞，由此引发针对标记的细胞群体的免疫介导的反应。宿主中存在的或产生的抗体与免疫原或半抗原结合然后引发内源性免疫反应。可选地，所述免疫原或半抗原可直接被宿主中的免疫细胞识别。对所述方法的改进包括使用TH1-偏向性佐剂来增强针对免疫原/半抗原的免疫反应。 
所述方法包括给予配体-免疫原结合物或配体-半抗原结合物，其中所述配体能够在体内特异性结合病原细胞群体，而与配体结合的免疫原/半抗原能够被抗体识别或直接被宿主中的免疫细胞识别。通过将结合配体的免疫原/半抗原与受体、转运体或由病原细胞独特表达、过表达或优选表达的其它呈递于表面的蛋白结合而引导病原细胞的免疫系统介导的消除。由病原细胞独特表达、过表达或优选表达的呈递于表面的蛋白是提供选择性消除病原细胞手段的非病原细胞上不存在的或较少量存在的受体。 
靶向的病原细胞群体可以是癌细胞群体、感染病毒的内源细胞或外源生物体群体如细菌、支原体、酵母或真菌。抗体与结合于细胞的配体-免疫原或配体-半抗原结合物结合导致补体介导的细胞毒性，抗体-依赖性细胞介导的细胞毒性，抗体调理作用和吞噬作用，抗体诱导的受体群集信号细胞死亡或休眠或其它任何由抗体与结合于细胞的配体-免疫原或配体-半抗原结合物结合所激发的体液或细胞免疫反应。免疫反应还可涉及宿主免疫细胞对所述免疫原/半抗原的直接识别。 
至少一种其它治疗因子，例如免疫系统刺激剂、细胞杀伤剂、肿瘤透入增强剂、化学治疗剂、细胞毒害免疫细胞或抗微生物剂可给予宿主细胞以便增强疗效。在一个实施方案中，细胞毒害免疫细胞是分离的，体外扩增的，然后注射至宿主动物内的细胞毒害免疫细胞群体。在另一个实施方案中，使用免疫刺激剂，所述免疫刺激剂可以是白介素如IL-2、IL-12或IL-15或IFN如IFN-α、IFN-β或IFN-γ或GM-CSF。在另一个实施方案中，免疫刺激剂可以是包含细胞因子，如IL-2、IL-12或IL-15与IFN-α、IFN-β或IFN-γ或GM-CSF的组合或其任何有效组合或其它任何细胞因子有效组合的细胞因子组合物。 
因此，在一个实施方案中提供了在存在所述群体的预先免疫的宿主动物中增强对病原细胞群体的内源性免疫反应介导的特异性消除的方法，其中细胞群体中的细胞含有配体可接近的结合位点。所述方法包括给予所述宿主包含与所述配体结合的免疫原或半抗原的组合物的步骤，其中所述免疫原或所述半抗原被宿主中的内源性抗体识别或直接被宿主中的免疫细胞识别，所述改进包括用免疫原或免疫原性半抗原-载体结合物和TH1-偏向性佐剂预先免疫所述宿主从而引发预存免疫的步骤。 
在另一个实施方案中，提供了增强存在病原细胞群体的宿主动物中消除所述病原细胞群体的免疫反应的方法，其中所述病原细胞含有配体可接近的结合位点。所述方法包括给予所述宿主TH1-偏向性佐剂；和给予所述宿主包含与所述配体结合的免疫原的组合物的步骤。 
在另一个实施方案中提供了包含治疗有效量的TH1-偏向性佐剂和半抗原-载体结合物的组合物，其中所述半抗原选自荧光素和二硝基苯基。 
而在另一个实施方案中提供了包含治疗有效量的TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物的组合物。 
而在另一个实施方案中提供了包含TH1-偏向性佐剂和半抗原-载体结合物的组合物的药盒，其中所述半抗原选自荧光素和二硝基苯基。 
在另一个实施方案中提供了包含TH1-偏向性佐剂，半抗原-载体结合物和配体-半抗原结合物的药盒。可选地，所述药盒可包括TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物，或还可包含免疫原。 
附图简介 
图1显示了用皂苷佐剂(即，GPI-0100)配制的KLH-FITC所免疫的小鼠中抗-FITC总IgG和抗-FITC IgG2a反应。 
图2显示了具有已建立的腹膜内L1210A白血病的小鼠，用KLH-FITC/皂苷佐剂免疫随后注射PBS(对照)、IL2+IFN-α或叶酸盐-FITC+IL2+IFN-α的存活百分率。 
图3显示了具有已建立的腹膜内M109肿瘤的小鼠，用KLH-FITC/皂苷佐剂免疫随后注射PBS、IL2+IFN-α或叶酸盐-FITC+IL2+IFN-α的存活百分率。 
图4显示了具有早期腹膜内M109肿瘤的小鼠，用KLH-FITC/皂苷佐剂免疫随后注射PBS或叶酸盐-FITC的存活百分率。 
图5显示了对存在固定的腹膜内M109肿瘤的小鼠，用KLH-FITC/皂苷佐剂免疫随后注射PBS或叶酸盐-FITC的存活百分率。 
图6显示了用KLH-FITC/皂苷佐剂免疫随后注射PBS、IL2+IFN-α或叶酸盐-FITC+IL2+IFN-α的小鼠中内皮下M109肿瘤的瘤体积。 
图7显示了叶酸盐-FITC(EC17)的结构。 
图8显示了KLH-FITC(EC90)的结构。 
发明详述 
本发明提供了一种对消除宿主中病原细胞群体方法的改进。所述方法基于通过增加病原细胞的抗原性从而增高对病原细胞群体的内源性免疫反应介导的消除从而增加宿主免疫系统对病原细胞群体的识别和反应。按照所示方法，对宿主给予配体-免疫原或配体-半抗原结合物以便结合肿瘤细胞和病原微生物的表面且所述结合物“标记”带有免疫原或半抗原的靶细胞群体的细胞，由此引发针对标记的细胞群体的免疫介导的反应。宿主或宿主的免疫细胞中存在的或产生的抗体结合免疫原/半抗原然后引发内源性免疫反应。根据本发明对所述方法的改进包括使用TH1-偏向性佐剂增强针对免疫原/半抗原的免疫反应。 
改进的方法用于增强存在病原细胞群体的宿主动物中对病原细胞群体的内源性免疫反应介导的消除。本发明可应用于能导致多种病理状况例如癌和感染性疾病的病原细胞群体。因此，病原细胞群体可以是致瘤性(包括良性肿瘤和恶性肿瘤)的癌细胞群体，或其可以是非致瘤性的。癌细胞群体可自发产生或由例如存在于宿主动物生殖系中的突变或体细胞突变的过程产生，或可以是经由化学、病毒或放射而诱导的。本发明可用于治疗癌症，所述癌症例如是癌，肉瘤，淋巴瘤，霍奇金病，黑色素瘤，间皮瘤，伯基特淋巴瘤，鼻咽癌，白血病和骨髓瘤。所述癌细胞群体可包括(但不限于)口腔，甲状腺，内分泌，皮肤，胃，食管，喉，胰腺，结肠，膀胱，骨，卵巢，颈，子宫，乳腺，睾丸，前列腺，直肠，肾，肝和肺的癌症。 
病原细胞群体还可以是外源病原体或包含外源病原体例如，病毒的细胞群体。本发明可应用于如细菌，真菌，病毒，支原体和寄生虫的外源病原体。可用本发明治疗的感染源是能在动物中导致疾病的任何现有技术已经识别的感染生物体，所述生物体包括例如革兰氏阴性或革兰氏阳性球菌或杆菌的细菌；DNA和RNA病毒，包括(但不限于)DNA病毒例如乳头状瘤病毒、细小病毒、腺病毒，疱疹病毒和痘苗病毒，和RNA病毒，如沙粒病毒，冠形病毒，鼻病毒，呼吸合胞病毒，流感病毒，微小RNA病毒，副粘病毒，呼肠孤病毒，反转录病毒和杆状病毒。特别优选的是抗生素抗性的细菌，例如抗生素抗性链球菌种(Streptococcus)和金黄色葡萄球菌种(Streptococcuss)，或虽对抗生素易感但会导致用抗生素治疗的多发性感染从而最终形成抗性生物 体的细菌。所述生物可用本发明的配体-免疫原或配体-半抗原结合物联合比正常情况下应给予患者的抗生素剂量低的抗生素剂量进行治疗从而避免产生对这些抗生素抗性的细胞株。本发明还可应用于任何真菌、支原体种、寄生虫或其它能在动物中致病的感染性生物体。可用本发明方法治疗的真菌的实例包括以霉生长的或酵母样真菌，包括，例如，致病真菌例如癣菌，组织胞浆菌，芽生菌，曲霉，隐球菌，孢子丝菌，球孢子菌，副球孢子菌和念珠菌。本发明可用于治疗寄生虫感染，所述寄生虫感染包括，但不限于由体绦虫(somatictapeworms)，血吸虫，组织线虫，阿米巴和疟原虫(Plasmodium)，锥虫(Trypanosoma)，利什曼原虫(Leishmania)和弓形虫种(Toxoplasma)导致的感染。特别优选的寄生虫是表达叶酸盐受体并结合叶酸盐的那些寄生虫；然而，现有技术已经公开大量关于对感染性生物体具表现出高亲和性的配体的内容。例如，已知青霉素和先锋霉素具有抗生素活性且能与细菌细胞壁前体特异性结合，二者同样可用于按照本发明的用途制备配体-免疫原或配体-半抗原结合物的配体。本发明的配体-免疫原或配体-半抗原结合物还可针对含有内源性病原体的细胞群体，其中病原体特异性抗原优选表达在含有抗原的细胞表面上，并作为特异性结合所述抗原的配体的受体。 
本发明的方法可用于人类临床医学和兽医用途。因此，包含病原生物体并用配体-免疫原或配体-半抗原结合物治疗的宿主动物可以是人类或(在兽医应用的情况下)可以是实验动物、农用动物、家畜动物或野生动物。本发明适用于的宿主动物包括(但不限于)人；实验动物如啮齿类动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠等)、兔、猴、猩猩；家畜例如犬、猫和兔；农用动物例如牛、马、猪、棉羊、山羊和笼养野生动物例如熊、熊猫、狮、虎、豹、象、斑马、长颈鹿、大猩猩、海豚和鲸。 
在改进方法的一个实施方案中，宿主用免疫原或半抗原-载体(例如，KLH或BSA)结合物和TH1-偏向性佐剂预免疫以引发针对免疫原或半抗原的预存免疫。然后对宿主给予配体-免疫原或配体-半抗原结合物，导致由与靶病原细胞结合的配体-免疫原或配体-半抗原结合物引导的体液或细胞介导的免疫反应(或二者并存)。 
在另一个实施方案中，预存免疫可以是针对免疫原(例如，如超抗原或胞壁酰二肽的免疫原)的先天免疫。在该实施方案中，可共同给予TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物以增强来源于(至少部分来源于)先天免疫的免疫反应。
在另一个实施方案中，预存免疫可以是通过正常的定期疫苗接种或与抗原的在先接触(例如，脊髓灰质炎病毒，破伤风，流行性感冒等)而发展出的免疫。在该实施方案中，共同给予包括引发预存免疫的抗原的免疫原和TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物以便增强由预存免疫引起的免疫反应。 
而在另一个实施方案中，可共同给予配体-免疫原结合物和TH1-偏向性佐剂以便引发无预存免疫情况下的免疫反应。在该实施方案中，由于佐剂和配体-免疫原结合物的共同给药，TH1-偏向性佐剂增强了针对免疫原的免疫反应。 
在另一个实施方案中(其中不存在预存免疫)，可共同给予配体-免疫原结合物，TH1-偏向性佐剂和被动给予的抗体。在该实施方案中，被动给予的抗体辅助增强针对免疫原的免疫反应。 
对此处的所有实施方案而言，“共同给予”是指在给予配体-免疫原、配体-半抗原或半抗原-载体结合物或免疫原之前、同时或之后的给予。根据本发明，“共同给予”还可以指在相同或不同的溶液中的给予。 
适用于根据本发明用途的佐剂是将免疫反应偏向于TH1反应的佐剂。小鼠中佐剂-诱导的TH1-偏向性免疫可通过免疫球蛋白同型分布测定法检测。将免疫反应偏向于TH1反应的佐剂是优选在小鼠体内相对IgG1抗体水平增加IgG2a抗体水平的佐剂。抗原特异性IgG2a/IgG1比率≥1可指示TH1-样抗体亚类模式。然而，根据本发明，增加抗原特异性抗体产生并同时将相对IgG2a/IgG1比率增高至约≥0.3的任何佐剂均能将免疫反应导向TH1-偏向性免疫反应。所述佐剂可包括皂苷佐剂(例如，皂树皂苷，包括脂质-修饰的皂树皂苷佐剂)，CpG，3-脱酰基单磷酰脂A(MPL)，牛卡介苗(BCG)，双茎-环免疫调节性寡脱氧核糖核苷酸(double stem-loop immunomodulatingoligodeoxyribonucleotides(d-SLIM))，热灭活流产布鲁氏菌(HKBA)，热灭活母牛分枝杆菌(SRL172)，灭活痘病毒，环磷酰胺，促乳素，沙利度胺，辅酶B12，revimid等。皂苷佐剂及其制备方法 和用途详细描述于美国专利号5,057,540、5,273,965、5,443,829、5,508,310、5,583,112、5,650,398、5,977,081、6,080,725、6,231,859和6,262,029中，所述专利引入此处作为参考。 
配体-免疫原或配体-半抗原结合物可选自多种配体，免疫原和半抗原。配体应能由于病原细胞上的配体的受体(配体结合可接近)的优选表达和过表达而优选靶向宿主动物中的病原细胞群体。适宜的配体包括叶酸，叶酸类似物和其它叶酸盐受体结合性分子，其它维生素，由文库筛选鉴定的肽配体，肿瘤特异性肽，肿瘤特异性适体，肿瘤特异性糖类，肿瘤特异性单克隆或多克隆抗体，抗体的Fab或scFv(即，单链可变区)片段，例如，针对EphA2或转移癌细胞上特异性表达或独特可接近的其它蛋白的抗体的Fab的片段，来自组合文库的小有机分子，生长因子，如EGF，FGF，胰岛素和胰岛素样生长因子，和同源多肽、促生长素抑制素及其类似物、转铁蛋白、脂蛋白复合物、胆盐、选择蛋白、类固醇激素、包含Arg-Gly-Asp的肽、类维生素A、多种半乳凝素、δ-阿片受体配体、胆囊收缩素A受体配体、血管紧张素AT1或AT2受体特异性配体、过氧化物酶体增生物激活受体γ配体、β-内酰胺类抗生素、包括抗微生物药物的小有机分子和与肿瘤细胞表面或感染性生物体表面上的优选表达的受体特异性结合的其它分子或任何这些分子的片段。与感染性生物体结合的配体可以是本领域已知优选与微生物结合的任何分子，如抗生素或其它药物。本发明还使用如下配体，如抗微生物药的分子(其根据受体的晶体结构而被设计为适于进入特定受体的结合袋)或其它细胞表面蛋白，其中所述受体在肿瘤、细菌、病毒、支原体、真菌、寄生虫或其它病原体的表面上优选表达。在一个实施方案中，还描述了可使用与任何肿瘤抗原或在肿瘤细胞表面上优选表达的其它分子结合的配体。 
在一个实施方案中，配体是维生素或其类似物或衍生物。适宜的维生素包括烟酸，泛酸，叶酸，核黄素，硫胺素，生物素，维生素B12和脂质可溶性维生素A，D，E和K。这些维生素和其受体结合性类似物和衍生物构成形成用于根据本发明的用途的配体-免疫原或配体-半抗原结合物的靶向实体。优选的维生素部分包括叶酸，生物素，核黄素，硫胺素，维生素B12和这些维生素分子的受体结合的类似物和衍生物，以及其它相关的维生素受体结合性(参见美国专利号5,108,921；5,416,016和5,635,382，其引入此处作为参考)。维生素类似物的实例是包含D构型谷氨酸残基的叶酸类似物(叶酸正常情况下包含一个与蝶酸相连的L构型的谷氨酸)。 
配体的结合位点可包括针对任何能特异性结合受体的分子的受体，其中所述受体或其它蛋白在病原细胞群体上优选表达，包括，例如，生长因子，维生素，肽(包括阿片肽)，激素，抗体，糖和小有机分子的受体。所述结合位点还可以是针对任何分子的结合位点，所述分子例如抗生素或其它药物，其中本领域已知所述位点优选存在于微生物上。例如，主结合位点可以是细菌细胞壁中针对β-内酰胺抗生素例如青霉素的结合位点，或唯一存在病毒表面上的针对抗病毒剂的结合位点。本发明还使用针对配体的结合位点，所述配体例如抗微生物药，其根据受体的晶体结构而被设计为适于进入特定受体的结合袋)或其它细胞表面蛋白，其中所述受体在病原细胞或生物体的表面上优选表达。 
还涉及发挥针对配体的结合位点功能的肿瘤特异性抗原。能发挥针对配体-免疫原或配体-半抗原结合物的结合位点功能的肿瘤特异性抗原的实例是Ephr in蛋白家族成员，如EphA2的细胞外表位。EphA2的表达受正常细胞中细胞-细胞连接的限制，而在转移肿瘤细胞中EphA2分布在整个细胞表面上。因此，转移细胞上的EphA2能与，例如与免疫原或半抗原结合的抗体Fab片段结合，而所述蛋白不能与正常细胞上的Fab片段结合，这导致配体-免疫原或配体-半抗原结合物特异性的针对转移癌细胞。本发明进一步涉及配体-免疫原或配体-半抗原结合物组合物用于最大化免疫反应消除的病原细胞的靶向。 
适宜的免疫原包括已经借助正常定期疫苗接种和对如下因素的在先接触如脊髓灰质炎病毒，破伤风，斑疹伤寒，风疹，麻疹，腮腺炎，百日咳，结核和流感抗原，以及α-半乳糖基团而针对其发展出预存免疫的抗原或抗原性肽。在所述情况下，将配体-免疫原结合物用于在宿主动物中将先前获得体液免疫或细胞免疫导向病原细胞群体以便消除外源细胞或病原性生物体，且TH1-偏向性佐剂增强了该免疫反应从而增强了对病原细胞的消除。 
宿主动物已经针对其发展出先天免疫的抗原或抗原性肽(例如，超抗原和胞壁酰二肽)也可以用于根据本发明用途的适宜的免疫原。 在该实施方案中，共同给予TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物而佐剂增强针对来源于先天免疫的免疫原的免疫反应。 
在不存在预存免疫的情况下，预存免疫可通过用免疫原或半抗原的预先免疫而产生。在这中情况下，通过用免疫原或半抗原(例如，荧光素，二硝基苯基，三硝基苯基，α-半乳糖表位，合成肽或来源于普通病毒的糖肽、细菌、糖，寡糖，神经节苷脂，和低分子量药物)的免疫可生成新的预存免疫。在使用半抗原的实施方案中，通常将半抗原与载体结合以形成半抗原-载体结合物。用半抗原-载体结合物和TH1-偏向性佐剂预先免疫宿主。由于随后给予配体-半抗原结合物，TH1-偏向性佐剂增强了对半抗原的免疫反应。在免疫原不是半抗原的实施方案中，可通过用免疫原和TH1-偏向性佐剂预先免疫来产生预存免疫。 
在不存在预存免疫的实施方案中，可使用任何与TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物共同给药而诱导免疫反应免疫原。 
可用于本发明的载体包括钥孔林普贝血蓝蛋白(KLH)，皱纹盘鲍血蓝蛋白(haliotis tuberculata hemocyanin(HtH))，灭活的白喉毒素，灭活的破伤风毒素，结核分支杆菌的纯蛋白衍生物(PPD)，牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，g-球蛋白，甲状腺球蛋白，肽抗原，和合成载体，如聚-L-赖氨酸，dendrimer和脂质体。 
配体或载体(例如，KLH或BSA)可通过使用现有技术中已知的构建复合物的任何方法与免疫原或半抗原结合。其可包括载体或配体与免疫原或半抗原的共价、离子或氢键结合(或者直接或者间接借助交联基团例如二价交联剂)。所述半抗原-载体，配体-免疫原和配体-半抗原结合物通常通过经所述结合物的各部分上的酸、醛、羟基、氨基或肼基之间形成的酰胺、酯或亚胺键的共价结合而得以形成。在使用交联剂的实施方案中，交联剂通常包括约1至约30个碳原子，更通常为约2至约20个碳原子。通常使用较低分子量交联剂(即，分子量大约为约20至约500的交联剂)。而且，按照本发明所述交联剂包括将所述配体或载体与免疫原或半抗原连接的间接方式，如通过经由中间交联剂、间隔臂或桥接分子的连接。联合的直接和间接方式均不应妨碍配体与细胞膜上受体的结合以便实施本发明的方法。 
在一个实施方案中，配体是叶酸、叶酸类似物或任何其它叶酸盐- 受体结合分子，而叶酸盐配体通过借助蝶酰叠氮化物中间体使用三氟醋酸酐制备叶酸的γ-酯的方法而与免疫原或半抗原结合。该方法导致合成叶酸盐配体，所述叶酸盐配体经通过叶酸盐的谷氨酸基团的γ-羧基与免疫原或半抗原结合(参见图7)其中γ-结合物结合具有高亲和性的叶酸受体，从而避免了形成α-结合物和γ-结合物的混合物。可选地，可由中间体制备纯α-结合物(其中γ-羧基被选择性保护)，使用本领域已知的有机合成方法和步骤形成α-结合物随后将γ-羧基去保护。 
对病原细胞群体的内源性免疫反应介导消除通过用TH1-偏向性佐剂免疫而得以增强。内源性免疫反应可包括体液反应，细胞介导的免疫反应和宿主动物的任何其它内源性免疫反应，其包括补体介导的细胞裂解，抗体-依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，引导吞噬作用的抗体调理作用，导致细胞调亡、抗增殖或分化的信号的经由抗体结合的受体聚集和免疫细胞对递送的免疫原/半抗原的直接识别。还预期内源性免疫反应将使用到调节例如免疫细胞的增殖和迁移的过程的细胞因子的分泌。内源性免疫反应可包括例如B细胞，T细胞(包括辅助T细胞和细胞毒性T细胞)，巨噬细胞，自然杀伤细胞，中性粒细胞，LAK细胞等的免疫细胞类型的参与。 
预期预先存在的抗体、诱导的抗体或被动给予的抗体将通过所述配体-免疫原或配体-半抗原结合物与这些侵入细胞和生物体的优选结合而被导向肿瘤细胞或感染性生物体，以及所述病原细胞将被上述免疫反应杀死。该细胞毒性过程还包括二次反应，该反应产生于受吸引的抗原呈递细胞吞噬不需要的细胞并将存在的天然肿瘤抗原或外源生物体的抗原呈递于免疫系统的细胞臂以便消除存在抗原的细胞或生物体时。 
如上所述，可通过例如正常定期疫苗接种，或通过天然免疫原或非天然免疫原或半抗原(例如，荧光素或二硝基苯基)的自动免疫接种(其中非天然的免疫原或半抗原能诱导新的免疫)的方法诱导免疫反应。自动免疫接种可包括在正常免疫接种方法之外定期多重注射天然免疫原或非天然免疫原或半抗原(例如，作为半抗原-载体结合物)从而诱导免疫。可使用任何免疫接种程序例如在给予天然或非天然免疫原或半抗原之前、同时或之后给予联同免疫原或半抗原的TH1-偏向 性佐剂。TH1-偏向性佐剂可在免疫原或半抗原相同溶液或不同溶液中给药。免疫反应还可产生自当宿主动物具有天然预存免疫例如对α-半乳糖基团的免疫时的先天免疫，而在先天免疫情况下，TH1-偏向性佐剂能增强来自先天免疫的免疫反应。 
至少一种包含治疗因子的其它组合物包含能与上述方法联合给予宿主从而增强对病原细胞群体的内源性免疫反应介导的消除，或者可给予多于一种其它治疗因子。所述治疗因子可选自能激发内源性免疫反应的化合物、化学治疗剂、抗微生物剂或其它能补充配体-免疫原或配体-半抗原结合物给药功效的治疗因子，如细胞毒害免疫细胞。在一个实施方案中，所述细胞毒害免疫细胞是分离的、体外扩增以及然后注射至宿主动物的细胞毒害免疫细胞群体。还可通过对宿主给予上述能激发内源性免疫反应的结合物之外的化合物或组合物来实施本发明的方法，所述化合物或组合物包括，但不限于细胞因子或免疫细胞生长因子例如白介素1-18，IL-23，干细胞因子，碱性FGF，EGF，G-CSF，GM-CSF，FLK-2配体，FLT-3配体，HILDA，MIP-1α，TGF-α，TGF-β，M-CSF，IFN-α，IF-β，IFN-γ，可溶性CD23，LIF及其组合。 
还可使用这些细胞因子的治疗上有效的组合。例如在一个实施方案中，可使用治疗有效量的IL-2(例如，其在多剂量每日治疗程序中的量为约0.1MIU/m2/剂/日至约60MIU/m2/剂/日)，和IFN-α(例如，其在多剂量每日治疗程序中的量为约0.1MIU/m2/剂/日至约10MIU/m2/剂/日)(MIU＝百万国际单位；m2＝一般人类的大约体表面积)。在另一个实施方案中使用治疗有效量的IL-12和IFN-α，和而在另一个实施方案中使用治疗有效量的IL-15和IFN-α。在可选的实施方案中，联合使用IL-2，IFN-α或IFN-γ和GM-CSF。使用的治疗因子(如IL-2，IL-12，IL-15，IFN-α，IFN-γ和GM-CSF)包括其组合可激活天然杀伤细胞和/或T细胞。可选地，治疗因子或其组合(包括白介素和干扰素和GM-CSF的组合)可激活例如巨噬细胞，B细胞，中性白细胞，NK细胞，NKT细胞，T细胞，LAK细胞等的其它免疫效应细胞。本发明涉及使用任何其它有效的细胞因子组合(包括其它白介素和干扰素和集落刺激因子的组合)。 
适用于根据本发明的治疗因子的化学治疗剂(可以是自身具有细胞毒性以及具有增强肿瘤通透性的功能)包括肾上腺类皮质激素，烷 化剂，抗雄激素物质，雌激素对抗剂，雄激素，雌激素，抗代谢物例如阿糖胞苷，嘌呤类似物，嘧啶类似物和甲氨喋呤，白消安，卡铂，苯丁酸氮芥，顺铂和其它铂化合物，他莫昔芬，红豆杉醇，环磷酰胺，植物生物碱，泼尼松，羟基脲，替尼泊苷，抗生素例如丝裂霉素C和博来霉素，氮芥，硝基脲类，长春新碱，长春碱，炎性和促炎症反应因子，和任何其它本领域已知的化学治疗剂。能与本发明的结合物一起给药的其它治疗因子包括青霉素，先锋霉素，万古霉素，红霉素，克林霉素，利福平，氯霉素，氨基糖苷，庆大霉素，两性霉素B，阿昔洛维，三氟尿苷，羟甲基无环鸟苷，叠氮胸苷，金刚烷胺，三氮唑核苷，和任何其它的本领域已知的抗微生物化合物。 
治疗因子还可以是针对免疫原或半抗原的抗体，如获自血清的天然抗体或单克隆抗体(可以是或可以不是遗传工程化的抗体，包括人源化抗体)，且可被动给予宿主动物以便增强对病原细胞的消除。被动给予的抗体可与配体-免疫原或配体-半抗原结合物共同给药。 
病原细胞群体的消除包括致成治疗反应的肿瘤质量或病原生物体的减少或消除。因此，根据本发明“病原细胞的消除”是指细胞的部分或完全消除。在肿瘤情况下，消除可以是原发性肿瘤细胞或已经转移的细胞或处于从原发性肿瘤分离过程的细胞的消除。本发明还预期对了防止肿瘤在用任何治疗方法(包括肿瘤的手术切除、放射治疗、化学治疗或生物治疗)除去后复发的预防疗法并认为是病原细胞的消除。预防疗法可以是在用配体-免疫原或配体-半抗原结合物治疗(如以多剂量每日程序治疗)之前的用TH1-偏向性佐剂和半抗原-载体结合物或免疫原的初次治疗，和/或可以是在进行包含或不包含TH1-偏向性佐剂的初次治疗后间隔数日或数月的用配体-免疫原或配体-半抗原结合物的附加治疗或系列治疗。 
本发明还涉及包含治疗有效量的TH1-偏向性佐剂和半抗原-载体结合物的组合物。在该实施方案中，半抗原可以是荧光素或二硝基苯基或任何其它半抗原。在另一个实施方案中，提供了包含治疗有效量的TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物的组合物。该组合物可进一步包括有效增强病原细胞消除的量的治疗因子。所述治疗因子选自细胞杀伤剂，肿瘤透入增强剂，化学治疗剂，抗微生物剂，细胞毒害免疫细胞，以及能激发内源性免疫反应的化合物。在治疗因子是能刺激内 源性免疫反应的化合物的实施方案中，所述治疗因子可包括细胞因子如IL-2、IL-12、IL-15或IL-23或细胞因子组合，包括IL-2、IL-12、IL-15或IL-23和干扰素如IFN-α，IFN-β和IFN-γ，以及干扰素，白介素和集落刺激因子，如GM-CSF的组合。还涉及包含上述组分的药盒。还涉及包含TH1-偏向性佐剂，半抗原-载体结合物，和配体-半抗原结合物的药盒。在另一个实施方案中，所述药盒可包括免疫原，TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物。所述药盒还可包括治疗因子。 
所述佐剂，免疫原，半抗原-载体结合物，配体-免疫原结合物，和配体-半抗原结合物的剂量可根据如下因素而变化：宿主的状况，治疗的疾病状态，结合物或免疫原的分子量，给药途径和组织分布，以及共同使用其它治疗方法如放射治疗的可能性。给予患者的有效量应基于体表面积，体重和对患者状况的医师评估。佐剂的有效剂量可为约0.01μg至约100mg/患者，或约100μg至约50mg/患者，或约500μg至约10mg/患者。半抗原-载体结合物或免疫原的有效剂量可为约1μg至约100mg/患者，或约10μg至约50mg/患者，或约50μg至约10mg/患者。配体-免疫原或配体-半抗原结合物的有效剂量可为约1ng/kg至约1mg/kg，或约1μg/kg至约500μg/kg，或约1μg/kg至约100μg/kg。 
可使用给予所述TH1-偏向性佐剂，免疫原，半抗原-载体结合物，配体-免疫原结合物，配体-半抗原结合物和治疗因子以便将免疫反应导向肿瘤细胞或感染性生物体的任何有效方法。例如，可将所述TH1-偏向性佐剂，免疫原，结合物和治疗因子作为单剂给药，或可将其分开然后作为多剂量每日治疗程序。而且，可将交错给药法(例如，每周1～3日)用作每日治疗的替代方法，而为限定本发明的目的将所述间断或交错每日给药法看作等效于每日治疗并包含在本发明的范围之内。例如，在本发明的一个实施方案中，在三次初始剂量TH1-偏向性佐剂和半抗原-载体结合物之后，用配体-半抗原结合物和治疗因子的多次注射治疗宿主以便消除病原细胞群体。在另一个实施方案中，用配体-半抗原结合物多次(例如，约2至约50次)注射宿主，例如以12-72小时间隔或以48-72小时间隔。可以在初次注射后以数日或数周为间隔对患者附加注射配体-半抗原结合物，所述附加注射防止疾病的复发。可选地，所述配体-半抗原结合物的初次注射可防止疾病复 发。 
在另一个实施方案(其中通过用所述TH1-偏向性位剂和免疫原或半抗原-载体结合物预先免疫而已经产生了预存免疫)中可随后给予配体-免疫原结合物或配体-半抗原结合物和治疗因子。可在配体-免疫原结合物或配体-半抗原结合物之前、之后或同时将所述治疗因子给予宿主动物而治疗因子可作为包含配体-免疫原结合物或配体-半抗原结合物的相同组合物的部分或作为不同于所述结合物的组合物的部分而进行给药。本发明可使用任何包含治疗伤有效量治疗因子的所述治疗组合物。在另一个实施方案(其中已经产生了预存免疫)中，治疗因子可与TH1-偏向性佐剂和配体-免疫原结合物共同给药。 
此外，可使用超过一种的免疫原，半抗原-载体结合物，配体-免疫原结合物，或配体-半抗原结合物。例如，可用荧光素-载体和二硝基苯基-载体结合物预先免疫宿主动物然后用与相同或不同的配体偶联的荧光素和二硝基苯基以共同给药法进行治疗。在化学治疗剂和抗微生物剂的情况下，所述治疗因子可按亚适量与配体-免疫原结合物或配体-半抗原结合物以联合治疗进行给药以避免宿主动物产生针对化学治疗剂或抗微生物剂的抗性。 
所述TH1-偏向性佐剂，免疫原，半抗原-载体结合物，配体-免疫原结合物，配体-半抗原结合物和治疗因子优选经肠道外注射且所述注射可以是皮内注射，腹腔内注射，皮下注射，肌内注射，静脉注射或鞘内注射。可选地，TH1-偏向性佐剂，免疫原和结合物可通过其它医学上可用的方式如口服给予宿主动物，且可使用任何适宜的治疗剂型。胃肠外剂型的实例包括活性剂在等渗盐水、5％葡萄糖或其它众所周知的药学上可接受的液体载体例如液体醇、二醇、酯和酰胺中的含水溶液。按照本发明的胃肠外剂型还可以是可重构的冻干的形式。在一个实施方案中，可给予现有技术中任何已知的多种延长释药剂型例如，美国专利号4,713,249；5,266,333和5,417,982(所述专利的公开内容引入此处作为参考)所描述的生物可降解的糖类基质。在另一个实施方案中，可使用缓释泵。 
本发明的方法可与其它治疗方法联合使用，所述治疗方法例如是肿瘤的手术切除、放射治疗、化学治疗或例如其它免疫疗法的生物疗法，所述其它免疫疗法包括(但不限于)单克隆抗体疗法，免疫调节 剂治疗，免疫效应细胞过继转移，造血生长因子、细胞因子治疗和疫苗接种。 
实施例1皂苷强化的免疫治疗(联同细胞因子)对具有腹膜内L1210A白血病的DBA小鼠的疗效 
使用与100μg GPI-0100共同配制的35μg异硫氰酸荧光素(FITC)标记的钥孔林普贝血蓝蛋白(KLH；参见图8)以2周为间隔经皮下对6至8周龄(～20-22克)雌性DBA小鼠免疫三次。GPI-0100是一种皂苷佐剂，其为部分修饰的皂树皂苷的脂质修饰的衍生物。美国专利号6,080,725(引入此处作为参考)中公开了GPI-0100的制备和用途。在第三次免疫后约1周，从治疗的动物取血样然后用于ELISA检测以便测定抗-FITCIgG和IgG2a抗体的存在量(参见图1)。在确定了所有小鼠中抗-FITC抗体效价均很高后，在第一次免疫后大约5周，对每只小鼠均经腹膜内注射2.5×104L1210A细胞，所述细胞是表达高水平高亲和性叶酸盐受体的同基因小鼠白血病细胞系。然后使癌细胞在体内增殖和生长7日。然后，用磷酸盐缓冲液或用PBS，IL-2(250,000IU/剂)和IFN-α(75,000IU/剂)共注射，或用叶酸盐-FITC结合物(EC17；参见图7；1800nmol/kg)，IL-2(250,000IU/剂)和IFN-α(75,000IU/剂)于肿瘤细胞植入后7，8，9，11和14日经腹膜内处理带瘤小鼠。每日监测动物的大体形态，行为和存活。如图2所示，单独使用细胞因子能将带瘤小鼠的存活扩大到某种程度，而用EC17，IL-2和IFN-α处理的小鼠被治愈(经组织病理学分析证实)。 
实施例2 
皂苷强化的免疫治疗(联同细胞因子)扩大了腹膜内注射M109肿瘤细胞的Ba1b/c小鼠的存活率 
使用与100μg GPI-0100共同配制的35μg KLH-FITC以2周为间隔经皮下对6至8周龄(～20-22克)雌性Ba1b/c小鼠免疫三次。如实施例1所述在确定了所有小鼠中抗-FITC抗体效价均很高后，在第一次免疫后大约5周，对每只小鼠均经腹膜内注射7.5×105M109细胞，所述细胞是表达高水平高亲和性叶酸盐受体的同基因小鼠肺癌白血病细胞系。然后使癌细胞在体内增殖和生长7日。然后，于肿瘤细胞植入后7-11，14-18和21-25日对带瘤小鼠经皮下注射PBS或PBS，IL-2(5,000IU/剂)和IFN-α(25,000IU/剂)共注射，或PBS，EC17 (1800nmol/kg)，IL-2(5,000IU/剂)和IFN-α(25,000IU/剂)。EC17和IFN-α每周给药3次。IL-2每周给药5次。每日监测动物的大体形态，行为和存活率。如图3所示，单独使用细胞因子能将带瘤小鼠的存活率扩大到某种程度，而用EC17，IL-2和IFN-α处理的小鼠的存活期显著延长。 
实施例3 
皂苷强化的EC17免疫疗法单独(无细胞因子)对具有1日龄腹膜内M109肿瘤的Ba1b/c小鼠的作用 
使用与100μg GPI-0100共同配制的35μg KLH-FITC以2周为间隔经皮下对6至8周龄(～20-22克)雌性Ba1b/c小鼠免疫三次。如实施例1所述在确定了所有小鼠中抗-FITC抗体效价均很高后，在第一次免疫后大约5周，对每只小鼠均经腹膜内注射7.5×105M109细胞。1日后，于肿瘤细胞植入后1，2，5，7，9，12，14，和16日对带瘤小鼠经皮下注射PBS或PBS和EC17(1800nmol/kg)。每日监测动物的大体形态，行为和存活率。如图4所示，PBS对照组中的小鼠全部在肿瘤植入后约24-25日死亡，而用EC17处理的小鼠的存活期显著延长。 
实施例4 
皂苷强化的EC17免疫疗法单独(无细胞因子)对具有7日龄腹膜内M109肿瘤的Ba1b/c小鼠的作用 
使用与100μg GPI-0100共同配制的35μg KLH-FITC以1周为间隔经皮下对6至8周龄(～20-22克)雌性Ba1b/c小鼠免疫三次。如实施例1所述在确定了所有小鼠中抗-FITC抗体效价均很高后，在第一次免疫后大约5周，对每只小鼠均经腹膜内注射0.5×105M109细胞。然后使癌细胞在体内增殖和生长7日。然后，用PBS或用PBS和EC17(1800nmol/kg/日)，于肿瘤细胞植入后7-11，14-18，和21-25日经腹膜内处理带瘤小鼠。EC17和IFN-α每周给药3次。IL-2每周给药5次。每日监测动物的大体形态，行为和存活率。如图5所示，与PBS对照相比，单独使用EC17显示出带瘤小鼠存活期的较小延长。由此，综合图4和图5所示结果证实了单独使用EC17在肿瘤发展的早期具有显著的抗肿瘤作用。更重要地，综合图3和图5所示结果证明了与单独用EC 17或细胞因子进行处理相比，EC 17和细胞因子(如IL-2和 IFN-α)能导致带瘤小鼠存活期的协同性地增加。 
实施例5 
皂苷强化的免疫疗法(联同细胞因子)抑制具有皮下M109肿瘤的Ba1b/c小鼠中的肿瘤生长 
使用与100μg GPI-0100共同配制的35μg KLH-FITC以1周为间隔经皮下对6至8周龄(～20-22克)雌性Ba1b/c小鼠免疫三次。如实施例1所述在确定了所有小鼠中抗-FI TC抗体效价均很高后，对每只小鼠均在肩部经皮下注射1×106M109细胞。然后使癌细胞生长1日至30-50mm3。然后，用PBS或用PBS，IL-2(40,000IU/剂)和IFN-α(25,000IU/剂)共注射，或用PBS，EC17(1800nmol/kg)，IL-2(40,000IU/剂)和IFN-α(25,000IU/剂)于肿瘤细胞植入后7-11，14-18，和21-25日经腹膜内处理带瘤小鼠。EC17和IL-2每周给药5次。IFN-α每周给药3次。采用测径器每隔一日测量肿瘤体积。如图6所示，与用PBS或用PBS，IL-2和IFN-α注射的小鼠中肿瘤的显著生长相比，注射了EC17，IL-2和IFN-α的小鼠中的皮下肿瘤在植入后35日间表现出体积减少。 

Claims (42)

1.TH1-偏向性皂苷佐剂与免疫原或免疫原性半抗原-载体结合物的组合在制备用于在存在病原细胞群体的预先免疫的宿主动物中增强对所述病原细胞群体的内源性免疫反应介导的特异性消除的产品中的应用，其中细胞群体的细胞含有配体可接近的结合位点，其中对所述宿主给予包含与所述配体结合的免疫原或半抗原的组合物，其中所述免疫原或半抗原被所述宿主中的内源性抗体识别或直接被所述宿主中的免疫细胞识别，以及其中用免疫原或免疫原性半抗原-载体结合物和TH1-偏向性皂苷佐剂预先免疫所述宿主从而引发预存免疫。
2.权利要求1的应用，其中还给予所述宿主至少一种包含治疗因子的其它组合物，其中所述因子选自细胞杀伤剂、肿瘤透入增强剂、化学治疗剂、抗微生物剂、细胞毒害免疫细胞和能够激发内源性免疫反应的化合物。
3.权利要求1的应用，其中所述佐剂选自未修饰的皂苷佐剂和修饰的皂苷佐剂。
4.权利要求1的应用，其中所述佐剂是皂树皂苷佐剂。
5.权利要求3的应用，其中所述佐剂是脂质修饰的皂树皂苷佐剂。
6.权利要求1的应用，其中用包含半抗原-载体结合物的组合物预先免疫所述宿主。
7.权利要求6的应用，其中所述半抗原选自荧光素和二硝基苯基。
8.权利要求6的应用，其中所述TH1-偏向性皂苷佐剂是修饰的皂苷佐剂。
9.权利要求8的应用，其中所述皂苷佐剂是脂质修饰的皂树皂苷佐剂。
10.权利要求7的应用，其中所述TH1-偏向性皂苷佐剂是修饰的皂苷佐剂。
11.权利要求10的应用，其中所述皂苷佐剂是脂质修饰的皂树皂苷佐剂。
12.权利要求7的应用，其中所述载体是钥孔林普贝血蓝蛋白。
13.权利要求11的应用，其中所述载体是钥孔林普贝血蓝蛋白。
14.权利要求13的应用，其中所述半抗原-载体结合物具有以下结构式：
Figure FFW00000038998200021
其中KLH为钥孔林普贝血蓝蛋白，而配体-免疫原结合物具有以下结构式：
15.TH1-偏向性皂苷佐剂与配体-免疫原结合物的组合在制备用于增强存在病原细胞群体的宿主动物中消除所述病原细胞群体的免疫反应的产品中的应用，其中所述病原细胞含有配体可接近的结合位点。
16.权利要求15的应用，其中还给予所述宿主至少一种包含治疗因子的其它组合物，其中所述因子选自细胞杀伤剂、肿瘤透入增强剂、化学治疗剂、抗微生物剂、细胞毒害免疫细胞和能够激发内源性免疫反应的化合物。
17.权利要求15的应用，其中所述佐剂选自未修饰的皂苷佐剂和修饰的皂苷佐剂。
18.权利要求15的应用，其中所述佐剂是皂树皂苷佐剂。
19.权利要求17的应用，其中所述皂苷佐剂是脂质修饰的皂树皂苷佐剂。
20.包含治疗有效量的TH1-偏向性皂苷佐剂和半抗原-载体结合物的组合物。
21.权利要求20的组合物，其中所述半抗原选自荧光素和二硝基苯基。
22.权利要求21的组合物，其中所述半抗原-载体结合物具有以下结构式：
而所述TH1-偏向性皂苷佐剂是皂树皂苷佐剂。
23.包含治疗有效量的TH1-偏向性皂苷佐剂和配体-免疫原结合物的组合物。
24.权利要求23的组合物，其中所述TH1-偏向性皂苷佐剂是皂树皂苷佐剂。
25.包含TH1-偏向性皂苷佐剂和半抗原-载体结合物的药盒。
26.权利要求25的药盒，其中所述半抗原选自荧光素和二硝基苯基。
27.权利要求26的药盒，其中所述TH1-偏向性皂苷佐剂是修饰的皂苷佐剂。
28.权利要求27的药盒，其中所述皂苷佐剂是脂质修饰的皂树皂苷佐剂。
29.权利要求26的药盒，其中所述载体是钥孔林普贝血蓝蛋白。
30.权利要求28的药盒，其中所述载体是钥孔林普贝血蓝蛋白。
31.权利要求30的药盒，其中所述半抗原-载体结合物具有以下结构式：
其中KLH为钥孔林普贝血蓝蛋白。
32.包含TH1-偏向性皂苷佐剂、半抗原-载体结合物和配体-半抗原结合物的药盒。
33.包含TH1-偏向性皂苷佐剂和配体-免疫原结合物的药盒。
34.权利要求32的药盒，其中所述半抗原选自荧光素或二硝基苯基。
35.权利要求34的药盒，其中所述载体是钥孔林普贝血蓝蛋白。
36.权利要求35的药盒，其中所述佐剂是皂树皂苷佐剂。
37.权利要求36的药盒，其中所述半抗原-载体结合物具有以下结构式：
Figure FFW00000038998200041
其中KLH为钥孔林普贝血蓝蛋白，而配体-免疫原结合物具有以下结构式：
Figure FFW00000038998200042
38.权利要求32的药盒，其中所述药盒还包含治疗因子。
39.权利要求38的药盒，其中所述治疗因子包括细胞因子。
40.权利要求33的药盒，其中所述药盒还包含治疗因子。
41.权利要求40的药盒，其中所述治疗因子包括细胞因子。
42.包含TH1-偏向性皂苷佐剂、免疫原和配体-免疫原结合物的药盒。
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