CN1608064A - 新化合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了通式(I)化合物，其中R¹选自苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基和咪唑基；其中每个R¹苯环和杂芳环可任选并独立地被选自以下的1、2或3个取代基进一步取代：直链和支链C₁－C₆烷基、NO₂、CF₃、C₁－C₆烷氧基、氯、氟、溴和碘。

Description

新化合物

发明领域

本发明涉及新化合物，涉及它们的制备、它们的用途以及包含所述新化合物的药用组合物。所述新化合物可用于治疗，特别是可用于治疗疼痛。

背景与现有技术

已经鉴定δ受体在许多机体功能例如循环系统和疼痛系统中起作用。因此δ受体的配体可以潜在用作镇痛剂和/或抗高血压药物。也已经表明δ受体的配体具有免疫调变活性。

现在已经很好地建立至少三组种不同的阿片样物质受体(μδ和κ)的鉴别，而且所有三组都存在于许多物种包括人类的中枢神经系统和周围神经系统中。当这些受体的一种或多种已经被激活时，已经在各种各样的动物模型中观察到痛觉缺失。

极少例外，当前可利用的选择性阿片样物质δ配体在自然界中是肽类，不适合于通过系统途径给予。一个非肽δ激动剂的例子是SNC80(Bilsky E.J.等，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，273(1)，第359-366页(1995))。然而，仍然需要不仅具有改进选择性而且具有改进的副作用型的选择性δ激动剂。

因此，本发明的问题是寻找新镇痛剂，所述镇痛剂具有改进的镇痛作用，而且具有优于当前μ激动剂的改进的副作用型，也具有改进的系统效力。

已经鉴定并在现有技术中存在的镇痛剂具有许多缺点，原因是它们的药代动力学差，并且当通过系统途径给予时不能镇痛。同时，在文件中已经记载了，现有技术中描述的优选的δ激动剂化合物在系统给予时表现出显著的致惊厥效应。

现在我们发现，在WO 98/28270中没有具体公开但包括在它的范围内的某些化合物当系统给予时，与WO 98/28270所公开化合物相比，表现出令人惊奇的改进的δ激动剂特性和体内效力。本发明的化合物表现出显著而出乎意料的增强水平的δ受体激动作用和代谢稳定性。

发明概述

本发明的新化合物由式I限定，

其中

R¹选自：

(i)苯基；

(ii)吡啶基

(iii)噻吩基

(iv)呋喃基

(v)咪唑基

(vi)三唑基

其中每个R¹的苯环和R¹杂芳环可以任选地并且独立地被1、2或3个选自以下的取代基进一步取代：直链和支链C₁-C₆烷基、NO₂、CF₃、C₁-C₆烷氧基、氯、氟、溴基和碘。在所述苯环和杂芳环上的取代可以在所述环系的任何位置发生。

所述式I化合物的药学上可接受的盐及其异构体也在本发明的范围内。

当所述苯环和杂芳环被取代时，优选的取代基选自CF₃、甲基、碘基、溴基、氟基和氯基中的任何一个。

在本发明的一个优选实施方案中，所述式I化合物以(+)-对映体或(-)-对映体存在。

所谓“异构体”是指其官能团和/或取向不同的式I化合物。所谓“取向”是指立体异构体、非对映异构体、区域异构体和对映体。

本发明的新化合物可用于治疗，尤其是治疗各种各样的疼痛，例如慢性疼痛、神经病性疼痛、急性疼痛、癌痛、类风湿性关节炎引起的疼痛、偏头痛和内脏疼痛等等。然而该表不应解释为是竭尽的。

本发明的化合物可用作免疫调变剂，尤其用于自身免疫病，例如关节炎、皮肤移植、器官移植和类似的外科手术需求、用于胶原疾病、各种变态反应、用作抗癌剂和抗病毒剂。

本发明的化合物可用于出现阿片样物质受体退化或功能障碍或包含在所述词形变化表中的病症。这可以包括在诊断技术和成像应用例如正电子发射断层扫描术(PET)中应用本发明的化合物的同位素标记形式。

本发明的化合物可用于治疗腹泻、抑郁、焦虑、尿失禁、各种精神病、咳嗽、肺水肿、各种胃肠道疾病、脊柱损伤和药瘾，包括治疗酒精滥用、尼古丁滥用、阿片样物质滥用和其他药物滥用以及交感神经系统疾病例如高血压。

本发明的化合物可用为镇痛剂，在进行全身麻醉和监控的麻醉护理期间使用。通常采用具有不同特性的药剂组合以获得维持麻醉状态所需的平衡作用(例如：记忆缺失、痛觉缺失、肌肉弛缓和镇静)。包含于该组合的是吸入麻醉剂、催眠药、抗焦虑药、神经肌肉阻滞药和阿片样物质。

按照上述式I的任何化合物在生产用于治疗任何上面讨论的病症的药物方面的应用，也在本发明范围内。

本发明的再一方面是治疗患有任何上述病症的患者的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的患者有效量的上述式I化合物。

下文流程I中描述的可用于合成上述式I化合物的任何新中间体也包含于本发明的范围中。

制备方法

可以按照下面流程I描述的合成方法制备本发明的所述化合物。该已知方法在Katritsky，A.R.，Lan，X.Chem.Soc.Rev.，第363-373页(1994)中有描述，该文献通过引用结合到本文中。

流程I

P＝保护基，例如Bn、Boc、CBz

M＝Li、Mg、Zn

X＝Br、I

L＝Cl、Br、OMs、OTs、I

R₁＝如上面式(I)定义

实施例

现在通过下面的实施例更详细地描述本发明，所述实施例不应被解释为限制本发明。

按照下面流程I描述的合成方法制备实施例1-3的化合物。

流程I

实施例1

4-[(4-苄基-1-哌嗪基)(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)甲基]- N，N-二乙基苯甲酰胺二盐酸盐(化合物6)的制备

(i)三氟代甲磺酸2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基酯(化合物1)的制备

将2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-酚(19g，0.11mol)和吡啶(18ml，0.23mol)溶于0℃CH₂Cl₂中。逐滴加入三氟甲磺酸酐(23ml，0.14mol)。在25℃下搅拌1小时后，用CH₂Cl₂稀释该混合物并HCl(水溶液)洗涤，干燥(MgSO₄)和真空蒸发。

化合物1的产量为32g(96％)，该化合物不需要纯化，而是直接用于下面的步骤。

¹H NMR(CDCl₃)δ1.50(s，6H)，3.09(s，2H)，6.81(m，1H)，7.03(m，1H)，7.11(m，1H)，MS(EI)m/e 296，163，135，107。

(ii)2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-羧酸甲酯(化合物2)的制备

将前面步骤制备的化合物1(32g，0.11mol)溶于DMSO(200ml)、MeOH(100ml)和Et₃N(34ml，0.25mol)中。向溶液中通入一氧化碳2-3分钟，然后加入醋酸钯(0.24g)和dppf(1.1g)，在CO环境下于70℃加热所得混合物。4小时后，再加入醋酸钯(0.10g)和dppf(0.50g)。12小时后，加入EtOAc和水，用HCl(水溶液)、盐水洗涤有机相，干燥(MgSO₄)并蒸发。经二氧化硅层析(0-20％EtOAc的庚烷溶液)，得到12g(52％)的化合物2。

¹H NMR(CDCl₃)δ1.52(s，6H)，3.00(s，2H)，3.88(s，3H)，6.82(m，1H)，7.27(m，1H)，7.70(m，1H)。MS(EI)m/e 206，174，159，146，131。

(iii)2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-甲醛(化合物3)的制备

将化合物2(5.0g，24mmol)溶解于甲苯(100ml)中，并在氮气环境下于-78℃将溶于甲苯的DIBAL(33ml，1.5M，50mmol)加入。30分钟后，通过加入HCl(水溶液)处理反应物，干燥(MgSO₄)和真空蒸发有机相。将残留物溶解于CH₂Cl₂(50ml)中，最后逐份添加磨细的重铬酸吡啶鎓(PDC)(11g，29mmol)。将混合物于40℃加热并逐份添加PDC(1g)直到反应完成。用庚烷稀释，经过硅石过滤并蒸发得到粗制品，所述粗制品经二氧化硅层析纯化(0-20％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物3(3.3g，19mmol，67％从化合物2开始)。

¹H NMR(CDCl₃)δ1.54(s，6H)，3.03(s，2H)，6.88(m，1H)，7.34(m，1H)，7.58(m，1H)，10.22(s，1H)。MS(EI)m/e 176，161，147，130。

(iv)和(v)4-[(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)(羟基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物4)和4-[(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)(1-哌嗪基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物5)的制备

将N，N-二乙基-4-碘代苯甲酰胺(化合物I)(14g，47mmol)溶于THF(150ml)中，在氮气环境下冷却至-78℃。滴加n-BuLi(21ml，2.2M庚烷溶液，47mmol)。在-78℃持续搅拌30分钟。滴加溶于THF(2ml)的醛(化合物3)(4.1g，24mmol)。30分钟后加入NH₄Cl(水溶液)。在真空中浓缩后，用EtOAc/水萃取，干燥(MgSO₄)并蒸发有机相，残留物经二氧化硅层析纯化，得到(化合物4)(6.1g，17mmol)。用SOCl₂(1.5ml，20mmol)的干燥CH₂Cl₂(200ml)溶液于0-25℃处理1小时，然后在真空中蒸发溶剂。将残留物溶解于MeCN(100ml)中，在80℃与哌嗪(5.8g，68mmol)反应12小时。在真空中浓缩后，经二氧化硅层析分离(含0-15％MeOH的CH₂Cl₂，含1％NH₄OH)，得到(化合物5)(4.9g，11mmol)。用HCl(水溶液)制备盐酸盐并冻干。

mp 130-40℃(二盐酸盐)。

IR(KBr，V_max)2982，2722，2481，1628，1450，1371，1292，1140。

¹H NMR(CD₃OD)δ1.1，1.2(2m，6H)，1.36，1.43(2s，6H)，2.72(m，4H)，2.95(m，2H)，3.25(m，6H)，3.5(m，2H)，4.8(s，1H)，6.74-7.60(m，7H)。分析。分析(C₂₆H₃₅N₃O₂)C，H，N。

(vi)标题化合物4-[(4-苄基-1-哌嗪基)(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺二盐酸盐(化合物6)的制备

将化合物5(0.62g，1.5mmol)和三乙胺(0.41ml，2.9mmol)溶解于MeCN(5ml)中，在25℃与苄基溴(0.17ml，1.5mmol)反应。2小时后加入第二份苄基溴，4小时后，反应物通过在真空中浓缩和经二氧化硅层析分离(含0-10％MeOH的CH₂Cl₂)进行处理，得到标题化合物6(0.49g，0.95mmol)。用HCl(水溶液)制备二盐酸盐并冻干。MS(ES)512.08(MH+)。

IR(NaCl，游离胺，V_max)2969，2806，2360，1630，1451，1368，1289，1135cm^-1。

¹H NMR(CDCl₃，游离胺)δ1.1，1.2(2m，6H，酰胺-Me)，1.36，1.46(2s，6H，Me2C)，2.5(m，8H，哌嗪-H)，2.95(m，2H，ArCH2)，3.2，3.5(2m，酰胺-CH2)，3.51(s，2H，ArCH2N)，4.62(s，1H，Ar2CH)，6.72-7.52(m，7H，Ar-H)。分析(C₃₃H₄₁N₃O₂×3.4HCl)C，H；N：计算值，6.61；实测值，7.19。

实施例2

4-{(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)[4-(4-碘代苄基)-1-哌嗪基]甲 基}-N，N-二乙基苯甲酰胺二盐酸盐(化合物7)的制备

方法如化合物6。化合物5(0.12g，0.29mmol)与4-碘代苄基溴(96mg，0.32mmol)反应48小时，得到标题化合物7(56mg，88μmol)。

MS(ES)638.24(MH+)。IR(NaCl，游离胺，V_max)2969，2810，1630，1451，1288，1135，1007cm^-1。

¹H NMR(CDCl₃，游离胺)δ1.1，1.2(2m，6H，酰胺-Me)，1.36，1.45(2s，6H，Me2C)，2.4(m，8H，哌嗪-H)，2.94(m，2H，ArCH2)，3.2，3.5(2m，酰胺-CH2)，3.43(s，2H，ArCH2N)，4.62(s，1H，Ar2CH)，6.73(m，1H，Ar-H)，6.94(d，J＝7.3Hz，1H，ArH)，7.05(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H，ArH)，7.25(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，7.48(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，7.61(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)。分析(C₂₆H₃₇Cl₂N₃O₂)C，H，N。

实施例3

4-{(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)[4-(3-吡啶基甲基)-1-哌嗪基] 甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺二盐酸盐(化合物8)的制备

将化合物5(0.20g，0.47mmol)溶解于含3-吡啶甲醛(90μl，0.95mmol)和HOAc(3μl，50μmol)的MeOH(2ml)中。在0℃下加入氰基硼氢钠(60mg，0.95mmol)，在25℃搅拌反应物48小时。反应物通过在真空下浓缩、萃取(CH₂Cl₂/K₂CO₃(水溶液))和经二氧化硅层析分离(含0-10％MeOH的CH₂Cl₂)进行处理，得到标题化合物8(82mg，0.16mmol)。用HCl(水溶液)制备二盐酸盐并冻干。

MS 513.25(MH+)。IR(NaCl，游离胺，V_max)2970，2808，2360，1631，1452，1425，1290，1135，1096，1009cm^-1。

¹H NMR(CDCl₃，游离胺)δ1.1，1.2(2m，6H，酰胺-Me)，1.36，1.46(2s，6H，Me2C)，2.5(m，8H，哌嗪-H)，2.94(m，2H，ArCH2)，3.2，3.5(2m，酰胺-CH2)，3.51(s，2H，ArCH2N)，4.64(s，1H，Ar2CH)，6.72-7.66(m，9H，Ar-H)，8.44-8.54(m，2H，Ar-H)。分析(C₃₂H₄₂N₄O₂)C，H，N。

实施例4

4-{(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)[4-(2-吡啶基甲基)-1-哌嗪基] 甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物9)的制备

将化合物5(0.45g，0.98mmol)溶解于含2-吡啶甲醛(110μl，1.18mmol)和HOAc(3μl，50μmol)的MeOH(10ml)中，制备标题化合物9。在0℃下加入氰基硼氢钠(70mg，1.18mmol)，在25℃搅拌反应物48小时。反应物通过在真空下浓缩、萃取(CH₂Cl₂/K₂CO₃(水溶液))和经反相HPLC层析分离进行处理，得到标题化合物9，461mg(63％)。

MS 513.04(MH+)。

药用组合物

根据本发明的新化合物可口服、肌内、皮下、局部、鼻内、腹膜内、胸腔内、静脉内、硬膜外、鞘内、脑室内给药及注射入关节给药。

优选的给药途径为口服、静脉内或肌内给药。

当为具体患者确定最佳个体给药方案和剂量水平时，其剂量取决于给药途径、疾病严重性、患者的年龄和体重以及主治医师通常考虑的其它因素。

为了用本发明化合物制备药用组合物，药学上可接受的惰性载体可以或者为固体，或者为液体。固体制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。

固体载体可以为能起稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂或片剂崩解剂作用的一种或多种物质；也可为包囊材料。

在粉剂中，载体为磨成细粉的固体，它可与磨成细粉的活性成分混合。在片剂中，活性成分与具有必需粘合性的载体按适当比例混合，并压制成需要的形状和规格。

为了制备栓剂组合物，首先熔化低熔点蜡如脂肪酸甘油酯和可可油的混合物，例如通过搅拌将活性成分分散于其中。然后将熔融的均匀混合物注入常用规格的模中，使其冷却固化。

合适的载体有碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、乳糖、糖、果胶、糊精、淀粉、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。

药学上可接受的盐有乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、glucaptate、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰阿散酸盐、己基间苯二酚盐、哈胺(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、溴代甲烷、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、扑酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱(teoclate)、triethiodide、苯乍生、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、1，2-乙二胺、葡甲胺、普鲁卡因、铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌的盐。药学上可接受的盐优选为盐酸盐和酒石酸氢盐。特别优选盐酸盐。

术语组合物包括所述活性成分与作为提供胶囊的载体的包囊材料的制剂，其中活性成分(与或不与其它载体一起)被载体所包围，因此载体与活性成分缔合。同样，扁囊剂也包括在内。

片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂可用作适于口服给药的固体剂型。

液体组合物包括溶液、悬浮液和乳液。适于不经胃肠给药的液体制剂实例有所述活性化合物的无菌水溶液或水-丙二醇溶液。也可将液体组合物制成聚乙二醇水溶液。

通过将活性组分溶解于水中并按要求加入适当的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂，可制备口服给药的水溶液。通过将磨成细粉的活性组分和粘性原料如天然合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它药用制剂领域已知的悬浮剂分散于水中，可制备口服用药的水性悬浮液。

优选的药用组合物是单位剂型。在这种单位剂型中，所述组合物分成含适量活性组分的单位剂量。所述单位剂型可为包装制剂，包装制剂包含个别量的所述制剂，例如片剂、胶囊剂和用管形瓶或安瓿包装的粉剂。单位剂型也可为一粒胶囊、一粒扁囊剂或一片药物本身，或者它可为适当数量的任何这类包装形式。

生物学评价

体外模型

细胞培养

于37℃、5％CO₂下，在含有无钙DMEM、10％FBS、5％BCS、0.1％Pluronic F-68和600μg/ml遗传霉素的摇瓶中，悬浮培养表达克隆的人μ、δ和κ受体和新霉素抗性的人293S细胞。

膜制备

沉淀细胞，将其重悬浮于裂解缓冲液中(50mM Tris，pH7.0，2.5mMEDTA，临用前用0.1M PMSF的乙醇母液加入至0.1mM)，在冰上孵育15分钟，然后用polytron匀化30秒。在4℃下以1000g(最大)离心该悬浮液10分钟。将其上清液收集于冰上，重悬浮沉淀后如上离心。将两次离心所得的上清液混合，以46,000g(最大)离心30分钟。将沉淀物重悬浮于冷Tris缓冲液(50mM Tris/Cl，pH7.0)中，再次离心。将最终的沉淀物重悬浮于膜缓冲液(50mM Tris、0.32M蔗糖、pH7.0)中。聚丙烯管中的等份物(1ml)冰冻于干冰/乙醇中并在使用前贮存于-70℃。用SDS通过改良Lowry测定法测定蛋白浓度。

结合测定

于37℃解冻膜，并冷却于冰上，通过25号针头三次，稀释入结合缓冲液(50mM Tris、3mM MgCl₂、1mg/ml BSA(Sigma A-7888)pH7.4，稀释液经0.22m滤纸过滤后贮存于4℃，并向其中加入5μg/ml抑肽酶、10μM苯丁抑制素、10μM diprotin A，无DTT)。将100μl(关于μg蛋白质，见表1)的等份液加入冰冻的装有100μl适当放射性配体(见表1)和100μl各种浓度的试验肽的12×75mm聚丙烯管中。分别测定在包含和不含10μM纳洛酮情况下的总结合(TB)和非特异性(NS)结合。将所述试管涡旋混合并于25℃温育60-75分钟，之后，通过GF/B滤纸(Whatman)(在0.1％聚环乙亚胺中预浸渍至少2小时)快速真空-过滤内容物，以约12ml/管的冰冷洗涤缓冲液(50mM Tris，pH7.0、3mMMgCl₂)洗涤。将滤纸在包含6-7ml闪烁液的小管形瓶中浸渍至少12小时后，用β计数器测量保留在滤纸上的放射性(dpm)。如果所述测定在96位深孔板中进行，则将过滤物过滤在96位PEI-浸渍的单滤纸(96-place PEI-soaked unifilters)上，用3×1ml洗涤缓冲液洗后，并于55℃烤箱中干燥2小时。加入50μl MS-20闪烁液体/孔后，用TopCount(Packard)对滤板计数。

数据分析

以TB-NS计算出特异性结(SB)，存在各种测试肽时的SB以对照SB的百分比表示。根据logit图或曲线拟合程序例如Ligand、GraphPad Prism、SigmaPlot或ReceporFit计算置换特异性结合的放射性配体的配体IC₅₀值和Hill系数(n_H)。用Cheng-Pmssoff方程计算K_i值。用至少三次置换曲线(at least three displacement curves)，报告测试配体的IC₅₀、K_i和n_H值的均值±S.E.M。生物学数据列于下表1中。

实施例编号	HDelta	HDelta		大鼠脑		小鼠脑		MLM		RLM
												EC50	％E最大	EC50	％E最大	EC50	％E最大	10000％残留(rem.)	10000％残留	10000％残留	10000％残留
		3	3.519	19.47	103.1	133.72	92.97
4	3.264											7.38	103.9	72.59	118.04	144.13	118.5	44.5	93	42.5	90.5

表1.生物学数据小结

受体饱和实验

用适当放射性配体(浓度范围为0.2-5倍于估计Kδ(如果所需放射配体量适宜的话，可高达10倍)对细胞膜进行结合试验，从而测定放射性配体Kδ值。特异性放射性配体结合以pmole/mg膜蛋白表示。根据单点模式(one-site model)由各个试验的特异性结合(B)放射性配体与nM游离(F)放射性配体的非线性拟合曲线，获得各个实验的Kδ和B_最大值。

用Von Frey试验测定机械-异常性疼痛

用Chaplan等(1994)所述的方法在08:00和16:00之间进行试验。将大鼠置于金属丝网底(可接触到其爪)之上的Plexilas笼中，让其适应10-15分钟。试验区域为左后爪的足底中部，避开较不敏感的足垫部分。用一系列呈对数递增硬度(0.41、0.69、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51和15.14克；Stoelting，III，USA)的8 Von Frey毛发接触其爪。从网状底板的下面，垂直于足底表面使用Von Frey毛发，其用力足以使Von Frey毛发对爪产生轻微弯曲并保持约6-8秒。如爪急剧缩回则为阳性反应。毛发一移开立即退缩也认为是阳性反应。走动是不明确的反应，在这种情况下需要重复刺激。

试验方案

FCA处理组在手术后第一天对动物进行试验。用Dixon(1980)的上-下方法确定50％缩回阈值。用2.04g(处于毛发系列刺激中间)毛发开始试验。无论刺激强度是上升或下降，一直连续刺激。爪对最初选定的毛发刺激无回缩反应时，就逐渐增强刺激；若爪回缩，则选择更弱的刺激。应用这种方法计算最优阈值需要6个极为接近50％阈值的反应，当反应发生第一个变化时，例如阈值首次交叉，才开始计数这6个反应。如果阈值落在刺激范围之外，则分别指定15.14(正常敏感度)或0.41(最大异常性疼痛)。采用常规的X＝未缩回；O＝缩回，对所得的阳性和阴性反应模式制表，用以下公式：

50％阈值(g)＝10_δ ^(Xf+k)/10,000

内推出50％缩回阈值，其中Xf＝最后使用的Von Frey毛发值(对数单位)；k＝阳性/阴性反应模式的表格数值(Chaplan等(1994))；而δ＝刺激的平均差值(对数单位)。此处δ＝0.224。

根据Chaplan等(1994)，将Von Frey阈值转化为最大可能作用的百分比(％MPE)。下列方程用于计算％MPE：

试验物的给药

在Von Frey试验前将试验物注射(皮下、腹膜内、静脉内或口服)给予大鼠，试验化合物给药与Von Frey试验时间间隔根据所试验的化合物的性质而变。

扭体试验

对小鼠腹膜内给药时，乙酸会引起腹部收缩。然后呈现典型的机体伸展。用了镇痛药后，则较少观察到所述运动，则该药选作潜在的良好侯选物。

只有出现下列情况才认为是完全典型的扭体反射：所述动物未运动；后背略微降低；双爪足底表面可观察到。

(i)溶液制备

乙酸(AcOH)：将120μl乙酸加入19.88ml的蒸馏水中以得到最终体积为20ml、最终浓度为0.6％的AcOH。再将该溶液混合(涡旋)以备注射用。

化合物(药物)：根据标准方法制备各化合物并溶解于最适当的载体中。

(ii)溶液的给药

在试验前20、30或40分钟(根据化合物的种类及其特性)，以10ml/kg(考虑平均小鼠体重)将所述化合物(药物)经口、腹膜内(i.p.)、皮下(s.c.)或静脉内(i.v.)给药。当所述化合物中枢性：脑室内(i.c.v.)或鞘内(i.t.)给药时，给药量为5μl。

临试验前以10ml/kg(考虑平均小鼠体重)AcOH在两侧腹膜内(i.p.)给药。

(iii)试验

观察所述动物(小鼠)20分钟，记录(扭体反射)发生次数，实验结束时进行数据汇编。将小鼠放置在带接触衬垫(bedding)的单个“鞋盒”状笼中。通常同时观察4只小鼠：一只对照和三只给药。

Claims (18)

1.一种下式I化合物及其药学上可接受的盐和异构体：

其中

R¹选自

(i)苯基；

(ii)吡啶基

(iii)噻吩基

(iv)呋喃基

(v)咪唑基

和

(vi)三唑基

其中每个R¹的苯环和R¹杂芳环可以任选地并且独立地被1、2或3个选自以下的取代基进一步取代：直链和支链C₁-C₆烷基、NO₂、CF₃、C₁-C₆烷氧基、氯、氟、溴基和碘，在所述苯环和杂芳环上的取代可以在所述环系的任何位置发生。

2.一种权利要求1的化合物，其中所述芳环或杂芳环上的任选取代基选自NO₂、异丁基、CF₃、甲氧基、甲基或氯中的任一个。

3.一种权利要求1或2的化合物，所述选自以下任何一种化合物：

·4-[(4-苄基-1-哌嗪基)(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺二盐酸盐(化合物6)；

·4-{(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)[4-(4-碘代苄基)-1-哌嗪基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺二盐酸盐(化合物7)；

·4-{(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)[4-(3-吡啶基甲基)-1-哌嗪基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺二盐酸盐(化合物8)；和

·4-{(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)[4-(3-吡啶基甲基)-1-哌嗪基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物9)。

4.一种权利要求1-3任一项的化合物，所述化合物为(+)-对映体。

5.一种权利要求1-3任一项的化合物，所述化合物为(-)-对映体。

6.一种任一项前述权利要求的化合物，所述化合物为其盐酸盐、硫酸盐、酒石酸盐或柠檬酸盐形式。

7.一种用于治疗的权利要求1-6任一项的化合物。

8.一种权利要求7的化合物，其中所述治疗为治疗疼痛。

9.一种权利要求7的化合物，其中所述治疗针对胃肠道疾病。

10.一种权利要求7的化合物，其中所述治疗针对脊柱损伤。

11.一种权利要求7的化合物，其中所述治疗针对交感神经系统疾病。

12.权利要求1式I的化合物的用途，用于制备治疗疼痛的药物。

13.权利要求1式I的化合物的用途，用于制备治疗胃肠道疾病的药物。

14.权利要求1式I的化合物的用途，用于制备治疗脊柱损伤的药物。

15.一种药用组合物，所述药用组合物包含作为活性成分的权利要求1的式I化合物以及药理学和药学上可接受的载体。

16.一种治疗疼痛的方法，其中将有效量的权利要求1的式I化合物给予需要治疗疼痛的患者。

17.一种治疗胃肠道疾病的方法，其中将有效量的权利要求1的式I化合物给予患有所述胃肠道疾病的患者。

18.一种治疗脊柱损伤的方法，其中将有效量的权利要求1的式I化合物给予患有所述脊柱损伤的患者。