[go: up one dir, main page]

CN1511258A - 神经退行性疾病的监控方法和所用试剂盒 - Google Patents

神经退行性疾病的监控方法和所用试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN1511258A
CN1511258A CNA028066081A CN02806608A CN1511258A CN 1511258 A CN1511258 A CN 1511258A CN A028066081 A CNA028066081 A CN A028066081A CN 02806608 A CN02806608 A CN 02806608A CN 1511258 A CN1511258 A CN 1511258A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
kit
tyr
isotype
antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA028066081A
Other languages
English (en)
Inventor
米歇尔・格法德
米歇尔·格法德
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GEMAC SA
Original Assignee
GEMAC SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GEMAC SA filed Critical GEMAC SA
Publication of CN1511258A publication Critical patent/CN1511258A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及检测和监控神经退行性疾病的方法，该方法基于对抗所述疾病的抗原的A－同种型或M－同种型抗体的检测。本发明还涉及实施该方法所需的试剂盒。

Description

神经退行性疾病的监控方法和所用试剂盒
技术领域
本发明涉及神经退行性疾病的监控方法和所用试剂盒。本发明特别可用于医学领域和免疫学领域。
背景技术
尽管近五十年来医学有了长足发展，对公共卫生的投资的也相当巨大，但对于某些久已存在的或新近出现的疾病，严格地讲尚无法治愈。特别需要提到的是神经退行性疾病，例如：帕金森病、多发性硬化(MS)、肌萎缩侧索硬化(ALS)、阿尔茨海默病、自身免疫性疾病、肝炎和包括类风湿性关节炎(RA)在内的退行性和炎症性风湿病。
人们对这些疾病按照疾病分类学进行了诊断，已经了解了其病变过程的某些机理和衍变过程，并且给以对症治疗，虽然这些治疗手段通常非常昂贵，但是效果并不尽如人意。
多发性硬化是中枢神经系统多腔的脱髓鞘病理改变，该病变影响到大脑和脊髓的白质，其起病隐匿，病情的发展难以预知，致残率非常高。
在法国，每1000个壮年人中就有1人患有多发性硬化症(100,000个居民中有40到60例)，即有50000个法国人患有此症，而且每年还有2000个新发病例。全世界有2百万例该病患者。
该病在15岁到50岁之间的青壮年起病(特别是20岁到40岁之间)，女性的发病率是男性的两倍。
多发性硬化有三个不同的临床类型：间歇型、进展型和间歇进展型。
肌萎缩侧索硬化即沙尔科病是一种进展迅速且病因未明的神经性疾病。该病的特征是大脑、脑干和脊髓前角的运动神经元的退行性病变，而感觉神经元不受影响且智力不受损害，因此这种病人完全清楚他们疾病的发展和机能退化的过程。
和多发性硬化一样，肌萎缩侧索硬化的发病率也很高。肌萎缩侧索硬化的发生率比亨廷顿舞蹈病高5倍。每年死于肌萎缩侧索硬化的病人比死于多发性硬化或亨廷顿舞蹈病的多。
肌萎缩侧索硬化大多数常发生于45岁到70岁之间，男性的发病率比女性高1.5到2倍。该病的患者越来越年轻，有的患者在40岁之前就发病了。
世界上该病的发生率即每年的新发病例数呈增长趋势，增长的原因尚不明确。在法国，每10,000人中就有5人患有该病，每年大约出现1,100个新发病例。
该病发展迅速且总是致命性的。该病呈进行性加重，患者卧床不起，肋间肌和膈肌的病变导致呼吸困难，从而迅速导致死亡(3到5年)。
肌萎缩侧索硬化具有进行性的临床多相性，由此人们想到(这种病具有)生物多相性。
类风湿性关节炎原称萎缩性关节炎，是一种慢性进行性多关节炎症性疾病，是造成骨软骨损伤的原因，骨软骨损伤引起关节变形和关节僵硬，进而导致痛性机能丧失。
因而，肌萎缩侧索硬化是一种潜在的严重疾病，症状出现十年后，一半多的病人留下严重的残疾，且使他们的预期寿命减少数年。
在法国，该病的发生率大约为1％，是最常见的慢性炎症性风湿病。法国每年有7,000个新发病例，通常是年轻的女性。
脊椎关节炎(SAR)是一种慢性风湿病，表现为腰骶的病变，造成进行性的关节僵硬。这种免疫炎性疾病与组织相容性抗原B27的过量表达有关(在90％的病例中发现了这种抗原)。
所以从这些疾病的患病人数和公共卫生投入方面来看，其重要性都是不容忽视的。
迄今为止，还没有用来检测这些疾病的进程和/或预测其发展的生物学检验法。这些疾病的诊断目前仅采用临床检查方法，或者辅以其他检查手段来完成。因而，确实需要有一种专门的便利的进展情况诊断法，以便弥补临床上的不足。
发明内容
申请人已经证明，神经退行性疾病的发生与抗原修饰物有关，所述抗原修饰物是由免疫活性细胞整合的，免疫活性细胞本身可生产出A-同种型和/或M-同种型的循环抗体。这些抗体可抗下表1中所列的抗原。表1列出了所述的抗原修饰物和参与这些疾病的慢性发展过程的细菌因子。
                                  表1
    抗原     来源 抗体的同种型
脂肪酸(棕榈酸、油酸、肉豆蔻酸)法呢基半胱氨酸磷脂酰肌醇乙酰胆碱 以酰胺键连接的内源性化合物 M
壬二酸 经修饰的内源性化合物(酰胺键)     M
丙二醛残基 对内源性成分具有高反应性的产物 M
一氧化氮-半胱氨酸一氧化氮-酪氨酸一氧化氮-色氨酸一氧化氮-组氨酸二氧化氮-酪氨酸一氧化氮-苯基丙氨酸一氧化氮-精氨酸一氧化氮-天冬酰胺酸一氧化氮-蛋氨酸一氧化氮-肌氨酸一氧化氮-牛血清白蛋白 经·NO和ROE(活性氧核素)修饰的内源性成分 M
细菌抗原3(Ig3) 蜂房哈夫尼菌     A或M
细菌抗原5(Ig5) 铜绿色假单胞菌     A或M
细菌抗原12(Ig12) 摩氏摩根菌     A或M
细菌抗原13(Ig13) 变异变形杆菌     A或M
细菌抗原16(Ig16) 艾氏假单胞菌     A或M
细菌抗原17(Ig17) 戴氏柠檬酸杆菌     A或M
细菌抗原19(Ig19) 肺炎克雷白杆菌     A或M
因此，这些抗体的检测可作为神经退行性疾病的常规诊断和监控内容的一部分。
检测生物体液中这些抗原的方法包括如下步骤：
-使所述体液与下列各种抗原接触：
Pal、Ole、Myr、PI、MAD、Ach、FarCys、Aze、NO-Cys、NO-Tyr、NO-Trp、NO-His、NO2-Tyr、NO-Phe、NO-Arg、NO-Asn、NO-Met、NO-Cr、NO-BSA、Ig3、Ig5、Ig12、Ig13、Ig16、Ig17、Ig19，和
-使所述抗原与相应的抗体选择性地形成的复合物显现。
如表1所示，若检测到抗细菌抗原“Ig”的抗体存在，则该抗体可能是A-同种型和/或M同种型的。
除了牛血清白蛋白被选择性地亚硝酰化以外，非细菌抗原都有利地形成了结合体。
在本发明中，术语“结合抗原”的含义是一种与载体分子特别是牛血清白蛋白结合的抗原，例如Pal、FarCys、NO-Cys等，这种结合可以是直接地，也可以是通过戊二醛或戊二酸酐结合的。如Boullerne等(1995，1996)以及Geffard等(1998)所述，这种结合方法是本技术领域的技术人员所熟知的。
通过声波裂解表1所示细菌的培养物可获得细菌抗原。
生物体液具体可以是血清、血浆、全血、尿液、脑脊液。
所用的方法可以有利地是“三明治”型的。
可借助被标记的A-或M-同种型抗人免疫球蛋白抗体来使选择性地形成的复合物显现，所述标记为例如荧光标记、生物素/链酶抗生物素蛋白系、(放射性)同位素或酶。
借助适当的固体支持物可方便地实施本发明的方法。
任何适于处理细胞悬浮液的装置都可用做固体支持物，优选管、特定的磁性支持体或刚性或柔性的带有微孔的微量滴定板，该微量滴定板由聚乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯或硝化纤维制成。
如果用含NH2端基的预先活化的微量滴定板，就不需要使抗原与载体分子“结合”。
“带有(放射性)同位素的抗体”这种表述的含义是，在该抗体结构的适当元素例如酪氨酸残基组分上，或在结合在该抗体上的适当基团上带有放射性同位素，通过计算相应于该同位素的放射性，可以将该抗体检测出来。
如果所述抗体与酶结合，则借助适当的试剂就可以定量测量该抗体。
选择底物和试剂，从而使在酶的作用下该底物和试剂发生的一步或多步反应的最终产物是：
-有色物质或荧光物质，这些物质分散于围绕细胞的液体介质中，它们分别是最后分光光度法或荧光测定检测的对象，或
-不溶性有色物质，该物质沉积在细胞上以及细胞所附着的壁上，它们是反射光光度测定法或视觉检测的对象，选择性地将其与标准染色范围相对比。
如果用放射性同位素，例如碘125，可采用任何适宜的方法在γ计数器中测定待检样品的放射性。
如果用酶，通过在所述固体支持物中加入一种溶液而得到有色或荧光产物，所述溶液含有该酶的底物及一种或多种辅助试剂，如上所述，最终可获得溶于该介质的有色产物、不溶性有色产物或可溶性荧光产物。然后借助仪器检测从经过这种处理的样品中发出的光信号，所述仪器分别是适用于不同情况的发射光度计、反射光度计或荧光计。当固体支持物是微量滴定板时，采用生物实验室中常用的自动读数器可以顺序读取同一滴定板所有的孔中的光信号。
酶可以采用碱性磷酸酶，当最后用分光光度计读数时，优选该酶的底物为磷酸对硝基苯酯，当用荧光计读数时，优选底物为4-甲基-2，4-二羟基肉桂基磷酸酯，或采用5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯以得到不溶性有色反应产物。类似地β-半乳糖可用做酶，其底物优选为邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷脂。
对于抗下列抗原的抗体的检测尤其有助于多发性硬化的诊断，这些抗原包括：PI、Ach、Aze、NO-Cys、NO-Tyr、NO-Trp、NO2-Tyr、NO-Asn、NO-Met、Ig5(A-同种型抗体)、Ig12(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig13(A-同种型抗体)、Ig16(A-同种型抗体)、Ig17(M-同种型抗体)和Ig19(A-同种型抗体)。抗NO2-Tyr、NO-Tyr、Ach和Ig16(A-同种型抗体)抗原的抗体的量化有助于识别多发性硬化的具体类型(进展型、间歇型、间歇进展型)。
类似地，对于抗下列抗原的抗体的检测有助于肌萎缩侧索硬化的诊断，并可根据抗体滴定的函数来区分上述三类疾病，所述抗原包括：Ole、PI、MAD、Aze、NO-Cys、FarCys、Ig3(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig5(A-同种型抗体)、Ig12(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig13(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig16(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig17(A-同种型抗体和M-同种型抗体)。
抗下列抗原的抗体的检测有助于类风湿性关节炎的诊断，这些抗原包括：Pal、Ole、Myr、PI、MAD、FarCys、Aze、NO-Cys、NO-Phe、Ig3(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig5(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig12(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig13(M-同种型抗体)和Ig19(A-同种型抗体)。
本说明书和权利要求中将用到以下缩写词：
BSA°：牛血清白蛋白
G°：戊二醛残基
GA°：戊二酸酐残基
PBS°：磷酸盐缓冲液
OPD°：邻苯二胺
H2O2°：过氧化氢
H2SO4°：硫酸
PI°：磷脂酰肌醇
CaCl2°：氯化钙
NaCl°：氯化钠
OD°：光密度
HSA°：人血清白蛋白
HSA-EA°：结合有乙二胺的人血清白蛋白
Ig°：免疫球蛋白
Ach：乙酰胆碱
Ole°：油酸
Pal°：棕榈酸
Myr°：肉豆蔻酸
FarCys：法呢基半胱氨酸
Figure A0280660800101
MDA°：丙二醛
(脂质过氧化所得的新抗原决定基)
(其中R＝蛋白质)
NO-Cys°：一氧化氮-半胱氨酸
(半胱氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800103
NO-Trp°：一氧化氮-色氨酸
(色氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800104
NO-Asn°：一氧化氮-天冬酰氨酸
(天冬酰氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
NO-Tyr°：NO-Trp
(酪氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
NO2-Tyr°：二氧化氮-酪氨酸
(过氧亚硝酸盐NO+O2-形成所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800112
NO-His°：一氧化氮-组氨酸
(组氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800113
NO-Phe°：一氧化氮-苯丙氨酸
(苯丙氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
NO-Met°：一氧化氮-蛋氨酸
(蛋氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
NO-Arg：一氧化氮-精氨酸
(精氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800116
NO-Cr：一氧化氮-肌氨酸
(肌氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
优选的抗Ig的抗体可与过氧化物酶以常规方式结合。用于显示与抗Ig的抗体结合的过氧化物酶的试剂中含有作为该酶的底物的过氧化氢，而且含有适宜的色原如邻苯二胺、3，3’-二氨基联苯胺或TMB(3，3’，5，5’-四甲基联苯胺)以得到不溶性的最终反应产物，甚至含有对羟基苯丙酸以得到溶于该介质的荧光反应产物。可用硫酸终止此比色反应。
本发明另一个优选的实施方式是可与乙酰胆碱脂酶结合的抗免疫球蛋白抗体的应用。
乙酰胆碱脂酶与该抗体的结合方法优选由法国专利No.2,550,799所述的方法演变而来，或优选采用大致包括以下步骤的方法：利用已知技术制备该抗体片段，然后与适当的异双官能团试剂反应进行酶的修饰，最后使由前两个步骤得到的产物相结合。
酶活性的显示优选采用熟知的方法，根据不同的试验，如Anal.Chem.(分析化学)57(1985)1170-1173所描述的方法，可以采用作为该酶的底物的乙酰硫胆碱和埃尔曼氏(Ellman’s)试剂，或采用5，5’-二硫-2-硝基苯甲酸作为色原体。
所述色原体是水溶性盐。
本发明的另一个主题是实施上述方法所用的试剂盒，这种试剂盒有利地含有：
-下列各种抗原：Pal、Ole、Myr、PI、MAD、Ach、FarCys、Aze、NO-Cys、NO-Tyr、NO-Trp、NO-His、NO2-Tyr、NO-Phe、NO-Arg、NO-Asn、NO-Met、NO-Cr、NO-BSA、Ig3、Ig5、Ig12、Ig13、Ig16、Ig17和Ig19；
-选择性地，如上所述的至少一种人的A-同种型和/或M-同种型抗免疫球蛋白抗体。
这种试剂盒还可包括适当的固体支持物。
这个试验特别可以：
-进行疾病的早期诊断，尤其是针对危险人群，因而不会延误治疗；
-监控疾病的进展，从而可以调整治疗方案。
对于抗下列抗原的抗体的检测尤其有助于多发性硬化的诊断，这些抗原包括：PI、Ach、Aze、NO-Cys、NO-Tyr、NO-Trp、NO2-Tyr、NO-Asn、NO-Met、Ig5(A-同种型抗体)、Ig12(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig13(A-同种型抗体)、Ig16(A-同种型抗体)、Ig17(M-同种型抗体)和Ig19(A-同种型抗体)。抗NO2-Tyr、NO-Tyr、Ach和Ig16(A-同种型抗体)抗原的抗体的量化有助于识别多发性硬化的具体类型(进展型、间歇型、间歇进展型)。
类似地，对于抗下列抗原的抗体的检测有助于肌萎缩侧索硬化的诊断，并可根据抗体滴定的函数来区分上述三类疾病，所述抗原包括：Ole、PI、MAD、Aze、NO-Cys、FarCys、Ig3(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig5(A-同种型抗体)、Ig12(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig13(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig16(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig17(A-同种型抗体和M-同种型抗体)。
抗下列抗原的抗体的检测有助于类风湿性关节炎的诊断，这些抗原包括：Pal、Ole、Myr、PI、MAD、FarCys、Aze、NO-Cys、NO-Phe、Ig3(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig5(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig12(A-同种型抗体和M-同种型抗体)、Ig13(M-同种型抗体)和Ig19(A-同种型抗体)。
本说明书和权利要求中将用到以下缩写词：
BSA：  牛血清白蛋白
G：    戊二醛残基
GA：   戊二酸酐残基
PBS：  磷酸盐缓冲液
OPD：  邻苯二胺
H2O2： 过氧化氢
H2SO4：硫酸
PI：   磷脂酰肌醇
CaCl2：氯化钙
NaCl： 氯化钠
OD：    光密度
HSA：   人血清白蛋白
HSA-EA：结合有乙二胺的人血清白蛋白
Ig：    免疫球蛋白
Ach：   乙酰胆碱
Ole：   油酸
Pal：   棕榈酸
Myr：   肉豆蔻酸
FarCys：法呢基半胱氨酸
MDA：   丙二醛
(脂质过氧化所得的新抗原决定基)
(其中R＝蛋白质)
NO-Cys：一氧化氮-半胱氨酸
(半胱氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
NO-Trp：一氧化氮-色氨酸
(色氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800144
NO-Asn：一氧化氮-天冬酰氨酸
(天冬酰氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800145
NO-Tyr：NO-Trp
(酪氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800151
NO2-Tyr：二氧化氮-酪氨酸
(过氧亚硝酸盐NO+O2-形成所得的新抗原决定基)
NO-His：一氧化氮-组氨酸
(组氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800153
NO-Phe：一氧化氮-苯丙氨酸
(苯丙氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
NO-Met：一氧化氮-蛋氨酸
(蛋氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
Figure A0280660800155
NO-Arg：一氧化氮-精氨酸
(精氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
NO-Cr：一氧化氮-肌氨酸
(肌氨酸亚硝酰化所得的新抗原决定基)
然后用如下方式表示相对于对照组数量的结果：
抗体滴度＝(血清的OD-对照组的平均OD)/对照组的平均OD
第五节：抗法呢基-半胱氨酸抗体的检测
选用Maxisorp微量滴定板，由FarCys-BSA结合物(根据下面第7节中所描述的针对脂肪酸的技术，用FarCys活化氯甲酸乙酯，再与BSA结合制备而成)在pH9.6的碳酸盐缓冲液中形成20μg/ml的溶液(空白反应：BSA)，在每孔中滴入该溶液。将该孔板于4℃下搅拌过夜。用PBS冲洗3次。然后向各孔中加入含有27g/l的氯化钠和2g/l脱脂BSA的PBS缓冲液，37℃下放置1小时，以使蛋白质在各孔的表层饱和。用PBS冲洗3次。
在含有27g/l的氯化钠和2g/l脱脂BSA的PBS缓冲液中将待测血清稀释到1/250，然后将该待测血清加入各孔，在37℃下孵育2小时。用PBS冲洗3次。
最后，由用过氧化物酶标记的人的抗IgM抗体(参考号75061，Sanofi Pasteur有售)在含有Tween和1g/l BSA的PBS缓冲液中形成1/5,000的溶液，然后向各孔中加入该溶液，再在37℃下孵育1小时。用含有Tween的PBS冲洗孔板3次。
翻转孔板清空各孔。向各孔中加入显色剂(在20ml的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液中，加入过氧化氢10μl和4％的OPD 0.5ml)，然后在暗处显色10分钟。用50μl 4N的硫酸终止反应，在492nm处读取OD值。
然后用如下方式表示相对于对照组数量的结果：
抗体滴度＝(血清的OD-对照组的平均OD)/对照组的平均OD
第六节：抗丙二醛抗体的检测
选用Maxisorp微量滴定板，由MDA-BSA结合物(根据Amara等(1995)描述的方法制备而成)在pH 9.6的碳酸盐缓冲液中形成80μg/ml的溶液(空白反应：BSA)，每孔中滴入该溶液。将该孔板于4℃下搅拌过夜。然后向各孔中加入含有Tween，、10％甘油和5g/l BSA的PBS缓冲液，37℃下放置1小时，以使蛋白质在各孔的表层饱和。用PBS冲洗3次。
在含有Tween和5g/l BSA的PBS缓冲液中将待测血清稀释到1/1,000，然后将该待测血清加入各孔，在37℃下孵育2小时用含有Tween的PBS冲洗孔板3次。
最后，由用过氧化物酶标记的人的抗IgM抗体(参考号75061，Sanofi Pasteur有售)在含有Tween和5g/l BSA的PBS缓冲液中形成1/5,000的溶液，然后向各孔中加入该溶液，再在37℃下孵育1小时。用含有Tween的PBS冲洗孔板3次。
翻转孔板清空各孔。向各孔中加入显色剂(在20ml的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液中，加入过氧化氢10μl和4％的OPD 0.5ml)，然后在暗处显色10分钟。用50μl 4N的硫酸终止反应，在492nm处读取OD值。
然后用如下方式表示相对于对照组数量的结果：
抗体滴度＝(血清的OD-对照组的平均OD)/对照组的平均OD
第七节：抗乙酰胆碱抗体的检测
选用Maxisorp微量滴定板，由Ole-BSA、Pal-BSA或Myr-BSA结合物(根据Maneta等(1987)、Amara等(1994)a和b、Constans等(1995)、Boulleme等(1996)描述的方法制备而成)在pH9.6的含0.001M CaCl2的碳酸盐缓冲液形成50μg/ml的溶液(空白反应：脱脂BSA)，将该溶液滴入每个孔中。将该孔板于4℃下搅拌过夜。用含0.001M CaCl2的PBS冲洗孔板3次。
在含有0.001M CaCl2和1g/l脱脂BSA的PBS缓冲液中将待测血清稀释到1/1,000，然后将该待测血清加入各孔，在37℃下孵育2小时用含有Tween的PBS冲洗孔板3次。
最后，由用过氧化物酶标记的人的抗IgM抗体(参考号75061，Sanofi Pasteur有售)在含有0.001M CaCl2和1g/l脱脂BSA的PBS缓冲液中形成1/5,000的溶液，然后向各孔中加入该溶液，再在37℃下孵育1小时。用含有Tween的PBS冲洗孔板3次。
翻转孔板清空各孔。向各孔中加入显色剂(在20ml的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液中，加入过氧化氢10μl和4％的OPD 0.5ml)，然后在暗处显色10分钟。用50μl 4N的硫酸终止反应，在492nm处读取OD值。
然后用如下方式表示相对于对照组数量的结果：
抗体滴度＝(血清的OD-对照组的平均OD)/对照组的平均OD
第8节：抗细菌抗原抗体的检测
选用Maxisorp微量滴定板。每孔中滴入34μg/ml的细菌抗原溶菌液，该溶菌液由声波裂解相应的细菌(参见表1)培养物并在溶于pH 9.6的碳酸盐缓冲液而获得(空白反应：BSA)。将该孔板于4℃下搅拌过夜。然后想各孔中加入含有5g/l BSA的PBS缓冲液，37℃下放置1小时，以使蛋白质在各孔的表层饱和。用用含有Tween的PBS冲洗3次。
在含有Tween和2.5g/l BSA的PBS缓冲液中将待测血清稀释到1/500，然后将该待测血清加入各孔，在37℃下孵育2小时，用含有Tween的PBS冲洗孔板3次。
最后，由用过氧化物酶标记的人的抗IgM抗体(参考号75041和75061，Sanofi Pasteur有售)在含有Tween和2.5g/l BSA的PBS缓冲液中形成1/5,000的溶液，然后向各孔中加入该溶液，再在37℃下孵育1小时。用含有Tween的PBS冲洗孔板3次。
翻转孔板清空各孔。向各孔中加入显色剂(在20ml的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液中，加入过氧化氢10μl和4％的OPD 0.5ml)，然后在暗处显色10分钟。用50μl 4N的硫酸终止反应，在492nm处读取OD值。
然后用如下方式表示相对于对照组数量的结果：
抗体滴度＝(血清的OD-对照组的平均OD)/对照组的平均OD
实施例1：多发性硬化患者循环抗体的定量测定
下表1集中了用上述各节的方法对大量受检对象所做的免疫酶试验的结果。
                      表1
    结合物 例数：多发性硬化/对照     p
    Pal     755/238     0.0095
    Myr     730/234     0.0302
    Ole     1399/226     0.0115
    FarCys     718/235     ＜0.0001
    Aze     1459/232     ＜0.0001
    NOCys     1314/234     ＜0.0001
    NOTyr     279/135     ＜0.0001
    NO2Tyr     251/126     0.0067
    NOTrp     288/148     ＜0.0001
    NOMet     218/101     0.0022
    NOHis     266/147     ＜0.0001
    NOPhe     243/116     ＜0.0001
    NOAsn     180/101     0.0092
    NOArg     177/81     0.0033
    NOBSA     264/135     0.6784
    NOCr     108/46     0.0718
    MDA     670/206     ＜0.0001
    Ach     731/229     0.0001
    PI     1387/209     ＜0.0001
    Ig3*     658/219     ＜0.0001
    Ig5*     670/222     0.0010
    Ig16*     670/218     0.0040
    Ig12*     670/221     0.0524
    Ig13*     670/221     0.2023
    Ig17*     670/222     0.9243
    Ig19*     299/95     0.9785
    Ig3**     657/226     ＜0.0001
    Ig5**     669/222     0.0009
    Ig16**     669/225     0.0909
    Ig12**     669/223     0.9913
    Ig13**     669/220     0.1731
    Ig17**     668/222     0.0133
    Ig19**     299/97     0.7493
*M-同种型抗体
**A-同种型抗体
对于多发性硬化，33种抗体中有23种的抗体反应有统计学意义。
作为例子，我们将多发性硬化与作为对照的神经退行性疾病的抗NO-Cys的抗体反应的特异性进行了对比，在这些作为对照的神经退行性疾病中，肌萎缩性侧索硬化、癫痫症和帕金森病的发展迅速。结果表明这种反应在多发性硬化的不同病理类型之间有显著的差异。
下表2显示了16种重要的结合物在多发性硬化(MS)不同类型(P：进展型；R：间歇型；RP：间歇进展型)间的关系。
                                         表2
结合物 例数：MS   p1P/CON 例数：MS R  p1/CON 例数：MS RP  p1/CON 例数：MS P/   p2R/RP
AzeNOCysNOTyrNO2TyrNOTrpNOMetNOAsnAchPIIg12*Ig17*Ig5**Ig16**Ig12**Ig13**Ig19** 259/232    0.0032240/234    0.007836/135     0.076239/126     0.382938/148     0.517736/101     0.871825/101     0.5167117/229    0.5938253/209  ＜0.0001110/221    0.1162110/222    0.0002109/222    0.0549109/225    0.2218109/223    0.1433109/220    0.640750/97      0.2028 164/232     0.0046152/234   ＜0.000153/135    ＜0.000159/126      0.009654/148    ＜0.000149/101      0.000549/101      0.0065112/229   ＜0.0001161/209   ＜0.0001107/221     0.0412107/222     0.4582107/222     0.9743107/225     0.0067107/223     0.0312107/220     0.000173/97       0.0173 111/232     0.4149111/234     0.007340/135    ＜0.000140/126      0.031139/148      0.089939/101      0.957434/101      0.698271/229      0.1375109/209     0.104068/221      0.485868/222      0.282768/222      0.001668/225      0.299768/223      0.223168/220      0.154342/97       0.8779 259/164/111   0.0343240/152/111   0.004636/53/40      0.049439/59/40      0.040938/54/39      0.000636/49/39      0.039325/49/34      0.0380117/112/71  ＜0.0001253/161/109   0.0117110/107/68    0.0290110/107/68    0.0123109/107/68    0.0406109/107/68    0.0491109/107/68    0.0185109/107/68    0.012450/73/42      0.0151
1秩和检验法                                  *M-同种型
2H检验法                                     **A-同种型
图1显示了各型多发性硬化和对照组数据的分布
抗原            NO2Tyr     NOTrp     Ach          Ig161
p2              0.0409      0.0006    ＜0.0001     0.0491
例数：MS P      39          38        117          109
例数：MS R      59          54        112          107
例数：MS RP     40          39        71           68
例数：对照组    126         148       229          225
(1A-同种型抗体；2H检验法)
每种结合物以特定的方式鉴别多发性硬化的临床类型：
抗NO2-Tyr抗体特别适用于鉴别进展型和间歇进展型多发性硬化(这两组样品之间秩和检验的p＝0.0167)。
进展型多发性硬化的检测值较低。
对于鉴别进展型和间歇型多发性硬化，抗NO-Trp抗体是较好的指示剂(秩和检验的p＜0.0001)。
抗Ach抗体适用于鉴别间歇型多发性硬化和另外两型多发性硬化(秩和检验的p＜0.0001)。
抗A-同种型Ig16抗体适用于鉴别进展型和间歇型多发性硬化(秩和检验的p＜0.01)。
这些循环抗体能够用于鉴别各型多发性硬化，重要的是，还能够用于鉴别由一种进展型向另一种类型(间歇型/进展型)的转变。用现有的其他任何临床或研究方法都不可能鉴别这种转变。
实施例2：肌萎缩侧索硬化患者循环抗体的定量测定
图2-4显示了肌萎缩侧索硬化的3种类型：
1型，占血清试验(总数为118)的39％，特点是抗原FarCys、Ig3、Ig5、Ig16、Ig12、Ig13的测定值较高，且Ig17的测定值较低(所有这些检测到的Ig抗体都是A-同种型)，见图2；
2型，占血清试验的34％，特点是所有21种抗原的测定值均较低(19种抗原的中位数＜0)。只有FarCys和PI的含量与对照组相同，见图3；
3型，占血清试验的27％，特点是抗原Ole、Aze、MDA、PI、NO-Cys、Ig3、Ig16、Ig12、Ig13、Ig17的测定值较高，(所有这些检测到的Ig抗体都是M-同种型)，且Ig15的测定值较低(检测到的这种抗体是A-同种型)，见图4。
上述生物学特点对应于肌萎缩侧索硬化的各种进展类型。
此外，在疾病的临床发展过程中，80％的受检患者的疾病类型没有发生改变。
实施例3：类风湿性关节炎患者循环抗体的定量测定
在类风湿性关节炎(RA)(所有的阶段及发展的整个过程)中，重要的抗体是抗以下抗原的抗体：脂肪酸、壬二酸、法呢基半胱氨酸、丙二醛、磷脂酰肌醇、一氧化氮-半胱氨酸、一氧化氮-苯丙氨酸和免疫球蛋白Ig3(A-同种型和M-同种型抗体)、Ig5(A-同种型和M-同种型抗体)、Ig12(A-同种型和M-同种型抗体)、Ig13(M-同种型抗体)、Ig17(M-同种型抗体)和Ig19(A-同种型抗体)，如下表3所示：
                     表3
    结合物   对照组例数   RA例数     P
    Pal     238     251     ＜0.0001
    Myr     234     251     ＜0.0001
    Ole     226     251     ＜0.0001
    FarCys     235     250     0.0005
    Aze     232     251     ＜0.0001
    MDA     206     239     ＜0.0001
    Ach     229     251     0.9593
    PI     209     251     ＜0.0001
    NOCys     234     251     ＜0.0001
    NOTyr     135     86     0.1471
    NO2Tyr     126     98     0.7411
    NOTrp     148     88     0.2906
    NOMet     101     84     0.2822
    NOHis     147     100     0.6778
    NOPhe     116     86     0.0376
    NOAsn     101     86     0.7968
    NOArg     81     86     0.8052
    NOBSA     135     100     NS
    NOCr     46     77     0.2909
    Ig3*     219     248     ＜0.0001
    Ig5*     222     251     0.0002
    Ig16*     218     251     0.0772
    Ig12*     221     251     ＜0.0001
    Ig13*     221     251     0.0003
    Ig17*     222     251     0.0005
    Ig19*     95     133     0.8907
    Ig3**     226     248     ＜0.0001
    Ig5**     222     251     0.0009
    Ig16**     225     251     0.2308
    Ig12**     223     251     0.0140
    Ig13**     220     251     0.0967
    Ig17**     222     251     0.2993
    Ig19**     97     133     0.0363
*M-同种型抗体
**A-同种型抗体
这表明M-同种型循环抗体的滴度有助于类风湿性关节炎患者的监控。
参考文献
·AMARA A.，CHAUGIER C.和GEFFARD M.，Autoantibodiesdirected against conjugated fatty acids in sera of HIV-1 infected patients(感染HIV-1的患者血清中抗结合脂肪酸的自身抗体)，AIDS(艾滋病)，(1994a)8，711-713。
·AMARA A.，CHAUGIER C.，RAGNAUD J.-M.和GEFFARD M.，Circulating autoantibodies directed against conjugated fatty acids in sera ofHIV-1 infected patients(感染HIV-1的患者的血清中抗结合脂肪酸的循环自身抗体)，Clinical and Experimental Immunology(临床和实验免疫学)，(1994 b)96，379-383。
·AMARA A.，CONSTANS J.，CHAUGIER C.，SEBBAN A.，DUBOURG L.，PEUCHANT E.，PELLEGRIN J.L.，LENG B.，CONRI C.和GEFFARD M.，Autoantibodies to malondialdehyde-modified epitope inconnective tissue diseases and vasculitides(结缔组织疾病和血管病中丙二醛修饰的抗原决定基的自身抗体)，Clinical and Exp.Immunol.，(1995)101，1-6。
·BOULLERNE A.，PETRY K.G.，MEYNARD M.和GEFFARD M.，Indirect evidence for NO involvement in multiple sclerosis bycharacterization of circulating antibodies directed against conjugatedS-nitrosocysteine(NO参与以抗结合S-亚硝酰半胱氨酸的循环抗体为特征的多发性硬化的间接证据)，J.of Neuroimmunol(神经免疫学杂志)，(1995)60，117-124。
·BOULLERNE A.I.，PETRY K.G.和GEFFARD M.，Circulatingantibodies directed against conjugated fatty acids in sera of patients withmultiple sclerosis(多发性硬化患者的血清中抗结合脂肪酸的循环抗体)，J.of Neuroimmunol.，(1996)65，75-81。
·BROCHET B.，FAIDERBE S.，AUDHUY S.，GOSSET I.，GEFFARDM.和ORGOGOZO J.M.，Antibodies against phosphatidylinositol in multiplesclerosis.Current Concepts in Multiple Sclerosis-proceedings of the 6thcongress of the ECTRIMS(多发性硬化中磷脂酰胆碱的循环抗体，ECTRIMS第6次会议论文——多发性硬化新概念)，(Wiethlter M.，Dichgans J.).MERTIN J.，Eds Excerpta Medica，Amsterdam，(1991)97-102。
·CONSTANS J.，CONRI C.，PELLEGRIN J.L.，SERGEANT C.，SIMONOFF M.，PEUCHANT E.，DUBOURG L.，THOMAS M.J.，PELLEGRIN I.，BROSSARD G.，BARBEAU P.，AMARA A.，GEFFARD M.，CLERC M.，FLEURY H.和LENG B.，Stress oxydatif and infection à VIH：un concept à préciser and une voie thérapeutique à explorer(《Oxidativestress and infection with HIV：a concept to be specified and a therapeuticroute to be explored》(氧化损伤与HIV感染：需澄清的概念及需探索的治疗途径))，Annales de Médecine Interne，(1995)146，514-520。
·DAVERAT P.，GEFFARD M.和ORGOGOZO J.M.，Identification andcharacterization of anti-conjugated azelaic acid antibodies in multiplesclerosis(多发性硬化中抗壬二酸抗体的识别和表征)，J.ofNeuroimmunology(神经免疫学杂志)，(1989)，22，129-134。
·FAIDERBE S.，CHAGNAUD J.L.，WAFFLART J.和GEFFARD M.，Autoanticorps dirigés contre un phospholipide membranaire dans les sérumsde malades porteurs de tumeurs malignes.(《Auto-antibodies directed againsta membrane phospholipid in the sera of ill subj ects having malignant tumours》(恶性肿瘤患者血清中抗膜磷脂的自身抗体))，CRAS，(1990)310，49-52。
·GEFFARD M.，BODET D.，CLAUDEPIERRE P.，METZGER J.M.和SIBILIA J.，Anticorps sériques circulants dirigés contre des antigènesmodifiés par le NO dans les affectiohs neurologiques和rhumatismales.(《Circulating serum antibodies directed against antigens modified by NO inneurological and rheumatic disease》(神经疾病和风湿病中抗NO修饰的抗原的血清循环抗体))，Immunoanal.Biol.Spec.，(1998)13，209-217。
·MANETA-PEYRET L.，DAVERAT P.，GEFFARD M.，CASSGANE C.和ORGOGOZO J.M.，Natural seric anti-fatty acid antibodies in multiplesclerosis(多发性硬化中天然丝胶蛋白抗脂肪酸抗体)，Neurosc.Letters(神经科学学报)，(1987)80，235-239。
·SOUAN M.L.，GEFFARD M.，LEBRUN-GRANDIE P.和ORGOGOZO J.M.，Detection of anti-acetylcholine antibodies in myasthenicpatients(肌萎缩患者抗乙酰胆碱抗体的检测)，Neurosc.Letters.(1986)64，23-28。

Claims (15)

1.检测生物体液中与神经退行性疾病的发生或发展有关的抗体的方法，该方法包括以下步骤：
-使所述体液与下列各种抗原接触：
Pal、Ole、Myr、PI、MAD、Ach、FarCys、Aze、NO-Cys、NO-Tyr、NO-Trp、NO-His、NO2-Tyr、NO-Phe、NO-Arg、NO-Asn、NO-Met、NO-Cr、NO-BSA、Ig3、Ig5、Ig12、Ig13、Ig16、Ig17、Ig19，和
-使所述抗原与相应的抗体选择性地形成的复合物显现。
2.检测生物体液中与神经退行性疾病的发生或发展有关的抗体的方法，该方法包括以下步骤：
-使所述体液与下列各种抗原接触：
PI、Ach、Aze、NO-Cys、NO-Tyr、NO-Trp、NO2-Tyr、NO-Asn、NO-Met、Ig5、Ig12、Ig13、Ig16、Ig17和Ig19，和
-使所述抗原与相应的抗体选择性地形成的复合物显现。
3.检测生物体液中与神经退行性疾病的发生或发展有关的抗体的方法，该方法包括以下步骤：
-使所述体液与下列各种抗原接触：
Ole、PI、MAD、Aze、NO-Cys、FarCys、Ig3、Ig5、Ig12、Ig13、Ig16和Ig17，和
-使所述抗原与相应的抗体选择性地形成的复合物显现。
4.检测生物体液中与神经退行性疾病的发生或发展有关的抗体的方法，该方法包括以下步骤：
-使所述体液与下列各种抗原接触：
Pal、Ole、Myr、PI、MAD、FarCys、Aze、NO-Cys、NO-Phe、Ig3、Ig5、Ig12、Ig13、Ig17和Ig19，和
-使所述抗原与相应的抗体选择性地形成的复合物显现。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中，除NO-BSA之外的非细菌抗原与载体分子相结合，所述载体分子优选牛血清白蛋白。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中，借助M-同种型或者有必要的话借助A-同种型的抗人免疫球蛋白抗体来显示选择性地形成的复合物，所述抗体优选用酶标记。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述的酶为氧化物酶。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，所述方法的实施借助固体支持物，所述固体支持物优选微量滴定板。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述退行性疾病包括：多发性硬化、肌萎缩侧索硬化、帕金森病、类风湿性关节炎或脊椎关节炎。
10.用于实施权利要求1的方法的试剂盒，所述试剂盒装有以下各种抗原：Pal、Ole、Myr、PI、MAD、Ach、FarCys、Aze、NO-Cys、NO-Tyr、NO-Trp、NO-His、NO2-Tyr、Ig3、Ig5、Ig12、Ig13、Ig16、Ig17和Ig19。
11.用于实施权利要求2的方法的试剂盒，所述试剂盒装有以下各种抗原：PI、Ach、Aze、NO-Cys、NO-Tyr、NO-Trp、NO2-Tyr、NO-Asn、NO-Met、Ig5、Ig12、Ig13、Ig16、Ig17和Ig19。
12.用于实施权利要求3的方法的试剂盒，所述试剂盒装有以下各种抗原：Ole、PI、MAD、Aze、NO-Cys、FarCys、Ig3、Ig5、Ig12、Ig13、Ig16和Ig17。
13.用于实施权利要求4的方法的试剂盒，所述试剂盒装有以下各种抗原：Pal、Ole、Myr、PI、MAD、FarCys、Aze、NO-Cys、NO-Phe、Ig3、Ig5、Ig12、Ig13、Ig17和Ig19。
14.根据权利要求10-13任一项所述的试剂盒，其中，除NO-BSA之外的非细菌抗原与载体分子相结合，所述载体分子优选牛血清白蛋白。
15.根据权利要求10-14任一项所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还装有至少一种M-同种型抗人免疫球蛋白抗体和/或至少一种A-同种型抗人免疫球蛋白抗体。
CNA028066081A 2001-03-16 2002-03-15 神经退行性疾病的监控方法和所用试剂盒 Pending CN1511258A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0103592A FR2822238B1 (fr) 2001-03-16 2001-03-16 Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives
FR01/03592 2001-03-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1511258A true CN1511258A (zh) 2004-07-07

Family

ID=8861210

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA028066081A Pending CN1511258A (zh) 2001-03-16 2002-03-15 神经退行性疾病的监控方法和所用试剂盒

Country Status (8)

Country Link
US (1) US7195881B2 (zh)
EP (1) EP1399743A2 (zh)
JP (1) JP2004530871A (zh)
CN (1) CN1511258A (zh)
CA (1) CA2441170A1 (zh)
FR (1) FR2822238B1 (zh)
NO (1) NO20034080L (zh)
WO (1) WO2002075274A2 (zh)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2822238B1 (fr) 2001-03-16 2003-08-29 Gemac Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
JP4662557B2 (ja) 2003-06-09 2011-03-30 レドックス−リアクティブ リエイジェンツ リミテッド ライアビリティー カンパニー 酸化還元反応による血漿タンパク質の結合特異性の改変方法
US7892751B2 (en) * 2003-06-09 2011-02-22 Redox-Reactive Reagents Llc Method of detecting or diagnosing of a neurodegenerative disease or condition
US9557325B2 (en) * 2003-06-09 2017-01-31 Redox-Reactive Reagents Llc Method of altering the binding specificity of proteins by oxidation-reduction reactions
WO2005009291A2 (en) 2003-07-23 2005-02-03 Synapse Biomedical, Inc. System and method for conditioning a diaphragm of a patient
US8338648B2 (en) * 2004-06-12 2012-12-25 Signum Biosciences, Inc. Topical compositions and methods for epithelial-related conditions
US9050005B2 (en) 2005-08-25 2015-06-09 Synapse Biomedical, Inc. Method and apparatus for transgastric neurostimulation
PL1976877T5 (pl) 2005-11-30 2017-09-29 Abbvie Inc Przeciwciała monoklonalne przeciwko białku amyloidu beta oraz ich zastosowania
US8691224B2 (en) 2005-11-30 2014-04-08 Abbvie Inc. Anti-Aβ globulomer 5F7 antibodies
US8676323B2 (en) * 2006-03-09 2014-03-18 Synapse Biomedical, Inc. Ventilatory assist system and methods to improve respiratory function
US20080097153A1 (en) * 2006-08-24 2008-04-24 Ignagni Anthony R Method and apparatus for grasping an abdominal wall
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008098001A2 (en) * 2007-02-05 2008-08-14 Synapse Biomedical, Inc. Removable intramuscular electrode
US20100311767A1 (en) 2007-02-27 2010-12-09 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
WO2008144578A1 (en) * 2007-05-17 2008-11-27 Synapse Biomedical, Inc. Devices and methods for assessing motor point electromyogram as a biomarker
WO2009059033A1 (en) * 2007-10-30 2009-05-07 Synapse Biomedical, Inc. Method of improving sleep disordered breathing
US8428726B2 (en) 2007-10-30 2013-04-23 Synapse Biomedical, Inc. Device and method of neuromodulation to effect a functionally restorative adaption of the neuromuscular system
MX336196B (es) 2010-04-15 2016-01-11 Abbvie Inc Proteinas de union a amiloide beta.
CN105348387B (zh) 2010-08-14 2020-08-25 Abbvie 公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
RU2693627C2 (ru) * 2017-11-03 2019-07-03 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента - Интеллект" Комбинации эдаравона для лечения ишемических повреждений мозга
US11471683B2 (en) 2019-01-29 2022-10-18 Synapse Biomedical, Inc. Systems and methods for treating sleep apnea using neuromodulation
FR3094492A1 (fr) * 2019-04-01 2020-10-02 Polyneuros Procédé de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique dégénérative par dosage immunologique
FR3094493A1 (fr) * 2019-04-01 2020-10-02 Polyneuros Procédé de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique auto-immune par dosage immunologique

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2550799B1 (fr) * 1983-08-17 1986-02-21 Commissariat Energie Atomique Compose marque par une enzyme, son procede de preparation et son utilisation en enzymoimmunologie
BE1006974A3 (fr) * 1993-04-23 1995-02-07 Anda Biolog Sa Procede de detection et/ou de quantification de differentes classes d'immunoglobulines specifiques d'une pathologie comportant une reponse auto-immunitaire.
FR2762602B1 (fr) * 1997-04-28 1999-06-04 Inst Nat Sante Rech Med Moyens pour la detection precoce de pathologies auto-immunes inflammatoires
FR2822238B1 (fr) 2001-03-16 2003-08-29 Gemac Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives

Also Published As

Publication number Publication date
CA2441170A1 (en) 2002-09-26
NO20034080D0 (no) 2003-09-15
FR2822238A1 (fr) 2002-09-20
NO20034080L (no) 2003-11-14
FR2822238B1 (fr) 2003-08-29
JP2004530871A (ja) 2004-10-07
WO2002075274A3 (fr) 2003-12-11
WO2002075274A2 (fr) 2002-09-26
US7195881B2 (en) 2007-03-27
EP1399743A2 (fr) 2004-03-24
US20040082015A1 (en) 2004-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1511258A (zh) 神经退行性疾病的监控方法和所用试剂盒
CN101048662A (zh) 阿尔茨海默氏病的检验方法及诊断试剂
CN1559005A (zh) 诊断分析
CN1258604C (zh) 一种用于检测非致病性或致病性a型流感病毒h5亚型病毒的试剂盒
CN1610831A (zh) 通过检测肿瘤发生和转移相关蛋白的糖基化变化诊断癌症的方法及使用其诊断癌症的试剂盒
CN86103610A (zh) 免疫复合物的检测方法和步骤
CN1806053A (zh) 对蛋白的结构同工型特异的配体的鉴定方法
CN1163753C (zh) 测定抗体的方法及抗体测定装置
CN1500140A (zh) 用于测试多种待分析物的装置及方法
CN1685236A (zh) N－11端截短的β－淀粉样蛋白的单克隆抗体、组合物、方法和用途
CN1217189C (zh) 测定全血样品中白细胞个数的方法
CN1527943A (zh) 过敏原微阵列分析
CN1100994C (zh) 基于检测谷光甘肽s转移酶的一种或多种同功酶来评估器官状态的快速测定法
CN101062939A (zh) 检测肝癌岩藻糖基化高尔基蛋白gp73的装置及试剂盒
CN1347501A (zh) 诊断传染性海绵状脑病的方法
CN1796997A (zh) 诊断ra的检测试剂盒、制备及完成质量检测标准的方法
CN1743849A (zh) 一种多肿瘤标志物并行检测的方法及试剂盒
CN1585900A (zh) 检测与胰腺胰岛细胞抗原分子和/或胰岛素反应的自身抗体
CN1926433A (zh) 用于检测psa的可活化游离形式的方法及其用于诊断前列腺的良性病理学和前列腺的腺癌的用途
CN1688886A (zh) 检测变应原蛋白质的方法
CN1189749C (zh) 检测液体样品中抗体的方法
CN1846133A (zh) 定量评价体液样品所含多肽的装置和方法以及检测病理状态的标志物
CN1313564C (zh) 一种经过表面修饰活化的上转换发光材料
CN1177937C (zh) 抗坏血酸的定量方法及定量用试剂
CN1240028A (zh) 检测抗p53抗体的测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication