CN1448405A - 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 - Google Patents
人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1448405A CN1448405A CN 02116263 CN02116263A CN1448405A CN 1448405 A CN1448405 A CN 1448405A CN 02116263 CN02116263 CN 02116263 CN 02116263 A CN02116263 A CN 02116263A CN 1448405 A CN1448405 A CN 1448405A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protein
- trail
- glu
- ser
- leu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 100
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 99
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 title claims 4
- 238000005215 recombination Methods 0.000 title claims 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title abstract description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims abstract description 98
- 102000046283 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 4
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 claims abstract description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 4
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 claims description 4
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 2
- QAODJPUKWNNNRP-DCAQKATOSA-N Arg-Glu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O QAODJPUKWNNNRP-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 2
- OFIYLHVAAJYRBC-HJWJTTGWSA-N Arg-Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O OFIYLHVAAJYRBC-HJWJTTGWSA-N 0.000 claims description 2
- VEAIMHJZTIDCIH-KKUMJFAQSA-N Arg-Phe-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O VEAIMHJZTIDCIH-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 2
- AMIQZQAAYGYKOP-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AMIQZQAAYGYKOP-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 2
- OPEPUCYIGFEGSW-WDSKDSINSA-N Asn-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OPEPUCYIGFEGSW-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 2
- KYQJHBWHRASMKG-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Cys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O KYQJHBWHRASMKG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims description 2
- XEDQMTWEYFBOIK-ACZMJKKPSA-N Asp-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XEDQMTWEYFBOIK-ACZMJKKPSA-N 0.000 claims description 2
- QNIACYURSSCLRP-GUBZILKMSA-N Asp-Lys-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QNIACYURSSCLRP-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- WWOYXVBGHAHQBG-FXQIFTODSA-N Asp-Met-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WWOYXVBGHAHQBG-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 2
- MVRGBQGZSDJBSM-GMOBBJLQSA-N Asp-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC(=O)O)N MVRGBQGZSDJBSM-GMOBBJLQSA-N 0.000 claims description 2
- YKLNMGJYMNPBCP-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Asp Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N YKLNMGJYMNPBCP-ACZMJKKPSA-N 0.000 claims description 2
- AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N Glu-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N 0.000 claims description 2
- IVGJYOOGJLFKQE-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N IVGJYOOGJLFKQE-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 2
- OQXDUSZKISQQSS-GUBZILKMSA-N Glu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OQXDUSZKISQQSS-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- OCJRHJZKGGSPRW-IUCAKERBSA-N Glu-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O OCJRHJZKGGSPRW-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 2
- MZZSCEANQDPJER-ONGXEEELSA-N Gly-Ala-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MZZSCEANQDPJER-ONGXEEELSA-N 0.000 claims description 2
- FCKPEGOCSVZPNC-WHOFXGATSA-N Gly-Ile-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 FCKPEGOCSVZPNC-WHOFXGATSA-N 0.000 claims description 2
- HJARVELKOSZUEW-YUMQZZPRSA-N Gly-Pro-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HJARVELKOSZUEW-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N His-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N 0.000 claims description 2
- SKYULSWNBYAQMG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SKYULSWNBYAQMG-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 2
- BXOLYFJYQQRQDJ-MXAVVETBSA-N His-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N BXOLYFJYQQRQDJ-MXAVVETBSA-N 0.000 claims description 2
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 claims description 2
- BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 2
- IBSGMIPRBMPMHE-IHRRRGAJSA-N Leu-Met-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O IBSGMIPRBMPMHE-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 2
- FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N Leu-Val-Arg Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AAKRWBIIGKPOKQ-ONGXEEELSA-N Leu-Val-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O AAKRWBIIGKPOKQ-ONGXEEELSA-N 0.000 claims description 2
- 108010062166 Lys-Asn-Asp Proteins 0.000 claims description 2
- ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- KYNNSEJZFVCDIV-ZPFDUUQYSA-N Lys-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KYNNSEJZFVCDIV-ZPFDUUQYSA-N 0.000 claims description 2
- PPNCMJARTHYNEC-MEYUZBJRSA-N Lys-Tyr-Thr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PPNCMJARTHYNEC-MEYUZBJRSA-N 0.000 claims description 2
- CNFMPVYIVQUJOO-NHCYSSNCSA-N Met-Val-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O CNFMPVYIVQUJOO-NHCYSSNCSA-N 0.000 claims description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Tyr Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 claims description 2
- SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 2
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 2
- FIDMVVBUOCMMJG-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO FIDMVVBUOCMMJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 2
- IXCHOHLPHNGFTJ-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N IXCHOHLPHNGFTJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 2
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 2
- UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 2
- RRVFEDGUXSYWOW-BZSNNMDCSA-N Ser-Phe-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O RRVFEDGUXSYWOW-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 2
- JLKWJWPDXPKKHI-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Asn Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O JLKWJWPDXPKKHI-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 2
- KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 2
- SDFUZKIAHWRUCS-QEJZJMRPSA-N Ser-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N SDFUZKIAHWRUCS-QEJZJMRPSA-N 0.000 claims description 2
- KIEIJCFVGZCUAS-MELADBBJSA-N Ser-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KIEIJCFVGZCUAS-MELADBBJSA-N 0.000 claims description 2
- TWLMXDWFVNEFFK-FJXKBIBVSA-N Thr-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O TWLMXDWFVNEFFK-FJXKBIBVSA-N 0.000 claims description 2
- QGXCWPNQVCYJEL-NUMRIWBASA-N Thr-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QGXCWPNQVCYJEL-NUMRIWBASA-N 0.000 claims description 2
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 claims description 2
- BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N Thr-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims description 2
- XVHAUVJXBFGUPC-RPTUDFQQSA-N Thr-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O XVHAUVJXBFGUPC-RPTUDFQQSA-N 0.000 claims description 2
- WSMVEHPVOYXPAQ-XIRDDKMYSA-N Trp-Ser-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N WSMVEHPVOYXPAQ-XIRDDKMYSA-N 0.000 claims description 2
- RYSNTWVRSLCAJZ-RYUDHWBXSA-N Tyr-Gln-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 RYSNTWVRSLCAJZ-RYUDHWBXSA-N 0.000 claims description 2
- KCPFDGNYAMKZQP-KBPBESRZSA-N Tyr-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCPFDGNYAMKZQP-KBPBESRZSA-N 0.000 claims description 2
- YMUQBRQQCPQEQN-CXTHYWKRSA-N Tyr-Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N YMUQBRQQCPQEQN-CXTHYWKRSA-N 0.000 claims description 2
- IEWKKXZRJLTIOV-AVGNSLFASA-N Tyr-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O IEWKKXZRJLTIOV-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 2
- QPOUERMDWKKZEG-HJPIBITLSA-N Tyr-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QPOUERMDWKKZEG-HJPIBITLSA-N 0.000 claims description 2
- KNYHAWKHFQRYOX-PYJNHQTQSA-N Val-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N KNYHAWKHFQRYOX-PYJNHQTQSA-N 0.000 claims description 2
- NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- 108010075431 glycyl-alanyl-phenylalanine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010028188 glycyl-histidyl-serine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010050475 glycyl-leucyl-tyrosine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 claims description 2
- 108010072637 phenylalanyl-arginyl-phenylalanine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 claims description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- 241000446313 Lamella Species 0.000 claims 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 claims 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 56
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 4
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 abstract description 3
- -1 arginines Acid, 6 histidines Chemical class 0.000 abstract description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 abstract description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 abstract description 3
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 abstract description 3
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 59
- 101710097160 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Proteins 0.000 description 11
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 101000830565 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Proteins 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 102000044949 human TNFSF10 Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000032271 Malignant tumor of penis Diseases 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 108091005956 Type II transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000005267 prostate cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL－170蛋白是一个包含氨基酸112－281 TRAIL蛋白的一个片段，在蛋白质一级结构中，N末端为脯氨酸，C末端为甘氨酸，含有11个精氨酸、6个组氨酸、11个赖氨酸、一个半胱氨酸，等电点PI＝9.27，为一碱性蛋白；该蛋白质的二级结构中包含两个反向平行的β片层；该蛋白的cDNA序列由510个核苷酸组成，编码170个氨基酸；该蛋白能够显著诱导肿瘤细胞的凋亡，杀死或/和抑制动物体内肿瘤细胞的生长，与国际上普遍使用的TRAIL95－281片段比较，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL－170蛋白具有分子量小、活性高的特点，在肿瘤治疗药物的制备中具有广阔的应用前景。
Description
发明领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用。
背景技术
TRAIL(TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand)/Apo-2L是1995年发现的能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡的细胞因子，属TNF超家族成员之一。人的TRAIL蛋白属于II型跨膜蛋白，它的一级结构由281个氨基酸组成，分子量为32kDa，其中胞浆区有17个氨基酸，跨膜区有21个氨基酸，胞外区则有243个氨基酸。
TRAIL蛋白的分布非常广泛，在心肌细胞、淋巴细胞、脾细胞、胸腺细胞、前列腺细胞、卵巢和小肠细胞上均有表达，但在正常的肝细胞、脑细胞和睾丸细胞上则不表达。TRAIL的胞外区可被金属蛋白酶割裂下来而成为可溶性的细胞因子，生物学功能研究证实，可溶性TRAIL蛋白可诱导不同来源的肿瘤细胞及病毒转化的细胞发生凋亡，包括肠癌、乳腺癌、黑色素瘤、肺癌、肾癌、中枢神经系统肿瘤、白血病、皮肤癌和多发性骨髓瘤细胞等。动物全身使用重组的可溶性TRAIL，可诱导所接种的肿瘤细胞发生凋亡、肿瘤生长受抑、提高荷瘤动物的存活期，而且在啮齿类和其它灵长类动物的体内实验中没有发现任何毒副作用。
目前国际上普遍使用的重组可溶性TRAIL包含一个氨基酸95～281的片段。该蛋白质分子量大、杀肿瘤细胞活性低，诱导50％细胞凋亡率的蛋白质浓度在200ng/ml以上。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有分子量小、活性高的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白；
本发明的另一目的在于该人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在制备肿瘤治疗药物中的应用。
本发明的技术方案如下：
本发明提供的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白是一个包含氨基酸112～281TRAIL蛋白的一个片段，在蛋白质一级结构中，N末端为脯氨酸，C末端为甘氨酸，含有11个精氨酸、6个组氨酸、11个赖氨酸、一个半胱氨酸，等电点PI＝9.27，为一碱性蛋白；人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的二级结构中包含两个反向平行的β片层；该蛋白的cDNA序列有510个核苷酸组成，编码170个氨基酸。
该人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的cDNA序列为序列1；
该人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的氨基酸序列为序列2。
本发明提供的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在制备肿瘤治疗药物中的应用，即可用于制备肿瘤治疗药物。
本发明提供的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白能显著诱导肿瘤细胞凋亡，杀死或/和抑制动物体内肿瘤细胞的生长；与国际上普遍使用的TRAIL95～281片段比较，TRAIL112～281具有分子量小、杀肿瘤细胞活性高(诱导50％细胞凋亡率的蛋白质浓度在10ng/ml左右)的特点，比TRAIL95～281蛋白的杀肿瘤细胞活性高20倍，是一个值得开发的潜在的抗肿瘤药物。
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的制备如下：
1.构建pGEX-4T-TRAIL-170质粒载体
根据已知的人TRAIL cDNA序列，设计了上游和下游两条寡聚核苷酸引物，上游引物为：CGG AAT TCC CCT AGT GAG AGA AAG AGG；下游引物为：CGG AAT TCTTAA CCA ACT AAA AAG GCC CC；以pSectagA-TRAIL为模板，用PCR方法扩增长度为510bp的TRAIL cDNA片段；将PCR产物进行回收、纯化，用T4 DNA Ligase连接过夜，克隆至pGEX-4T载体中，构建成pGEX-4T-TRAIL170质粒载体(图1，图1为pGEX-4T-TRAIL170质粒载体的构建示意图)；
2.将该质粒转化DH5α菌，筛选阳性克隆，得到表达人截短型重组可溶性TRAIL-170质粒的菌株，从菌株中提取质粒，将得到的质粒在3100测序仪上进行测序及DNA序列分析，结果证明：该质粒的cDNA序列与Gene Bank登录的TRAILcDNA全长序列中的421～930碱基序列完全相同；
将pGEX-4T-TRAIL-170质粒转化BL21大肠杆菌，加入IPTG(50μM)，在30℃振荡培养4小时，6000rpm离心10min，弃上清，PBS混悬细菌沉淀，加入溶菌酶(100μg/ml)，冰浴后超声波裂解菌体，16000rpm离心30min，收集上清，过谷胱甘肽-Sepharose-4B柱，再经凝血酶酶切，收集切割下来的蛋白溶液；该蛋白溶液即为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白；经SDS-PAGE电泳显示，所得的TRAIL-170蛋白纯度为85％以上，见图2，图2为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在大肠杆菌的表达和纯化的电泳图，图2中，1为未诱导的BL21菌株，2为诱导的BL21菌株，3为包涵体，4为纯化的TRAIL-170蛋白，5为GST蛋白，6为中分子量蛋白标准，由图2可知，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白纯度为85％以上；
经测定，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的生物学特性为：
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白是一个包含氨基酸112-281 TRAIL蛋白的一个片段，在蛋白质一级结构中，N末端为脯氨酸，C末端为甘氨酸，含有11个精氨酸、6个组氨酸、11个赖氨酸、一个半胱氨酸，等电点PI＝9.27，为一碱性蛋白；该蛋白的二级结构中包含两个反向平行的β片层；该人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的cDNA序列由510个核苷酸组成，编码170个氨基酸；
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的cDNA序列为序列1；
本发明人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的氨基酸序列为序列2。
附图说明附图1为pGEX-4T-TRAIL-170质粒载体的构建示意图；附图2为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在大肠杆菌的表达和纯化的电泳图；
1为未诱导的BL21菌株 2为诱导的BL21菌株
3为包涵体 5为GST蛋白
4为纯化的本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白
6为中分子量蛋白标准附图3-1至图3-8为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白诱导Jurkat细胞凋亡
的流式细胞术检测示意图，呈现剂量依赖性关系；本发明的人截短型重组可溶性
TRAIL-170蛋白处理组可显著诱导肿瘤细胞的凋亡；其中：附图3-1：未用TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞对照组，细胞的凋亡率为21.5％；附图3-2：100ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为89.55％；附图3-3：50ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为86.55％；附图3-4..25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为82.53％；附图3-5：12.5ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为79.53％；附图3-6：6.25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为66.68％；附图3-7：3.125ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为57.19％；附图3-8：1.56ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为45.53％；附图4-1至图4-8为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白诱导MCF7细胞凋亡的流式细胞检测示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著诱导肿瘤细胞的凋亡；附图4-1：未用TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞对照组，细胞的凋亡率为6.36％；附图4-2：1000ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为67.01％；附图4-3：500ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为55.29％；附图4-4：250ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为48.85％；附图4-5：100ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为44.35％；附图4-6：50ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为40.13％；附图4-7：25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为23.05％；附图4-8：12.5ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为17.81％；附图5为PBS组和本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组的肿瘤重量比
较示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著抑制小
鼠体内肿瘤细胞的生长，p＝0.049＜0.05；附图6为PBS组和本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组的肿瘤大小比
较示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著抑制小
鼠体内肿瘤细胞的生长，p＝0.023＜0.05。
具体实施方式
实施例1，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白具有杀伤肿瘤细胞作用的实验：
将纯化的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理各种不同的肿瘤细胞系，如Jurkat细胞系(人T淋巴细胞白血病细胞)、MCF-7细胞系(人乳腺癌细胞)、KU-8细胞系(人阴茎癌细胞)、U937细胞系(人髓样白血病细胞)、NCI-H929细胞系和IM-9细胞系(人骨髓瘤细胞)，以FITC-Annexin V和PI染色为细胞凋亡的检测指标，流式细胞术分析TRAIL-170诱导肿瘤细胞凋亡的情况，结果证明，TRAIL-170具有广泛的杀伤肿瘤细胞的作用，但不同类型的肿瘤细胞敏感程度不一样，其中，Jurkat细胞系和MCF-7细胞系对TRAIL-170的敏感性最高，诱导Jurkat细胞50％凋亡率的TRAIL170蛋白浓度在10ng/ml左右，见附图3-1至附图3-8和附图4-1至附图4-8；
附图3-1至图3-8为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白诱导Jurkat细胞
凋亡的流式细胞术检测示意图，呈现剂量依赖性关系；其中：附图3-1：未用TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞对照组，细胞的凋亡率为21.5％；附图3-2：100ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为89.55％；附图3-3：50ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为86.55％；附图3-4：25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为82.53％；附图3-5：12.5ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为79.53％；附图3-6：6.25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为66.68％；附图3-7：3.125ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为57.19％；附图3-8：1.56ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为45.53％；
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著诱导肿瘤细胞的凋亡；
附图4-1至图4-8为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白诱导MCF7细胞凋亡的流式细胞检测示意图；其中附图4-1：未用TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞对照组，细胞的凋亡率为6.36％；附图4-2：1000ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为67.01％；附图4-3；500ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为55.29％附图4-4：250ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为48.85％；附图4-5：100ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为44.35％；附图4-6：50ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为40.13％；附图4-7：25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为23.05％；附图4-8：12.5ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为17.81％；
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著诱导肿瘤细胞的凋亡；
实施例2，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白具有杀伤小鼠体内肿瘤细胞的作用的实验：
实验用动物：Balb/C小鼠，共10只，分成两组，每组5只，一组为PBS阴性对照，另一组为TRAIL-170蛋白处理组；将体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞，4×106/只)连同TRAIL-170蛋白(100μg/只)或PBS，注射于小鼠背部皮下，5天后同剂量TRAIL-170蛋白或PBS加强注射，21天后处死小鼠，测量形成肿瘤的大小和重量，结果显示，PBS组小鼠背部均有肿瘤生长，且大小均匀，而TRAIL-170蛋白处理的小鼠有两只背部未长肿瘤，一只肿瘤较小，两只肿瘤的大小同PBS组，将两组的数据进行t检验，证明二者有显著性差异，见附图5和附图6，附图5为PBS组和本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组的肿瘤重量比较示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著抑制小鼠体内肿瘤细胞的生长，p＝0.049＜0.05；附图6为PBS组和本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组的肿瘤大小比较示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著抑制小鼠体内肿瘤细胞的生长，p＝0.023＜0.05；说明TRAIL-170蛋白在体内可以发挥杀肿瘤细胞作用，抑制肿瘤的生长。
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的cDNA序列为序列1：cccctagtga gagaaagagg tcctcagaga gtagcagctc acataactgggaccagagga agaagcaaca cattgtcttc tccaaactcc aagaatgaaaaggctctggg ccgcaaaata aactcctggg aatcatcaag gagtgggcattcattcctga gcaacttgca cttgaggaat ggtgaactgg tcatccatgaaaaagggttt tactacatct attcccaaac atactttcga tttcaggaggaaataaaaga aaacacaaag aacgacaaac aaatggtcca atatatttacaaatacacaa gttatcctga ccctatattg ttgatgaaaa gtgctagaaatagttgttgg tctaaagatg cagaatatgg actctattcc atctatcaagggggaatatt tgagcttaag gaaaatgaca gaatttttgt ttctgtaacaaatgagcact tgatagacat ggaccatgaa gccagttttt tcggggcctttttagttggc
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的氨基酸序列为序列2：Pro Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His IleThr Gly Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn SerLys Asn Glu Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu SerSer Arg Ser Gly His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg AsnGly Glu Leu Val Ile His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr SerGln Thr Tyr Phe Arg Phe Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr LysAsn Asp Lys Gln Met Val Gln Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser TyrPro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys Ser Ala Arg Asn Ser Cys TrpSer Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr Ser Ile Tyr Gln Gly GlyIle Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile Phe Val Ser Val ThrAsn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala Ser Phe Phe GlyAla Phe Leu Val Gly
Claims (3)
1.一种人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白，其特征在于，该蛋白包含氨基酸112-281 TRAIL蛋白的一个片段，在蛋白质一级结构中，N末端为脯氨酸，C末端为甘氨酸，含有11个精氨酸、6个组氨酸、11个赖氨酸、一个半胱氨酸，等电点PI＝9.27，为一碱性蛋白；该蛋白质的二级结构中包含两个反向平行的β片层；TRAIL-170蛋白的cDNA序列由510个核苷酸组成，编码170个氨基酸。
2.按权利要求1所述的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白，其特征在于，该人截短型重组可溶性TRAIL-170的cDNA序列为：cccctagtga gagaaagagg tcctcagaga gtagcagctc acataactgggaccagagga agaagcaaca cattgtcttc tccaaactcc aagaatgaaaaggctctggg ccgcaaaata aactcctggg aatcatcaag gagtgggcattcattcctga gcaacttgca cttgaggaat ggtgaactgg tcatccatgaaaaagggttt tactacatct attcccaaac atactttcga tttcaggaggaaataaaaga aaacacaaag aacgacaaac aaatggtcca atatatttacaaatacacaa gttatcctga ccctatattg ttgatgaaaa gtgctagaaatagttgttgg tctaaagatg cagaatatgg actctattcc atctatcaagggggaatatt tgagcttaag gaaaatgaca gaatttttgt ttctgtaacaaatgagcact tgatagacat ggaccatgaa gccagttttt tcggggcctttttagttggc
该人截短型重组可溶性TRAIL-170的氨基酸序列为：Pro Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His IleThr Gly Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn SerLys Asn Glu Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu SerSer Arg Ser Gly His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg AsnGly Glu Leu Val Ile His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr SerGln Thr Tyr Phe Arg Phe Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr LysAsn Asp Lys Gln Met Val Gln Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser TyrPro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys Ser Ala Arg Asn Ser Cys TrpSer Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr Ser Ile Tyr Gln Gly GlyIle Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile Phe Val Ser Val ThrAsn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala Ser Phe Phe GlyAla Phe Leu Val Gly
3一种权利要求1所述的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在制备肿瘤治疗药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02116263 CN1189481C (zh) | 2002-03-28 | 2002-03-28 | 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02116263 CN1189481C (zh) | 2002-03-28 | 2002-03-28 | 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1448405A true CN1448405A (zh) | 2003-10-15 |
| CN1189481C CN1189481C (zh) | 2005-02-16 |
Family
ID=28680659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 02116263 Expired - Fee Related CN1189481C (zh) | 2002-03-28 | 2002-03-28 | 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1189481C (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1958794B (zh) * | 2005-11-03 | 2010-05-05 | 成都地奥九泓制药厂 | 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体编码cDNA及制备方法和应用 |
| CN102370987A (zh) * | 2010-08-26 | 2012-03-14 | 复旦大学 | 一种包载抗肿瘤药物组合物的注射用脂质体 |
| WO2013037090A1 (zh) * | 2011-09-16 | 2013-03-21 | 北京沙东生物技术有限公司 | 包含trail/apo2l环化变构体的融合蛋白及其编码基因与应用 |
| CN101365951B (zh) * | 2005-08-16 | 2013-09-11 | 健泰科生物技术公司 | 通过检测细胞/组织中galnac-t14的表达判定对apo2l/trail的凋亡敏感性 |
-
2002
- 2002-03-28 CN CN 02116263 patent/CN1189481C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101365951B (zh) * | 2005-08-16 | 2013-09-11 | 健泰科生物技术公司 | 通过检测细胞/组织中galnac-t14的表达判定对apo2l/trail的凋亡敏感性 |
| CN1958794B (zh) * | 2005-11-03 | 2010-05-05 | 成都地奥九泓制药厂 | 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体编码cDNA及制备方法和应用 |
| CN102370987A (zh) * | 2010-08-26 | 2012-03-14 | 复旦大学 | 一种包载抗肿瘤药物组合物的注射用脂质体 |
| CN102370987B (zh) * | 2010-08-26 | 2013-05-29 | 复旦大学 | 一种包载抗肿瘤药物组合物的注射用脂质体 |
| WO2013037090A1 (zh) * | 2011-09-16 | 2013-03-21 | 北京沙东生物技术有限公司 | 包含trail/apo2l环化变构体的融合蛋白及其编码基因与应用 |
| CN103534273A (zh) * | 2011-09-16 | 2014-01-22 | 北京沙东生物技术有限公司 | 环化变构trail/apo2l及其编码基因与应用 |
| US9289468B2 (en) | 2011-09-16 | 2016-03-22 | Beijing Sunbio Biotech Co. Ltd. | Fusion protein comprising circularly permuted form of trail/Apo2L, coding gene and use thereof |
| CN103534273B (zh) * | 2011-09-16 | 2020-05-12 | 北京沙东生物技术有限公司 | 环化变构trail/apo2l及其编码基因与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1189481C (zh) | 2005-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2018203868B2 (en) | Fusokines involving cytokines with strongly reduced receptor binding affinities | |
| JP2557053B2 (ja) | 腫瘍壊死因子の精製、製造および使用法 | |
| US20190216898A1 (en) | Interleukin Combination and Use Thereof | |
| JPH01502397A (ja) | Ｍ―ｃｓｆの生産方法 | |
| TW565569B (en) | Novel polypeptides for inducing the production of interferon-gamma | |
| IL181898A (en) | Interleukin-4 (il-4) and interleukin-9 (il-9) chimeric mutein receptor antagonists, compositions comprising them, polynucleotide encoding them, methods of their production and uses thereof | |
| AU724940B2 (en) | Protein which induces interferon-gamma production by immunocompetent cell | |
| CN102603886A (zh) | 突变的成纤维细胞生长因子及在治疗内分泌疾病中的用途 | |
| TW570801B (en) | Osteoclastgenic inhibitory agent | |
| CN111499762B (zh) | 一种包含PDGFRβ特异性亲和体和TNFα的融合蛋白及其用途 | |
| AU624625B2 (en) | Non-glycosylated, recombinant human il2 in the reduced form, the process for obtaining it and its use as a medicament | |
| CN1448405A (zh) | 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 | |
| JPS63264500A (ja) | 新規ポリペプチドおよびその製造法 | |
| CN113956346B (zh) | 一种重组白介素-15变体 | |
| CN101671390A (zh) | 人干扰素α衍生物及其聚乙二醇化修饰物的制备和用途 | |
| KR101651330B1 (ko) | 세포투과성이 우수한 ｔａｔ－ａ２０ 융합단백질의 제조방법 및 이의 용도 | |
| JPS6034915A (ja) | ポリペプチド | |
| CN111233997B (zh) | 一种重组犬干扰素CaIFN-λ突变体及其应用 | |
| CN1448404A (zh) | 人截短型重组可溶性trail－180蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 | |
| JP2589094B2 (ja) | 抗悪性腫瘍剤 | |
| WO1985005619A1 (en) | Novel polypeptide and process for its preparation | |
| KR100863060B1 (ko) | 암 억제 활동을 하는 재조합 단백질, 그 암호화 유전자 및 재조합 단백질을 활성성분으로 포함하는 암치료용 약학적 조성물 | |
| JP3993652B2 (ja) | 感受性疾患剤 | |
| CN1436792A (zh) | 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体胞外区突变多肽及其制法与用途 | |
| JP3689111B2 (ja) | インターロイキン１５ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20050216 Termination date: 20130328 |