CN1420930A - 新颖的化合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多肽及编码BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB06、BASB066和BASB071多肽的多核苷酸，以及通过重组技术来生产这些多肽的方法。本文也提供了这些多肽在疾病诊断、预防和治疗上的应用。

Description

新颖的化合物

发明领域

本发明涉及多核苷酸(此处指BASB051多核苷酸、BASB057多核苷酸、BASB060多核苷酸、BASB061多核苷酸、BASB063多核苷酸、BASB065多核苷酸、BASB066多核苷酸和BASB071多核苷酸)、这些核苷酸编码的多肽(此处指相应的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071，或相应的BASB051多肽、BASB057多肽、BASB060多肽、BASB061多肽、BASB063多肽、BASB065多肽、BASB066多肽和BASB071多肽)、重组物质以及生产这些物质的方法。另一方面，本发明涉及利用这些多肽和多核苷酸，包括疫苗，来预防细菌感染。进一步，本发明涉及诊断分析以检测特定病原体的感染。

发明背景

Neisseria meningitidis(脑膜炎奈瑟氏球菌)是一种可经常从人上呼吸道中分离到的革兰氏阳性细菌。它有时会引起侵袭性的细菌疾病如菌血症和脑膜炎。脑膜炎奈瑟氏球菌所引起的疾病的发生具有地理上的季节和年度差异(Schwartz，B.，Moore，P.S.，Broome，C.V.；Clin.Microbiol.Rev.2(Supplement)，S18-24，1989)。在气候温和的国家中，大多数的脑膜炎奈瑟氏球菌引起的疾病是由血清组B脑膜炎奈瑟氏球菌引起的，并且他们的发生率在1-10/100，000/年总人口间变动，有时能达到一较高值(Kaczmarski，E.B.(1997)，Commun.Dis.Rep.Rev.7：R55-9，1995；Scholten，R.J.P.M.，Bijlmer，H.A.，Poolman，J.T.et al.Clin.Infect.Dis.16：237-246，1993；Cruz，C.，Pavez，G.，Aguilar，E.，etal.Epidemiol.Infect.105：119-126，1990)。血清组A型脑膜炎奈瑟氏球菌占主导地位的流行病的发病率可高达1000/100，000/年，而这些流行病主要是中非国家遭遇的(Schwartz，B.，Moore，P.S.，Broome，C.V.Clin.Microbiol.Rev.2(Supplement)，S18-S24，1989)。从整体上来讲，几乎所有的脑膜炎奈瑟氏球菌疾病是由血清组A、C、W-135和Y型脑膜炎奈瑟氏球菌引起的，并且已有可利用的四价的A、C、W-135、Y多糖疫苗(Armand，J.，Arminjon，R.，Mynard，M.C.，Lafaix，C.，J.Biol.Stand.10：335-339，1982)。

这些多糖疫苗现今正通过将他们化学结合到载体蛋白上的方法进行改进(Lieberman，J.M.，Chiu，S.S.，Wong，V.K.，et al.JAMA275：1499-1503，1996)。

血清组B型疫苗尚未得到，因为发现B胶囊多糖是非免疫原性的，最有可能是归因于它与宿主组成成分有结构相似性(Wyle，F.A.，Artenstein，M.S.，Brandt，M.L.et al.J.Infect.Dis.126：514-522，1972：Finne，J.M.，Leinonen，M.，Mkel，P.M.Lancetii.：355-357，1983)。

经过多年的努力，已经发起和建立了基于脑膜炎奈瑟氏球菌外膜的疫苗(de Moraes，J.C.，Perkins，B.，Camargo，M.C.et al.Lancet 340：1074-1078，1992：Bjune，G.，Hoiby，E.A.Gronnesby，J.K.et al.338：1093-1096，1991)。这些疫苗在大龄儿童(＞4岁)和青少年身上表现的功效为57％-85％。

在这些疫苗中含有多种细菌的外膜组分，例如PorA，PorB，Rmp，Opc，Opa，FrpB，这些组分对可见的防护作用的贡献大小仍有待于进一步确定。通过利用与保护性免疫诱导有潜在关联的动物或人抗体，如TbpB和NSpA，确定了其他细菌外膜组分(Martin，D.，Cadieux，N.，Hamel，J.，Brodeux，B.R.，J.Exp.Med.185：1173-1183，1997：Lissolo，L.， -Wilmotte，C.，Dumas，p.et al.，Inf.Immun.63：884-890，1995)。保护性免疫的机制包括抗体介导的杀菌活性和opsonophagocytosis。

已经利用一种菌血症动物模型来结合所有的抗体介导的作用机制(Saukkonen，K.，Leinonen，M.，Abdillahi，H.Poolman，J.T.Vaccine 7：325-328，1989)。普遍接受的是晚期补体组分介导的杀菌机制在脑膜炎奈瑟氏球菌疾病预防中起关键作用(Ross，S.C.，Rosenthal P.J.，Berberic，H.M.，Densen，P.J.Infect.Dis.155：1266-1275，1987)。

在过去的几十年里，脑膜炎奈瑟氏球菌感染的频率有戏剧性的的提高。这要归因于复合抗生素抗性菌株的出现和具有削弱的免疫系统的人群的逐渐增加。分离对某种或所有标准抗生素具抗性的脑膜炎奈瑟氏球菌不再是罕见的事情了。这种现象导致了对医疗的需求，以及对新的抗微生物制剂、疫苗、药物筛选方法和对这些生物的诊断检测的需求。

发明概述

本发明涉及BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071，尤其是BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多肽和BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多核苷酸、重组物质和生产这些物质的方法。另一方面，本发明涉及应用这些多肽和多核苷酸的方法，包括预防和治疗由微生物引起的疾病，以及其他的疾病。进一步，本发明涉及检测与微生物感染有关的疾病和与这些感染相关的病情的诊断分析法，例如检测BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多核苷酸或多肽活性及表达的分析法。

通过阅读下面的描述和已公开内容的其他部分，对于本领域中的技术人员来讲，已公开的发明的精髓和在其范围之内的变化和更改是显而易见的。

发明描述

本发明涉及如下详述的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多肽和多核苷酸。本发明尤其涉及那些分别含有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15和SEQID NO：2、4、6、8、10、12、14、16中的核苷酸及氨基酸序列的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071。下文序列表中所述的DNA序列应理解为他是代表本发明的一种实施方案的范例，因为那些普通技术人员都认为这些序列能有效的应用于一般的多核苷酸，包括核糖多核苷酸。多肽

本发明一方面提供了脑膜炎奈瑟氏球菌的多肽，此处指BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071，及BASB051多肽、BASB057多肽、BASB060多肽、BASB061多肽、BASB063多肽、BASB065多肽、BASB066多肽和BASB071多肽，以及其在生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有效的变体和包含这些物质的组合物。

本发明进一步提供：

(a)一种分离的肽段，此肽段包含一个氨基酸序列，这个序列至少与SEQ ID NO：2有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全同一性的序列。

(b)有一种分离的多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列就完全长度的SEQID NO：1而言，与SEQID NO：1至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全同一性的序列。

(c)由一种分离的多核苷酸编码的多肽，编码此多肽的多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列编码一种多肽，此多肽与SEQ IDNO：2的氨基酸序列至少有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

SEQ ID NO：2中提供的BASB051多肽来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

另外，本发明还提供了BASB051多肽的免疫原性片段，也即BASB051多肽的连续部分，这一片段与含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性。也就是说，(当与一种载体偶连时，如果必要)此片段就能引起识别BASB051多肽的免疫反应。这样的片段可包括，例如缺少N-末端前导序列的BASB051多肽，和/或跨膜域，和/或C-末端锚定域。。按照本发明，一种优选的观点是BASB051的免疫原性片段基本上包含了一种多肽的所有胞外域，这种多肽的序列就全部长度的SEQ ID NO：2而言，与SEQ ID NO：2有至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少有95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

本发明进一步提供了：

(a)一种分离的肽段，此肽段包含一个氨基酸序列，这个序列至少与SEQ ID NO：4有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(b)有一种分离的多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸含有一个核苷酸序列，这个序列就完全长度的SEQ ID NO：3而言，与SEQ IDNO：3至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(c)由一种分离的多核苷酸编码的多肽，编码此多肽的多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列编码一种多肽，此多肽与SEQ IDNO：4的氨基酸序列至少有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

SEQ ID NO：4中提供的BASB057多肽来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

另外，本发明还提供了BASB057多肽的免疫原性片段，也即BASB057多肽的连续部分，这一片段与含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性。也就是说，(当与一种载体偶连时，如果必要)此片段就能引起识别BASB057多肽的免疫反应。这样的片段可包括，例如缺少N-末端前导序列的BASB057多肽，和/或跨膜域，和/或C-末端锚定域。按照本发明，一种优选的观点是BASB057的免疫原性片段基本上包含了一种多肽的所有胞外域，这种多肽的序列就全部长度的SEQ ID NO：4而言，与SEQ ID NO：4至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

本发明进一步提供了：

(a)一种分离的肽段，此肽段包含一个氨基酸序列，这个序列至少与SEQ ID NO：6有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(b)有一种分离的多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸含有一个核苷酸序列，这个序列就完全长度的SEQ ID NO：5而言，与SEQ IDNO：5至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(c)由一种分离的多核苷酸编码的多肽，编码此多肽的多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列编码一种多肽，此多肽与SEQ IDNO：6的氨基酸序列至少有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

SEQ ID NO：6中提供的BASB060多肽来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

另外，本发明还提供了BASB060多肽的免疫原性片段，也即BASB060多肽的连续部分，这一片段与含有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性。也就是说，(当与一种载体偶连时，如果必要)此片段就能引起识别BASB060多肽的免疫反应。这样的片段可包括，例如缺少N-末端前导序列的BASB060多肽，和/或跨膜域，和/或C-末端锚定域。按照本发明，一种优选的观点是BASB060的免疫原性片段基本上包含了一种多肽的所有胞外域，这种多肽的序列与全部长度的SEQ ID NO：6而言，与SEQ ID NO：6至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

本发明进一步提供了：

(a)一种分离的肽段，此肽段包含一个氨基酸序列，这个序列至少与SEQ ID NO：8有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(b)有一种分离的多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸含有一个核苷酸序列，这个序列就完全长度的SEQ ID NO：7而言，与SEQ IDNO：7至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(c)由一种分离的多核苷酸编码的多肽，编码此多肽的多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列编码一种多肽，此多肽与SEQ IDNO：8的氨基酸序列至少有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

SEQ ID NO：8中提供的BASB061多肽来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

另外，本发明还提供了BASB061多肽的免疫原性片段，也即BASB061多肽的连续部分，这一片段与含有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性。也就是说，(当与一种载体偶连时，如果必要)此片段就能引起识别BASB061多肽的免疫反应。这样的片段可包括，例如缺少N-末端前导序列的BASB061多肽，和/或跨膜域，和/或C-末端锚定域。按照本发明，一种优选的观点是BASB061的免疫原性片段基本上包含了一种多肽的所有胞外域，这种多肽的序列与全部长度的SEQ ID NO：8而言，与SEQ ID NO：8至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

本发明进一步提供了：

(a)一种分离的肽段，此肽段包含一个氨基酸序列，这个序列至少与SEQ ID NO：10有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(b)有一种分离的多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸含有一个核苷酸序列，这个序列就完全长度的SEQ ID NO：9而言，与SEQ IDNO：9至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(c)由一种分离的多核苷酸编码的多肽，编码此多肽的多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列编码一种多肽，此多肽与SEQ IDNO：10的氨基酸序列至少有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

SEQ ID NO：10中提供的BASB063多肽来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

另外，本发明还提供了BASB063多肽的免疫原性片段，也即BASB063多肽的连续部分，这一片段与含有SEQID NO：10的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性。也就是说，(当与一种载体偶连时，如果必要)此片段就能引起识别BASB063多肽的免疫反应。这样的片段可包括，例如缺少N-末端前导序列的BASB063多肽，和/或跨膜域，和/或C-末端锚定域。按照本发明，一种优选的观点是BASB063的免疫原性片段基本上包含了一种多肽的所有胞外域，这种多肽的序列就全部长度的SEQ ID NO：10而言，与SEQ ID NO：10至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

本发明进一步提供了：

(a)一种分离的肽段，此肽段包含一个氨基酸序列，这个序列至少与SEQ ID NO：12有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(b)有一种分离的多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸含有一个核苷酸序列，这个序列就完全长度的SEQ ID NO：11而言，与SEQ IDNO：11至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(c)由一种分离的多核苷酸编码的多肽，编码此多肽的多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列编码一种多肽，此多肽与SEQ IDNO：12的氨基酸序列至少有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

SEQ ID NO：12中提供的BASB065多肽来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

另外，本发明还提供了BASB065多肽的免疫原性片段，也即BASB065多肽的连续部分，这一片段与含有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性。也就是说，(当与一种载体偶连时，如果必要)此片段就能引起识别BASB065多肽的免疫反应。这样的片段可包括，例如缺少N-末端前导序列的BASB065多肽，和/或跨膜域，和/或C-末端锚定域。按照本发明，一种优选的观点是BASB065的免疫原性片段基本上包含了一种多肽的所有胞外域，这种多肽的序列与全部长度的SEQ ID NO：12至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

本发明进一步提供了：

(a)一种分离的肽段，此肽段包含一个氨基酸序列，这个序列至少与SEQ ID NO：14有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(b)有一种分离的多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸含有一个核苷酸序列，这个序列就完全长度的SEQ ID NO：13而言，与SEQ IDNO：13至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(c)由一种分离的多核苷酸编码的多肽，编码此多肽的多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列编码一种多肽，此多肽与SEQ IDNO：14的氨基酸序列至少有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

SEQ ID NO：14中提供的BASB066多肽来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

另外，本发明还提供了BASB066多肽的免疫原性片段，也即BASB066多肽的连续部分，这一片段与含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性。也就是说，(当与一种载体偶连时，如果必要)此片段就能增强识别BASB066多肽的免疫反应。这样的片段可包括，例如缺少N-末端前导序列的BASB066多肽，和/或跨膜域，和/或C-末端锚定域。按照本发明，一种优选的观点是BASB066的免疫原性片段基本上包含了一种多肽的所有胞外域，这种多肽的序列就全部长度的SEQID NO：14而言，与SEQ ID NO：14至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

本发明进一步提供了：

(a)一种分离的肽段，此肽段包含一个氨基酸序列，这个序列至少与SEQ ID NO：16有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(b)有一种分离的多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸含有一个核苷酸序列，这个序列就完全长度的SEQ ID NO：15而言，与SEQ IDNO：15至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

(c)由一种分离的多核苷酸编码的多肽，编码此多肽的多核苷酸含有一个多核苷酸序列，这个序列编码一种多肽，此多肽与SEQ IDNO：16的氨基酸序列至少有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

SEQ ID NO：16中提供的BASB07 1多肽来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

另外，本发明还提供了BASB071多肽的免疫原性片段，也即BASB071多肽的连续部分，这一片段与含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性。也就是说，(当与一种载体偶连时，如果必要)此片段就能引起识别BASB071多肽的免疫反应。这样的片段可包括，例如缺少N-末端前导序列的BASB071多肽，和/或跨膜域，和/或C-末端锚定域。按照本发明，一种优选的观点是BASB071的免疫原性片段基本上包含了一种多肽的所有胞外域，这种多肽的序列就全部长度的SEQ ID NO：16而言，与SEQ ID NO：16至少有85％的同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，最优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

这些片段是一些多肽，这些多肽含有的氨基酸序列与本发明中多肽的部分氨基酸序列完全相同，而不是与本发明中多肽的所有氨基酸序列完全相同。当含有BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多肽时，这些片段是“游离状态的”，或包含在形成一部分或区域的长肽段之中，最优选的是在分离的长肽段中作为分离的连续区域。

优选的肽段包括，如含有SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16或其变体的部分氨基酸序列的、缩短的多肽，例如含有一种氨基和/或羧基末端的氨基酸序列的连续的系列残基。存在于宿主细胞内或由宿主细胞产生的本发明中的降解形式的多肽也是优选的。进一步优选的是一些片段，他们的特征在于结构和功能方面的特性，例如一些片段包括a-螺旋及α-螺旋形成的区域、β-折叠及β-折叠形成的区域、转角及转角形成的区域、卷曲螺旋及卷曲螺旋形成的区域、亲水区、疏水区、α-两性分子区、β-两性分子区、柔性区、表面形成区、底物结合区和高抗原索引区。

进一步优选的片段包括一种分离肽段，它至少含有SEQ IDNO：2，4，6，8，10，12，14，16的氨基酸序列中的15、20、30、40、50或100个邻接氨基酸，或一种分离肽段，它至少含有对SEQ IDNO：2，4，6，8，10，12，14，16的氨基酸序列缺失或缩短的15、20、30、40、50或100个邻近氨基酸。

本发明中的多肽片段可用于通过肽段合成生产其相应全长的多肽；因此，这些肽段可用作生产本发明中全部长度的多肽的中间体。

尤其优选的是一些变体，他们中的几个、5-10、1-5、1-3、1-2或1个氨基酸已经以任何组合形式替代、缺失或添加。

本发明中的多肽或免疫原性片段可以“成熟”蛋白形式或以大蛋白如前体或融合蛋白部分的形式存在。包含一些附加氨基酸序列往往是有益的，这些氨基酸序列包含分泌序列或前导序列、前序列、辅助纯化的序列如多组氨酸残基或在重组生产中与稳定性相关的附加序列。此外，对添加外源多肽或脂质尾或多核苷酸序列以增加最终分子的免疫原性潜能也做了考虑。

一方面，本发明涉及通过基因工程方法合成的可溶性融合蛋白，这些蛋白包括本发明中的多肽或其片段，以及各种免疫球蛋白亚类(IgG，IgM，IgA，IgE)的重链或轻链恒定区的不同部分。作为免疫球蛋白，优选的是人IgG，尤其是IgG1重链的恒定区，而融合反应是在IgG1的铰链区进行的。在一特定的方案中，仅仅通过结合一种切割序列就能将Fc区去除掉，而通过血液凝固因子Xa就可将此切割序列切除。

此外，本发明涉及通过基因工程制备这些融合蛋白的方法，以及其在药物筛查、诊断和治疗上的应用。本发明进一步的方面也涉及到多核苷酸编码如融合蛋白。融合蛋白工艺的示例可见国际专利申请号为No.WO94/29458和WO94/22914的专利中。

与非融合蛋白相比，在表达系统中这些蛋白可以是以化学结合的方式存在，或是表达为在表达系统中提高水平的重组融合蛋白形式。融合配偶体可辅助提供T协助抗原决定部位(免疫融合配偶体)，优选的是可被人识别的T协助抗原决定部位；或者辅助表达较原始重组蛋白有更高产量的蛋白(表达增强因子)。优选的融合配偶体不仅是免疫融合配偶体，而且是表达增强配偶体。

融合配偶体包括Haemophilus influemae的蛋白D和流感病毒NS1(红血球凝集素)的非结构蛋白。另一种融合蛋白称作LytA。优选应用的是这种分子的C-末端部分。LytA源自肺炎链球菌，此菌合成一种N-乙酰-L-丙氨酸酰胺酶，即酰胺酶LytA(由LytA基因{Gene，43(1986)page 265-272})编码，这种酶是一种可特异降解肽聚糖骨架中特定键的自溶素。LytA蛋白的C-末端区域负责与胆碱或与胆碱类似物如DEAE结合。这一性质已经应用于大肠杆菌C-LytA表达质粒的生长，这种质粒在融合蛋白的表达中是有用的。在氨基末端包含C-LytA片段的杂种蛋白的纯化方法已有描述{Biotechnology：10，(1992)page 795-798}。有可能利用C-末端的LytA分子的重复部分，这些重复序列从178残基起始，例如第188-305残基。

本发明也包括前述多肽的变体，也即通过保守氨基酸置换而不同于其指示物的多肽，此处的置换是指用一种相同特性的氨基酸来替代另一种氨基酸。典型的置换发生在Ala，Val，Leu和lle间、Ser和Thr间、酸性残基Asp和Glu间、Asn和Gln间、碱性残基Lys和Arg间或芳香残基Phe和Tyr间。

本发明中的多肽可用任一合适的方法制备。这样的多肽包括天然存在的分离的多肽、通过重组制备的多肽、通过合成方法制备的多肽或通过利用上述方法的结合而制备的多肽。在本领域中，对这些多肽的制备方法已有很深的了解。

本发明中的多肽最优选的是取自脑膜炎奈瑟氏球菌，然而也可优选的从其同种的其他生物体中获得。本发明中的多肽也可从，例如相同的科和目的生物体中获得。多核苷酸

本发明的一个目标是提供编码BASB051多肽的多核苷酸，尤其是编码此处所指的BASB051多肽的多核苷酸。

在本发明的一种尤其优选的实施方案中，此多核苷酸包含编码BASB051多肽或其变体的区，此编码区包含SEQ ID NO：1中的一种序列，而此序列包含编码BASB051多肽的全部长度的基因或其变种。

SEQ ID NO：1中提供的BASB051多核苷酸是脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

进一步，本发明提供了编码和/或表达BASB051多肽和多核苷酸，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌BASB051多肽和多核苷酸的分离的核酸分子，这些核酸分子包括，如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA，cDNA，基因组DNA，B-和Z-DNA。本发明中进一步的实施方案包括生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有用的多核苷酸和多肽、及其变体、包含这些物质的组合物。

本发明的另一方面涉及分离的多核苷酸、与其有紧密关联的多核苷酸及其变体，而这些分离的多核苷酸至少包括一种全部长度的、编码BASB051多肽的基因，此多肽含有从SEQ ID NO：2推导的氨基酸序列。

在本发明的另一优选实施方案中的多肽是BASB051多肽或其变体，此BASB051多肽取自脑膜炎奈瑟氏球菌，它包含SEQ ID NO：2的一种氨基酸序列或由SEQ ID NO：2的一种氨基酸序列组成。

利用此处提供的信息，如SEQ ID NO：1中的多核苷酸序列，本发明中的一种编码BASB051多肽的多核苷酸就可由标准的克隆和筛选方法，如那些以脑膜炎奈瑟氏球菌细胞为出发物质对细菌染色体DNA片段进行克隆和测序、进而得到全部长度克隆的方法，来获得。例如，要想获得本发明中的多核苷酸序列，如SEQ ID NO：1中给定的多核苷酸序列，具代表性的是探查大肠杆菌或其他合适宿主的脑膜炎奈瑟氏球菌的染色体DNA克隆文库，探针是衍生自一种部分序列、优选长度为17-mer或更长的放射性标记寡聚核苷酸。利用严格的杂交条件就可将携带与探针相同DNA的克隆区分开。通过与由原始多肽或多核苷酸设计的测序引物对每个由杂交而鉴定的克隆进行测序，有可能将此多核苷酸从两个方向进行延伸，从而确定全部长度的基因序列。较方便的是这样的测序可通过，如利用从质粒克隆制备的变性双链DNA，来进行。适当的技术在Manistis，T.，Fritsch，E.F.和Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORYMAMIAL，2nd Ed.；ColdSpring Harbor Labocatory pnss，Cold Spring Harbor，New York(1989)中有叙述.(见in particular.Screening By Hybridization1.90 and Sequencing Denatured Double-Stranded DNA Templates13.70)。直接的基因组DNA测序也可通过获取一种全部长度的基因序列来进行。本发明的说明性的例子中，SEQ ID NO：1中的每一种多核苷酸都可在源自脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA文库中发现。

此外，脑膜炎奈瑟氏球菌中的DNA序列含有一种开放阅读框架，此开放阅读框架可编码一种蛋白质，这种蛋白质含有的氨基酸数目大约与SEQ ID NO：2之中的氨基酸相同，其分子量可通过本领域中的技术人员熟知的氨基酸残基分子量评估法来计算。

SEQ ID NO：1中，在第一个核苷酸处的密码子与从第802个核苷酸开始的终了密码子间的多核苷酸，编码SEQ ID NO：2的多肽。

进一方面，本发明提供了由下列序列组成或包含下列序列的分离多核苷酸。

(a)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：1全部长度而言至少与SEQ ID NO：1有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列，或

(b)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：2全部长度而言至少与SEQ ID NO：2有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

编码本发明中的多肽的一种多核苷酸，包含其在脑膜炎奈瑟氏球菌之外的种中的同源基因和直向同源基因，可由一种方法制得。这种方法包括在严格的杂交条件下(例如，所需温度在45-60℃之间，SDS浓度为0.1-1％)，利用含有SEQ ID NO：1序列或其片段、或由SEQ IDNO：1序列或其片段组成的探针来筛选一种合适的文库，并且分离包含该多核苷酸序列的全部长度的基因或基因组克隆等步骤。

本发明提供一种就其全长而言，与SEQ ID NO：1中的编码序列(开放阅读框架)完全相同的多核苷酸。本发明也提供了一种成熟多肽或其片段的编码序列，以此多核苷酸序列自身以及阅读框架中的一种成熟蛋白或其片段的编码序列的形式存在，此阅读框架又含有另一种编码序列，例如编码一种引导或分泌序列、前-蛋白序列、原蛋白序列、前蛋白原序列的序列。本发明中的多核苷酸至少含有一种非编码序列，例如这些非编码序列包括如，但并不局限于至少一种5′和3′非编码序列，例如转录但非翻译序列、终止信号(如依赖ρ-因子和不依赖ρ-因子的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酰化信号。这些多核苷酸序列也可包含编码附加氨基酸的附加序列。例如，可编码能促进对融合多肽的纯化的标记物序列。在本发明的某一特定实施方案中，标准物序列是一种六组胺酸肽段，如pQE载体(Qiagen，Inc.)提供的、在Gentz et al.，Proc.Natl.Acad Sci.，USA 86：821-824(1989)中有描述的六组胺酸肽段，或一种HA肽段标记(Wilson et al.，Cell 3～：767(1984)，这两种序列在分离与他们相融合的多肽序列时有用的。本发明中的多核苷酸还包括，但并不局限于，含有结构基因和其控制基因表达的自然相关联的序列。

编码SEQ ID NO：2的BASB051多肽的序列可与包含在SEQ ID NO：1的第1-801个核苷酸的多肽编码序列相同。另一种情况，作为基因编码冗余(退化)的结果，此多核苷酸序列也编码SEQ ID NO：2的多肽。此处的“多核苷酸编码多肽”包含那些包括编码本发明中的多肽，尤其是细菌多肽，更尤其是含有SEQ ID NO：2氨基酸序列的脑膜炎奈瑟氏球菌BASB051多肽的多核苷酸。“多核苷酸编码多肽”这个名词也包含那些包括编码与附加区相连的多肽(如被整合噬菌体间断的多核苷酸、整合的插入序列、整合的载体序列、整合的转座子序列或引起RNA编辑或基因组DNA改组的序列)的连续区或不连续区的多核苷酸，而附加区也可包含编码和/或非编码序列。

本发明进一步涉及此处所述的多核苷酸的变体，这些多核苷酸变体编码含有SEQ ID NO：2的推导氨基酸序列的多肽的变体。本发明中的多核苷酸片段可用于，如合成本发明中全部长度的多核苷酸。

进一步优选的实施方案是编码BASB051变体的多核苷酸，这些BASB051变体具有SEQ ID NO：2的BASB051多肽的氨基酸序列，而在其序列中，几个、一些、5-10、1-5、1-3、第2、第1个氨基酸残基或0个氨基酸残基已以替代、修饰、缺失和/或添加的任意组合方式进行处理过。其中尤其优选的是沉默的替代、添加或缺失，因为他们不改变BASB057多肽的活性或特性。

本发明进一步优选的实施方案是就其全长而言与编码含有SEQID NO：2氨基酸序列的BASB051多肽至少85％同一性的多核苷酸，以及与此多核苷酸互补的多核苷酸。在这一点上，至少有90％到100％同一性的多核苷酸是尤其优选的，并且在这些优选的多核苷酸中，那些至少95％同一性的是尤其优选的。进一步来讲，在至少有95％同一性的多核苷酸中，那些至少97％同一性的是非常优选的，至少98％和99％同一性的是尤其非常优选的，至少99％同一性的是更加非常优选的。

优选的实施方案是那些编码基本上保留有与SEQ ID NO：1的DNA所编码的成熟多肽相同的生物活性或功能的多核苷酸。

相应于本发明中的特定优选实施方案，本发明提供了与BASB051多核苷酸，如SEQ ID NO：1的那些多核苷酸，尤其是在严格的条件下，进行杂交的多核苷酸。

本发明进一步提供了与此处提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸。在这一点上，本发明尤其涉及那些在严格条件下与此处所述的多核苷酸杂交的多核苷酸。此处所用的名词“严格的条件”和“严格的杂交条件”指只有序列间有至少95％、优选至少97％同一性时才能进行杂交。严格杂交条件的一个例子就是在一种溶液中42℃培育过夜，随后在65℃下洗涤0.1×SSC中的杂交支撑物，此处的溶液含有：50％甲醛，5×SSC(150mM NaCI，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt’s溶液，10％硫酸右旋糖苷，和20微克/ml已剪切的鲑鱼精子的变性DNA。杂交和洗涤条件是众所周知的，并且在Sambrook等的  Molecular Cloning：A LaboratoryManual，Second Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)中，尤其是其第11章中有示例。杂交溶液也可与本发明提供的多核苷酸序列共用。

本发明也提供了一种有一多核苷酸序列组成或包含此多核苷酸序列的多核苷酸，此多核苷酸序列是在严格的杂交条件下，以含有SEQ ID NO：1中的该多核苷酸序列或其片段为探针，筛选包含SEQ IDNO：1中一种多核苷酸序列的完整基因的适当文库，并且将该多核苷酸序列进行分离的方法获得的。对获得此多核苷酸有益的片段包括，例如本发明的其他部分详细叙述的探针和引物。

关于多核苷酸检测，本发明的其他部分有讨论，例如本发明中的多核苷酸可用作RNA、cDNA和基因组DNA的探针，以此分离编码BASB051的全部长度的cDNAs和基因组克隆，并且也可以此分离与BASB051高同一性，尤其是高序列同一性的其他基因的cDNA和基因组克隆。一般来讲，这样的探针至少含有15个核苷酸残基或碱基对。优选的至少含有30个核苷酸残基或碱基对的探针或至少含有50个核苷酸残基或碱基对的探针。尤其优选的是至少含有20个核苷酸残基或碱基对、但有少于30个核苷酸残基或碱基对的探针。

通过利用SEQ ID NO：1提供的DNA序列来合成的寡核苷酸探针进行筛选的方法，可以分离到BASB051基因的编码区。然后，利用含有与本发明中的基因序列互补的序列的标记寡核苷酸筛选cDNA，基因组DNA或文库mRNA，进而以此来确定与探针进行杂交的文库的成员。

本发明的一个目标是提供编码BASB057多肽的多核苷酸，尤其是编码此处所指的BASB057多肽的多核苷酸。

在本发明的一种尤其优选的实施方案中，此多核苷酸包含编码BASB057多肽或其变体的区，此编码区包含SEQ ID NO：3中的一种序列，而此序列包含编码BASB057多肽的全部长度的基因或其变体。

SEQ ID NO：3中提供的BASB057多核苷酸是脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

进一步，本发明提供了编码和/或表达BASB057多肽和多核苷酸，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌BASB057多肽和多核苷酸的分离的核酸分子，这些核酸分子包括，如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA，cDNA，基因组DNA，B-和Z-DNA。本发明中进一步的实施方案包括生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有益的多核苷酸和多肽、及其变体、包含这些物质的组合物。

本发明的另一方面涉及分离的多核苷酸、与其有紧密关联的多核苷酸及其变体，而这些分离的多核苷酸至少包括一种全部长度的、编码BASB057多肽的基因，此多肽含有从SEQ ID NO：4推导的氨基酸序列。

在本发明的另一尤其优选实施方案中的多肽是BASB057多肽或其变体，此BASB057多肽取自包括脑膜炎奈瑟氏球菌，它包含SEQ IDNO：4的一种氨基酸序列或由SEQ ID NO：4的一种氨基酸序列组成。

利用此处提供的信息，如SEQ ID NO：3中的多核苷酸序列，本发明中的一种编码BASB057多肽的多核苷酸就可由标准的克隆和筛选方法，如那些以脑膜炎奈瑟氏球菌细胞为出发物质，对细菌染色体DNA片段进行克隆和测序进而得到全部长度克隆的方法，来获得。例如，要想获得本发明中的多核苷酸序列，如SEQ ID NO：3中给定的多核苷酸序列，具代表性的是探查大肠杆菌或其他合适的宿主的脑膜炎奈瑟氏球菌的染色体DNA克隆文库，探针是衍生自一种部分序列、优选长度为17-mer或更长的放射性标记寡聚核苷酸。利用严格的杂交条件就可将携带与探针相同DNA的克隆区分开。通过与由原始多肽或多核苷酸设计的测序引物对每个由杂交而鉴定的克隆进行测序，有可能将此多核苷酸从两个方向进行延伸，从而确定全部长度的基因序列。较方便的是这样的测序可通过，如利用从质粒克隆制备的变性双链DNA，来进行。适当的技术在Manistis，T.，Fritsch，E.F.和Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORYMAMIAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Labocatory pnss，Cold Spring Harbor，NewYork(1989)中有叙述。(见in particular.Screening ByHybridization 1.90 and Sequencing Denatured Double-StrandedDNA Templates 13.70)。直接的基因组DNA测序也可通过获取一种全部长度的基因序列来进行。本发明的说明性的例子中，SEQ ID NO：3中的每一种多核苷酸都可在源自脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA文库中发现。

此外，脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA序列含有一种开放阅读框架，此开放阅读框架可编码一种蛋白质，这种蛋白质含有的氨基酸数目大约与SEQ ID NO：4之中的氨基酸相同，其分子量可通过本领域中的技术人员熟知的氨基酸残基分子量评估法来计算。

在SEQ ID NO：3中，第一个核苷酸处的密码子与从第1402个核苷酸开始的终了密码子间的多核苷酸编码SEQ ID NO：4的多肽。

进一方面，本发明提供了由下列序列组成或包含下列序列的分离多核苷酸：

(a)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：3全长而言，至少与SEQ ID NO：3有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列，或

(b)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：4全长而言，至少与SEQ ID NO：4有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

编码本发明中的多肽的一种多核苷酸，包含其在脑膜炎奈瑟氏球菌之外的种中的同源基因和直向同源基因，可由一种方法制得。这种方法包括在严格的杂交条件下(例如，所需温度在45-60℃之间，SDS浓度为0.1-1％)，利用含有SEQ ID NO：3的序列或其片段、或由SEQID NO：3序列或其片段组成的探针来筛选一种合适的文库，并且分离包含该多核苷酸序列的全部长度的基因或基因组克隆等步骤。

本发明提供了一种就全长而言，与SEQ ID NO：3中的一种与全部长度的编码序列(开放阅读框架)完全相同的多核苷酸。本发明也提供了一种成熟多肽或其片段的编码序列，以此多核苷酸序列自身以及阅读框架中的一种成熟蛋白或其片段的编码序列的形式存在，此阅读框架又含有另一种编码序列，例如编码一种引导或分泌序列、前蛋白序列、原蛋白序列、前蛋白原序列的序列。本发明中的多核苷酸至少含有一种非编码序列，例如这些非编码序列包括如，但并不局限于至少一种5′和3′非编码序列，例如转录但非翻译序列、终止信号(如依赖ρ-因子和不依赖ρ-因子的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酰化信号。这些多核苷酸序列也可包含编码附加氨基酸的附加序列。例如，可编码能促进对融合多肽的纯化的标记物序列。在本发明的某一特定实施方案中，标准物序列是一种六组胺酸肽段，如pQE载体(Qiagen，Inc.)提供的、在Gentz等.，Proc.Natl.Acad Sci.，USA 86：821-824(1989)中有描述的六组胺酸肽段，或一种HA肽段标记(Wilson et al.，Cell 3～：767(1984)，这两种序列在分离与他们相融合的多肽序列时是有益的。本发明中的多核苷酸还包括，但并不局限于，含有结构基因和其控制基因表达的、与其自然相关联的序列。

编码SEQ ID NO：4的BASB057多肽的序列可与包含在SEQ ID NO：3的第1-1401个核苷酸的多肽编码序列相同。另一种情况，作为基因编码冗余(退化)的结果，此多核苷酸序列也编码SEQ ID NO：4的多肽。此处的“多核苷酸编码多肽”包含那些包括编码本发明中的多肽，尤其是细菌多肽，更尤其是含有SEQ ID NO：4氨基酸序列的脑膜炎奈瑟氏球菌BASB057多肽的多核苷酸。“多核苷酸编码多肽”这个名词也包含那些包括编码与附加区相连的多肽(如被整合噬菌体间断的多核苷酸、整合的插入序列、整合的载体序列、整合的转座子序列或引起RNA编辑或基因组DNA改组的序列)的连续区或不连续区的多核苷酸，而附加区也可包含编码和/或非编码序列。

本发明进一步涉及此处所述的多核苷酸的变体，这些多核苷酸变体编码含有SEQ ID NO：4的推导氨基酸序列的多肽变体。本发明中的多核苷酸片段可用于，如合成本发明中全部长度的多核苷酸。

进一步尤其优选的实施方案是编码BASB057变体的多核苷酸，这些BASB057变体具有SEQ ID NO：4的BASB057多肽的氨基酸序列，而在其序列中，几个、一些、5-10、1-5、1-3、第2、第1个氨基酸残基或0个氨基酸残基已以替代、修饰、缺失和/或添加及他们的任意组合方式进行处理过。其中尤其优选的是沉默的替代、添加或缺失，因为他们不改变BASB057多肽的活性或特性。

本发明进一步优选的实施方案是就其全长而言，与编码含有SEQID NO：4的氨基酸序列的BASB057多肽至少有85％相同的多核苷酸，以及与此多核苷酸互补的多核苷酸。在这一点上，至少有90％到100％同一性的多核苷酸是尤其优选的，并且在这些优选的多核苷酸中，那些至少95％同一性的是尤其优选的。进一步来讲，在至少有95％同一性的多核苷酸中，那些至少97％同一性的是非常优选的，至少98％和99％同一性的是尤其非常优选的，至少99％同一性的是更加非常优选的。

优选的实施方案是那些编码基本上保持有与SEQ ID NO：3的DNA所编码的成熟多肽相同的生物活性或功能的多核苷酸。

按照本发明中的特定优选实施方案，本发明提供了与BASB057多核苷酸，如SEQ ID NO：3的那些多核苷酸，尤其是在严格的条件下，进行杂交的多核苷酸。

本发明进一步提供了与此处提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸。在这一点上，本发明尤其涉及那些在严格条件下与此处所述的多核苷酸进行杂交的多核苷酸。此处所用的名词“严格的条件”和“严格的杂交条件”指只有在序列间有至少95％、优选的是至少97％同一性时才能进行杂交。严格杂交条件的一个例子就是在一种溶液中42℃培育过夜，随后在65℃下洗涤0.1×SSC中的杂交支撑物，此处的溶液含有：50％甲醛，5×SSC(150mM NaCI，15mM柠檬酸三钠)，50 mM磷酸钠(pH7.6)，5× Denhardt’s溶液，10％硫酸右旋糖苷，和20微克/ml已剪切的鲑鱼精子的变性DNA。另外杂交和洗涤条件是众所周知的，并且在Sambrook等的Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)中，尤其是其第11章中有示例。杂交溶液也可与本发明提供的多核苷酸序列共用。

本发明也提供了一种由一种多核苷酸序列组成或包含此多核苷酸序列的多核苷酸。此多核苷酸序列是在严格的杂交条件下，以含有SEQ ID NO：3中的该多核苷酸序列或其片段为探针，筛选包含SEQ IDNO：3中一种多核苷酸序列的完整基因的适当文库，并且将该多核苷酸序列进行分离这一系列方法获得的。有益于获得此多核苷酸的片段包括，例如本发明其他部分详细叙述的探针和引物。

关于多核苷酸的检测，本发明的其他部分有讨论，例如本发明中的多核苷酸可用作RNA、cDNA和基因组DNA的探针，以此分离编码BASB057的全部长度的cDNA和基因组克隆，并且也可以此分离与BASB057具有高同一性，尤其是高序列同一性的其他基因的cDNA和基因组克隆。一般来讲，这样的探针至少含有15个核苷酸残基或碱基对。优选的是至少含有30个核苷酸残基或碱基对的探针、或至少含有50个核苷酸残基或碱基对的探针。尤其优选的是至少含有20个核苷酸残基或碱基对、但又少于30个核苷酸残基或碱基对的探针。

通过利用SEQ ID NO：3提供的DNA序列合成的寡核苷酸探针进行的筛选方法，可以分离到BASB057基因的编码区。然后，利用含有与本发明中的基因序列互补的序列的标记寡核苷酸筛选cDNA、基因组DNA或mRNA文库，进而来确定与探针进行杂交的文库的成员。

本发明的一个目标是提供编码BASB060多肽的多核苷酸，尤其是编码此处所指的BASB060多肽的多核苷酸。

在本发明的一种尤其优选的实施方案中，此多核苷酸包含编码BASB060多肽或其变体的区，此编码区包含SEQ ID NO：5中的一序列，而此序列包含编码BASB060多肽的全部长度的基因或其变体。

SEQ ID NO：5中提供的BASB060多核苷酸是脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

进一步，本发明提供了编码和/或表达BASB060多肽和多核苷酸，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌BASB060多肽和多核苷酸的分离的核酸分子，这些核酸分子包括，如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA，cDNA，基因组DNA，B-和Z-DNA。本发明中进一步的实施方案包括生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有益的多核苷酸和多肽、及其变体、包含这些物质的组合物。

本发明的另一方面涉及分离的多核苷酸、与其有紧密关联的多核苷酸及其变体，而这些分离的多核苷酸至少包括一种全部长度的、编码BASB060多肽的基因，此多肽含有从SEQ ID NO：6推导的氨基酸序列。

在本发明的另一尤其优选实施方案中的多肽是BASB060多肽或其变体，此BASB060多肽取自脑膜炎奈瑟氏球菌，它包含SEQ ID NO：6的一种氨基酸序列或由SEQ ID NO：6的一种氨基酸序列组成。

利用此处提供的信息，如SEQ ID NO：5中的多核苷酸序列，本发明中的一种编码BASB060多肽的多核苷酸就可由标准的克隆和筛选方法，如那些以脑膜炎奈瑟氏球菌细胞为出发物质，对细菌染色体DNA片段进行克隆和测序进而得到全部长度克隆的方法，来获得。例如，要想获得本发明中的多核苷酸序列，如SEQ ID NO：5中给定的多核苷酸序列，具代表性的是探查大肠杆菌或其他合适的宿主的脑膜炎奈瑟氏球菌的染色体DNA克隆文库，探针是衍生自一种部分序列、优选长度为17-mer或更长的放射性标记寡聚核苷酸。利用严格的杂交条件就可将携带与探针相同DNA的克隆区分开。通过与由原始多肽或多核苷酸设计的测序引物对每个由杂交而鉴定的克隆进行测序，有可能将此多核苷酸从两个方向进行延伸，从而确定全部长度的基因序列。较方便的是这样的测序可通过，如利用从质粒克隆制备的变性双链DNA，来进行。适当的技术在Manistis，T.，Fritsch，E.F.和Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORYMAMIAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Labocatory pnss，Cold Spring Harbor，NewYork(1989)中有叙述(见in particular.Screening  ByHybridization 1.90 and Sequencing Denatured Double-StrandedDNA Templates 13.70)。直接的基因组DNA测序也可通过获取一种全部长度的基因序列来进行。本发明的说明性的例子中，SEQ ID NO：5中的每一种多核苷酸都可在源自脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA文库中发现。

此外，脑膜炎奈瑟氏球菌中的DNA序列含有一种开放阅读框架，此开放阅读框架可编码一种蛋白质，这种蛋白质含有的氨基酸数目大约与SEQ ID NO：6之中的氨基酸相同，其分子量可通过本领域中的技术人员熟知的氨基酸残基分子量评估法来计算。

在SEQ ID NO：5中，第一个核苷酸处的密码子与从第418个核苷酸开始的终了密码子间的多核苷酸编码SEQ ID NO：6的多肽。

进一方面，本发明提供了由下列序列组成或包含下列序列的分离多核苷酸：

(a)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：5全长而言，至少与SEQ ID NO：5有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列，或

(b)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：6全长而言，至少与SEQ ID NO：6有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

编码本发明中的多肽的一种多核苷酸，包含其在脑膜炎奈瑟氏球菌之外的种中的同源基因和直向同源基因，可由一种方法制得。这种方法包括在严格的杂交条件下(例如，所需温度在45-60℃之间，SDS浓度为0.1-1％)，利用含有SEQ ID NO：5的序列或其片段、或由SEQID NO：5序列或其片段组成的探针来筛选一种合适的文库，并且分离包含该多核苷酸序列的全部长度的基因或基因组克隆等步骤。

本发明提供了一种就其全长而言，与SEQ ID NO：5中的编码序列(开放阅读框架)完全相同的多核苷酸。本发明也提供了一种成熟多肽或其片段的编码序列，以此多核苷酸序列自身以及阅读框架中的一种成熟蛋白或其片段的编码序列的形式存在，此阅读框架又含有另一种编码序列，例如编码一种引导或分泌序列、前蛋白序列、原蛋白序列、前蛋白原序列的序列。本发明中的多核苷酸至少含有一种非编码序列，例如这些非编码序列包括如，但并不局限于至少一种5′和3′非编码序列，例如转录但非翻译序列、终止信号(如依赖ρ-因子和不依赖p-因子的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酰化信号。这些多核苷酸序列也可包含编码附加氨基酸的附加序列。例如，可编码能促进对融合多肽的纯化的标记物序列。在本发明的某一特定实施方案中，标准物序列是一种六组胺酸肽段，如pQE载体(Qiagen，Inc.)提供的、在Gentz等.，Proc.Natl.Acad Sci.，USA 86：821-824(1989)中有描述的六组胺酸肽段，或一种HA肽段标记(Wilson et al.，Cell 3～：767(1984)，这两种序列在分离与他们相融合的多肽序列时是有益的。本发明中的多核苷酸还包括，但并不局限于，含有结构基因和其控制基因表达的、与其自然相关联的序列。

编码SEQ ID NO：6的BASB060多肽的序列可与包含在SEQ ID NO：6的第1-417个核苷酸的多肽编码序列相同。另一种情况，作为基因编码冗余(退化)的结果，此多核苷酸序列也编码SEQ ID NO：6的多肽。此处的“多核苷酸编码多肽”包含那些包括编码本发明中的多肽，尤其是细菌多肽，更尤其是含有SEQ ID NO：6氨基酸序列的脑膜炎奈瑟氏球菌BASB060多肽的多核苷酸。“多核苷酸编码多肽”这个名词也包含那些包括编码与附加区相连的多肽(如被整合噬菌体间断的多核苷酸、整合的插入序列、整合的载体序列、整合的转座子序列或引起RNA编辑或基因组DNA改组的序列)的连续区或不连续区的多核苷酸，而附加区也可包含编码和/或非编码序列。

本发明进一步涉及此处所述的多核苷酸的变体，这些多核苷酸变体编码含有SEQ ID NO：6的推导氨基酸序列的多肽变体。本发明中的多核苷酸片段可用于，如合成本发明中全部长度的多核苷酸。

进一步尤其优选的实施方案是编码BASB060变体的多核苷酸，这些BASB060变体具有SEQ ID NO：6的BASB060多肽的氨基酸序列，而在其序列中，几个、一些、5-10、1-5、1-3、第2、第1个氨基酸残基或0个氨基酸残基已以替代、修饰、缺失和/或添加及他们的任意组合方式进行处理过。其中尤其优选的是沉默的替代、添加或缺失，因为他们不改变BASB060多肽的活性或特性。

本发明进一步优选的实施方案是就其全长而言与编码含有SEQID NO：6的氨基酸序列的BASB060多肽至少有85％相同的多核苷酸，以及与此多核苷酸互补的多核苷酸。在这一点上，至少有90％到100％同一性的多核苷酸是尤其优选的，并且在这些优选的多核苷酸中，那些至少95％同一性的是尤其优选的。进一步来讲，在至少有95％同一性的多核苷酸中，那些至少97％同一性的是非常优选的，至少98％和99％同一性的是尤其非常优选的，至少99％同一性的是更加非常优选的。

优选的实施方案是那些编码基本上保持有与SEQ ID NO：5的DNA所编码的成熟多肽同一性的生物活性或功能的多核苷酸。

按照本发明中的特定优选实施方案，本发明提供了与BASB060多核苷酸，如SEQ ID NO：5的那些多核苷酸，尤其是在严格的条件下，进行杂交的多核苷酸。

本发明进一步提供了与此处提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸。在这一点上，本发明尤其涉及那些在严格条件下与此处所述的多核苷酸进行杂交的多核苷酸。此处所用的名词“严格的条件”和“严格的杂交条件”指只有在序列间有至少95％、优选的是至少97％同一性时才能进行杂交。严格杂交条件的一个例子就是在一种溶液中42℃培育过夜，随后在65℃下洗涤0.1×SSC中的杂交支撑物，此处的溶液含有：50％甲醛，5×SSC(150mM NaCI，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt’s溶液，10％硫酸右旋糖苷，和20微克/ml已剪切的鲑鱼精子的变性DNA。另外杂交和洗涤条件是众所周知的，并且在Sambrook等的Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)中，尤其是其第11章中有示例。杂交溶液也可与本发明提供的多核苷酸序列共用。

本发明也提供了一种由一种多核苷酸序列组成或包含此多核苷酸序列的多核苷酸。此多核苷酸序列是在严格的杂交条件下，以含有SEQ ID NO：5中的该多核苷酸序列或其片段为探针，筛选包含SEQ IDNO：5中一种多核苷酸序列的完整基因的适当文库，并且将该多核苷酸序列进行分离这一系列方法获得的。有益于获得此多核苷酸的片段包括，例如本发明其他部分详细叙述的探针和引物。

关于多核苷酸的检测，本发明的其他部分有讨论，例如本发明中的多核苷酸可用作RNA、cDNA和基因组DNA的探针，以此分离编码BASB060的全部长度的cDNA和基因组克隆，并且也可以此分离与BASB060具有高同一性，尤其是高序列同一性的其他基因的cDNA和基因组克隆。一般来讲，这样的探针至少含有15个核苷酸残基或碱基对。优选的是至少含有30个核苷酸残基或碱基对的探针、或至少含有50个核苷酸残基或碱基对的探针。尤其优选的是至少含有20个核苷酸残基或碱基对、但又少于30个核苷酸残基或碱基对的探针。

通过利用SEQ ID NO：5提供的DNA序列合成的寡核苷酸探针进行的筛选方法，可以分离到BASB060基因的编码区。然后，利用含有与本发明中的基因序列互补的序列的标记寡核苷酸筛选cDNA、基因组DNA或mRNA文库，进而来确定与探针进行杂交的文库的成员。

本发明的一个目标是提供编码BASB061多肽的多核苷酸，尤其是编码此处所指的BASB061多肽的多核苷酸。

在本发明的一种尤其优选的实施方案中，此多核苷酸包含编码BASB061多肽或其变体的区，此编码区包含SEQ ID NO：7中的一序列，而此序列包含编码BASB061多肽的全部长度的基因或其变体。

SEQ ID NO：7中提供的BASB061多核苷酸是脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

进一步，本发明提供了编码和/或表达BASB061多肽和多核苷酸，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌BASB061多肽和多核苷酸的分离的核酸分子，这些核酸分子包括，如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA，cDNA，基因组DNA，B-和Z-DNA。本发明中进一步的实施方案包括生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有益的多核苷酸和多肽、及其变体、包含这些物质的组合物。

本发明的另一方面涉及分离的多核苷酸、与其有紧密关联的多核苷酸及其变体，而这些分离的多核苷酸至少包括一种全部长度的、编码BASB061多肽的基因，此多肽含有从SEQ ID NO：8推导的氨基酸序列。

在本发明的另一尤其优选实施方案中的多肽是BASB061多肽或其变体，此BASB061多肽取自脑膜炎奈瑟氏球菌，它包含SEQ ID NO：8的一种氨基酸序列或由SEQ ID NO：8的一种氨基酸序列组成。

利用此处提供的信息，如SEQ ID NO：7中的多核苷酸序列，本发明中的一种编码BASB061多肽的多核苷酸就可由标准的克隆和筛选方法，如那些以脑膜炎奈瑟氏球菌细胞为出发物质，对细菌染色体DNA片段进行克隆和测序进而得到全部长度克隆的方法，来获得。例如，要想获得本发明中的多核苷酸序列，如SEQ ID NO：7中给定的多核苷酸序列，具代表性的是探查大肠杆菌或其他合适的宿主的脑膜炎奈瑟氏球菌的染色体DNA克隆文库，探针是衍生自一种部分序列、优选长度为17-mer或更长的放射性标记寡聚核苷酸。利用严格的杂交条件就可将携带与探针相同DNA的克隆区分开。通过与由原始多肽或多核苷酸设计的测序引物对每个由杂交而鉴定的克隆进行测序，有可能将此多核苷酸从两个方向进行延伸，从而确定全部长度的基因序列。较方便的是这样的测序可通过，如利用从质粒克隆制备的变性双链DNA，来进行。适当的技术在Manistis，T.，Fritsch，E.F.和Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORYMAMIAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Labocatory pnss，Cold Spring Harbor，NewYork(1989)中有叙述(见in particular.Screening ByHybridization 1.90 and Sequencing Denatured Double-StrandedDNA Templates 13.70)。直接的基因组DNA测序也可通过获取一种全部长度的基因序列来进行。本发明的说明性的例子中，SEQ ID NO：7中的每一种多核苷酸都可在源自脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA文库中发现。

此外，脑膜炎奈瑟氏球菌中的DNA序列含有一种开放阅读框架，此开放阅读框架可编码一种蛋白质，这种蛋白质含有的氨基酸数目大约与SEQ ID NO：8之中的氨基酸相同，其分子量可通过本领域中的技术人员熟知的氨基酸残基分子量评估法来计算。

在SEQ ID NO：7中，第一个核苷酸处的密码子与从第514个核苷酸开始的终了密码子间的多核苷酸编码SEQ ID NO：8的多肽。

进一方面，本发明提供了由下列序列组成或包含下列序列的分离多核苷酸：

(a)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：7而言，至少与SEQ ID NO：7有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列，或

(b)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：8全长而言，至少与全部长度的SEQ ID NO：8有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

编码本发明中的多肽的一种多核苷酸，包含其在脑膜炎奈瑟氏球菌之外的种中的同源基因和直向同源基因，可由一种方法制得。这种方法包括在严格的杂交条件下(例如，所需温度在45-60℃之间，SDS浓度为0.1-1％)，利用含有SEQ ID NO：7的序列或其片段、或由SEQID NO：7序列或其片段组成的探针来筛选一种合适的文库，并且分离包含该多核苷酸序列的全部长度的基因或基因组克隆等步骤。

本发明提供了一种就其全长而言，与SEQ ID NO：7中的一种与全部长度的编码序列(开放阅读框架)完全相同的多核苷酸。本发明也提供了一种成熟多肽或其片段的编码序列，以此多核苷酸序列自身以及阅读框架中的一种成熟蛋白或其片段的编码序列的形式存在，此阅读框架又含有另一种编码序列，例如编码一种引导或分泌序列、前蛋白序列、原蛋白序列、前蛋白原序列的序列。本发明中的多核苷酸至少含有一种非编码序列，例如这些非编码序列包括如，但并不局限于至少一种5′和3′非编码序列，例如转录但非翻译序列、终止信号(如依赖ρ-因子和不依赖ρ-因子的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酰化信号。这些多核苷酸序列也可包含编码附加氨基酸的附加序列。例如，可编码能促进对融合多肽的纯化的标记物序列。在本发明的某一特定实施方案中，标准物序列是一种六组胺酸肽段，如pQE载体(Qiagen，Inc.)提供的、在Gentz等.，Proc.Natl.Acad Sci.，USA 86：821-824(1989)中有描述的六组胺酸肽段，或一种HA肽段标记(Wilson et al.，Cell 3～：767(1984)，这两种序列在分离与他们相融合的多肽序列时是有益的。本发明中的多核苷酸还包括，但并不局限于，含有结构基因和其控制基因表达的、与其自然相关联的序列。

编码SEQ ID NO：8的BASB061多肽的序列可与包含在SEQ ID NO：8的第1-513个核苷酸的多肽编码序列相同。另一种情况，作为基因编码冗余(退化)的结果，此多核苷酸序列也编码SEQ ID NO：8的多肽。此处的“多核苷酸编码多肽”包含那些包括编码本发明中的多肽，尤其是细菌多肽，更尤其是含有SEQ ID NO：8氨基酸序列的Neisseriameningitides BASB061多肽的多核苷酸。“多核苷酸编码多肽”这个名词也包含那些包括编码与附加区相连的多肽(如被整合噬菌体间断的多核苷酸、整合的插入序列、整合的载体序列、整合的转座子序列或引起RNA编辑或基因组DNA改组的序列)的连续区或不连续区的多核苷酸，而附加区也可包含编码和/或非编码序列。

本发明进一步涉及此处所述的多核苷酸的变体，这些多核苷酸变体编码含有SEQ ID NO：8的推导氨基酸序列的多肽变体。本发明中的多核苷酸片段可用于，如合成本发明中全部长度的多核苷酸。

进一步尤其优选的实施方案是编码BASB060变体的多核苷酸，这些BASB061变体具有SEQ ID NO：8的BASB061多肽的氨基酸序列，而在其序列中，几个、一些、5-10、1-5、1-3、第2、第1个氨基酸残基或0个氨基酸残基已以替代、修饰、缺失和/或添加及他们的任意组合方式进行处理过。其中尤其优选的是沉默的替代、添加或缺失，因为他们不改变BASB061多肽的活性或特性。

本发明进一步优选的实施方案是就其全长而言，与编码含有SEQID NO：8的氨基酸序列的BASB061多肽至少有85％相同的多核苷酸，以及与此多核苷酸互补的多核苷酸。在这一点上，至少有90％到100％同一性的多核苷酸是尤其优选的，并且在这些优选的多核苷酸中，那些至少95％同一性的是尤其优选的。进一步来讲，在至少有95％同一性的多核苷酸中，那些至少97％同一性的是非常优选的，至少98％和99％同一性的是尤其非常优选的，至少99％同一性的是更加非常优选的。

优选的实施方案是那些编码基本上保持有与SEQ ID NO：7的DNA所编码的成熟多肽相同的生物活性或功能的多核苷酸。

按照本发明中的特定优选实施方案，本发明提供了与BASB061多核苷酸，如SEQ ID NO：7的那些多核苷酸，尤其是在严格的条件下，进行杂交的多核苷酸。

本发明进一步提供了与此处提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸。在这一点上，本发明尤其涉及那些在严格条件下与此处所述的多核苷酸进行杂交的多核苷酸。此处所用的名词“严格的条件”和“严格的杂交条件”指只有在序列间有至少95％、优选的是至少97％同一性时才能进行杂交。严格杂交条件的一个例子就是在一种溶液中42℃培育过夜，随后在65℃下洗涤0.1×SSC中的杂交支撑物，此处的溶液含有：50％甲醛，5×SSC(150mM NaCI，15mM柠檬酸三钠)，50 mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt’s溶液，10％硫酸右旋糖苷，和20微克/ml已剪切的鲑鱼精子的变性DNA。另外杂交和洗涤条件是众所周知的，并且在Sambrook等的Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)中，尤其是其第11章中有示例。杂交溶液也可与本发明提供的多核苷酸序列共用。

本发明也提供了一种由一种多核苷酸序列组成或包含此多核苷酸序列的多核苷酸。此多核苷酸序列是在严格的杂交条件下，以含有SEQ ID NO：7中的该多核苷酸序列或其片段为探针，筛选包含SEQ IDNO：7中一种多核苷酸序列的完整基因的适当文库，并且将该多核苷酸序列进行分离这一系列方法获得的。有益于获得此多核苷酸的片段包括，例如本发明其他部分详细叙述的探针和引物。

关于多核苷酸的检测，本发明的其他部分有讨论，例如本发明中的多核苷酸可用作RNA、cDNA和基因组DNA的探针，以此分离编码BASB061的全部长度的cDNA和基因组克隆，并且也可以此分离与BASB061具有高同一性，尤其是高序列同一性的其他基因的cDNA和基因组克隆。一般来讲，这样的探针至少含有15个核苷酸残基或碱基对。优选的是至少含有30个核苷酸残基或碱基对的探针、或至少含有50个核苷酸残基或碱基对的探针。尤其优选的是至少含有20个核苷酸残基或碱基对、但又少于30个核苷酸残基或碱基对的探针。

通过利用SEQ ID NO：7提供的DNA序列合成的寡核苷酸探针进行的筛选方法，可以分离到BASB061基因的编码区。然后，利用含有与本发明中的基因序列互补的序列的标记寡核苷酸筛选cDNA、基因组DNA或mRNA文库，进而来确定与探针进行杂交的文库的成员。

本发明的一个目标是提供编码BASB063多肽的多核苷酸，尤其是编码此处所指的BASB063多肽的多核苷酸。

在本发明的一种尤其优选的实施方案中，此多核苷酸包含编码BASB063多肽或其变体的区，此编码区包含SEQ ID NO：9中的一序列，而此序列包含编码BASB063多肽的全部长度的基因或其变体。

SEQ ID NO：9中提供的BASB063多核苷酸是脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

进一步，本发明提供了编码和/或表达BASB063多肽和多核苷酸，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌BASB063多肽和多核苷酸的分离的核酸分子，这些核酸分子包括，如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA，cDNA，基因组DNA，B-和Z-DNA。本发明中进一步的实施方案包括生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有益的多核苷酸和多肽、及其变体、包含这些物质的组合物。

本发明的另一方面涉及分离的多核苷酸、与其有紧密关联的多核苷酸及其变体，而这些分离的多核苷酸至少包括一种全部长度的、编码BASB063多肽的基因，此多肽含有从SEQ ID NO：10推导的氨基酸序列。

在本发明的另一尤其优选实施方案中的多肽是BASB063多肽或其变体，此BASB063多肽取自脑膜炎奈瑟氏球菌，它包含SEQ ID NO：10的一种氨基酸序列或由SEQ ID NO：10的一种氨基酸序列组成。

利用此处提供的信息，如SEQ ID NO：9中的多核苷酸序列，本发明中的一种编码BASB063多肽的多核苷酸就可由标准的克隆和筛选方法，如那些以脑膜炎奈瑟氏球菌细胞为出发物质，对细菌染色体DNA片段进行克隆和测序进而得到全部长度克隆的方法，来获得。例如，要想获得本发明中的多核苷酸序列，如SEQ ID NO：9中给定的多核苷酸序列，具代表性的是探查大肠杆菌或其他合适的宿主的脑膜炎奈瑟氏球菌的染色体DNA克隆文库，与衍生自一种部分序列、优选长度为17-mer或更长的放射性标记寡聚核苷酸。利用严格的杂交条件就可将携带与探针相同DNA的克隆区分开。通过与由原始多肽或多核苷酸设计的测序引物对每个由杂交而获得的克隆进行测序，有可能将此多核苷酸从两个方向进行延伸，从而确定全部长度的基因序列。较方便的是这样的测序可通过，如利用从质粒克隆制备的变性双链DNA，来进行。适当的技术在Manistis，T.，Fritsch，E.F.和Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORYMAMIAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Labocatory pnss，Cold Spring Harbor，NewYork(1989)中有叙述(见in particular.Screening ByHybridization 1.90 and Sequencing Denatured Double-StrandedDNA Templates 13.70)。直接的基因组DNA测序也可通过获取一种全部长度的基因序列来进行。本发明的说明性的例子中，SEQ ID NO：9中的每一种多核苷酸都可在源自脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA文库中发现。

此外，脑膜炎奈瑟氏球菌中的DNA序列含有一种开放阅读框架，此开放阅读框架可编码一种蛋白质，这种蛋白质含有的氨基酸数目大约与SEQ ID NO：10之中的氨基酸相同，其分子量可通过本领域中的技术人员熟知的氨基酸残基分子量评估法来计算。

在SEQ ID NO：9中，第一个核苷酸处的密码子与从第814个核苷酸开始的终了密码子间的多核苷酸编码SEQ ID NO：10的多肽。

进一方面，本发明提供了由下列序列组成或包含下列序列的分离多核苷酸：

(a)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：9全长而言，至少与SEQ ID NO：9有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列，或

(b)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：10全长而言，至少与SEQ ID NO：10有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

编码本发明中的多肽的一种多核苷酸，包含其在脑膜炎奈瑟氏球菌之外的种中的同源基因和直向同源基因，可由一种方法制得。这种方法包括在严格的杂交条件下(例如，所需温度在45-60℃之间，SDS浓度为0.1-1％)，利用含有SEQ ID NO：9的序列或其片段、或由SEQID NO：9序列或其片段组成的探针来筛选一种合适的文库，并且分离包含该多核苷酸序列的全部长度的基因或基因组克隆等步骤。

本发明提供了一种就其全长而言，与SEQ ID NO：9中的一种与编码序列(开放阅读框架)完全同一性的多核苷酸。本发明也提供了一种成熟多肽或其片段的编码序列，而此多核苷酸序列自身以及阅读框架中的一种成熟蛋白或其片段的编码序列的形式存在，此阅读框架又含有另一种编码序列，例如编码一种引导或分泌序列、前蛋白序列、原蛋白序列、前蛋白原序列的序列。本发明中的多核苷酸至少含有一种非编码序列，例如这些非编码序列包括如，但并不局限于至少一种5′和3′非编码序列，例如转录但非翻译序列、终止信号(如依赖ρ-因子和不依赖ρ-因子的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酰化信号。这些多核苷酸序列也可包含编码附加氨基酸的附加序列。例如，可编码能促进对融合多肽的纯化的标记物序列。在本发明的某一特定实施方案中，标准物序列是一种六组胺酸肽段，如pQE载体(Qiagen，Inc.)提供的、在Gentz等.，Proc.Natl.Acad Sci.，USA 86：821-824(1989)中有描述的六组胺酸肽段，或一种HA肽段标记(Wilson et al.，Cell 3～：767(1984)，这两种序列在分离与他们相融合的多肽序列时是有益的。本发明中的多核苷酸还包括，但并不局限于，含有结构基因和其控制基因表达的、与其自然相关联的序列。

编码SEQ ID NO：10的BASB063多肽的序列可与包含在SEQ IDNO：10的第1-813个核苷酸的多肽编码序列同一性。另一种情况，作为基因编码冗余(退化)的结果，此多核苷酸序列也编码SEQ ID NO：10的多肽。此处的“多核苷酸编码多肽”包含那些包括编码本发明中的多肽，尤其是细菌多肽，更尤其是含有SEQ ID NO：10氨基酸序列的Neisseria meningitides BASB063多肽的多核苷酸。“多核苷酸编码多肽”这个名词也包含那些包括编码与附加区相连的多肽(如被整合噬菌体间断的多核苷酸、整合的插入序列、整合的载体序列、整合的转座子序列或引起RNA编辑或基因组DNA改组的序列)的连续区或不连续区的多核苷酸，而附加区也可包含编码和/或非编码序列。

本发明进一步涉及此处所述的多核苷酸的变体，这些多核苷酸变体编码含有SEQ ID NO：10的推导氨基酸序列的多肽变体。本发明中的多核苷酸片段可用于，如合成本发明中全部长度的多核苷酸。

进一步尤其优选的实施方案是编码BASB063变体的多核苷酸，这些BASB063变体具有SEQ ID NO：10的BASB063多肽的氨基酸序列，而在其序列中，几个、一些、5-10、1-5、1-3、第2、第1个氨基酸残基或0个氨基酸残基已以替代、修饰、缺失和/或添加及他们的任意组合方式进行处理过。其中尤其优选的是沉默的替代、添加或缺失，因为他们不改变BASB063多肽的活性或特性。

本发明进一步优选的实施方案是就其全长而言与编码含有SEQID NO：10的氨基酸序列的BASB063多肽至少有85％同一性的多核苷酸，以及与此多核苷酸互补的多核苷酸。在这一点上，至少有90％到100％同一性的多核苷酸是尤其优选的，并且在这些优选的多核苷酸中，那些至少95％同一性的是尤其优选的。进一步来讲，在至少有95％同一性的多核苷酸中，那些至少97％同一性的是非常优选的，至少98％和99％同一性的是尤其非常优选的，至少99％同一性的是更加非常优选的。

优选的实施方案是那些编码基本上保持有与SEQ ID NO：9的DNA所编码的成熟多肽相同的生物活性或功能的多核苷酸。

按照本发明中的特定优选实施方案，本发明提供了与BASB063多核苷酸，如SEQ ID NO：9的那些多核苷酸，尤其是在严格的条件下，进行杂交的多核苷酸。

本发明进一步提供了与此处提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸。在这一点上，本发明尤其涉及那些在严格条件下与此处所述的多核苷酸进行杂交的多核苷酸。此处所用的名词“严格的条件”和“严格的杂交条件”指只有在序列间有至少95％、优选的是至少97％同一性时才能进行杂交。严格杂交条件的一个例子就是在一种溶液中42℃培育过夜，随后在65℃下洗涤0.1×SSC中的杂交支撑物，此处的溶液含有：50％甲醛，5×SSC(150mM NaCI，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt’s溶液，10％硫酸右旋糖苷，和20微克/ml已粉碎的鲑鱼精子的变性DNA。另外杂交和洗涤条件是众所周知的，并且在Sambrook等的Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)中，尤其是其第11章中有示例。杂交溶液也可与本发明提供的多核苷酸序列共用。

本发明也提供了一种由一种多核苷酸序列组成或包含此多核苷酸序列的多核苷酸。此多核苷酸序列是在严格的杂交条件下，以含有SEQ ID NO：9中的该多核苷酸序列或其片段为探针，筛选包含SEQ IDNO：9中一种多核苷酸序列的完整基因的适当文库，并且将该多核苷酸序列进行分离这一系列方法获得的。有益于获得此多核苷酸的片段包括，例如本发明其他部分详细叙述的探针和引物。

关于多核苷酸的检测，本发明的其他部分有讨论，例如本发明中的多核苷酸可用作RNA、cDNA和基因组DNA的探针，以此分离编码BASB063的全部长度的cDNA和基因组克隆，并且也可以此分离与BASB063具有高同一性，尤其是高序列同一性的其他基因的cDNA和基因组克隆。一般来讲，这样的探针至少含有15个核苷酸残基或碱基对。优选的是至少含有30个核苷酸残基或碱基对的探针、或至少含有50个核苷酸残基或碱基对的探针。尤其优选的是至少含有20个核苷酸残基或碱基对、但又少于30个核苷酸残基或碱基对的探针。

通过利用SEQ ID NO：9提供的DNA序列合成的寡核苷酸探针进行的筛选方法，可以分离到BASB063基因的编码区。然后，利用含有与本发明中的基因序列互补的序列的标记寡核苷酸筛选cDNA、基因组DNA或mRNA文库，进而来确定与探针进行杂交的文库的成员。

本发明的一个目标是提供编码BASB065多肽的多核苷酸，尤其是编码此处所指的BASB065多肽的多核苷酸。

在本发明的一种尤其优选的实施方案中，此多核苷酸包含编码BASB065多肽或其变体的区，此编码区包含SEQ ID NO：11中的一序列，而此序列包含编码BASB065多肽的全部长度的基因或其变体。

SEQ ID NO：11中提供的BASB065多核苷酸是脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

进一步，本发明提供了编码和/或表达BASB065多肽和多核苷酸，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌BASB065多肽和多核苷酸的分离的核酸分子，这些核酸分子包括，如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA，cDNA，基因组DNA，B-和Z-DNA。本发明中进一步的实施方案包括生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有益的多核苷酸和多肽、及其变体、包含这些物质的组合物。

本发明的另一方面涉及分离的多核苷酸、与其有紧密关联的多核苷酸及其变体，而这些分离的多核苷酸至少包括一种全部长度的、编码BASB065多肽的基因，此多肽含有从SEQ ID NO：12推导的氨基酸序列。

在本发明的另一尤其优选实施方案中的多肽是BASB065多肽或其变体，此BASB065多肽取自Neisseria meningitiilis，它包含SEQ ID NO：12的一种氨基酸序列或由SEQ ID NO：12的一种氨基酸序列组成。

利用此处提供的信息，如SEQ ID NO：11中的多核苷酸序列，本发明中的一种编码BASB065多肽的多核苷酸就可由标准的克隆和筛选方法，如那些以脑膜炎奈瑟氏球菌细胞为出发物质，对细菌染色体DNA片段进行克隆和测序进而得到全部长度克隆的方法，来获得。例如，要想获得本发明中的多核苷酸序列，如SEQ ID NO：11中给定的多核苷酸序列，具代表性的是探查大肠杆菌或其他合适的宿主的脑膜炎奈瑟氏球菌的染色体DNA克隆文库，探针是衍生自一种部分序列、优选长度为17-mer或更长的放射性标记寡聚核苷酸。利用严格的杂交条件就可将携带与探针相同DNA的克隆区分开。通过与由原始多肽或多核苷酸设计的测序引物对每个由杂交而鉴定的克隆进行测序，有可能将此多核苷酸从两个方向进行延伸，从而确定全部长度的基因序列。较方便的是这样的测序可通过，如利用从质粒克隆制备的变性双链DNA，来进行。适当的技术在Manistis，T.，Fritsch，E.F.和Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORYMAMIAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Labocatory pnss，Cold Spring Harbor，NewYork(1989)中有叙述(见in particular.Screening ByHybridization 1.90 and Sequencing Denatured Double-StrandedDNA Templates 13.70)。直接的基因组DNA测序也可通过获取一种全部长度的基因序列来进行。本发明的说明性的例子中，SEQ ID NO：11中的每一种多核苷酸都可在源自脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA文库中发现。

此外，脑膜炎奈瑟氏球菌中的DNA序列含有一种开放阅读框架，此开放阅读框架可编码一种蛋白质，这种蛋白质含有的氨基酸数目大约与SEQ ID NO：12之中的氨基酸相同，其分子量可通过本领域中的技术人员熟知的氨基酸残基分子量评估法来计算。

在SEQ ID NO：11中，第一个核苷酸处的密码子与从第715个核苷酸开始的终了密码子间的多核苷酸编码SEQ ID NO：12的多肽。

进一方面，本发明提供了由下列序列组成或包含下列序列的分离多核苷酸：

(a)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：11全长而言，至少与SEQ ID NO：11有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列，或

(b)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：12全长而言，至少与SEQ ID NO：12有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

编码本发明中的多肽的一种多核苷酸，包含其在脑膜炎奈瑟氏球菌之外的种中的同源基因和直向同源基因，可由一种方法制得。这种方法包括在严格的杂交条件下(例如，所需温度在45-60℃之间，SDS浓度为0.1-1％)，利用含有SEQ ID NO：11的序列或其片段、或由SEQ ID NO：11序列或其片段组成的探针来筛选一种合适的文库，并且分离包含该多核苷酸序列的全部长度的基因或基因组克隆等步骤。

本发明提供了一种就其全长而言，与SEQ ID NO：11中的一种与全部长度的编码序列(开放阅读框架)完全相同的多核苷酸。本发明也提供了一种成熟多肽或其片段的编码序列，以此多核苷酸序列自身以及阅读框架中的一种成熟蛋白或其片段的编码序列形式存在，此阅读框架又含有另一种编码序列，例如编码一种引导或分泌序列、前蛋白序列、原蛋白序列、前蛋白原序列的序列。本发明中的多核苷酸至少含有一种非编码序列，例如这些非编码序列包括如，但并不局限于至少一种5′和3′非编码序列，例如转录但非翻译序列、终止信号(如依赖ρ-因子和不依赖ρ-因子的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酰化信号。这些多核苷酸序列也可包含编码附加氨基酸的附加序列。例如，可编码能促进对融合多肽的纯化的标记物序列。在本发明的某一特定实施方案中，标准物序列是一种六组胺酸肽段，如pQE载体(Qiagen，Inc.)提供的、在Gentz等.，Proc.Natl.Acad Sci.，USA 86：821-824(1989)中有描述的六组胺酸肽段，或一种HA肽段标记(Wilson et al.，Cell 3～：767(1984)，这两种序列在分离与他们相融合的多肽序列时是有益的。本发明中的多核苷酸还包括，但并不局限于，含有结构基因和其控制基因表达的、与其自然相关联的序列。

编码SEQ ID NO：12的BASB065多肽的序列可与编码包含在SEQ IDNO：12的第1-714个核苷酸的多肽编码序列相同。另一种情况，作为基因编码冗余(退化)的结果，此多核苷酸序列也编码SEQ ID NO：12的多肽。此处的“多核苷酸编码多肽”包含那些包括编码本发明中的多肽，尤其是细菌多肽，更尤其是含有SEQ ID NO：12氨基酸序列的脑膜炎奈瑟氏球菌BASB065多肽的多核苷酸。“多核苷酸编码多肽”这个名词也包含那些包括编码与附加区相连的多肽(如被整合噬菌体间断的多核苷酸、整合的插入序列、整合的载体序列、整合的转座子序列或引起RNA编辑或基因组DNA改组的序列)的连续区或不连续区的多核苷酸，而附加区也可包含编码和/或非编码序列。

本发明进一步涉及此处所述的多核苷酸的变体，这些多核苷酸变体编码含有SEQ ID NO：12的推导氨基酸序列的多肽变体。本发明中的多核苷酸片段可用于，如合成本发明中全部长度的多核苷酸。

进一步尤其优选的实施方案是编码BASB065变体的多核苷酸，这些BASB065变体具有SEQ ID NO：12的BASB065多肽的氨基酸序列，而在其序列中，几个、一些、5-10、1-5、1-3、第2、第1个氨基酸残基或0个氨基酸残基已以替代、修饰、缺失和/或添加及他们的任意组合方式进行处理过。其中尤其优选的是沉默的替代、添加或缺失，因为他们不改变BASB065多肽的活性或特性。

本发明进一步优选的实施方案是就其全长而言，与编码含有SEQID NO：12的氨基酸序列的BASB065多肽至少有85％相同的多核苷酸，以及与此多核苷酸互补的多核苷酸。在这一点上，至少有90％到100％同一性的多核苷酸是尤其优选的，并且在这些优选的多核苷酸中，那些至少95％同一性的是尤其优选的。进一步来讲，在至少有95％同一性的多核苷酸中，那些至少97％同一性的是非常优选的，至少98％和99％同一性的是尤其非常优选的，至少99％同一性的是更加非常优选的。

优选的实施方案是那些编码基本上保持有与SEQ ID NO：11的DNA所编码的成熟多肽相同的生物活性或功能的多核苷酸。

按照本发明中的特定优选实施方案，本发明提供了与BASB065多核苷酸，如SEQ ID NO：11的那些多核苷酸，尤其是在严格的条件下，进行杂交的多核苷酸。

本发明进一步提供了与此处提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸。在这一点上，本发明尤其涉及那些在严格条件下与此处所述的多核苷酸进行杂交的多核苷酸。此处所用的名词“严格的条件”和“严格的杂交条件”指只有在序列间有至少95％、优选的是至少97％同一性时才能进行杂交。严格杂交条件的一个例子就是在一种溶液中42℃培育过夜，随后在65℃下洗涤0.1×SSC中的杂交支撑物，此处的溶液含有：50％甲醛，5×SSC(150mM NaCI，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt’s溶液，10％硫酸右旋糖苷，和20微克/ml已剪切鲑鱼精子的变性DNA。另外杂交和洗涤条件是众所周知的，并且在Sambrook等的  Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)中，尤其是其第11章中有示例。杂交溶液也可与本发明提供的多核苷酸序列共用。

本发明也提供了一种由一种多核苷酸序列组成或包含此多核苷酸序列的多核苷酸。此多核苷酸序列是在严格的杂交条件下，以含有SEQ ID NO：11中的该多核苷酸序列或其片段为探针，筛选包含SEQ IDNO：11中多核苷酸一种序列的完整基因的适当文库，并且将该多核苷酸序列进行分离这一系列方法获得的。有益于获得此多核苷酸的片段包括，例如本发明其他部分详细叙述的探针和引物。

关于多核苷酸的检测，本发明的其他部分有讨论，例如本发明中的多核苷酸可用作RNA、cDNA和基因组DNA的探针，以此分离编码BASB065的全部长度的cDNA和基因组克隆，并且也可以此分离与BASB065具有高同一性，尤其是高序列同一性的其他基因的cDNA和基因组克隆。一般来讲，这样的探针至少含有15个核苷酸残基或碱基对。优选的是至少含有30个核苷酸残基或碱基对的探针、或至少含有50个核苷酸残基或碱基对的探针。尤其优选的是至少含有20个核苷酸残基或碱基对、但又少于30个核苷酸残基或碱基对的探针。

通过利用SEQ ID NO：11提供的DNA序列合成的寡核苷酸探针进行的筛选方法，可以分离到BASB065基因的编码区。然后，利用含有与本发明中的基因序列互补的序列的标记寡核苷酸筛选cDNA、基因组DNA或mRNA文库，进而来确定与探针进行杂交的文库的组成。

本发明的一个目标是提供编码BASB066多肽的多核苷酸，尤其是编码此处所指的BASB066多肽的多核苷酸。

在本发明的一种尤其优选的实施方案中，此多核苷酸包含编码BASB066多肽或其变体的区，此编码区包含SEQ ID NO：13中的一序列，而此序列包含编码BASB066多肽的全部长度的基因或其变体。

SEQ ID NO：13中提供的BASB066多核苷酸是脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

进一步，本发明提供了编码和/或表达BASB066多肽和多核苷酸，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌BASB066多肽和多核苷酸的分离的核酸分子，这些核酸分子包括，如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA，cDNA，基因组DNA，B-和Z-DNA。本发明中进一步的实施方案包括生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有益的多核苷酸和多肽、及其变体、包含这些物质的组合物。

本发明的另一方面涉及分离的多核苷酸、与其有紧密关联的多核苷酸及其变体，而这些分离的多核苷酸至少包括一种全部长度的、编码BASB066多肽的基因，此多肽含有从SEQ ID NO：14推导的氨基酸序列。

在本发明的另一尤其优选实施方案中的多肽是BASB066多肽或其变体，此BASB066多肽取自脑膜炎奈瑟氏球菌，它包含SEQ ID NO：14的一种氨基酸序列或由SEQ ID NO：14的一种氨基酸序列组成。

利用此处提供的信息，如SEQ ID NO：13中的多核苷酸序列，本发明中的一种编码BASB066多肽的多核苷酸就可由标准的克隆和筛选方法，如那些以脑膜炎奈瑟氏球菌细胞为出发物质，对细菌染色体DNA片段进行克隆和测序进而得到全部长度克隆的方法，来获得。例如，要想获得本发明中的多核苷酸序列，如SEQ ID NO：13中给定的多核苷酸序列，具代表性的是探查大肠杆菌或其他合适的宿主的脑膜炎奈瑟氏球菌的染色体DNA克隆文库，探针是衍生自一种部分序列、优选长度为17-mer或更长的放射性标记寡聚核苷酸。利用严格的杂交条件就可将携带与探针相同DNA的克隆区分开。通过与由原始多肽或多核苷酸设计的测序引物对每个由杂交而鉴定克隆进行测序，有可能将此多核苷酸从两个方向进行延伸，从而确定全部长度的基因序列。较方便的是这样的测序可通过，如利用从质粒克隆制备的变性双链DNA，来进行。适当的技术在Manistis，T.，Fritsch，E.F.和Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORYMAMIAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Labocatory pnss，Cold Spring Harbor，NewYork(1989)中有叙述(见in particular.Screening ByHybridization 1.90 and Sequencing Denatured Double-StrandedDNA Templates 13.70)。直接的基因组DNA测序也可通过获取一种全部长度的基因序列来进行。本发明的说明性的例子中，SEQ ID NO：13中的每一种多核苷酸都可在源自脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA文库中发现。

此外，脑膜炎奈瑟氏球菌中的DNA序列含有一种开放阅读框架，此开放阅读框架可编码一种蛋白质，这种蛋白质含有的氨基酸数目大约与SEQ ID NO：14之中的氨基酸相同，其分子量可通过本领域中的技术人员熟知的氨基酸残基分子量评估法来计算。

在SEQ ID NO：13中，第一个核苷酸处的密码子与从第1174个核苷酸开始的终了密码子间的多核苷酸编码SEQ ID NO：14的多肽。

进一方面，本发明提供了由下列序列组成或包含下列序列的分离多核苷酸：

(a)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：13全长而言，至少与SEQ ID NO：13有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列，或

(b)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：14全长而言，至少与SEQ ID NO：14有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

编码本发明中的多肽的一种多核苷酸，包含其在脑膜炎奈瑟氏球菌之外的种中的同源基因和直向同源基因，可由一种方法制得。这种方法包括在严格的杂交条件下(例如，所需温度在45-60℃之间，SDS浓度为0.1-1％)，利用含有SEQ ID NO：13的序列或其片段、或由SEQ ID NO：13序列或其片段组成的探针来筛选一种合适的文库，并且分离包含该多核苷酸序列的全部长度的基因或基因组克隆等步骤。

本发明提供了一种就其全长而言，与SEQ ID NO：13中的一种与编码序列(开放阅读框架)完全相同的多核苷酸。本发明也提供了一种成熟多肽或其片段的编码序列，以此多核苷酸序列自身以及阅读框架中的一种成熟蛋白或其片段的编码序列的形式存在，此阅读框架又含有另一种编码序列，例如编码一种引导或分泌序列、前蛋白序列、原蛋白序列、前蛋白原序列的序列。本发明中的多核苷酸至少含有一种非编码序列，例如这些非编码序列包括如，但并不局限于至少一种5′和3′非编码序列，例如转录但非翻译序列、终止信号(如依赖ρ-因子和不依赖ρ-因子的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酰化信号。这些多核苷酸序列也可包含编码附加氨基酸的附加序列。例如，可编码能促进对融合多肽的纯化的标记物序列。在本发明的某一特定实施方案中，标准物序列是一种六组胺酸肽段，如pQE载体(Qiagen，Inc.)提供的、在Gentz等.，Proc.Natl.Acad Sci.，USA 86：821-824(1989)中有描述的六组胺酸肽段，或一种HA肽段标记(Wilson et al.，Cell 3～：767(1984)，这两种序列在分离与他们相融合的多肽序列时是有益的。本发明中的多核苷酸还包括，但并不局限于，含有结构基因和其控制基因表达的、与其自然相关联的序列。

编码SEQ ID NO：14的BASB060多肽的序列可与包含SEQ ID NO：14的第1-1173个核苷酸的多肽编码序列相同。另一种情况，作为基因编码冗余(退化)的结果，此多核苷酸序列也编码SEQ ID NO：14的多肽。此处的“多核苷酸编码多肽”包含那些包括编码本发明中的多肽，尤其是细菌多肽，更尤其是含有SEQ ID NO：14氨基酸序列的Neisseria meningitides BASB066多肽的多核苷酸。“多核苷酸编码多肽”这个名词也包含那些包括编码与附加区相连的多肽(如被整合噬菌体间断的多核苷酸、整合的插入序列、整合的载体序列、整合的转座子序列或引起RNA编辑或基因组DNA改组的序列)的连续区或不连续区的多核苷酸，而附加区也可包含编码和/或非编码序列。

本发明进一步涉及此处所述的多核苷酸的变体，这些多核苷酸变体编码含有SEQ ID NO：14的推导氨基酸序列的多肽变体。本发明中的多核苷酸片段可用于，如合成本发明中全部长度的多核苷酸。

进一步尤其优选的实施方案是编码BASB066变体的多核苷酸，这些BASB066变体具有SEQ ID NO：14的BASB066多肽的氨基酸序列，而在其序列中，几个、一些、5-10、1-5、1-3、第2、第1个氨基酸残基或0个氨基酸残基已以替代、修饰、缺失和/或添加及他们的任意组合方式进行处理过。其中尤其优选的是沉默的替代、添加或缺失，因为他们不改变BASB066多肽的活性或特性。

本发明进一步优选的实施方案是就其全长而言，与编码含有SEQID NO：14的氨基酸序列的BASB066多肽至少有85％全部长度相同的多核苷酸，以及与此多核苷酸互补的多核苷酸。在这一点上，至少有90％到100％同一性的多核苷酸是尤其优选的，并且在这些优选的多核苷酸中，那些至少95％同一性的是尤其优选的。进一步来讲，在至少有95％同一性的多核苷酸中，那些至少97％同一性的是非常优选的，至少98％和99％同一性的是尤其非常优选的，至少99％同一性的是更加非常优选的。

优选的实施方案是那些编码基本上保持有与SEQ ID NO：13的DNA所编码的成熟多肽相同的生物活性或功能的多核苷酸。

按照本发明中的特定优选实施方案，本发明提供了与BASB066多核苷酸，如SEQ ID NO：13的那些多核苷酸，尤其是在严格的条件下，进行杂交的多核苷酸。

本发明进一步提供了与此处提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸。在这一点上，本发明尤其涉及那些在严格条件下与此处所述的多核苷酸进行杂交的多核苷酸。此处所用的名词“严格的条件”和“严格的杂交条件”指只有在序列间有至少95％、优选的是至少97％同一性时才能进行杂交。严格杂交条件的一个例子就是在一种溶液中42℃培育过夜，随后在65℃下洗涤0.1×SSC中的杂交支撑物，此处的溶液含有：50％甲醛，5×SSC(150mM NaCI，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt’s溶液，10％硫酸右旋糖苷，和20微克/ml已剪切鲑鱼精子的变性DNA。另外杂交和洗涤条件是众所周知的，并且在Sambrook等的Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)中，尤其是其第11章中有示例。杂交溶液也可与本发明提供的多核苷酸序列共用。

本发明也提供了一种由一种多核苷酸序列组成或包含此多核苷酸序列的多核苷酸。此多核苷酸序列是在严格的杂交条件下，以含有SEQ ID NO：13中的该多核苷酸序列或其片段为探针，筛选包含SEQ IDNO：13中一种多核苷酸序列的完整基因的适当文库，并且将该多核苷酸序列进行分离这一系列方法获得的。有益于获得此多核苷酸的片段包括，例如本发明其他部分详细叙述的探针和引物。

关于多核苷酸的检测，本发明的其他部分有讨论，例如本发明中的多核苷酸可用作RNA、cDNA和基因组DNA的探针，以此分离编码BASB066的全部长度的cDNA和基因组克隆，并且也可以此分离与BASB066具有高同一性，尤其是高序列同一性的其他基因的cDNA和基因组克隆。一般来讲，这样的探针至少含有15个核苷酸残基或碱基对。优选的是至少含有30个核苷酸残基或碱基对的探针、或至少含有50个核苷酸残基或碱基对的探针。尤其优选的是至少含有20个核苷酸残基或碱基对、但又少于30个核苷酸残基或碱基对的探针。

通过利用SEQ ID NO：13提供的DNA序列合成的寡核苷酸探针进行的筛选方法，可以分离到BASB066基因的编码区。然后，利用含有与本发明中的基因序列互补的序列的标记寡核苷酸筛选cDNA、基因组DNA或mRNA文库，进而来确定与探针进行杂交的文库的成员。

本发明的一个目标是提供编码BASB071多肽的多核苷酸，尤其是编码此处所指的BASB071多肽的多核苷酸。

在本发明的一种尤其优选的实施方案中，此多核苷酸包含编码BASB071多肽或其变体的区，此编码区包含SEQ ID NO：15中的一序列，而此序列包含编码BASB071多肽的全部长度的基因或其变体。

SEQ ID NO：15中提供的BASB071多核苷酸是脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090。

进一步，本发明提供了编码和/或表达BASB071多肽和多核苷酸，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌BASB071多肽和多核苷酸的分离的核酸分子，这些核酸分子包括，如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA，cDNA，基因组DNA，B-和Z-DNA。本发明中进一步的实施方案包括生物学上、诊断上、预防上、临床上或治疗上有益的多核苷酸和多肽、及其变体、包含这些物质的组合物。

本发明的另一方面涉及分离的多核苷酸、与其有紧密关联的多核苷酸及其变体，而这些分离的多核苷酸至少包括一种全部长度的、编码BASB060多肽的基因，此多肽含有从SEQ ID NO：16推导的氨基酸序列。

在本发明的另一尤其优选实施方案中的多肽是BASB071多肽或其变体，此BASB071多肽取自脑膜炎奈瑟氏球菌，它包含SEQ ID NO：16的一种氨基酸序列或由SEQ ID NO：16的一种氨基酸序列组成。

利用此处提供的信息，如SEQ ID NO：15中的多核苷酸序列，本发明中的一种编码BASB071多肽的多核苷酸就可由标准的克隆和筛选方法，如那些以脑膜炎奈瑟氏球菌细胞为出发物质，对细菌染色体DNA片段进行克隆和测序进而得到全部长度克隆的方法，来获得。例如，要想获得本发明中的多核苷酸序列，如SEQ ID NO：15中给定的多核苷酸序列，具代表性的是探查大肠杆菌或其他合适的宿主的脑膜炎奈瑟氏球菌的染色体DNA克隆文库，探针是衍生自一种部分序列、优选长度为17-mer或更长的放射性标记寡聚核苷酸。利用严格的杂交条件就可将携带与探针相同DNA的克隆区分开。通过与由原始多肽或多核苷酸设计的测序引物对每个由杂交而鉴定的克隆进行测序，有可能将此多核苷酸从两个方向进行延伸，从而确定全部长度的基因序列。较方便的是这样的测序可通过，如利用从质粒克隆制备的变性双链DNA，来进行。适当的技术在Manistis，T.，Fritsch，E.F.和Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORYMAMIAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Labocatory pnss，Cold Spring Harbor，NewYork(1989)中有叙述(见in particular.Screening ByHybridization 1.90 and Sequencing Denatured Double-StrandedDNA Templates 13.70)。直接的基因组DNA测序也可通过获取一种全部长度的基因序列来进行。本发明的说明性的例子中，SEQ ID NO：15中的每一种多核苷酸都可在源自脑膜炎奈瑟氏球菌的DNA文库中发现。

此外，脑膜炎奈瑟氏球菌中的DNA序列含有一种开放阅读框架，此开放阅读框架可编码一种蛋白质，这种蛋白质含有的氨基酸数目大约与SEQ ID NO：16之中的氨基酸相同，其分子量可通过本领域中的技术人员熟知的氨基酸残基分子量评估法来计算。

在SEQ ID NO：15中，第一个核苷酸处的密码子与从第805个核苷酸开始的终了密码子间的多核苷酸编码SEQ ID NO：16的多肽。

进一方面，本发明提供了由下列序列组成或包含下列序列的分离多核苷酸：

(a)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：15全长而言，至少与SEQ ID NO：15有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列，或

(b)一种多核苷酸序列，这个序列就SEQ ID NO：16全长而言，至少与SEQ ID NO：16有85％同一性，优选的是与其至少有90％同一性的序列，然而更优选的是与其至少95％同一性的序列，甚至更优选的是与其至少97-99％同一性或完全相同的序列。

编码本发明中的多肽的一种多核苷酸，包含其在脑膜炎奈瑟氏球菌之外的种中的同源基因和直向同源基因，可由一种方法制得。这种方法包括在严格的杂交条件下(例如，所需温度在45-60℃之间，SDS浓度为0.1-1％)，利用含有SEQ ID NO：15的序列或其片段、或由SEQ ID NO：15序列或其片段组成的探针来筛选一种合适的文库，并且分离包含该多核苷酸序列的全部长度的基因或基因组克隆等步骤。

本发明提供了一种就其全长而言，与SEQ ID NO：15中的编码序列(开放阅读框架)完全相同的多核苷酸。本发明也提供了一种成熟多肽或其片段的编码序列，以此多核苷酸序列自身以及阅读框架中的一种成熟蛋白或其片段的编码序列的形式存在，此阅读框架又含有另一种编码序列，例如编码一种引导或分泌序列、前蛋白序列、原蛋白序列、前蛋白原序列的序列。本发明中的多核苷酸至少含有一种非编码序列，例如这些非编码序列包括如，但并不局限于至少一种5′和3′非编码序列，例如转录但非翻译序列、终止信号(如依赖ρ-因子和不依赖ρ-因子的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酰化信号。这些多核苷酸序列也可包含编码附加氨基酸的附加序列。例如，可编码能促进对融合多肽的纯化的标记物序列。在本发明的某一特定实施方案中，标准物序列是一种六组胺酸肽段，如pQE载体(Qiagen，Inc.)提供的、在Gentz等.，Proc.Natl.Acad Sci.，USA 86：821-824(1989)中有描述的六组胺酸肽段，或一种HA肽段标记(Wilson et al.，Cell 3～：767(1984)，这两种序列在分离与他们相融合的多肽序列时是有益的。本发明中的多核苷酸还包括，但并不局限于，含有结构基因和其控制基因表达的、与其自然相关联的序列。

编码SEQ ID NO：16的BASB071多肽的序列可与包含在SEQ IDNO：16的第1-804个核苷酸的多肽编码序列相同。另一种情况，作为基因编码冗余(退化)的结果，此多核苷酸序列也编码SEQ ID NO：16的多肽。此处的“多核苷酸编码多肽”包含那些包括编码本发明中的多肽，尤其是细菌多肽，更尤其是含有SEQ ID NO：16氨基酸序列的Neisseria meningitides BASB071多肽的多核苷酸。“多核苷酸编码多肽”这个名词也包含那些包括编码与附加区相连的多肽(如被整合噬菌体间断的多核苷酸、整合的插入序列、整合的载体序列、整合的转座子序列或引起RNA编辑或基因组DNA改组的序列)的连续区或不连续区的多核苷酸，而附加区也可包含编码和/或非编码序列。

本发明进一步涉及此处所述的多核苷酸的变体，这些多核苷酸变体编码含有SEQ ID NO：16的推导氨基酸序列的多肽变体。本发明中的多核苷酸片段可用于，如合成本发明中全部长度的多核苷酸。

进一步尤其优选的实施方案是编码BASB071变体的多核苷酸，这些BASB071变体具有SEQ ID NO：16的BASB071多肽的氨基酸序列，而在其序列中，几个、一些、5-10、1-5、1-3、第2、第1个氨基酸残基或0个氨基酸残基已以替代、修饰、缺失和/或添加及他们的任意组合方式进行处理过。其中尤其优选的是沉默的替代、添加或缺失，因为他们不改变BASB071多肽的活性或特性。

本发明进一步优选的实施方案是就其全长而言，与编码含有SEQID NO：16的氨基酸序列的BASB071多肽至少有85％相同的多核苷酸，以及与此多核苷酸互补的多核苷酸。在这一点上，至少有90％到100％同一性的多核苷酸是尤其优选的，并且在这些优选的多核苷酸中，那些至少95％同一性的是尤其优选的。进一步来讲，在至少有95％同一性的多核苷酸中，那些至少97％同一性的是非常优选的，至少98％和99％同一性的是尤其非常优选的，至少99％同一性的是更加非常优选的。

优选的实施方案是那些编码基本上保持有与SEQ ID NO：15的DNA所编码的成熟多肽相同的生物活性或功能的多核苷酸。

按照本发明中的特定优选实施方案，本发明提供了与BASB071多核苷酸，如SEQ ID NO：15的那些多核苷酸，尤其是在严格的条件下，进行杂交的多核苷酸。

本发明进一步提供了与此处提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸。在这一点上，本发明尤其涉及那些在严格条件下与此处所述的多核苷酸进行杂交的多核苷酸。此处所用的名词“严格的条件”和“严格的杂交条件”指只有在序列间有至少95％、优选的是至少97％同一性时才能进行杂交。严格杂交条件的一个例子就是在一种溶液中42℃培育过夜，随后在65℃下洗涤0.1×SSC中的杂交支撑物，此处的溶液含有：50％甲醛，5×SSC(150mM NaCI，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt’s溶液，10％硫酸右旋糖苷，和20微克/ml已剪切的鲑鱼精子的变性DNA。另外杂交和洗涤条件是众所周知的，并且在Sambrook等的Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)中，尤其是其第11章中有示例。杂交溶液也可与本发明提供的多核苷酸序列共用。

本发明也提供了一种由一种多核苷酸序列组成或包含此多核苷酸序列的多核苷酸。此多核苷酸序列是在严格的杂交条件下，以含有SEQ ID NO：15中的该多核苷酸序列或其片段为探针，筛选包含SEQ IDNO：15中一种多核苷酸序列的完整基因的适当文库，并且将该多核苷酸序列进行分离这一系列方法获得的。有益于获得此多核苷酸的片段包括，例如本发明其他部分详细叙述的探针和引物。

关于多核苷酸的检测，本发明的其他部分有讨论，例如本发明中的多核苷酸可用作RNA、cDNA和基因组DNA的探针，以此分离编码BASB060的全部长度的cDNA和基因组克隆，并且也可以此分离与BASB071具有高同一性，尤其是高序列同一性的其他基因的cDNA和基因组克隆。一般来讲，这样的探针至少含有15个核苷酸残基或碱基对。优选的是至少含有30个核苷酸残基或碱基对的探针、或至少含有50个核苷酸残基或碱基对的探针。尤其优选的是至少含有20个核苷酸残基或碱基对、但又少于30个核苷酸残基或碱基对的探针。

通过利用SEQ ID NO：15提供的DNA序列合成的寡核苷酸探针进行的筛选方法，可以分离到BASB071基因的编码区。然后，利用含有与本发明中的基因序列互补的序列的标记寡核苷酸筛选cDNA、基因组DNA或mRNA文库，进而来确定与探针进行杂交的文库的成员。

可利用多种本领域中的技术人员熟知的方法，如那些基于cDNA末端快速扩增(RACE)方法(见，如Frohman，et al.，PNAS IlSA85：8998-9002，1988)之上的方法，来获得全长的DNA或延伸短链的DNA。最近对这些技术的修改，如Marathon^TM technology所做的示例(Clontech Laboratories Inc.)，已经显著简化了对长链DNA的寻找。在Marathon^TM technology中是从选择的组织中提取RNA，然后在两端分别连接上‘接受体’序列，从而制备cDNA。结合利用基因特异的和接合体特异的寡核苷酸引物，通过核酸扩增(PCR)技术来扩增DNA缺失的5′末端。然后利用嵌套的引物，即设计来对扩增产物退火的引物(典型的是增进接合体序列的3′末端退火的、接合体特异的引物和增进选择的基因序列5′末端退火的、基因特异的引物)，来重复这一PCR扩增反应。通过DNA测序对此反应产物进行分析，而此全长DNA是通过将产物直接连接到现有的DNA中以产生一种完全序列，或利用用于设计5′引物的新序列信息来进行分离全长PCR的方法来构建的。

本发明中的多核苷酸和多肽可用作，如研究用试剂和进行疾病诊断和治疗方法的发现的物质，这些疾病尤其指人类的疾病，这些在涉及多核苷酸检测的部分有进一步的讨论。

本发明中的多核苷酸是衍生自SEQ ID NO：1-16的序列的寡核苷酸，他们可用于已描述的方法，但优选的是PCR，从而确定此处所鉴别的多核苷酸是否在感染组织的细菌中进行了部分或全部的转录。已经验证，这些肽段也将应用在感染阶段的诊断和病原体引起的感染类型的诊断上。

本发明也提供了一些编码多肽的多核苷酸，这些多肽是包含有附加的氨基或羧基末端氨基酸、或成熟多肽内部的氨基酸(例如当此多肽成熟形式含有多于一种多肽链时)的成熟蛋白。这样的序列可能在蛋白从前体到成熟形式的加工中起着重要的作用，可在其他物质中允许进行递送，可延长或缩短蛋白的半寿期或可促进蛋白检验或生产等操作。在体内，利用细胞酶可将附加氨基酸从成熟蛋白中处理掉。

对本发明中的每一个和所有多核苷酸来讲，本发明也提供了与其互补的多核苷酸。优选的是这些互补多核苷酸与与之互补的每一多核苷酸互补。

前体蛋白可以是多肽的非活性形式，含有融合到一种或多种前序列上的成熟形式多肽。但前序列去除掉后，这些失活的前体一般会变为其活性形式。一些或所有的前序列可在活化前去除掉。一般说来，这些前体被称为前蛋白(proprotein)。

在标准的代表核苷的A、G、C、T/U外，“N”也可用作描述本发明中的某一多核苷酸。N是四种DNA或RNA核苷中的任一种都可出现在这种DNA或RNA的指定位置，只要与相邻核苷酸部位相组合、在正确的阅读框架中阅读时，优选的N不是在此阅读框架中产生早熟的终止密码子的核苷酸。

总的来说，本发明中的多核苷酸可编码成熟蛋白、带有前导序列的成熟蛋白(可认为是前蛋白)、含有一种或多种非前蛋白前导序列的前序列成熟蛋白前体、或前蛋白原，而前蛋白原是前蛋白的前体，他含有一种前导序列和一或多种前序列，这些前序列一般在进行加工以获得有活性且成熟的多肽形式的过程中就去除掉了。

按照本发明的一个方面，本发明提供了本发明中的多核苷酸在治疗或预防，尤其是基因免疫方面的应用。

本发明的多核苷酸在基因免疫上的应用上优选应用合适的递送方法，例如直接注射质粒DNA到肌肉中(Wolff et al.，Hum Mol Genet(1992)1：363，Manthorpe et al.，Hum.Gene Ther.(1983)4：419)递送、与特异的蛋白载体复合的DNA(Wu et al.，J Biol Chem.(1989)364：16985)、与磷酸钙共沉淀(Benvenisty & Reshef，PNAS USA，(1986)83：9551)、通过脂质体进行的多种形式的DNA包被(Kanedaet al.，Science(1989)243：375)、粒子轰击(Tang et al.，Nature(1992)356：152，Eisenbraun et al.，DNA Cell Biol(1993)12：791)和通过克隆的反转录病毒载体进行的体内感染(Seeger et al.，PNAS USA(1984)81：5849)。载体，宿主细胞，表达体系

本发明涉及的载体包含本发明中的一种或多种多核苷酸，涉及的宿主细胞是利用重组技术对本发明的载体和本发明的多肽产物进行了基因工程设计的。应用源自本发明的DNA构建物的RNA、无细胞翻译体系可制备这样的蛋白质。

利用本领域中的技术人员熟知的技术，本发明中的重组多肽可从基因工程设计的、含有表达体系的宿主细胞来制备。进一步，本发明相应的涉及包含本发明中一种或多种多核苷酸的表达体系，也涉及含有这样的表达体系的、进行基因工程设计过的宿主细胞，也涉及本发明中通过重组技术制备的产物。

为了重组生产本发明中的多肽，就要对宿主细胞进行基因工程改造，使其结合表达体系或表达体系的一部分或本发明的多核苷酸。利用许多标准的实验室手册如Davis等的BASIC METHODS IN

MOLECULAR BIOLOGY，(1986)和Sambrook等的MOLECULARCLONING：A LABORATORY MANUAL，2nd Ed.，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989)中描述的方法，如磷酸钙转染、DEAE-右旋糖苷介导的转染、转位、显微注射、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、擦伤加载、冲击式引入和感染，将多核苷酸有效的引入宿主细胞。

适当的代表性宿主包括细菌细胞如链球菌细胞、葡萄球菌、肠道球菌、大肠杆菌细胞、链霉菌细胞、蓝细菌、枯草杆菌、粘膜炎莫拉菌(Moraxella catarrhalis)、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟氏球菌；真菌细胞如酵母细胞、克鲁维酵母菌、酵母属细胞(Saccharomyces)、担子菌类细胞、白色念珠菌和曲霉属细胞；昆虫细胞如果蝇属S2细胞和草地贪夜蛾Sf9；动物细胞如CHO，COS，HeLa，C127，3T3，BHK，293，CV-1和Bowes黑素瘤细胞；以及植物细胞裸子植物细胞或被子植物细胞。

有多种表达体系可用于制备本发明中的多肽。在其他的表达体系中，这些载体包括染色体起源的、游离起源的、和病毒起源的载体，例如衍生自病毒质粒、细菌噬菌体、转座子、酵母游离体、插入元件、酵母染色体元件的载体，及衍生自病毒如杆状病毒、乳多空病毒如SV40、牛痘病毒、腺病毒、家禽痘病毒、假狂犬病病毒、小核糖体核酸病毒、反转录病毒和甲病毒属病毒的载体，以及衍生自这些病毒的结合体如衍生自质粒和细菌噬菌体基因元件的结合体、如粘粒和噬菌粒的结合体的载体。表达体系的构成包括调节和产生表达的控制区。在这一点上，一般来讲，任何适于在宿主中维持、繁殖或表达多种多核苷酸和/或一种多核苷酸的体系可用于表达本发明中的多肽。利用多种众所周知的、程序性的技术中的任一种技术，如Sambrook等的MOLECULAR CLONING.A LABORATORY MANUAL(见上文)，就可将适当的DNA序列插入到表达体系中。

在真核细胞的重组表达体系中，为了将翻译的蛋白分泌到内质网内腔、周质空间或胞外环境中，就需要将适当的分泌信号引入表达的多肽中。这些信号可以是多肽的内源或外源信号。

利用包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阳离子或阴离子交换层析、磷酸纤维素层析、疏水相互作用层析、亲和层析、羟磷灰石层析和外源凝集素层析等众所周知的方法，可从重组细胞培养物中回收和纯化本发明中的多肽。最优选的是利用离子金属层析(IMAC)来纯化多肽。当多肽在细胞内合成、分离和/或纯化的过程中变性时，众所周知的蛋白重折叠技术可用于重新产生其活性形式。

表达体系也可是重组的活体微生物，如病毒或细菌。有益的基因可插入到活体重组病毒或细菌的基因组中。接种或体内感染这种活体载体就会导致在体内表达这种抗原和诱导免疫反应。用于这种操作的病毒和细菌包括如痘病毒(如牛痘、家禽痘、金丝雀痘)、甲病毒属病毒(Sindbis病毒，Semliki Forest病毒，Venezuelian EquineEncephalitis病毒)、腺病毒、腺相关病毒，小RNA病毒(脊髓灰质炎病毒、鼻病毒)、疱疹病毒(水痘带状疹子病毒等)、李斯特菌属、Salmonella、志贺菌属、奈瑟菌属、BCG。这些病毒和细菌可以是致命的，也可通过多种方法减毒以制备活体疫苗。这些活体疫苗也是本发明中的一部分。诊断检测，预测检测，血清型检测和突变检测

本发明也涉及BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多核苷酸和多肽在作为诊断试剂方面的应用。对真核生物，特别是哺乳动物，尤其是人的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多核苷酸和/或多肽的检测将提供一种疾病诊断、疾病阶段划分或在感染微生物对药物的反应方面的诊断方法。真核生物，特别是哺乳动物，尤其是人，特别是那些已感染或易于感染含有BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071基因或蛋白的生物体的人，可利用多种众所周知的和本发明提供的技术在核酸或氨基酸水平上进行检查。

用于预防、诊断或其他分析的多核苷酸和多肽可由假定已感染/和/或已感染的个体的身体材料中获得。这种来源的多核苷酸，尤其是DNA或RNA，可直接用于检测，也可在用于分析之前通过PCR或其他扩增技术进行酶促扩增。RNA，尤其是mRNA、cDNA和基因组DNA也可具有相同的应用。

利用扩增技术，通过分析从生物体中选定的多核苷酸的基因型，就可以获得这些或感染性或常驻生物体的种和株的特性。通过扩增产物的长度的改变，在与选择的相关生物体，优选的是同一属的不同种生物或同一种的不同菌株的参考序列的基因型对比后，就能检测到插入和缺失现象。将扩增的DNA与标记的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多核苷酸序列杂交就能检测到点突变。通过利用Dnase或Rnase对DNA或RNA分别进行消化，或通过检测熔解温度或复性动力学的差别，就可将完美的或显著匹配的序列与不完美的或更加错配的双螺旋区分开。在与参考序列的电泳迁移率相比的情况下，通过凝胶中多核苷酸片段的电泳迁移率改变就可检测到多核苷酸序列间的差别。这种检测在有变性剂存在或无变性剂的情况下都能进行。通过直接的DNA或RNA测序也可检测到多核苷酸间的差别。见如Myers等.，Science，130：1242(1985)。通过核酶保护检测法如RNase，V1 and S1保护检测法、或通过化学切割法也可检测到特异位点的序列变化。见如Cotton等，Proc.Natl.Acad Sci.，USA，85：4397-4401(1985)。

在另一实施方案中，可构建包含BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071核苷酸序列或其片段的一系列寡核苷酸探针，从而进行有效的筛选，如基因突变、血清型、分类学上的分类或鉴别。这一系列的技术方法是众所周知的，并且他们具有一般的适用性，他们可用于解决分子基因学中包括基因表达、基因联锁和基因变异性在内的多种问题((见如Chee等，Science，17～：610(1996))。

因此，在另一方面，本发明涉及的诊断试剂盒包含：

(a)本发明中的多核苷酸，优选的是SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13，15的核苷酸序列或其片段；

(b)与(a)互补的多核苷酸序列；

(c)本发明中的多肽，优选的是SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16的核苷酸序列或其片段；或

(d)本发明中的多肽的抗体，优选的是SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16的多肽的抗体。

应当认为任一试剂盒的(a)、(b)、(c)或(d)都含有基本的组分。在上述试剂盒中，这些试剂盒将用于疾病诊断或对疾病的易感性的诊断。

本发明也涉及将本发明中的多核苷酸作为诊断试剂的应用。对本发明的多核苷酸的突变形式，优选的是与疾病或致病性相关联的SEQID NO：1，3，5，7，9，11，13，15多核苷酸，的检测，将会提供一种诊断工具，他可辅助或定义疾病的诊断方法、疾病进程的预测、疾病阶段的确定或疾病的感染性，而这些疾病是由于多核苷酸的表达不足、过度表达或表达改变产生的。利用多种技术，如本发明中其他部分描述的技术，则可将生物体，尤其是已感染的生物体，所携带的这些多核苷酸的突变在多核苷酸水平上检测到。

通过多种技术，如虑及按血清型进行分类，在多核苷酸水平上，可将携带本发明中的多核苷酸和/或多肽上的突变或多态现象(等位基因变异)的生物体细胞检测出来。例如，RT-PCR可用于检测RNA的突变。尤其优选的是利用与自动检测体系如GeneScan，相结合的RT-PCR。RNA、cDNA或基因组DNA也可用于同样的目的-PCR。例如，与编码BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多肽的多核苷酸互补的PCR引物能用于鉴别和分析一些突变。

本发明进一步提供了一些从5′和/或3′末端去掉1、2、3或4个核苷酸的引物。这些引物可用于扩增BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071 DNA和/或RNA，这些DNA和/或RNA是从源自一个体，如身体的物质的样品中分离出来的。引物可用于扩增从感染个体中分离到的多核苷酸，然后利用多种技术来解释此多核苷酸。这样就可检测到多核苷酸序列中的突变，也可将此突变应用于诊断和/或预测疾病感染或感染的阶段或感染的过程，或用于确定易感染物血清型和/或对其进行分类。

本发明进一步提供了诊断疾病，优选的是细菌感染，更优选的是由脑膜炎奈瑟氏球菌引起的感染的方法，这些方法包括确定含有SEQID NO：1，3，5，7，9，11，13，15序列的多核苷酸增强的表达，而此多核苷酸是从源自一个体，如身体的物质的样品中分离出来的。利用任意一种本领域中的技术人员熟知的、对多核苷酸定量的方法，例如扩增、PCR，、RT-PCR、RNase保护、，Northern印记、光谱测定法和其他的杂交方法，来测定BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸表达的增强或减少。

此外，按照本发明，通过与正常的对照组织标本相对比从而可对BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽的过度表达进行检测，此诊断方法也可用于检测，如是否有感染存在。对本领域中的技术人员来讲，这些可用于确定BA5B051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽水平的检测方法是众所周知的，这些BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽是从源自一宿主，如身体的材料的样品中分离出来的。这样的检测方法包括放射性免疫测定、竞争性结合测定、Westem印记分析、抗体三夹板测定、抗体检测和ELISA测定。

本发明中的多核苷酸可作为多核苷酸阵列，优选的是高密度多核苷酸阵列(array)或多核苷酸栅格(grid)的组分。这些高密度阵列对疾病的诊断和预测尤其有益。例如，一组点，每一个都包含一种不同的基因，并且含有本发明中的一种多核苷酸或多种多核苷酸，可用于探查，这种探查是利用由杂交或核酸扩增、利用从体样品中衍生的、或利用从体样品中获得的探针来确定个体中的特异多核苷酸序列或相关序列的存在的方法进行的。这样的特异多核苷酸序列的存在表明病菌，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌的存在，并可有效的用于疾病或疾病过程的诊断和/或预防。含有大量SEQ IDNO：1，3，5，7，9，11，13，15的多核苷酸序列变体栅格是优选的。含有大量编码SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16的多肽序列的多核苷酸序列变体栅格也是优选的。抗体

本发明中的多肽和多核苷酸或其变体或其表达细胞可作为免疫原，利用此免疫原可产生分别对多肽或多核苷酸特异性免疫的抗体。

在本发明的某些优选实施方案提供了抗BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽或多核苷酸的抗体。

按照常规规程，将本发明中的多肽和/或多核苷酸或二者或其中之一的含有抗原决定簇的片段、二者或其中之一的相似物、表达二者或其中之一的细胞对动物，优选非人类的动物给药，就能获得抗本发明的多肽或多核苷酸的抗体。本领域中的技术人员熟知的、用来由连续细胞系制备抗体的任一方法都可用于制备单克隆抗体。这样的例子包括多种技术，如在Kohler，G.和Milstein，C.，Nature 156：495-497(1975)中、Kozbor等的Immunology Today 4：72(1983)中、Cole等.，pg 77-96 in MONOCLONAL ANTIBODIESAND CANCERTHERAPY，Alan R.Liss，Inc.(1985)中的技术。

制备单链抗体的技术(U.S.Patent No.4，946，778)可用于制备对本发明中的多核苷酸或多肽有抗性的单链抗体。此外，转基因小鼠或其他生物体或动物，如除小鼠外的哺乳动物，可用于表达对本发明中的多肽或多核苷酸具特异性免疫的、人源化抗体。

另一方面，利用噬菌体展示技术，可以从淋巴细胞v-基因PCR扩增物或首次用于实验的文库(McCafferty，et al.，(1990)，Nature 348，552-554；Marks，et al.，(1992)Biotechnology 10，779-783)中选择对本发明的多肽有结合活性的抗体基因，而这些淋巴细胞v基因PCR扩增物是从通过抗-BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071处理筛选的人得到的。通过如链改组(Clackson et al.，(1991)Nature 352：628)也能改进这些抗体的亲和性。

上述的抗体可用于分离和鉴定能表达本发明的多肽或多核苷酸的克隆，进而通过如亲和层析来纯化这些多肽或多核苷酸。

因此，抗BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽或多核苷酸的抗体可用于治疗感染，尤其是细菌感染。

包括抗原等价变体、抗原决定簇等价变体或免疫等价变体在内的变体也是本发明特别的一方面。

优选的是经修饰过的、对个体产生较少免疫原性的抗体或其变体。例如，如果此个体是人，则此抗体便是“人源化的”，此处已将互补性决定区或杂交瘤衍生的抗体区移植入人单克隆抗体中，见Jones等(1986)，Nature 321，522-525或Tempest et al.，(1991)Biotechnology 9，266-273.的描述。拮抗剂和激动剂检测及其各种分子

本发明的多肽或多核苷酸也可评估小分子底物和配基在如细胞、无细胞制剂、化学药品库、和天然产物混合物中的结合。这些底物和配基可以是天然的底物和配基或其结构或功能类似物。见如Coligan等，Current Protocols in Immunology I(2)：Chapter 5(1991)。

利用直接或间接与侯选化合物相连的标记物，则筛选方法就可轻而易举的检测到侯选化合物与多肽或多核苷酸、或与含有多肽或多核苷酸的细胞或膜、或与多肽的融合蛋白的结合。另外，此筛选方法包括与已标记的竞争物相竞争。进一步，利用适合于含有多肽或多核苷酸的细胞的检测体系，这些筛选方法可对多肽或多核苷酸的活化作用或抑制作用能否使侯选化合物产生信号进行检测。一般是在已知激动剂的存在下对活化作用的抑制剂进行检测，并且在侯选化合物存在的情况下就可观察到激动剂对活化作用产生的影响。在没有激动剂或拮抗剂存在的条件下，通过检测侯选化合物是否对多肽或多核苷酸的活化作用产生抑制，组成性的活性多肽和/或组成性的已表达的多肽和多核苷酸就可用于逆转激动剂或拮抗剂的作用的筛选方法中。而侯选化合物是有可能对多肽或多核苷酸的活化作用产生抑制的。进一步，这些筛选方法包括将侯选化合物与含有本发明的多肽或多核苷酸的溶液混合、形成一种混合物、检测混合物中BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽和/或多核苷酸的活性以及将混合物中的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽和或多核苷酸的活性与标准进行比较等步骤。融合蛋白，如从本文前述的Fc部分和BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽制备的融合蛋白，也能用于高通量检测法，以此来鉴定本发明中的多肽的拮抗剂，也可用来鉴定与其在系统发生和/或功能上相关的多肽(见D.Bennett er al.，J MolRecognition，8：52-58(1995)；及K.Johanson er al.，J BiolChem，270(16)：9459-9471(1995))。

与本发明中的多肽相连接或与其相互作用的多核苷酸、多肽和抗体也可用于形成新的筛选方法，以此来检测加入的化合物对细胞中的mRNA和/或多肽产量的影响。例如，通过本领域中熟知的标准方法，就可利用单克隆抗体和多克隆抗体构建一种旨在检测与分泌或细胞相关联的多肽水平的ELISA检测法。这种方法能用于发现那些抑制或增强从经过合适的操作的细胞或组织中产生多肽的物质(也相应的叫做拮抗剂或抑制剂)。

本发明也提供了一种筛选化合物、鉴定那些能增强(激动剂)或抑制(拮抗剂)BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽或多核苷酸作用的化合物，尤其是那些能杀菌或抑菌的化合物的方法。这些筛选方法可包括高通量的技术。例如，为了筛选激动剂或拮抗剂，对一种合成的混合物，一种细胞区室，如含有BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽和这些多肽的标记底物或配体的膜、细胞外膜或细胞壁、或他们的任一制剂，在存在侯选分子或不存在侯选分子的条件下进行培育，这些侯选分子可含有BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071拮抗剂或激动剂。这些侯选分子增强或拮抗BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽的能力反映在标记配体结合的降低或从底物所得产物产量的降低。那些进行义务结合，也即不诱导BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽作用的结合的分子最有可能是良好的拮抗剂。看情况，那些结合良好，并且能增加从底物得到的产物的产率、增加信号转导或增加化学通道活性的分子是激动剂。看情况，通过利用一种报道体系可增加对从底物得到的产物的、信号转导的或化学通道活性速率或水平的检测。在这一点上，报道体系是有益的，他包括，但并不局限于比色的、标记的底物转化为产物以及本领域中已知的结合检测法，这些产物是对BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸或多肽活性变化作出响应的报道基因。

BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071激动剂检测法的另一例子是竞争性检测法，竞争性检测法是指在竞争性抑制检测的合适条件下，将BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071和一种潜在的激动剂与BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071结合分子、天然底物或配体、或底物或配体模拟物相结合。可对BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071进行标记，例如通过放射性或比色化合物进行的标记，因此能精确的确定与结合分子相结合的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071分子或转化为产物的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071分子数目，从而对此潜在拮抗物的效力进行评估。

潜在拮抗物包括那些结合到本发明中的多核苷酸和/或多肽上，从而抑制或完全清除他们的活性或表达的小有机分子、肽段、多肽和抗体。潜在拮抗物也可以是小有机分子、肽段、多肽如紧密相关的蛋白质，或在结合分子上有相同结合位点的抗体，例如这些结合分子：不诱发BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071诱导的活性的结合分子，通过排除BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽和/或多核苷酸的结合，从而他们就能防止BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽和/或多核苷酸的作用或表达。

潜在拮抗物包括一些小分子，这些小分子结合并占据多肽的结合位点，从而防止他们与细胞结合分子相结合，因而也就防止了正常的生物活性。小分子的例子包括，但并不局限于小有机分子、肽段或多肽相似物分子。其他的潜在拮抗物包括反义分子(见0kano，J.Neurochem.16：560(1991)；OLIGODEOXYNUCLEOTIDESASANTISENSEINHIB1TORS OF GENE EXPRESSION，CRC Press，Boca Raton，FL(1988)，对这些分子所做的描述)。优选的潜在拮抗物包括与BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071相关联的化合物和BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071的变体。

进一步，本发明涉及含有本发明的一种多肽或其片段的、由基因工程设计的可溶性蛋白，以及多种亚类的免疫球蛋白(IgG，IgM，IgA，IgE)的重链或轻链中恒定区的不同部分。对免疫球蛋白来讲，优选的是人IgG，尤其是IgG1重链的恒定区，而融合反应就发生在IgG的铰链区。在一特别的实施方案中，仅仅通过引入切割序列就可将Fc部分切割掉，而此切割序列可通过血液凝固因子Xa切割掉。此外，本发明也涉及利用基因工程制备那些融合蛋白的方法，并且可将这些方法用于药物筛选、疾病诊断和治疗。本发明进一步设计编码这些融合蛋白的多核苷酸。融合蛋白技术的例子可在国际专利申请序号为WO94/29458和WO94/22914的专利申请中发现。

本发明提供的每一种多核苷酸序列可用于发现或开发抗菌化合物。在表达时，编码蛋白可用作抗菌药物筛选的靶物质。此外，这些多核苷酸序列可用于构建控制感兴趣的编码序列表达的反义序列，而这些多核苷酸序列是可以编码编码蛋白氨基末端区、或Shine-Delgarno、或其他相应RNA的翻译促进序列的。

本发明也提供了本发明中的多肽、多核苷酸、激动剂或拮抗剂在干涉一或多种病原菌与负有感染后遗症的真核宿主，优选在哺乳动物宿主间的起始生理反应方面的应用。本发明中的分子尤其可用于：防止细菌，尤其是革兰氏阳性和/或革兰氏阴性细菌与埋藏设备上的真核生物，优选哺乳动物的胞外基质蛋白间的粘附，或与伤口胞外基质蛋白间的粘附；和/或抑制真核生物，优选哺乳动物胞外基质蛋白与介导组织损伤的细菌BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071蛋白间的粘附；抑制由植入埋藏设备或其他外科手术引起的感染的正常发病。

根据本发明的一个方面，本发明提供了BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071激动剂和拮抗剂，优选抑菌或杀菌的激动剂和拮抗剂。

本发明中的拮抗剂和激动剂可用于，如防止、抑制和/或治疗疾病。

进一方面，本发明涉及本发明中的多肽的拟位(mimotope)。拟位就是一种肽段序列，他与天然肽段非常相似(在序列组成或结构上)，而此肽段序列是能被可识别天然肽段的抗体所识别的，或者当此肽段与合适的载体相偶联时，他就能产生可识别天然肽段的抗体。

通过添加、缺失或替代选择的氨基酸，就可将肽段拟位设计用于特定的目的。因此，就可将肽段做一些修饰，从而使其与蛋白载体的结合作用易于进行。例如，理想的是包含末端半胱胺酸的一些化学结合方法。此外，肽段与蛋白载体结合，以在肽的结合末端的远端包含疏水末端也是理想的，因此肽段游离的未结合末端仍然与载体蛋白表面相连。从而将此肽段处于与整个天然肽段分子环境下的肽段最相似的构象状态。例如，可将肽段修饰成为含有N-末端半胱胺酸和C-末端疏水酰胺尾的肽段。另一方面，通过添加或替代一种或多种氨基酸的D-立体异构体就可产生有益的衍生物，例如能提高肽段稳定性的衍生物。

另一方面，利用一些技术如噬菌体展示技术(EP 0 552 267 B1)，就可通过抗体来鉴定肽段拟位，因为这些抗体本身就能与本发明中的多肽结合。利用这种技术产生了大量的肽段序列，这些序列与天然肽段的结构类似，因而他们能够结合到抗天然肽段抗体上，但他们本身不一定含有与天然肽段同源的大部分序列。疫苗

本发明的另一方面涉及诱导个体，尤其是哺乳动物，优选人类产生免疫应答的方法，这些方法包括对个体接种以足够剂量、能产生抗体和/或T-细胞免疫应答的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸和/或多肽，或其片段或变体，而这些免疫应答能保护该个体免予遭受感染，尤其是细菌感染，最尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌感染。也提供了一些方法，借助于其中的免疫应答可减缓细菌的复制。

本发明的另一方面涉及诱导免疫应答的方法，这些方法包括体内运送核酸载体、序列或核酶至这些个体以指导BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸和/或多肽的表达，因为这些BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸和/或多肽，或其片段或变体在体内的表达就能诱导产生免疫应答，如产生抗体和/或T细胞免疫应答，这些T细胞包括产生细胞因子T细胞或细胞毒素T细胞，他们可保护该个体，优选人类个体，免受疾病，不管该疾病在体内已经存在与否。对这种基因给药的一个例子是通过将其加速进入目的细胞中，这种基因就可做为颗粒或其他物质的包衣。这样的核酸载体包括DNA、RNA、核酶、修饰过的核酸、DNA/RNA杂种、DNA-蛋白复合体或RNA-蛋白复合体。

本发明的进一方面涉及免疫组合物，当将这些组合物引入能在体内诱导产生免疫应答的某一个体，优选人个体，他们就能诱导产生对BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸和/或这些多核苷酸编码的多肽的免疫应答，此处的组合物包含重组BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸和/或这些多核苷酸编码的多肽，和/或编码并表达该BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸、及由这些多核苷酸编码的多肽的抗原，或本发明中的其他多肽。这些免疫应答可用于疾病的预防或治疗，他们也可以抗体免疫和/或细胞免疫，如由CTL或CD4+T细胞引起的细胞免疫的形式存在。

BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽或其片段可与辅助蛋白或化学半体相融合，这些辅助蛋白或化学半体本身能或不能产生抗体，但他们能稳定第一蛋白，并产生融合的或修饰过的、具有抗原的或免疫原的特性，尤其是保护特性的蛋白。因此，进一步优选的已融合的重组蛋白优选包含抗原辅助蛋白，例如，从流感嗜血杆菌获得的脂蛋白D、谷胱苷肽-S-转移酶(GST)或β-半乳糖苷酶、或那些相对较大的、能增溶蛋白并加速其制备和纯化的蛋白。此外，这些蛋白都会使接受他们的生物体的免疫系统产生一般的刺激，从这一点上来讲，辅助蛋白有可能作为佐剂。辅助蛋白可结合到第一蛋白的氨基或羧基末端。

根据本发明的疫苗组合物中，BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽或多核苷酸、或其片段、或其拟位、或其变体可存在于载体中，例如上述的活体重组载体，如活体细菌载体。

其他适合于BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽的载体是非活体载体，例如细菌外膜小泡或“小泡(blebs)”。OM小泡是从革兰氏阴性细菌双层膜的外膜中获得的，并且已经证明他们也存在于包含C.trachomatis和C.psittaci在内的许多革兰氏阴性细菌中((Zhou，L et al.1998.FEMS Microbiol.Lett.163：223-228)。一个已经报道的、但并不详尽的能产生小泡的细菌病原体名单包括：百日咳杆菌、布氏疏螺旋体、马尔他布鲁菌、羊布鲁菌、大肠杆菌、流感嗜血杆菌，嗜肺性军团杆菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟氏球菌、绿脓假单胞菌和小肠结肠炎耶尔森菌。

天然构象中小泡的优点是能提供外膜蛋白，因而对于疫苗来讲它尤其有用。对细菌进行一些设计，改变一种或多种外膜分子的表达，就能对用于疫苗的小泡做一些改进。这样，例如所要的外膜免疫原性蛋白，如BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽的表达就能引入或受到增量调节(例如通过改变启动子)。作为替代的方法或附加的方法，不相关的外膜分子(例如非保护性抗原或免疫显性但可变的蛋白)或有害的外膜分子(如有毒分子如LPS或自体免疫应答的潜在诱导物)的表达受到负调节。这些方法在下文有更详细的讨论。

BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071基因的非编码侧翼区含有在基因表达中较重要的调节元件。这些调节在转录和翻译水平上进行。通过DNA测序就能得到基因开放阅读框架的上游或下游区的序列。这些序列信息允许确定潜在的调节基序，如不同的启动子元件、终止子序列、可诱导的序列元件、阻遏物、负责阶段变异的元件、shine-dalgarno序列、以及那些含有与调节相关的潜在二级结构和与其他多种调节基序或序列相关的区。

这些序列信息允许BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071基因的自然表达的调节。通过修饰启动子、shine-dalgamo序列、潜在阻遏物或操纵基因元件、或其他相关的元件就能对基因表达进行正调节。同样，通过进行相似的修饰就可以完成对他们的负调节。另一方面，通过改变阶段变异序列就可将基因的表达置于阶段变异序列的控制之下，或可使其不再受到调节。利用另一种方法，可将基因的表达置于一或多种允许受调节的表达的诱导元件之下。这些调节包括，但并不局限于温度变化诱导、添加诱导底物如选择的碳水化合物或他们的衍生物、痕量元素、维生素、辅助因子、金属离子等。

上述修饰可通过多种不同的方式引入。通过随机诱变，可在体内完成对涉及基因表达的序列的修饰，随后挑选需要的显型。另一方法包括分离有益的区，并且通过随机诱变、定点诱变、插入诱变或缺失诱变对他进行修饰。然后，通过同源重组就可将修饰过的区重新引入细菌基因组中，并且也可评估他们对基因表达的影响。在另一方法中，这些有益区的序列信息可用于替代或缺失所有或部分的天然调节序列。既然这样就对靶定的调节区进行分离和修饰，使其含有来自另一基因、不同基因的调节元件的组合、合成的调节区、或其他调节区的调节元件，或使其缺失野生型调节序列的选定部分。然后经由同源重组将修饰过的序列重新引入细菌基因组中。优选的那些可用于基因表达正调节的启动子的名单包括：脑膜炎奈瑟氏球菌或淋病萘瑟氏菌的porA，porB，lbpB，tbpB，pl10，lst，hpuAB；ompCD，copB，lbpB，ompE，UspA1；UspA2；M.Catarrhalis的TbpB；流感嗜血杆菌H.influenzae的p1，p2，p4，p5，p6，lpD，tbpB，D15，Hia，Hmw1，Hmw2。

在一个例子中，通过将基因的启动子与一个较强的启动子进行互换(分离此基因的上游序列，然后对此序列进行修饰，随后通过同源重组将此序列重新导入基因组中)来调节基因的表达。从这两种细菌中可获得受正调节的表达，也可从由细菌制备的或由细菌释放的外膜小泡中获得。

在另一例子中，利用上述方法可生产重组细菌菌株，这些菌株具有已改良的、可用做疫苗的特性。这些菌株可包括，但并不局限于减毒株、能增加表达选择的抗原的菌株、已经剔除干涉免疫应答的基因或可降低干涉免疫应答的基因表达的菌株、具有免疫显性蛋白调节的表达的菌株、具有外膜小泡调节释放的菌株。

因而，本发明也提供了BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071基因经修饰过的上游区，这个修饰过的上游区含有一种异源调节元件，此调节元件可改变位于外膜的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071蛋白的表达水平。按照本发明，此上游区包括BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071基因的上游序列。这个上游区从BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071基因紧接的上游开始，进一步延续至距ATG起始密码子不超过1000bp处。在这一基因位于多顺反子(操纵子)序列的情况下，上游区可以从紧接此基因最前端处起始、或在操纵子的第一个基因前起始。按照本发明，优选的是一种已经修饰过的上游区，此上游区含有在ATG上游500-700bp处的外源启动子。

因而，本发明提供了存在于经修饰过的细菌小泡中的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽。本发明进一步提供了修饰过的宿主细胞，这些宿主细胞能产生基于非活体膜基的小泡载体。本发明进一步提供了含有BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071基因的核酸载体，这些基因含有包含外源调节元件的、已经修饰的上游区。

本发明进一步提供制备本发明中的宿主细胞和细菌小泡的方法。

本发明也提供了一些组合物，尤其是疫苗组合物，以及包括本发明中的多肽和/或多核苷酸、在Sato，Y.et al.Science 273：352(1996)中所述的免疫刺激性DNA序列的方法。

本发明也提供了一些方法，这些方法利用那些已经证明可编码细菌表面蛋白不变区的上述多核苷酸或其特殊片段，而这些多核苷酸或其特殊片段存在于多核苷酸构建物中，而这些构建物可用于在脑膜炎奈瑟氏球菌的动物感染模型中进行的基因免疫实验。这些免疫实验对鉴别那些可引起预防或治疗性免疫应答的蛋白的抗原决定簇尤其有用。我们相信，这种方法使随后的那些具有特殊价值的单克隆抗体制剂的制备成为可能，这些单克隆抗体源于那些对于开发对哺乳动物，尤其是人的感染，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌感染的预防或治疗的药物，从而成功抵抗或清除感染所必须的器官。

本发明还包括一种疫苗制剂，包括与合适的载体，如药剂上可接受的载体，相结合的本发明的免疫原性重组多肽或多核苷酸。由于多肽和多核苷酸在胃中能够降解，因而他们须进行肠胃外给药，包括，如皮下给药、肌肉给药、静脉给药、或皮内给药。适于肠胃外给药的剂型包括含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌化合物以及使制剂与体液优选血液等张的溶液的水性或非水性无菌注射溶液；以及可含有悬浮因子或增稠因子的水合或非水合悬浮物。这些剂型可以分装于单位剂量或多剂量容器中，如密封的安瓿瓶或小瓶中，也可贮存在冷冻干燥的条件下，对此仅需在使用前添加无菌液体载体。

本发明中的疫苗剂型也可包括用于提高剂型的免疫原性的助剂体系。优选的助剂体系可优选的引起TH1型应答。

一种免疫应答可广义的区分为两种最终的类型，即体液或细胞介导的免疫应答(传统上他们的特征在于分别是抗体和保护的细胞效应物机制)。这两种免疫应答类型又叫作TH1型免疫应答(细胞介导的应答)和TH2型免疫应答(体液介导的应答)

极端的TH1型免疫应答特征于其抗原特异性的产生、单元型限制的细胞毒素的T淋巴细胞的产生，以及天然杀伤细胞应答的产生。鼠TH1型应答特征常常在于IgG2a亚型抗体的产生，而在人体中相应的是产生IgGI型抗体。TH2型免疫应答特征于产生众多的同型免疫球蛋白，包括鼠IgGI、IgA和IgM。

可以认为发展这两种免疫应答的驱动力是细胞因子。高水平的TH1型细胞因子倾向于诱导给定抗原的细胞介导的免疫应答，而高水平的TH2型细胞因子倾向于诱导给定抗原的体液介导的免疫应答。

TH1型和TH2型免疫应答的区别并不是绝对的。事实上，一个个体将要支持一种免疫应答，其中是TH1型或TH2型占优势。然而，便利的是按照Mosmann和Coffman在鼠CD4+ve T细胞克隆中所述的来考虑各家族的细胞因子(Mosmann，T.R.and Coffman，R.L.(1989)TH1 and TH2 cells：differernt patterns of lymphokine secretionlead to different funcitional properties.Annual Review ofImmunology，7，p145-173)。传统上来讲，TH1型免疫应答是与通过T淋巴细胞来产生的INF-γ和IL-2细胞因子相联系的。其他直接与TH1型免疫应答的诱导相联系细胞因子不是由T细胞，如IL-12产生的。相反，TH2型免疫应答是与IL-4、IL-5、IL-6和IL-13的分泌相联系的。

已知某些特定疫苗助剂尤其适于刺激产生TH1或TH2型细胞因子的应答。在疫苗接种或感染中，传统上免疫应答的TH1：TH2平衡最好的指示剂包括在重刺激抗原后，通过直接测定体内T淋巴细胞TH1或TH2的产量，和/或测定抗原特异性抗体反应的IgGI：IgG2a比率。

因而，TH1型助剂是当体内有重刺激抗原时能优选刺激分离的T细胞群以产生高水平的TH1型细胞因子，以及促进与同型TH1型相联系的CD8+细胞毒T淋巴细胞和抗原特异性免疫球蛋白反应的物质。

那些能够优选刺激TH1细胞应答的助剂在国际专利申请NO.WO94/00153和WO95/17209中有描述。

3-脱氧-酰基单磷酰基脂质A(3D-MPL)就是一种这样的助剂。这可由GB 2220211(Ribi)中知道。从化学上来讲，它是含有3、4、5、或6酰化链的3-脱氧-酰基单磷酰基脂质A的混合物，是由RibiImmunochem，Montana制备的。3-脱氧-酰基单磷酰脂质A的一种优选形式在欧洲专利0 689 454 B1(SmithKline Beecham BiologicalsSA)中已公开。

优选的是足够小的、可无菌滤过0.22微米滤膜的3D-MPL颗粒(欧洲专利号0 689 454)。每一制剂中3D-MPL的量是10μg-100μg，优选25-50μg，而其中的抗原典型的是2-50μg/剂。

另一种优选的助剂包括QS21，它是一种源于QuillajaSaponaria Molina树皮、经高效液相色谱纯化的无毒片段。它可任意的与3-脱氧-酰基单磷酰基脂质A(3D-MPL)混合，也可任意的与载体混合。

QS21的制备方法在美国专利NO.5,057,540中有公开的叙述。

含有QS21的非反应原性助剂剂型在前面已有叙述(WO96/33739)。当与一种抗原共同制备成制剂时，含有QS21和胆固醇的制剂已经证明是有效的TH1刺激助剂。

进一步的可作为TH1细胞应答优选刺激物的助剂包括免疫调制寡核苷酸，例如WO 96/02555中公开的未甲基化的CpG序列。

不同TH1刺激助剂的结合物，如上述助剂的结合物，也被认为可提供助剂，而此助剂是TH1细胞应答的优选刺激物。例如，QS21可与3D-MPL来共同植制备制剂。QS21与3D-MPL的典型的比例是1∶10-10∶1，优选1∶5-5∶1，经常基本上为1∶1。最佳协同作用的优选范围是3D-MPL∶QS21为2.5；1-1∶1。

按照本发明，优选的一种载体也存在于疫苗组合物中。此载体可以是水包油乳剂，或铝盐，如磷酸铝或氢氧化铝。

一种优选的水包油乳剂包含一种可代谢的油，如鲨烯、α-生育酚、及吐温80。按照本发明，在一优选方面，疫苗组合物中抗原是在这样的乳剂中与3D-MPL和QS21结合的。此外，水包油乳剂可含有span 85和/或卵磷脂和/或三辛酰甘油酯。

典型的、可用于对人给药的QS21和3D-MPL在疫苗中的计量范围为1μg-200μg，如10-100μg，优选10μg-50μg/剂。典型的水包油乳剂包含2-10％鲨烯、2-10％α-生育酚和0.3-3％吐温80。优选的鲨烯：α-生育酚比率等于或小于1，因为这样可提供更稳定的乳剂。span 85也可为1％的水平。在一些情况下，本发明中的疫苗进一步含有稳定剂将是有益的。

非毒性的水包油乳剂优选的含有非毒性油，如存在于水性载体中的鲨烷(squalane)和鲨烯、乳化剂如吐温80。这些水性载体可以是，如磷酸缓冲盐溶液。

一种尤其有效的助剂剂型包括WO95/17210中所述的水包油乳剂中的QS21、3D-MPL和生育酚。

本发明也提供了一种多价疫苗组合物，他含有本发明中与其他抗原，尤其是可用于有效治疗癌症、自身免疫疾病及相关疾病相结合的疫苗制剂。这样的多价疫苗组合物可包括，如前述的TH1诱导性助剂。虽然本发明对特定的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071多肽和多核苷酸已有描述，我们应该理解为他包括了天然产生的多肽或多核苷酸的片段，以及进行基本上不影响重组多肽或多核苷酸的免疫原特性的添加、缺失或替代操作的相似多肽或多核苷酸。

抗原也能以整个细菌(死的或活的)的形式、以及亚细胞片段的形式进行传送，这些可能的传送形式确实也包括脑膜炎奈瑟氏球菌本身。组合物、试剂盒和给药

本发明的进一方面提供了一些组合物，这些组合物含有可用于对细胞给药或对多细胞生物体给药的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多核苷酸和/或BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066或BASB071多肽。

本发明也涉及此处讨论的、含有多核苷酸或多肽的以及他们的激动剂与拮抗剂组合物。本发明中的多肽和多核苷酸可与非无菌的或无菌载体或对细胞、组织或有机体有用的载体，如适于对个体给药的药物载体，结合应用。这样的组合物包括，例如媒介添加剂或本发明中的、治疗上有效剂量的多肽和/或多核苷酸，以及药物可接受的载体或赋形剂。这些载体可包括，但并不局限于盐、缓冲盐、右旋糖、水、甘油、乙醇和他们的结合物。剂型应该与给药方式相适。本发明进一步涉及诊断和药物包及试剂盒，他们含有装有一或多种前述的、本发明中的组合物成分的一或多种容器。本发明中的多肽、多核苷酸和其他化合物可分离应用，或与其他化合物，如治疗性化合物，结合使用。

治疗性的组合物可以任何有效且方便的方式给药，这些方式包括，例如通过局部、口、肛门、阴道、静脉内、腹膜内、肌肉、皮下、鼻内或皮内给药等。

在治疗或预防上，活性药剂可以可注射的组合物的形式对个体给药，例如无菌水合分散物，优选等张的无菌水合分散物。

进一方面，本发明提供了一些药物组合物，他们包括药物可接受的载体或与赋形剂相结合的、治疗上有效剂量的多肽和/或多核苷酸，例如本发明中的多肽和/或多核苷酸的可溶形式、与药物可接受的载体或赋形剂相结合的激动剂或拮抗剂肽段、或小分子化合物。这些载体可包括，但并不局限于盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、乙醇和他们的组合物。本发明进一步涉及诊断和药物包及试剂盒，他们含有装有一或多种前述的、本发明中的组合物成分的一或多种容器。本发明中的多肽、多核苷酸和其他化合物可分离应用，或与其他化合物，如治疗性化合物结合使用。

这些组合物要适合于给药途径，如通过系统或口服给药。优选的系统给药方式包括注射，典型的是通过静脉内注射。其他的注射途径，如皮下注射、肌肉注射或腹膜内注射也可。另外的系统给药方式包括利用渗透剂，如胆盐或梭链孢酸或其他去污剂进行的跨粘膜的或经皮肤的给药。此外，如果本发明中的多肽或其他化合物可制备成肠溶的或胶囊制剂，就可能进行口服给药。对这些化合物的给药也可是局部的和/或局部化的，其形式可以是药膏、糊剂、凝胶、溶液、粉或其他。

对哺乳动物，尤其对人给药，预期的活性药物日剂量水平是0.01mg/kg-10mg/kg，一般是在1mg/kg左右。医生在具体情况下可决定实际剂量，这些剂量要与个体相适合，并且随年龄、体重及特定个体的反应不同而变化。上述剂量是一般情况下的例子。当然，有的个体可以给药以较高或较低的剂量范围，这也在本发明的范围之内。

要求的剂量范围依赖于肽段的选择、给药途径、制剂特性、受药者的情况的类型、以及医生的诊断。然而，对受药者来讲，合适的剂量是0.1-100μg/kg受药者体重。

疫苗组合物以可注射形式是方便的。传统的助剂可用于提高免疫应答。疫苗接种的合适剂量是0.5-5微克/kg抗原，并且这样的剂量要优选给药1-3次，间隔为1-3周。在给定的剂量范围内，没有观察到本发明中的化合物产生毒理学上的副作用，而毒理学上的副作用的产生将排除他可以对合适的个体的给药。

然而，考虑到可得的化合物类型及不同给药途径的效率不同，所需剂量的较宽变化是在预期之中的。例如，口服就要求有比静脉注射较高的剂量。剂量水平的变化可利用用于优化的标准经验方法来调整，这种调整方法在本领域中已有很好的了解。序列数据库、在可知的媒介(tangible medium)中的序列及运算方法

多肽和多核苷酸序列形成了极具价值的信息资源，通过这些信息就可确定他们的2-或3-维结构，以及可进一步鉴别相似的同源物的序列。最容易推动这些方法的做法是将序列存储在计算机可读的媒介中，然后利用在已知的大分子结构中已储存的信息或利用众所周知的搜索工具，如GCG程序包来搜索序列数据库。

本发明还提供了分析特征序列或序列串，尤其是基因序列或他们编码的蛋白序列的方法。优选的序列分析方法包括，例如序列同源物分析方法，如同一性和相似性分析；DNA、RNA和蛋白质结构分析；序列组装；分支分析；序列基元分析；开放阅读框架确定；核酸碱基清点；密码子使用分析；核酸碱基修饰；以及序列色谱峰分析。

提供了一种基于计算机的方法来对同源性进行鉴别。这种方法包括以下步骤：在计算机可读媒介中提供含有本发明中的多核苷酸序列的第一多核苷酸序列；将该第一多核苷酸序列与至少一种第二多核苷酸或多肽序列进行对比，以鉴别同源性。

本发明还提供了一种基于计算机的方法来对同源物进行鉴别。这种方法包括以下步骤：在计算机可读媒介中提供含有本发明中的多肽序列的第一多肽序列；将该第一多肽序列与至少一种第二多核苷酸或多肽序列进行对比，以鉴别同源性。

所有的出版物和参考文献，包括但并不局限于专利和专利申请，在本说明书中全部引用，就象明确的、个别的指出每一分离出版物或参考文献在本文中全部引用以作参考一样。任何作为本专利申请的优先权的专利申请也在此处全文引用以作参考，方式同上。定义

如本领域中已知的，“同一性”是两或多种多肽序列或两或多种多核苷酸序列间的关系，可对序列进行对比来确定他们之间的关系。在本领域中，“同一性”也可指多肽或多核苷酸序列间的相关程度，可以通过对序列串进行对比来确定他们本来的相关程度。通过已有的方法可将同一性很容易的计算出来，这些方法包括，但并不局限于那些在(Computational Molecular Biology，Lesk，A.M.，ed.，OxfordUniversity Press，New York，1988；Biocomputing：Informaticsand Genome Projects，Smith，D.W.，ed.，Academic Press，NewYork，1993；Computer Analysis of Sequence Data，Part I，Griffin，A.M.，and Griffn，H.G.，eds.，Humana press，NewJergey，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology，vonHeine，G.，Academic Press，1987；及Sequence Analysis Primer，Gribskov，M.and Devereux，J.，eds.，M Stockton Press，NewYork，1991；及Cacillo，H.，and Lipman，D.，SIAM J.AppliedMath，.48：1073(1988)中有描述的方法。用于确定同一性的方法是设计来提供待测序列间最大匹配的方法。此外，确定同一性的方法已经编篡在可公开购买的计算机程序中。确定两序列间同一性的计算机程序法包括，但并不局限于GCG程序包中的GAP程序(Devereux，J.，et al.，Nucleic Acids Research 12(1)：387(1984))、BLASTP、BLASTN(Altschul，S.F.et al.，J.Mol.Biol.215：403-410(1990))、及FAFSTA(Pearson and Lipman Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85；2444-2448(1988))。BLAST族程序可从NCBI或其他渠道公开购买(BLAST Manual，Alt schul，S.，et al.，NCBI NLM NIHBethesda，MD 20894；Altschul，S.，et al.，J.Mol.Biol.215：406-410(1990))。众所周知的Smith Waterman运算方法也可用于确定同一性。

多肽序列对比的参数包括：

运算方法：Needleman and Wunsch，J.Mol Biol.48：443-453(1970)

对比基质：BLOSSUM62 from Henikoff and Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89：10915-10919(1992)

缺口罚值(penalty)：8

缺口长度罚值(penalty)：2

带有这些参数的有效程序可以公开购买到，如从GeneticsComputer Group，Madison WI处可购买“缺口”程序。前述参数是肽段对比的默认参数(末端缺口没有罚值(penalty))。

多核苷酸序列对比的参数包括：

运算方法：Needleman and Wunsch，J.Mol Biol.48：443-453(1970)

对比罚值：匹配的＝+10，不匹配的＝0

缺口罚值：50

缺口长度损失：3

来自：从Genetics Computer Group，Madison WI购买的“缺口”程序。这些参数是核酸对比的默认参数(末端缺口没有罚值)。

看情况，对多核苷酸和多肽来讲，“同一性”优选的意义可见下列(1)和(2)。

(1)多核苷酸实施方案进一步包括分离的多核苷酸，他含有与SEQ ID NO：1参考序列至少有50、60、70、80、85、90、95、97或100％同一性的多核苷酸序列，其中该多核苷酸序列可与SEQ ID NO：1参考序列完全相同或含有同参考序列对比有特定整数个核苷酸变更的多核苷酸序列；其中该变更是从由至少一种核苷酸缺失、替代，包括转换和颠换、或插入组成的组中挑选的；以及其中该变更可发生在参考核苷酸序列的5′或3′末端，或发生在这两个末端之间的任何位置，他们可以个别的散布在参考序列的核苷酸中，或以一个或多个邻接的群体散布在参考序列中；并且其中该核苷变更数目是通过将SEQID NO：1的核苷酸总数乘以已除以100的定义百分比同一性的整数，然后从该SEQ ID NO：1的核苷酸总数中减去此乘积得到的，或

                 Nn≤Xn-(Xn·y)，其中，Nn是核苷酸变更数；Xn是SEQ ID NO：1的核苷酸总数；y的0.50指50％、0.60指60％、0.70指70％、0.80指80％、0.85指85％、0.90指90％、0.95指95％、0.97指97％、1.00指100％；·代表乘号；其中非整数的Xn和y在从Xn中减去之前就将其近似为最相近的整数。编码SEQ ID NO：2的多肽的多核苷酸序列的变更可在此编码序列中产生无义突变、错义突变或移码突变，从而改变经过这些变更之后的多核苷酸编码的多肽。

由示例可知，本发明中的多核苷酸序列可与SEQ ID NO：1的参考序列完全相同，也即100％同一性，或者他可包括与参考序列相比有特定整数的核酸发生变更，因而同一性百分数就低于100％。其中该变更是从由至少一种核苷酸缺失、替代，包括转换和颠换、或插入组成的组中挑选的；以及其中该变更可发生在参考核苷酸序列的5′或3′末端，或发生在这两个末端之间的任何位置，他们可以个别的，或以一个或多个邻接的群体散布在参考序列的核苷酸中，或散布；并且其中该核苷酸变更数目是通过将SEQ ID NO：1的核苷酸总数乘以已除以100的定义百分比同一性的整数，然后从该SEQ ID NO：1的核苷酸总数中减去此乘积得到的，或

                   Nn≤Xn-(Xn·y)，其中，Nn是核苷变更数；Xn是SEQ ID NO：1的核苷总数；y的0.50指50％、0.60指60％、0.70指70％、0.80指80％、0.85指85％、0.90指90％、0.95指95％、0.97指97％、1.00指100％；·代表乘号；其中非整数的Xn和y在从Xn中减去之前就将其近似为最相近的整数。

(2)多核苷酸实施方案进一步包括分离的多肽，他含有与SEQ IDNO：2参考序列至少有50、60、70、80、85、90、95、97或100％同一性的多肽序列，其中该多肽序列可与SEQ ID NO：2参考序列完全相同或含有同参考序列对比有特定整数个氨基酸变更的多肽序列；其中该变更是从由至少一种氨基酸缺失、替代，包括保守替代和非保守替代、或插入等组成的组中挑选的；以及其中该变更可发生在参考序列的氨基或羧基末端，或发生在这两个末端之间的任何位置，他们可以个别的或以一个或多个邻接的群体散布在参考序列的氨基酸中；并且其中该氨基酸变更数目是通过将SEQ ID NO：2的氨基酸总数乘以已除以100的定义百分比同一性的整数，然后从该SEQ ID NO：2的氨基酸总数中减去此乘积得到的，或

                   Na≤Xa-(Xa·y)，其中，Na是氨基酸变更数；Xa是SEQ ID NO：2的氨基酸总数；y的0.50指50％、0.60指60％、0.70指70％、0.80指80％、0.85指85％、0.90指90％、0.95指95％、0.97指97％、1.00指100％；·代表乘号；其中非整数的Xa和y在从Xa中减去之前就将其近似为最相近的整数。

作为举例，本发明中的多肽序列可与SEQ ID NO：2的参考序列完全相同，也即100％同一性，或者他可包括与参考序列相比有特定整数的氨基酸发生变更，因而同一性百分数就低于100％。其中该变更是从由至少一种氨基酸缺失、替代，包括保守替换和非保守替换、或插入等组成的组中挑选的；以及其中该变更可发生在参考多肽序列的氨基或羧基末端，或发生在这两个末端之间的任何位置，他们可以个别的，或以一个或多个邻接的群体散布在参考序列的氨基酸中；并且其中该特定的同一性％的氨基酸变更数目是通过将SEQID NO：2的氨基酸总数乘以已除以100的定义百分比同一性的整数，然后从该SEQ ID NO：2的氨基酸总数中减去此乘积得到的，或

                  Na≤Xa-(Xa·y)，其中，Na是氨基酸变更数；Xa是SEQ ID NO：2的氨基酸总数；y的0.50指50％、0.60指60％、0.70指70％、0.80指80％、0.85指85％、0.90指90％、0.95指95％、0.97指97％、1.00指100％；·代表乘号；其中非整数的Xa和y在从Xa中减去之前就将其近似为最相近的整数。

“个体”，当在本发明中提及时指代一种生物体，意即多细胞真核生物，包括但并不局限于后生动物、哺乳动物、OVID、牛科动物、猿、灵长类动物和人。

“分离的”意味着从原始状态经“人手”改变过，也即如果他出现在自然界，那他就是已经从其最初环境中改变或已经与最初环境无关，或二者兼具。例如，自然存在于活的生物体中的多核苷酸或多肽不是“分离的”，而从其天然状态下的共存物中分离到的相同多核苷酸或多肽就是“分离的”，本文中这个名词就指此意。此外，通过转化作用、基因操作或其他任何重组方法导入生物体的多核苷酸或多肽是“分离的”，甚至如果他们仍然存在于该生物体中，而该生物体可以是或的或非活体的。

“多核苷酸”一般指多聚核糖核苷酸或多聚脱氧核糖核苷酸，这些多聚核糖核苷酸或多聚脱氧核糖核苷酸可以是未经修饰的RNA或DNA或经过修饰的RNA或包含单链和双链区的DNA。

“变体”指与参考多核苷酸或多肽不同，但又保留有基本特性的多核苷酸或多肽。多核苷酸的典型变体的核苷酸序列与另一变体及参考多核苷酸的核苷酸序列不同。变体核苷酸序列的改变有可能改变或不改变参考序列编码的多肽的氨基酸序列。核苷酸变化可以导致参考序列编码的多肽的氨基酸发生替代、添加、缺失、融合与缩短，在下文对此有讨论。多肽的典型变体的氨基酸序列与另一变体及参考多肽的氨基酸序列不同。一般来讲，区别是有限的，因此参考多肽与变体序列整体上非常相似，并且有些区是完全相同的。变体和参考序列可由于一或多种任意结合的替代作用、添加作用、缺失作用而在氨基酸序列上有所不同。替代的或插入的氨基酸残基可以是由基因密码子编码或不由基因密码子编码。多核苷酸变体可以是天然存在的，如等位基因变体，也可以是天然未知的变体。非天然发生的多核苷酸或多肽变体可由变异发生技术制得或直接通过合成制备。

“疾病”指细菌感染引起或与细菌感染有关的疾病，包括，如上呼吸道感染、侵入性细菌疾病如菌血症和脑膜炎。示例

下述示例是按照标准方法进行的，对于本领域中的技术人员来讲是众所周知的、程式化的，然而那些详细叙述的除外。这些示例是说明性的，但他们并不限制本发明。示例1脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB051基因

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB051基因在SEQ IDNO：1中有示。BASB051多核苷酸序列的翻译后序列见SEQ ID NO：2中所示，他表明此BASB051多肽与淋病奈瑟氏球菌ComL脂蛋白有显著的相似性。BASB051多肽含有一种前导序列，其特征在于一脂蛋白信号序列。示例2脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB057基因

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB057基因在SEQ IDNO：3中有示。BASB057多核苷酸序列的翻译后序列见SEQ ID NO：4中所示，他表明此BASB057多肽与淋病奈瑟氏菌MtrE外膜脂蛋白有显著的相似性。BASB057多肽含有一种前导序列，其特征在于一脂蛋白信号序列。示例3脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB060基因

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB060基因在SEQ IDNO：5中有示。BASB060多核苷酸序列的翻译后序列见SEQ ID NO：6中所示，他表明此BASB060多肽与已知的蛋白没有显著的相似性。BASB060多肽含有一种前导序列，其特征在于一脂蛋白信号序列，并且含有外膜脂蛋白的特点。示例4脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB061基因

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB061基因在SEQ IDNO：7中有示。BASB061多核苷酸序列的翻译后序列见SEQ ID NO：8中所示，他表明此BASB061多肽与脑膜炎奈瑟氏球菌mlp基因的产物有显著的相似性。BASB061多肽含有一种前导序列，其特征在于一脂蛋白信号序列，并且含有外膜脂蛋白的特点。示例5脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB063基因

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB063基因在SEQ IDNO：9中有示。BASB063多核苷酸序列的翻译后序列见SEQ ID NO：10中所示，他表明此BASB063多肽与已知的蛋白有显著的相似性。BASB063多肽含有一种前导序列，其特征在于一脂蛋白信号序列，并且含有外膜脂蛋白的特点。示例6脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB065基因

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB065基因在SEQ IDNO：11中有示。BASB065多核苷酸序列的翻译后序列见SEQ ID NO：12中所示，他表明此BASB065多肽与已知的蛋白有显著的相似性。BASB065多肽含有一种前导序列，其特征在于一脂蛋白信号序列，并且含有外膜脂蛋白的特点。示例7脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB066基因

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB066基因在SEQ IDNO：13中有示。BASB066多核苷酸序列的翻译后序列见SEQ ID NO：14中所示，他表明此BASB066多肽与脑膜炎奈瑟氏菌CtrA蛋白有显著的相似性。BASB066多肽含有一种前导序列，其特征在于一脂蛋白信号序列，并且含有位于外膜上的蛋白的特点。示例8脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB071基因

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC 13090中的BASB071基因在SEQ IDNO：15中有示。BASB071多核苷酸序列的翻译后序列见SEQ ID NO：16中所示，他表明此BASB071多肽与淋病奈瑟氏菌HisJ蛋白有显著的相似性。BASB071多肽含有一种前导序列，其特征在于一脂蛋白信号序列，并且含有外膜脂蛋白的特点。

                多核苷酸和多肽序列SEQ ID NO：1脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB051多核苷酸序列ATGAAAAAAATTCTTTTAACGGTTTCATTAGGTTTGGCACTGAGTGCCTGTGCCACTCAAGGTACGGTCGATAAAGATGCTCAGATTACCCAAGATTGGAGTGTGGAGAAGCTCTATGCCGAAGCCCAGGACGAATTGAACAGCAGCAATTATACGCGGGCTGTCAAGTTATACGAAATCTTGGAATCGCGCTTCCCCACCAGCCGCCATGCCCGGCAATCCCAACTGGATACCGCATACGCCTATTATAAAGACGATGAAAAAGACAAGGCTCTGGCGGCAATCGAACGCTTCCGCCGCCTCCATCCGCAGCATCCGAATATGGATTACGCGCTGTATCTGCGCGGCTTGGTGCTGTTCAACGAAGACCAGTCCTTCTTGAACAAACTGGCCTCGCAAGACTGGTCCCACCGCGACCCGAAAGCCAACCGCGAAGTAACCCAGGCGTTTGCGGAACTCGTCCAACGCTTCCCCAACAGCAAATACGCCGCCGATGCGACCGCACGCATGGTCAAACTGGTCGATGCACTGGGCGGCAATGAAATGTCGGTGGCGCGCTACTACATGAAACGCGGCGCATATATCGCCGCCGCCAACCGCGCCCAAAAAATTATCGGCAGCTACCAAAATACACGCTATGTCGAAGAATCGCTCGCCATCTTGGAACTTGCCTACCAAAAACTCGGCAAACCACAGCTTGCCGCCGATACGCGCCGCGTGTTGGAAACCAACTTCCCGAAAAGCCCGTTTTTGACGCACGCTTGGCAGCCCGACGATATGCCTTGGTGGCGTTACTGGCATTAASEQ ID NO：2脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的、从SEQ ID NO：1多核苷酸序列推导的BASB051多肽序列MKKILLTVSLGLALSACATQGTVDKDAQITQDWSVEKLYAEAQDELNSSNYTRAVKLYEILESRFPTSRHARQSQLDTAYAYYKDDEKDKALAAIERFRRLHPQHPNMDYALYLRGLVLFNEDQSFLNKLASQDWSDRDPKANREVTQAFAELVQRFPNSKYAADATARMVKLVDALGGNEMSVARYYMKRGAYIAAANRAQKIIGSYQNTRYVEESLAILELAYQKLGKPQLAADTRRVLETNFPKSPFLTHAWQPDDMPWWRYWHSEQ ID NO：3脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB057多核苷酸序列ATGGATACTACATTGAAAACCACCTTGACTTCTGTTGCAGCAGCCTTCGCATTATCCGCCTGCACCATGATTCCCCAATACGAGCAGCCCAAAGTCGAAGTTGCCGAAACGTTTAAAAACGATACCGCCGACAGCGGCATCCGTGCGGTCGATTTAGGTTGGCATGACTATTTTGCCGACCCGCGCCTGCAAAAGCTGATCGACATCGCACTCGAGCGCAATACCAGTTTGCGTACCGCCGTATTGAACAGCGAAATCTACCGCAAACAATACATGATTGAGCGCAACAACCTCCTGCCCACGCTTGCCGCCAATGCGAACGGCTCGCGCCAAGGCAGCTTGAGCGGCGGCAATGTCAGCAGCAGCTACAATGTCGGACTGGGTGCGGCATCTTACGAACTCGACCTGTTCGGACGCGTCCGCAGCAGCAGCGAAGCAGCACTGCAAGGCTATTTTGCAAGTGTCGCCAACCGCGATGCGGCACATTTGAGCCTGATTGCCACCGTTGCCAAAGCCTATTTCAACGAACGTTATGCCGAAGAAGCGATGTCTTTGGCGCAGCGTGTTTTGAAAACGCGCGAGGAAACCTACAAGCTGTCCGAATTACGTTACAAGGCAGGCGTGATTTCCGCCGTCGCCCTACGTCAGCAGGAAGCCCTGATCGAATCTGCCAAAGCCGATTATGCCCATGCCGCGCGCAGCCGCGAACAGGCGCGCAATGCCTTGGCAACCTTGATTAACCAACCGATACCCGAAGACCTGCCTGCCGGTTTGCCGCTGGACAAGCAGTTTTTTGTTGAAAAACTGCCGGCCGGTTTGAGTTCCGAAGTATTGCTCGACCGTCCCGATATCCGTGCTGCCGAACACGCGCTCAAACAGGCAAACGCCAATATCGGTGCGGCACGCGCCGCCTTTTTCCCATCCATCCGCCTGACCGGAACCGTCGGTACGGGTTCTGCCGAATTGGGTGGGTTGTTCAAAAGCGGCACGGGCGTTTGGTCGTTCGCGCCGTCTATTACCCTGCCGATTTTTACCTGGGGTACGAACAAAGCCAACCTTGATGTAGCCAAGCTGCGCCAACAGGCACAAATCGTTGCCTATGAAGCCGCCGTCCAATCCGCATTTCAAGACGTGGCAAACGCATTGGCGGCGCGCGAGCAGCTGGATAAAGCCTATGACGCTTTAAGCAAACAAAGCCGCGCCTCTAAAGAGGCGTTGCGCTTGGTCGGCCTGCGTTACAAGCACGGCGTATCCGGCGCGCTCGACTTGCTCGATGCGGAACGCAGCAGCTATGCGGCGGAGGGTGCGGCTTTGTCGGCACAACTGACCCGCGCCGAAAACCTTGCCGATTTGTACAAGGCACTCGGCGGCGGATTGAAACGGGATACCCAAACCGACAAATAASEQ ID NO：4从SEQ ID NO：3多核苷酸序列推导的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株BASB057多肽序列MDTTLKTTLTSVAAAFALSACTMIPQYEQPKVEVAETFKNDTADSGIRAVDLGWHDYFADPRLQKLIDIALERNTSLRTAVLNSEIYRKQYMIERNNLLPTLAANANGSRQGSLSGGNVSSSYNVGLGAASYELDLFGRVRSSSEAALQGYFASVANRDAAHLSLIATVAKAYFNERYAEEAMSLAQRVLKTREETYKLSELRYKAGVISAVALRQQEALIESAKADYAHAARSREQARNALATLINQPIPEDLPAGLPLDKQFFVEKLPAGLSSEVLLDRPDIRAAEHALKOANANIGAARAAFFPSIRLTGTVGTGSAELGGLFKSGTGVWSFAPSITLPIFTWGTNKANLDVAKLRQQAQIVAYEAAVQSAFQDVANALAAREQLDKAYDALSKQSRASKEALRLVGLRYKHGVSGALDLLDAERSSYAAEGAALSAQLTRAENLADLYKALGGGLKRDTQTDKSEQ ID NO：5脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB060多核苷酸序列ATGAAAAAACTTCTAATGATAACCCTCACCGGTATGCTTGCAGCTTGTGCAACAGGTGTCAATGTCGGCCGGTTGATGGTTGAAATGCCGCAGGGAGAACGTTCTGTCGTTGTGCAGGTTCCCGCGACAAATAACCCGCTTTCCGATACGGTAGCTGTCGGAATGATTAAAACATCCGGTTCGCCTTCGGCATCAAATATGATTGAAATGCTCGGCGCGGACAATATCAACGTCGGCGTGGTGGGAAGCAGCCAAATGCTTAATAAGGCGACCGCACTTTATTCCTTAAACCATGCAAAGAAAGTCGGAAATAATGTCAGTGTTTATATGATGGGCGACAGCGAAAGTGACAAGGCCGATTTGGAAAACGCGGCAAATGCCAAAAATATCAAATTGCATTATTTCTTTAACCAAAAATAASEQ ID NO：6从SEQ ID NO：5多核苷酸序列推导的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株BASB060多肽序列MKKLLMITLTGMLAACATGVNVGRLMVEMPQGERSVVVQVPATNNPLSDTVAVGMIKTSGSPSASNMIEMLGADNINVGVVGSSQMLNKATALYSLNHAKKVGNNVSVYMMGDSESDKADLENAANAKNIKLHYFFNQKSEQ ID NO：7脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB061多核苷酸序列ATGAAAATCAAACAAATCGTCAAACCGGGCTTGGCAGTATTGGCGGCGGGCGTTCTGTCTGCCTGCGCAACCAAAAGCAACGTCAAAGCCGACGGAACGACCGACAATCCGGTTTTCCCGAAACCCTATTCCGTAACGCTCGACAACAATCGCGGTACATTCCCGACCTATGACGAATTGGACTTGATGCGTCCCGGTCTGACCAAAGACGACATCTACAAAATCCTGGGTCGTCCGCATTACGACGAAGGTATGTACGGCGTGCGCGAATGGGATTATCTGTTCCACTTCCACACCCCGGGCGTAGGCATCGACCCTGAAAACACTTCCGGCGTAGAAGGCATTACCACCTGTCAATACAAAATTATTTTCGATAAAGACAAATTTGCCCGCAGCTTCTACTGGAACCCCGTCTTCCCGAAAGATGCCGCCTGTCCGCCGCCCGCACCCAAAGCCGAGCCGCAAgTCATCATCCGCGAAATCGTGCCCGCCAAAcCCAAACGCATCCGCCAATAASEQ ID NO：8从SEQ ID NO：7多核苷酸序列推导的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株BASB061多肽序列MKIKQIVKPGLAVLAAGVLSACATKSNVKADGTTDNPVFPKPYSVTLDNNRGTFPTYDELDLMRPGLTKDDIYKILGRPHYDEGMYGVREWDYLFHFHTPGVGIDPENTSGVEGITTCQYKIIFDKDKFARSFYWNPVFPKDAACPPPAPKAEPQVIIREIVPAKPKRIRQSEQ ID NO：9脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB063多核苷酸序列ATGAGACCATATGCTACTACCATTTATCAACTTTTTATTTTGTTTATTGGGAGTGTTTTTACTATGACCTCATGTGAACCTGTGAATGAAAAGACAGATCAAAAAGCAGTAAGTGCGCAACAGGCTAAAGAACAAACCAGTTTCAACAATCCCGAGCCAATGACAGGATTTGAACATACGGTTACATTTGATTTTCAGGGCACCAAAATGGTTATCCCCTATGGCTATCTTGCACGGTATACGCAAGACAATGCCACAAAATGGCTTTCCGACACGCCCGGGCAGGATGCTTACTCCATTAATTTGATAGAGATTAGCGTCTATTACAAAAAAACCGACCAAGGCTGGGTTCTTGAGCCATACAACCAGCAAAACAAAGCACACTTTATCCAATTTCTACGCGACGGTTTGGATAGCGTGGACGATATTGTTATCCGAAAAGATGCGTGTAGTTTAAGTACGACTATGGGAGAAAGATTGCTTACTTACGGGGTTAAAAAAATGCCATCTGCCTATCCTGAATACGAGGCTTATGAAGATAAAAGACATATTCCTGAAAATCCATATTTTCATGAATTTTACTATATTAAAAAAGGAGAAAATCCGGCGATTATTACTCATCGGAATAATCGAATAAACCAAACTGAAGAAGATAGTTATAGCACTAGCGTAGGTTCCTGTATTAACGGTTTCACGGTACAGTATTACCCGTTTATTCGGGAAAAGCAGCAGCTCACACAGCAGGAGTTGGTAGGTTATCACCAACAAGTAGAGCAATTGGTACAGAGTTTTGTAAACAATTCAAATAAAAAATAASEQ ID NO：10从SEQ ID NO：9多核苷酸序列推导的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株BASB063多肽序列MRPYATTIYQLFILFIGSVFTMTSCEPVNEKTDQKAVSAQQAKEQTSFNNPEPMTGFEHTVTFDFQGTKMVIPYGYLARYTQDNATKWLSDTPGQDAYSINLIEISVYYKKTDQGWVLEPYNQQNKAHFIQFLRDGLDSVDDIVIRKDACSLSTTMGERLLTYGVKKMPSAYPEYEAYEDKRHIPENPYFHEFTYIKKGENPAIITHRNNRINQTEEDSYSTSVGSCINGFTVQYYPFIREKQQLTQQELVGYHQQVEQLVQSFVNNSNKKSEQ ID NO：11脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB065多核苷酸序列ATGAAGACCAAATTACCGCTTTTTATCATTTGGCTGTCCGTATCCGCCGCCTGTTCTTCCCCTGTTTCCCGCAATATTCAGGATATGCGGCCCGAACCGCAGGCAGAGGCAGGTAGTTCGGACGCTATTCCCTATCCCGTTCCCACTCTGCAAGACCGTTTGGATTATCTGGAAGGCACACTCGTCCGCCTGTCGAACGAAGTGGAAACCTTAAACGGCAAAGTCAAAGCACTGGAGCATGCGAAAACACACCCTTCCGGTAGGGCATACGTCCAAAAACTCGACGACCGCAAGTTGAAAGAGCATTACCTCAATACCGAAGGCGGCAGCGCATCCGCACATACCGTCGAAACCGCACAAAACCTCTACAATCAGGCACTCAAACACTATAAAAGCGGCAGGTTTTCTGCCGCAGCCGCCCTGTTGAAAGGCGCGGACGGAGGCGACGGCGGCAGCATCGCGCAACGCAGTATGTACCTGTTGCTGCAAAGCAGGGCGCGTATGGGCAACTGCGAATCCGTCATCGAAATCGGAGGGCGTTACGCCAACCGTTTCAAAGACAGCCCAACCGCGCCCGAAGCCATGTTCAAAATCGGCGAATGCCAATACAGGTTGCAGCAGAAAGACATTGCAAGGGCAACTTGGCGCAGCCTGATACAGGCTTACCCGAGCAGCCCGGCGGCAAAACGCGCCGCCGCAGCCGTACGCAAACGATAGSEQ ID NO：12从SEQ ID NO：11多核苷酸序列推导的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株BASB065多肽序列MKTKLPLFIIWLSVSAACSSPVSRNIQDMRPEPQAEASSSDAIPYPVPTLQDRLDYLEGTLVRLSNEVETLNGKVKALEHAKTHPSGRAYVQKLDDRKLKEHYLNTEGGSASAHTVETAQNLYNQALKHYKSGRFSAAAALLKGADGGDGGSIAQRSMYLLLQSRARMGNCESVIEIGGRYANRFKDSPTAPEAMFKIGECQYRLQQKDIARATWRSLIQAYPSSPAAKRAAAAVRKRSEQ ID NO：13脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB066多核苷酸序列GTGTTTAAAGTGAAATTTTATATTCGTCACGCAGTATTATTATTGTGTGGAAGTTTAATTGTAGGATGCTCTGCGATTCCTTCATCAGGCCCCAGCGCAAAAAAAATTGTCTCTTTAGGGCAACAATCTGAAGTTCAAATTCCTGAAGTGGAGCTGATTGATGTGAATCATACGGTTGCTCAGTTATTATATAAGGCTCAGATAAATCAGTCATTCACTCAGTTTGGCGATGGTTATGCTTCGGCTGGTACGCTAAATATTGGTGATGTATTGGATATTATGATTTGGGAAGCGCCGCCGGCAGTATTGTTTGGTGGTGGCCTTTCTTCGATGGGCTCGGGTAGTGCGCATCAAACTAAGTTGCCAGAGCAGTTGGTCACGGCACGTGGTACGGTTTCTGTGCCGTTTGTTGGCGATATTTCGGTGGTCGGTAAAACGCCTGGTCAGGTTCAGGAAATTATTAAAGGCCGCCTGAAAAAAATGGCCAATCAGCCACAAGTGATGGTGCGTTTGGTGCAGAATAATGCGGCGAATGTGTCGGTGATTCGTGCTGGGAATAGTGTGCGTATGCCGCTGACGGCAGCCGGTGAGCGTGTGTTGGATGCGGTGGCTGCGGTAGGTGGTTCAACGGCAAATGTGCAGGATACGAATGTGCAGCTGACACGTGGCAATGTAGTACGAACTGTTGCCTTGGAAGATTTAGTTGCAAATCCGCGACAAAATATTTTGCTGCGTCGCGGTGATGTGGTTACCATGATTACCAATCCCTATACCTTTACGTCTATGGGTGCGGTGGGGAGAACACAAGAAATCGGTTTTTCAGCCAGAGGCTTATCGCTTTCTGAAGCCATTGGCCGTATGGGCGGTTTGCAAGATCGCCGTTCTGATGCGCGTGGTGTGTTTGTGTTCCGCTATACGCCATTGGTGGAATTGCCGGCAGAACGTCAGGATAAATGGATTGCTCAAGGTTATGGCAGTGAGGCAGAGATTCCAACGGTATATCGTGTGAATATGGCTGATGCGCATTCGCTATTTTCTATGCAGCGCTTTCCTGTGAAGAATAAAGATGTATTGTATGTGTCGAATGCGCCGTTGGCTGAAGTGCAGAAATTCTTGTCGTTTGTGTTCTCGCCGGTTACCAGTGGCGCGAACAGTATTAATAATTTAACTAATTAASEQ ID NO：14从SEQ ID NO：13多核苷酸序列推导的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株BASB066多肽序列MFKVKFYIRHAVLLLCGSLIVGCSAIPSSGPSAKKIVSLGQQSEVQIPEVELIDVNHTVAQLLYKAQINQSFTQFGDGYASAGTLNIGDVLDIMIWEAPPAVLFGGGLSSMGSGSAHQTKLPEQLVTARGTVSVPFVGDISVVGKTPGQVQEIIKGRLKKMANQPQVMVRLVQNNAANVSVIRAGNSVRMPLTAAGERVLDAVAAVGGSTANVQDTNVQLTRGNVVRTVALEDLVANPRQNILLRRGDVVTMITNPYTFTSMGAVGRTQEIGFSARGLSLSEAIGRMGGLQDRRSDARGVFVFRYTPLVELPAERQDKWIAQGYGSEAEIPTVYRVNMADAHSLFSMQRFPVKNKDVLYVSNAPLAEVQKFLSFVFSPVTSGANSINNLTNSEQ ID NO：15脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB071多核苷酸序列ATGAATATGAAAAAATGGATTGCCGCCGCCCTTGCCTGTTCCGCGCTCGCGCTCTCTGCCTGCGGCGGTCAGGGCAAAGATGCCGCCGCGCCCGCCGCAAACCCCGACAAAGTGTACCGCGTGGCTTCCAACGCCGAGTTTGCCCCCTTTGAATCTTTAGACTCGAAAGGCAATGTTGAAGGTTTCGATGTGGATTTGATGAACGCGATGGCGAAGGCGGGCAATTTTAAAATCGAATTCAAACACCAGCCGTGGGACAGCCTTTTCCCCGCCTTGAACAACGGCGATGCGGACGTTGTGATGTCGGGCGTAACCATTACCGACGACCGCAAACAGTCTATGGACTTCAGCGACCCGTATTTTGAAATCACCCAAGTCGTCCTCGTTCCGAAAGGCAAAAAAATATCTTCTTCCGAAGATTTGAAAAACATGAACAAAGTCGGCGTGGTAACCGGCTACACGGGCGATTTCTCCGTATCCAAACTCTTGGGCAACGACAACCCGAAAATCGCGCGCTTTGAAAACGTTCCCCTGATTATCAAAGAACTGGAAAACGGCGGCTTGGATTCCGTGGTCAGCGACAGCGCAGTCATCGCCAATTATGTGAAAAACAATCCGACCAAAGGGATGGACTTCGTTACCCTGCCCGACTTCACCACCGAACACTACGGCATCGCGGTACGCAAAGGCGACGAAGCAACCGTCAAAATGCTGAACGATGCGTTGAAAAAAGTACGCGAAAGCGGCGAATACGACAAAATCTACGCCAAATATTTTGCAAAAGAAGACGGACAGGCCGCAAAATAASEQ ID NO：16从SEQ ID NO：15多核苷酸序列推导的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株BASB071多肽序列MNMKKWIAAALACSALALSACGGQGKDAAAPAANPDKVYRVASNAEFAPFESLDSKGNVEGFDVDLMNAMAKAGNFKIEFKHQPWDSLFPALNNGDADVVMSGVTITDDRKQSMDFSDPYFEITQVVLVPKGKKISSSEDLKNMNKVGVVTGYTGDFSVSKLLGNDNPKIARFENVPLIIKELENGGLDSVVSDSAVIANYVKNNPTKGMDFVTLPDFTTEHYGIAVRKGDEATVKMLNDALKKVRESGEYDKIYAKYFAKEDGQAAK保藏材料

含有脑膜炎奈瑟氏球菌的B血清型菌株已于1997年6月22日在American Type Culture Collection(也即″ATCC″)存储，存储号为13090。存储物是登记为脑膜炎奈瑟氏球菌(Albrecht和Ghon)，他是经冷冻干燥过的、1.5-2.9kb长的插入文库，他是从脑膜炎奈瑟氏球菌分离物中构建的。此存储物在Int.Bull.Bacteriol.Nomencl.Taxon.8：1-15(1958).中有描述。

脑膜炎奈瑟氏球菌菌株存储物在此处指“存储菌株”或“存储菌株的DNA“。

存储菌株含有全部长度的BASB051、BASB057、BASB060、BASB061、BASB063、BASB065、BASB066和BASB071基因。如果发生与此处所描述的序列相冲突的情况，以存储菌株中含有的多核苷酸序列及其编码的多肽的氨基酸序列为主。

此存储菌株的存储是按照Budapest Treaty中关于应用于专利程序的、国际认可的、微生物存储的条款来进行的。当专利一发布，此菌株将不能撤回，可不加限制和附加条件的流入特定人群。存储菌株仅仅是为本领域中的技术人员提供方便，并不是授予权利所要求，如35U.S.C.§112的要求，的进行菌株存储。

                       序列表

<110>SmithKline Beecham Biologicals S.A.

<120>新化合物

<130>BM45348

<160>16

<170>FastSEQ for Windows Version 3.0

<210>1

<211>804

<212>DNA

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

<400>1atgaaaaaaa ttcttttaac ggtttcatta ggtttggcac tgagtgcctg tgccactcaa     60ggtacggtcg ataaagatgc tcagattacc caagattgga gtgtggagaa gctctatgcc    120gaagcccagg acgaattgaa cagcagcaat tatacgcggg ctgtcaagtt atacgaaatc    180ttggaatcgc gcttccccac cagccgccat gcccggcaat cccaactgga taccgcatac    240gcctattata aagacgatga aaaagacaag gctctggcgg caatcgaacg cttccgccgc    300ctccatccgc agcatccgaa tatggattac gcgctgtatc tgcgcggctt ggtgctgttc    360aacgaagacc agtccttctt gaacaaactg gcctcgcaag actggtccga ccgcgacccg    420aaagccaacc gcgaagtaac ccaggcgttt gcggaactcg tccaacgctt ccccaacagc    480aaatacgccg ccgatgcgac cgcacgcatg gtcaaactgg tcgatgcact gggcggcaat    540gaaatgtcgg tggcgcgcta ctacatgaaa cgcggcgcat atatcgccgc cgccaaccgc    600gcccaaaaaa ttatcggcag ctaccaaaat acacgctatg tcgaagaatc gctcgccatc    660ttggaacttg cctaccaaaa actcggcaaa ccacagcttg ccgccgatac gcgccgcgtg    720ttggaaacca acttcccgaa aagcccgttt ttgacgcacg cttggcagcc cgacgatatg    780ccttggtggc gttactggca ttaa                                           804

<210>2

<211>267

<212>PRT

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

<400>2Met Lys Lys Ile Leu Leu Thr Val Ser Leu Gly Leu Ala Leu Ser Ala1               5                  10                  15Cys Ala Thr Gln Gly Thr Val Asp Lys Asp Ala Gln Ile Thr Gln Asp

        20                  25                  30Trp Ser Val Glu Lys Leu Tyr Ala Glu Ala Gln Asp Glu Leu Asn Ser

    35                  40                  45Ser Asn Tyr Thr Arg Ala Val Lys Leu Tyr Glu Ile Leu Glu Ser Arg

50                  55                  60Phe Pro Thr Ser Arg His Ala Arg Gln Ser Gln Leu Asp Thr Ala Tyr65                  70                  75                  80Ala Tyr Tyr Lys Asp Asp Glu Lys Asp Lys Ala Leu Ala Ala Ile Glu

            85                  90                  95Arg Phe Arg Arg Leu His Pro Gln His Pro Asn Met Asp Tyr Ala Leu

        100                 105                 110Tyr Leu Arg Gly Leu Val Leu Phe Asn Glu Asp Gln Ser Phe Leu Asn

    115                 120                 125Lys Leu Ala Ser Gln Asp Trp Ser Asp Arg Asp Pro Lys Ala Asn Arg

130                 135                 140Glu Val Thr Gln Ala Phe Ala Glu Leu Val Gln Arg Phe Pro Asn Ser145                 150                 155                 160Lys Tyr Ala Ala Asp Ala Thr Ala Arg Met Val Lys Leu Val Asp Ala

            165                 170                 175Leu Gly Gly Asn Glu Met Ser Val Ala Arg Tyr Tyr Met Lys Arg Gly

        180                 185                 190Ala Tyr Ile Ala Ala Ala Asn Arg Ala Gln Lys Ile Ile Gly Ser Tyr

    195                 200                 205Gln Asn Thr Arg Tyr Val Glu Glu Ser Leu Ala Ile Leu Glu Leu Ala

210                 215                 220Tyr Gln Lys Leu Gly Lys Pro Gln Leu Ala Ala Asp Thr Arg Arg Val225                 230                 235                 240Leu Glu Thr Asn Phe Pro Lys Ser Pro Phe Leu Thr His Ala Trp Gln

            245                 250                 255Pro Asp Asp Met Pro Trp Trp Arg Tyr Trp His

        260                 265

<210>3

<211>1404

<212>DNA

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

<400>3atggatacta cattgaaaac caccttgact tctgttgcag cagccttcgc attatccgcc     60tgcaccatga ttccccaata cgagcagccc aaagtcgaag ttgccgaaac gtttaaaaac    120gataccgccg acagcggcat ccgtgcggtc gatttaggtt ggcatgacta ttttgccgac    180ccgcgcctgc aaaagctgat cgacatcgca ctcgagcgca ataccagttt gcgtaccgcc    240gtattgaaca gcgaaatcta ccgcaaacaa tacatgattg agcgcaacaa cctcctgccc    300acgcttgccg ccaatgcgaa cggctcgcgc caaggcagct tgagcggcgg caatgtcagc    360agcagctaca atgtcggact gggtgcggca tcttacgaac tcgacctgtt cggacgcgtc    420cgcagcagca gcgaagcagc actgcaaggc tattttgcaa gtgtcgccaa ccgcgatgcg    480gcacatttga gcctgattgc caccgttgcc aaagcctatt tcaacgaacg ttatgccgaa    540gaagcgatgt ctttggcgca gcgtgttttg aaaacgcgcg aggaaaccta caagctgtcc    600gaattacgtt acaaggcagg cgtgatttcc gccgtcgccc tacgtcagca ggaagccctg    660atcgaatctg ccaaagccga ttatgcccat gccgcgcgca gccgcgaaca ggcgcgcaat     720gccttggcaa ccttgattaa ccaaccgata cccgaagacc tgcctgccgg tttgccgctg     780gacaagcagt tttttgttga aaaactgccg gccggtttga gttccgaagt attgctcgac     840cgtcccgata tccgtgctgc cgaacacgcg ctcaaacagg caaacgccaa tatcggtgcg     900gcacgcgccg cctttttccc atccatccgc ctgaccggaa ccgtcggtac gggttctgcc     960gaattgggtg ggttgttcaa aagcggcacg ggcgtttggt cgttcgcgcc gtctattacc    1020ctgccgattt ttacctgggg tacgaacaaa gccaaccttg atgtagccaa gctgcgccaa    1080caggcacaaa tcgttgccta tgaagccgcc gtccaatccg catttcaaga cgtggcaaac    1140gcattggcgg cgcgcgagca gctggataaa gcctatgacg ctttaagcaa acaaagccgc    1200gcctctaaag aggcgttgcg cttggtcggc ctgcgttaca agcacggcgt atccggcgcg    1260ctcgacttgc tcgatgcgga acgcagcagc tatgcggcgg agggtgcggc tttgtcggca    1320caactgaccc gcgccgaaaa ccttgccgat ttgtacaagg cactcggcgg cggattgaaa    1380cgggataccc aaaccgacaa ataa                                           1404

<210>4

<211>467

<212>PRT

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

<400>4Met Asp Thr Thr Leu Lys Thr Thr Leu Thr Ser Val Ala Ala Ala Phe1               5                  10                  15Ala Leu Ser Ala Cys Thr Met Ile Pro Gln Tyr Glu Gln Pro Lys Val

        20                  25                  30Glu Val Ala Glu Thr Phe Lys Asn Asp Thr Ala Asp Ser Gly Ile Arg

    35                  40                  45Ala Val Asp Leu Gly Trp His Asp Tyr Phe Ala Asp Pro Arg Leu Gln

50                  55                  60Lys Leu Ile Asp Ile Ala Leu Glu Arg Asn Thr Ser Leu Arg Thr Ala65                  70                  75                  80Val Leu Asn Ser Glu Ile Tyr Arg Lys Gln Tyr Met Ile Glu Arg Asn

            85                  90                  95Asn Leu Leu Pro Thr Leu Ala Ala Asn Ala Asn Gly Ser Arg Gln Gly

        100                 105                 110Ser Leu Ser Gly Gly Asn Val Ser Ser Ser Tyr Asn Val Gly Leu Gly

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<210>5

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<212>DNA

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

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<212>PRT

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

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<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

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<210>8

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<212>PRT

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

  <400>8Met Lys Ile Lys Gln Ile Val Lys Pro Gly Leu Ala Val Leu Ala Ala1               5                  10                  15Gly Val Leu Ser Ala Cys Ala Thr Lys Ser Asn Val Lys Ala Asp Gly

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<212>DNA

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

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<212>PRT

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

<400>10Met Arg Pro Tyr Ala Thr Thr Ile Tyr Gln Leu Phe Ile Leu Phe Ile1               5                  10                  15Gly Ser Val Phe Thr Met Thr Ser Cys Glu Pro Val Asn Glu Lys Thr

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    115                 120                 125Phe Ile Gln Phe Leu Arg Asp Gly Leu Asp Ser Val Asp Asp Ile Val

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<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

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<212>PRT

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

<400>12Met Lys Thr Lys Leu Pro Leu Phe Ile Ile Trp Leu Ser Val Ser Ala1               5                  10                  15Ala Cys Ser Ser Pro Val Ser Arg Asn Ile Gln Asp Met Arg Pro Glu

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<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

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<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

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    195                 200                 205Ser Thr Ala Asn Val Gln Asp Thr Asn Val Gln Leu Thr Arg Gly Asn

210                 215                 220Val Val Arg Thr Val Ala Leu Glu Asp Leu Val Ala Asn Pro Arg Gln225                 230                 235                 240Asn Ile Leu Leu Arg Arg Gly Asp Val Val Thr Met Ile Thr Asn Pro

            245                 250                 255Tyr Thr Phe Thr Ser Met Gly Ala Val Gly Arg Thr Gln Glu Ile Gly

        260                 265                 270Phe Ser Ala Arg Gly Leu Ser Leu Ser Glu Ala Ile Gly Arg Met Gly

    275                 280                 285Gly Leu Gln Asp Arg Arg Ser Asp Ala Arg Gly Val Phe Val Phe Arg

290                 295                 300Tyr Thr Pro Leu Val Glu Leu Pro Ala Glu Arg Gln Asp Lys Trp Ile305                 310                 315                 320Ala Gln Gly Tyr Gly Ser Glu Ala Glu Ile Pro Thr Val Tyr Arg Val

            325                 330                 335Asn Met Ala Asp Ala His Ser Leu Phe Ser Met Gln Arg Phe Pro Val

        340                 345                 350Lys Asn Lys Asp Val Leu Tyr Val Ser Asn Ala Pro Leu Ala Glu Val

    355                 360                 365Gln Lys Phe Leu Ser Phe Val Phe Ser Pro Val Thr Ser Gly Ala Asn

370                 375                 380Ser Ile Asn Asn Leu Thr Asn385                 390

<210>15

<211>807

<212>DNA

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

<400>15atgaatatga aaaaatggat tgccgccgcc cttgcctgtt ccgcgctcgc gctgtctgcc     60tgcggcggtc agggcaaaga tgccgccgcg cccgccgcaa accccgacaa agtgtaccgc    120gtggcttcca acgccgagtt tgcccccttt gaatctttag actcgaaagg caatgttgaa    180ggcctcgatg tggatttgat gaacgcgatg gcgaaggcgg gcaattttaa aatcgaattc    240aaacaccagc cgtgggacag ccttttcccc gccttgaaca acggcgatgc ggacgttgtg    300atgtcgggcg taaccattac cgacgaccgc aaacagtcta tggacttcag cgacccgtat    360tttgaaatca cccaagtcgt cctcgttccg aaaggcaaaa aaatatcttc ttccgaagat    420ttgaaaaaca tgaacaaagt cggcgtggta accggctaca cgggcgattt ctccgtatcc    480aaactcttgg gcaacgacaa cccgaaaatc gcgcgctttg aaaacgttcc cctgattatc    540aaagaactgg aaaacggcgg cttggattcc gtggtcagcg acagcgcagt catcgccaat    600tatgtgaaaa acaatccgac caaagggatg gacttcgtta ccctgcccga cttcaccacc    660gaacactacg gcatcgcggt acgcaaaggc gacgaagcaa ccgtcaaaat gctgaacgat    720gcgttgaaaa aagtacgcga aagcggcgaa tacgacaaaa tctacgccaa atattttgca    780aaagaagacg gacaggccgc aaaataa                                        807

<210>16

<211>268

<212>PRT

<213>Neisseria meningitidis

<214>脑膜炎奈瑟氏球菌

<400>16Met Asn Met Lys Lys Trp Ile Ala Ala Ala Leu Ala Cys Ser Ala Leu1               5                  10                  15Ala Leu Ser Ala Cys Gly Gly Gln Gly Lys Asp Ala Ala Ala Pro Ala

        20                  25                  30Ala Asn Pro Asp Lys Val Tyr Arg Val Ala Ser Asn Ala Glu Phe Ala

    35                  40                  45Pro Phe Glu Ser Leu Asp Ser Lys Gly Asn Val Glu Gly Phe Asp Val

50                  55                  60Asp Leu Met Asn Ala Met Ala Lys Ala Gly Asn Phe Lys Ile Glu Phe65                  70                  75                  80Lys His Gln Pro Trp Asp Ser Leu Phe Pro Ala Leu Asn Asn Gly Asp

            85                  90                  95Ala Asp Val Val Met Ser Gly Val Thr Ile Thr Asp Asp Arg Lys Gln

    100                     105                 110Ser Met Asp Phe Ser Asp Pro Tyr Phe Glu Ile Thr Gln Val Val Leu

    115                 120                 125Val Pro Lys Gly Lys Lys Ile Ser Ser Ser Glu Asp Leu Lys Asn Met

130                 135                 140Asn Lys Val Gly Val Val Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Ser Val Ser145                 150                 155                 160Lys Leu Leu Gly Asn Asp Asn Pro Lys Ile Ala Arg Phe Glu Asn Val

            165                 170                 175Pro Leu Ile Ile Lys Glu Leu Glu Asn Gly Gly Leu Asp Ser Val Val

        180                 185                 190Ser Asp Ser Ala Val Ile Ala Asn Tyr Val Lys Asn Asn Pro Thr Lys

195                     200                 205Gly Met Asp Phe Val Thr Leu Pro Asp Phe Thr Thr Glu His Tyr Gly

210                 215                 220Ile Ala Val Arg Lys Gly Asp Glu Ala Thr Val Lys Met Leu Asn Asp225                 230                 235                 240Ala Leu Lys Lys Val Arg Glu Ser Gly Glu Tyr Asp Lys Ile Tyr Ala

            245                 250                 255Lys Tyr Phe Ala Lys Glu Asp Gly Gln Ala Ala Lys

        260                 265

Claims (24)

1.含有一种氨基酸序列的分离多肽，此氨基酸序列与选自由SEQID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16组成的序列组中的氨基酸序列至少有85％的同一性。

2.权利要求1中的分离多肽，其氨基酸序列与选自由SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16组成的序列组中的氨基酸序列至少有95％的同一性。

3.权利要求1中的多肽，它含有选自由SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16组成的序列组中的氨基酸序列。

4.SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16的分离多肽。

5.权利要求1-4中多肽的免疫原性片段，该免疫原性片段的免疫原活性基本上与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16的多肽相同。

6.含有编码一种多肽的核苷酸序列的分离多核苷酸，此核苷酸序列编码的多肽就全部长度的SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14或16而言，与SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：6，SEQ IDNO：8，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：16，的氨基酸序列至少有85％的同一性，或与该分离多核苷酸序列互补的核苷酸序列。

7.含有一种核苷酸序列的分离多核苷酸，此核苷酸序列与编码SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14或16的多肽在全部长度的编码区有至少85％的同一性；或与该分离多核苷酸互补的多核苷酸。

8.含有一种核苷酸序列的分离多核苷酸，此核苷酸序列就全长的SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13或15至少有85％的同一性；或与该多核苷酸序列互补的多核苷酸序列。

9.权利要求6-8中与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13或15至少有95％同一性的分离多核苷酸。

10.含有编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：16的多肽的核苷酸序列的分离多核苷酸。

11.含有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15的多核苷酸的分离多核苷酸。

12.含有编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：16的多肽的核苷酸序列的分离多核苷酸，他可以通过利用含有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15序列或其片段的探针，在严格的杂交条件下，通过筛选合适的文库在获得。

13.含有相应于权利要求6-12的分离多核苷酸的表达载体或重组活体微生物体。

14.含有权利要求13的表达载体的宿主细胞或亚细胞片段或该宿主细胞的一种膜，可表达一种分离的多肽，此多肽含有的氨基酸序列与由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、EQ ID NO：16组成的组中挑选的氨基酸序列至少有85％的同一性。

15.制备含有一种氨基酸序列的多肽的方法，此氨基酸序列与由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：16组成的组中挑选的氨基酸序列至少有85％的同一性，此方法也包括在可充分制备该多肽的条件下培养权利要求14的宿主细胞，以及从培养基中回收该多肽。

16.表达权利要求6-12中的多核苷酸的方法，包括利用含有至少一种该多核苷酸的载体转化宿主细胞，以及在可充分表达该多核苷酸的条件下培养该宿主细胞。

17.含有权利要求1-5中的、有效剂量的多肽及药物上可接受的载体的疫苗组合物。

18.含有权利要求6-12中的、有效剂量的多肽及药物上可接受的载体的疫苗组合物。

19.权利要求17或18的疫苗组合物，其中该组合物含有至少一种另外的脑膜炎奈瑟氏球菌抗原。

20.对权利要求1-5中的多肽或免疫学片段具有免疫特异性的抗体。

21.诊断脑膜炎奈瑟氏球菌感染的方法，包括在从怀疑感染这种感染的动物中取得的生物学标本中鉴别权利要求1-5中的多肽，或该多肽特异性免疫的抗体的存在。

22.含有免疫学上有效剂量的权利要求1-5中多肽的组合物，在制备用于在动物体内产生免疫应答的药物制剂中的应用。

23.含有免疫学上有效剂量的权利要求6-12中核苷酸的组合物在制备用于可在动物体内产生免疫应答的药物制剂中的应用。

24.可有效治疗人脑膜炎奈瑟氏球菌疾病的治疗性组合物，该组合物至少含有直接抗权利要求1-5中的多肽的抗体以及合适的载体。