CN1291095A

CN1291095A - 化学化合物

Info

Publication number: CN1291095A
Application number: CN99803038A
Authority: CN
Inventors: A·J·巴克尔; J·G·克特勒; A·W·福尔
Original assignee: AstraZeneca UK Ltd
Current assignee: AstraZeneca UK Ltd
Priority date: 1998-02-17
Filing date: 1999-02-02
Publication date: 2001-04-11
Also published as: AU745772B2; AU2432799A; NO20004090L; DE69906940T2; US6291507B1; NZ505586A; JP2002502873A; EP1054667B1; EP1054667A1; ATE237327T1; DE69906940D1; GB9803226D0; WO1999040913A1; NO20004090D0; KR20010040996A; BR9907962A; CA2317456A1

Abstract

一种药物组合物,它含有式(Ⅰ)化合物或其可药用的盐、酯或酰胺和可药用载体,其中式(Ⅰ)化合物是单核细胞化学引诱剂蛋白－1的抑制剂,式(Ⅰ)中A和B形成可任选取代的亚烷基链以与和它们相连的碳原子形成一个环;X是CH₂或SO₂;R¹是可任选取代的芳基或杂芳基;R²是特定的有机基团,例如羧基;以及R³是氢或特定的有机基团。某些式(Ⅰ)化合物是新化合物并要求保护其本身。

Description

化学化合物

本发明涉及药物组合物，该组合物含有通过拮抗CCR2受体(还已知称为MCP-1受体)，尤其是致使单核细胞化学引诱剂蛋白-1(MCP-1)抑制而起作用的抗炎和免疫调节化合物，这些化合物包含双环结构。本发明还涉及用于所述组合物的新化合物，它们的制备方法、用于制备它们的中间体以及它们作为治疗剂的用途。

MCP-1是介导白细胞趋化性和活化的促炎蛋白趋化因子家族中的一员。MCP-1是一种C-C趋化因子，它是最有效和最具选择性的已知T-细胞和单核细胞化学引诱剂和活化剂之一。MCP-1参与多种炎症疾病的病生理过程，它们包括类风湿关节炎、肾小球肾炎、肺纤维化、再狭窄(国际专利申请WO 94／09128)，牙槽炎(Jones等，1992，J．Immunol．，149，2147)和哮喘。据认为MCP-1在其病理中起作用的其它疾病是动脉粥样硬化(如，Koch等，1992，J．Clin．Invest．，90，772-779)、牛皮癣(Deleuran等，1996，J．Dermatological Science，13，228-236)、延迟型皮肤过敏反应、炎症性肠病(Grimm等，1996，J．LeukocyteBiol．，59，804-812)、多发性硬化和脑损伤(Berman等，1996，J．Immunol．，156，3017-3023)。CCR2拮抗剂也可用于治疗中风、再灌注损伤、局部缺血、心肌梗塞和移植排斥反应。

MCP-1通过CCR2受体起作用。MCP-2和MCP-3也可至少是部分地通过该受体起作用。因此，在本说明书中，当其它细胞因子是通过MCP-1受体起作用时，提及的“抑制或拮抗MCP-1”或者“MCP-1介导的作用”包括抑制或拮抗这些其它细胞因子介导的作用，包括MCP-2和／或MCP-3介导的作用。

J．Chem．Soc．Perkin Trans I(1995)1131-1136公开了多种双环化合物，它们是制备生物活性吲哚化合物的中间体。

EP-A-189690公开了某些可用于治疗眼内压升高的环烷烃并吡咯衍生物，而WO 9730704建议相关化合物可用于治疗或预防水肿斑。

本申请人发现一类含双环结构的化合物是CCR2受体拮抗剂。另外，它们表现出抑制RANTES诱导的趋化因子。RANTES(调节活化，正常T-细胞表达和分泌的)是与MCP-1同族的另一种趋化因子，它与MCP-1具有相似的生物学特性，但它是通过CCR1起作用的。因此，这些化合物可用于治疗由这些物质介导的疾病，尤其是炎症疾病。

因此，本发明提供一种药物组合物，它含有式(Ⅰ)化合物

或其可药用的盐、酯或酰胺和可药用载体，式(Ⅰ)化合物是单核细胞化学引诱剂蛋白-1的抑制剂；其中

A和B形成可任选取代的亚烷基链以与和它们相连的碳原子形成一个环；

X是CH₂或SO₂；

R¹是可任选取代的芳基或杂芳基；

R²是羧基、氰基、-C(O)CH₂OH、-CONHR⁴、-SO₂NHR⁵、四唑-5-基、SO₃H或者式(Ⅵ)的基团

其中R⁴选自氢、烷基、芳基、氰基、羟基、-SO₂R⁹，其中R⁹是烷基、芳基、杂芳基或者卤代烷基，或者R⁴是基团-(CHR¹⁰)_r-COOH，其中r是1-3的整数并且各个R¹⁰基团独立地选自氢或烷基；R⁵是烷基，可任选取代的芳基，例如可任选取代的苯基或可任选取代的杂芳基，例如5或6元杂芳基，或者基团COR⁶，其中R⁶是氢、烷基、芳基、杂芳基或卤代烷基；R⁷和R⁸独立地选自氢或烷基，尤其是C_1-4烷基；并且

R³是氢、官能团、可任选取代的烷基、可任选取代的链烯基、可任选取代的炔基、可任选取代的芳基、可任选取代的杂环基、可任选取代的烷氧基、可任选取代的芳烷基、可任选取代的芳烷氧基、可任选取代的环烷基。

适宜的组合物含有式(Ⅰ)化合物或者其盐或体内可水解的酯。

这类化合物的实例是这样一些化合物，其中A、B、X、R¹和R³如上所定义，并且R²如上所定义的，但R⁴选自氰基、羟基、-SO₂R⁹，其中R⁹是烷基、芳基、杂芳基或卤代烷基，或者R⁴是基团(CHR¹⁰)_r-COOH，其中r是1-3的整数并且各个R¹⁰基团独立地选自氢或烷基；R⁵是可任选取代的苯基或可任选取代的杂芳基，或者基团COR⁹，其中R⁶是烷基、芳基、杂芳基或卤代烷基；R⁷和R⁸独立地选自氢或烷基，尤其是C_1-4烷基。

式(Ⅰ)化合物是单核细胞化学引诱剂蛋白-1的抑制剂，因此可用于治疗炎症疾病。因此，本发明还提供一种用于治疗炎症疾病的式(Ⅰ)化合物。

在另一个方案中，本发明提供式(Ⅰ)化合物在制备治疗炎症疾病的药物中的应用。

在本说明书中，术语“烷基”在单独或作为前后缀使用时都包括直链或支链结构。这些基团可包含有至多10个，优选至多6个，更优选至多4个碳原子。同样，术语“链烯基”和“炔基”是指不饱和的包含例如2-10个，优选2-6个碳原子的直链或支链结构。环状结构，例如环烷基、环链烯基和环炔基同样具有至少3个碳原子。术语，例如“烷氧基”包含本领域中理解的烷基。

术语“卤代”包括氟、氯、溴和碘。芳基包括芳族碳环，如苯基和萘基。术语“杂环基”包括例如含4-20个，适宜地是含5-8个环原子芳香或非芳香环，其中的至少一个环原子是杂原子，例如氧、硫或氮。这类基团的实例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、咪唑基、三唑基、噻唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基。

“杂芳基”是指那些上述具有芳香性的基团。术语“芳烷基”是指芳基取代的烷基，例如苄基。

本说明书中使用的其他表达方式包括“烃基”，它是指含碳和氢原子的任何结构。例如，可以是烷基、链烯基、炔基、芳基、杂环基、烷氧基、芳烷基、环烷基、环链烯基或环炔基。

术语“官能团”是指反应性取代基。它们包括供电子或吸电子基团。这类基团的实例包括卤素、氰基、硝基、氧代、=CR¹¹R¹²、C(O)_nR¹¹、OR¹¹、S(O)_mR¹¹、NR¹²R¹³、C(O)NR¹²R¹³、OC(O)NR¹²R¹³、=NOR¹¹、-CHNOR¹¹、-NR¹²C(O)_nR¹¹、-NR¹¹CONR¹²R¹³、-N=CR¹²R¹³、S(O)_mNR¹²R¹³或-NR¹²S(O)_mR¹¹，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自氢或可任选取代的烃基，或者R¹²和R¹³一起形成可任选取代的环，该环可任选包含其他杂原子，例如S(O)_m、氧和氮，n是1或2的整数，m是O或者1-3的整数。在有两个键可利用的条件下，官能团应理解为仅仅是双键合的。因此，例如，R³不可以是氧代或者=CR¹¹R¹²或=NOR¹¹。当官能团包含S(O)_mNR¹²R¹³或者-NR¹²S(O)_mR¹¹时，m通常是1-3的整数。为避免产生疑问，其中R¹²和R¹³一起形成可任选取代的环，该环将包括如上定义的非芳香的杂环基。

烃基R¹¹、R¹²和R¹³的适宜任选取代基包括卤素、全卤代烷基(例如三氟甲基)、巯基、羟基、羧基、烷氧基、杂芳氧基、链烯氧基、炔氧基、烷氧烷氧基、芳氧基(其中芳基可被卤素、硝基或羟基取代)、氰基、硝基、氨基、一或二烷基氨基、肟基(如羟基亚氨基或烷氧基亚氨基)或者S(O)_mRy，其中m定义如上，R^y是烷基。

适宜的A和B形成包含3-6个碳原子的亚烷基链，以便与和它们相连的碳原子一起形成5-8个原子的环。A-B链的适宜取代基包括如上定义的官能团或者可任选取代的烃基或可任选取代的杂环基。这些烃基和杂环基的适宜取代基包括上面列出的那些R¹¹、R¹²、R¹³的取代基。

A-B链的取代基的特别实例包括氧代；=NOR¹¹，其中R¹¹定义如上，并且特别是肟，=NOH；可任选取代的烷基，例如芳烷基、羧基烷基或者其酰胺衍生物；烷氧基；芳氧基；芳烷氧基；或者可任选被烷基、芳基或芳烷基取代的氨基。适合A-B链的特定官能团是亚-式(Ⅵ)基团。

A-B链的取代基的特别实例是=NOR¹¹基。

A-B环上可以存在的取代基实例包括羧基或其烷基酯，尤其是叔丁基酯，氧代、=NOH或=NOR*，其中R*是甲基、苄基、羧基苄基、甲氧羰基苄基、3-(羧基)丙基或其酯(例如乙酯)、4-羧基丁基或其酯(如，乙酯)以及羧基甲基。

R¹宜是单个芳基环。

R¹宜是可任选取代的苯环、吡啶环、萘环、呋喃环或噻吩环。

式(Ⅰ)中R¹的适宜任选取代基包括除芳氧基或杂芳氧基以外的某些上面列出的R¹¹、R¹²和R¹³的取代基，以及烷基、链烯基和炔基。

R¹取代基的实例包括三氟甲基、C_1-4烷基、卤素、三氟甲氧基、C_{1- 4}烷氧基、C_1-4链烷酰基、C_1-4链烷酰氧基、硝基、羧基、氨基甲酰基、C_1-4烷氧羰基、C_1-4烷基硫基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷基亚磺酰基、磺酰氨基(sulphonamido)、氨基甲酰基C_1-4烷基、N-(C_1-4烷基)氨基甲酰基C_1-4烷基、N-(C_1-4烷基)2氨基甲酰基-C_1-4烷基、羟基C_{1 -4}烷基或C_1-4烷氧基C_1-4烷基。

R¹的任选取代基尤其选自卤素、包括全卤代烷基的卤代烷基(如三氟甲基)、羧基、烷氧基、卤代烷氧基、链烯氧基、炔氧基、羟基烷氧基、烷氧基烷氧基、链烷酰基、链烷酰氧基、氰基、硝基、氨基、一或二烷基氨基、磺酰氨基或S(O)_mR^x，其中m定义如上并且R^x是烃基。适宜的实例是三氟甲基、C_1-4烷基、卤素、三氟甲氧基、C_1-4烷氧基、C_{1 -4}链烷酰基、C_1-4链烷酰氧基、硝基、羧基、C_1-4烷氧羰基、C_1-4烷基硫基、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、磺酰氨基、羟基C_1-4烷基或C_1-4烷氧基C_1-4烷基。

另外或此外，两个这类取代基一起可形成与R¹环上相邻碳原子相连的式-O(CH₂)_1-4O-二价基团。

R¹的优选取代基是一个或多个非极性的取代基，例如卤素。

特别是，R¹被一个或多个卤素基团，尤其是氯取代。R¹基的具体实例是3，4-二氯苯基、3，4-二氟苯基、3-氟-4-氯苯基、3-氯-4-氟苯基或2，3-二氯吡啶-5-基。

R¹优选是3，4-二氯苯基。

R¹不宜为SO₂NH₂基团。

R²的实例包括羧基；氰基；四唑-5-基；SO₃H；-CONHR⁴，其中R⁴选自氰基、羟基；-SO₂R⁹，其中R⁹是烷基(例如C_1-4烷基)、芳基(如苯基)、杂芳基或三氟甲基；或者R⁴是-(CHR¹⁰)_r-COOH，其中r是1-3的整数并且各个R¹⁰独立地选自氢或烷基，如C_1-4烷基；或者R²是-SO₂NHR⁵，其中R⁵是可任选取代的苯基或可任选取代的5或6元杂芳基；或者COR⁶，其中R⁶是烷基(例如C_1-4烷基)、芳基(如苯基)、杂芳基或三氟甲基；或者R²是式(Ⅵ)的基团

其中R⁷和R⁸独立地选自氢或烷基，尤其是C_1-4烷基。

R²优选是羧基或其可药用盐或酯，例如C_1-4烷基酯，特别是羧基或其可药用盐，尤其是羧基。

当R³是可任选取代的烷基、链烯基或炔基时，则R³是一个包括烷基部分的基团，适宜的任选取代基包括卤素、全卤代烷基(如三氟甲基)、巯基、羟基、羧基、烷氧基、杂芳氧基、链烯氧基、炔氧基、烷氧基烷氧基、芳氧基(其中芳基可被卤素、硝基或羟基取代)、氰基、硝基、氨基、一或二烷基氨基、肟基(例如羟基亚氨基或烷氧基亚氨基)或S(O)_mR^y，其中m定义如上并且R^y是烷基。

当R³是芳基、芳烷基、芳氧基、环烷基或杂环基时，适宜的取代基包括那些上面列出的R1的取代基。

适宜的R³包括氢、氟、氯、溴、碘、甲基、氰基、三氟甲基、羟甲基、羧基烷基、烷氧基烷基(如C_1-4烷氧基甲基)、甲氧基、苄氧基、羧基烷氧基(如羧基甲氧基)、甲硫基、甲基亚磺酰基、甲基磺酰基或羧基C_3-6环烷基、-(CHR²³)_r-NR²⁴R²⁵(其中r是0-2，优选1或2，各个R²³独立地是氢或烷基，尤其是C_1-4烷基，R²⁴和R²⁵独立地选自H和C_1-4烷基或者R²⁴和R²⁵与和它们相连的氮原子一起形成5或6元环，该环可任选地含有一个其他的选自O、N、S、S(O)或SO₂的杂原子)。适宜地R²⁴和R²⁵一起形成杂环，例如吗啉代或哌嗪基。

其他这样的R³基团包括可任选取代的芳基，例如可任选取代的苯基。苯基R³的适宜取代基包括一个或多个选自氯、氟、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基或甲酰基的基团。

虽然R³可包含上面列出范围内的取代基，但其取代基优选是氢或较小的取代基，例如C_1-4烷基，尤其是甲基、卤素或三氟甲基，最优选是氢。

适宜地X是CH₂。

一类优选的式(Ⅰ)化合物是式(Ⅲ)那些化合物

其中R¹、R²、R³和X如式(Ⅰ)中所定义，Y是基团(CR¹⁸R¹⁹)s，R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷及各个R¹⁸和R¹⁹独立地选自氢、烷基、环烷基、链烯基、环烯基、炔基、环炔基或官能团，并且s是1-4的整数。R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷及各个R¹⁸和R¹⁹尤其独立地选自氢、烷基、链烯基、炔基或官能团。

R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷及各个R¹⁸和R¹⁹的适宜基团包括氢；三氟甲基；可任选被例如芳基、羧基或其酰胺衍生物取代的C_1-4烷基；卤素；羟基；C_1-4烷氧基；C_1-4链烷酰基；C_1-4链烷酰氧基；氨基；氰基；C_1-4烷基氨基；二(C_1-4烷基)氨基；C_1-4链烷酰氨基；硝基；氨基甲酰基；C_{1- 4}烷氧羰基；巯基；C_1-4烷基硫基；C_1-4烷基亚磺酰基；C_1-4烷基磺酰基；磺酰氨基；烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、氨基甲酰基C_1-4烷基；N-(C_{1 -4}烷基)氨基甲酰基C_1-4烷基；N-(C_1-4烷基)₂氨基甲酰基C_1-4烷基；羟基C_1-4烷基；C_1-4烷氧基C_1-4烷基；吗啉代；硫代吗啉代；氧(oxy)硫代吗啉代；吡咯烷基；羧基C_1-4烷基氨基；R²⁰；NHR²¹和-OR²¹，其中R²⁰和R²¹独立地选自可任选取代的苯基或可任选取代的5或6元杂芳环；或者R¹⁴和R¹⁵、R¹⁶和R¹⁷，和／或R¹⁸和R¹⁹一起形成氧代基团或者=NOR²²基团，其中R²²是氢或可任选取代的烃基，例如被如官能团取代的C_1-4烷基或者芳基；条件是与同一个碳原子相连的R¹⁴和R¹⁵，或者R¹⁶和R¹⁷或R¹⁸和R¹⁹两个不都是羟基、C_1-4烷氧基、氨基、氰基、硝基或巯基。

R²⁰和R²¹的适宜任选的取代基包括那些上面列出的R¹的取代基。

这类化合物的实例是其中R¹⁶和R¹⁷是氢的那些化合物。

其他实例包括R¹⁴和R¹⁵中的至少一个不是氢的化合物。优选的实例是其中R¹⁴和R¹⁵一起形成氧代基团的化合物。另一个优选的实例是其中R¹⁴和R¹⁵一起形成=NOH或者NOR²²的化合物，其中R²²定义如上面的R*。

其他实例是其中基团R¹⁸和R¹⁹不都是氢的化合物，与带有R¹⁴和R¹⁵的碳原子相近的，例如相邻的那个不是氢。

更优选R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸和R¹⁹都是氢。

s最优选是1或2。

式(Ⅰ)化合物的优选亚组是式(Ⅲ)化合物或其可药用盐，其中R²是羧基或其体内可水解的酯，X和R¹如式(Ⅰ)中所定义，R³是氢或C_{1 -4}烷基，s如式(Ⅲ)中所定义，R¹⁴和R¹⁵选自氢、=O、=NOH、=NOR*，其中R*定义如上，并且R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸和R¹⁹都是氢。

式(Ⅰ)化合物的适宜可药用盐包括酸加成盐，例如甲磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐及与磷酸和硫酸形成的盐。另一方面，适宜的盐是碱盐，例如碱金属盐，如钠盐；碱土金属盐，如钙或镁盐；有机胺盐，例如三乙胺、吗啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普鲁卡因、二苄基胺、N，N-二苄基乙基胺或氨基酸，如赖氨酸。根据荷电官能团的数量和阳离子或阴离子的价数，可存在一个或多个阳离子或阴离子。优选的可药用盐是钠盐。

包含羧基或羟基的式(Ⅰ)化合物的体内可水解酯是例如在人体或动物体内水解产生母体酸或醇的可药用酯。

羧基的适宜可药用酯包括烷基酯，例如C_1-6烷基酯，如乙酯；C_1-4烷氧基甲酯，如甲氧基甲酯；C_1-6链烷酰氧基甲酯，如戊酰氧基甲酯；phthalidyl酯；C_3-8环烷氧基-羰氧基C_1-6烷基酯，如1-环己基羰氧基乙酯；1，3-二氧杂环戊烯-2-onyl甲酯，如5-甲基-1，3-二氧杂环戊烯-2-onyl甲酯；和C1-6烷氧基羰氧基乙酯，如1-甲氧基羰氧基乙酯，可在本发明化合物中的任何羧基上形成酯。

式(Ⅰ)化合物的适宜可药用酯是含羟基的式(Ⅰ)化合物体内可水解酯，包括无机酯，例如磷酸酯和α-酰氧基烷基酯和相关化合物，酯在体内水解断裂的结果是得到母体羟基。α-酰氧基烷基酯的实例包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基甲氧基。羟基的体内可水解酯形成基团选自链烷酰基、苯甲酰基、苯乙酰基及取代的苯甲酰基和苯乙酰基、烷氧羰基(得到烷基碳酸酯)、二烷基氨基甲酰基和N-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲酰基(得到氨基甲酸酯)、二烷基氨基乙酰基和羧基乙酰基。

非体内可水解的酯可用作制备式(Ⅰ)化合物的中间体，因此它们构成了本发明的另一部分。

适宜的酰胺包括，例如N-C_1-6烷基酰胺和N，N-二(C_1-6烷基)酰胺，如N-甲基酰胺、N-乙基酰胺、N-丙基酰胺、N，N-二甲基酰胺、N-乙基-N-甲基酰胺或N，N-二乙基酰胺。

式(Ⅰ)化合物的实例示于下表Ⅰ至Ⅲ中。

表Ⅰ

表Ⅱ

其中*表示异构体混合物+表示Z异构体▲表示E异构体

表Ⅲ

式(Ⅰ)的某些化合物是新的，它们构成的本发明的另一部分。因此，本发明还提供上述定义的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或体内可水解酯，它是单核细胞化学引诱剂蛋白-1的抑制剂；条件是如果A是-(CH₂)₃-，X是CH₂，R²是羧基或其酯或酰胺，并且R³是氢，则R¹不是未取代的苯基。

新化合物的特别和优选的基团包括上面对药物组合物所述的那些。

式(Ⅰ)化合物的一些化合物可以非对映体形式存在和／或具有手性中心。应该理解本发明包括式(Ⅰ)化合物的所有这些光学异构体和非对映体及含有它们的药物组合物。

本发明还涉及式(Ⅰ)化合物的所有互变异构体形式和含有它们的药物组合物。

还应该理解的是某些式(Ⅰ)化合物可以溶剂化以及非溶剂化形式，例如水合形式存在。应该理解，本发明还包括所有这些溶剂化形式以及含有它们的药物组合物。

式(Ⅰ)化合物适宜地通过下列方法制备：将其中A、B、R²和R³如式(Ⅰ)中所定义的式(Ⅶ)化合物

与其中R¹和X如式(Ⅰ)中所定义并且Z是离去基团的式(Ⅷ)化合物反应；

R¹-X-Z

Ⅷ

并任选地进行一个或多个下列步骤：

(ⅰ)将基团R²转化为不同的此类基团；

(ⅱ)在基团A-B上引入取代基或改变其上的取代基；

(ⅲ)将基团R³转化为不同的此类基团。

适宜离去基团Z包括卤化物，例如氯化物、溴化物或碘化物以及甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。该反应宜在有机溶剂，如二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)或DCM中，在碱，如氢化钠、氢氧化钠、碳酸钾的存在下进行。该反应可任选在适宜相转移催化剂的存在下进行。正如本领域所理解的那样，碱和溶剂的选自某种程度上依赖于某些溶剂与某些碱相容性。例如氢化钠可优选与二甲基甲酰胺或四氢呋喃一起使用，而氢氧化钠优选与二氯甲烷和相转移催化剂一起使用。

该反应在中等温度下，例如O-50℃进行，方便地是在大约环境温度条件下进行。

式Ⅶ化合物中R²优选是酯基，其随后通过常规方法转化为酸或酰胺，或者转化为另一种酯或盐。例如，当X是SO₂并且R²是羧基的甲酯基时，它可通过与碘化锂在无水吡啶或DMF中反应转化为相应的羧酸。

式(Ⅶ)化合物是已知化合物，或它们可通过常规方法由已知化合物制备。

例如，式(Ⅶ)化合物可如下制备：将式(Ⅸ)化合物

其中R3如式(Ⅰ)中所定义，R²⁸是羧基酯，例如烷基酯并且R³⁰是在还原条件下可被除去的基团，例如-NH(C₆H₅)；与式(Ⅹ)的环酮反应

其中Q形成环烷基环，例如形成5-8元碳环。

该反应宜在有机溶剂，例如有机酸如乙酸和丙酸中，在碱如乙酸钠及还原剂如锌的存在下进行。

式(Ⅷ)、(Ⅸ)和(Ⅹ)化合物是已知化合物，或它们可通过常规方法由已知化合物制备。

或者，如果式(Ⅰ)中的A和B形成六元环，则该化合物可通过氢化相应的芳族化合物如适当取代的吲哚来制备。这类化合物是已知的，或它们可通过常规方法获得。氢化可例如在有机溶剂如乙酸中，在催化剂，如铂的存在下进行。

由A-B形成的环上的取代基可在上面概括的合成反应期间引入，或者根据所引入的特定取代基的性质采用各种本领域普通技术人员已知的方法引入。或者，可采用常规化学方法将一个取代基转变为不同的取代基。例如通过与式H₂N-OR⁷的肟反应氧代取代基可被=NOR⁷替代。或者，通过还原胺化，将氧代取代基转化为胺。通过与例如酰卤还原，胺可转化为酰胺。可运用Wittig反应引入烷基或取代的烷基取代基。对于本领域普通专业人员来说，其他可行的方法是显而易见的。

本文定义的某些中间体是新的，它们构成了本发明的另一个方面。

因此，另一方面，本发明提供本文所定义的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或体内可水解酯，它们通过治疗用于人类或动物体的治疗方法中。本发明的化合物尤其可用于治疗炎症的方法中。

另一方面，本发明提供一种对需要拮抗MCP-1介导作用的温血动物，如人类进行此种治疗的方法，该方法包括对所述动物施用有效量的式(Ⅰ)化合物或者其可药用盐或体内可水解酯。

本发明还提供作为药物使用的如本文定义的式(Ⅰ)化合物或者其可药用盐或体内可水解酯。

本发明的组合物可以呈适于口服给药形式(例如片剂、锭剂、硬胶囊或软胶囊、水性或油性悬浮液、乳剂、可分散粉末或颗粒、糖浆或酏剂)、局部给药形式(例如霜剂、软膏、凝胶、水溶液或油溶液、水悬浮液或油悬浮液)、吸入给药形式(如细粉或液体气雾剂)、吹入给药形式(例如细粉)或者非胃肠给药形式(用于静脉、皮下、肌内或肌内给药的无菌水溶液或油溶液，或者用于直肠给药的栓剂)。

本发明的组合物可通过本领域熟知的常规方法用常规药物赋形剂获得。因此口服使用的组合物可含有，例如一种或多种着色剂、甜味剂、芳香剂和／或防腐剂。

片剂的适宜可药用赋形剂包括，例如惰性稀释剂，如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙；制粒剂和崩解剂有，例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，如淀粉；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石；防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯；以及抗氧剂，如抗坏血酸。片剂可以是未包衣的或者进行包衣以改进其崩解性及随后胃肠道中活性成分的吸收，或者提高它们的稳定性或改善外观，在任何一种情况下，都是使用本领域熟知的常规包衣剂和方法。

口服组合物可以呈硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合；或者呈软明胶胶囊形式，其中活性成分与水或油，如花生油、液体石蜡或者橄榄油混合。

水悬浮液通常含有活性成分细粉与一种或多种悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄原胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂，例如卵磷脂或烯化氧与脂肪酸的缩合产物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇例如十七亚乙基氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxycetanol)的缩合产物、环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨醇一油酸酯、环氧乙烷与长链脂肪醇例如十七亚乙基氧基鲸蜡醇的缩合产物、环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨醇一油酸酯或者环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇酐衍生的部分酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯。水悬浮液也可含有一种或多种防腐剂(如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯)、抗氧剂(如抗坏血酸)、着色剂、芳香剂和／或甜味剂(如蔗糖、糖精或天冬甜素)。

油悬浮液可通过将活性成分悬浮在植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(如液体石蜡)中进行制备。油性悬浮液还可含有增稠剂，如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂(如上述的)和芳香剂以提供适口的口服制剂。这些组合物可通过加入抗氧剂，如抗坏血酸进行防腐。

适于通过加入水制备水悬浮液的可分散粉末和颗粒通常含有与活性成分同时存在的分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或润湿剂和悬浮剂可例举上面已经提及的那些。也可存在其他的赋形剂，如甜味剂、芳香剂和着色剂。

本发明的药物组合物还可呈水包油乳液形式。油相可以是植物油，如橄榄油或花生油；或者矿物油，如液体石蜡；或者它们的任意混合物。适宜的乳化剂是，例如天然存在的树胶，如阿拉伯胶或黄原胶；天然存在的磷脂，如大豆卵磷脂；由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或部分酯(如山梨醇酐一油酸酯)和上述部分酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯。乳液还可含有甜味剂、芳香剂和防腐剂。

糖浆和酏剂可用甜味剂，如甘油、丙二醇、山梨醇、天冬甜素或蔗糖配制，它还可含有缓和剂(demulcent)、防腐剂、芳香剂和／或着色剂。

药物组合物还可呈无菌注射水悬浮液或油悬浮液形式，它们可按照已知方法，用一种或多种适当的上面提及的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌注射剂还可以是无毒的可非胃肠用的稀释剂或乳剂的无菌注射溶液或悬浮液，如1，3-丁二醇的溶液。

栓剂可通过将活性成分与适宜的无刺激赋形剂混合制备，上述赋形剂在常温是固体，但在直肠温度是液体，因此可在直肠熔融并释放药物。适宜的赋形剂包括，例如椰子油和聚乙二醇。

局部制剂，如霜剂、软膏、凝胶以及水溶液或油溶液或者水悬浮液或油悬浮液通常可通过本领域熟知的常规方法将活性成分与常规可局部用的的载体或稀释剂混配得到。

吹入给药的组合物可以是含有平均直径为，例如30μ或更小的颗粒的细粉，该粉末本身仅含有活性成分或者用一种或多种可生理用载体如乳糖稀释。吹入粉末通常存留在胶囊中，胶囊中含例如供涡轮-吸入装置用的1-50毫克活性成分，这种吸入装置例如用于吸入本领域已知的药物色甘酸钠(sodium cromoglycate)。

吸入给药的组合物可以是常见的加压气溶胶形式，以含细粉固体或液滴的气溶胶形式配送活性成分。可使用常用的气溶胶抛射剂，如挥发性氟代烃或烃类，气溶胶装置是常规的，以配送计量量的活性成分。

有关制剂的其他资料，请读者参考《Comprehensive MedicinalChemistry》，Volume 5，Chapter 25．2(Corwin Hansch；Chairman ofEditorial Board)，Pergamon Press 1990。

与一种或多种赋形剂结合产生单剂的活性成分的量的变化取决于被治疗对象和特定的给药途径。例如给人口服的制剂通常含有，例如O．5毫克至2克的活性物质和适当方便量的赋形剂，赋形剂占组合物总重的约5-98％。剂量单位形式通常含有约1毫克至约500毫克的活性成分。有关给药途径与剂量方案的其他资料请参考《Comprehensive MedicinalChemistry》，Volume 5，Chapter 25．2(Corwin Hansch；Chairman ofEditorial Board)，Pergamon Press 1990。

根据熟知的医学规则，用于治疗或预防目的的式Ⅰ化合物剂量根据适应症的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及给药途径自然发生变化。如上所述，式Ⅰ化合物用于治疗仅由于或部分由于大鼠的法呢基化(farnesylation)引起的疾病或医学适应症。

在使用式Ⅰ化合物治疗或预防时，接受的每日剂量通常在例如O．5毫克至75毫克／千克体重，如果需要可分次给药。一般，非经胃肠给药时使用较低的剂量。例如，对于静脉给药，常用的剂量范围在例如O．5毫克至30毫克／千克体重。同样，对于吸入给药，使用的剂量范围在O．5毫克至25毫克／千克体重。但口服是优选的。

本发明通过下列实施例进一步说明，而不是限定于在下列实施例中。其中，除非另有说明，均采用下列通用方法。

N，N-二甲基甲酰胺(DMF)经4埃分子筛干燥。无水四氢呋喃(THF)来自Aldrich SURESEALTM瓶。除非另有说明，使用的其他市售试剂和溶剂没有进一步纯化。有机溶剂提取物经无水硫酸镁干燥。除非另有说明，如果合适，在Bruker WM200、WM250、WM300或WM400仪器上用Me₂SO-d₆与Me₄Si或CCl₃F作为内标记录¹H、¹³C和¹⁹F NMR。化学位移值以d(百万分之一，ppm)表示，峰的多重性表示如下：s，单峰；d，双蜂；dd，双重裂分的双峰；t，三峰；dt，双重裂分的三峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰。在VG 12-12四极、VG70-250SE、VG ZAB 2-SE或VG改进的AEI／Kratos MS9质谱仪上记录质谱。使用Merck预铺TLC板(硅胶60 F254，d=O．25mm)进行TLC分析。用硅胶(Merck Kieselgel：Art．9385)进行快速色谱。在Kofler block或布氏熔点仪上测定熔点，未进行校正。所有的温度均以摄氏度表示。

制备例1

2，3-二氧代-4，4，4-三氟丁酸乙酯-2-苯腙

在0℃，经15分钟将亚硝酸钠(2．57g)分批加到苯胺(3．22g)在浓盐酸(6．5ml)和水(10ml)的混合物中。在0℃下，将所得的溶液滴加到2，3-二氧代-4，4，4-三氟丁酸乙酯(6．31g)和乙酸钠(6g)在水(30ml)中的混合物中，沉淀出红色固体产物，过滤并真空干燥(7．15g，72％)。该腙粗产物无需纯化即可使用。

制备例2

3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氢环庚三烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯

在60℃下，经30分钟将2，3-二氧代丁酸乙酯-2-苯腙(20．9g)(T．D．Lash等，J．Org．Chem．1992，57，4809-4820)的乙酸(50ml)溶液滴加到搅拌下的乙酸钠(10g)和环庚酮(10g)的乙酸(100ml)溶液中。添加过程中，少量多次地加入锌粉(30g)。将该反应在80℃再搅拌1小时，然后倾入冰水(500g)中。过滤所得固体沉淀并在乙醇中重结晶，得到白色针状的产物(2．77g，14％)。

NMR d(CDCl₃) 1．38 (3H，t)，1．60-1．85(6H，m)，2．24(3H，s)，2．48(2H，t)，2．68(2H，t)，4．30(2H，q)，8．70(1H，bs)；M／z(+)222(MH⁺)，176．

制备例3

3-三氟甲基-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯

重复制备例2所述的方法，但用适宜的苯腙和环烷酮，以10％的产率得到标题化合物。

NMRd(CDCl₃) 1．37(3H，t)，1．7g(4H，m)，2．63(4H，m)，4．36(2H，q)，9．23(1H，bs)；M／z(-)260(M-H⁺)．

制备例4

4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯

在氢气氛和室温下，将吲哚-2-甲酸乙酯(0．5g)和氧化钯(Ⅳ)(0．1g)在乙酸(20ml)中搅拌16小时。然后将反应物滤过硅藻土并加入氢氧化钠水溶液(2N)碱化。将所得沉淀过滤并真空干燥，得到白色固体(0．17g，33％)。

NMR d(CDCl₃) 1．35(3H，t)，1．80(4H，m)，2．50(2H，t)，2．60(2H，t)，4．30(2H，q)，6．65(1H，d)，8．70(1H，bs)；M／z(+)194(MH⁺)．

制备例5

4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸甲酯

重复制备例4所述方法，但用适宜的吲哚-2-甲酸酯，以35％的产率得到标题化合物。

NMR d(CDCl₃) 1．77(4H，m)，2．50(2H，m)，2．60(2H，m)，3．80(3H，s)，6．65(1H，m)，8．70(1H，bs)；M／z(+)180(MH⁺)．

实施例1

1-(3，4-二氯苄基)-1，4，5，6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(表Ⅰ的化合物1)

将氢化钠(25mg，60％)加到环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(96mg)(T．Aubert et al．，J．Chem．Soc．Perkin Trans．1，1989，1369)的溶液中并将该反应物搅拌30分钟。加入3，4-二氯苄基溴(154mg)并再继续搅拌2小时。通过加入水使反应停止并用乙醚萃取。合并的有机萃取液经硫酸镁干燥并浓缩，残余物经柱色谱，用异己烷-5％乙酸乙酯作为洗脱剂纯化，得到白色结晶固体的标题化合物(0．15g，83％)

NMR d(DMSO) 1．18(3H，t)，2．30(1H，m)，2．53(2H，m)，4．10(2H，q)，5．40(2H，s)，6．67(1H，s)，6．92(1H，dd)，7，25(1H，s)，7．57(1H，d)；M／z(+)338(M⁺)．

实施例2

用适宜的吡咯和苄基卤化物或芳基磺酰氯重复实施例1所述的方法。得到下述的化合物。

实例例2a

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯(表Ⅱ的化合物6)

该化合物由3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯(T．Lash et al．，supra．)制备，产率为35％。

NMR d(CDCl₃) 1．34(3H，t)，2．12(2H，m)，2．48(2H，t)，2．67(5H，s+t)，4．25(2H，q)，5．52(2H，s)，6．79(1H，dd)，7．07(1H，s)，7．38(1H，d)；M／z(+)380(M⁺)．

实施例2b

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氢环庚三烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(表Ⅲ的化合物38)

以30％产率制备了该化合物。

NMR d(CDCl₃)1．28(3H，t)，1．60(4H，m)，1．80(2H，m)，2．27(3H，s)，2．52(4H，m)，4．22(2H，q)，5．55(2H，s)，6．74(1H，dd)，7．04(1H，d)，732(1H，d)；M／z(+)380 (M⁺)，219．该化合物的酯化将产生式(Ⅲ)中化合物39。

实施例2c

1-(3，4-二氯苄基)-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯(表Ⅱ的化合物8)

以63％的产率制备了该化合物。

NMR d(CDCl₃) 1．25(3H，t)，1．80(4H，m)，2．42(2H，m)，2．50(2H，m)，4．20(2H，q)，5．45(2H，s)，6．80(1H，m)，6．83(1H，s)， 7．08(1H，s)，7．35(1H，d)；M／z(+)352(M⁺)．

实施例2d

1-(3，4-二氯苯磺酰基)-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸甲酯(表Ⅱ的化合物10)

以19％产率制备了该化合物，M／z(+)387(M⁺)。

实施例3

1-(3，4-二氯苄基)-1，4，5，6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸(表Ⅰ的化合物2)

将氢氧化钠(3N，2ml)加到搅拌着的实施例1得到的(3，4-二氯苄基)环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(0．13g)的THF(5ml)和甲醇(5ml)溶液中。在室温持续搅拌16小时，真空浓缩，残余物溶于水。滴加乙酸使白色固体产物沉淀，将产物过滤并干燥(70mg，59％)。NMR d(DMSO) 2．30(2H，m)，2．55(4H，m)，5．44(2H，s)，6．63(1H，s)，6．96(1H，dd)，7．28(1H．d)，7．58(1H，d)；M／z(-)310(M⁺)，308．

C₁₅H₁₃Cl₂NO₂分析结果：实测值：C，57．8％；H，4．1％；N，4．4％；

理论值：C，58．1％；H，4．2％；N，4．5％。

实施例4

用适宜的吡咯-2-甲酸酯重复实施例3所述的方法。得到下述的化合物。

制备例4a

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸(表Ⅱ的化合物7)

用实施例2a的酯以46％的产率得到该化合物。

NMRd(DMSO) 1．98(2H，m)，2．34(2H，t)，2．50(3H，s)，2．69(2H，t)，5．54(2H，s)，6．87(1H，dd)，7．30(1H，d)，7．57(1H，d)；M／z(-)352(M⁺)，350，308，306，159，146．

制备例4b

1-(3，4-二氯苄基)-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸(表Ⅱ的化合物9)

由实施例2c的酯以72％的产率获得该化合物。

NMRd(DMSO)1．65(4H，m)，2．42(4H，m)，5．50(2H，s)，6．65(1H，s)，6．82(1H，m)，7．20(1H，s)，7．55(1H，d)，11．90(1H，bs)；M／z(-)324(M⁺)，322．C₁₆H₁₅Cl₂NO₂分析结果：实测值：C，59．1％；H，4．8％；N，4．2％；

理论值：C，59．3％；H，4．7％；N，4．3％。

实施例51-(3，4-二氯苯磺酰基)-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸(表Ⅱ的化合物11)

将实施例2d的1-(3，4-二氯苯磺酰基)-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸(66mg)和碘化锂(228mg)溶于吡啶(5ml)并加热回流5小时，冷却后真空浓缩。将残余物分配到2N盐酸和乙醚中。合并的有机萃取液经硫酸镁干燥，浓缩，残余物用乙醚研制，得到白色结晶固体的标题产物，将其过滤并干燥(18mg，28％)。

NMR d(DMSO)1．65(4H，m)，2．38(2H，m)，2．80(2H，m)，6．70(1H，s)，7．90(2H，m)，8．30(1H，s)；M／z(+)373(M-H⁺)．

实施例6

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲腈(表Ⅱ的化合物12)

将4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲腈(5．5g)(Estep，K．G．；Synthetic Communications，1995，25，507-514)在DMF(100ml)中与3，4-二氯苄基氯(5．86g)、碘化钾(cat．)和碳酸钾(5．5g)搅拌过夜直至反应完全。将该混合物倾入冰中并分配到水和二氯甲烷中。有机相用盐水洗涤，硫酸镁干燥并真空除去溶剂，得到浅黄色固体。用乙醚研制，得到白色固体的标题化合物(8．71g，91％)

NMR d(CDCl₃) 2．20(2H，dt)，2．50(2H，t)，2．78(2H，t)，5．20(2H，s)6．95(1H，dd)，7．20(2H，m)，7．45(1H，d)；M／z(+)321(MH⁺)，319.

实施例7

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸(表Ⅱ的化合物13)

将1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲腈(3．8g)在固体氢氧化钠(12．8g)的存在下在正丁醇(40ml)中加热回流3天。该反应用浓盐酸中和形成浅灰色沉淀。将沉淀物过滤、用水洗涤并真空干燥，得到浅灰色固体的标题化合物(3．38g，84％)。

NMR d(DMSO)， 2．00(2H，dt)，2．35(2H，t)， 2．70(2H，t)，5．60(2H，s)，6．90(1H，dd)，7．10(1H，s)，7．27(1H，d)，7．55(1H，d)；M／z(-)338(M⁺)，336．

实施例8

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯(表Ⅱ的化合物14)

将1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸(1．32g)和苄基溴(0．68g)在碳酸钾(0．48g)存在下在DMF(10ml)中搅拌18小时。真空除去DMF，残余物溶于乙酸乙酯(50ml)。有机溶液用2M盐水洗涤并经硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到近白色固体的标题化合物(1．63g，97％)。

NMRd(CDCl₃) 2．20(2H，dt)，2．50(2H，t)，2．70(2H，t)，5．21(2H，m)，5．55(2H，s)，6．80(1H，d)，7．10(1H，s)，7．35(6H，s)，7．50(1H，s)；M／z(+)430，428(M⁺)．

实施例9

1-(3，4-二氯苄基)-5-甲酰基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯(表Ⅱ的化合物15)

往苄醇(1．29g)的无水THF(20ml)溶液中加入氢化钠(0．48g)，搅拌该反应直至氢气不再冒出。加入1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯(1．28g)的THF溶液，然后加入甲酸苄基酯(1．62g)，将该反应再搅拌2小时。搅拌完后，将反应物倾入2M盐酸中，用乙酸乙酯萃取(2×100ml)。有机层经硫酸镁干燥并真空浓缩。减压蒸馏残留的苄醇得到橙色胶状物，通过柱色谱，用20％乙酸乙酯：己烷作为洗脱剂纯化，得到近白色固体的标题化合物(1．15g，84％)。

NMR d(CDCl₃) 2．60(2H，t)，2．70(2H，t)，5．20(2H，s)，5．55(2H，s)，6．75(1H，dd)，7．10(1H，s)7．20-7．40(8H，m)；M／z(-)456(M⁺)．

实施例10

5-重氮基-1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯(表Ⅱ的化合物16)

在室温下，将三乙胺(0．36ml)滴加到1-(3，4-二氯苄基)-5-甲酰基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯(0．5g)和对乙酰氨基苯磺酰叠氮化物(305mg)的溶液中。搅拌18小时后，得到棕色溶液。真空除去溶剂，得到棕色油。通过柱色谱，用异己烷：20％乙酸乙酯作为洗脱剂纯化，得到浅黄色固体的标题化合物(0．31g，62％)。

NMR d(CDCl₃) 2．80(2H，t)，3．05(2H，t)，5．13(2H，s)，5．57(2H，s)，6．76(1H，dd)，7．05(1H，s)，7．20-7．40(7H，m)；M／z(+)456，454(M⁺)．

实施例11

4-叔丁氧羰基-1-(3，4-二氯苄基)环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸苄基酯(表Ⅰ的化合物3)

将5-重氮基-1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯(0．3g)和叔丁醇(1ml)在180℃在三甲基吡啶(10ml)中加热30分钟后，冷却到室温，倾入乙醚中。有机层用2M盐酸(100ml)洗涤，经硫酸镁干燥并真空浓缩，得到橙色油状的标题化合物(0．32g，97％)。

NMR d(CDCl₃)1．45(9H，s)，2．45-2．80(4H，m)，3．78(1H，dd)，5．20(2H，d)，5．40(2H，d)，6．80(1H，dd)，6．95(1H，s)，7．10(1H，s)，7．30(6H，m)；M／z(+)502，500(M⁺)．

实施例12

4-羧基-1-(3，4-二氯苄基)环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸苄基酯(表Ⅰ的化合物4)

将4-叔丁氧羰基-1-(3，4-二氯苄基)环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸苄基酯(0．7g)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入TFA(3ml)。持续搅拌24小时后，真空除去溶剂得到浅色的油。经放置该油状物缓慢地固化，得到标题产物(0．61g，98％)。

NMRd(DMSO)2．40(4H，m)，3．70(1H，t)，5．10(2H，s)，5．40(2H，AB d)，6．70(1H，s)，6．90(1H，d)，7．30(6H，m)，7．50(1H，d)；M／z(-)444，442(M-H⁺)．

实施例13

1-(3，4-二氯苄基)环戊二烯并[b]吡咯-2，4-二甲酸(表Ⅰ的化合物5)

将4-羧基-1-(3，4-二氯苄基)环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸苄基酯(0．1g)溶于乙酸乙酯(5ml)中。加入钯／碳(5％Pd，10mg)并使该反应物在氢气压(1．1个大气压)下保持4小时直至反应完全。放出氢气，将所得溶液滤过硅藻土除去催化剂。真空浓缩反应物，得到粗产物，将其溶于尽可能少量的2M氢氧化钠中，用水稀释(1ml)，然后加入稀盐酸以沉淀。收集固体并干燥，得到浅乳白色固体的标题化合物(32mg，41％)。

NMR d(DMSO)2．40(4H，m)，3．70(1H，t)，5．40(2H，ABd)，6．68(1H，s)，6．95(1H，dd)，7．15(1H，s)，7．58(1H，d)；M／z(-)355，353(M-H⁺)．

实施例14

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-甲基肟(表Ⅱ的化合物17)

在室温下，将甲氧基胺盐酸盐(44mg)加到1-(3，4-二-氯苄基)-3-乙基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯(0．15g)和吡啶(0．2ml)在乙醇(10ml)中的混合物中，并将该反应物搅拌18小时。将反应物分配到2N盐酸和乙酸乙酯中。将合并的有机萃取液干燥并浓缩，得到透明胶状产物(0．13g，80％)。d(CDCl₃)1．25(3H，t)，1．86(2H，m)，2．5(2H，t)，2．62(3H，s)，2．7(2H，t)，3．92(3H，s)，4．24(2H，q)，5．48(2H，s)6．72(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．32(1H，d)；M／z(+)409(M⁺)．

实施例15

用适宜的羟胺和酮重复实施例14的方法。获得下列化合物。

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-苄基肟(表Ⅱ的化合物18)

产率为83％，

NMR d(CDCl₃)1．28(3H，t)，1．85(2H，m)，2．5(2H，t)，2．6(3H，s)，2．75(2H，t)，4．22(2H，q)，5．15(2H s)，5．45(2H，s)，6．72(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．28-7．44(6H，m)；M／z(+)485(M⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-羧甲基肟(表Ⅱ的化合物19)

NMR d(CDCl₃) 1．31(3H，t)，1．92(2H，m)，2．54(2H，t)，2．55(3H，s)，2．8(2H，t)，4．25(2H，q)，4．66(2H，s)，5．48(2H，s)，6．74(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．35(1H，d)；M／z(+)451(M⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯E-肟和

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯Z-肟(表Ⅱ的化合物20)

产率为22％(E-异构体)，

NMR d(CDCl₃)2．0(2H，m)，2．5(2H，t)，2．6(2H，t)，5．24(2H，s)，5．5(2H，s)，6．75(1H，dd)，7．06(1H，d)，7．35(6H，m)，7．91(1H，s)；M／z(-)441(M-H⁺)，产率为26％(Z-异构体)，

NMR d(CDCl₃)1．92(2H，m)，2．65(2H，t)，2．74(2H，t)，5．21(2H，s)，5．51(2H，s)，6．75(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．31(7H，m)，M／z(-)441(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-肟(表Ⅱ的化合物21)

产率为68％，

NMR d(CDCl₃)1．3(3H，t)，1．91(2H，m)，2．5(2H，t)，2．6(3H，s)，2．78(2H，t)，4．24(2H，q)，5．48(2H，s)，6．73(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．34(1H，d)；M／z(+)393(MH⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸苄基酯E-O-苄基肟(表Ⅱ的化合物22)

产率为58％，

NMR d(CDCl₃)1．91(2H，m)，2．52(2H，t)，2．72(2H，t)，5．15(2H，s)，5．25(2H，s)，5．5(2H，s)，6．74(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．28-7．42(11H，m)；M／z(+)533(MH⁺)．

实施例16

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-乙氧羰基丁基肟(表Ⅱ的化合物23)

将1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-肟(0．2g)的二甲基甲酰胺(2ml)溶液加到氢化钠(0．025g，60％油分散体)的二甲基甲酰胺(1ml)悬浮液中并将该反应物搅拌15分钟。将5-溴代戊酸乙酯(0．15ml)加到该反应物中并在室温下搅拌18小时。将反应物倾入水中，用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取液经干燥，真空浓缩，残余物经柱色谱，用异己烷到异己烷：20％乙酸乙酯作为洗脱剂进行纯化，得到透明胶状的产物(0．25g，94％)。

NMR d(CDCl₃)1．25(3H，t)，1．3(3H， t)，1．75(4H，m)，1．88(2H，m)，2．35(2H，t)，2．5(2H，t)，2．62(3H，s)，2．71(2H，t)，4．12(4H，m)，4．25(2H，q)，5．48(2H，s)，6．72(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．35(1H，d)；M／z(+)523(M⁺)．

实施例17

用适宜的烷基卤化物重复实施例16的方法。获得下列化合物。

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-4’-甲氧羰基苄基肟(表Ⅱ的化合物24)

产率为84％，

NMR d(CDCl₃)1．3(2H，t)，1．9(2H，m)，2．5(2H，t)，2．55(3H，s)，2．75(2H，t，)，3．91(3H，s)，4．25(2H，q)，5．2(2H，s)，5．48(2H，s)，6．72(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．31(1H，d)，7．48(2H，d)，8．04(2H，d)；M／z(+)543(M⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-3’-甲氧装基苄基肟(表Ⅱ的化合物25)

产率为41％，

NMR d(CDCl₃)1．28(3H，t)，1．88(2H，m)，2．5(2H，t)，2．58(3H，s)，2．72(2H，t)，3．92(3H，s)，4．22(2H，q)，5．18(2H，s)，5．45(2H，s)，6．71(1H，dd)，7．04(1H，d)，7．32(1H，d)，7．44(1H，dd)，7．62(1H，dd)，7．98(1H，dd)，8．1(1H，dd)；M／z(+)543(M⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-乙氧羰基丙基肟(表Ⅱ的化合物26)

产率为39％，

NMR d(CDCl₃)1．25(2H，t)，1．3(2H，t)，1．78(2H，m)，2．05(2H，m)，2．45(2H，t)，2．5(2H，t)，2．61(3H，s)，2．7(2H，t)，4．14(2H，q)，4．25(2H，q)5．48(2H，s)，6．74(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．34(1H，d)；M／z(+)509(M⁺)．

实施例18

用适宜的4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸酯重复实施例3的方法。获得下列化合物。

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-O-甲基肟(表Ⅱ的化合物27)

产率为48％，

NMR d(DMSO)1．75(2H，m)，2．48(3H，s)，2．51(2H，t)，2．56(2H，t)，3．76(3H，s)，5．5(2H，s)，6．84(1H，dd)，7．22(1H，d)，7．54(1H，d)；M／z(-)379M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-O-苄基肟(表Ⅱ的化合物28)

产率为49％，

NMR d(DMSO)1．75(2H，m)，2．48(3H，s)，2．5(2H，t)，2．61(2H，t)，5．05(2H，s)，5．5(2H，s)，6．8(1H，dd)，7．14(1H，d)，7．15-7．21(5H，m)，7．52(1H，d)；M／z(-)455(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-O-羧甲基肟(表Ⅱ的化合物29)

产率为78％，

NMR d(DMSO)1．72(2H，m)，2．41(3H，s)，2．43(2H，t)，2．6(2H，t)，4．41(2H，s)，5．55(2H，s)，6．82(1H，dd)，7．25(1H，dd)，7．52(1H，d)；M／z(-)423(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-肟(表Ⅱ的化合物30)

NMR d(DMSO)1．72(2H，m)，2．48(3H，s)，2．5(2H，t)，2．55(2H，t)，5．5(2H，s)，6．82(1H，dd)，7．21(1H，d)，7．53(1H，d)；M／z(-)365(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-O-羧甲基肟(表Ⅱ的化合物31)

产率为75％，

NMR d(DMSO)1．84(2H，m)，2．32(2H，t)，2．6(2H，t)，4．52(2H，s)，5．58(2H，s)，6．85(1H，dd)，7．28(1H，d)，7．55(1H，d)，7．6(1H，d)；M／z(-)409(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸E-O-羧甲基肟(表Ⅱ的化合物32)

产率为51％，

NMR d(DMSO)1．8(2H，m)，2．53(2H，t)，2．6(2H，t)，4．5(2H，s)，5．54(2H，s)，6．85(1H，dd)，6．95(1H，s)，7．28(1H，d)，7．55(1H，d)；M／z(-)409(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸E-O-苄基肟(表Ⅱ的化合物33)

产率为21％，

NMR d(DMSO)1．79(2H，m)，2．52(2H，t)，2．59(2H，t)，5．06(2H，s)，5．52(2H，s)，6．86，(1H，dd)，6．98(1H，s)，7．28(1H，d)，7．3-7．38(5H，m)，7．56(1H，d)；M／z(-)441(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-O-3’-羧苄基肟(表Ⅱ的化合物34)

产率为46％，

NMR d(DMSO)1．75(2H， m)，2．45(3H，s)，2．61(2H，t)，2．48(2H，t)，5．1(2H，s)，5．48(2H，s)，6．8(1H，dd)，7．24(1H，d)，7．45(1H，dd)，7．52(1H，d)，7．62(1H，dd)，7．85(1H，dd)，7．95(1H，bs)；M／z(-)499(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-O-羧丙基肟(表Ⅱ的化合35)产率为72％，

NMR d(DMSO)1．72(2H，m)，1．85(2H，m)，2．26(2H，t)，2．48(3H，s)，2．51(2H，t)，2．55(2H，t)，4．0(2H，t)，5．5(2H，s)，6．8(1H，dd)，7．24(1H，d)，7．55(1H，d)；M／z(-)451(M-H⁺)．

1-(3，4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-O-4’-羧苄基肟(表Ⅱ的化合物36)

产率为70％，

NMR d(DMSO)1．74(2H，m)，2．4(3H，s)，2．51(2H，t)，2．65(2H，t)，5．11(2H，s)，5．51(2H，s)，6．8(1H，dd)，7．24(1H，d)，7．46(2H，d)，7．51(1H，d)，7．9(2H，d)，12．56(2H，s)；M／z(-)499(M-H⁺)．

1-(3、4-二氯苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氢吲哚-2-甲酸Z-O-羧丁基肟(表Ⅱ的化合物37)

产率为55％，

NMR d(DMSO)1．5-1．68(4H，m)，1．75(2H，m)，2．22(2H，t)，2．48(3H，s)，2．50(2H，t)，2．58(2H，t)，4．0(2H，t)，5．5(2H，s)，6．82(1H，dd)，7．22(1H，d)，7．52(1H，d)；M／z(-)465(M-H⁺)．

实施例19

hMCP-1拮抗剂的生物试验

a)hMCP-1受体结合试验

ⅰ)hMCP-1受体的克隆和表达

根据公开的MCP-1受体序列(Charo et al．，1994，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，91，2752)通过THP-1细胞RNA的PCR用适宜的寡核苷酸引物克隆MCP-1受体B(CCR2B)cDNA。将所得的PCR产物克隆到载体PCR-ⅡTM(IN Vitrogen，San Diego，CA)。将无差错CCR2B cDNA作为Hind Ⅲ-Not Ⅰ片断亚克隆到真核生物表达载体pCDNA3(In Vitrogen)上分别产生pCDNA3／CC-CKR2A和pCDNA3／CCR2B。

将线性化pCDNA3／CCR2B DNA通过磷酸钙沉淀法(Wigler et al．，1979，Cell，16，777)转染到CHO-K1细胞。在细胞进行转染后24小时，通过加入1mg／ml的硫酸遗传霉素(G418，Gibco BRL)选择转染了的细胞。RNA的制备和RNA印记法按照先前所述进行(Needham et al．，1995，Prot．Espress．Purific．，6，134)。CHO-K1纯系7(CHO-CCR2B)被鉴别为最高效的MCP-1受体B表达子。

ⅱ)膜片断的制备

将CHO-CCR2B细胞在DMEM培养基中培养，DMEM中补加有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、1x非必需氨基酸、1x次黄嘌呤和胸腺嘧啶补充物及青霉素-链霉素(以50μg链霉素／ml加入，Gibco BRL)。如先前所述(Siciliano et al．，1990，J．Biol． Chem．，265，19658)，用细胞溶解／差速离心法制备膜片断。按照制造商的说明，通过BCA蛋白分析(Pierce，Rockford，Illinois)测定蛋白浓度。

ⅲ)测定

结合Bolton和Hunter的方法(Bolton et al．，1973，Biochem．J．，133，529；Amersham International plc)制备¹²⁵I MCP-1。用Ernst等(1994，J．Immunol．，152，3541)的方法进行平衡结合测定。概括地说，是将不同浓度的¹²⁵I-标记的MCP-1加到在100ml结合缓冲液中的10mg纯化的CHO-CCR2B细胞膜中。在室温培养1小时后，过滤结合反应混合物并通过培养板洗涤器(Packard Harvester Filtermate^TM 196)洗涤5次。将闪烁液(25μl， Microscint^TM-20，一种用于水性样品的高效液体闪烁计数合剂)加到各个孔中，将培养板盖上盖并计数(Packard TopCount^TM)。在不同浓度的未标记MCP-1的存在下，用100pM ¹²⁵I-标记的MCP-1如上进行冷竞争性研究。通过在反应物中包含200倍摩尔过量的未标记MCP-1测定非特异性结合。

用由CHO-CCR2B细胞制备的膜片断进行的配体结合研究显示出CCR2B以0．2pmoles／mg膜蛋白存在，而且选择性地与MCP-1结合并具有高度亲和性(IC₅₀=110pM，K_d=120pM)。与这些膜的结合完全可逆并在室温下45分钟后达到平衡，当使用100pM～500pM浓度的MCP-1时，MCP-1结合与CHO-CCR2B细胞膜浓度间呈线性关系。

用八个剂量点-反应曲线，将溶于DMSO(5μl)的一定浓度范围(0．1-200μM)的测试化合物与100pM标记的MCP-1进行两次竞争性测试，并计算IC₅₀浓度。

在本文描述的hMCP-1受体结合测定中，本发明测试化合物的IC₅₀值小于5μM。例如，实施例4a化合物的IC₅₀为0．4μM。

b)在THP-1细胞中MCP-1介导的钙流

将人单核细胞系THP-1在人工细胞培养基RPMI 1640中进行培养，该培养基中补加有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和青霉素-链霉素(50μg链霉素／毫升，Gibco BRL)。将THP-1细胞在HBSS(缺乏Ca²⁺和Mg²⁺)+1mg／ml BSA中进行洗涤并以3x10⁶个细胞／毫升的密度再悬浮于同样的缓冲液中。然后在37℃下，往细胞中加入1mM FURA-2／AM并保持30分钟，在HBSS中洗涤两次，并再以1x10⁶个细胞／毫升的密度悬浮。将THP-1细胞悬浮液(0．9ml)加到内有磁力搅拌棒的5毫升一次性比色杯中，该比色杯中还装有2．1毫升预温热的(37℃)含1mg／ml BSA、1mM MgCl₂和2mM CaCl₂的HBSS。将该比色杯放在荧光分光光度计(PerkinELmer，Norwalk，CT)中并在搅拌下与37℃预培养4分钟。记录70秒的荧光，在10秒钟后通过将hMCP-1加到比色杯中刺激细胞。通过在340nm和380nm交替激发测量[Ca²⁺]i，随后测定在510nm荧光发射的强度。计算在340nm和380nm激发后，发射荧光的强度比率，(R)，并根据下面的等式估测胞浆[Ca²⁺]：

[{Ca}^{2 +}] i = K_{d} \frac{(R - R_{\min})}{(R_{\max} - R)} (Sf 2 / Sb 2)

其中在37℃，FURA-2Ca²⁺复合物的K_d取为224nm。R_max是在加入10mM离子霉素后测定的最大荧光比率，R_min是在随后加入含5mM EGTA的不含Ca²⁺溶液后测定的最小比率，Sf2／Sb2是分别在R_mim和R_max下测定的在380nm激发下的荧光比率。

hMCP-1对THP-1的刺激以特异性和剂量依赖方式引发了[Ca²⁺]i的快速的、暂时性升高。剂量反应曲线表明大约的ED₅₀值为2nm。通过在配体加入前10秒钟将它们加到细胞悬浮液中，分析溶于DMSO(10μl)的测试化合物对钙释放的抑制并测定[Ca²⁺]i暂时性升高的降低。通过用测试化合物替代hMCP-1，还测定了它们不具有激动作用。

c)hMCP-1介导的趋化性和RANTES分析

用人单核细胞系THP-1或混合有单核细胞的外周血进行体外趋化性分析，所述外周血由新鲜人血液并通过红细胞沉淀及随后在9．6％(w／v)甲泛影酸钠和5．6％(w／v)多糖的存在下进行密度梯度离心纯化得到的，密度为1．077g／ml(Lymphoprep^TM Nycomed)。通过Coulter计数法直接枚数迁移通过聚碳酸酯膜的细胞或者用比色存活力分析测定通过线粒体呼吸链裂解的四唑鎓盐间接地枚数迁移通过聚碳酸酯膜的细胞(Scudiero D．A．et al．，1988，Cancer Res．，48，4827-4833)。

按照制造商的说明，将化学引诱剂加到96孔微滴板中，所述微滴板已形成了安有无PVP的5μm孔径聚碳酸酯粘着性框制滤膜(NeuroProbe MB系列产品，Cabin John，MD 20818，USA)的趋化性小室的下部孔。化学引诱剂用人工细胞培养基RPMI 1640(Gibco)或补加有2mM谷氨酰胺和0．5％BSA的相同培养基，或者用含Ca²⁺和Mg²⁺但不含酚红加0．1％BSA的HBSS(Gibco)稀释。每种稀释液都在真空下脱气30分钟后，将其(400μl)放置到小室的下部孔中，将THP-1细胞(在100μl RPMI 1640+0．5％BSA中的5x10⁵个细胞)在小室的各上部孔中培养。为抑制趋化性，各种化学活素引诱剂(MCP-1为1nM，RANTES为2nM)在测定前应保持在恒定的亚最高浓度，然后与溶于DMSO(DMSO的终浓度小于0．05％v／v)的不同浓度的试验化合物一起加到下部孔中。将小室在37℃和5％CO2下保温2小时。从上部孔中取出培养基，在打开孔之前用200微升生理盐水进行冲洗，擦干膜表面并于600g下将96孔板离心5分钟收获细胞。吸出上清液(150微升)，将10微升细胞增殖试剂，WST-1，{4-[3-(4-碘苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-5-四唑鎓基(tetrazolio)]-1，3-苯基二磺酸酯}与电子偶联试剂(Biehringer Mannheim，Cat．no．1644807)一起加回到各个孔中。将平板在37℃保温3小时并在平板阅读器上读取可溶性甲瓒产物在450nm处的吸收。将数据输入电子表格，校正在没有化学引诱剂存在下的任何随机性迁移，计算平均吸收值、均值的标准偏差和显著性检验。hMCP-1诱发的浓度依赖于细胞迁移和特征性两相反应，最大为0．5～1．0nm。

在上述分析的另一种形式中，可使用荧光标记的细胞协助终点的检测。在这种情况下，通过在5mM Calcein AM(甘氨酸，N，N’-[[3’，6’-二(乙酰氧基)-3-氧代螺[异苯并呋喃-1(3H)，9’-[9H]呫吨]-2’，7’-二基]二(亚甲基)二[N-[2-[(乙酰氧基)甲氧基]-2-氧代乙基]]-二[(乙酰氧基)甲基]酯；Molecular Probs)的存在下在暗处保温45分钟将使所用的THP-1细胞标记上荧光。通过离心收集细胞并再悬浮于含Ca²⁺和Mg²⁺及0．1％BSA的HBSS(不含酚红)中．将50毫升(2×10⁵个细胞)细胞悬浮液加到上述的各孔上的滤膜上，将各孔在37℃和5％CO₂下保温2小时。保温结束时，用磷酸缓冲盐水洗去滤膜上表面的细胞，从板上取下滤膜，通过在485nm激发的、发射波长为538nm的荧光(fmax，Molecular Devices)估测吸附在滤膜下侧或下部孔中的细胞数．将数据输入电子表格，校正在没有化学引诱剂存在下的任何随机性迁移，计算平均荧光值、均值的标准偏差、百分抑制和测试化合物的IC₅₀及显著性检验。

在本发明试验化合物的有效剂量下，未观测到生理不可接受的毒性。

实施例19

药物组合物

下列实施例说明本发明的人类治疗或预防用的药剂形式，但不是将其限定为本文所述的药剂形式(活性成分被成为“化合物Ⅹ”)：

(a)

片Ⅰ	毫克／片
片Ⅰ	毫克／片	化合物Ⅹ	100
乳糖Ph．Eur	182．75	化合物Ⅹ	100
乳糖Ph．Eur	182．75	交联羧甲基纤维素钠	12．0
玉米淀粉糊(5％w／v的糊)	2．25	交联羧甲基纤维素钠	12．0
玉米淀粉糊(5％w／v的糊)	2．25	硬脂酸镁	3．0

(b)

片Ⅱ	毫克／片
片Ⅱ	毫克／片	化合物Ⅹ	50
乳糖Ph．Eur	223．75	化合物Ⅹ	50
乳糖Ph．Eur	223．75	交联羧甲基纤维素钠	6．0
玉米淀粉	15．0	交联羧甲基纤维素钠	6．0
玉米淀粉	15．0	聚乙烯吡咯烷酮(5％w／v的糊)	2．25
硬脂酸镁	3．0	聚乙烯吡咯烷酮(5％w／v的糊)	2．25

(c)

片Ⅲ	毫克／片
片Ⅲ	毫克／片	化合物Ⅹ	1．0
乳糖Ph．Eur	93．25	化合物Ⅹ	1．0
乳糖Ph．Eur	93．25	交联羧甲基纤维素钠	4．0
玉米淀粉糊(5％w／v的糊)	0．75	交联羧甲基纤维素钠	4．0
玉米淀粉糊(5％w／v的糊)	0．75	硬脂酸镁	1．0

(d)

胶囊	毫克／枚
胶囊	毫克／枚	化合物Ⅹ	10．0
乳糖Ph．Eur	488．5	化合物Ⅹ	10．0
乳糖Ph．Eur	488．5	镁	1．5

(e)

注射剂Ⅰ	50毫克／毫升
注射剂Ⅰ	50毫克／毫升	化合物Ⅹ	5．0％w／v
1M氢氧化钠溶液	15．0％v／v	化合物Ⅹ	5．0％w／v
1M氢氧化钠溶液	15．0％v／v	0．1M盐酸	调至pH 7．6
聚乙二醇400	4．5％w／v	0．1M盐酸	调至pH 7．6
聚乙二醇400	4．5％w／v	注射用水	至100％

(f)

注射剂Ⅱ	(10毫克／毫升)
注射剂Ⅱ	(10毫克／毫升)	化合物Ⅹ	1．0％w／v
磷酸钠BP	3．6％w／v	化合物Ⅹ	1．0％w／v
磷酸钠BP	3．6％w／v	O．1M氢氧化钠溶液	15．0％v／v
注射用水	至100％	O．1M氢氧化钠溶液	15．0％v／v

(g)

注射剂Ⅲ	(1毫克／毫升，缓冲到pH 6)
注射剂Ⅲ	(1毫克／毫升，缓冲到pH 6)	化合物Ⅹ	0．1％w／v
磷酸钠BP	2．26％w／v	化合物Ⅹ	0．1％w／v
磷酸钠BP	2．26％w／v	柠檬酸	0．38％w／v
聚乙二醇400	3．5％w／v	柠檬酸	0．38％w／v
聚乙二醇400	3．5％w／v	注射用水	至100％

(h)

气雾剂Ⅰ	毫克／毫升
气雾剂Ⅰ	毫克／毫升	化合物Ⅹ	10．0
山梨醇酐三油酸酯	13．5	化合物Ⅹ	10．0
山梨醇酐三油酸酯	13．5	三氯一氟甲烷	910．0
二氯二氟甲烷	490．0	三氯一氟甲烷	910．0

(i)

气雾剂Ⅱ	毫克／毫升
气雾剂Ⅱ	毫克／毫升	化合物Ⅹ	0．2
山梨醇酐三油酸酯	0．27	化合物Ⅹ	0．2
山梨醇酐三油酸酯	0．27	三氯一氟甲烷	70．0
二氯二氟甲烷	280．0	三氯一氟甲烷	70．0
二氯二氟甲烷	280．0	二氯四氟乙烷	1094．0

(j)

气雾剂Ⅲ	毫克／毫升
气雾剂Ⅲ	毫克／毫升	化合物Ⅹ	2．5
山梨醇酐三油酸酯	3．38	化合物Ⅹ	2．5
山梨醇酐三油酸酯	3．38	三氯一氟甲烷	67．5
二氯二氟甲烷	1086．0	三氯一氟甲烷	67．5
二氯二氟甲烷	1086．0	二氯四氟乙烷	191．6

(k)

气雾剂Ⅳ	毫克／毫升
气雾剂Ⅳ	毫克／毫升	化合物Ⅹ	2．5
大豆卵磷脂	2．7	化合物Ⅹ	2．5
大豆卵磷脂	2．7	三氯一氟甲烷	67．5
二氯二氟甲烷	1086．0	三氯一氟甲烷	67．5
二氯二氟甲烷	1086．0	二氯四氟乙烷	191．6

(l)

软膏	毫升
软膏	毫升	化合物Ⅹ	40 mg
乙醇	300μl	化合物Ⅹ	40 mg
乙醇	300μl	水	300μl
1-月桂基氮杂环庚烷-2-酮	50μl	水	300μl
1-月桂基氮杂环庚烷-2-酮	50μl	丙二醇	至1 ml

注：上面制剂中的化合物Ⅹ可包括实施例1-18中举例的化合物，例如实施例3、4、5、13和18的化合物．上面的制剂可通过制药领域的常规方法获得，片(a)-(c)可以通过常规手段包覆肠溶衣，例如包覆乙酸苯二甲酸纤维素．气雾剂(h)-(k)可结合普通的计量剂量的喷雾器进行使用，悬浮剂山梨醇酐三油酸酯和大豆卵磷脂可被其它悬浮剂替代，例如山梨醇酐一油酸酯、山梨醇酐倍半油酸酯、聚山梨醇酯80、聚甘油油酸酯或油酸。

Claims

1．一种药物组合物，它含有式(Ⅰ)化合物

或其可药用的盐、酯或酰胺和可药用载体，其中式(Ⅰ)化合物是单核细胞化学引诱剂蛋白-1的抑制剂；其中

X是CH₂或SO₂；

R¹是可任选取代的芳基或杂芳基；

其中R⁴选自氢、烷基、芳基、氰基、羟基、-SO₂R⁹，其中R⁹是烷基、芳基、杂芳基或者卤代烷基，或者R⁴是基团-(CHR¹⁰)_r-COOH，其中r是1-3的整数并且各个R¹⁰基团独立地选自氢或烷基；R⁵是氢，烷基，可任选取代的芳基例如可任选取代的苯基或可任选取代的杂芳基例如5或6元杂芳基，或者基团COR⁶，其中R⁶是氢、烷基、芳基、杂芳基或卤代烷基；R⁷和R⁸独立地选自氢或烷基，尤其是C_1-4烷基；并且

2．根据权利要求1的组合物，其中式(Ⅰ)的化合物是式(Ⅲ)的化合物

其中R¹、R²、R³和X如权利要求1中所定义，Y是基团(CR¹⁸R¹⁹)_s，R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷及各个R¹⁸和R¹⁹独立地选自氢、烷基、环烷基、链烯基、环烯基、炔基、环炔基或官能团，并且s是1-4的整数。

3．根据权利要求2的组合物，其中式(Ⅰ)化合物中R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷及各个R¹⁸和R¹⁹独立地选自氢；三氟甲基；可任选被芳基、羧基或其酰胺衍生物取代的C_1-4烷基；卤素；羟基；C_1-4烷氧基；C_{1- 4}链烷酰基；C_1-4链烷酰氧基；氨基；氰基；C_1-4烷基氨基；二(C_1-4烷基)氨基；C_1-4链烷酰氨基；硝基；氨基甲酰基；C_1-4烷氧羰基；巯基；C_1-4烷基硫基；C_1-4烷基亚磺酰基；C_1-4烷基磺酰基；磺酰氨基；烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、氨基甲酰基C_1-4烷基；N-(C_1-4烷基)氨基甲酰基C_1-4烷基；N-(C_1-4烷基)2氨基甲酰基C_1-4烷基；羟基C_1-4烷基；C_1-4烷氧基C_1-4烷基；吗啉代；硫代吗啉代；氧硫代吗啉代；吡咯烷基；羧基C_1-4烷基氨基；R²⁰；NHR²¹和-OR²¹，其中R²⁰和R²¹独立地选自可任选取代的苯基或可任选取代的5或6元杂芳环；或者R¹⁴和R¹⁵、R¹⁶和R¹⁷，和／或R¹⁸和R¹⁹一起形成氧代基团或者=NOR²²基团，其中R²²是氢或可任选取代的烃基；条件是与同一个碳原子相连的R¹⁴和R¹⁵，或者R¹⁶和R¹⁷或R¹⁸和R¹⁹两个不都是羟基、C_1-4烷氧基、氨基、氰基、硝基或巯基。

4．根据前述任一项权利要求的组合物，其中X是CH₂。

5．根据前述任一项权利要求的组合物，其中R¹是可任选取代的苯基、萘基、呋喃基或噻吩基。

6．根据前述任一项权利要求的组合物，其中R²是羧基或者其可药用盐或酯。

7．根据权利要求2的组合物，其中的式(Ⅰ)化合物包括式(Ⅲ)的化合物，其中R²是羧基，X和R¹如权利要求1中所定义，R³是氢或C_{1 -4}烷基，s如权利要求2中所定义，R¹⁴和R¹⁵选自氢、=O、=NOH、=NOR*，其中R*是甲基、苄基、羧基苄基、甲氧羰基苄基、3-(羧基)丙基或其酯例如乙酯、4-羧基丁基或其酯如乙酯以及羧甲基，并且R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸和R¹⁹都是氢；或者其可药用盐或体内可水解的酯。

8．用于治疗炎性疾病的如权利要求1中定义的式(Ⅰ)化合物。

9．如权利要求1中定义的式(Ⅰ)化合物，或者其可药用盐或体内可水解酯，条件是其中A是-(CH₂)₃-，X是CH₂，R²是羧基或其酯或酰胺，并且R³是氢，R¹不是未取代的苯基。

10．一种制备权利要求9的化合物的方法，该方法包括将其中A、B、R²和R³如权利要求1中所定义的式(Ⅶ)化合物

与其中R¹和X如权利要求1中所定义并且Z是离去基团的式(Ⅷ)化合物反应；R¹-X-ZⅧ并任选地进行一个或多个下列步骤：(ⅰ)将基团R²转化为不同的此类基团；(ⅱ)在基团A-B上引入取代基或改变其上的取代基；(ⅲ)将基团R³转化为不同的此类基团。