CN1290510C - 一种含人参总皂苷、黄芪总皂苷的药物组合物及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含人参总皂苷、黄芪总皂苷的药物组合物及其制备和应用，其特点在于从中药人参、黄芪中得到的有效部位人参总皂苷、黄芪总皂苷与药用辅料组成，制备成具有治疗心脑血管疾病作用的注射制剂；药理实验结果表明，本发明的药物组合物制剂，对气虚型心脑血管疾病具有更好的药理作用。
Description
技术领域
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种含人参总皂苷、黄芪总皂苷的药物组合物及其制备和应用。
背景技术
中药组方中，性能功效相类似的药物配伍使用，可增强疗效，这是中医治疗疾病时选药组方中的一个重要内容“相须”。
中药复方的确定，是在分析病机的基础上，确定治法，在治法的的指导下组成符合病情需要的方剂，方剂是由药物组成，但它不是随意使用中药的乌合之众，而是以治法为依据，选择适宜的药物、适宜的药物剂量，在中医理论指导下，组合而成的，治法是方剂的理论依据，方剂是治法的具体体现，因此，方剂是治法，治法既是方剂，二者不可分割。
人参为五加科人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，性甘、微苦，平，归脾、肺、心经，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神的功效，人参含有人参总皂苷，现代药理研究表明，人参总皂苷对大鼠心肌细胞钙通道阻滞作用(基础医学与临床，1994，02)、对大鼠心肌作用的单钙通道分析及ESR谱研究(基础医学与临床，1994，04)、人参总皂苷对心肌缺血再灌犬CO、TPVR及血清NE含量的影响(白求恩医科大学学报1995 05)、人参总皂苷对沙土鼠急性脑缺血-再灌注损伤的保护作用(中国药理学通报、1996、06)、人参总皂苷对兔缺血再灌注损伤心脏血流动力学的影响(中国中医药科技200403)等药理作用。黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜夹黄芪的干燥根，其味甘，性微温，具有益气补虚之功效，可生用，亦可炙用，生用能固表，并能排毒、抗疮生肌；炙用能益气补中。其皮可利尿逐水湿，且持续时间较长。黄芪还具有增强免疫系统，抵御疾病、增强体质，抗氧化延缓衰老，改善心功能状态，抗病毒，抗癌等功能，其药效显著，历史悠久，应用广泛，是多种中草药的有效成分之一。有研究表明，用黄芪治疗病毒性心肌炎，其效果明显优于一般治疗。近代药理研究证明，黄芪皂苷是黄芪的主要成分之一，药理作用广泛，黄芪总皂苷对急梗犬有改善心肌收缩功能，缩小心肌梗塞面积，减轻心肌损伤的作用，黄芪总皂苷对垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血有明显的保护作用，能明显对抗BaCl2诱发的大鼠心律失常和CHCL3诱发的小鼠室颤，能提高血小板粘附率，减慢心率。
查阅专利文献，未检索到以人参、黄芪进行组方制备的中药注射制剂。
发明内容
基于上述原因，本发明在中医药理论指导下，结合临床实践经验，以中药黄芪、人参进行组方，进行提取分离纯化得到皂苷类有效部位有效部位，加入药用辅料分别制备成治疗心脑血管疾病的注射制剂，药理实验结果表明，本发明各组制剂具有更好的药理作用。
本发明是通过以下方案实现的.
一.工艺制法
(1)本发明使用的原料药材为：
黄芪2-4重量份，人参1-3重量份；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取3-5次，每次2-4小时，合并提取液，提取液用30％-50％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用60％-70％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上大孔吸附树脂柱，用6-10倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用3-6倍柱体积的50％-80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(4)制剂的制备：
水针剂的制备：取人参总皂苷40-120重量份、黄芪总皂苷70-140重量份，用注射用水溶解，用葡甲胺调PH值5.5-6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂；
输液剂的制备：取人参总皂苷40-120重量份、黄芪总皂苷70-140重量份，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调PH值5.5-6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂；
粉针剂的制备：取人参总皂苷40-120重量份、黄芪总皂苷70-110重量份，赋形剂240-390重量份，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂；
二.检测分析
1.人参总皂苷的检测分析
照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；乙腈0.05％磷酸溶液(19∶81)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rb1记峰计算，应不低于4000。
对照品溶液的制备：精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的人参皂苷Rb15mg，置25ml量瓶中，加乙腈∶水(19∶81)至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加乙腈∶水(19∶81)稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本发明制剂用甲醇提取，提取液回收甲醇至尽，干燥，精密称定残留物10mg，用流动相定容在25ml容量瓶中，作为供试品溶液。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，测定，经过计算，结果见表1。
2.黄芪总皂苷检测分析
按照《中华人民共和国药典》2000年版一部249页黄芪的【含量测定】进行检测分析，经过计算得到黄芪总皂苷(以黄芪甲苷计)的含量，见表1：
表1 制剂中有效成分含量比较
| 组别 | 人参总皂苷(以人参皂苷Rb1计，mg/瓶) | 黄芪总皂苷(以黄芪甲苷计，mg/瓶) |
| 本发明水针剂本发明输液剂 | 120.36118.71 | 101.33102.57 |
| 本发明粉针剂 | 117.54 | 99.85 |
三.药理实施例
实施例1
对病毒性心肌炎小鼠心肌损伤影响
实验动物：4周龄雄性纯种BALB/c小鼠。(由沈阳药科大学中药药理教研室根据文献造成气虚模型)
实验病毒：柯萨奇B3亲心肌病毒株(CVB3m)病毒原液效价，50％组织感染率(TCID)为10-6。
实验药物：本发明各组制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
市售黄芪注射液(北京白塔寺医药批发公司购买，正大青春宝药业有限公司生产)
生理盐水
实验方法：气虚型小鼠随机分成5组。模型组(感染加生理盐水)，15只；本发明的水针针剂组(感染加本发明的水针针剂)，15只；本发明的粉针剂组(感染加本发明的粉针剂)，15只；本发明的输液制剂组(感染加本发明的大输液制剂)，15只；对照组，市售黄芪注射液组(感染加市售黄芪注射液)15只。各组分别于实验当天每鼠腹腔注射0.1ml，2×104TCID 50的CVB3m；各组小鼠均连续7天腹腔注射，给药量16mg有效部位/kg，每天一次，为统计小鼠死亡率见表2，于实验第8天，将活着小鼠处死，取心脏中下1/3处的部分心肌，用10％福尔马林固定检测计算病理组织学改变见表3
表2 各组制剂的死亡率的比较
| 组别 | 动物数(只) | 死亡数(只) | 死亡率(％) |
| 模型组(感染加生理盐水)市售黄芪注射液组(感染加市售黄芪注射液)本发明的水针针剂组本发明的输液制剂组本发明的粉针剂组 | 1515151515 | 108545 | 66.753.333.326.733.3 |
表3 各组制剂对心肌病理改变的比较
| 组别 | 心肌坏死率 | 炎性浸润 |
| 模型组(感染加生理盐水)市售黄芪注射液组(感染加市售黄芪注射液)本发明的水针针剂组本发明的输液制剂组本发明的粉针剂组 | 3.15％2.11％*1.75％**1.70％**1.71％** | 3.36％1.85％*1.50％**1.45％**1.44％** |
注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
实施例2
对气虚型狗心肌缺血保护作用
实验动物：Beagle狗，体重7.5-10kg。(由沈阳药科大学中药药理教研室根据文献造成气虚模型)
实验药物：本发明各组制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
黄芪皂苷注射液(山西中医研究院提供)
生理盐水
实验方法：取实验狗，分为生理盐水组、黄芪皂苷注射液组、本发明水针剂组、本发明输液组、本发明粉针剂组，给药组分别在狗前肢皮下头静脉给药，给药量每次4.0mg有效部位/kg，生理盐水组等容不等量，每天给药1次，连续给药3天，给药第3天后用戊巴比妥钠25mg/kg静脉麻醉，气管插管，接人工呼吸机加以正压呼吸，从左侧第五肋开胸，剪开心包，暴露心脏，将心包切开缘缝于胸壁，在左冠状动脉前降支分二期结扎，并缓慢iv利多卡因8mg/kg以防结扎前可能引起的心室颤动，随后缝合心包及胸壁。心梗后24h，狗经戊巴比妥钠麻醉后处死，迅速取出心脏，切除大血管和脂肪组织，核对前降支结扎点的位置，称全心重，然后切除右心室和左右心房，留下室中隔及左心房，称得左心室重，从心尖和开始与前降支垂直方向将左心室切成2-3mm厚的肌片，浸于硝基四唑蓝溶液(NBT)中染色30min，剪下缺血区心肌组织称重，计算心肌梗塞范围，即：心梗范围＝缺血区重/左心室重×100％，结果见表4。
表4 对气虚型狗心室梗塞范围的影响
| 组别 | 全心重(g) | 左室重(g) | 缺血区重(g) | 心梗范围(％) |
| 生理盐水组黄芪皂苷注射液本发明水针剂组本发明输液组本发明粉针剂组 | 68.47±7.6267.54±8.2665.17±7.6968.22±6.2567.71±7.68 | 44.31±5.2844.19±4.0642.06±5.4144.31±4.5843.82±4.26 | 11.39±0.774.3 8±0.622.21±0.232.30±0.462.20±0.24 | 25.71±1.389.91±0.84*5.25±0.24**5.19±0.19**5.03±0.19** |
注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
实施例3
对气虚型大鼠急性脑缺血的保护作用
实验动物：SD大鼠，体重(350±47)，雌雄不分。
实验药物：本发明各组制剂(皂苷类有效部位制备而成，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
黄芪皂苷注射液(山西中医研究院提供)
生理盐水
实验方法：取大鼠分为分为生理盐水组、黄芪皂苷注射液组、本发明水针剂组、本发明输液组、本发明粉针剂组，给药组分别在腹腔给药，给药量每次4.0mg有效部位/kg，生理盐水组等容不等量，给药2小时开始实验。
急性不完全性脑缺血模型：给药后的大鼠戊巴比妥钠(40mg/kg)ip麻醉，颈部正中切口，气管插管，分离两侧颈总动脉，双重结扎并剪断，于脑缺血后3h、6h检测EEG的变化。6h后快速断头取脑，以检测脑含水量及组织形态学改变。结果见表5：
EEG的改变：根据文献缺血期EEG的改变按其幅度下降程度分为4级，I级：无变化，幅度为原水平的75％以上；II级：轻度抑制，为原水平的50％～75％；III级：中度抑制，为原水平的25％～50％；IV级：严重抑制，变平坦至原水平的25％。。
表5 对气虚型大鼠急性脑缺血的保护作用
| 组别 | 3h后EEG的改变级 | 6h后EEG的改变级 | 缺血侧脑半球湿重 | 缺血侧脑半球干重 | 脑含水量％ |
| 别 | 别 | g | g | ||
| 生理盐水组血塞通注射液本发明水针剂组本发明输液组本发明粉针剂组 | IVIIIII | IVIIIII | 0.81±0.060.78±0.030.83±0.040.71±0.030.75±0.04 | 0.12±0.010.19±0.020.29±0.040.24±0.020.25±0.03 | 85.19±0.1774.68±0.26*65.26±0.34**66.54±0.19**66.67±0.27** |
注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结论：通过以上药理实验表明，本发明各组制剂对气虚型心脑血管疾病具有更好的药理作用。
二.制备实施例
实施例1
(1)本发明使用的原料药材为：
黄芪2000克，人参1000克；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取3次，每次2小时，合并提取液，提取液用30％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用60％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上NKA型大孔吸附树脂柱，用6倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用3倍柱体积的50％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(4)制剂的制备：水针剂的制备：取人参总皂苷40克、黄芪总皂苷70克，用注射用水溶解，用葡甲胺调PH值5.5-6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂1000瓶；
输液剂的制备：取人参总皂苷40克、黄芪总皂苷70克，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调PH值5.5-6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂1000瓶；
粉针剂的制备：取人参总皂苷40克、黄芪总皂苷70克，赋形剂蔗糖390克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂1000瓶；
实施例2
(1)本发明使用的原料药材为：
黄芪4000可，人参3000克；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取5次，每次4小时，合并提取液，提取液用50％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用670％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上AB-8型大孔吸附树脂柱，用10倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用6倍柱体积的80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(4)制剂的制备：
水针剂的制备：取人参总皂苷120克、黄芪总皂苷140克，用注射用水溶解，用葡甲胺调PH值6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂1000瓶；
输液剂的制备：取人参总皂苷120克、黄芪总皂苷140克，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调PH值6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂1000瓶；
粉针剂的制备：取人参总皂苷120克、黄芪总皂苷140克，赋形剂乳糖240克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂1000瓶；
实施例3
(1)本发明使用的原料药材为：
黄芪3000克，人参2000克；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取4次，每次3小时，合并提取液，提取液用40％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用65％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上D101型大孔吸附树脂柱，用8倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用4倍柱体积的70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(4)制剂的制备：
水针剂的制备：取人参总皂苷86克、黄芪总皂苷117.2克，用注射用水溶解，用葡甲胺调PH值6.0，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂1000瓶；
输液剂的制备：取人参总皂苷86克、黄芪总皂苷117.2克，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调PH值6.0，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂1000瓶；
粉针剂的制备：取人参总皂苷86克、黄芪总皂苷117.2克，赋形剂甘露醇296.8克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂1000瓶；
实施例4
(1)本发明使用的原料药材为：
黄芪2500克，人参1500克；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取3次，每次4小时，合并提取液，提取液用35％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用70％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上NKA型大孔吸附树脂柱，用7倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用5倍柱体积的55％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(3)制剂的制备：
水针剂的制备：取人参总皂苷62.1克、黄芪总皂苷86.1克，用注射用水溶解，用葡甲胺调PH值6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂1000瓶；
输液剂的制备：取人参总皂苷62.1克、黄芪总皂苷86.1克，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调PH值6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂1000瓶；
粉针剂的制备：取人参总皂苷62.1克、黄芪总皂苷86.1克，赋形剂甘露醇、蔗糖351.8克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂1000瓶；
实施例5
(1)本发明使用的原料药材为：
黄芪3500克，人参2500克；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取5次，每次2小时，合并提取液，提取液用45％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用70％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上D101型大孔吸附树脂柱，用9倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用4倍柱体积的75％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(4)制剂的制备：
水针剂的制备：取人参总皂苷99.6克、黄芪总皂苷122.9克，用注射用水溶解，用葡甲胺调PH值6.0，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂1000瓶；
输液剂的制备：取人参总皂苷99.6克、黄芪总皂苷122.9克，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调PH值6.0，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂1000瓶；
粉针剂的制备：取人参总皂苷99.6克、黄芪总皂苷122.9克，赋形剂蔗糖、乳糖277.5克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂1000瓶；
实施例6
(1)本发明使用的原料药材为：
黄芪2500克，人参2500克；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取3次，每次4小时，合并提取液，提取液用40％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用65％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上AB-8型大孔吸附树脂柱，用7倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用6倍柱体积的65％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(4)制剂的制备：
水针剂的制备：取人参总皂苷101.5克、黄芪总皂苷91.3克，用注射用水溶解，用葡甲胺调PH值5.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂1000瓶；
输液剂的制备：取人参总皂苷101.5克、黄芪总皂苷91.3克，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调PH值5.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂1000瓶；
粉针剂的制备：取人参总皂苷101.5克、黄芪总皂苷91.3克，赋形剂甘露醇、乳糖307.2克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂1000瓶；
实施例7
(1)本发明使用的原料药材为：
黄芪3500克，人参1500克；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取5次，每次2小时，合并提取液，提取液用45％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用70％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上D101型大孔吸附树脂柱，用8倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用5倍柱体积的55％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(5)制剂的制备：
水针剂的制备：取人参总皂苷58.9克、黄芪总皂苷123.6克，用注射用水溶解，用葡甲胺调PH值6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂1000瓶；
输液剂的制备：取人参总皂苷58.9克、黄芪总皂苷123.6克，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调PH值5.5-6.5，用0.22um微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂1000瓶；
粉针剂的制备：取人参总皂苷58.9克、黄芪总皂苷123.6克，赋形剂甘露醇、蔗糖、乳糖317.5克，加注射用水溶解完全，用0.22um微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂1000瓶。
Claims (1)
1.一种含人参总皂苷、黄芪总皂苷的药物组合物的制备方法，其特征为：
(1)原料药材及重量份为：
黄芪2-4重量份，人参1-3重量份；
(2)取黄芪、人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用水提取3-5次，每次2-4小时，合并提取液，提取液用30％-50％乙醇沉淀，上清液备用，沉淀干燥去除乙醇至尽，干燥沉淀用水溶解，溶解完全后用60％-70％乙醇沉淀，上清液与上述上清液合并备用；
(3)取备用上清液，上大孔吸附树脂柱，用6-10倍的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用3-6倍柱体积的50％-80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，干燥，得到人参总皂苷、黄芪总皂苷；
(4)制剂制备：
水针剂的制备：取人参总皂苷40-120重量份、黄芪总皂苷70-140重量份，用注射用水溶解，用葡甲胺调pH值5.5-6.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成水针制剂；
输液剂的制备：取人参总皂苷40-120重量份、黄芪总皂苷70-140重量份，用注射用水溶解，加入葡萄糖，用葡甲胺调pH值5.5-6.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，检验，制成输液制剂；
粉针剂的制备：取人参总皂苷40-120重量份、黄芪总皂苷70-140重量份，赋形剂240-390重量份，加注射用水溶解完全，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，检验，得到粉针制剂。
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