CN1261762C - 一种体外培植牛黄的质量鉴别方法 - Google Patents
一种体外培植牛黄的质量鉴别方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1261762C CN1261762C CN 200410041748 CN200410041748A CN1261762C CN 1261762 C CN1261762 C CN 1261762C CN 200410041748 CN200410041748 CN 200410041748 CN 200410041748 A CN200410041748 A CN 200410041748A CN 1261762 C CN1261762 C CN 1261762C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- calculus bovis
- external
- external cultural
- cultural
- finger
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了一种体外培植牛黄的质量鉴别方法，首先对体外培植牛黄的胆汁酸类成分和胆红素类成分制定标准指纹图谱：①制备供试品溶液和对照品溶液，②反相色谱柱测定其高效液相色谱，③对10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订胆汁酸类成分和胆红素类成分两种标准指纹图谱。然后将待测样品建立高效液相色谱数据，与上述的标准指纹图谱数据进行对比、鉴别。本发明用于体外培植牛黄原料和含体外培植牛黄的制剂中体外培植牛黄的质量鉴别、鉴定，可以作为区别体外培植牛黄与天然牛黄、人工牛黄的有效手段。本发明的优点是方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握，能从色谱的整体特征面貌上把握体外培植牛黄的品种和质量情况。
Description
技术领域
本发明涉及一种牛黄的质量控制方法，具体的说是利用指纹图谱来鉴别和控制体外培植牛黄原料或含体外培植牛黄的制剂中体外培植牛黄的质量。
背景技术
中药指纹图谱技术在国内外已成为一种发展趋势。中药指纹图谱技术是中药生产质量的一种新型标准，可以确保中药产品的一致性；也是组分群体的特征图谱，能全面反映中药所含化学成分的种类与数量，进而反映中药材及其产品的质量。指纹图谱获得的是中药不同个体的化学成分信息，用图形或图案方式表达，进行比对和分析，可实现对中药未知物质群整体的质量控制，是实现多种成分整体相关质量评价的关键技术，也是中药创新、研究开发、质量鉴别、鉴定的必要技术手段。
天然牛黄是名贵稀少中药材，加之疯牛病的困扰，其来源、产量均非常有限，已远不能满足社会需求。因此出现各种替代品，如体外培植牛黄、人工牛黄等，但其主要成分和药用功效有差距较大。动物药材的指纹图谱一向是指纹图谱研究的难点，现阶段以单一化学成分分析的观点，不适合牛黄这一复杂成分分析体系。而解决这一难题的有效手段，就是要借助已被国际社会所认可的中药指纹图谱技术。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：通过对市售天然牛黄、体外培植牛黄、人工牛黄等进行研究，提供了一种体外培植牛黄指纹图谱的研究方法，用于体外培植牛黄原料和含体外培植牛黄的制剂中体外培植牛黄的质量鉴别、鉴定，可以作为区别体外培植牛黄与天然牛黄、人工牛黄的有效手段。
本发明要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的，一种体外培植牛黄的质量鉴别方法，其特点是：
(一)体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定，分别以20～100ml/g的倍量加入0～5％有机酸水溶液与低碳有机醇的混合溶液，置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为3～10∶90～97，
b、对照品溶液的制备
取胆酸和去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，分别制成每ml含1mg对照品的溶液，
c、检测仪器、试剂
高效液相色谱仪，检测器为蒸发光散射检测器，
甲醇为色谱纯，水为超纯水，
d、色谱条件
色谱柱：反相色谱柱；流速：0.8～1.2ml/min；柱温：25～30℃；进样量：10～20μl；流动相：A为0.1％挥发性有机酸，B为甲醇和乙腈的任意比例，从70％B开始以线性梯度方式经70min到达90％B；记录时间：70min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆汁酸类成分标准指纹图谱数据，
(二)体外培植牛黄胆红素类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定，分别以20～100ml/g的倍量加入0～5％有机酸水溶液与低碳有机醇的混合溶液，置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，倾去上清液，残渣同一溶液离心洗至无色，加二甲亚砜10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为3～10∶90～97，
b、对照品溶液的制备
取胆红素对照品适量，精密称定，加二甲亚砜适量，制成浓度为0.5mg/ml的胆红素对照品溶液，
c、检测仪器、试剂、
高效液相色谱仪，
d、色谱条件
色谱柱：反相色谱柱；流速：0.8～1.2ml/min；柱温：25～30℃；检测波长：451nm；进样量：1～5μl；流动相：A为0.1～5％醋酸铵水，B为乙腈/二甲亚砜，其比例为1～5∶5～8，45～55％B等度洗脱；记录时间：20min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆红素类标准指纹图谱数据，
(三)将体外培植牛黄原料或含体外培植牛黄的制剂等待测的样品，以上述相同方法建立高效液相色谱数据，与上述的标准指纹图谱数据进行对比、鉴别。
本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，所述的有机酸采用甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸，其优选甲酸；所述的低碳有机醇采用甲醇、乙醇、正丁醇、异丁醇、戊醇，其优选甲醇，其中甲酸、三氟乙酸为分析纯。
本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱色谱优选条件为：色谱柱：反相色谱柱；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；进样量为20μl；流动相：A为0.1％挥发性有机酸，B为甲醇和乙腈的任意比例，从70％B开始以线性梯度方式经70min到达90％B；记录时间：70min。
本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，体外培植牛黄胆红素类成分指纹图谱色谱优选条件为：色谱柱：反相色谱柱；流速为1.0ml/min；柱温为30□；检测波长：451nm；进样量为1μl；流动相：A为1％醋酸铵水，B为乙腈与二甲亚砜其比例为4∶7，B系统中可以加入10％以下的四氢呋喃作为改性剂，52％B等度洗脱；记录时间：20min。
通过本发明的方法建立的体外培植牛黄胆汁酸类ELSD-HPLC指纹图谱的标准图谱共有峰为12个。
体外培植牛黄胆汁酸类ELSD-HPLC指纹图谱的标准图谱数据
| 峰号* | 1 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 11 | 14 | 16(S) | 17 | 18 | 19 |
| 相对保留时间 | 0.110不敷出 | 0.335 | 0.367 | 0.477 | 0.519 | 0.611 | 0.700 | 0.927 | 1 | 1.099 | 1.617 | 1.714 |
| 相对峰面积比值 | 0 705 | 0 0171 | 0.00726 | 0 0170 | 0.00602 | 0 00892 | 0 00323 | 0.00637 | 1 | 0.00431 | 0.0230 | 0 328 |
S：为参照峰—胆酸(cholic acid)。
以本发明的方法、条件测定的体外培植牛黄胆汁酸类ELSD-HPLC指纹图谱经夹角余弦法、或相关系数法计算，其与标准图谱的相似度应在0.95-1.0之间。
通过本发明的方法建立的体外培植牛黄胆红素类HPLC指纹图谱的标准图谱共有峰为12个。
体外培植牛黄胆红素类HPLC指纹图谱的标准图谱数据
| 峰号* | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11(S) | 12 |
| 相对保留时间 | 0.154 | 0.177 | 0.200 | 0.225 | 0.248 | 0.259 | 0.293 | 0.321 | 0.456 | 0.786 | 1 | 1.228 |
| 相对峰面积比值 | 0.017 | 0.008 | 0.013 | 0.009 | 0.007 | 0.012 | 0.008 | 0.002 | 0.043 | 0.036 | 1 | 0.042 |
以本发明的方法、条件测定的体外培植牛黄胆红素类HPLC指纹图谱经夹角余弦法、或相关系数法计算，其与标准图谱的相似度在0.95-1.0之间。
具体实施方式
实施例1，
(一)体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱标准的研究方法
1、供试品溶液的制备
取10批体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉0.2g，分别精密称定，分别加入0～5％甲酸水溶液与甲醇的混合溶液(v∶v＝5∶95)10.0ml，置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。
2、对照品溶液的制备
取胆酸(cholic acid)和去氧胆酸(deoxycholic acid)对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，分别制成每ml含1mg对照品的溶液。
3、检测方法(仪器、试剂、色谱条件)
高效液相色谱仪(例如Agilent 1100系列，含二元高压泵、自动进样系统、在线脱气、柱温箱等单元。)
检测器为蒸发光散射检测器(例如Alltech 500ELSD)。
甲醇为色谱纯，甲酸、三氟乙酸为分析纯，水为超纯水。
色谱柱：反相色谱柱，选用C18柱，例如Zorbax SB C18，5μm，4.6×12.5mm(预柱)+4.6×150mm(分析柱)；流速是1.0ml/min；柱温是30□；进样量选20μl；流动相：A为0.1％挥发性有机酸甲酸，B为甲醇和乙腈的任意比例，从70％B开始以线性梯度方式经70min到达90％B；记录时间：70min。进行数据分析即得。
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订，
优选条件下体外培植牛黄胆汁酸类成分典型指纹图谱
体外培植牛黄胆汁酸类ELSD-HPLC指纹图谱的标准图谱数据
| 峰号* | 1 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 11 | 14 | 16(S) | 17 | 18 | 19 |
| 相对保留时间 | 0 110 | 0 335 | 0.367 | 0 477 | 0.519 | 0 611 | 0.700 | 0.927 | 1 | 1 099 | 1.617 | 1.714 |
| 相对峰面积比值 | 0 705 | 0.0171 | 0 00726 | 0 0170 | 0.00602 | 0 00892 | 0.00323 | 0 00637 | 1 | 0.00431 | 0.0230 | 0.328 |
S：为参照峰—胆酸(cholic acid)。
上述体外培植牛黄胆汁酸类ELSD-HPLC指纹图谱的标准图谱共有峰为12个。
以上述条件测定的体外培植牛黄胆汁酸类ELSD-HPLC指纹图谱经夹角余弦法、或相关系数法计算，其与标准图谱的相似度应在0.95～1.0之间。
我们用该条件检测了10批体外培植牛黄，批号分别为20030401、20030402、20030403、20030601、20030801、20030802、20030803、20031001、20031002、20031003，结果相似度均超过0.99，见下图，
10批体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱叠加图
与五批非体外培植牛黄对比，则相似度则差异较大，见下图
体外培植牛黄、人工牛黄供试品与胆汁酸对照品、空白样品的HPLC对比图自上而下依次是：去氧胆酸对照品；人工牛黄；体外培植牛黄；胆酸对照品；空白对照
4批天然牛黄与体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱的对比图
由上至下的顺序分别为：西牛黄、巴西黄、印度黄、天然牛黄(未定种)、体外培植牛黄
(二、)体外培植牛黄胆红素类成分指纹图谱研究方法
1、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定。分别加50倍量(ml/g)的0～5％有机酸甲酸水溶液与低碳有机醇甲醇的混合溶液(v∶v＝5∶95)10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，倾去上清液，残渣同一溶液离心洗至无色，加二甲亚砜10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。
2、对照品溶液的制备
取胆红素(bilirubin)对照品适量，精密称定，加二甲亚砜适量，制成浓度为0.5mg/ml的胆红素对照品溶液。
3、检测方法及验证
4、仪器、试剂、色谱条件
高效液相色谱仪(例如Agilent 1100系列HPLC色谱仪，含二元高压泵、DAD检测器、自动进样系统、在线脱气、柱温箱等单元)。
色谱柱：反相色谱柱，优选是C8柱(例如Zorbax SB C18 5μm 4.6×12.5mm(预柱)+Zorbax Eclipse XDB-C8 5μm 4.6×150mm(分析柱))；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长：451nm；进样量选1μl；流动相：A为1％醋酸铵水，B为乙腈/二甲亚砜(4∶7)，B系统中加入8％的四氢呋喃作为改性剂，52％B等度洗脱；记录时间：20min。进行数据分析即得。
体外培植牛黄胆红素类HPLC标准指纹图谱
体外培植牛黄胆红素类HPLC指纹图谱的标准图谱数据
| 峰号* | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11(S) | 12 |
| 相对保留时间 | 0 154 | 0 177 | 0 200 | 0 225 | 0.248 | 0 259 | 0.293 | 0.321 | 0 456 | 0.786 | 1 | 1.228 |
| 相对峰面积比值 | 0.017 | 0.008 | 0.013 | 0.009 | 0 007 | 0 012 | 0.008 | 0 002 | 0 043 | 0 036 | 1 | 0 042 |
上述体外培植牛黄胆胆红素类HPLC指纹图谱的标准图谱共有峰为12个。以上述条件测定的体外培植牛黄胆红素类HPLC指纹图谱经夹角余弦法、或相关系数法计算，其与标准图谱的相似度应在0.95～1.0之间。
我们用该条件检测了10批体外培植牛黄，批号分别为20030401、20030402、20030403、20030601、20030801、20030802、20030803、20031001、20031002、20031003，结果相似度均超过0.99，检测一批人工牛黄，结果相似度为0.77。
10批牛黄供试品胆红素类成分HPLC指纹图谱叠加图
注：从上至下依次为人工牛黄和十批体外培植牛黄。
(三)将体外培植牛黄原料或含体外培植牛黄的制剂等待测的样品，以上述相同方法建立高效液相色谱数据，与上述的标准指纹图谱数据进行对比、鉴别。
实施例2，一种体外培植牛黄的质量鉴别方法，
(一)体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定。分别加100倍量(ml/g)的5％有机酸乙酸水溶液与低碳有机醇乙醇的混合溶液，置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为5∶95，
b、对照品溶液的制备
取胆酸和去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，分别制成每ml含1mg对照品的溶液，
c、检测仪器、试剂
高效液相色谱仪，检测器为蒸发光散射检测器，
甲醇为色谱纯，甲酸、三氟乙酸为分析纯，水为超纯水，
d、色谱条件
色谱柱：反相色谱柱；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；进样量：10μl；流动相：A为0.1％挥发性有机酸，B为甲醇和乙腈的任意比例，从70％B开始以线性梯度方式经70min到达90％B；记录时间：70min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆汁酸类成分标准指纹图谱，
(二)体外培植牛黄胆红素类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定。分别加90倍量(ml/g)的5％有机酸水溶液与低碳有机醇的混合溶液10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，倾去上清液，残渣同一溶液离心洗至无色，加二甲亚砜10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为3∶90，
b、对照品溶液的制备
取胆红素对照品适量，精密称定，加二甲亚砜适量，制成浓度为0.5mg/ml的胆红素对照品溶液，
c、检测仪器、试剂、
高效液相色谱仪，
d、色谱条件
7.色谱柱：反相色谱柱；流速：1.2ml/min；柱温：28□；检测波长：451nm；进样量：5μl；流动相：A为0.1％醋酸铵水，B为乙腈/二甲亚砜，其比例为3∶6，B系统中加入5％的四氢呋喃作为改性剂，45％B等度洗脱；记录时间：20min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆红素类标准指纹图谱，
(三)将体外培植牛黄原料或含体外培植牛黄的制剂等待测的样品，以上述相同方法建立高效液相色谱数据，与上述的标准指纹图谱数据进行对比、鉴别。
实施例3
一种体外培植牛黄的质量鉴别方法，
(一)体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定。分别加20倍量(ml/g)的2％有机酸三氟乙酸水溶液与低碳有机醇正丁醇的混合溶液10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为10∶97，
b、对照品溶液的制备
取胆酸和去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，分别制成每ml含1mg对照品的溶液，
c、检测仪器、试剂
高效液相色谱仪，检测器为蒸发光散射检测器，
甲醇为色谱纯，甲酸、三氟乙酸为分析纯，水为超纯水，
d、色谱条件
色谱柱：反相色谱柱；流速：1.2ml/min；柱温：25℃；进样量：10μl；流动相：A为0.1％挥发性有机酸，B为甲醇和乙腈的任意比例，从70％B开始以线性梯度方式经70min到达90％B；记录时间：70min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆汁酸类成分标准指纹图谱，
(二)体外培植牛黄胆红素类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定。分别加80倍量(ml/g)的0～5％有机酸水溶液与低碳有机醇的混合溶液10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，倾去上清液，残渣同一溶液离心洗至无色，加二甲亚砜10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为8∶92，
b、对照品溶液的制备
取胆红素对照品适量，精密称定，加二甲亚砜适量，制成浓度为0.5mg/ml的胆红素对照品溶液，
c、检测仪器、试剂：高效液相色谱仪，
d、色谱条件
色谱柱：反相色谱柱；流速：1.2ml/min；柱温：30□；检测波长：451nm；进样量：2μl；流动相：A为3％醋酸铵水，B为乙腈/二甲亚砜，其比例为5∶8，55％B等度洗脱；记录时间：20min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆红素类标准指纹图谱，
(三)将体外培植牛黄原料或含体外培植牛黄的制剂等待测的样品，以上述相同方法建立高效液相色谱数据，与上述的标准指纹图谱数据进行对比、鉴别。
实施例4
一种体外培植牛黄的质量鉴别方法，
(一)体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定。分别加100倍量(ml/g)的0～5％有机酸磷酸水溶液与低碳有机醇异丁醇的混合溶液10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为3∶97，
b、对照品溶液的制备
取胆酸和去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，分别制成每ml含1mg对照品的溶液，
c、检测仪器、试剂
高效液相色谱仪，检测器为蒸发光散射检测器，甲醇为色谱纯，甲酸、三氟乙酸为分析纯，水为超纯水，
d、色谱条件
色谱柱：反相色谱柱；流速：1ml/min；柱温：27℃；进样量：18μl；流动相：A为0.1％挥发性有机酸，B为甲醇和乙腈的任意比例，从70％B开始以线性梯度方式经70min到达90％B；记录时间：70min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆汁酸类成分标准指纹图谱，
(二)体外培植牛黄胆红素类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定。分别加50倍量(ml/g)的5％有机酸水甲酸溶液与低碳有机醇戊醇的混合溶液10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，倾去上清液，残渣同一溶液离心洗至无色，加二甲亚砜10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为3～10∶90～97，
b、对照品溶液的制备
取胆红素对照品适量，精密称定，加二甲亚砜适量，制成浓度为0.5mg/ml的胆红素对照品溶液，
c、检测仪器、试剂、高效液相色谱仪，
d、色谱条件
8.色谱柱：反相色谱柱；流速：1ml/min；柱温：30□；检测波长：451nm；进样量：4μl；流动相：A为2％醋酸铵水，B为乙腈/二甲亚砜，其比例为1∶5，B系统中加入9％的四氢呋喃作为改性剂，50％B等度洗脱；记录时间：20min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆红素类标准指纹图谱，
(三)将体外培植牛黄原料或含体外培植牛黄的制剂等待测的样品，以上述相同方法建立高效液相色谱数据，与上述的标准指纹图谱数据进行对比、鉴别。
Claims (6)
1.一种体外培植牛黄的质量鉴别方法，其特征在于，
(一)体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定，分别以20～100ml/g的倍量加入0～5％有机酸水溶液与低碳有机醇的混合溶液，置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为3～10∶90～97，
b、对照品溶液的制备
取胆酸和去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，分别制成每ml含1mg对照品的溶液，
c、检测仪器、试剂
高效液相色谱仪，检测器为蒸发光散射检测器，
甲醇为色谱纯，水为超纯水，
d、色谱条件
色谱柱：反相色谱柱；流速：0.8～1.2ml/min；柱温：25～30℃；进样量：10～20μl；流动相：A为0.1％挥发性有机酸，B为甲醇和乙腈的任意比例，从70％B开始以线性梯度方式经70min到达90％B；记录时间：70min，
e、对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆汁酸类成分标准指纹图谱数据；
(二)体外培植牛黄胆红素类成分指纹图谱的建立
a、供试品溶液的制备
取10批以上体外培植牛黄细粉或取含体外培植牛黄的制剂细粉，分别精密称定，分别以20～100ml/g的倍量加入0～5％有机酸水溶液与低碳有机醇的混合溶液，置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，提取液置离心管中，离心，倾去上清液，残渣同一溶液离心洗至无色，加二甲亚砜10.0ml置具塞锥形瓶中超声提取10～45min，离心，上清液用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，
其中有机酸水溶液与低碳有机醇的体积比为3～10∶90～97，
b、对照品溶液的制备
取胆红素对照品适量，精密称定，加二甲亚砜适量，制成浓度为0.5mg/ml的胆红素对照品溶液，
c、检测仪器、试剂、
高效液相色谱仪，
d、色谱条件
色谱柱：反相色谱柱；流速：0.8～1.2ml/min；柱温：25～30℃；检测波长：451nm；进样量：1～5μl；流动相：A为0.1～5％醋酸铵水，B为乙腈/二甲亚砜，其比例为1～5∶5～8，45～55％B等度洗脱；记录时间：20min，
对上述10批以上供试品溶液的高效液相色谱进行数据分析制订体外培植牛黄胆红素类标准指纹图谱数据，
(三)将体外培植牛黄原料或含体外培植牛黄的制剂做为待测的样品，以上述相同方法建立高效液相色谱数据，与上述的标准指纹图谱数据进行对比、鉴别。
2.根据权利要求1所述的体外培植牛黄的质量鉴别方法，其特征在于，所述的有机酸采用甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸；所述的低碳有机醇采用甲醇、乙醇、正丁醇、异丁醇、戊醇，其中甲酸、三氟乙酸为分析纯。
3.根据权利要求1或2所述的体外培植牛黄的质量鉴别方法，其特征在于，所述的有机酸为甲酸；所述的低碳有机醇为甲醇。
4.根据权利要求1所述的体外培植牛黄的质量鉴别方法，其特征在于，体外培植牛黄胆汁酸类成分指纹图谱色谱条件为，色谱柱：反相色谱柱；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；进样量为20μl；流动相：A为0.1％挥发性有机酸，B为甲醇和乙腈的任意比例，从70％B开始以线性梯度方式经70min到达90％B；记录时间：70min，制订的标准指纹图谱数据为：
体外培植牛黄胆汁酸类ELSD-HPLC指纹图谱的标准图谱数据
峰号*
1
5
6
7
8
9
11
14
16(S)
17
18
19
相对保留时间 0.110 0.335 0.367 0.477 0.519 0.611 0.700 0.927 1 1.099 1.617 1.714
相对峰面积比值 0.705 0.0171 0.00726 0.0170 0.00602 0.00892 0.00323 0.00637 1 0.00431 0.0230 0.328
S：为参照峰—胆酸(cholic acid)；
上述体外培植牛黄胆汁酸类指纹图谱的标准图谱共有峰为12个，
以上述条件测定的体外培植牛黄胆汁酸类指纹图谱经夹角余弦法、或相关系数法计算，其与标准图谱的相似度在0.95～1.0之间。
5.根据权利要求1所述的体外培植牛黄的质量鉴别方法，其特征在于，体外培植牛黄胆红素类成分指纹图谱色谱条件为，色谱柱：反相色谱柱；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长：451nm；进样量为1μl；流动相：A为1％醋酸铵水，B为乙腈与二甲亚砜，其比例为4∶7，52％B等度洗脱；记录时间：20min，制订的标准指纹图谱数据为：
体外培植牛黄胆红素类指纹图谱的标准图谱数据
峰号*
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11(S)
12
相对保留时间 0.154 0.177 0.200 0.225 0.248 0.259 0.293 0.321 0.456 0.786 1 1.228
相对峰面积比值 0.017 0.008 0.013 0.009 0.007 0.012 0.008 0.002 0.043 0.036 1 0.042
上述体外培植牛黄胆胆红素类指纹图谱的标准图谱共有峰为12个，
以上述条件测定的体外培植牛黄胆红素类指纹图谱经夹角余弦法、或相关系数法计算，其与标准图谱的相似度应在0.95～1.0之间。
6.根据权利要求5所述的体外培植牛黄的质量鉴别方法，其特征在于，在B系统乙腈与二甲亚砜中加入10％以下的四氢呋喃作为改性剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410041748 CN1261762C (zh) | 2004-08-16 | 2004-08-16 | 一种体外培植牛黄的质量鉴别方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410041748 CN1261762C (zh) | 2004-08-16 | 2004-08-16 | 一种体外培植牛黄的质量鉴别方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1598572A CN1598572A (zh) | 2005-03-23 |
| CN1261762C true CN1261762C (zh) | 2006-06-28 |
Family
ID=34665235
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200410041748 Expired - Lifetime CN1261762C (zh) | 2004-08-16 | 2004-08-16 | 一种体外培植牛黄的质量鉴别方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1261762C (zh) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1877322B (zh) * | 2005-06-10 | 2010-08-11 | 上海华拓医药科技发展有限公司 | 一种益母草中水苏碱含量的高效液相色谱检测方法 |
| CN101566607B (zh) * | 2009-06-03 | 2011-09-28 | 川渝中烟工业公司 | 卷烟纸中有机酸根的测量方法 |
| CN101995441A (zh) * | 2010-02-10 | 2011-03-30 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 检测血中3-硫酸甘氨鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸的试剂盒 |
| CN106841492A (zh) * | 2017-03-30 | 2017-06-13 | 杭州佰辰医学检验所有限公司 | 高效液相色谱串联质谱检测血清中五种游离型胆汁酸的方法 |
| CN107328875A (zh) * | 2017-06-28 | 2017-11-07 | 合肥今越制药有限公司 | 一种用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱 |
| CN107881243B (zh) * | 2017-10-31 | 2022-03-18 | 中国食品药品检定研究院 | 用于牛黄真伪鉴别的荧光定量pcr检测的方法和用途 |
| CN107881244B (zh) * | 2017-10-31 | 2022-03-18 | 中国食品药品检定研究院 | 用于牛黄真伪鉴别的荧光定量pcr检测的探针引物及检测方法和用途 |
| CN113237960A (zh) * | 2020-11-18 | 2021-08-10 | 上海和黄药业有限公司 | 一种药物制剂中人工牛黄的主要药效成分的检测方法 |
| CN115575542B (zh) * | 2022-10-19 | 2024-11-19 | 陕西科技大学 | 一种西黄胶囊的指纹图谱构建方法及指纹图谱 |
| CN117907487B (zh) * | 2024-02-02 | 2024-08-27 | 安徽中医药大学 | 一种天然牛黄及其代用品的鉴别方法和应用 |
-
2004
- 2004-08-16 CN CN 200410041748 patent/CN1261762C/zh not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1598572A (zh) | 2005-03-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1261762C (zh) | 一种体外培植牛黄的质量鉴别方法 | |
| CN1201144C (zh) | 中药药材红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法 | |
| CN1621836A (zh) | 生脉注射剂的质量控制方法 | |
| CN1865988A (zh) | 检测夏桑菊制剂中氨基酸类成分的方法 | |
| CN1712051A (zh) | 一种宫炎平制剂的质量控制方法 | |
| CN1588050A (zh) | 一种利用特征图谱对药材进行鉴别的方法 | |
| CN1857551A (zh) | 一种中药制剂的质量控制方法 | |
| CN1540337A (zh) | 四季三黄胶囊活性成分含量检测方法 | |
| CN1844911A (zh) | 一种水蛭指纹图谱的建立方法和水蛭药材的鉴别方法 | |
| CN1973855A (zh) | 一种益母草注射剂 | |
| CN1991361A (zh) | 用指纹图谱技术检测中国劲酒质量的方法 | |
| CN1202413C (zh) | 中药配方颗粒红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法 | |
| CN1844912A (zh) | 一种地龙指纹图谱的建立方法和地龙药材的鉴别方法 | |
| CN1947740A (zh) | 独一味药材、中间体及其注射液的指纹图谱质量检测方法 | |
| CN1544935A (zh) | 多波长中药色谱指纹图谱及其构建方法与应用 | |
| CN1916602A (zh) | 同时检测血、尿中多种药物和毒物的毛细管电泳方法 | |
| CN1857620A (zh) | 治疗视疲劳的药物制剂的质量控制方法 | |
| CN1808114A (zh) | 灯莫注射剂的质量控制方法 | |
| CN1605864A (zh) | 利用特征峰值与农药浓度的关系检测农药残留量的方法 | |
| CN1304840C (zh) | 一种治疗血栓闭塞性疾病的注射液的质量控制方法 | |
| CN1857406A (zh) | 一种中药制剂的质量控制方法 | |
| CN101066437A (zh) | 复方斑蝥口服制剂的质量控制方法 | |
| CN1857422A (zh) | 一种中药制剂的质量控制方法 | |
| CN1824238A (zh) | 治疗抑郁症的药物制剂的质量控制方法 | |
| CN1556404A (zh) | 一种中药制剂的质量控制方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: WUHAN JIANMIN DAPENG PHARMACEUTICAL CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: JIANGSU ZHONGKANG MEDICINE SCIENCE + TECHNOLOGY CO., LTD. Effective date: 20060804 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20060804 Address after: 430014 Wu Xin building, 152 Yanjiang Avenue, Wuhan, Hankou, Hubei Patentee after: WUHAN JIANMIN DAPENG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 222001 Jiangsu Province, Lianyungang city Sinpo District Haichang Road No. 58 Patentee before: Jiangsu Zeukov Pharmaceutical S. & T. Inc. |
|
| CX01 | Expiry of patent term | ||
| CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20060628 |