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CN119403574A - 双半抗原和三半抗原缀合物、组合物、制备方法及其治疗方法 - Google Patents

双半抗原和三半抗原缀合物、组合物、制备方法及其治疗方法 Download PDF

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CN119403574A
CN119403574A CN202380048230.2A CN202380048230A CN119403574A CN 119403574 A CN119403574 A CN 119403574A CN 202380048230 A CN202380048230 A CN 202380048230A CN 119403574 A CN119403574 A CN 119403574A
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M·斯里尼瓦萨罗
I·沙赫利亚尔
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Abstract

一种具有式TL‑L‑Hn的缀合物，其中TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；L是接头；H是半抗原；并且n是2或更大的整数。还提供了包含所述缀合物的组合物和使用方法。

Description

双半抗原和三半抗原缀合物、组合物、制备方法及其治疗方法
优先权
本申请涉及并要求以下各项的优先权益：(1)2022年4月19日提交的美国临时专利申请号63/332,521；(2)2022年7月27日提交的美国临时申请号63/392,744；以及(3)2022年11月30日提交的美国临时申请号63/429,030。上述申请的内容通过引用全部并入本公开。
技术领域
本发明包括包含两个或更多个半抗原的缀合物，以及包含此类缀合物的组合物(例如药物组合物)和制备此类缀合物的方法，所述半抗原与病毒或细胞上靶蛋白的靶向配体连接。此外，本公开还包括治疗病毒感染、纤维化和癌症的方法。
背景技术
本部分介绍的方面可能有助于更好地理解本公开。因此，在阅读这些表述时应注意这一点，而不应将其理解为承认什么是或不是现有技术。
众所周知的Fc介导(片段可结晶结构域介导)抗体效应功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。此外，已经发现抗体通过诱导细胞分化和激活来介导炎症和免疫调节。这些机制既可以保护病毒复制，也可以通过抗体介导的针对病毒感染细胞的效应功能(例如病毒糖蛋白脱落、病毒糖蛋白内化、抗体协同作用和抗体糖基化)来增强受感染细胞的清除。识别IgG(免疫球蛋白G)分子Fc结构域的受体家族被称为FcRn和FcγR家族。几项研究已经证实，Fc:FcγR亲和力和选择性与免疫复合物(IC)参与的免疫效应细胞的细胞毒性功能之间存在相关性。
人类γ受体(FcγR)包括FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32a)、FcγRIIb(CD32b)、FcγRIIc(CD32c)、FcγRIIIa(CD16a)和FcγRIIIb(CD16b)，这些受体在各种免疫细胞表面上以不同水平表达。FcγRIIIa是促进ADCC活性的关键表面受体，存在于自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、单核细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和树突状细胞的表面。然而，它是NK细胞表达的唯一FcγR。
人类表达两种FcγRIIIa同种异型，在位置158的单个氨基酸上不同；残基可以是缬氨酸(V)或苯丙氨酸(F)，其中在位置158位有V的同种型对IgG1的Fc结构域具有高亲和力，在位置158有F的同种型具有低亲和力。免疫复合物(IC)与高亲和力FcγRIIIa-V158的结合产生了比FcγRIIIa-F158体外细胞毒性效力更强的体外细胞毒性效力。与天然Fc相比，对FcγRIIIa亲和力提高的Fc工程抗体显示出更高的治疗疗效，因为它们可以更有效地启动和激活NK细胞。已知晓ADCP活性是由FcγRIIa细胞内信号传导触发的，这已由糖工程抗体对FcγRIIa的亲和力增强，使得ADCP活性增强所证实。主要是，Fc变体对FcγRIIa-R131同种型表现出高亲和力，对FcγRIIa而不是FcγRIIb具有高选择性，已被证明可以介导更强的ADCP活性。任一种补体受体都可以参与吞噬细胞的机制。感染细胞也可以通过CDC以及由携带FcγR的效应细胞介导的ADCC和/或ADCP清除。
几乎所有经FDA批准的治疗性抗体都是全尺寸IgG1抗体，大小约为150kDa。Dimitrov,Engineered CH2 domains(nanoantibodies),mAbs 1(1):26-28(2009)。临床试验中的绝大多数抗体也是如此。少数例外是抗原结合片段(Fab)。
全尺寸抗体给治疗带来了根本性的问题。一个问题是组织渗透性差，例如实体瘤渗透性差。Dimitrov(2009)，同上。另一个问题是与某些分子表面上的区域(例如人类免疫缺陷病毒(HIV)的包膜糖蛋白)结合不良或没有结合。同上
鉴于上述情况，需要的是一些材料和方法，使抗体(Ab)(无论是天然存在的、外源性施用的自体Ab还是外源性施用IgG ab)与病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞和/或成纤维细胞紧密接近，例如以改善Ab功能。根据本文提供的详细描述，这一与其他的目的和优势以及创造性特征将变得显而易见。
发明内容
在本公开的一个方面，提供了式TL-L-Hn的缀合物及其药学上可接受的盐，其中TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；L是接头；H是半抗原；n是2或3的整数。
在本公开的另一个方面，提供了具有以下式IA的缀合物：
及其药学上可接受的盐，其中：
TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；La、Lb和Lc是接头；C是碳原子；
R4选自氢、C1-C5烷基、C1-C5烯基或C1-C5炔基基团；H1和H2是半抗原。
在本公开的另一个方面，提供了具有以下式IB的缀合物：
及其药学上可接受的盐，其中TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；La、Lb、Lc和Ld是接头；C是碳原子；H1、H2和H3是半抗原。
在本公开的另一个方面，提供了具有以下式II结构的缀合物：
或其药用盐，其中L1、L2和L3各自独立地为接头。
在某些实施方案中，所述缀合物具有以下式：
TL-L-Hn
或是其药学上可接受的盐，其中：TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；L是接头；H是半抗原；并且n是2-3的整数；任选地，其中至少两个所述H在与其接触时可以各自结合不同的抗体。
至少有两个所述H可以各自被抗体结合。每个H可以被不同的抗体结合。在某些实施方案中，当与体内抗体接触时，至少两个所述H可以各自结合不同的抗体。在某些实施方案中，当与体外抗体接触时，至少两个所述H可以各自结合不同的抗体。
每个H可以独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。至少一个H可以是选自血凝素和神经氨酸酶的流感病毒抗原。至少一个H可以是选自L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg和preS的肝炎病毒抗原。至少一个H可以是gp120或gp160。至少一个H可以是糖蛋白。
n可以是2。n可以是3。
每个H可以独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。
在某些实施方案中，n为2，第一H为DNP片段，并且第二H为鼠李糖片段。
所述靶蛋白可以是病毒的包膜蛋白或病毒感染细胞表面上的病毒包膜蛋白。所述靶蛋白可以是流感病毒神经氨酸酶或流感病毒血凝素。所述靶蛋白可以是呼吸道合胞病毒融合蛋白F。所述靶蛋白可以是冠状病毒刺突蛋白。所述靶蛋白可以是乙型肝炎病毒表面抗原或HBV核心抗原。所述靶蛋白可以是癌症细胞上的细胞表面受体。所述靶蛋白可以是叶酸受体。所述靶蛋白可以是叶酸受体α或叶酸受体β。所述靶蛋白可以是前列腺特异性膜抗原。
权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是碳酸酐酶9。所述靶蛋白可以是促黄体激素释放激素受体。所述靶蛋白可以是神经激肽1受体。所述靶蛋白可以是肿瘤相关巨噬细胞上的细胞表面受体。所述靶蛋白可以是髓系来源抑制细胞上的细胞表面受体。所述靶蛋白可以是癌症相关成纤维细胞上的细胞表面受体。所述靶蛋白可以是成纤维细胞激活蛋白。所述靶向配体可以是神经氨酸酶抑制剂。所述靶向配体可以是奥司他韦片段、扎那米韦片段、帕拉米韦片段或拉尼米韦片段。所述靶向配体可以是扎那米韦片段。所述靶向配体可以是叶酸片段或其类似物。所述靶向配体可以是5-甲基四氢叶酸。
L可以包含(-CH2CH2-O-)n、肽、肽聚糖或上述两种或更多种的组合，其中n是介于并包括1和32的整数。L可以是支链接头，并且至少两个所述半抗原连接到所述接头的不同支链，其中所述不同支链任选地从所述接头的不同原子延伸。
所述靶向配体可以是叶酸片段或其衍生物，至少第一H可以包含鼠李糖片段，并且至少第二H可以包含二硝基苯基片段。
本文的所述缀合物可以配制成前药。
在某些实施方案中，所述缀合物具有以下式
或是其药学上可接受的盐，其中：TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；La、Lb和Lc各自是接头，可以相同或不同；C是碳原子；R4选自氢、C1-C5烷基、C1-C5烯基或C1-C5炔基基团；H1和H2各自是半抗原；并且，任选地，其中H1和H2各自可以结合不同的抗体。
在某些实施方案中，所述缀合物具有以下式
或是其药学上可接受的盐，其中：TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；La、Lb、Lc和Ld各自是接头，可以相同或不同；C是碳原子；H1、H2和H3各自是半抗原；并且，任选地，其中每个H1、H2和H3可以各自结合不同的抗体。
H1和H2可以各自被抗体结合。H1、H2和H3可以各自被抗体结合。H1和H2可以各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。H1、H2和H3可以各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。H1或H2可以各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。H1、H2或H3可以各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。在某些实施方案中，H1是DNP片段，并且H2是鼠李糖片段。
至少一个半抗原可以是选自血凝素和神经氨酸酶的流感病毒抗原。至少一个半抗原可以是选自L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg和preS的肝炎病毒抗原。至少一个半抗原可以是gp120或gp160。至少一个半抗原可以是糖蛋白。
所述靶蛋白可以是病毒的包膜蛋白或病毒感染细胞表面上的病毒包膜蛋白。所述靶蛋白可以是流感病毒神经氨酸酶或流感病毒血凝素。所述靶蛋白可以是呼吸道合胞病毒融合蛋白F。所述靶蛋白可以是冠状病毒刺突蛋白。所述靶蛋白可以是乙型肝炎病毒表面抗原或HBV核心抗原。所述靶蛋白可以是癌症细胞上的细胞表面受体。所述靶蛋白可以是叶酸受体。所述靶蛋白可以是叶酸受体α或叶酸受体β。所述靶蛋白可以是前列腺特异性膜抗原。所述靶蛋白可以是碳酸酐酶9。所述靶蛋白可以是促黄体激素释放激素受体。所述靶蛋白可以是神经激肽1受体。所述靶蛋白可以是肿瘤相关巨噬细胞上的细胞表面受体。所述靶蛋白可以是髓系来源抑制细胞上的细胞表面受体。所述靶蛋白可以是癌症相关成纤维细胞上的细胞表面受体。所述靶蛋白可以是成纤维细胞激活蛋白。所述靶向配体可以是神经氨酸酶抑制剂。所述靶向配体可以是奥司他韦片段、扎那米韦片段、帕拉米韦片段或拉尼米韦片段。所述靶向配体可以是扎那米韦片段。所述靶向配体可以是叶酸片段或其类似物。所述靶向配体可以是5-甲基四氢叶酸。
在所述缀合物的某些实施方案中，La、Lb、Lc和Ld中的至少一种各自独立地包含：(-CH2CH2-O-)n、烷基基团、肽、肽聚糖或上述两种或更多种的组合，其中n是介于并包括1和32的整数。在所述缀合物的某些实施方案中，La、Lb和Lc中的至少一种各自独立地包含：(-CH2CH2-O-)n、烷基基团、肽、肽聚糖或上述两种或更多种的组合，其中n是介于并包括1和32的整数。n可以是介于并包括1和16的整数。
La、Lb、Lc和Ld中的至少一种可以包含肽片段或肽聚糖片段。La、Lb和Lc中的至少一种可以包含肽片段或肽聚糖片段。La、Lb和Lc、以及Ld可以各自独立地包含C2-C18烷基基团。La、Lb和Lc可以各自独立地包含C2-C18烷基基团。
在某些实施方案中，缀合物具有以下式：
或者是其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，缀合物具有以下式：
或者是其药学上可接受的盐。
所述缀合物的一个或更多个-OH基团可以独立地被巯基、磷酸酯或膦酸酯取代。一个或更多个所述-OH基团可以被-OC(＝O)R取代，其中R是烷基基团。一个或更多个所述-OH基团可以被-OC(＝O)R取代，其中R是C1-C6烷基基团。氨基(-NH2)基团可以被-OC(＝O)R2取代，R2可以是烷基基团。所述氨基(-NH2)基团可以被-OC(＝O)R2取代，R2可以是C1-C6烷基基团。羧基(-COOH)基团可以用-OC(＝O)R3代替，其中R3是烷基基团。所述羧基(-COOH)基团可以被-OC(＝O)R3取代，其中R3是C1-C6烷基基团。
在某些实施方案中，所述缀合物具有以下式：
或者是其药学上可接受的盐，其中L1、L2和L3是接头。L1、L2和L3中的一个或更多个可以包含(-CH2CH2-O-)n，其中n可以介于并包括1和16的整数。L1、L2和L3可以各自独立地包含C2-C18烷基基团、肽片段或肽聚糖片段。
在某些实施方案中，所述缀合物具有以下式：
或者是其药学上可接受的盐。
所述缀合物还可以在体内与一种或更多种抗体复合。
还提供了一种药物组合物。所述药物组合物可以包含缀合物(例如，本文中任一种缀合物)和药学上可接受的赋形剂。
还提供了一种治疗受试者病毒感染的方法。所述治疗受试者病毒感染的方法可以包含向所述受试者施用有效量的本文中缀合物或其药物组合物。所述方法还可以包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体免疫球蛋白G(IgG)抗体。所述病毒感染可以是流感。所述缀合物或所述药物组合物可以口服施用。所述缀合物或所述药物组合物可以每天施用一次。所述缀合物或所述药物组合物可以每天施用一次以上。所述缀合物或所述药物组合物可以每天施用两次。
提供了一种治疗受试者癌症的方法。所述治疗受试者癌症的方法可以包含向所述受试者施用有效量的本文中缀合物或其组合物(例如药物组合物)。所述方法还可以包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体IgG抗体。所述癌症可以是热癌症。所述癌症可以是肾癌、肺癌或结直肠癌。
所述缀合物或所述药物组合物可以口服或静脉施用。所述缀合物或药物组合物可以每天施用一次。
所述治疗癌症的方法还可包含对所述受试者施用第二疗法，其中所述第二疗法包含化疗、舒尼替尼、PD-1抑制剂或PDL-1抑制剂。
还提供了一种激活受试者免疫反应的方法，在某些实施方案中，此类方法包含向所述受试者施用有效量的本文中缀合物或其药物组合物。所述免疫反应可以是先天免疫反应。所述免疫反应可以在所述受试者靶向区域(例如肿瘤微环境或病毒复制位点的位置)激活。
所述激活免疫反应的方法还可以包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体IgG抗体。施用有效量的所述缀合物或所述药物组合物可以在所述靶向区域诱导M2型巨噬细胞重新编程为M1型巨噬细胞。
附图说明
根据下文对本公开各种示例性实施方案的详细描述，本文中所公开的实施方案和其他特征、优势和方面以及实现这些实施方案和特征、优势和方面的事项将变得显而易见。当结合附图时，将更好地理解这样的详细描述。
图1A是抗体募集的示意图。
图1B是使用本文所述缀合物实施方案进行抗体募集的示意图，其中10包含靶向配体(TL)和两个半抗原(每个H)，所述靶向配体对病毒或病毒感染细胞的神经氨酸酶(即受体)具有特异性，所述缀合物10的半抗原H结合人类内源性抗DNP和抗Rha抗体(Abs 12)。
图2A-2H显示了化合物7(图2A)、化合物8(图2B)、化合物9(图2C)、化合物12(图2D)、化合物18(图2E)、化合物22(图2F)、化合物23(图2G)和化合物24(图2H)的液相色谱法-质谱法(LC-MS)、质谱法和紫外光谱法数据。
图3是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、感染后24小时(hpi)腹腔内施用人类IgG(IVIg(-C))和48hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。
图4是如图3所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
图5是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用人类IgG(IVIg(-C))和48hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。
图6是如图5所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
图7是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用人类IgG(IVIg(-C))和96hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。
图8是如图7所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
图9是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用人类IgG(IVIg(-C))和48hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。
图10是如图9所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
图11是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用人类IgG(IVIg(-C))和96hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。
图12是如图11所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
图13A显示了缀合物和市售药物48hpi的病毒滴度(倍数变化)。
图13B显示了缀合物和市售药物96hpi的病毒滴度(倍数变化)。
图14A显示了缀合物和市售药物48hpi的病毒滴度(倍数变化)。
图14B显示了缀合物和市售药物96hpi的病毒滴度(倍数变化)。
图15A是感染后天数与存活率(％)的关系图。
图15B是感染后天数与体重(％)的关系图。
图16是施用途径(SC＝皮下；OG＝口服灌胃；IV＝静脉；IN＝鼻内；PBS＝磷酸盐缓冲盐水)与病毒滴度(每ng核糖核酸(RNA)的PFU/ml/)的条形图。
图17是OG和PBS与病毒滴度(每ng RNA的PFU/ml)的条形图。
图18是静脉(IV)施用单次剂量1.5μmol/kg(n＝2只小鼠/时间点)的时间(h＝小时)与浓度(ng/mL)的关系图，与化合物24(Zan-DNP-鼠李糖)给药药代动力学研究有关。
图19是口服施用单次剂量4.5μmol/kg(n＝2只小鼠/时间点)的时间(h＝小时)与浓度(ng/mL)的关系图，与化合物24(Zan-DNP-鼠李糖)给药的药代动力学研究有关。
图20A是与剂量递增研究相关的感染后天数与存活率(％)的关系图，其中小鼠感染了100×LD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934，hIVIg用作抗半抗原抗体的来源(在药物施用前24小时以8g/kg的剂量注射)，在48hpi施用化合物24(Zan-DNP-鼠李糖)的剂量，单次剂量是1.5μmol/kg Zan-DNP-鼠李糖(IV)，或两次剂量是4.5μmol/kg Zan-DNP-鼠李糖(口服)。
图20B是与图20A的剂量递增研究有关的感染后天数与体重％的关系图，图20A中的图例也适用于图20B。
图21是PBS和扎那米韦-DNP-鼠李糖(化合物24)IV和OG施用感染后天数与病毒滴度(每ng RNA的PFU/ml)的关系图。
图22是感染后天数与存活率(％)的关系图。
图23是感染后天数与体重(％)的关系图。
图24的图显示Balb/c小鼠在治疗后24小时(这又是感染10LD50A/H1N1/PR8/1934病毒(第0天)后48小时)的肺部滴度，比较了化合物24和PBS、 的治疗和未感染的小鼠队列(未感染)。
图25的图显示Balb/c小鼠在感染10LD50 A/H1N1/PR8/1934病毒(第0天)并在感染后第4天通过各种途径(即IN途径、IV途径和OG途径)服用化合物24(C.24)的存活率，并与仅施用PBS的存活率进行了比较。
图26的图显示基于图25中给药数据的感染后天数对比体重％。
图27A和图27B分别显示了化合物24的浓度(单位：nM)与通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)的杀伤百分比的关系图，杀伤作用于体外N1转染的HEK293细胞(NA-HEK)和野生型(WT)HEK 293细胞。
图28A和图28B分别显示了Balb/c小鼠IV施用化合物24剂量递增研究中感染后天数与存活率(％)以及感染后天数与体重(％)的关系图。
图29A和图29B分别显示了在比较Balb/c小鼠施用本文中所述缀合物与单半抗原(96hpi治疗)的研究中，感染后天数与存活率(％)以及感染后天数与体重(％)的关系图。
图30A和图30B分别显示了比较对感染各种流感病毒株的Balb/c小鼠施用所述缀合物的研究中，感染后天数与存活率(％)和感染后天数与体重(％)的关系图，其中(A)是甲型流感/California/07/2009(H1N1)pdm09+化合物24治疗组；(B)是甲型流感/Wisconsin/67/2005(H3N2)+化合物24治疗组；(C)是乙型流感/Florida/04/2006+化合物24治疗组；(D)是甲型流感/California/07/2009(H1N1)pdm09+PBS对照组；(E)是甲型流感/Wisconsin/67/2005(H3N2)+PBS对照组；并且(F)为乙型流感/Florida/04/2006+PBS对照组。
图31显示了治疗组或对照组小鼠肺部测量的细胞因子和趋化因子水平图。
图32显示了治疗组或对照组中测量的血清细胞因子和趋化因子水平图，以观察测试受试者是否存在全身炎症。
图33显示了从感染甲型流感/H1N1/PR8/1934并用1)PBS、2)通过IV的化合物24或3)通过OG的化合物24治疗的小鼠体内采集的肺部组织活检的定性组织学分析图像。
图34显示了用化合物24(口服或静脉)治疗后或未治疗的病毒感染小鼠肺部或肾脏组织的组织学图像。
图35显示了叶酸盐双半抗原缀合物化合物150的合成方案。
图36显示了化合物3'的LC-MS、质谱法和紫外光谱法数据。
图37显示了化合物5'的LC-MS、质谱法和紫外光谱法数据。
图38显示了化合物10'的LC-MS、质谱法和紫外光谱法数据。
图39显示了化合物11'的LC-MS、质谱法和紫外光谱法数据。
图40显示了化合物13'的LC-MS、质谱法和紫外光谱法数据。
图41显示了化合物14'的LC-MS、质谱法和紫外光谱法数据。
图42显示了化合物18'的LC-MS、质谱法和紫外光谱法数据。
图43显示了化合物150的LC-MS、质谱法和紫外光谱法数据。
图44显示了与CDC测定相关的数据，在叶酸盐双半抗原(化合物150＝FDH)浓度(nM)与通过CDC的杀伤百分比的关系图中示出，该图显示了化合物150作用于与抗半抗原抗体和人类血清共同培养时的小鼠肺癌细胞(M109)(M109_comp＝叶酸盐-葡糖胺竞争物)。
图45A-45D显示了与ADCC测定相关的数据，在FDH浓度(nM)与通过ADCC的杀死百分比的关系图中示出，该图显示了化合物150在体外作用于对多种小鼠和人类癌症细胞系(4T1-FR＝化合物150并且4T1-FR_comp＝叶酸盐-葡糖胺竞争物，作用于4T1细胞；MDA-MB-231＝化合物150并且MDA-MB-231_comp＝叶酸盐-葡糖胺竞争物，作用于MDA-MB-231细胞；M109＝化合物150并且M109_comp＝叶酸盐-葡糖胺竞争物，作用于M109细胞；THP-1＝化合物150并且THP-1_comp＝叶酸盐-葡糖胺竞争物，作用于THP-1细胞(用作急性髓系白血病(AML)体外模型的人类白血病单核细胞系))。
图46显示了与化合物150体内小鼠肺癌疗效研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；抗PD1+卡铂+紫杉醇＝SOC供试品；以及化合物150供试品)。Abs＝抗体，在图46所示的研究中，是一种小鼠抗PD1抗体(InVivoMAb抗小鼠PD-1目录#BE0146；InVivoGen,San Diego,CA)。
图47显示了与图46化合物150的体内肺癌疗效研究相关的数据，在受试者体重百分比与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；抗PD1+卡铂+紫杉醇＝SOC供试品；Fol双半抗原(+Abs)＝化合物150供试品)。Abs＝抗PD1抗体。
图48显示了与化合物150的体内人类肺癌疗效研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；抗PD1+放疗＝SOC供试品；以及化合物150供试品)。
图49显示了与图48化合物150的体内人类肺癌疗效研究相关的安全数据，在受试者体重百分比与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；抗PDL1+放疗＝SOC供试品；以及化合物150供试品)。
图50显示了与化合物150的体内小鼠结直肠癌疗效研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；甲酰四氢叶酸+5-FU+奥沙利铂＝SOC供试品；Fol双半抗原(+Abs)＝化合物150供试品)。
图51显示了与图50化合物150的体内结直肠癌疗效研究相关的安全数据，在受试者体重百分比与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；抗PD1+卡铂+紫杉醇＝SOC供试品；以及化合物150(+Abs)供试品)。
图52显示了与体内小鼠肺癌联合疗法研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出。
图53显示了与体内小鼠肺癌联合疗法研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出。
图54显示了与体内小鼠肺癌联合疗法研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；甲酰四氢叶酸+5FU+OXH＝SOC供试品；Fol双半抗原(+Abs)＝化合物150供试品)。
图55显示了与图54化合物150的体内人类肺癌疗效研究相关的数据，在受试者体重百分比与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；甲酰四氢叶酸+5FU+OXH＝SOC供试品；Fol双半抗原(+Abs)＝化合物150供试品)。
图56显示了与体内小鼠结直肠癌联合疗法研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出。
图57显示了与体内小鼠结直肠癌联合疗法研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；甲酰四氢叶酸+5FU+OXH＝SOC供试品；Fol双半抗原(+Abs)＝化合物150供试品；Fol双半抗原+舒尼替尼＝化合物150+舒尼替尼；Fol双半抗原+FA-TLR7＝化合物150+FA-TLR 7)。
图58显示了化合物150与抗PD1+化疗治疗的体内小鼠肺癌比较疗效研究的相关数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出(PBS(+Abs)＝对照组；抗PD1+化疗＝SOC供试品；Fol双半抗原(+Abs)＝化合物150供试品)。
图59显示了与化合物150的体内小鼠肺癌(冷性)疗效研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出。
图60显示了与体内小鼠肾癌(Renca细胞系)疗效研究相关的数据，在肿瘤体积与肿瘤植入后天数的关系图中示出。
图61显示了用PBS(对照)、化合物150(FDH)或SOC处理后测量的Y856、LLC-1和M109细胞系(冷与热)中免疫细胞群的比较数据图。
虽然本公开易于实现各种修改和替代形式，但其示例性实施方案在附图中以实例的方式示出，并在本文中进行详细描述。
具体实施方式
虽然本公开的概念在本文描述中进行详细的示出和说明，但所述描述的结果应被视为示例性的，而不是限制性的；应当理解的是，仅显示和描述了示例性实施方案，并且希望保护所有符合本公开精神的变更和修改。
本公开提供了募集抗体(例如募集到病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面)的材料和方法。参见，例如，抗体募集示意图的图1A。
更具体地说，公开了一种具有双重作用机制的靶向治疗策略，引发宿主对靶标(例如，病毒、病毒感染细胞、癌症细胞)的免疫反应。本文中所述缀合物可以是三价的，使得它们包含结合(例如，通过接头)至少两个半抗原的靶向配体，所述半抗原结合天然存在的抗体(例如，人体中的抗体)。一旦被募集，这些抗半抗原抗体就会结合并激活针对所述靶标的先天免疫系统。还提供了包含此类缀合物的药物组合物以及包含施用此类缀合物和组合物的方法。
缀合物
本文中所述缀合物可以是小分子配体靶向的药物缀合物，其将受体特异性配体与至少两个半抗原结合。因此，所述缀合物可以是三价药物，可以通过所述受体特异性配体(例如靶向配体)靶向所需的细胞，并且还可以通过双有效载荷结合受试者体内的两种或更多种抗体。一般方案是提供与两个或更多个半抗原的有效载荷缀合的特异性靶向配体，以治疗病毒感染或癌症。所述靶向配体可以特异性识别靶受体(例如，病毒的包膜蛋白(可以仅在感染细胞表面上表达)，或在靶细胞上过表达的受体(例如癌症细胞上的叶酸受体等))。在某些实施方案中，选择一个或更多个所述半抗原来激活所述受试者的先天免疫系统(例如，邻近靶细胞)以募集免疫细胞和/或以其他方式利用所述受试者自身的免疫系统对抗病毒或癌症。
在某些实施方案中，缀合物具有以下式：
TL—L—Hn，
或其药学上可接受的盐，其中：
TL是靶细胞表面上靶蛋白的靶向配体；
L是接头；
H是半抗原；并且
n是2或更大的整数。
任选地，例如，当与体内存在的抗体接触时，至少两个所述H可以被不同的抗体结合。在某些实施方案中，n是大于或等于2的整数(例如，2、3、4、5、……10等)。n可以是2或3。
在许多实施方案中，所述缀合物具有以下式：
或
包括其药用盐，其中TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；La、Lb、Lc和Ld各自是接头；C是碳原子；H1、H2和H3各自为半抗原。
在这些和其他实施方案中，例如，当与体内存在的抗体接触时，至少两个半抗原被不同的抗体结合。在这些和其他实施方案中，H1和H2可以各自结合不同的抗体。在这些和其他实施方案中，H1、H2和H3可以各自结合不同的抗体。
任选地，所述缀合物可以通过所述缀合物一个或更多个半抗原与抗体复合。当结合时，每个半抗原通常独立地结合到不同的抗体。每种抗体可以是天然存在的自体抗体、外源性施用的自体抗体或外源性施用的免疫球蛋白G(IgG)抗体。与抗体的结合通常是非共价相互作用，例如氢键、库仑键、Ca++桥和利弗席兹-范德华(Lifshitz-van der Waals)键等。所述结合通常发生在体内。
每个H或H1、H2或H3(如适用)都可以独立地选自不同的半抗原。在某些实施方案中，当n＝2时，所述半抗原的是不同的半抗原。当n＝3或更大时，两个或更多个所述半抗原可以是相同的。可使用的半抗原包括但不限于鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基(DNP)片段、三硝基苯基(TNP)片段、荧光素片段、地高辛片段、生物素片段或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒(HPV)、流感病毒抗原(例如血凝素或神经氨酸酶)、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒(HSV)、水痘病毒、甲型肝炎病毒(HAV)抗原(例如L-HbsAg、S-HbsAg、M-HbsAg和preS)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、庚型肝炎病毒(HGV)、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒(HIV)(例如gp120或gp160)、巨细胞病毒(CMV)、水泡性口炎病毒(例如糖蛋白)、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。
在一些实施方案中，所述半抗原各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分和DNP片段。在一些实施方案中，当n为2时，所述半抗原是鼠李糖片段和DNP片段。
半抗原可以是gp120或gp160。所述半抗原可以是糖蛋白。
所述缀合物的靶向配体可以特异性识别靶向受体，例如靶细胞表面上的靶蛋白。所述靶细胞可以是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞。
通过将所述半抗原特异性递送至所述靶向配体识别的细胞，本文中所述缀合物可以对恶性细胞、病毒感染细胞、免疫细胞和表面上有靶蛋白的任何其他细胞表现出高选择性，同时还可以降低附带毒性。目前为止，许多癌症已经通过靶向肿瘤细胞上过表达受体的小分子配体靶向药物缀合物进行治疗。这些过表达受体包括但不限于叶酸受体(FR)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、胆囊收缩素2受体(CCK2R)、碳酸酐酶IX(CA IX)等。所述缀合物的靶向配体可以对任何此类过表达受体具有特异性。
所述靶向配体也可以对病毒包膜蛋白具有特异性。例如，所述靶蛋白可以是病毒的包膜蛋白或病毒感染细胞表面上病毒包膜蛋白。
例如，流感病毒是包膜病毒。所有流感亚型在总体结构和组成上都非常相似；也就是说，病毒颗粒的直径为80-120纳米，其病毒包膜含有两种主要类型的糖蛋白，包裹在中央核心周围。所述中央核心含有病毒核糖核酸(RNA)基因组与其他包装和保护此类RNA的病毒蛋白质。与病毒不同的是，流感病毒的基因组不是单段核酸，而是七或八段分段负义RNA，每段RNA含有一个或两个编码基因产物(蛋白质)的基因。例如，甲型流感基因组在8段RNA上含有11个基因，编码11种蛋白质：血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、M1、M2、NS1、NS2(NEP：核输出蛋白)、PA、PB1(聚合酶碱性蛋白1)、PB1-F2和PB2。
HA和NA是病毒颗粒外侧的两种大型糖蛋白。HA是凝集素，可以介导所述病毒与靶细胞的结合以及病毒基因组进入靶细胞，而NA通常通过切割结合成熟病毒颗粒的糖参与子代病毒从感染细胞的释放。所述靶蛋白可以是流感NA或流感HA。
在本文中所述缀合物的一些实施方案中，所述靶向配体是NA或HA抑制剂，可用于将所述缀合物递送到病毒感染细胞和/或病毒复制位点(例如鼻、喉和肺部)。这能够在所述子代病毒释放之前杀死病毒感染细胞，从而阻碍病毒复制，和/或抑制病毒感染引起的早期细胞因子风暴。在某些实施方案中，所述靶向配体是奥司他韦片段、扎那米韦片段、帕拉米韦片段或拉尼米韦片段。在某些实施方案中，所述靶向配体是扎那米韦。
在其他实施方案中，所述靶蛋白选自呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白F、冠状病毒刺突蛋白、乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原或HBV核心抗原、癌症细胞上的细胞表面受体、叶酸受体α、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、促黄体激素释放受体(LHRH)、神经激肽1受体(NK1R)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)或髓系来源抑制细胞上的表面受体、叶酸受体β、癌症相关成纤维细胞上的表面受体和成纤维细胞激活蛋白(FAP)。
在某些实施方案中，所述靶向配体是叶酸(叶酸盐，folate)或其类似物，例如5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)。“叶酸(叶酸盐，folate)”是指叶酸受体结合分子，包括例如叶酸和叶酸的类似物及衍生物，例如但不限于亚叶酸、蝶酰基聚谷氨酸、蝶酰基-D-谷氨酸和叶酸受体结合的蝶啶(例如四氢蝶呤)、二氢叶酸盐、四氢叶酸盐及其脱氮杂和二脱氮杂类似物。
术语“脱氮杂”和“二脱氮杂”类似物是指在天然存在的叶酸结构中用碳原子取代一个或两个氮原子的本领域公认的类似物，或其类似物或衍生物。例如，所述脱氮杂类似物可以包括叶酸盐、亚叶酸、蝶酰聚谷氨酸和叶酸受体结合蝶啶(例如四氢蝶呤)、二氢叶酸盐和四氢叶酸盐的1-脱氮杂类似物、3-脱氮杂类似物、5-脱氮杂类似物、8-脱氮杂类似物和10-脱氮杂类似物。所述二脱氮杂类似物包括，例如叶酸盐的1,5-二脱氮杂类似物、5,10-二脱氮杂类似物、8,10-二脱氮杂类似物和5,8-二脱氮杂类似物。在本公开的语境下，可用作复合物形成配体的其他叶酸盐是叶酸受体结合类似物培美曲塞、氯胍、乙嘧啶、甲氧苄啶、普拉曲沙、雷替曲塞、氨基蝶呤、氨甲蝶呤(也称为甲氨蝶呤)、N10-甲基叶酸盐、2-脱氨基-羟基叶酸盐、脱氮杂类似物，例如1-脱氮杂氨甲蝶呤或3-脱氮杂氨甲喋呤，以及3′,5′-二氯-4-氨基-4-脱氧-N10-甲基蝶酰谷氨酸(二氯甲氨喋呤)。
叶酸和上述类似物和/或衍生物也被称为“叶酸盐”、“所述叶酸盐”或“叶酸盐”(folates)，反映了它们与叶酸受体结合的能力。如本文所述，当与外源性分子缀合时，这些分子能有效增强跨膜转运，例如通过叶酸盐介导的内吞作用。上述物质可用于本文所述的叶酸受体靶向配体。
在许多实施方案中，所述缀合物包含将每个半抗原偶联或以其他方式连接到所述靶向配体的接头(L)。在许多实施方案中，所述缀合物包含接头La、Lb、Lc。在一些实施方案中，所述缀合物包含接头La、Lb、Lc和Ld。当所述缀合物包含一个以上的接头(例如La、Lb、Lc和任选地Ld)时，所述接头可以相同或不同。例如但不限于，La、Lb、Lc和Ld中的每一个都可以具有相同的结构。或者，一个或更多个所述接头可以具有与至少一个其他接头相比不同的结构。在某些实施方案中，La包含第一结构，并且Lb、Lc和Ld(当存在时)包含第二结构。在某些实施方案中，Lb、Lc和Ld(当存在时)包含彼此不同的结构。
如本文所用，术语“接头”包括在生物功能上适于与TL和/或半抗原和/或碳原子形成化学键的原子链，并连接分子的两个或更多个功能部分以形成本文中缀合物。示例性地，所述原子链可以选自碳(C)、氮(N)、氧(O)、硫(S)、硅(Si)和磷(P)。所述原子链可以共价连接所述缀合物的不同功能部分(functional capabilities)，例如所述靶向部分和半抗原。所述接头可以包含各种各样的连接，例如连续主链中范围是约2至约100个原子的连接。所述接头可以包含缓释接头(例如，不可水解接头)。
在所述缀合物包含两个半抗原的某些实施方案中，所述缀合物可以包含至少三个接头——第一接头将所述靶向部分连接到碳原子，第二接头将所述碳原子连接到第一半抗原，第三接头将所述碳原子连接到第二半抗原，如式IA和式IB半抗原所示的那样，所述第二接头将所述靶向部分连接到所述第二半抗原。或者，所述缀合物可以包含将所有半抗原连接到所述靶向部分的单个支链接头(参见，例如，式I)。在某些实施方案中，所述接头是支链接头，并且所述缀合物的至少两个半抗原连接到所述接头的不同支链。例如，所述接头可以包含主链，所述主链包含从其延伸的至少两个支链(例如，2个支链、3个支链等)。所述不同的支链可以包含与主链和/或其他支链相同的结构或不同的结构。例如，所述不同的支链可以从主链接头的不同原子延伸，或者从同一原子延伸(例如，如式IA和式IB所示)。
在许多实施方案中，所述接头包含聚乙二醇(PEG)接头、PEG衍生物接头、肽、烷基基团、肽聚糖或上述两种或更多种的组合。在一些实施方案中，所述PEG接头可以包含(-CH2CH2-O-)n，其中n是介于并包括1和32的整数。在某些实施方案中，所述PEG接头的n是介于1和16并包括1和16的整数。在某些实施方案中，所述接头是任选地取代的杂烷基。
在一些实施方案中，所述接头是取代的杂烷基，包含至少一个选自由以下组成的组的取代基：烷基、羟基、氧代基、PEG、羧酸酯和卤代基。除非另有说明，否则“卤代基”或“卤素”本身或作为另一个取代基的一部分是指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。
在一些实施方案中，所述接头包括间隔物。在一些实施方案中，所述间隔物包含肽聚糖或糖。
所述接头可以包含C2-C18烷基基团、肽片段或肽聚糖片段。如本文所用，术语“片段”是指已被修饰以能够在所述缀合物中以单价连接(例如靶向配体或半抗原的情况)或二价连接(例如接头(L)的情况)进行连接的分子。例如，术语“扎那米韦片段”是指扎那米韦经化学修饰，使其能够制备成共价结合接头的靶向配体。就扎那米韦而言，缺少质子(例如来自醇的质子)，从而在相应的氧上产生开放价态，该氧进而与所述接头L结合。通常，最靠近扎那米韦二氢吡喃环的醇氧与接头L形成键。同样地，半抗原片段是基于相应分子的部分，这些分子已经适于与所述接头L连接。就所述接头L而言，相应的片段具有开放价态以能够与其他接头部分、靶向配体和/或半抗原结合。例如，就PEG而言，术语(-CH2CH2-O-)n是指两侧均结合到另一部分(例如另一接头组分)的片段。使用术语“片段”并不需要从合成的角度来看；它所指的分子是在所述缀合物的制备过程中产生的。它描述的是所述缀合物中的部分，无论其是如何制备的。
任选地，所述缀合物可以与抗体复合，例如在体内复合。这种复合可以按半抗原与不同的抗体进行。
在本公开许多实施方案中，所述缀合物具有式I的结构：
或者是其药学上可接受的盐，其中L1、L2和L3各自是接头。在某些实施方案中，L1、L2和L3各自独立地包含PEG部分、烷基基团、肽基团和肽聚糖基团。在某些实施方案中，所述PEG部分(-CH2CH2-O-)n的n范围介于并包括1至16。所述烷基基团可以是介于并包括2至约18个碳(例如18个碳)之间的烷基链。例如，L1、L2和L3可以各自独立地包含C2-C18烷基基团。L1、L2和L3可以各自独立地包含肽片段或肽聚糖片段。
在某些实施方案中，L1包含酰胺(可以任选地被烷基基团取代)、PEG部分、任选地被取代或未被取代的三唑部分其中如果被取代则取代可以是羰基烷基基团和可以任选地被烷基基团取代的酰胺。此外，在某些实施方案中，L1中的酰胺直接与式I所示的扎那米韦片段的氧结合，从而与所述氧形成氨基甲酸酯部分。在某些实施方案中，L1、L2和L3交叉处的叔碳与L1的酰胺的氮键合。在某些实施方案中，所述PEG部分的一侧与酰胺结合，另一侧与酰胺或取代或未取代的三唑部分结合。所述PEG部分可以表示为(-CH2CH2-O-)n，其中n可以介于并包括1和32，介于并包括2和16，介于并包括3和8，介于并包括4和7。在一些实施方案中，n是6。
在某些实施方案中，L2包含任选被烷基基团取代的酰胺部分和PEG部分。所述PEG部分可以表示为(-CH2CH2-O-)n，其中n通常可以介于并包括1和32，介于并包括2和16，介于并包括3和8，以及介于并包括3和5。在一些实施方案中，n是4。
在某些实施方案中，L3包含烷基酰胺基团、羰基烷基基团、醚烷基基团和任选被烷基基团取代的氨基基团。在一些实施方案中，L3包含PEG。在一些实施方案中，L3包含表示为(-CH2CH2-O-)n的PEG，其中n可以介于并包括1和32。
在某些实施方案中，提供了一种具有化合物24结构的双半抗原缀合物：
或者是其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，提供了一种具有化合物100结构的三半抗原缀合物：
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，所述缀合物是具有化合物101结构的双半抗原缀合物：
或者是其药学上可接受的盐，其中Ac是乙酸盐。
在某些实施方案中，所述缀合物包含叶酸盐靶向部分。在某些实施方案中，所述缀合物是叶酸盐双半抗原缀合物。在某些实施方案中，所述缀合物是叶酸盐双半抗原缀合物，并具有化合物150的结构：
或者是其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，化合物24、100、101和/或150结构中的一个或更多个羟基(-OH)基团可以独立地被巯基、磷酸酯或膦酸酯或-OC(＝O)R1取代，其中R1是烷基基团。在这些实施方案中，氨基(-NH2)基团可以被-OC(＝O)R2取代，其中R2是烷基基团。在这些和其他实施方案中，羧基(-COOH)基团可以被-OC(＝O)R3取代，其中R3是烷基基团。R2和R3可以各自为例如C1至C6烷基基团。
任选地，本文中所述缀合物(例如化合物24、化合物100、化合物101或化合物150)在体内与抗体复合。这种复合可以按半抗原与不同的抗体进行。
在某些实施方案中，提供了制备本文中所述缀合物的方法。例如，化合物24的缀合物可以如实施例1所述制备，和/或化合物150的缀合物可如实施例19所述制备。同样地，本文中的其他缀合物可以根据实施例1和/或19的所述方法以及本领域已知的此类其他方法制备。
在某些实施方案中，将所述缀合物配制为前药。术语“前药”是指缀合物的衍生物，其可以在生物条件(体外或体内)下水解、氧化或以其他方式反应，以提供活性化合物或缀合物，特别是本文公开的多半抗原缀合物。前药的实例包括但不限于本文中缀合物的衍生物和代谢物，其包括生物水解部分，例如生物水解酰胺、生物水解酯、生物水解氨基甲酸酯、生物水解碳酸酯、生物水解酰脲和生物水解磷酸酯类似物。具有羧基官能团的化合物的特定前药是羧酸的低级烷基酯。羧酸酯是通过酯化所述分子上存在的任何羧酸部分而方便地形成的。前药通常可以使用众所周知的方法制备，例如Burger’s Medicinal Chemistryand Drug Discovery 6th ed.(Donald J.Abraham ed.,2001,Wiley)和Design andApplication of Prodrugs(H.Bundgaard ed.,1985,Harwood Academic PublishersGmbH)所述的方法。
将所述缀合物配制成前药可以加入保护基团，可以进一步减缓所述缀合物在体内的水解。在施用所述前药以对靶向区域中的免疫细胞进行重新编程和/或减缓靶向区域中细胞因子激活的情况下，这可能是有益的。
所述化合物和任选地一种或更多种其他治疗剂可以以其本身(纯形式)或以药学上可接受的盐的形式施用。当用于药物时，所述盐应该是药学上可接受的，但非药学上可接受的盐可以方便地用于制备其药学上可接受的盐。此类盐包括但不限于由以下酸制备的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲烷磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。此外，此类盐可以制备成碱金属盐或碱土金属盐，例如羧酸基团的钠盐、钾盐或钙盐。
合适的缓冲剂包括乙酸和盐(1-2％w/v)；柠檬酸和盐(1-3％w/v)；硼酸和盐(0.5-2.5％w/v)；以及磷酸和盐(0.8-2％w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵(0.003-0.03％w/v)；氯丁醇(0.3-0.9％w/v)；对羟基苯甲酸酯(0.01-0.25％w/v)和硫柳汞(0.004-0.02％w/v)。
本文所述化合物的盐(例如药学上可接受的盐)可以通过各种方法制备，例如在色谱纯化期间将酸包含在流动相中，或色谱纯化后的产物与酸溶液一起搅拌。
本文中所述缀合物可以是“氘代的”，意味着一个或更多个氢原子可以被氘取代。由于氘和氢具有几乎相同的物理性质，氘取代是可以进行的最小结构变化。氘代对于本领域普通技术人员来说是众所周知的。
在一些实施方案中，所述缀合物可以含有一个或更多个不对称中心，从而产生对映体、非对映体和其他立体异构形式，这些形式在绝对立体化学方面被定义为(R)-或(S)-。在某些实施方案中，所述缀合物具有R-构型。在某些实施方案中，所述缀合物具有S构型。除非另有说明，否则应考虑所述缀合物的所有立体异构形式。当所述缀合物含有烯烃双键时，除非另有说明，否则应包括E和Z几何异构体(例如顺式或反式)和/或光学异构体。在某些实施方案中，例如，缀合物的D和A以相对顺式取向排列。在某些实施方案中，缀合物的D和A以相对反式取向排列。同样地，还旨在包括所有可能的异构体，以及它们的外消旋形式和光学纯形式，以及所有互变异构形式。术语“几何异构体”是指烯烃双键的E或Z几何异构体(例如顺式或反式)。术语“位置异构体”是指中心环周围的结构异构体，例如苯环周围的邻位、间位和对位异构体。
此外，在每个上述和以下实施方案中，应理解的是，所述式不仅包括并表示所述缀合物的所有药学上可接受的盐，还包括所述缀合物式或其盐的任何和所有水合物和/或溶剂化物。事实上，还可以考虑所述缀合物的水合物、溶剂化物和N-氧化物。术语“溶剂化物”是指缀合物或其盐，其还包括化学计量或非化学计量量的以非共价分子间力结合的溶剂。当所述溶剂是水时，所述溶剂化物是水合物。
应当理解，某些官能团(例如羟基、氨基等基团)与水和/或各种溶剂形成复合物和/或配位化合物，以所述缀合物的各种物理形式存在。因此，上述式应理解为包括并表示这些各种水合物和/或溶剂化物。
在每个上述和以下实施方案中，还应理解的是，所述式包括并表示所述缀合物的任何和所有结晶形式、部分结晶形式以及非结晶和/或无定形形式。
药物组合物
还提供了药物组合物。所述药物组合物可以包含本文所述的任何缀合物(例如，式I的缀合物)或其药学上可接受的盐，以及一种或更多种药学上可接受的赋形剂或载体。术语“组合物”通常是指包含一种以上成分的任何产物，包括所述缀合物。所述组合物可以由分离的缀合物或由盐、溶液、水合物、溶剂化物和其他形式的所述缀合物制备。
在某些实施方案中，所述药物组合物包含多种缀合物(例如两种或更多种)和药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，药物组合物还包含至少一种额外的药物活性剂。所述至少一种额外的药物活性剂可以是用于治疗病毒感染、纤维化或癌症的药剂。
药物组合物可以通过根据本领域已知和下文所述的方法将一种或更多种缀合物与药学上可接受的赋形剂和任选地一种或更多种额外的药物活性剂组合来制备。
本文中所述药物组合物可以包含一种或更多种药学上可接受的载体、佐剂、稀释剂、赋形剂和/或媒介物(例如，常规无毒的药学上可接受的载体、佐剂和媒介物)及它们的组合。可以使用本领域已知的任何药学上可接受的载体、稀释剂和赋形剂。实例包括但不限于赋形剂、着色剂、防腐剂和稳定剂。更具体的实例包括晶体纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素和硬脂酸镁。
所述缀合物或药物组合物的溶液可以是水性的，任选地与无毒表面活性剂混合，和/或可以含有载体或赋形剂，例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选pH为3至9)，但对于某些应用，它们可以更合适地配制成无菌非水性溶液或干燥形式，以便与合适的媒介物(例如无菌、无热原的水或磷酸盐缓冲盐水)结合使用。例如，分散体可以在甘油、液体PEG、三乙酸甘油酯及它们的混合物和油中制备。在正常的储存和使用条件下，这些制剂还可以含有防腐剂，以防止微生物的生长。
所述缀合物可以配制成药物组合物，并以适于所选施用途径的各种形式施用于哺乳动物宿主，例如人类患者。所述药物组合物可以配制，例如用于给定的施用途径，并根据本领域的方法制造，并且例如在Remington,The Science and Practice of Pharmacy,22ndedition(2012)中进行说明。所述组合物可以是输注或可注射组合物，例如可以皮下或静脉注射的组合物。
所述药物组合物可以以适于所选施用途径的各种形式施用于哺乳动物宿主，例如人类患者。在某些实施方案中，所述药物组合物被配制成皮下施用。在某些实施方案中，所述药物组合物被配制成口服施用。在某些实施方案中，所述药物组合物被配制为肌肉施用、静脉施用、动脉施用、腹腔内施用，或以任何其他本领域公认的肠胃外施用途径施用。
所述药物组合物可以与药学上可接受的媒介物联合进行全身施用。所述组合物和制剂的组分百分比可以变化，并且可以是活性成分(例如所述化合物或缀合物)和粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂和/或甜味剂(例如本领域已知的)的约1至约99％重量。在这种具有治疗作用的组合物中，活性缀合物的量可以获得有效剂量水平(例如，在血清或靶组织或靶细胞中)。
肠胃外施用的示例性方式包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输注技术，以及本领域公认的任何其他肠胃外施用的方式。肠胃外配制物通常是水性溶液，可以含有赋形剂，例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选pH范围是约3至约9)，但对于某些应用，它们可能更适合配制成无菌非水性溶液或干燥形式，以便与合适的媒介物(例如无菌、无热原水)结合使用。在无菌条件下，例如通过冻干制备肠胃外配制物，可以使用本领域技术人员熟知的标准制药技术很容易地实现。
适于施用的药物剂型可以包括无菌水性溶液或分散体或无菌粉末，包含适于即时制备无菌可注射或可输注的溶液或分散体的活性成分，所述成分任选地包封在脂质体、纳米晶体或聚合物纳米颗粒中。在所有情况下，最终剂型在生产和储存条件下都应该是无菌、流动和稳定的。液体载体或媒介物可以是溶剂或液体分散介质，包含例如但不限于水、电解质、糖、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯和/或其合适的混合物。在至少一个实施方案中，可以通过形成脂质体、在分散体的情况下保持所需粒径或使用表面活性剂来保持所需的流动性。
无菌可注射溶液可以通过在所需量的适当溶剂中将所述药物组合物与上述其他成分如需的一种或更多种结合，然后进行过滤灭菌来制备。在制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，可以采用真空干燥和冷冻干燥技术，这可以产生活性成分以及之前无菌过滤溶液中存在的任何其他所需成分的粉末。
方法
此外，鉴于上述情况，还提供了一种治疗受试者病毒感染的方法。所述方法可以包含给所述受试者口服(例如，约0.01μm/kg至约10μm/kg的所述缀合物)或静脉施用有效量的上述缀合物、前药或组合物以及药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，“有效量”是指有效治疗病毒感染(例如流感)的量。所述方法还可以包含施用自体抗体或同种异体免疫球蛋白G(IgG)抗体。
所述病毒感染可能是流感。所述病毒感染可以是甲型流感。所述病毒感染可能是乙型流感。所述方法可以引发免疫反应，从而通过抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)清除抗体(Ab)包被的病毒或抗体包被的感染细胞。
进一步鉴于上述情况，还提供了一种治疗受试者癌症的方法。所述方法包含向所述受试者施用有效量的上述缀合物、前药或组合物以及药学上可接受的赋形剂。所述方法还可以包含施用自体抗体、同种异体IgG抗体或IVIG。
所述癌症可以是肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头部癌症、颈部癌症、皮肤黑色素瘤、眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌(endometrial cancer)、上皮癌、平滑肌肉瘤、直肠癌、胃癌(stomach cancer)、结肠癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌(carcinoma of the endometrium)、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病(Hodgkin’sDisease)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性白血病、急性白血病、淋巴细胞淋巴瘤、胸膜间皮瘤、膀胱癌、胃癌(gastric cancer)、伯基特(Burkitt)淋巴瘤、输尿管癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、胆管癌、许特尔(Hurthle)细胞甲状腺癌和胃食管交界处腺癌。所述癌症是肺癌、三阴性乳腺癌、结肠癌、胃癌(gastric cancer)、膀胱癌、前列腺癌或胰腺癌。
在某些实施方案中，所述癌症是热癌症。用检查点抑制剂治疗无效且通常免疫浸润低的癌症通常被称为“冷”癌症。相反，对治疗有反应的癌症或肿瘤通常被称为“热”癌症，通常在癌症细胞表面具有受体，并可能在所述受试者体内引发强烈的免疫反应。所述热癌症可能是肾癌。所述热癌症可能是肺癌。所述热癌症可能是结直肠癌。
还提供联合疗法。在用于治疗病毒感染或癌症的方法的某些实施方案中，所述方法还包含对所述受试者施用第二疗法。在治疗癌症的方法的情况下，所述第二疗法可以包含施用化疗(例如，有效量的化疗)。所述第二疗法可以包含施用(例如有效量)舒尼替尼。所述第二疗法可以包含施用(例如有效量)PD-1抑制剂。所述第二疗法可以包含施用(例如有效量)PDL-1抑制剂。
所述第二疗法可以包含施用(例如有效量)叶酸盐toll样受体7(FA-TLR7)激动剂缀合物。由于FA-TLR7激动剂可以通过将促肿瘤巨噬细胞转化为抗肿瘤巨噬细胞来重新编程肿瘤微环境(TME)中激活的巨噬细胞，因此这可以与化合物150发挥协同作用，以进一步减少肿瘤生长。
在某些实施方案中，所述第二疗法包含化疗、放疗、舒尼替尼、PD-1抑制剂或PDL-1抑制剂中的一种或更多种。在某些实施方案中，所述方法还包含对所述受试者成像(例如，使用已知的成像模式)以捕捉癌症(例如，癌性肿瘤)的图像。
还提供了一种治疗受试者纤维化的方法。所述方法包含向所述受试者施用有效量的上述缀合物、前药或组合物以及药学上可接受的赋形剂。所述方法还可以包含施用自体抗体、同种异体IgG抗体或IVIG。
还提供了激活受试者(例如受试者的靶向区域，例如TME)免疫反应的方法。在某些实施方案中，用于激活受试者免疫反应的方法包含向所述受试者施用有效量的上述缀合物、前药或组合物以及药学上可接受的赋形剂。所述免疫反应可以是先天免疫反应。所述免疫反应可以在所述受试者的靶向区域(例如TME或病毒复制位点的位置(例如，靠近一个或更多个病毒感染细胞))被激活。在施用前药的情况下，这种前药可以进一步减缓基础缀合物的水解和/或减缓细胞因子在所述受试者靶向区域的激活。
所述激活免疫反应的方法还可以包含向所述受试者施用自体抗体、同种异体IgG抗体或人类IVIG。
施用有效量的所述缀合物或组合物可以在所述靶向区域诱导M2型巨噬细胞重新编程为M1型巨噬细胞。通常，在没有任何预期限制的情况下，本文中的新型缀合物、组合物和方法可以靶向受试者先天免疫系统，并将巨噬细胞的极化从M2型重新编程为M1型，以有利于M1型表型的促炎特性。例如，在至少一个示例性实施方案中，此类缀合物和组合物包含靶向叶酸受体(例如FRβ)的靶向部分，例如通过接头与两个或更多个半抗原偶联的叶酸受体结合配体，或其类似物、功能片段、衍生物或自由基(例如蝶酰基氨基酸)。这样的实施方案利用所述叶酸受体的有限表达将全身施用的缀合物和组合物直接定位到叶酸盐表达细胞(例如癌组织的细胞)，使得所述半抗原组分然后可以结合所需的抗体，将免疫细胞募集到靶位点，并将激活的髓系细胞(例如M2样巨噬细胞)重新编程为促炎性M1极化。这种靶向设计有利地防止了免疫系统的全身激活(即减少了对这种缀合物/组合物的全身暴露)，从而避免了毒性，同时促进了所述受试者自身免疫系统在靶位点或其附近的激活。如上所述，在某些实施方案中，本文中所述缀合物或组合物可以与包含施用有效量的FA-TLR7激动剂的第二疗法一起施用，所述激动剂可以通过进一步促进激活的巨噬细胞转化为抗肿瘤(M1样)巨噬细胞与本文中所述缀合物/组合物发挥协同作用。
术语“治疗”(treat)、“治疗”(treating)、“治疗”(treated)或“治疗”(treatment)(就疾病或病况而言)是获得有益或所需结果(包括并优选临床结果)的方法，并且包括但不限于以下一项或更多项：改善与疾病相关的病况、治愈疾病、减轻疾病的严重程度、延缓疾病进展、缓解与疾病有关的一种或更多种症状、提高患病者的生活质量、延长生存期和/或进行防范性(prophylactic)或预防性(preventative)治疗。
“有效量”和“治疗有效量”是指足以达到所需生物效果的任何量。结合本文提供的教导，通过在各种活性缀合物中进行选择并权衡因素(例如效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的严重程度和施用方式)，可以规划有效的防范性或治疗性方案，所述方案不会引起严重的不必要毒性，但能有效治疗特定受试者。任何特定应用的有效量可以根据诸如正在治疗的感染、癌症或其他病况，正在施用的特定缀合物或组合物，同时或连续进行的治疗，所述受试者的体型或疾病或病况的严重程度等因素而变化。本领域普通技术人员可以凭经验确定特定化合物和/或其他治疗剂的有效量，而不需要进行过多的实验。可以使用最大剂量，即根据一些医学判断的最高安全剂量。每天多次剂量可用于使化合物达到适当的全身水平。可以通过例如测量患者血浆中药物的峰值或持续水平来确定适当的全身水平。“剂量”(Dose)和“剂量”(dosage)在本文中可以互换使用。
通常，对于人类受试者，化合物的每天口服剂量为每天约0.01毫克/kg至每天1,000毫克/kg。口服剂量范围是0.5至50毫克/kg，每天施用一次或更多次，可以产生治疗效果。根据施用方式，可以适当调整剂量以达到所需的局部或全身药物水平。例如，静脉施用的剂量可以从每天低一个数量级到低几个数量级不等。如果受试者在这种剂量下的反应不足，在患者耐受性允许的范围内，可以采用更高的剂量(或通过不同的、更局部的递送途径使用有效的更高剂量)。为使所述缀合物达到适当的全身水平，考虑每天进行多次剂量，例如每天两次剂量。
关于治疗中使用的缀合物(在本文中与“化合物”可互换使用)的“有效量”(或“治疗(在治疗方面)有效量”)是指制剂中所述化合物的量，当作为所需剂量方案的一部分(向哺乳动物，例如人类)施用时，根据待治疗病症或病况或美容目的的临床可接受标准，例如以适用于任何医学治疗的合理效益/风险比，减轻症状、改善病况或减缓疾病病况的发作。
对于任何缀合物，治疗有效量最初可以从动物模型确定。对于已经对人类进行过测试的化合物和已知表现出类似药理活性的化合物(例如其他相关活性剂)，也可以从人类数据中确定治疗有效剂量。肠胃外施用可能需要更高的剂量。所施加的剂量可以基于所施用化合物的相对生物利用度和效力进行调整。基于上述方法和本领域公知的其他方法调整剂量以实现最高疗效完全在本领域技术人员的能力范围内。
对于临床使用，任何化合物的施用量可以等于或相当于所述受试者每天每千克(kg)体重0.2-2,000毫克(mg)的化合物。所述化合物施用的剂量可以等于或相当于所述受试者每天每kg体重2-2,000mg化合物。所述化合物施用的剂量可以等于或相当于所述受试者每天每kg体重20-2,000mg化合物。所述化合物施用的剂量可以等于或相当于所述受试者每天每kg体重50-2,000mg化合物。所述化合物施用的剂量可以等于或相当于所述受试者每天每kg体重100-2,000mg化合物。所述化合物施用的剂量可以等于或相当于所述受试者每天每kg体重200-2,000mg化合物。如果待施用化合物的前体或前药，则其施用量相当于，即足以递送上述量的所述化合物。
所述化合物的配制物可以以治疗有效量施用于人类受试者。典型的剂量范围为每天约0.01微克/kg至约2mg/kg体重。待施用的药物剂量很可能取决于多种变量，例如病症的类型和程度、特定受试者的整体健康状况、所施用的特定化合物、用于配制所述化合物的赋形剂及其施用途径。常规实验可用于优化任何特定化合物的剂量和给药频率。
所述缀合物施用的浓度范围可以是约0.001微克/kg至大于约500mg/kg。例如，浓度可以是0.001微克/kg、0.01微克/kg、0.05微克/kg、0.1微克/kg、0.5微克/kg、1.0微克/kg、10.0微克/kg、50.0微克/kg、100.0微克/kg、500微克/kg、1.0mg/kg、5.0mg/kg、10.0mg/kg、15.0mg/kg、20.0mg/kg、25.0mg/kg、30.0mg/kg、35.0mg/kg、40.0mg/kg、45.0mg/kg、50.0mg/kg、60.0mg/kg、70.0mg/kg、80.0mg/kg、90.0mg/kg、100.0mg/kg、150.0mg/kg、200.0mg/kg、250.0mg/kg、300.0mg/kg、350.0mg/kg、400.0mg/kg、450.0mg/kg，至大于约500.0mg/kg或其任何增量值。应当理解，这些数值和范围之间的所有数值和范围都意在涵盖在内。
所述缀合物施用的剂量范围可以是约0.2毫克/kg/天至大于约100mg/kg/天。例如，剂量可以是0.2mg/kg/天至100mg/kg/天、0.2mg/kg/天至50mg/kg/天、0.2mg/kg/天至25mg/kg/天、0.2mg/kg/天至10mg/kg/天、0.2mg/kg/天至7.5mg/kg/天、0.2mg/kg/天至5mg/kg/天、0.25mg/kg/天至100mg/kg/天、0.25mg/kg/天至50mg/kg/天、0.25mg/kg/天至25mg/kg/天、0.25mg/kg/天至10mg/kg/天、0.25mg/kg/天至7.5mg/kg/天、0.25mg/kg/天至5mg/kg/天、0.5mg/kg/天至50mg/kg/天、0.5mg/kg/天至25mg/kg/天、0.5mg/kg/天至20mg/kg/天、0.5mg/kg/天至15mg/kg/天、0.5mg/kg/天至10mg/kg/天、0.5mg/kg/天至7.5mg/kg/天、0.5mg/kg/天至5mg/kg/天、0.75mg/kg/天至50mg/kg/天、0.75mg/kg/天至25mg/kg/天、0.75mg/kg/天至20mg/kg/天、0.75mg/kg/天至15mg/kg/天、0.75mg/kg/天至10mg/kg/天、0.75mg/kg/天至7.5mg/kg/天、0.75mg/kg/天至5mg/kg/天、1.0mg/kg/天至50mg/kg/天、1.0mg/kg/天至25mg/kg/天、1.0mg/kg/天至20mg/kg/天、1.0mg/kg/天至15mg/kg/天、1.0mg/kg/天至10mg/kg/天、1.0mg/kg/天至7.5mg/kg/天、1.0mg/kg/天至5mg/kg/天、2mg/kg/天至50mg/kg/天、2mg/kg/天至25mg/kg/天、2mg/kg/天至20mg/kg/天、2mg/kg/天至15mg/kg/天、2mg/kg/天至10mg/kg/天、2mg/kg/天至7.5mg/kg/天，或2mg/kg/天至5mg/kg/天。
所述缀合物施用的剂量范围可以是约0.25毫克/kg/天至约25mg/kg/天。例如，剂量可以是0.25mg/kg/天、0.5mg/kg/天、0.75mg/kg/天、1.0mg/kg/天、1.25mg/kg/天、1.5mg/kg/天、1.75mg/kg/天、2.0mg/kg/天、2.25mg/kg/天、2.5mg/kg/天、2.75mg/kg/天、3.0mg/kg/天、3.25mg/kg/天、3.5mg/kg/天、3.75mg/kg/天、4.0mg/kg/天、4.25mg/kg/天、4.5mg/kg/天、4.75mg/kg/天、5mg/kg/天、5.5mg/kg/天、6.0mg/kg/天、6.5mg/kg/天、7.0mg/kg/天、7.5mg/kg/天、8.0mg/kg/天、8.5mg/kg/天、9.0mg/kg/天、9.5mg/kg/天、10mg/kg/天、11mg/kg/天、12mg/kg/天、13mg/kg/天、14mg/kg/天、15mg/kg/天、16mg/kg/天、17mg/kg/天、18mg/kg/天、19mg/kg/天、20mg/kg/天、21mg/kg/天、22mg/kg/天、23mg/kg/天、24mg/kg/天、25mg/kg/天、26mg/kg/天、27mg/kg/天、28mg/kg/天、29mg/kg/天、30mg/kg/天、31mg/kg/天、32mg/kg/天、33mg/kg/天、34mg/kg/天、35mg/kg/天、36mg/kg/天、37mg/kg/天、38mg/kg/天、39mg/kg/天、40mg/kg/天、41mg/kg/天、42mg/kg/天、43mg/kg/天、44mg/kg/天、45mg/kg/天、46mg/kg/天、47mg/kg/天、48mg/kg/天、49mg/kg/天，或50mg/kg/天。
所述缀合物或其前体施用的浓度范围可以是0.01微摩尔至大于或等于500微摩尔。例如，剂量可以是0.01微摩尔、0.02微摩尔、0.05微摩尔、0.1微摩尔、0.15微摩尔、0.2微摩尔、0.5微摩尔、0.7微摩尔、1.0微摩尔、3.0微摩尔、5.0微摩尔、7.0微摩尔、10.0微摩尔、15.0微摩尔、20.0微摩尔、25.0微摩尔、30.0微摩尔、35.0微摩尔、40.0微摩尔、45.0微摩尔、50.0微摩尔、60.0微摩尔、70.0微摩尔、80.0微摩尔、90.0微摩尔、100.0微摩尔、150.0微摩尔、200.0微摩尔、250.0微摩尔、300.0微摩尔、350.0微摩尔、400.0微摩尔、450.0微摩尔，至大于约500.0微摩尔或其任何增量值。应当理解，这些数值和范围之间的所有数值和范围都意在涵盖在内。
所述缀合物或其前体施用的浓度范围可以是0.10微克/mL至500.0微克/mL。例如，浓度可以是0.10微克/mL、0.50微克/mL、1微克/mL、2.0微克/mL、5.0微克/mL、10.0微克/mL、20微克/mL、25微克/mL、30微克/mL、35微克/mL、40微克/mL、45微克/mL、50微克/mL、60.0微克/mL、70.0微克/mL、80.0微克/mL、90.0微克/mL、100.0微克/mL、150.0微克/mL、200.0微克/mL、250.0g/mL、250.0微克/mL、300.0微克/mL、350.0微克/mL、400.0微克/mL、450.0微克/mL，至大于约500.0微克/mL或其任何增量值。应当理解，这些数值和范围之间的所有数值和范围都意在涵盖在内。
所述配制物可以以药学上可接受的溶液施用，所述溶液通常含有药学上可接受浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体、佐剂和任选地其他治疗成分。为了用于疗法，可以通过将所述缀合物递送到所需表面的任何模式向受试者施用有效量的所述缀合物。施用药物组合物可以通过本领域技术人员已知的任何方式来实现。施用途径包括但不限于静脉、肌肉、腹腔内、膀胱内(膀胱)、口服、皮下、直接注射(例如，注射到肿瘤或脓肿中)、粘膜(例如，局部施用到眼睛)、吸入和局部施用。
对于口服施用，通过将所述活性缀合物与本领域众所周知的药学上可接受的赋形剂结合，可以很容易地配制所述缀合物。这些赋形剂使所述缀合物能够配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊剂、液体、凝胶剂、糖浆剂、浆液、悬浮液等，供待治疗受试者口服摄入。口服药物制剂可以作为固体赋形剂获得，任选地对所得混合物进行研磨，并在添加合适的助剂(如果需要的话)后加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸核(dragee core)。合适的赋形剂包括填料，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以添加崩解剂，例如交联的PVP、琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。任选地，口服配制物也可以在盐水或缓冲液(例如EDTA)中配制，用于中和内部酸性条件，或者可以在没有任何赋形剂的情况下施用。
还考虑了所述缀合物的口服剂型。所述缀合物可以进行化学修饰，使口服递送衍生物有效。通常，所考虑的化学修饰是将至少一个部分附接到所述化合物本身，其中所述部分能够(a)抑制酸水解；和(b)从胃或肠道吸收到血流中。还期望所述化合物的整体稳定性提高，体内循环时间延长。此类部分的实例包括聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、PVP和聚脯氨酸。Abuchowski and Davis,“Soluble Polymer-Enzyme Adducts,”In:Enzymes as Drugs,Hocenberg and Roberts,eds.,Wiley-Interscience,New York,N.Y.,pp.367-383(1981)；Newmark et al.,Preparation andproperties of adducts of streptokinase and streptokinase-plasmin complex withpolyethylene glycol and pluronic polyol F38,J Appl Biochem 4:185-189(1982)。可使用的其他聚合物是聚-1,3-二氧戊烷和聚-1,3,6-三氧戊烷(tioxocane)。如上所述，对于药物使用，聚乙二醇部分是合适的。
本文中化合物的释放位置可以是胃、小肠(例如十二指肠、空肠或回肠)或大肠。本领域技术人员可提供不会在胃中溶解，但会在十二指肠或肠道的其他地方释放物质的配制物。所述释放可以通过保护所述化合物或将所述化合物释放到胃外环境(例如肠道中)来避免胃环境的有害影响。
为了确保完全的胃耐受性，通常使用耐受至少pH 5.0的包衣。用作肠溶包衣的更常见的惰性成分实例是乙酸纤维素苯三酸酯(CAT)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、HPMCP 50、HPMCP 55、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、Eudragit L30D、Aquateric、乙酸纤维素邻苯二甲酸酯(CAP)、Eudragit L、Eudragi S和虫胶。这些包衣可以用作混合薄膜。
包衣或包衣混合物也可用于片剂，这些片剂不是旨在保护免受胃的影响。这可以包括糖衣，或使所述片剂更容易吞咽的包衣。胶囊剂可以由硬壳(例如明胶)组成，用于递送干治疗药物(例如粉末)；对于液体形式，可以使用软明胶壳。扁形胶囊的外壳材料可以是厚淀粉或其他可食用纸。对于丸剂、锭剂、模制片或片剂研制物，可以使用湿法块化技术(moist massing technique)。
所述缀合物可以以粒径约为1mm的颗粒剂或丸粒形式作为细多颗粒包括在配制物中。胶囊剂施用材料的配制物也可以作为粉剂、轻微压缩的药棉(lightly compressedplugs)甚至片剂。治疗剂可以通过压缩制备。
着色剂和增味剂都可以包括在内。例如，可以配制所述化合物(例如通过脂质体或微球包封进行配制)，然后将其含在可食用产品中，例如含有着色剂和增味剂的冷藏饮料。
可以用惰性材料稀释或增加所述化合物的体积。这些稀释剂可以包括碳水化合物，特别是甘露醇、a-乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性葡聚糖和淀粉。某些无机盐也可用作填料，包括三磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些市售稀释剂是Fast-Flo、Emdex、STA-Rx1500、Emcompress和Avicell。
在将治疗剂配制成固体剂型中，可包括崩解剂。用作崩解剂(disintegrate)的材料包括但不限于淀粉，包括基于淀粉的商业崩解剂Explotab。可以使用羧甲基淀粉钠、Amberlite、羧甲基纤维素钠、超支链淀粉、海藻酸钠、明胶、橙皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和膨润土。所述崩解剂的另一形式是不溶性阳离子交换树脂。粉状树胶可用作崩解剂和粘合剂，这些可以包括粉状树胶，例如琼脂、卡拉胶(Karaya)或黄蓍胶。海藻酸及其钠盐也可用作崩解剂。
粘合剂可用于将所述化合物固定在一起形成硬片剂，包括来自天然产物的材料，例如阿拉伯胶、黄蓍胶、淀粉和明胶。其他粘合剂包括甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素(CMC)。PVP和HPMC均可以在醇溶液中用于颗粒化治疗剂。
减摩剂可以包括在治疗剂的配制物中，以防止在配制过程中发生粘连。润滑剂可以用作治疗剂和模具壁之间的层，这些润滑剂可以包括但不限于硬脂酸，包括其镁盐和钙盐、聚四氟乙烯(PTFE)、液体石蜡、植物油和蜡。也可以使用可溶性润滑剂，例如十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、各种分子量的聚乙二醇、Carbowax 4000和6000。
可以添加助流剂，可以改善药物在配制期间的流动性能，并有助于压缩过程中的重排。所述助流剂可以包括淀粉、滑石粉、热解硅石和水合硅铝酸盐。
为了有助于治疗剂溶解到水性环境中，可以添加表面活性剂作为润湿剂。表面活性剂可以包括阴离子洗涤剂，例如十二烷基硫酸钠、磺化琥珀酸二辛酯钠和二辛基磺酸钠。可使用的阳离子洗涤剂包括苯扎氯铵和苄索氯铵。可作为表面活性剂包括在所述配物中的潜在非离子洗涤剂包括聚桂醇400，聚乙二醇40硬脂酸酯，聚氧乙烯氢化蓖麻油10、50和60，单硬脂酸甘油酯，聚山梨酯40、60、65和80，蔗糖脂肪酸酯、甲基纤维素和羧甲基纤维素。这些表面活性剂可以单独或作为不同比例的混合物存在于所述化合物或其衍生物的配制物中。
可口服的药物制剂包括由明胶制成的推入配合式胶囊剂，以及由明胶和塑化剂(例如甘油或山梨糖醇)制成的软密封胶囊剂。所述推入配合式胶囊剂可以含有与填料(例如乳糖)、粘合剂(例如淀粉)和/或润滑剂(例如滑石粉或硬脂酸镁)以及任选地稳定剂混合的活性成分。在软胶囊剂中，所述活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体(例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇)中。此外，可以添加稳定剂。也可以使用配制用于口服施用的微球。这种微球在本领域中已经被明确限定。所有口服施用配制物的剂量都应该适合此类施用。
对于颊部施用，所述组合物可以采取的形式是以常规方式配制的片剂或锭剂。
对于吸入施用，使用合适的推进剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体)，可以方便地从加压包或雾化器中以气溶胶喷雾呈现(presentation)的形式递送化合物。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可以通过设置阀门确定以递送计量数量。用于吸入器或吹入器的(例如明胶的)胶囊剂和药筒(cartridge)可以配制成含有所述化合物和合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
还考虑了所述化合物(或其盐)的肺部递送。所述化合物在吸入时被递送到哺乳动物肺部，并穿过肺部上皮层进入血流。其他关于吸入分子的报告包括Adjei&Garren,Pulmonary delivery of peptide drugs:Effect of particle size onbioavailability of leuprolide acetate in healthy male volunteers,JPharmaceutical Research 7:565-569(1990)；Adjei et al.,Bioavailability ofleuprolide following intratracheal administration to beagledogs,InternationalJ Pharmaceutics 63:135-144(1990)(leuprolide acetate)；Braquet et al.,Effect ofendothelin-1on blood pressure and bronchopulmonary system of the guinea pig,JCardiovascular Pharmacology13(suppl.5):143-146(1989)(endothelin-1)；Hubbard etal.,Annals of Internal Medicine 3:206-212(1989)(a1-antitrypsin)；Smith et al.,Pulmonary deposition and clearance of aerosolized alpha-1-proteinaseinhibitor administered to dogs and to sheep,J Clinical Investigation 84:1145-1146(1989)(a-1-proteinase)；Oswein et al.,Aerosolization of Proteins,Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II,Keystone,Colorado,March,1990(recombinant hepatocyte growth hormone)；Debs et al.,Lung-specificdelivery of cytokines induces sustained pulmonary and systemicimmunomodulation in rats,J Immunology 140:3482-3488(1988)(interferon-gammaand tumor necrosis factor alpha)and U.S.Patent No.5,284,656(granulocytecolony stimulating factor；通过引用并入本文)。美国专利号5,451,569中描述了一种用于肺部递送药物以达到全身效果的方法和组合物(通过引用将其具体地并入本文，以公开其相关内容)。
考虑使用的是设计用于肺部递送治疗产品的多种类机械装置，包括但不限于雾化器、计量吸入器和粉末吸入器，所有这些装置都是本领域技术人员所熟悉的。
还考虑了鼻腔递送药物组合物。鼻腔递送使得药物组合物在治疗产品施用到鼻子后直接进入血流，而无须让所述产品沉积在肺部。用于鼻腔递送的配制物包括含有葡聚糖或环葡聚糖的配制物。
当需要全身递送所述缀合物时，可以将其配制成通过注射(例如通过弹丸式注射或连续输注)进行肠胃外施用。注射用配制物可以采用单位剂型，例如安瓿或多剂量容器，并添加防腐剂。所述组合物可以采取如油性或水性媒介物中悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配方剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
用于胃肠外施用的药物配制物包括水溶性形式活性化合物的水性溶液。此外，所述活性化合物的悬浮液可以制备成适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油(例如芝麻油)，或合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酯)，或脂质体。水性注射悬浮液可以含有增加所述悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，所述悬浮液还可以含有合适的稳定剂或试剂，以提高所述化合物的溶解度，从而制备高浓度溶液。
或者，所述活性缀合物可以是粉末形式，以在使用前与合适的媒介物(例如无菌无热原水)一起构成溶液(constitution)。
所述缀合物也可以配制成直肠组合物或阴道组合物，例如栓剂或滞留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质(例如可可脂或其他甘油酯)。
除了上述配制物外，缀合物也可以配制为长效制剂(depot preparation)。这种长效制剂可以用合适的聚合物或疏水材料(例如可接受油的乳液)或离子交换树脂配制，或配制成微溶性衍生物，例如微溶性盐。
所述药物组合物还可以包含合适的固相或凝胶相或赋形剂。此类赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物(例如聚乙二醇)。
合适的液体或固体药物制剂形式是例如，用于吸入的水性溶液或盐水溶液，微胶囊化、包裹、包被在极微小金颗粒上，包含在脂质体中，雾化，气溶胶、植入皮肤的丸粒，或在尖锐物体上干燥以刮入皮肤。所述药物组合物还包括颗粒剂、散剂、片剂、包衣片剂、(微)胶囊剂、栓剂、糖浆剂、乳液、悬浮液、乳膏剂、滴剂或长期释放活性化合物的制剂，在其制剂中，通常如上所述使用赋形剂和添加剂和/或助剂，例如崩解剂、粘合剂、包衣剂、膨胀剂、润滑剂、调味剂、甜味剂或增溶剂。所述药物组合物适合用于各种药物递送系统。关于药物递送方法的简要综述，请参见Langer,New methods of drug delivery,Science 249(4976):1527-1533(1990)。
所述缀合物和任选地一种或更多种其他治疗剂可以以其本身(纯形式)或以药学上可接受的盐的形式施用。当用于药物时，所述盐应该是药学上可接受的，但非药学上可接受的盐可以方便地用于制备其药学上可接受的盐。此类盐包括但不限于由以下酸制备的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲烷磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。此外，此类盐可以制备成碱金属盐或碱土金属盐，例如羧酸基团的钠盐、钾盐或钙盐。
合适的缓冲剂包括乙酸和盐(1-2％w/v)；柠檬酸和盐(1-3％w/v)；硼酸和盐(0.5-2.5％w/v)；以及磷酸和盐(0.8-2％w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵(0.003-0.03％w/v)；氯丁醇(0.3-0.9％w/v)；对羟基苯甲酸酯(0.01-0.25％w/v)和硫柳汞(0.004-0.02％w/v)。
药物组合物含有有效量的如本文所述的化合物和任选地一种或更多种其他治疗剂，所述治疗剂包括在药学上可接受的赋形剂中。术语“药学上可接受的赋形剂”是指一种或更多种相容性的固体或液体填料、稀释剂或包封物质，适合于施用至人类或其他脊椎动物。术语“赋形剂”表示天然或合成的有机或无机成分，与所述活性成分结合以方便应用。所述药物组合物的组分也可以与所述化合物混合，以及相互混合，方式是不会有实质上影响所需药物疗效的相互作用。
可以以颗粒形式提供治疗剂，具体包括但不限于化合物。如本文所用的“颗粒”是指可以全部或部分组成本文所述化合物或其他治疗剂的纳米颗粒或微粒(或在某些情况下是较大的颗粒)。所述颗粒可以在被包衣(包括但不限于肠溶包衣)包围的核心中含有治疗剂。治疗剂也可以分散在整个颗粒中。治疗剂也可以吸附到所述颗粒中。所述颗粒的释放动力学可以是任意级的，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放及它们的任何组合等。除了治疗剂外，所述颗粒还可以包括药学和医学领域常用那些材料的任一种，包括但不限于可蚀、不可蚀、可生物降解或不可生物降解的材料或它们的组合。所述颗粒可以是微胶囊剂，其中含有所述化合物溶液或半固态的化合物。所述颗粒几乎可以是任何形状。
不可生物降解和可生物降解的聚合物材料均可用于制造递送治疗剂的颗粒。此类聚合物可以是天然聚合物或合成聚合物。所述聚合物的选择基于所需释放的时间段。特别关注的生物粘附聚合物包括生物可蚀性水凝胶，其描述见于Sawhney et al.,Bioerodiblehydrogels based on photopolymerized poly(ethylene glycol)-co-poly(.alpha.-hydroxy acid)diacrylate macromers,Macromolecules 26(4):581-587(1993)，该文献的教导通过引用具体并入本文。这些聚合物包括聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚脱水酶、聚丙烯酸、海藻酸酯、壳聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)和聚(丙烯酸十八酯)。
缀合物可以含在控释系统中。术语“控释”旨在指任何含药物的配制物，其中药物从所述配制物中释放的方式和特征(profile)受到控制。这是指即时和非即时释放配制物，非即时释放配制物包括但不限于持续释放和延迟释放配制物。术语“持续释放”(也称为“延长释放”)在传统意义上用于指一种药物配制物，其可在较长时间段内逐渐释放药物，并可在较长时间段内使药物的血液水平大致恒定。术语“延迟释放”在传统意义上是指施用所述配制物与药物从其释放之间存在时间延迟的药物配制物。“延迟释放”可能涉及或可能不涉及药物在较长时间段内的逐渐释放，因此可以是或可以不是“持续释放”。
使用长期持续释放植入物特别适合于治疗慢性病况。如本文所用，“长期”释放是指将所述植入物构造和设置成递送治疗水平的所述活性成分至少7天，最多30-60天。长期持续释放植入物是本领域普通技术人员所熟知的，包括一些上述释放系统。
某些定义
如本文所用，术语“约”可以允许数值或范围有一定程度变化，例如，在规定数值或范围规定限值的10％、5％或1％以内。
以范围格式表示的数值应以灵活的方式解释成，不仅包括明确表示为所述范围限值的数值，而且包括该范围内涵盖的所有单个数值或子范围，就像每个数值和子范围都被明确记述一样。例如，“约0.1％至约5％”或“约0.1％到5％”的范围应被解释为不仅包括约0.1％至约5％，还包括指示范围内的单个数值(例如1％、2％、3％和4％)和子范围(例如0.1％至0.5％、1.1％至2.2％、3.3％至4.4％)。除非另有说明，否则“约X至Y”的表述与“约X至约Y”具有相同的含义。同样地，除非另有说明，否则“约X、Y或Z”的表述与“约X、约Y或约Z”具有相同的含义。
在本文件中，除非上下文另有明确规定，否则术语“a”、“an”或“the”用于包括一个或多于一个。除非另有声明，否则术语“或”用于指代非排他性的“或”。此外，应理解的是，本文使用的措辞或术语，如无另行限定，仅用于描述目的，而非限制目的。
“烷基基团”是饱和、部分饱和或不饱和的直链或支链非环状烃，具有1至10个碳原子(C1-C10烷基)、1至8个碳原子(C1-C8烷基)、1至6个碳原子(C1-C6烷基)、1至4个碳原子(C1-C4烷基)、1至3个碳原子(C1-C3烷基)，或2至6个碳原子(C2-C6烷基)。在一些实施方案中，所述烷基基团具有单价。单价烷基基团的实例包括-CH3、-CH2CH3等。例如，单价烷基可能存在于接头L链中的取代基上。在一些实施方案中，所述烷基基团具有二价，例如在所述接头L的链中时。具有二价的烷基基团实例包括但不限于-CH2-、-CH2CH2-等。在一些实施方案中，所述烷基基团是饱和烷基基团。在一些实施方案中，烷基基团是不饱和烷基基团，也称为烯基基团或炔基基团。
除非另有说明，否则术语“杂烷基”本身或与另一术语组合是指由至少一个碳原子和至少一个杂原子组成的稳定的直链或支链，或两者组合，所述杂原子选自由O、N、P、Si和S组成的组，其中氮和硫原子可以任选地被氧化，氮杂原子可以任选地被季铵化。所述杂原子O、N、P、S和Si可以放置在所述杂烷基基团的任何内部位置或所述烷基基团附接到分子其余部分的位置。实例包括但不限于-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH2＝CH-O-CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH＝N-OCH3、-CH＝CH-N(CH3)-CH3、-O-CH3、-O-CH2-CH3，以及-CN。最多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3。
任何使用节标题和小标题仅是为了便于参考，并不意味着将一节中任何公开仅限于该节；相反，在一个节标题或小标题下进行的任何公开都旨在构成在其他每一节标题或小标题下进行的公开。
在不脱离所述技术范围和精神的情况下，本领域技术人员将清楚本技术的所述组合物、方法和用途的各种修改和变化。虽然已经结合具体的示例性实施方案描述了本技术，但所要求保护的本发明不应过度限于这些具体实施方案。事实上，对本领域技术人员而言显而易见的对实施本发明所述模式的各种修改旨在落入所附权利要求的范围内。
已使用的术语和表达仅作用描述性术语而非限制性术语。在这方面，在其他地方对某些术语进行限定和描述或讨论时，所述限定和所有描述和讨论都旨在归于这些术语。使用此类术语和表达也无意排除所示和所述特征或其部分的任何等效特征或部分。
此外，本文提及的所有出版物和专利均通过引用将其全部内容并入，用于所有目的。如果本文件与通过引用并入文件之间的用法不一致，则所并入的引用文件中的用法应被视为对本文件用法的补充；对于无法调和的不一致，则以本文件中的用法为准。
实施方案
以条款表示的以下实施方案并不意味着限制，而是进一步描述了本公开的发明。
条款A.一种具有以下式的缀合物：
TL-L-Hn
或其药学上可接受的盐，其中：
TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；
L是接头；
H是半抗原；并且
n是2-3的整数；并且任选地，其中至少两个所述H在与其接触时可以各自结合不同的抗体。
条款B.根据条款A所述的缀合物，其中至少两个所述H各自被抗体结合。
条款C.根据条款A或B所述的缀合物，其中每个H都由不同的抗体结合。
条款D.根据条款A-C中任一项所述的缀合物，其中每个H独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。
条款E.根据条款A所述的缀合物，其中n为2。
条款F.根据条款A所述的缀合物，其中n为3。
条款G.根据条款A-C、E或F中任一项所述的缀合物，其中每个H独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。
条款H.根据条款A-C中任一项所述的缀合物，其中n为2，第一H是DNP片段，并且第二H是鼠李糖片段。
条款I.根据条款A所述的缀合物，其中至少一个H是选自血凝素和神经氨酸酶的流感病毒抗原。
条款J.根据条款A所述的缀合物，其中至少一个H是选自L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg和preS的肝炎病毒抗原。
条款K.根据条款A所述的缀合物，其中至少一个H是gp120或gp160。
条款L.根据条款A所述的缀合物，其中至少一个H是糖蛋白。
条款M.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是病毒的包膜蛋白或病毒感染细胞表面上的病毒包膜蛋白。
条款N.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是流感病毒神经氨酸酶或流感病毒血凝素。
条款O.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是呼吸道合胞病毒融合蛋白F。
条款P.根据条款A-C、E、F或I-L所述的缀合物，其中所述靶蛋白是冠状病毒刺突蛋白。
条款Q.根据条款A-C、E、F或I-L所述的缀合物，其中所述靶蛋白是乙型肝炎病毒表面抗原或HBV核心抗原。
条款R.根据条款A-C、E、F或I-L所述的缀合物，其中所述靶蛋白是癌症细胞上的细胞表面受体。
条款S.根据条款A所述的缀合物，其中所述靶蛋白是叶酸受体。
条款T.根据条款S所述的缀合物，其中所述靶蛋白是叶酸受体α或叶酸受体β。
条款U.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是前列腺特异性膜抗原。
条款V.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是碳酸酐酶9。
条款W.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是促黄体激素释放激素受体。
条款X.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是神经激肽1受体。
条款Y.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是肿瘤相关巨噬细胞上的细胞表面受体。
条款Z.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是髓系来源抑制细胞上的细胞表面受体。
条款AA.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是癌症相关成纤维细胞上的细胞表面受体。
条款BB.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是成纤维细胞激活蛋白。
条款CC.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是神经氨酸酶抑制剂。
条款DD.根据条款A-C、E、F或I-L中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是奥司他韦片段、扎那米韦片段、帕拉米韦片段或拉尼米韦片段。
条款EE.根据条款A所述的缀合物，其中所述靶向配体是扎那米韦片段。
条款FF.根据条款A-C、E、F、I-L、S或T中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是叶酸片段或其类似物。
条款GG.根据条款A-C、E、F、I-L、S或T中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体为5-甲基四氢叶酸。
条款HH.根据条款A-C、E、F、I-L、S、T或EE中任一项所述的缀合物，其中L包含(-CH2CH2-O-)n、肽、肽聚糖或上述两种或更多种的组合，其中n是介于并包括1和32的整数。
条款II.根据条款A-C、E、F、I-L、S、T或EE中任一项所述的缀合物，其中L是支链接头，并且至少两个所述半抗原连接到所述接头的不同支链，其中所述不同支链任选地从所述接头的不同原子延伸。
条款JJ.根据条款A所述的缀合物，其中所述靶向配体是叶酸片段或其衍生物，至少第一H包含鼠李糖片段，并且至少第二H包含二硝基苯基片段。
条款KK.根据条款A-JJ中任一项所述的缀合物，配制作为前药。
条款LL.一个具有以下式的缀合物
或其药学上可接受的盐，其中：
TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；
La、Lb和Lc各自是接头，可以相同或不同；
C是碳原子；
R4选自氢、C1-C5烷基、C1-C5烯基或C1-C5炔基基团；
H1和H2各自是半抗原；并且
任选地，其中H1和H2各自可以结合不同的抗体。
条款MM.一种具有以下式的缀合物
及其药学上可接受的盐，其中：
TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；
La、Lb、Lc和Ld各自是接头，可以相同或不同；
C是碳原子；
H1、H2和H3各自是半抗原；并且
任选地，其中每个H1、H2和H3可以各自结合不同的抗体。
条款NN.根据条款MM所述的缀合物，其中H1和H2各自被抗体结合。
条款OO.根据条款MM所述的缀合物，其中H1、H2和H3各自被抗体结合。
条款PP.根据条款LL或NN所述的缀合物，其中H1和H2各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。
条款QQ.根据条款MM或PP所述的缀合物，其中H1、H2和H3各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。
条款RR.根据条款LL或NN所述的缀合物，其中H1或H2各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒，以及麻疹病毒。
条款SS.根据条款LL或OO所述的缀合物，其中H1、H2或H3各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。
条款TT.根据条款LL或OO所述的缀合物，其中H1是DNP片段，并且H2是鼠李糖片段。
条款UU.根据条款LL或MM所述的缀合物，其中至少一个半抗原是选自血凝素和神经氨酸酶的流感病毒抗原。
条款VV.根据条款LL或MM所述的缀合物，其中至少一个半抗原是选自L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg和preS的肝炎病毒抗原。
条款WW.根据条款LL或MM所述的缀合物，其中至少一个半抗原是gp120或gp160。
条款XX.根据条款LL或MM所述的缀合物，其中至少一个半抗原是糖蛋白。
条款YY.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是病毒的包膜蛋白或病毒感染细胞表面上的病毒包膜蛋白。
条款ZZ.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是流感病毒神经氨酸酶或流感病毒血凝素。
条款AAA.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是呼吸道合胞病毒融合蛋白F。
条款BBB.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是冠状病毒刺突蛋白。
条款CCC.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是乙型肝炎病毒表面抗原或HBV核心抗原。
条款DDD.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是癌症细胞上的细胞表面受体。
条款EEE.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是叶酸受体。
条款FFF.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是叶酸受体α或叶酸受体β。
条款GGG.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是前列腺特异性膜抗原。
条款HHH.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是碳酸酐酶9。
条款III.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是促黄体激素释放激素受体。
条款JJJ.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是神经激肽1受体。
条款KKK.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是肿瘤相关巨噬细胞上的细胞表面受体。
条款LLL.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是髓系来源抑制细胞上的细胞表面受体。
条款MMM.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是癌症相关成纤维细胞上的细胞表面受体。
条款NNN.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是成纤维细胞激活蛋白。
条款OOO.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是神经氨酸酶抑制剂。
条款PPP.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是奥司他韦片段、扎那米韦片段、帕拉米韦片段或拉尼米韦片段。
条款QQQ.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是扎那米韦片段。
条款RRR.根据条款LL-OO中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是叶酸片段或其类似物。
条款SSS.根据条款LL-OO任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是5-甲基四氢叶酸。
条款TTT.根据条款MM所述的缀合物，其中La、Lb、Lc和Ld中至少一个各自独立地包含：(-CH2CH2-O-)n、烷基基团、肽、肽聚糖或上述两种或更多种的组合，其中n是介于并包括1和32的整数。
条款UUU.根据条款NN所述的缀合物，其中La、Lb和Lc中至少一个各自独立地包含：(-CH2CH2-O-)n、烷基基团、肽、肽聚糖或上述两种或更多种的组合，其中n是介于并包括1和32的整数。
条款VVV.根据条款TTT或UUU所述的缀合物，其中n是介于并包括1和16的整数。
条款WWW.根据条款MM或OO所述的缀合物，其中La、Lb和Lc以及Ld中的至少一个包含肽片段或肽聚糖片段。
条款XXX.根据条款MM或NN所述的缀合物，其中La、Lb和Lc中的至少一个包含肽片段或肽聚糖片段。
条款ZZZ.根据条款MM或OO所述的缀合物，其中La、Lb和Lc、以及Ld各自独立地包含C2-C18烷基基团。
条款AAAA.根据条款LL或NN所述的缀合物，其中La、Lb和Lc各自独立地包含C2-C18烷基基团。
条款BBBB.一种以下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐。
条款CCCC.一种以下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐。
条款DDDD.根据条款AAAA或BBBB所述的缀合物，其中一个或更多个所述-OH基团独立地被巯基、磷酸酯或膦酸酯取代。
条款EEEE.根据条款AAAA或BBBB项所述的缀合物，其中一个或更多个所述-OH基团被-OC(＝O)R取代，其中R是烷基基团。
条款FFFF.根据条款AAAA或BBBB所述的缀合物，其中一个或更多个所述-OH基团被-OC(＝O)R取代，其中R是C1-C6烷基基团。
条款GGGG.根据条款AAAA或BBBB所述的缀合物，其中所述氨基(-NH2)基团被-OC(＝O)R2取代，R2是烷基基团。
条款HHHH.根据条款AAAA或BBBB所述的缀合物，其中所述氨基(-NH2)基团被-OC(＝O)R2取代，R2是C1-C6烷基基团。
条款IIII.根据条款AAAA或BBBB所述的缀合物，其中所述羧基(-COOH)基团被-OC(＝O)R3取代，其中R3是烷基基团。
条款JJJJ.根据条款AAAA或BBBB所述的缀合物，其中所述羧基(-COOH)基团被-OC(＝O)R3取代，其中R3是C1-C6烷基基团。
条款KKKK.一种以下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐，其中L1、L2和L3是接头。
条款LLLL.根据条款JJJJ所述的缀合物，其中L1、L2和L3中的一个或更多个包含(-CH2CH2-O-)n，其中n是介于且包括1和16的整数。
条款MMMM.根据条款JJJJ或KKKK所述的缀合物，其中L1、L2和L3各自独立地包含C2-C18烷基基团、肽片段或肽聚糖片段。
条款MMMM.一种以下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐。
条款NNNN.根据条款AAAA-MMMM中任一项所述的缀合物，在体内进一步与一种或更多种抗体复合。
条款OOOO.一种药物组合物，包含条款A-MMMM中任一项所述的缀合物和药学上可接受的赋形剂。
条款PPPP.一种治疗受试者病毒感染的方法，包含向所述受试者施用有效量的条款A-MMMM中任一项所述的缀合物或条款OOOO所述的药物组合物。
条款QQQQ.根据条款PPPP所述的方法，还包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体免疫球蛋白G(IgG)抗体。
条款RRRR.根据条款PPPP所述的方法，其中所述病毒感染是流感。
条款SSSS.根据条款PPPP-RRRR中任一项所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物口服施用。
条款TTTT.根据条款PPPP所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物每天施用一次。
条款UUUU.根据条款PPPP所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物每天施用一次以上。
条款VVVV.根据条款PPPP所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物每天施用两次。
条款WWWW.一种治疗受试者癌症的方法，包含向所述受试者施用有效量的条款A-MMMM中任一项所述的缀合物或条款OOOO所述的药物组合物。
条款XXXX.根据条款WWWW所述的方法，还包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体IgG抗体。
条款YYYY.根据条款WWWW所述的方法，其中所述癌症是热癌症。
条款ZZZZ.根据条款WWWW所述的方法，其中所述癌症是肾癌、肺癌或结直肠癌。
条款AAAAA.根据条款PPPP-ZZZZ中任一项所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物口服或静脉施用。
条款BBBBB.根据条款PPPP-ZZZZ中任一项所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物每天施用一次。
条款CCCCC.根据条款PPPP-ZZZZ中任一项所述的方法，还包含对所述受试者施用第二疗法，其中所述第二疗法包含化疗、舒尼替尼、PD-1抑制剂或PDL-1抑制剂。
条款DDDDD.一种激活受试者免疫反应的方法，包含向所述受试者施用有效量的条款A-MMMM中任一项所述的缀合物或条款OOOO所述的药物组合物。
条款EEEEE.根据条款DDDDD所述的方法，其中所述免疫反应是先天免疫反应。
条款FFFFF.根据条款DDDDD所述的方法，其中所述免疫反应在所述受试者靶向区域中激活，其中所述靶向区域是肿瘤微环境或病毒复制位点的位置。
条款GGGGG.根据条款DDDDD-FFFFF中任一项所述的方法，还包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体IgG抗体。
条款HHHHH.根据条款FFFFF所述的方法，其中施用有效量的所述缀合物或所述药物组合物在所述靶向区域内诱导M2型巨噬细胞重新编程为M1型巨噬细胞。
条款IIIII.根据条款A所述的缀合物，其中至少两个所述H在体内与抗体接触时可以各自结合不同的抗体。
条款JJJJJ.根据条款A项所述的缀合物，其中两个所述H在体外与抗体接触时可以各自结合不同的抗体。
略语表
实施例
以下实例用于说明本公开。这些实例并不旨在以任何方式限制权利要求的范围。
实施例1
Zan-PEG6-DNP-鼠李糖(zan双半抗原)药物缀合物(化合物24)的合成
方案1
化合物9的合成方案：
试剂和条件：
a)PPh3、THF和H2O；b)N,N'-二-Boc-1H-吡唑-1-甲脒、四氢呋喃(THF)和三乙胺(TEA)；c)NaOMe、MeOH；d)2,2-二甲氧基丙烷、无水丙酮、p-TsOH；e)室温下的4-硝基苯基氯甲酸酯、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和吡啶，；f)N3-PEG6-NH2、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)和THF；g)1M NaOH(水溶液)、THF；h)室温下的三氟乙酸(TFA)。
化合物12的合成方案：
化合物16的合成方案：
zan-DNP-鼠李糖(化合物24)的合成方案：
其中Ac是乙酸盐。
化合物2的合成：根据Chandler et al.,Synthesis of the potent influenzaneuraminidase inhibitor 4-guanidino Neu5Ac2en.X-Ray molecular structure of 5-acetamido-4-amino-2,6-anhydro-3,4,5-trideoxy-Derythro-L-gluco-nononic acid,JChem Society,Perkin Transactions 1:1173-1180(1995)；Shidmoossavee et al.,Chemical insight into the emergence of influenza virus strains that areresistant to Relenza,J Am Chem Soc 135:13254-13257(2013)；and Ying&Gervay-Hague,One-Bead–One-Inhibitor–One-Substrate Screening of NeuraminidaseActivity,ChemBioChem 6:1857-1865(2005)中报道的文献方法，由唾液酸制备扎那米韦衍生物1。向扎那米韦中间体(1)(5g，11mmol)的THF(40mL)溶液中加入三苯基膦(3.67g，14mmol，1.27当量)，将所得溶液在室温下搅拌12小时。随后，加入水(10mL)，并将所述溶液在室温下再搅拌24小时。然后浓缩反应溶液，粗产物在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-100％ EtOAc/己烷)上通过快速柱色谱法纯化，得到黄色粉末2。分离出产物2，2.89g，产率61％。
化合物3的合成：将三乙胺(1.5mL)加入到化合物2(2.74g，6.37mmol)和N,N'-二(叔丁氧基羰基)-1H-吡唑-1-甲脒(2.57g，8.28mmol，1.30当量)溶解在THF(20mL)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后浓缩并在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-100％ EtOA/己烷)上通过快速柱色谱法纯化，得到白色固体化合物3(4.14g，97％)。
化合物5的合成：将NaOMe(2.9mL，0.5M，1.414mmol)加入到搅拌的化合物3(4.225g，6.281mmol)的无水甲醇(70mL)溶液中。然后将反应混合物搅拌1小时。加入Dowex50XW8(H+)树脂以中和所述反应混合物，过滤，浓缩得到先导化合物4，无需进一步纯化即可用于下一步。
向化合物4的无水丙酮(70mL)溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(7.7mL，6.54g，62.81mmol，10当量)，然后加入对甲苯磺酸(120mg，0.628mmol，0.1当量)，所得混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物浓缩，并在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-100％ EtOAc/己烷)上通过快速柱色谱法纯化，得到白色固体化合物5，分离出2.4g产物，产率65％。
化合物6的合成：向化合物5(1.46g，2.49mmol)的吡啶(30mL)溶液中加入4-二甲氨基吡啶(2.13g，17.43mmol)和4-硝基苯基氯甲酸酯(3.51g，17.43mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后浓缩并在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-100％EtOAc/己烷)上通过快速柱色谱法纯化，得到白色固体化合物6(1.62g，87％)。
化合物7的合成：在室温、氩气下向激活的扎那米韦——化合物6(0.1g，0.13mmol)的THF(2.7mL)溶液中加入N3-PEG6-NH2(0.05g，0.14mmol，1.05当量)，然后加入DIPEA(0.12mL，0.67mmol，5.0当量)并搅拌过夜。通过薄层色谱法(TLC)和LC/MS监测反应进程。
反应完成后，将所述反应混合物减压浓缩。粗产物在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-10％ MeOH/DCM)上通过快速柱色谱法纯化，得到粘性固体化合物7(0.12g，93％)(参见图2A)。
化合物9的合成：将化合物7(75mg，0.078mmol)溶解在THF:MeOH(6:1，1.5mL)中，并用1M NaOH(100μl)逐滴处理。将反应混合物在室温下搅拌1小时，此时LC-MS分析显示甲酯的脱保护完成。通过加入50WX8(H+)树脂中和所述反应混合物，过滤并减压浓缩。中间体粗产物8直接用于下一步，无需进一步纯化。(参见图2B)。
向所述中间体粗化合物8中加入TFA(0.5mL)。将所述反应混合物在室温下搅拌1小时，使用LC-MS指示反应完成。在减压下通过旋转蒸发去除TFA，将粗产物置于真空下，得到化合物9。两步的总产率为91％。(参见图2C)。
DNP-PEG1-CO2H(化合物12)的合成：向溶于乙醇(25mL)的1-氯-2,4-二硝基苯——化合物10(0.5g，2.47mmol)和3-(2-氨基乙氧基)丙酸——化合物11(0.33g，2.47mmol)的溶液中加入TEA(1.38mL，9.87mmol)。将反应混合物加热至55℃16小时，并通过LC-MS监测反应进程。反应完成后，这通过一种起始原料(即二硝基苯)消失来确认，将所述反应混合物冷却并减压浓缩。通过在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-20％甲醇/DCM)上进行快速柱色谱法纯化粗混合物，得到黄色固体化合物12，产率为90％)。LC-MS[M+H]+＝299.98。(参见图2D)。
化合物14的合成：将α-L-鼠李糖一水合物(化合物13，1.0g，5.49mmol)溶解在9.2mL无水吡啶中。在冰浴中搅拌溶液，并在滴加乙酸脱水酶(4.15mL，43.92mmol，8.0当量)之前用氮气吹扫。将反应混合物缓慢升至室温，并通过TLC(己烷/EtOAc，65:35)和LC-MS进行监测，表明在惰性气氛下反应20小时后，α-L-鼠李糖一水合物完全消耗。将所述反应混合物倒入乙酸乙酯中，用1.0M HCl萃取两次。用饱和碳酸钠溶液、水和盐水洗涤有机层，并且用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得粗油产物(化合物14)(产率，98％)用于下一步。
化合物16的合成：在惰性气氛下，将1,2,3,4-四-O-乙酰基-α-L-鼠李糖(化合物14，0.50g，1.50mmol)溶解在DCM(7.5mL)中，然后加入氨基-PEG4-OH(化合物15，0.35g，1.81mmol，1.2当量)。将反应烧瓶置于冰浴中，在30分钟内滴加三氟化硼乙醚(0.56mL，4.51mmol，3.0当量)。将反应混合物在冰浴中搅拌2小时，然后使反应达到室温。通过TLC(己烷/EtOAc，30:70，Rf＝0.30)和LC-MS监测表明，反应16小时后，1,2,3,4-四-O-乙酰基-α-L-鼠李糖完全消耗。将所述反应混合物倒入冰水中，用DCM萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤两次，并且用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得粗产物通过硅胶柱色谱法(己烷/EtOAc，20:80)纯化，分离产物(化合物16)，产率90％。
化合物18的合成：在氩气气氛下，将1-[双(二甲氨基)-亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐——HATU(0.11g，0.28mmol，0.85当量)加入到3-(2-((2,4-二硝基苯基)氨基)乙氧基)丙酸(化合物12，0.1g，0.33mmol)的二甲基亚砜(2mL)溶液中，然后加入DIPEA(0.29mL，1.67mmol，5.0当量)，并在室温下搅拌10分钟。向反应混合物中加入Fmoc-Lys-OH.HCl(化合物17，0.11g，0.27mmol，0.8当量)，并在室温下搅拌2-3小时。通过LC-MS监测反应的进程。通过LC-MS确认反应完成后，通过加水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得粗产物通过硅胶柱色谱法(己烷/EtOAc，20:80)纯化，并且分离产物(化合物18)，产率为70％。(参见图2E)。
化合物19的合成：在室温、氩气气氛下，向酸(化合物18，0.06g，0.09mmol)和Rham(OAc)3-PEG4-NH2(化合物16，0.04g，0.09mmol，1.0当量)的二甲基亚砜(1.5mL)溶液中加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，PyBOP(0.05g，0.10mmol，1.1当量)，然后加入DIPEA(0.081mL，0.46mmol，5.0当量)。通过LC/MS监测反应的进程。
通过LC-MS确认反应完成后，通过加水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得粗产物通过硅胶柱色谱法(0-10％ MeOH/DCM)纯化，分离产物(化合物19)，产率为93％。
-Fmoc基团的脱保护(化合物20)：在室温、氩气下，向化合物19(0.01g，0.01mmol)的无水DCM(0.2ml)溶液中加入DEA(100uL)。将溶液在室温下搅拌1小时，直至反应完成，如LC-MS所证实。在减压下通过旋转蒸发去除DEA，将粗产物在乙醚中沉淀，得到定量产率的黄色固体化合物20。LC-MS[M+H]+＝876.1。
化合物22的合成：在氩气下向溶解在DCM中的DBCO-NHS(化合物21，0.012g，0.029mmol，1.05当量)和化合物20(0.024g，0.027mmol，1.0当量)的溶液中滴加N,N-DIPEA(0.048μl，0.27mmol，10当量)。将反应混合物在室温下搅拌2-3小时，并通过LC-MS监测反应进程。反应完成后，使用旋转蒸发器在减压下蒸发溶剂，并通过在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(0-10％甲醇/DCM)上进行硅胶柱色谱法纯化粗产物，得到淡黄色固体化合物22，产率93％。LC-MS[M+H]+＝1163.2。(参见图2F)。
OAc基团(化合物23)的水解：将化合物22(0.025g，0.022mmol)溶解在无水MeOH(1mL)中，并用0.5M NaOH(25μl)逐滴处理。将反应混合物在室温下搅拌1小时，此时LC-MS分析显示产物形成。反应完成后，通过加入50WX8(H+)树脂中和所述反应混合物，过滤并减压浓缩。淡黄色粗产物(化合物23)直接用于下一步，无需进一步纯化。LCMS[M+H]+＝1037.3。(参见图2G)。
zan-PEG6-DNP-鼠李糖(化合物24)的合成：在氩气下向扎那米韦-PEG6-叠氮化物(化合物9)(2.4mg，0.003mmol)和化合物23(3.5mg，0.003mmol，1.0当量)的无水DCM:DMSO(10:1，0.2mL)溶液中滴加DIPEA(6μl，0.03mmol，10当量)。将反应混合物在室温(室温)下搅拌2小时，并通过LC-MS监测反应进程。反应完成后，在减压下通过旋转蒸发去除溶剂，并通过C18色谱柱(5-95％乙腈/20mM NH4OAc水性溶液，pH 7缓冲液，60分钟，流速7mL/分钟)进行制备型高效液相色谱法(HPLC)纯化粗产物，得到黄色粉末的Zan-PEG6-DNP-鼠李糖(化合物24，产率50％)。LC-MS[M+H]+＝1745.9。(参见图2H)。
实施例2
化合物24与zan-Fc-WT和zan-Fc-DLE的比较
在实验的第0天，用100LD50的甲型流感病毒/Puerto Rico/8/1934(H1N1)(目录号NR-348，BEI Resources，NIAID，NIH)感染6-8周龄的雌性BALB/c小鼠(n＝5/组)。在感染后24小时(hpi)，对小鼠(仅施用磷酸盐缓冲盐水(PBS)组除外)腹腔内注射8g/kg人类静脉免疫球蛋白(IVIg)，以在施用供试品时达到抗DNP和抗鼠李糖抗体的人源化滴度。在48hpi用供试品治疗小鼠。Zan-DNP-鼠李糖以1.5μmol/kg的单次鼻内剂量施用。zan-Fc-WT和zan-Fc-DLE以10μg/小鼠的单次静脉剂量施用(合成细节如下)。两个对照组的小鼠接受PBS作为安慰剂。
为了评估药物疗效，在感染后14天内每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。该实验的结果如图3和图4所示。
图3是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用IVIg(-C)和48hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。
图4是如图3所述治疗的小鼠的感染后天数与体重(％)的关系图。
方案2
zan-Fc-WT和zan-Fc-DLE的合成
扎那米韦-叠氮化物，即化合物4"，根据先前报道的文献方法(Chandler et al.,Synthesis of the potent influenza neuraminidase inhibitor 4-guanidinoNeu5Ac2en.X-ray molecular structure of 5-acetamido-4-amino-2,6-anhydro-3,4,5-trieoxy-D-erythro-L-gluco-nononic acid,J Chemical Society,Perkin Transactions1:1173-1180(1995)；Shidmoossavee et al.,Chemical insight into the emergence ofinfluenza virus strains that are resistant to Relenza,J American ChemistrySociety 135(36):13254-13257(2013)；Ying,L.&Gervay-Hague,One-bead-one-inhibitor-one-substrate screening of neuraminidase activity,ChemBioChem 6(10):1857-1865(2005))由唾液酸制备。
化合物5″的合成：向扎那米韦-叠氮化物(化合物4″)(5g，11mmol)的THF(40mL)溶液中加入三苯基膦(3.67g，14mmol，1.27当量)，并将所得溶液在室温下搅拌12小时。随后，加入水(10mL)，并将所述溶液在室温下再搅拌24小时。然后浓缩反应溶液，粗产物在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-100％ EtOAc/己烷)上通过快速柱色谱法纯化，得到黄色粉末化合物5″。分离产物(化合物5″)，2.89g；产率61.1％。
化合物6″的合成：向化合物5″(2.74g，6.37mmol)和N,N'-二(叔丁氧基羰基)-1H-吡唑-1-甲脒(2.57g，8.28mmol，1.30当量)溶解在THF(20mL)中的溶液中加入三乙胺(1.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后浓缩并在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-100％ EtOAc/己烷)上通过快速柱色谱法纯化，得到白色固体化合物7″(4.14g，97％)。
化合物8″的合成：将NaOMe(2.9mL，0.5M，1.414mmol)加入到搅拌的化合物(化合物6)(4.225g，6.281mmol)的无水甲醇(70mL)溶液中。然后将反应混合物搅拌1小时。加入Dowex 50XW8(H+)树脂以中和所述反应混合物，过滤混合物并浓缩，得到先导化合物7″，其无需进一步纯化即可用于下一步。
向化合物7″的无水丙酮(70mL)溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(7.7mL，6.54g，62.81mmol，10当量)，然后加入对甲苯磺酸(120mg，0.628mmol，0.1当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物浓缩，并在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-100％ EtOAc/己烷)上通过快速柱色谱法纯化，得到白色固体化合物8″(2.4g，65.2％)。
化合物9″的合成：向化合物8″(1.46g，2.49mmol)的吡啶(30mL)溶液中加入4-二甲氨基吡啶(2.13g，17.43mmol)和4-硝基苯基氯甲酸酯(3.51g，17.43mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后浓缩并在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-100％ EtOAc/己烷)上通过快速柱色谱法纯化，得到白色固体状激活的扎那米韦(化合物9″)(1.62g，87％)。
化合物10″的合成：在室温、氩气下，向激活的扎那米韦(化合物9″)(0.2g，0.27mmol)的THF(12.0mL)溶液中加入叔-Boc-N-酰胺-PEG6-胺(0.124g，0.29mmol，1.1当量)，然后加入DIPEA(0.23mL，1.33mmol，5.0当量)，搅拌6-12小时。通过TLC和LC/MS监测反应进程。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物。粗产物在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(硅胶柱，0-20％ MeOH/DCM)上通过快速柱色谱法纯化，得到粘性固体化合物10″(234mg，85％)。
化合物12″的合成：将化合物10″(0.22g，0.21mmol)溶解在THF(1.5mL)中，用1MNaOH(0.6mL)逐滴处理。将反应混合物在室温下搅拌1小时，此时LC-MS分析显示甲酯的脱保护完成。通过加入50WX8(H+)树脂中和所述反应混合物，过滤并减压浓缩。中间体粗化合物11″直接用于下一步，无需进一步纯化。
将TFA(1.5mL)加入到所述中间体粗化合物11″中。在室温下搅拌溶液1小时，直至反应完成，如LC-MS所证实。在减压下通过旋转蒸发去除TFA，用乙醚(3×2mL)处理，并在真空下干燥，得到粘性产物的化合物12″。两步的总产率为79％。
化合物13″的合成：在室温、氩气下，向化合物12″(4mg，5.86μmol)的DMSO(200μl)溶液中加入4-((4-(氰基乙炔基)苯甲酰基)氧基)-2,3,5,6-四氟苯磺酸钠和CBTF(2.60mg，6.15μmol，1.05当量)，然后加入三乙胺(8.20μl，58.59μmol，10.0当量)，搅拌10-15分钟。通过TLC和LC-MS监测反应进程。反应完成后，化合物13″直接用于下一步，无需任何纯化(最好使用硅胶柱进行纯化以便与Fc蛋白缀合)。
对于LC-MS评估，条件如下：色谱柱：XBridge BEH C18色谱柱，3.5μm，3mm×100mm；流动相：A:20mM碳酸氢铵缓冲液，pH 7；B:乙腈(HPLC级)；方法运行(Method run)：5-95％B，7分钟，0.75mL/分钟。
WT-Fc表达、纯化和QC分析：使用已知方法合成IgG1 CH2-CH3野生型并亚克隆到表达载体中。制备确认的质粒DNA并用于瞬时转染CHO-S细胞。转染后5至6天，将细胞悬浮液以8,000rpm离心30分钟，以回收上清液级分。IgG1 Fc野生型(WT-Fc)通过蛋白A亲和层析法纯化。
简而言之，培养上清液通过0.22μm过滤器，然后装载到填充有蛋白A高容量琼脂糖树脂的聚丙烯柱上。收集所得的流穿液(flow-through)，并再次通过所述柱两次，然后用>10CV(柱体积)的1×PBS洗掉任何未结合的蛋白质。用3ml 100mM柠檬酸盐缓冲液(pH 3.0)洗脱WT-Fc，并立即用1ml的1M Tris(pH 8.0)中和。使用截留分子量为10kDa的AmiconUltra-4(Millipore)旋转柱将样品缓冲液交换到1×PBS中，并通过4-20％梯度SDS-PAGE凝胶评估纯化样品的纯度。单体形式的最终Fc蛋白约为26kDa。产率约为每100ml培养物30至40mg。
Zan-PEG6-Fc-WT的最终半胱氨酸缀合：向pH 7.2的纯化Fc蛋白的PBS溶液中添加化合物13″(10-12当量)，同时在4℃下缓慢搅拌10分钟。添加完成后，搅拌反应混合物12-72小时，通过SDS-PAGE和基质辅助激光解吸/电离(MALDI)质谱分析监测反应进程。
反应完成后，使用截留分子量(MWCO；10kDa，Vivaspin 500，目录号GE28-9322-25)过滤器纯化缀合的粗产物，并在4℃、15,000/RPM下离心10分钟，以去除所有未反应的接头和低分子量杂质。将该过程重复3-5次(浓度为5mg/mL，产率：60-70％)。
分别通过SDS-PAGE和MALDI分析确认了zan-PEG6-Fc-WT缀合物的纯度和分子量。最终产物(zan-Fc-WT)的分子量为～29kDa，而所述Fc蛋白的分子量仅为26kDa。
第二基于半胱氨酸缀合物zan-Fc-DLE的合成遵循上述方案，并通过SDS-PAGE和MALDI分析确认产物。如本文所用，术语“zan-Fc-WT”可与术语“Zan-PEG6-Fc-WT”互换使用。
实施例3
48hpi和96hpi单半抗原与双半抗原的比较
在实验的第0天，第一组6-8周龄的雌性BALB/c小鼠(n＝5/组)感染了10LD50的甲型流感病毒/Puerto Rico/8/1934(H1N1)(目录号NR-348，BEI Resources，NIAID，NIH)。小鼠(仅施用PBS组除外)在24hpi腹腔内注射8g/kg人类IVIg，以在施用供试品时达到抗DNP和抗鼠李糖抗体的人源化滴度。在48hpi用供试品治疗小鼠。所有三种供试品均以1.5umol/kg的单次鼻内剂量施用。两个对照组的小鼠接受PBS作为安慰剂。
为了评估药物疗效，在感染后14天内每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。
该实验的结果如图5和图6所示。图5是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用人类IgG(IVIg(-C))和48hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。图6是按照图5所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
在实验的第0天，第二组6-8周龄的雌性BALB/c小鼠(n＝5/组)感染了10LD50的甲型流感病毒/Puerto Rico/8/1934(H1N1)(目录号NR-348，BEI Resources，NIAID，NIH)。小鼠(仅施用PBS组除外)在72hpi腹腔内注射8g/kg人类IVIg，以在施用供试品时达到抗DNP和抗鼠李糖抗体的人源化滴度。在96hpi时用供试品治疗小鼠。所有三种供试品均以1.5umol/kg的单次鼻内剂量施用。两个对照组的小鼠接受PBS作为安慰剂。
与之前的研究一样，为了评估药物疗效，在感染后14天内每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。
该实验的结果如图7和图8所示。图7是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用人类IgG(IVIg(-C))和96hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。图8是按照图7所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
实施例4
感染后48小时和96小时双半抗原与市售药物的比较
在实验的第0天，第一组6-8周龄的雌性BALB/c小鼠(n＝5/组)感染了10LD50的甲型流感病毒/Puerto Rico/8/1934(H1N1)(目录号NR-348，BEI Resources，NIAID，NIH)。小鼠(仅施用PBS组除外)在24小时hpi腹腔内注射8g/kg人类IVIg，以在施用供试品时达到抗DNP和抗鼠李糖抗体的人源化滴度。
感染小鼠的治疗从48hpi开始。Zan-DNP-鼠李糖(化合物24)以1.5μmol/kg的单次鼻内剂量施用。Tamiflu以5mg/kg的剂量连续五天每天两次施用，Xofluza以1.5mg/kg的剂量每天两次在五天内施用。两个对照组的小鼠接受PBS作为安慰剂。
为了评估药物疗效，在感染后14天内每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。该实验的结果在图9和图10中示出。图9是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用人类IgG(IVIg(-C))和48hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。图10是按照图9所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
在实验的第0天，另一组6-8周龄的雌性BALB/c小鼠(n＝5/组)感染了10LD50的甲型流感病毒/Puerto Rico/8/1934(H1N1)(目录号NR-348，BEI Resources，NIAID，NIH)。小鼠(仅施用PBS组除外)在72hpi腹腔内注射8g/kg人类IVIg，以在施用供试品时达到抗DNP和抗鼠李糖抗体的人源化滴度。
感染小鼠的治疗从96hpi开始。Zan-DNP-鼠李糖以1.5umol/kg的单次鼻内剂量施用。Tamiflu以5mg/kg的剂量连续五天每天两次施用，Xofluza以1.5mg/kg的剂量每天两次在五天内施用。两个对照组的小鼠接受PBS作为安慰剂。为了评估药物疗效，在感染后14天内每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。该实验的结果在图11和图12中示出。图11是感染100LD50甲型流感H1N1/PR8、去除抗流感抗体、24hpi腹腔内施用人类IgG(IVIg-C))和96hpi施用缀合物的小鼠(n＝5/组)感染后天数与存活率(％)的关系图。图12是按照图11所述治疗的小鼠感染后天数与体重(％)的关系图。
实施例5
48hpi双半抗原病毒滴度与市售药物病毒滴度的比较
在实验的第0天，6-8周龄的雌性BALB/c小鼠(n＝5/组)感染了10LD50的甲型流感病毒/Puerto Rico/8/1934(H1N1)(目录号NR-348，BEI Resources，NIAID，NIH)。在供试品(TA)施用前24小时，小鼠(仅施用PBS组除外)腹腔内注射8g/kg人类IVIg，以在施用供试品时达到抗DNP和抗鼠李糖抗体的人源化滴度。
感染小鼠的治疗从48hpi或96hpi开始。Zan-DNP-鼠李糖(ZDR)(化合物24)、Zan-DNP(ZD)和Zan-鼠李糖(ZR)以1.5μmol/kg的单次鼻内剂量施用。Tamiflu以5mg/kg的剂量连续五天每天两次施用，Xofluza以1.5mg/kg的剂量每天两次在五天内施用。两个对照组的小鼠接受PBS作为安慰剂。
为了评估TA施用24小时内病毒滴度的降低率，在TA施用后24小时，通过CO2窒息法处死每个队列中的2只小鼠，采集它们的肺部，并立即使用gentleMACS Octo Dissociator(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)匀浆物。通过实时逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测量肺部匀浆中的病毒滴度。使用Quick-RNATM Microrep试剂盒(ZymoResearch Corporation,Irvine,California)从匀浆物中提取RNA。根据标准方案进行cDNA合成和逆转录。合成引物/探针组以识别流感基质(M)基因的两个高度保守区域。为了构建计算病毒滴度的标准曲线，将已知病毒滴度的甲型流感病毒/Puerto Rico/8/1934(H1N1)原液的10倍稀释液与肺部匀浆物同时检测(run)。
该实验的结果在图13A、图13B、图14A和图14B中示出。图13A显示了所述缀合物(化合物24＝ZDR并且zan-DNP＝ZD)和市售药物(Xofusa＝XO并且Tamiflu＝TAMI)48hpi的病毒滴度(倍数变化)。图13B显示了所述缀合物(化合物24＝ZDR并且zan DNP＝ZD)和市售药物(Xofusa＝XO并且Tamiflu＝TAMI)96hpi的病毒滴度(倍数变化)。图14A显示了所述缀合物(化合物24＝ZDR并且zan-DNP＝ZD)和市售药物(Xofusa＝XO并且Tamiflu＝TAMI)48hpi的病毒滴度(倍数变化)。图14B显示了所述缀合物(化合物24＝ZDR并且zan-DNP＝ZD)和市售药物(Xofusa＝XO并且Tamiflu＝TAMI)96hpi的病毒滴度(倍数变化)。
实施例6
口服施用化合物24
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(5只小鼠/组)感染了100×LD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934。人类IVIg用作抗半抗原抗体的来源，并在药物施用前24小时以8g/kg的剂量注射。供试品扎那米韦-DNP-鼠李糖(化合物24)在感染后48小时通过静脉(IV)和口服途径以单次剂量1.5或4.5μmol/kg施用。在感染后的14天内，每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。
当口服施用相同剂量的供试品时，存活率降至60％，而在3倍高剂量的情况下，存活率上升至80％。图15A是感染后天数与存活率的关系图。图15B是感染后天数与体重(％)的关系图。
实施例7
肺部病毒滴度的量化
将6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(2只小鼠/组)经鼻内(IN)接种100×MLD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934，48小时后用1.5μmol/kg(2.6mg/kg)或4.5μmol/kg(7.8mg/kg)化合物24或PBS的单次IN/IV/OG/SC剂量治疗。小鼠在感染后3天安乐死，收获肺部并立即使用gentleMACS Octo Dissociator(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)进行匀浆。通过实时RT-PCR测量肺部匀浆物的病毒滴度。使用Quick-RNATMMicrorep试剂盒(ZymoResearch Corporation,Irvine,California)从所述匀浆物中提取核糖核酸(RNA)。根据制造商的方案，使用One Step PrimeScriptTMRT-PCR试剂盒(Takara Bio,Inc.,Kusatsu,Japan)将等量的RNA用于qrt-PCR。合成引物/探针组以识别流感基质(M)基因的两个高度保守区域。为了构建计算病毒滴度的标准曲线，将已知病毒滴度的甲型流感病毒/PuertoRico/8/1934(H1N1)原液的10倍稀释液与肺部匀浆物同时检测。
小鼠口服施用化合物24并没有像鼻内或IV施用相同剂量或3倍高剂量时那样快速降低病毒滴度。生物利用度降低使得口服施用与IV和IN施用途径相比，肺部病毒滴度降低较慢。
图16是施用途径(SC＝皮下；OG＝口服灌胃；IV＝静脉；IN＝鼻内；PBS＝磷酸盐缓冲盐水)与病毒滴度(每ng RNA的PFU/ml)的条形图。图17是OG和PBS与病毒滴度(每ng RNA的PFU/ml)的条形图。
实施例8
口服化合物24的药代动力学
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(3只小鼠/组)施用单次静脉(IV)剂量或口服剂量1.5μmol/kg(2.6mg/kg)、1.5μmol/kg(2.6mg/kg)，或13.5μmol/kg的化合物24，并在药物施用后5分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时和12小时收集血液样品。通过液相色谱法-串联质谱法(LC-MS/MS)测定化合物24的血浆浓度。在药物施用前24小时，IVIg作为抗半抗原抗体的来源施用。
与IV相比，口服施用使得Cmax(血浆中的最大浓度)显著降低，即使在9倍更高剂量时也是如此，但在9倍更高剂量的情况下，半衰期(t1/2)从大约0.4小时增加到4小时。
图18是IV施用单次剂量1.5μmol/kg的时间(h＝小时)与浓度(ng/mL)的关系图(n＝3只小鼠/时间点)。图19是口服施用单次剂量13.5μmol/kg的时间(h＝小时)与浓度(ng/mL)的关系图(n＝3只小鼠/时间点)。
实施例9
增加口服给药频率的病毒攻击和小鼠疗法研究
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(5只小鼠/组)感染了100×LD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934。人类IVIg用作抗半抗原抗体的来源，并在药物施用前24小时以8g/kg的剂量注射。所述供试品化合物24在48hpi施用，单次剂量为1.5μmol/kg的zan-DNP-鼠李糖(IV)或两次剂量为4.5umol/kg的zan-DNP-鼠李糖(口服)。在感染后的14天内，每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。
将给药频率增加到两次剂量，间隔12小时，实现了100％的存活率(相比之下，口服施用单次剂量4.5μmol/kg zan-DNP的存活率为80％)。图20A是感染后天数与存活率的关系图。图20B是感染后天数与体重％的关系图。
实施例10
肺部病毒滴度的量化
将6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(2只小鼠/组)IN接种100×MLD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934，48小时后用1.5μmol/kg(2.6mg/kg)的单次IV剂量或4.5μmol/kg(7.8mg/kg)的两次口服剂量(间隔12小时)化合物24或PBS治疗。在感染后3天、5天和8天对小鼠实施安乐死，采集其肺部并立即在RNA裂解缓冲液中快速冷冻。使用gentleMACS Octo Dissociator(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)制备肺部匀浆物。通过qrt-PCR测量肺部匀浆物的病毒滴度。使用Quick-RNATMMicroprep试剂盒(Zymo Research Corporation,Irvine,California)从所述匀浆物中提取RNA。根据制造商的方案，使用One StepPrimeScriptTMRT-PCR试剂盒(Takara Bio,Inc.,Kusatsu,Japan)将等量的RNA用于qrt-PCR。合成引物/探针组以识别流感基质(M)基因的两个高度保守区域。为了构建计算病毒滴度的标准曲线，将已知病毒滴度的甲型流感病毒/Puerto Rico/8/1934(H1N1)原液的10倍稀释液与肺部匀浆物同时检测。
口服施用使病毒滴度降低的速度比IV施用慢，但能够在感染后第8天完全消除病毒滴度。IV和口服施用化合物24均可以完全消除肺部的病毒感染，通过IV途径比口服途径作用得更快。图21是PBS以及扎那米韦-DNP-鼠李糖IV和口服(OG＝口服灌胃)施用感染后天数与病毒滴度(每ng RNA的PFU/ml)的关系图。
实施例11
化合物24与标准治疗(SOC)的疗效比较(96hpi治疗)
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(5只小鼠/组)感染了10×LD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934(第0天)。健康小鼠(在第0天未感染)的对照组也作为对照进行了测试。
将人类IVIg用作抗半抗原抗体的来源，并在每个队列药物施用前24小时以6g/kg的优化剂量注射。所述供试品和SOC在96hpi施用，单次IV剂量是2.6mg/kg化合物24(图22和图23中的C.24(A))，单次口服剂量是23.4mg/kg化合物24(图22和图23中的C.25(B))，单次口服剂量为12.3mg/kg的巴洛西韦马波西酯(图22和图23中的Xofluza(C))，五天每天两次口服施用5mg/kg的磷酸奥司他韦(图22和图23中的Tamiflu(D))或PBS(图22与图23中的E)(健康小鼠数据未显示在图22和图23中)。在感染后的14天内，每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。
单次剂量IV(A)和口服施用化合物24(B)均能使病毒感染小鼠100％存活，而所测试的两种SOC药物均无法实现。当在96hpi治疗时，化合物24的治疗效果优于目前的标准治疗抗病毒药物。图22是感染后天数与存活率(％)的关系图。图23是感染后天数与体重(％)的关系图。(图23和图24中的化合物24＝C.24)。
药物施用后24小时(120hpi)，对小鼠进行异氟烷麻醉，然后进行颈椎脱位。肺部组织用10％中性缓冲福尔马林(NBF)固定，包埋在石蜡中，切片，用苏木精和曙红(H&E)染色，然后在Nikon Eclipse光学显微镜下放大10倍成像。对肺部进行了定性组织学分析，图像如图33所示。未接受治疗的病毒感染小鼠表现出弥漫性肺泡损伤、肺水肿和炎性细胞过度浸润的迹象，而与未治疗组相比，静脉或口服施用化合物24治疗的小鼠肺部组织中病毒诱导的组织病理学变化显著减少。
同时，两个健康小鼠队列分别注射化合物24IV和化合物24OG，另一小鼠队列未接受干预。药物施用24小时后，对小鼠进行异氟烷麻醉，然后进行颈椎脱位。将肺部、肾脏、肝脏、胃和小肠组织用10％中性缓冲福尔马林(NBF)固定，包埋在石蜡中，切片，用H&E染色(除肾脏外，肾脏组织用过碘酸希夫(PAS)染色)，然后在Nikon Eclipse光学显微镜下放大10倍成像。对肺部进行了定性组织学分析，图像如图33所示。与未干预组相比，注射化合物24的小鼠的组织形态没有观察到异常变化。
实施例12
化合物24与单半抗原的疗效比较(96hpi治疗)
公开了一种具有双重作用机制的靶向治疗策略，所述策略可引发宿主对病毒和病毒感染细胞的免疫反应。神经氨酸酶抑制剂扎那米韦(作为片段)被用作靶向配体。神经氨酸酶出现在流感病毒包膜和感染细胞表面。包含扎那米韦片段的缀合物与半抗原结合，所述半抗原与人类天然存在的抗体结合。一旦被募集，这些抗半抗原抗体就会结合并激活先天免疫系统，对抗病毒和病毒感染细胞。
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(5只小鼠/组)感染了10×LD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934(第0天)。人类IVIg用作抗半抗原抗体的来源，并在药物施用前24小时以6g/kg的优化剂量注射。所述供试品在96hpi按以下1.5μmol/kg的单次IV剂量施用：(a)化合物24(图29A和图29B中的(A))；(b)扎那米韦-DNP(单半抗原缀合物；图29A和图29B中的(B))；(c)扎那米韦-鼠李糖(单半抗原缀合物；图29A和图29B中的(C))；(d)扎那米韦(图29A和图29B中的(D))；或(e)PBS(对照)(图29A和图29B中的(E))。在感染后的14天内，每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。
当在补充IVIg并感染甲型流感病毒(H1N1，A/Puerto Rico/8/1934)的BALB/c小鼠体内进行测试时，扎那米韦-双半抗原缀合物(化合物24)在早期和晚期感染中均表现出比单半抗原缀合物更优的抗病毒活性。此外，与单次剂量的单半抗原缀合物相比，双半抗原缀合物在晚期感染中显示出更好的活性。因此，化合物24可以治疗早期和晚期流感感染。
实施例13
24小时肺部滴度比较
将6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(5只小鼠/组)感染10×LD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934，48小时后，用以下药物治疗：(a)单次IV剂量1.5μmol/kg的化合物24；(b)单次OG剂量13.5μmol/kg化合物24；(c)单次OG剂量(d)单次OG剂量10mg/kg或(e)单次IV剂量100μl PBS。
治疗24小时后，通过实时RT-PCR测量肺部匀浆物的病毒滴度，结果如图24所示，口服递送化合物24(化合物24＝C.24)的滴度最低。
实施例14
化合物24途径施用比较
如图25所示，Balb/c小鼠在第0天受到感染。感染攻击后四天，化合物24通过如所示的三种不同途径(鼻内、IV和口服)施用，口服剂量最高为13.5μmol/kg，其他剂量为1.5μmol/kg。结果表明，所有三种化合物24队列在14天后的存活率为100％，而用PBS治疗的小鼠没有活过第10天。感染/体重％图如图26所示。
实施例15
抗体介导的体外效应功能
为了在体外测试化合物24作用机制的概念证明，进行了抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)测定。ADCC测定使用ADCC试剂盒(Promega，目录号G7010；Promega Corporation,Madison,WI)进行，所述试剂盒含有流感病毒神经氨酸酶(N1)转染(NA-HEK)的和野生型(WT)人类胚胎肾脏(HEK 293)细胞。为此，将细胞一式三份(100μl，5000个细胞/孔)铺板在96孔黑壁板(Corning Life Sciences,Corning,NY)中，然后在存在或不存在100倍过量扎那米韦的情况下用化合物24的系列稀释液处理。在37℃下培育2小时后，将人类IVIg加入每个孔中，并在37℃的条件下再培育所述板30分钟。最后，以75,000个细胞/孔加入ADCC效应细胞，并在37℃和5％CO2下培育过夜。
然后使用Bio-GloTM萤光素酶测定试剂(包括在试剂盒中)对由ADCC效应细胞产生的萤火虫荧光素酶量进行量化。使用Synergy Neo2 HTS多模式微孔板阅读器(BioTekInstruments,Winooski,VT)测量发光。
通过补体依赖性细胞毒性(CDC)测定进行补体系统对病毒感染细胞杀伤作用的分析。收获N1转染(NA-HEK)的和野生型(WT)HEK 293细胞，在96孔黑壁板(Corning LifeSciences,Corning,NY)中一式三份(100μl，5,000个细胞/孔)进行铺板，然后在存在或不存在100倍过量扎那米韦的情况下用化合物24的系列稀释液处理。(扎那米韦是游离药物，过量使用时与化合物24竞争)。在37℃下培育2小时后，将人类IVig和人类血清加入每个孔中，并在5％CO2下于37℃将所述板培育过夜。使用CellTiter水性非放射性细胞增殖试剂盒(Promega Corporation,Madison,WI)测量细胞存活率。
化合物24通过与所述效应细胞上表达的Fc受体和抗体存在下的补体蛋白相互作用，在体外以高效力和选择性诱导抗体介导的效应细胞功能。图27A和图27B分别显示了化合物24的浓度(单位为nM)与ADCC百分比和CDC百分比的关系图。
实施例16
IV施用化合物24的剂量递增
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(5只小鼠/组)感染了10×LD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934(第0天)。人类IVIg用作抗半抗原抗体的来源，并在药物施用前24小时以6g/kg的优化剂量注射。每个测试组的小鼠在96hpi施用以下单次IV剂量：(a)0.17μmol/kg的化合物24(图28A和图28B中的(A))；(b)0.5μmol/kg化合物24(图28A和图28B中的(B))；(c)1.5μmol/kg的化合物24(图28A和图28B中的(C))；(d)4.5μmol/kg的化合物24(图28A和图28B中的(D))；以及(e)PBS(图28A和图28B中的(e))。在感染后的14天内，每天对小鼠进行称重和监测，当它们体重减轻25％或被诊断为垂死时，将其计为死亡。
单次IV剂量的1.5μmol/kg化合物24(C)和单次IV剂量的4.5μmol/kg化合物24(D)均使得小鼠100％存活，而其他检测剂量或对照(PBS)无法实现。图28A和图28B分别显示了感染后天数与存活率(％)和感染后天数与体重(％)的关系图。
实施例17
对多种流感病毒株的疗效
在第0天，6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(5只小鼠/组)感染了10×LD50的甲型流感/California/07/2009(H1N1)pdm09、甲型流感/Wisconsin/67/2005或乙型流感/Florida/04/2006。感染甲型流感/California/07/2009(H1N1)pdm09的小鼠在96hpi施用单次IV剂量1.5μmol/kg的化合物24(图30A和图30B中的(A))或PBS(图30A和图30B中的(D))。感染甲型流感/Wisconsin/67/2005的小鼠在96hpi施用单次IV剂量1.5μmol/kg的化合物24(图30A和图30B中的(B))或PBS(图30A和图30B中的(E))。感染乙型流感/Florida/04/2006的小鼠在96hpi施用单次IV剂量1.5μmol/kg的化合物24(图30A和图30B中的(C))或PBS(图30A和图30B中的(F))。
化合物24对所有检测的流感病毒株都同样有效，所有三个化合物24队列在14天后的存活率为100％，而用PBS治疗的小鼠没有活过第11天。
实施例18
炎性细胞因子和趋化因子水平
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(5只小鼠/组)感染了10×LD50的甲型流感/H1N1/PR8/1934(第0天)。每个测试组的小鼠在48hpi或96hpi施用单次剂量的以下治疗之一：通过IV100μl PBS(A)，通过单次剂量IV 2.6mg/kg化合物24(B)；通过单次剂量OG 23.4mg/kg化合物24(C)，通过单次剂量OG 12.3mg/kg(D)和通过OG 5mg/kg每天两次，持续5天(E)。两组小鼠没有感染病毒，但在96hpi通过IV施用化合物24(F)(相对于其他组)，第三组小鼠既没有感染也没有接受任何治疗(G)。通过BioLegend’s LEGENDplexTM珠基免疫测定在肺组织样品中测量每组的细胞因子和趋化因子，并使用制造商(BioLegend,SanDiego,CA)提供的标准方案确定细胞因子和趋化因子水平。
图31显示了在48hpi和96hpi治疗组中每组测量的肺部特异性细胞因子和趋化因子表达水平图。如果图中没有显示对照组的细胞因子或趋化因子水平，则没有可检测的水平。无论是口服还是血管内施用，化合物24在任一种情况下都不会在肺部引起细胞因子风暴，而是通过迅速消除细胞因子风暴的根本原因(即病毒感染)，来防止其发生。这些数据证实施用化合物24可以预防流感病毒感染引发的肺部炎症和损伤。
还测量了血清细胞因子和趋化因子水平，以评估所述受试者是否存在全身炎症。图32显示了在48hpi和96hpi治疗组中每组测量的血清中特异性细胞因子和趋化因子表达水平图，其中A是PBS对照组，B是通过单次剂量IV的化合物24治疗组，C是通过单次剂量OG的化合物24治疗组。
与其他治疗组和对照相比，化合物24治疗组表现出的炎性细胞因子水平均较低。
实施例19
叶酸盐双半抗原缀合物(化合物150)的合成
图35显示了化合物150合成的合成方案。
化合物3'的合成：化合物1'和2'按照Ref Chemistry–An Asian Journal 7(2):272-276(Theresa Kueckmann et al.eds.)(2012)中规定的程序制备。此后，将TEA(1.38mL，9.87mmol)加入到溶解在EtOH(25mL)中的1-氯-2,4-二硝基苯(化合物1')(0.5g，2.47mmol)和3-(2-氨基乙氧基)丙酸(化合物2'，0.33g，2.47mmol)的溶液中。将反应混合物加热至55℃，持续16小时，并通过LC-MS监测反应进程。通过一种起始原料(即二硝基苯)消失确认反应完成后，将所述反应混合物冷却并减压浓缩。粗混合物在Teledyne CombiFlashRf+Lumen(硅胶，12g色谱柱，0-20％甲醇/DCM)上通过快速柱色谱法纯化，得到黄色固体化合物3'，产率90％。LC-MS[M+H]+＝300.24(参见图36)。
化合物5'的合成：在氩气气氛下，向3-(2-((2,4-二硝基苯基)氨基)乙氧基)丙酸(化合物3'，0.1g，0.33mmol)的二甲基亚砜(2mL)溶液中加入HATU(0.11g，0.28mmol，0.85当量)，然后加入DIPEA(0.29mL，1.67mmol，5.0当量)，并在室温下搅拌10分钟。将Fmoc-LysOH.HCl(购自Chem-Impex International,Wood Dale,IL；化合物4'，0.11g，0.27mmol，0.8当量)加入反应混合物中，在室温下搅拌2-3小时，并通过LC-MS监测反应进程。
通过LC-MS确认反应完成后，通过加水淬灭所述反应混合物并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得粗品在Teledyne CombiFlashRf+Lumen(0-10％甲醇/DCM)上通过硅胶(4g)柱色谱法纯化，并通过LC-MS分析级分。在减压下使用旋转蒸发器从合并的纯级分中蒸发溶剂，分离化合物5'，产率为70％。LC-MS[M+H]+＝650.67(参见图37)。
2,3,4-四-O-乙酰基-α-L-鼠李糖(化合物7')的合成：按照De Coen et al.,Synthetic rhamnose glycopolymer cell-surface receptor for endogenous antibodyrecruitment,Biomacromolecules 21(2):793-802(2020)中规定的程序制备化合物7'。简而言之，将α-L-鼠李糖一水合物(6，1.0g，5.49mmol)溶解在9.2mL无水吡啶中。在滴加乙酸酐(4.15mL，43.92mmol，8.0当量)之前，通过将内部温度保持在10℃以下，在冰浴中搅拌溶液并用氮气吹扫15分钟。在2小时内使反应缓慢升温至室温，并通过TLC(己烷/EtOAc，65:35)和LC-MS监测反应进程，表明在惰性气氛下反应20小时后α-L-鼠李糖一水合物完全消耗。将所述反应混合物倒入乙酸乙酯中，用1.0M HCl萃取两次。合并的有机层用饱和碳酸钠溶液、水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得粗油产物化合物7’(产率98％)用于下一步。LC-MS[M+H]+＝333.32和/或LC-MS[M+H2O]＝350.32。
化合物9'的合成：按照上述De Coen et al.(2020)中规定的程序制备化合物9'。简而言之，在惰性气氛下加入-H2N-PEG4-OH(购自BroadPharm,San Diego,CA；8，0.35g，1.81mmol，1.2当量)之前，将1,2,3,4-四-O-乙酰基-α-L-鼠李糖(7，0.50g，1.50mmol)溶解在DCM(7.5mL)中。将反应烧瓶置于冰浴中，在4℃下30分钟内逐滴加入三氟化硼乙醚(0.56mL，4.51mmol，3.0当量)。将反应混合物在冰浴温度下搅拌2小时，然后使反应升温至室温。通过TLC(己烷/EtOAc，30:70，Rf＝0.30)和LC-MS监测反应进程，表明反应16小时后1,2,3,4-四-O-乙酰基-α-L-鼠李糖(化合物7')完全消耗。将所述反应混合物倒入冰水中，用DCM(3×10mL)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤两次，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得粗产物在Teledyne CombiFlash Rf+Lumen(0-10％甲醇/DCM)上通过硅胶(12g)柱色谱法纯化，分离产物(化合物9')，产率90％。LC-MS[M+H]+＝466.51。
化合物10'的合成：在室温、氩气气氛下，向酸(化合物5'，0.06g，0.09mmol)和鼠李糖(OAc)3-PEG4-NH2(化合物9'，0.04g，0.09mmol，1.0当量)的二甲基亚砜(1.5mL)溶液中加入PyBOP(0.05g，0.10mmol，1.1当量)，然后加入DIPEA(0.081mL，0.46mmol，5.0当量)。通过LC-MS监测反应进程。在通过LC-MS确认反应完成后，通过加水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得粗品在TeledyneCombiFlash Rf+Lumen(0-10％ MeOH/二氯甲烷)上通过硅胶(4g)柱色谱法纯化，分离产物(化合物10')，产率为93％。LC-MS[M+H]+＝1098.15(参见图38)。
脱保护-Fmoc基团以合成化合物11'：在室温、氩气下向化合物10'(0.01g，0.01mmol)的无水DCM(0.2ml)溶液中加入DEA(100uL)。所述溶液在室温下搅拌1小时，直至反应完全，如LC-MS所证实。在减压下通过旋转蒸发去除DEA，粗产物在乙醚中沉淀，得到定量产率的黄色固体，其可用于下一步，无需进一步纯化。LC-MS[M+H]+＝875.91(参见图39)。
化合物13'的合成：在氩气下向溶解在DCM:DMSO(10:1,0.6mL)中的DBCO-NHS(购自BroadPharm,San Diego,CA；化合物12'，0.012g，0.029mmol，1.05当量)和化合物11'(0.024g，0.027mmol，1.0当量)溶液中滴加DIPEA(0.048μl，0.27mmol，10当量)。将反应混合物在室温下搅拌2-3小时，通过LC-MS监测反应进程。反应完成(通过化合物11'的完全消耗证实)后，在减压下通过旋转蒸发器蒸发溶剂，并通过硅胶(4g)柱色谱法在TeledyneCombiFlash Rf+Lumen(0-10％甲醇/DCM)上纯化粗产物，得到淡黄色固体化合物13'，产率为93％。LC-MS[M+H]+＝1163.21(参见图40)。
中间体14'的合成：将化合物13'(0.025g，0.022mmol)溶解在无水MeOH(1mL)中，用0.5M NaOH(25μl)逐滴处理。将反应混合物在室温下搅拌1小时，此时LC-MS分析显示没有起始原料。通过加入50WX8(H+)树脂中和反应，过滤和减压浓缩。淡黄色粗产物(化合物14')直接用于下一步，无需进一步纯化。LC-MS[M+H]+＝1037.11(参见图41)。
叶酸盐-NHS酯(化合物16)的合成：在室温、氩气下将DCC(0.281g，1.359mmol，1.2当量)加入到化合物15'(0.50g，1.133mmol)和N-羟基琥珀酰亚胺(0.143g，1.246mmol，1.10当量)的DMSO(12mL)溶液中，并将溶液搅拌12小时。通过LC/MS监测反应进程。在通过LC-MS确认反应完成后，将反应混合物在丙酮(15x)中沉淀，并通过离心分离产物。此外，用丙酮(2×50mL)和EtOAc(1×30mL)洗涤粗产物，真空干燥，粗产物(化合物16)无需进一步纯化，即可用于下一步。
叶酸盐-PEG6-叠氮化物(化合物18')的合成：在室温、氩气下向叶酸盐-NHS酯(化合物16，0.05g，0.093mmol)的无水DMSO(1.0mL)溶液中加入N3-PEG6-NH2(化合物17'，购自BroadPharm,San Diego,CA；0.032g，0.093mmol，1.05当量)，然后加入DIPEA(0.081mL，0.46mmol，5.0当量)并搅拌12小时。通过LC/MS监测反应进程。通过LC/MS确认反应完成后，通过加入乙醚沉淀反应混合物并离心。收集黄色沉淀，用乙醚(2×15mL)洗涤，粗品通过制备型HPLC在C18色谱柱(60分钟内5-95％ B，流速7mL/min；B：乙腈；A:20mM NH4OAc，pH 7缓冲液，UV@280nm)上进行纯化，得到化合物18'。LC-MS[M+H]+＝774.83(参见图42)。
化合物150的合成：在氩气下向化合物18'(10mg，0.013mmol)和化合物14'(13.4mg，0.013mmol，1.0当量)的无水DMSO(1.0mL)溶液中滴加DIPEA(12μl，0.065mmol，5.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌2-4小时，并通过LC-MS监测反应进程。反应完成后，粗产物通过制备型HPLC在C18色谱柱(5-95％ B，60分钟内，流速7mL/min；B:乙腈；a:20mMNH4OAc，pH 7缓冲液，UV@360nm和280nm)上纯化，得到最终化合物150，产率24％。纯度：97％(HPLC纯化)，并且LC-MS[M+H]+＝1810.93(参见图43)。
实施例20
化合物150的体外功能测定
将表达叶酸受体的小鼠肺癌细胞(细胞系M109)以500细胞/孔的密度接种在96细胞板上，并在37℃下粘附过夜。然后将所述细胞与叶酸盐双半抗原缀合物化合物150的系列稀释液在37℃下培育2小时，然后加入人类血清以评估对补体依赖性细胞毒性(CDC)的影响(如果有的话)。
结果在图44中示出，其证实了化合物150的添加诱导CDC，可能是通过在癌症细胞表面上募集抗半抗原抗体，然后被人类血清中补体系统的抗体激活诱导的。在对照组中，使用100倍过量的叶酸盐-葡糖胺(图44中标记为M109_comp)作为竞争物，以确认所观察到的免疫原性效应确实是由于靶细胞上的叶酸受体和双半抗原缀合物上叶酸盐部分的结合。
此外，对表达叶酸受体的癌症细胞(4T1(小鼠乳腺癌细胞)、MDA-MB-231(人类乳腺癌细胞)、M109(小鼠肺癌细胞))和THO-1(AML模型)进行了化合物150的ADCC活性测定。用化合物150的系列稀释液培育2小时后，将所述细胞与IVIg在37℃下培育2小时，并与表达人类Fc-γ-RIII的效应细胞在37℃、5％CO2下培育过夜。结果在图45A-图45D中示出，证实了化合物150通过在癌症细胞表面上募集抗半抗原抗体，然后激活所述效应细胞上表达的Fc-γ-RIII受体诱导ADCC。
实施例21
化合物150在小鼠肺癌模型中的体内疗效研究
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠在右侧皮下接种M109小鼠肺癌细胞系(表达叶酸受体的小鼠肺癌细胞)，接种量为2×106个细胞/小鼠。接种10天后，当肿瘤大小达到～50mm3时，用以下供试品开始治疗：(a)按100μl/小鼠仅施用PBS；(b)SOC治疗(即200μg/小鼠，3天/周抗PD1+化疗(肿瘤接种后第18天腹腔内注射卡铂50mg/kg+肿瘤接种后第18-22天静脉注射紫杉醇36mg/kg)；或(c)10nmol/小鼠化合物150，每只每天一剂量，持续5天/周。PBS和化合物150组在第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在整个研究期间实现抗半抗原抗体的人源化滴度。
每隔一天测量肿瘤，并在肿瘤植入后第25天处死小鼠。图46和图47分别显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系，以及所述受试者体重百分比与肿瘤植入后天数的关系。该数据证实化合物150在M109模型中抑制肿瘤生长，并显示有望作为肺癌治疗的单一疗法。
实施例22
化合物150在人类肺癌(冷肿瘤)模型中的体内疗效研究
6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠在右侧皮下接种LLC-1人类肺癌细胞系(LLC-1)，接种量为5×106个细胞/小鼠。接种10天后，当肿瘤大小达到～50mm3时，用以下供试品开始治疗：(a)按100μl/小鼠仅施用PBS；(b)SOC治疗(即200μg/小鼠腹腔内注射抗PDL1，3天/周+2Gy/小鼠，3天/周放疗)；或(c)10nmol/小鼠的化合物150，每只每天一剂量，持续5天/周。PBS和化合物150组在植入后第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在两周时间段内达到抗半抗原抗体的人源化滴度。
每隔一天测量肿瘤，并在肿瘤植入后第25天处死小鼠。图48和图49分别显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系，以及所述受试者体重百分比与肿瘤植入后天数的关系。数据证实化合物150可能受益于与将冷肿瘤转化为热肿瘤的疗法相结合。
实施例23
化合物150在小鼠结直肠癌模型中的体内疗效研究
将6-8周龄的雌性Balb/c小鼠右侧皮下植入CT26小鼠结直肠癌细胞系，植入量为2×106个细胞/小鼠。接种10天后，当肿瘤大小达到～50mm3时，用以下供试品开始治疗：(a)按100μl/小鼠仅施用PBS；(b)SOC治疗(即，每周一次腹腔内注射甲酰四氢叶酸100mg/kg+每周一次5-FU 50mg/kg+在肿瘤接种后第8天和第10天施用奥沙利铂6mg/kg)；或(c)10nmol/小鼠的化合物150，每只每天一剂量，持续5天/周。PBS和化合物150组在第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在整个研究期间实现抗半抗原抗体的人源化滴度。
每隔一天测量肿瘤，并在肿瘤植入后第25天处死小鼠。图50和图51分别显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系，以及所述受试者体重百分比与肿瘤植入后天数的关系。体重减轻超过25％的小鼠被安乐死，作为人道终点。
在甲酰四氢叶酸+5-FU+奥沙利铂组中，所有小鼠在第17天死亡，但在化合物150队列中，与未治疗的对照相比，所有小鼠均存活，肿瘤生长速度较慢。
实施例24
在小鼠肺癌模型中对多种联合疗法的评估
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(n＝5/队列)皮下植入2-5×106个M109小鼠肺癌细胞系细胞(表达叶酸受体的小鼠肺癌细胞)(第0天)。在植入后第11天，用以下供试品开始治疗：(a)按10μl/小鼠仅施用PBS；(b)化疗(卡铂+紫杉醇)；(c)10nmol/小鼠的化合物150+抗PD1；(d)10nmol/小鼠的化合物150(+Abs)；和(e)10nmol/小鼠化合物150+化疗。PBS和化合物150组在第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在整个研究期间实现抗半抗原抗体的人源化滴度。每隔一天测量肿瘤。
图52显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系。化疗治疗队列中的五只动物中有两只在植入后第17天失去肿瘤(该队列中的所有动物直到研究结束还都存活)。联合疗法化合物150+抗PD1队列中的五只动物中有三只失去了肿瘤(其余动物中有一只未活到植入后第22天)。联合疗法(化合物+化疗)队列中五只动物中有四只失去了肿瘤(5只动物中3只未活到植入后第22天)。数据证实化合物150与抗PD-1或化疗的联合显著提高了治疗疗效。
使用上述相同方案通过以下供试品进行了第二研究：(i)按100μl/小鼠仅施用PBS；(ii)SOC治疗(抗PD1+化疗(卡铂+紫杉醇))；(iii)10nmol/小鼠的化合物150+舒尼替尼；(iv)10nmol/小鼠的化合物150(+Abs)；和(v)10nmol/小鼠的化合物150+叶酸盐-toll样受体7激动剂缀合物(FA-TLR7)。PBS和化合物150组在第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在整个研究期间实现抗半抗原抗体的人源化滴度。
图53显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系。SOC治疗队列中五只动物中有四只失去了肿瘤(该队列中的所有动物直到研究结束还都存活)。联合疗法化合物150+舒尼替尼队列中五只动物中有一只即将失去肿瘤，但在植入后第22天死亡。联合疗法化合物+FA-TLR7队列中五只动物中有一只失去了肿瘤(该队列中的所有动物直到研究结束还都存活)。数据证实化合物150与舒尼替尼的联合略微增强了治疗的抗肿瘤疗效，但在这些剂量下，化合物150与FA-TLR7的联合没有实现任何统计相关的疗效改善。
实施例25
化合物150在小鼠结直肠癌模型中的体内疗效研究比较
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(n＝5/队列)皮下植入CT-26小鼠结直肠癌细胞系(第0天)，植入量为2×106个细胞/小鼠。在植入后第11天，开始使用以下供试品进行治疗：(a)仅施用PBS；(b)甲酰四氢叶酸+5FU+奥沙利铂(OXH)(SOC队列)；或(c)10nmol/小鼠的化合物150，每只每天一剂量。治疗于植入后第22天结束。PBS和化合物150组在第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在整个研究期间实现抗半抗原抗体的人源化滴度。
每隔一天测量肿瘤，并在肿瘤植入后第25天处死小鼠(所有动物直到研究结束还存活)。图54和图55分别显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系，以及所述受试者体重百分比与肿瘤植入后天数的关系。SOC队列中五只动物中有三只失去了肿瘤，所有动物在植入后第19天体重均低于75％，并被安乐死。
实施例26
在小鼠结直肠癌模型中对多种联合疗法的评估
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠(n＝5/队列)皮下植入2-5×106个CT-26小鼠结直肠癌细胞系细胞(第0天)。在植入后第11天，用以下供试品开始治疗：(a)按100μl/小鼠仅施用PBS；(b)化疗(卡铂+紫杉醇)；(c)10nmol/小鼠的化合物150+抗PD1；(d)10nmol/小鼠的化合物150(+Abs)；(e)10nmol/小鼠的化合物150+化疗；以及(f)SOC(甲酰四氢叶酸+5FU+奥沙利铂)。PBS和化合物150组在第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射了抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在整个研究期间实现抗半抗原抗体的人源化滴度。每隔一天测量肿瘤。
图56显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系。联合疗法化合物150+抗PD1队列中五只动物中有四只失去了肿瘤。联合疗法化合物150+化疗队列中五只动物中有三只失去了肿瘤。化疗(单独)队列中五只动物中有两只失去了肿瘤。数据证实化合物150与化疗的联合治疗比单独化疗治疗表现更好，化合物150与抗PD1的联合治疗也比SOC表现更好。
使用上述相同方案通过以下供试品进行了第二研究：(i)按100μl/小鼠仅施用PBS；(ii)甲酰四氢叶酸+5FU+OXH(SOC)；(iii)10nmol/小鼠的化合物150+舒尼替尼；(iv)10nmol/小鼠的化合物150(+Abs)；和(v)10nmol/小鼠的化合物150+叶酸盐-TLR7缀合物。PBS和化合物150组在第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射了抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在整个研究期间实现抗半抗原抗体的人源化滴度。
图57显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系。联合疗法治疗队列化合物150+舒尼替尼队列中五只动物中有一只失去了肿瘤。联合疗法化合物150+FA-TLR7队列中五只动物中有一只失去了肿瘤。数据证实化合物150与舒尼替尼或FA-TLR7的联合疗法显著提高了治疗的抗肿瘤疗效。
图58显示的图比较了图56和图57数据，以突出化合物150与抗PD1/舒尼替尼/化疗的联合疗法与单独SOC治疗之间的差异。
实施例27
化合物150在小鼠肺癌模型Y856(冷肿瘤模型)中体内疗效研究比较
6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠(n＝5/队列)皮下植入2×106个Y856小鼠肺癌细胞系细胞(第0天)。植入后第11天，用以下供试品开始治疗：(a)PBS(100μl/小鼠IV)+抗DNP/抗鼠李糖抗体；(b)抗PD1(200μg/小鼠，IP，3天/周)+卡铂(肿瘤接种后第18天，IP，50mg/kg)+紫杉醇(从肿瘤接种后第18-22天开始每天一次，IV，36mg/kg)；或(c)FDR(化合物150)(10nmol/小鼠，每天一次)+抗DNP/抗鼠李糖抗体。
每隔一天测量肿瘤，并在肿瘤植入后第25天处死小鼠。图59显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系。PBS和化合物150组在第10天、第14天、第17天和第21天也腹腔内注射了抗DNP和抗鼠李糖抗体，以在整个研究期间实现抗半抗原抗体的人源化滴度。
实施例28
化合物150在小鼠肾癌模型中的体内疗效研究
6-8周龄的雌性Balb/c小鼠皮下植入2×106个Renca肾癌细胞系细胞。植入后12天开始使用以下供试品进行治疗：(a)PBS(100μl/小鼠，IV)+抗DNP/抗鼠李糖抗体；(b)抗PD1(200μg/小鼠，IP，3天/周)/PD-L1(200μg/小鼠，IP，3天/周)+舒尼替尼(20mg/kg，OG，每天一次)；或(c)FDR(化合物150)(10nmol/小鼠，每天一次)+抗DNP/抗鼠李糖抗体，每只每天一剂量。
每隔一天测量肿瘤，并在肿瘤植入后第25天处死小鼠。图60显示了肿瘤体积(mm3)与肿瘤植入后天数的关系。
实施例29
免疫反应评估
将上述研究中使用Y856、LLC-1和M109细胞系的Balb/c小鼠肿瘤切碎，并使用肿瘤解离试剂盒(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)消化。洗涤、固定单细胞悬浮液并对其进行相应的免疫细胞标记物染色，然后通过流式细胞术分析。图61显示了Y856、LLC-1和M109肿瘤中免疫细胞群在上述评估后测量的比较。(FDH＝化合物150，SOC是抗PD1+化疗(卡铂+紫杉醇))。
在热肿瘤模型(M109)中，化合物150治疗使得抗肿瘤巨噬细胞和自然杀伤(NK)细胞群显著增加，同时减少了肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的数量，但在冷肿瘤模型(Y8569和LLC-1)中则不能。数据证实化合物150单一疗法可以诱导巨噬细胞重新编程，从而减少TAM数量并增强NK细胞群。

Claims (114)

1.一种缀合物，具有以下式：
TL-L-Hn
或其药学上可接受的盐，其中：
TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；
L是接头；
H是半抗原；并且
n是2-3的整数；并且任选地，其中至少两个所述H在与其接触时可以各自结合不同的抗体。
2.根据权利要求1所述的缀合物，其中至少两个所述H各自被抗体结合。
3.根据权利要求1或2所述的缀合物，其中每个H被不同的抗体结合。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的缀合物，其中每个H独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。
5.根据权利要求1所述的缀合物，其中n为2。
6.根据权利要求1所述的缀合物，其中n为3。
7.根据权利要求1-3、5或6中任一项所述的缀合物，其中每个H独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的缀合物，其中n为2，第一H为DNP片段，并且第二H为鼠李糖片段。
9.根据权利要求1所述的缀合物，其中至少一个H是选自血凝素和神经氨酸酶的流感病毒抗原。
10.根据权利要求1所述的缀合物，其中至少一个H是选自L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg和preS的肝炎病毒抗原。
11.根据权利要求1所述的缀合物，其中至少一个H是gp120或gp160。
12.根据权利要求1所述的缀合物，其中至少一个H是糖蛋白。
13.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是病毒的包膜蛋白或病毒感染细胞表面上的病毒包膜蛋白。
14.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是流感病毒神经氨酸酶或流感病毒血凝素。
15.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是呼吸道合胞病毒融合蛋白F。
16.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是冠状病毒刺突蛋白。
17.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是乙型肝炎病毒表面抗原或HBV核心抗原。
18.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是癌症细胞上的细胞表面受体。
19.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述靶蛋白是叶酸受体。
20.根据权利要求19所述的缀合物，其中所述靶蛋白是叶酸受体α或叶酸受体β。
21.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是前列腺特异性膜抗原。
22.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是碳酸酐酶9。
23.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是促黄体激素释放激素受体。
24.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是神经激肽1受体。
25.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是肿瘤相关巨噬细胞上的细胞表面受体。
26.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是髓系来源抑制细胞上的细胞表面受体。
27.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是癌症相关成纤维细胞上的细胞表面受体。
28.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是成纤维细胞激活蛋白。
29.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是神经氨酸酶抑制剂。
30.根据权利要求1-3、5、6或9-12中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是奥司他韦片段、扎那米韦片段、帕拉米韦片段或拉尼米韦片段。
31.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述靶向配体是扎那米韦片段。
32.根据权利要求1-3、5、6、9-12、19或20中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是叶酸片段或其类似物。
33.根据权利要求1-3、5、6、9-12、19或20中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是5-甲基四氢叶酸。
34.根据权利要求1-3、5、6、9-12、19、20或31中任一项所述的缀合物，其中L包含(-CH2CH2-O-)n、肽、肽聚糖或上述两种或更多种的组合，其中n是介于并包括1和32的整数。
35.根据权利要求1-3、5、6、9-12、19、20或31中任一项所述的缀合物，其中L是支链接头，并且至少两个所述半抗原连接到所述接头的不同支链，其中所述不同支链任选地从所述接头不同原子延伸。
36.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述靶向配体是叶酸片段或其衍生物，至少第一H包含鼠李糖片段，并且至少第二H包含二硝基苯基片段。
37.根据权利要求1-36中任一项的缀合物，配制为前药。
38.一种缀合物，具有以下式
或其药学上可接受的盐，其中：
TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；
La、Lb和Lc各自是接头，可以相同或不同；
C是碳原子；
R4选自氢、C1-C5烷基、C1-C5烯基或C1-C5炔基基团；
H1和H2各自是半抗原；并且
任选地，其中H1和H2各自可以结合不同的抗体。
39.一种缀合物，具有以下式
及其药学上可接受的盐，其中：
TL是病毒、病毒感染细胞、癌症细胞、免疫细胞或成纤维细胞表面上靶蛋白的靶向配体；
La、Lb、Lc和Ld各自是接头，可以相同或不同；
C是碳原子；
H1、H2和H3各自是半抗原；并且
任选地，其中每个H1、H2和H3可以各自结合不同的抗体。
40.根据权利要求38所述的缀合物，其中H1和H2各自被抗体结合。
41.根据权利要求39所述的缀合物，其中H1、H2和H3各自被抗体结合。
42.根据权利要求38或40所述的缀合物，其中H1和H2各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。
43.根据权利要求39或41所述的缀合物，其中H1、H2和H3各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、二硝基苯基片段、三硝基苯基片段或它们的组合。
44.根据权利要求38或40所述的缀合物，其中H1或H2各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。
45.根据权利要求38或41所述的缀合物，其中H1、H2或H3各自独立地选自鼠李糖片段、α-半乳糖基部分、DNP片段、TNP片段、荧光素、地高辛、生物素或病毒抗原，所述病毒选自白喉、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、流感病毒、SARS-COV-2、黄热病病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、轮状病毒、腮腺炎病毒、破伤风、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、风疹病毒、天花病毒、猴痘病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒和麻疹病毒。
46.根据权利要求38或41所述的缀合物，其中H1是DNP片段，并且H2是鼠李糖片段。
47.根据权利要求38或39所述的缀合物，其中至少一个半抗原是选自血凝素和神经氨酸酶的流感病毒抗原。
48.根据权利要求38或39所述的缀合物，其中至少一个半抗原是选自L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg和preS的肝炎病毒抗原。
49.根据权利要求38或39所述的缀合物，其中至少一个半抗原是gp120或gp160。
50.根据权利要求38或39所述的缀合物，其中至少一个半抗原是糖蛋白。
51.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是病毒的包膜蛋白或病毒感染细胞表面上的病毒包膜蛋白。
52.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是流感病毒神经氨酸酶或流感病毒血凝素。
53.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是呼吸道合胞病毒融合蛋白F。
54.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是冠状病毒刺突蛋白。
55.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是乙型肝炎病毒表面抗原或HBV核心抗原。
56.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是癌症细胞上的细胞表面受体。
57.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是叶酸受体。
58.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是叶酸受体α或叶酸受体β。
59.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是前列腺特异性膜抗原。
60.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是碳酸酐酶9。
61.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是促黄体激素释放激素受体。
62.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是神经激肽1受体。
63.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是肿瘤相关巨噬细胞上的细胞表面受体。
64.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是髓系来源抑制细胞上的细胞表面受体。
65.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是癌症相关成纤维细胞上的细胞表面受体。
66.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶蛋白是成纤维细胞激活蛋白。
67.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是神经氨酸酶抑制剂。
68.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是奥司他韦片段、扎那米韦片段、帕拉米韦片段或拉尼米韦片段。
69.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是扎那米韦片段。
70.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是叶酸片段或其类似物。
71.根据权利要求38-41中任一项所述的缀合物，其中所述靶向配体是5-甲基四氢叶酸。
72.根据权利要求39所述的缀合物，其中La、Lb、Lc和Ld中的至少一种各自独立地包含：
(-CH2CH2-O-)n，其中n是介于并包括1和32的整数，
烷基基团，
肽，
肽聚糖，或
上述两种或更多种的组合。
73.根据权利要求38所述的缀合物，其中La、Lb和Lc中的至少一种各自独立地包含：
(-CH2CH2-O-)n，其中n是介于并包括1和32的整数，
烷基基团，
肽，
肽聚糖，或
上述两种或更多种的组合。
74.根据权利要求72或73所述的缀合物，其中n是介于并包括1和16的整数。
75.根据权利要求39或41所述的缀合物，其中La、Lb和Lc以及Ld中的至少一种包含肽片段或肽聚糖片段。
76.根据权利要求39或40所述的缀合物，其中La、Lb和Lc中的至少一种包含肽片段或肽聚糖片段。
77.根据权利要求39或41所述的缀合物，其中La、Lb和Lc、以及Ld各自独立地包含C2-C18烷基基团。
78.根据权利要求38或40所述的缀合物，其中La、Lb和Lc各自独立地包含C2-C18烷基基团。
79.一种下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐。
80.一种下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐。
81.根据权利要求79或80所述的缀合物，其中一个或更多个所述-OH基团独立地被巯基、磷酸酯或膦酸酯取代。
82.根据权利要求79或80所述的缀合物，其中一个或更多个所述-OH基团被-OC(＝O)R取代，其中R是烷基基团。
83.根据权利要求79或80所述的缀合物，其中一个或更多个所述-OH基团被-OC(＝O)R取代，其中R是C1-C6烷基基团。
84.根据权利要求79或80所述的缀合物，其中所述氨基(-NH2)基团被-OC(＝O)R2取代，并且R2是烷基基团。
85.根据权利要求79或80所述的缀合物，其中所述氨基(-NH2)基团被-OC(＝O)R2取代，并且R2是C1-C6烷基基团。
86.根据权利要求79或80所述的缀合物，其中所述羧基(-COOH)基团被-OC(＝O)R3取代，其中R3是烷基基团。
87.根据权利要求79或80所述的缀合物，其中所述羧基(-COOH)基团被-OC(＝O)R3取代，其中R3是C1-C6烷基基团。
88.一种下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐，其中L1、L2和L3是接头。
89.根据权利要求88所述的缀合物，其中L1、L2和L3中的一个或更多个包含(-CH2CH2-O-)n，其中n是介于并包括1和16的整数。
90.根据权利要求88或89所述的缀合物，其中L1、L2和L3各自独立地包含C2-C18烷基基团、肽片段或肽聚糖片段。
91.一种下式的缀合物：
或其药学上可接受的盐。
92.根据权利要求79至91中任一项所述的缀合物，还在体内与一种或更多种抗体复合。
93.一种药物组合物，包含权利要求1-91中任一项所述的缀合物和药学上可接受的赋形剂。
94.一种治疗受试者病毒感染的方法，包含向所述受试者施用有效量的权利要求1-91中任一项所述的缀合物或权利要求93所述的药物组合物。
95.根据权利要求94所述的方法，还包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体免疫球蛋白G(IgG)抗体。
96.根据权利要求94所述的方法，其中所述病毒感染是流感。
97.根据权利要求94-96中任一项所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物口服施用。
98.根据权利要求94所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物每天施用一次。
99.根据权利要求94所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物每天施用一次以上。
100.根据权利要求94所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物每天施用两次。
101.一种治疗受试者癌症的方法，包含向所述受试者施用有效量的权利要求1-91中任一项所述的缀合物或权利要求93所述的药物组合物。
102.根据权利要求101所述的方法，还包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体IgG抗体。
103.根据权利要求101所述的方法，其中所述癌症是热癌症。
104.根据权利要求101所述的方法，其中所述癌症是肾癌、肺癌或结直肠癌。
105.根据权利要求94-104中任一项所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物口服或静脉施用。
106.根据权利要求94-104中任一项所述的方法，其中所述缀合物或所述药物组合物每天施用一次。
107.根据权利要求94-104中任一项所述的方法，还包含向所述受试者施用第二疗法，其中所述第二疗法包含化疗、舒尼替尼、PD-1抑制剂或PDL-1抑制剂。
108.一种激活受试者免疫反应的方法，包含向所述受试者施用有效量的权利要求1-91中任一项所述的缀合物或权利要求93所述的药物组合物。
109.根据权利要求108所述的方法，其中所述免疫反应是先天免疫反应。
110.根据权利要求108所述的方法，其中所述免疫反应在所述受试者靶向区域中被激活，其中所述靶向区域是肿瘤微环境或病毒复制位点的位置。
111.根据权利要求108-110中任一项所述的方法，还包含向所述受试者施用自体抗体或同种异体IgG抗体。
112.根据权利要求110所述的方法，其中施用有效量的所述缀合物或所述药物组合物在所述靶向区域中诱导M2型巨噬细胞重新编程为M1型巨噬细胞。
113.根据权利要求1所述的缀合物，其中当在体内与抗体接触时，至少两个所述H可以各自结合不同的抗体。
114.根据权利要求1所述的缀合物，其中当在体外与抗体接触时，两个所述H可以各自结合不同的抗体。
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US9861702B2 (en) * 2012-10-22 2018-01-09 Wisconsin Alumni Research Foundation Lipid-conjugated rhamnose for immune system recruitment and oncotherapy
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JP2022504745A (ja) * 2018-10-12 2022-01-13 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ． ２，３－ジアミノスクシニル基を含む共役連結体

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