CN119345201A - 治疗tfe3基因重排性肾细胞癌的药物或药物组合物及用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物或药物组合物及用途，涉及临床肿瘤的药物治疗与应用技术领域。所述治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物或药物组合物包括舍吲哚。本发明的药物或药物组合物能有效抑制TFE3基因重排性肾细胞癌的增殖、迁移、侵袭能力，有望应用于临床TFE3基因重排性肾癌病人的治疗。

Description

治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物或药物组合物及用途

技术领域

本发明涉及临床肿瘤的药物治疗与应用技术领域，特别涉及一种治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物或药物组合物及用途。

背景技术

TFE3基因重排性肾细胞癌(Transcription factor enhancer 3-rearrangedrenal cell carcinoma、TFE3-RCC)是一类少见的肾癌亚型，1986年被首次报道，由于患者X染色体上一区一带二亚带TFE3基因发生易位并形成融合基因，又被称为Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌（Xp11.2 translocation renal cell carcinoma，Xp11.2 tRCC）。2004年WHO肾肿瘤分类中将其正式列为一种独立的肾癌亚型。由于TFE3基因属于小眼畸形转录因子家族（MiTF），2016年Xp11.2 tRCC被归类为MiTF易位型肾癌。2022年第五版WHO肾脏肿瘤分类将Xp11.2 tRCC重新命名为TFE3 tRCC，并将其归为基于分子技术诊断的肾细胞癌。

目前，对TFE3-RCC患者缺乏普适有效的治疗方式。对于局限性早期肾癌其治疗以保留肾单位的手术为主。对于肿瘤体积较大的患者可以采用根治性肾切除术。然而对于无手术指征的局部浸润或者远处转移的患者则无有效的治疗方案。

目前，临床上探索了舒尼替尼、依维莫司、索拉非尼、克唑替尼、培唑帕尼等多种靶向治疗以及抗 PD-L1 抗体治疗对TFE3-RCC患者的疗效，但由于样本较少，系统性不足，尚无有效的治疗评价。

发明内容

为了解决现有技术存在的技术问题，本发明提供了一种治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物或药物组合物及用途。所述技术方案如下：

一种治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物或药物组合物，其包括舍吲哚。

可选地，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。

可选地，所述载体或赋形剂包括粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、湿润剂中的一种或几种。

可选地，所述药物或药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、冲剂、丸剂、散剂、颗粒剂、膏剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。

可选地，所述药物或药物组合物的给药途径为口服、透皮、肌肉、皮下或静脉注射。

舍吲哚在制备治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物中的用途。

可选地，所述药物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。

可选地，所述载体或赋形剂包括粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、湿润剂中的一种或几种。

可选地，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、冲剂、丸剂、散剂、颗粒剂、膏剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。

可选地，所述药物的给药途径为口服、透皮、肌肉、皮下或静脉注射。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果至少包括：

本发明的药物或药物组合物所包含的Sertindole (中文名字：舍吲哚) 能有效抑制TFE3基因重排性肾细胞癌的增殖、迁移、侵袭能力，最大抑制率为99.99%，当浓度达到20μM时，类器官几乎全部死亡，效果优于舒尼替尼，有望应用于临床TFE3基因重排性肾癌病人的治疗。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1提供了不同舍吲哚药物浓度对TFE3-RCC细胞抑制效果的图，得出抑制50%细胞的药物浓度为12.5 μM；

图2提供了舍吲哚药物浓度为13 μM时相较对照组不同时间点的细胞增殖情况的图，得出舍吲哚应用48小时后能明显抑制细胞的增殖能力；

图3提供了舍吲哚药物浓度为13 μM时相较对照组对细胞增殖的抑制效果的图，得出舍吲哚能明显抑制细胞的增殖能力，甚至能完全杀死肿瘤细胞；

图4提供了舍吲哚药物浓度为13 μM时相较对照组对细胞迁移能力的抑制效果的图，对照组细胞迁移率约为53%，舍吲哚组细胞迁移率约为35%。得出舍吲哚能明显抑制细胞的迁移能力；

图5提供了舍吲哚药物浓度为13 μM时相较对照组对细胞迁移和侵袭能力的抑制效果的图，得出舍吲哚能明显抑制细胞的迁移和侵袭能力；

图6提供了不同舍吲哚药物浓度对TFE3-RCC类器官抑制效果的图，得出抑制50%细胞的药物浓度为0.93 μM，最大抑制效率能达到99.99%；

图7提供了不同舒尼替尼药物浓度对TFE3-RCC类器官抑制效果的图，得出抑制50%细胞的药物浓度为0.06 μM，最大抑制效率能达到57.85%；

图8提供了对照组、舍吲哚组和舒尼替尼组治疗TFE3-RCC类器官治疗效果的明场图。

具体实施方式

下面结合附图，对本发明中的技术方案进行描述。

本发明目的在于探索出能靶向治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的小分子药物。为了达到上述目的，本发明人引入小分子药物Sertindole (中文名字：舍吲哚) 能有效的抑制TFE3基因重排性肾细胞癌的增殖、迁移、侵袭能力。同时在类器官水平进行了该药物与舒尼替尼在TFE3基因重排性肾细胞癌中的治疗效果。发现Sertindole (中文名字：舍吲哚) 治疗效果明显优于舒尼替尼。

舍吲哚是非典型抗精神病药物，其英文名为Sertindole，商品名为Serdolect(Serlect)，化学名为：1-[2-[4-[5-氯-1-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-基]-1-哌啶基]乙基-2-咪唑啉酮。英文名称为：5-Chloro-1-(4-fluorophenyl)-3-[1- (2-oxoimidazolidin-1-ylethyl)-4-piperidyl]-1H-indole；或1-[2-[4-[5-Chloro-1- (4-fluorophenyl)-1H-indol-3-y1]piperidinyl]ethyl]-2-imidazolidinone。此化合物公开于US 4,710,500中，其抗精神分裂活性公开于US5,112,838中。在体内，舍吲哚是作用于中枢神经系统D2和5-HT2A受体的拮抗剂，且进一步在焦虑、高血压、药物滥用和认知障碍的模型中显示了治疗效果。

为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。

实施例1 细胞半抑制浓度（IC₅₀）测定

正常培养状态良好的TFE3基因重排性肾细胞癌细胞，其中TFE3基因重排性肾细胞癌细胞系是由解放军总医院第三医学中心泌尿外科研究所经过肾癌组织原代分离培养，永生化得到的。具体步骤如下：1. 配制胶原酶消化液：浓度均为2 mg/ml的Ⅰ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶等体积混合后配制成消化组织细胞用的胶原酶消化液。2. 配制原代细胞培养基：20%的胎牛血清、2%的青霉素-链霉素以及DMEM/F12培养基混合配置成原代细胞培养基。3.破碎肿瘤组织：取黄豆大小肿瘤组织于1.5 ml离心管中，取500 µl胶原酶消化液加入离心管中，然后用高压灭菌后的组织剪反复剪碎组织至直径约约芝麻粒大小。4. 初次组织细胞消化：将含有组织细胞和胶原酶消化液的离心管置于37 °C孵箱放置5 min后3000 rpm、3min离心后，弃去上层胶原酶消化液，获取消化后的组织细胞。5. 再次破碎组织细胞和消化：将上述步骤获得的组织细胞用胶原酶组织消化液1 ml 重悬后，用高压灭菌后的组织剪再次反复剪碎组织至用1 ml移液枪吸取液体无明显阻力，将离心管于37 °C孵箱放置10min后3000 rpm、3 min离心后，弃去上层胶原酶消化液，用配置好的培养基重悬组织细胞团。6. 将悬浮后的组织细胞悬液通过100 µm的无菌过滤器后接种于T25培养瓶中培养。7.原代细胞永生化：日常观察细胞生长状况，待正常生长的贴壁细胞融合率达到50%，通过SV40大T抗原稳定慢病毒（由汉尹生物科技有限公司提供）传导转染原代细胞，持续传代20代左右建成稳定的永生化细胞系。8. TFE3重排性肾细胞癌永生化细胞系的鉴定：通过免疫组化的方式鉴定其肾组织标志物PAX8的表达及TFE3蛋白的表达，同时通过FISH鉴定其为TFE3重排性肾细胞癌细胞系，并通过基因组测序技术鉴定出分离原代永生化的细胞系TFE301-1细胞系为NONO-TFE3融合类型。

胰酶消化后细胞计数板计数约2000个细胞/孔，铺到96孔板中，24小时细胞贴壁后加入不同浓度的药物舍吲哚(0 μM、5 μM、10 μM、15 μM、20 μM、25 μM、30 μM)，37摄氏度孵箱培养48小时后加入细胞活性检测试剂（CCK-8）后继续孵箱培养，2小时后测吸光度值。

结果分析：

实验结果参见图1。图1示出了舍吲哚在0 μM、5 μM、10 μM、15 μM、20 μM、25 μM、30μM浓度时对应的TFE3基因重排性肾细胞癌细胞活性，可以计算出舍吲哚杀死一半TFE3基因重排性肾细胞癌的药物浓度即IC₅₀为12.5 μM。

实施例2 细胞增殖实验

1). 细胞活性检测试剂（CCK-8）：正常培养状态良好的TFE3基因重排性肾细胞癌细胞系细胞，胰酶消化后细胞计数板计数约2000个细胞/孔，铺到96孔板中分为两组（对照组DMSO和实验组舍吲哚），铺板24小时细胞贴壁后后分别加入DMSO和舍吲哚 (13 μM)，分别于加入药物后的0 h、24 h、48 h 检测细胞吸光度值，并计算出相对细胞活性。

2). 平板克隆实验：正常培养状态良好的TFE3基因重排性肾细胞癌细胞系细胞，胰酶消化后细胞计数板计数约2000个细胞/孔，铺到六孔板中，分为两组（对照组DMSO和实验组舍吲哚），铺板24小时后分别加入DMSO和舍吲哚 (13 μM)，10天后，加入4%组织细胞固定液，固定10分钟，后弃去固定液，加入结晶紫溶液染色后，观察细胞集落形成情况。

结果分析：

实验结果参见图2和图3。从图2可以看出，与对照组相比，舍吲哚药物浓度为13 μM处理TFE3基因重排性肾细胞癌48小时后能明显抑制细胞的活性。从图3可以看出，与对照组相比，舍吲哚药物浓度为13 μM处理TFE3基因重排性肾细胞癌，能明显抑制其增殖能力。

实施例3 细胞迁移和侵袭实验

1). 细胞划痕实验：正常培养状态良好的TFE3基因重排性肾细胞癌细胞系细胞，胰酶消化后铺到六孔板中，分为两组（对照组DMSO和实验组舍吲哚），药物分别处理48小时，细胞长满后进行划痕实验并记录0 h时的划痕宽度，划痕实验的具体步骤如下：细胞铺板后观察细胞生长密度，待细胞完全长满视野后，用200µl 黄枪头以合适力度划一条直线，然后PBS洗掉划痕脱落的细胞后镜下观察，记录拍照坐标和划痕宽度，后置于37摄氏度孵箱培养24小时后记录同一坐标的划痕宽度，利用公式：细胞迁移率=（0 h时的划痕宽度 - 24小时后划痕宽度）/ 0 h时的划痕宽度×100%。

2). 细胞迁移：正常培养状态良好的TFE3基因重排性肾细胞癌细胞系细胞，胰酶消化后用无血清培养基重悬细胞，计数约30000个细胞均匀铺到上室中，下室加入10%血清培养基，37摄氏度孵箱培养24小时，然后弃去培养基，加入4%组织细胞固定液，固定10分钟，后弃去固定液，加入结晶紫溶液染色后，镜下观察拍照计数穿过小室的细胞数量。

加入舍吲哚药物以及对照组的具体步骤如下：TFE3-RCC细胞铺到培养皿中培养，一组加入浓度为13 μM的舍吲哚，另一组设为对照组，培养48小时后，胰酶消化后用无血清培养基重悬细胞计数约30000个细胞均匀铺到上室中，下室加入10%血清培养基，37摄氏度孵箱培养24小时，然后弃去培养基，加入4%组织细胞固定液，固定10分钟，后弃去固定液，加入结晶紫溶液染色后，镜下观察拍照计数穿过小室的细胞数量。

3). 侵袭实验：实验开始前在小室上层铺上基质胶（基质胶：无血清培养基 = 1:8），放入37摄氏度孵箱30分钟后进行步骤同细胞迁移实验。

结果分析：

实验结果参见图4和图5。从图4可以看出，与对照组相比，舍吲哚药物浓度为13 μM处理TFE3基因重排性肾细胞癌，能明显抑制其迁移能力。从图5可以看出，与对照组相比，舍吲哚药物浓度为13 μM处理TFE3基因重排性肾细胞癌，能明显抑制其迁移和侵袭能力。

实施例4 类器官实验

类器官半抑制浓度（IC₅₀）测定: 正常培养状态良好类器官（北京大橡科技有限公司），胰酶消化后室温1000rpm离心后细胞沉淀培养基重悬与60%浓度基质胶混合均匀，以800细胞/5μL/孔标准，接种于IBAC S1芯片（北京大橡科技有限公司）微孔中，加入类器官培养基培养类器官3天后，使用带有药物的类器官培养基孵育类器官5天（舍吲哚药物浓度梯度分别为：0.37 μM、1.11 μM、3.33 μM、10 μM、30 μM; 舒尼替尼药物浓度梯度分别为：0.002 μM、0.007 μM、0.02 μM、0.06 μM、0.184 μM）后，使用倒置显微镜记录类器官明场状态并拍照保存。

药物孵育类器官完成后，采用ATP活性检测方法，弃除旧培养基，加入类器官活性检测试剂室温避光孵育30分钟后置于多功能酶标仪检测化学发光值，评估类器官活性。

结果分析：

实验结果参见图6至图8。从图6可以看出，舍吲哚在0.37 μM、1.11 μM、3.33 μM、10μM、30 μM浓度时对应的TFE3基因重排性肾细胞癌类器官活性，可以看出舍吲哚杀死一半TFE3基因重排性肾细胞癌类器官的药物浓度即IC₅₀为0.93 μM，最大抑制率为99.99%。

从图7可以看出，舒尼替尼在0.002 μM、0.007 μM、0.02 μM、0.06 μM、0.184 μM浓度时对应的TFE3基因重排性肾细胞癌类器官活性，可以看出舍吲哚杀死一半TFE3基因重排性肾细胞癌类器官的药物浓度即IC₅₀为0.05 μM，最大抑制率为57.85%。

从图8可以看出，与对照组相比舍吲哚能明显抑制TFE3基因重排性肾细胞癌类器官的生长，舒尼替尼一定程度上能抑制TFE3基因重排性肾细胞癌类器官的生长，但相对舍吲哚来说，其抑制作用明显弱很多。

本文虽然已经给出了本发明的几个实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。

Claims (10)

1.一种治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物或药物组合物，其特征在于，包括舍吲哚。

2.根据权利要求1所述的药物或药物组合物，其特征在于，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。

3.根据权利要求2所述的药物或药物组合物，其特征在于，所述载体或赋形剂包括粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、湿润剂中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的药物或药物组合物，其特征在于，所述药物或药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、冲剂、丸剂、散剂、颗粒剂、膏剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。

5.根据权利要求1所述的药物或药物组合物，其特征在于，所述药物或药物组合物的给药途径为口服、透皮、肌肉、皮下或静脉注射。

6.舍吲哚在制备治疗TFE3基因重排性肾细胞癌的药物中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述载体或赋形剂包括粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、湿润剂中的一种或几种。

9.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、冲剂、丸剂、散剂、颗粒剂、膏剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。

10.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物的给药途径为口服、透皮、肌肉、皮下或静脉注射。