CN119137102A

CN119137102A - Cdk9抑制剂

Info

Publication number: CN119137102A
Application number: CN202380037664.2A
Authority: CN
Inventors: 哈里普拉萨德·万卡拉帕蒂; 李兆亮; 凯尔·麦得力; 闫冬青; 大卫·J·比尔斯
Original assignee: Baiolesi Treatment Co ltd
Current assignee: Baiolesi Treatment Co ltd
Priority date: 2022-04-08
Filing date: 2023-04-06
Publication date: 2024-12-13
Also published as: KR20250002426A; US20230322792A1; AU2023248394A1; WO2023196517A1; MX2024012471A; EP4504708A1

Abstract

(I)或其立体异构体或盐(例如，药学上可接受的盐)，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p、m和n如本文所定义。还提供了化合物作为药物组合物的组分的用途和其使用方法。

Description

CDK9抑制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求于2022年4月8日提交的题为“CDK9抑制剂(CDK9 INHIBITORS)”的美国临时专利申请序列号63/329,105的权益，所述美国临时专利申请的全部内容特此通过引用并入。

技术领域

本公开总体上涉及抑制蛋白激酶(如细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK))活性的化合物，并且涉及治疗癌症和与CDK相关的其它病状的组合物和方法。

背景技术

细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)是丝氨酸-苏氨酸激酶，其功能是协调多种细胞功能并磷酸化细胞周期进展所必需的底物。特定CDK在特定时间的活性对于细胞周期的启动和协调进展都是必不可少的。例如，CDK7、CDK8和CDK9在调节转录中起作用，以通过驱动许多靶基因的表达来进一步影响细胞增殖和存活。CDK与癌症生长和存活的相关性已经在CDK抑制剂的产生中获得了广泛的关注。

大量CDK9抑制剂已被广泛用于肿瘤细胞快速诱导凋亡。然而，与CDK9以外的活性相关的复杂毒性概况阻碍了开发。

因此，需要合理设计特异性和选择性CDK9抑制剂，用于治疗癌症和其它介导和/或相关的病状。本公开满足这些需求并提供其它相关优点。

发明内容

简而言之，本公开提供了CDK9抑制剂化合物，所述CDK9抑制剂化合物包括其立体异构体或盐(例如药学上可接受的盐)，其可以单独使用或与药学上可接受的载体组合使用。还提供了使用CDK9抑制剂化合物治疗各种疾病或病状如膀胱癌、前列腺癌和白血病的方法。

在一个实施方案中，提供了具有以下结构(I)的化合物：

或其盐(例如药学上可接受的盐)或立体异构体，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p、m和n如本文所定义。还提供了化合物作为药物组合物的组分的用途和其使用方法。还提供了包含前述结构(I)的化合物中的一种或多种化合物和治疗剂的药物组合物。

在其它实施方案中，本公开提供了一种用于向有需要的患者施用治疗剂的方法，所述方法包含制备包含结构(I)的化合物和治疗剂的组合物并且将所述组合物递送到所述患者。

在参考以下详细描述后，本公开的这些和其它方面将是显而易见的。

具体实施方式

在以下说明中，给出某些具体细节以便提供对本公开的各种实施方案的彻底理解。然而，本领域的普通技术人员将理解可以在没有这些细节的情况下实践本公开的实施方案。如本文所使用的，除非另外说明，否则以下术语具有赋予它们的含义。

除非上下文另有要求，否则在整个本说明书和权利要求书中，词语“包含(comprise)”及其变型，如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应以开放和包容的意义解释，即“包括但不限于”。

在整个说明书中对“一个实施方案”或“实施方案”的引用意指结合所述实施方案描述的特定特征、结构或特性包括在本公开的至少一个实施方案中。因此，在本说明书中各处出现的短语“在一个实施方案中”或“在实施方案中”不一定都指同一实施方案。此外，特定特征、结构或特性可以以任何合适的方式组合在一个或多个实施方案中。

除非另外规定，否则本文中所使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。如在说明书和权利要求中所用的，单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“所述(the)”包括复数对象，除非上下文中另外明确指明。

“羟基(Hydroxy)”或“羟基(hydroxyl)”是指-OH基团。

“氨基”是指-NH₂基团。

“氰基”是指-CN基团。

“烷基”是指饱和直链或支链烃链基团，其仅由碳和氢原子组成，具有一至六个碳原子(C₁-C₆烷基)，所述碳原子通过单键附接到分子的其余部分。烃链基团包括例如甲基、乙基、正丙基、1甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1二甲基乙基(叔丁基)、异戊基、正己基等。除非本说明书中另有具体说明，否则烷基任选地被取代。

“环烷基”是指具有三至八个碳原子的饱和环状烃基(C₃-C₈环烷基)，所述碳原子通过单键附接到分子的其余部分。饱和环状烃基团包括例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。除非在本说明书中另有具体陈述，否则环烷基任选地被取代。

“卤代”是指氟代、氯代、溴代或碘代。卤代属于元素周期表第17族。

“烷氧基”是指式-OR_a的基团，其中R_a是如上文所定义的烷基，含有一至十二个碳原子(C₁-C₁₂烷氧基)、一至八个碳原子(C₁-C₈烷氧基)或一至六个碳原子(C₁-C₆烷氧基)或这些范围内的任何值。除非在说明书中另外具体地说明，否则烷氧基任选地被取代。

“卤代烷基”是指被一个或多个如上所定义的卤代基团所取代的如上所定义的烷基，例如，三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,2-二氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1,2-二溴乙基等。除非在说明书中另外具体地说明，否则卤代烷基任选地被取代。

“卤代烷氧基”是指具有下式的基团：-O卤代烷基，其中卤代烷基如上所定义。除非在本说明书中另有具体陈述，否则卤代烷氧基任选地被取代。

“羟烷基(Hydroxylalkyl)”或“羟烷基(hydroxyalkyl)”是指被一个或多个羟基取代的如上所定义的烷基。羟烷基通过烷基碳原子连接在主链上。除非在说明书中另外具体地说明，否则羟烷基任选地被取代。

“芳基”是指具有完全缀合π电子系统的6至12个碳原子的全碳单环或稠环多环(即，共享相邻碳原子对的环)基团。芳基的实例(但不限于)是苯基、萘基和蒽基。芳基可以被取代或未被取代。当被取代时，如此术语在下文所定义的，芳基被一个或多个取代基取代，更优选地一个、两个或三个、甚至更优选地一个或两个独立地选自由以下组成的组的取代基：烷基(其中烷基可以任选地被一个或两个取代基取代)、卤代烷基、卤代、羟基、烷氧基、巯基、烷硫基、氰基、酰基、硝基、苯氧基、杂芳基、杂芳氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基二烷基氨基、芳基、杂芳基、碳环或杂环(其中芳基、杂芳基、碳环或杂环可以任选地被取代)。

“杂环基”或“杂环”是指由两至十二个碳原子和一至六个杂原子组成的稳定的3至18元非芳香族环基团，所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组。在一些实施方案中，杂环基是饱和的(即，不含双键或三键)。除非说明书中另外具体说明，否则杂环基可以是单环、双环、三环或四环体系，其可以包括稠合或桥接环体系；并且杂环基中的氮、碳或硫原子可以任选地被氧化；氮原子可以任选地被季铵化；并且杂环基可以是部分地或完全饱和的。此类杂环基的实例包括但不限于二氧戊环基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、喹宁环酯基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻吩基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、噻吗啉基、1-氧代-硫代吗啉基和1,1-二氧代-硫代吗啉基。除非在本说明书中另有具体陈述，否则杂环基可以任选地被取代。

“杂芳基”是指包含一至十三个环碳原子、一至六个环杂原子和至少一个芳香族环的5至18元，例如5至6元环体系基团，所述环杂原子选自由氮、氧和硫组成的组。杂芳基可以为单环、双环、三环或四环环体系，其可以包括稠合或桥接环体系；并且杂芳基中的氮、碳或硫原子可以任选地被氧化；氮原子可以任选地被季铵化。实例包括但不限于氮杂环庚烯基、吖啶基，苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并吲哚基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧氮杂基、1,4-苯并二噁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并噁唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并二噁英基、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(苯并硫苯基)、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、异喹啉基、吲哚嗪基、异噁唑基、萘啶基、噁二唑基、2-氧代氮杂基、噁唑基、1-环氧吡啶基、1-环氧嘧啶基、1-环氧吡嗪基、1-环氧哒嗪基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基和噻吩基(即，噻吩基)。除非在说明书中另外具体地说明，否则杂芳基任选地被取代。

本文所用的术语“取代的”意指上述基团中的任何基团(例如，烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、羟烷基或杂环基)，其中至少一个氢原子被与非氢原子相连的键替换，如但不限于：卤素原子如F、Cl、Br和I；氧代基团(＝O)；羟基(-OH)；烷氧基(-OR^a，其中R^a为C₁-C₁₂烷基或环烷基)；羧基(-OC(＝O)R^a或-C(＝O)OR^a，其中R^a为H、C₁-C₁₂烷基或环烷基)；胺基(-NR^aR^b，其中R^a和R^b各自独立地为H、C₁-C₁₂烷基或环烷基)；C₁-C₁₂烷基；以及环烷基。在一些实施方案中，取代基为C₁-C₁₂烷基。在其它实施方案中，取代基为环烷基。在其它实施方案中，取代基为卤代基团，如氟。在其它实施方案中，取代基为氧代基团。在其它实施方案中，取代基为羟基。在其它实施方案中，取代基为烷氧基。在其它实施方案中，取代基为羧基。在其它实施方案中，取代基为胺基。

“任选的”或“任选地”(例如，任选取代的)意指随后描述的情况事件可能会或可能不会发生，并且所述描述包括所述事件或情况发生的实例和不发生的实例。例如，“任选取代的烷基”意指烷基可以或可以不被取代，并且所述描述包括经取代的烷基和未经取代的烷基两者。

“前药”是指可以在生理条件下或通过溶剂分解转化成本公开的生物活性化合物的化合物。因此，术语“前药”是指药学上可接受的本公开化合物的代谢前体。前药在施用于有需要的受试者时可能是无活性的，但在体内转化为本公开的活性化合物。前药通常在体内快速转化以产生本公开的母体化合物，例如通过在血液中水解。前药化合物通常在哺乳动物生物体中提供溶解性、组织相容性或延迟释放的优点(参见Bundgard,H.,《前药设计(Design of Prodrugs)》(1985),第7-9页,21-24(阿姆斯特丹的爱思唯尔出版社(Elsevier,Amsterdam))。Higuchi,T.等人,《A.C.S.会议录(A.C.S.Symposium Series)》第14卷和《药物设计中的生物可逆载体(Bioreversible Carriers in Drug Design)》,Edward B.Roche编辑,美国药学协会(American Pharmaceutical Association)和佩加蒙出版社(Pergamon Press),1987中提供了前药的论述。

术语“前药”还意在包括任何共价键合的载体，当此类前药施用于哺乳动物受试者时，其在体内释放本公开的活性化合物。本公开的化合物的前药可以通过修饰存在于本公开的化合物中的功能基团制备，其方式使得这些修饰在常规操控中或者在体内切割为本公开的母体化合物。前药包括其中羟基、氨基或巯基与任何基团键合的本公开的化合物，当将本公开的化合物的前药施用于哺乳动物受试者时，所述基团裂解以分别形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前药的实例包括但不限于本公开的化合物中醇的乙酸盐、甲酸盐和苯甲酸盐衍生物或胺官能团的酰胺衍生物等。

本文所公开的实施方案还意在涵盖通过用具有不同原子质量或质量数的原子替换一个或多个原子而被同位素标记的结构(I)的化合物的所有药学上可接受的化合物。可以掺入所公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分别地如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl、¹²³I和¹²⁵I。这些放射性标记的化合物可以用于帮助确定或测量化合物的有效性，例如通过表征作用位点或方式或对药理学重要作用位点的结合亲和力。某些经同位素标记的结构(I)的化合物，例如那些掺入放射性同位素的化合物，可用于药物和/或底物组织分布研究。放射性同位素氚(即，³H)和放射性同位素碳-14(即，¹⁴C)由于其易于并入和现成的检测手段而对此目的特别有用。

用如氘即²H等较重同位素取代可以提供由较大代谢稳定性产生的某些治疗优点，例如，体内半衰期增加或剂量需求降低，并且因此可以在一些情况下是优选的。

用如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N等正电子发射同位素取代可以在用于检查底物受体占有率的正电子发射断层扫描(PET)研究中有用。经同位素标记的结构(I)的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与如下文所示在制备和实施例中所描述的方法类似的方法使用适当的经同位素标记的试剂代替先前采用的未经标记的试剂来制备。

本文所公开的实施方案还意在涵盖所公开化合物的体内代谢产物。此类产物可以由例如所施用的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、酯化等产生，主要是由于酶促过程。因此，本公开包括通过包含向哺乳动物施用本公开的化合物持续足以产生其代谢产物的时间段的方法产生的化合物。此类产物通常通过以下方式来鉴定：将本公开的经放射性标记的化合物以可检测剂量施用于动物(如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或人)，允许足够的时间以发生代谢，并且将其转化产物与尿液、血液或其它生物样品分离。

“稳定化合物”和“稳定结构”意在指示足够稳健以便在从反应混合物中分离至可用纯度并且调配为有效治疗剂后继续存在的化合物。

“哺乳动物”包括人以及如实验室动物和家庭宠物(例如，猫、狗、猪、牛、绵羊、山羊、马、兔)等家养动物和如野生动物等非家养动物。

“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”包括但不限于任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、风味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂，其已被美国食品和药物管理局(United StatesFood and Drug Administration)认可用于人或家畜是可接受的。

“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐两者。

“药学上可接受的酸加成盐”是指保留游离碱的生物有效性和性质的那些盐，所述盐在生物学上或其它方面并非是不期望的，并且由以下形成：无机酸，如但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；以及有机酸，如但不限于乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、樟脑酸、樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环己氨磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡萄庚酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、马尿酸、异丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、帕莫酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸(TFA)、十一碳烯酸等。

“药学上可接受的碱加成盐”是指保留游离酸的生物学有效性和特性的那些盐，所述盐在生物学上或其它方面不是不期望的。这些盐通过向游离酸中添加无机碱或有机碱来制备。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐是铵盐、钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺盐、仲胺盐和叔胺盐，经取代的胺包括天然存在的经取代的胺、环胺和碱离子交换树脂，如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因(procaine)、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、苯明青霉素(benethamine)、苄星青霉素(benzathine)、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。特别优选的有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱和咖啡因。

“药物组合物”是指本公开的化合物的调配物和在本领域中通常接受的用于将生物活性化合物递送到哺乳动物(例如，人)的介质。此类介质包括所有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

“有效量”或“治疗有效量”是指本公开的化合物在向哺乳动物(优选地人)施用时足以实现对哺乳动物(优选地人)的治疗的量。构成“治疗有效量”的本公开的脂质纳米颗粒的量将依据化合物、病状及其严重程度、施用方式和要治疗的哺乳动物的年龄而变化，但可以由本领域的普通技术人员根据其自己的知识和本公开来常规地进行确定。

如本文所使用的，“蛋白激酶介导的病状”或“疾病”是指已知蛋白激酶在其中起作用并且通过用蛋白激酶抑制剂治疗而减轻的任何疾病或其它有害病状。在某些实施方案中，癌症为结肠癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌或卵巢组织癌。

如本文所用的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”涵盖患有所关注的疾病或病状的哺乳动物(优选地人)的所关注疾病或病状的治疗，并且包括：

(i)预防疾病或病状在哺乳动物体内发生，具体地在此类哺乳动物易患病状但尚未诊断患有所述病症时；

(ii)抑制疾病或病状，即，阻止其发展；

(iii)缓解疾病或病状，即，使疾病或病状消退；或者

(iv)缓解由所述疾病或病状引起的症状，即，缓解疼痛而不解决潜在的疾病或病状。如本文所使用的，术语“疾病”和“病状”可以互换使用或可以不同，因为特定疾病或病状可能不具有已知的致病源(因此病因学尚未确定)，并且因此所述特定疾病或病状尚未被识别为疾病，而仅被识别为一种不期望的病状或综合征，其中临床医生已鉴定出或多或少的具体的症状组。

本公开的化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)可以含有一个或多个不对称中心，并且因此可以产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，其可以根据绝对立体化学定义为氨基酸的(R)-或(S)-或(D)-或(L)-。本公开意在包括所有此类可能的异构体及其外消旋和光学纯的形式。光学活性(+)和(-)、(R)-和(S)-或(D)-和(L)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术，例如色谱法和分级结晶进行拆分。用于制备/分离单独的对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯前体进行手性合成或使用例如手性高压液相色谱法(HPLC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。当本文所描述的这些化合物含有烯烃双键或几何不对称的其它中心时，并且除非另有说明，否则意图是这些化合物包括E几何异构体和Z几何异构体两者。同样，也旨在包括所有互变异构形式。

“立体异构体”是指由通过相同键键合的相同原子构成但是具有不同三维结构的相同原子的化合物，所述立体异构体是不可互换的。本公开考虑了各种立体异构体及其混合物，并且包括“对映异构体”，所述对映异构体是指其分子是彼此不可叠加的镜像的两个立体异构体。本公开还考虑了“非对映异构体”，其是指不相同立体异构体的非镜像。当化合物的两个或更多个立体异构体在等效立体中心中的一个或多个等效立体中心处具有不同构型并且彼此不是镜像时，就会出现非对映异构体。

“互变异构体”是指从分子的一个原子到同一分子的另一个原子的质子转移。本公开包括任何所述化合物的互变异构体。

化合物

一方面，本公开提供了CDK9抑制剂化合物，所述CDK9抑制剂化合物包括其立体异构体或盐(例如药学上可接受的盐)，其可以单独使用或与药学上可接受的载体组合使用。还提供了使用CDK9抑制剂化合物治疗各种疾病或病状如膀胱癌、前列腺癌和白血病的方法。

在一个实施方案中，所述化合物具有以下结构(I)：

或其立体异构体或盐，其中：

R¹为氢、卤代、羟基、C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆羟烷基；

R²为氢、卤代、羟基、C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆羟烷基；

R³为C₃-C₈环烷基或3-10元杂环基；

R⁴在每次出现时独立地为卤代、羟基、氰基、氨基、C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆羟烷基；

m为0、1或2；并且

n为0、1、2、3或4，

其中R¹、R²、R³和R⁴中的每一个任选地被一个或多个取代基取代。例如，在一些实施方案中，每个C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆羟烷基和3-10元杂环基任选地被取代。

一个实施方案提供了一种具有以下结构(I)的化合物：

或其立体异构体或盐，其中：

R³为C₃-C₈环烷基或3-10元杂环基；

R⁴和R⁵在每次出现时独立地为卤代、羟基、氰基、氨基、C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆羟烷基；

m为0、1或2；

n为0、1、2、3或4；并且

p为0、1或2，

其中每个R¹、R²、R³、R⁴和R⁵任选地被一个或多个取代基取代。

另一个实施方案提供了一种具有以下结构(I)的化合物：

或其立体异构体或盐，其中：

R³为C₃-C₈环烷基或3-10元杂环基；

m为0、1或2；

n为0、1、2、3或4；并且

p为0、1或2，

其中每个R¹、R²、R³、R⁴和R⁵(例如，烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、羟烷基或杂环基)任选地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：C₁-C₁₂烷基、C₃-C₁₂环烷基、卤代、氧代、羟基、氰基、烷氧基、-C(＝O)OR^a和-NR^bR^c，

其中：

R^a在每次出现时独立地为氢或C₁-C₁₂烷基或环烷基；

R^a和R^b在每次出现时独立地为氢、C₁-C₁₂烷基、C₃-C₁₂环烷基、-C(＝O)烷基(例如，-C(＝O)-C₁-C₁₂烷基)、3-10元杂环基或3-10元杂芳基。

在一些实施方案中，R¹为氢、C₁-C₆烷基或C₃-C₈环烷基。在某些实施方案中，R¹为氢、环丙基、环丁基、环戊基、异丙基、甲基或乙基。在一些实施方案中，R¹为氢、环丙基、环丁基、异丙基或甲基。在某些实施方案中，R¹未被取代。

在一些实施方案中，R²为氢或C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，R²为C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R²为-CH₃。在一些其它实施方案中，R²为氢。在一些实施方案中，R²未被取代。

在某些实施方案中，R¹或R²中的至少一个为氢。在某些实施方案中，R¹和R²中的两者均为氢。

在一些实施方案中，n为0或1。在某些实施方案中，n为2、3或4。在一些实施方案中，n为1。在某些实施方案中，n为0。

在一些实施方案中，R³为C₃-C₈环烷基。在某些实施方案中，R³为C₅-C₆环烷基。在一些实施方案中，R³为3-10元杂环基。在某些实施方案中，R³为5-6元杂环基。在一些实施方案中，R³被取代。

在一些实施方案中，R³被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：羟基、氨基、氰基、卤代、C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、C₁-C₆卤代烷基或-N(R^3b)R^3a，其中R^3a为3-10元杂环基或3-10元杂芳基并且R^3b为氢或C₁-C₆烷基。

在一些实施方案中，R³被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：羟基、氨基、氰基、卤代、C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、C₁-C₆卤代烷基或-N(R^3b)R^3a，其中R^3a为-C(＝O)烷基、3-10元杂环基或3-10元杂芳基并且R^3b为氢或C₁-C₆烷基。

在一些实施方案中，R³被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：羟基、氨基或-N(H)R^3c，其中R^3c为5-6元杂环基。

在一些实施方案中，R³被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：羟基、氨基或-N(H)R^3c，其中R^3c为-C(＝O)CH₃或5-6元杂环基。

在一些其它实施方案中，R³未被取代。

在一些实施方案中，R³具有以下结构中的一种结构：

在某些实施方案中，R³具有以下结构中的一种结构：

在一些实施方案中，R³具有以下结构中的一种结构：

在某些实施方案中，R³具有以下结构中的一种结构：

在一些实施方案中，R³具有以下结构：

在某些实施方案中，R³具有以下结构：

在一些实施方案中，R³具有以下结构：

在某些实施方案中，R³具有以下结构：

在一些实施方案中，R³具有以下结构：

在某些实施方案中，m为1或2。在一些实施方案中，m为0。在一些实施方案中，m为0或1。在某些实施方案中，R⁴在每次出现时为卤代。在一些实施方案中，R⁴在每次出现时独立地为氟、氯或溴。在一些实施方案中，R⁴在每次出现时为氟。

在一些实施方案中，p为0。在一些实施方案中，p为1或2。在一些实施方案中，p为1，并且R⁵为卤代。在某些实施方案中，p为1，并且R⁵为氯。在一些实施方案中，R⁵为2并且R⁵在每次出现时为氯。

在一些实施方案中，化合物呈游离碱形式。在某些实施方案中，化合物为药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为三氟乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为盐酸盐。在一些实施方案中，化合物为甲酸盐。在某些实施方案中，化合物为互变异构体。

在各个不同的实施方案中，化合物具有下表1中列出的结构之一(或其立体异构体或盐)。

表1.结构(I)的代表性化合物

也作为三氟乙酸盐获得

也作为盐酸盐获得

^#也作为甲酸盐获得

IC₅₀值：

+++表示低于1μM的值

++表示高于1μM且低于5μM的值

+表示高于5μM且低于10μM的值

应当理解，如上所述的结构(I)的化合物的任何实施方案，以及如上所述的结构(I)的化合物中的任何特定取代基和/或变量可以独立地与结构(I)的化合物的其它实施方案和/或取代基和/或变量组合以形成上文未具体阐述的本公开的实施方案。另外，在特定实施方案和/或权利要求中针对任何特定R基团或变量n或m列出取代基和/或变量的列表的情况下，应当理解，每个单独的取代基和/或变量可以从特定实施方案和/或权利要求中删除，并且剩余的取代基和/或变量列表将被认为在本公开的范围内。应当理解，在本说明书中，所描绘的式的取代基和/或变量的组合仅在此类贡献产生稳定化合物时是允许的。

药物组合物

其它实施方案涉及药物组合物。药物组合物包含任何一种(或多种)前述化合物和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，药物组合物被调配用于口服施用。在其它实施方案中，药物组合物被配制用于注射。在仍多个实施方案中，药物组合物包含如本文所公开的化合物和另外的治疗剂(例如，抗癌剂)。此类治疗剂的非限制性实例描述于下文中。

合适的施用途径包括但不限于口服、静脉内、直肠、气雾剂、肠胃外、眼、肺、经粘膜、经皮、阴道、耳、鼻和局部施用。另外，仅作为实例，肠胃外递送包括肌内、皮下、静脉内、髓内注射以及鞘内、直接心室内、腹膜内、淋巴内和鼻内注射。

在某些实施方案中，如本文所述的化合物以局部而非全身的方式施用，例如，经由将化合物直接注射到器官中，通常以贮库制剂或持续释放调配物形式。在具体实施方案中，长效调配物通过植入(例如，皮下或肌内)或通过肌内注射施用。此外，在其它实施方案中，化合物在靶向药物递送系统中递送，例如在包被有器官特异性抗体的脂质体中递送。在此类实施方案中，脂质体靶向器官并被器官选择性吸收。在又其它实施方案中，如本文所述的化合物以快速释放调配物的形式、以延长释放调配物的形式或以中间释放调配物的形式提供。在又其它实施方案中，局部施用本文所述的化合物。

在根据本公开的实施方案的治疗方法中，将有效量的至少一种结构(I)的化合物施用于患有或诊断为患有此类疾病、病症或医学病状的受试者。有效量或剂量可以通过方法如建模、剂量递增研究或临床试验来确定，例如施用或药物递送的模式或途径，药剂的药代动力学，疾病、病症或病状的严重程度和过程，受试者先前或正在进行的疗法，受试者的健康状态和对药物的应答以及治疗医师的判断。

根据本公开的化合物在宽剂量范围内是有效的。例如，在成人的治疗中，每天10至5000mg、100至5000mg、1000mg至4000mg和每天1000至3000mg的剂量是在一些实施方案中使用的剂量的实例。确切剂量将取决于施用途径、化合物的施用形式、待治疗的受试者、待治疗的受试者的体重以及主治医师的偏好和经验。

在一些实施方案中，本公开的化合物以单剂量施用。通常，此类施用将通过注射，例如静脉内注射施用，以快速引入药剂。然而，适当时使用其它途径。单剂量的本公开的化合物也可以用于治疗急性病症。

在一些实施方案中，本公开的化合物以多剂量施用。在一些实施方案中，给药为每天约一次、两次、三次、四次、五次、六次或多于六次。在其它实施方案中，给药为约每月一次、每两周一次、每周一次或每隔一天一次。在另一个实施方案中，本公开的化合物和另一种药剂(例如，抗癌剂)一起施用约每天一次至约每天6次。在另一个实施方案中，本公开的化合物和药剂的施用持续少于约7天。在又另一个实施方案中，施用持续超过约6天、10天、14天、28天、两个月、六个月或一年。在一些情况下，实现连续给药并且连续给药持续所需时长。

本公开化合物的施用可以持续所需的时间。在一些实施方案中，本公开的化合物施用超过1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天或28天。在一些实施方案中，本公开的化合物施用少于28天、14天、7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天。在一些实施方案中，本公开的化合物持续长期施用，例如以治疗慢性效应。

在一些实施方案中，本公开的化合物以单独剂型施用。本领域中已知的是，由于受试者间化合物药代动力学存在可变性，所以给药方案的个体化对于最佳疗法来说是必要的。

在一些实施方案中，本文描述的化合物被调配成药物组合物。在具体实施方案中，使用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式调配药物组合物，所述载体包含促进将所公开的化合物加工成可以在药学上使用的制剂的赋形剂和助剂。适当的调配物取决于所选择的施用途径。使用任何药学上可接受的技术、载体和赋形剂适于调配本文所描述的药物组合物：《雷明顿：药学科学与实践(Remington:The Science and Practice ofPharmacy)》,第十九版(宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton,Pa.):麦克出版公司(MackPublishing Company),1995)；Hoover,John E.,《雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceutical Sciences)》马克出版公司,宾夕法尼亚州伊斯顿1975；Liberman,H.A.和Lachman,L.编辑,《药物剂型(Pharmaceutical Dosage Forms)》,纽约州纽约市的马塞尔德克尔公司(Marcel Decker,New York,N.Y.),1980；以及《药物剂型和药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)》,第七版(利平科特·威廉斯和威尔金斯出版公司(Lippincott Williams&Wilkins)1999)。

本文提供了包含一种或多种结构(I)的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。

本文提供了药物组合物，其包含一种或多种选自结构(I)的化合物的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂和载体。在某些实施方案中，所描述的化合物作为药物组合物施用，其中一种或多种选自结构(I)的化合物的化合物与其它活性成分混合，如在组合疗法中。本文涵盖在以下组合疗法部分和整个本公开中阐述的活性物质的所有组合。在具体实施方案中，药物组合物包括一种或多种结构(I)的化合物。

如本文所使用的，药物组合物是指选自结构(I)的化合物的一种或多种化合物与其它化学组分(如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂)的混合物。在某些实施方案中，药物组合物有助于将化合物施用于生物体。在一些实施方案中，将治疗有效量的选自本文所提供的结构(I)的化合物的一种或多种化合物以药物组合物形式施用于患有待治疗的疾病、病症或医学病状的哺乳动物。在具体的实施方案中，哺乳动物是人。在某些实施方案中，治疗有效量根据疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和其它因素而变化。本文所描述的化合物单独使用或与作为混合物的组分的一种或多种治疗剂组合使用。

在一个实施方案中，将一种或多种选自结构(I)的化合物的化合物调配在水溶液中。在具体实施方案中，仅作为实例，水溶液选自生理学上相容的缓冲液，如汉克氏溶液(Hank's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理盐水缓冲液。在其它实施方案中，将选自结构(I)的化合物的一种或多种化合物调配用于经粘膜施用。在具体实施方案中，经粘膜调配物包括适于待渗透的屏障的渗透剂。在其中将本文所描述的化合物调配用于其它胃肠外注射的仍其它实施方案中，合适的调配物包括水性或非水性溶液。在具体实施方案中，此类溶液包括生理相容的缓冲液和/或赋形剂。

在另一个实施方案中，本文所描述的化合物被调配用于口服施用。通过将活性化合物与例如药学上可接受的载体或赋形剂组合来调配本文所描述的化合物。在各种实施方案中，将本文所描述的化合物调配成口服剂型，仅作为实例，所述口服剂型包括片剂、粉末、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、酏剂、浆液、悬浮液等。

在某些实施方案中，用于口服使用的药物制剂通过以下方式获得：将一种或多种固体赋形剂与一种或多种本文所描述的化合物混合，任选地研磨所得混合物，并且如果需要，在添加合适的助剂之后加工颗粒的混合物以获得片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂为填充剂，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；或其它，如：聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚维酮)或磷酸钙。在具体实施方案中，任选地添加崩解剂。仅作为实例，崩解剂包括交联的交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐如藻酸钠。

在一个实施方案中，给剂型如糖衣丸芯和片剂提供一种或多种合适的包衣。在具体实施方案中，浓缩的糖溶液用于包衣剂型。糖溶液任选地含有另外的组分，如仅作为实例，阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料和/或颜料也任选地添加到包衣中用于识别目的。另外，染料和/或颜料任选地用于表征活性化合物剂量的不同组合。

在某些实施方案中，将治疗有效量的至少一种本文所描述的化合物调配成其它口服剂型。口服剂型包括由明胶制成的推合式胶囊，以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨醇)制成的软的密封胶囊。在具体实施方案中，推合式配合胶囊含有与一种或多种填料混合的活性成分。仅作为实例，填充剂包括乳糖、粘结剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石或硬脂酸镁)以及任选地稳定剂。在其它实施方案中，软胶囊含有溶解或悬浮于合适液体中的一种或多种活性化合物。仅作为实例，合适液体包括一种或多种脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，任选地添加稳定剂。

在其它实施方案中，本文所描述的化合物被调配用于胃肠外注射，包括适于团注或连续输注的调配物。在具体实施方案中，用于注射的调配物以单位剂型(例如，在安瓿中)或在多剂量容器中呈现。任选地将防腐剂添加到注射调配物中。在仍其它实施方案中，将药物组合物调配成适于肠胃外注射的形式，如在油性或水性媒剂中的无菌悬浮液、溶液或乳液。肠胃外注射调配物任选地含有调配剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。在具体实施方案中，用于肠胃外施用的药物调配物包括呈水溶性形式的活性化合物的水溶液。在另外的实施方案中，将选自结构(I)的化合物的一种或多种化合物的悬浮液制备为合适的油性注射悬浮液。用于本文所描述的药物组合物中的合适的亲脂性溶剂或媒剂包括，仅作为实例，脂肪油(如芝麻油)或合成脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酯)或脂质体。在某些具体实施方案中，水性注射悬浮液含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，悬浮液含有合适的稳定剂或增加化合物溶解度以允许制备高浓度溶液的制剂。可替代地，在其它实施方案中，活性成分呈粉末形式，用于在使用前用合适的媒剂例如无菌无热原水重构。

药物组合物包括至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，以及一种或多种选自本文所描述的结构(I)的化合物的化合物作为活性成分。活性成分呈游离酸或游离碱形式，或药学上可接受的盐形式。另外，本文所描述的方法和药物组合物包括使用具有相同类型活性的这些化合物的N-氧化物、结晶形式(也称为多晶型物)以及活性代谢物。本文所描述的化合物的所有互变异构体都包括在本文提供的化合物的范围内。另外，本文所描述的化合物涵盖非溶剂化形式以及具有药学上可接受的如水、乙醇等溶剂的溶剂化形式。本文所呈现的化合物的溶剂化形式也被视为本文所公开的。另外，药物组合物任选地包括其它医学或药学试剂、载体、佐剂(如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂)、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐、缓冲液和/或其它治疗上有价值的物质。

用于制备包含本文所描述的化合物的组合物的方法包括将化合物与一种或多种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体调配以形成固体、半固体或液体。固体组合物包括但不限于粉末、片剂、可分散颗粒、胶囊、扁囊和栓剂。液体组合物包括其中溶解有化合物的溶液、包含化合物的乳液、或含有包含本文所公开的化合物的脂质体、胶束或纳米颗粒的溶液。半固体组合物包括但不限于凝胶、悬浮液和乳膏。本文所描述的药物组合物的形式包括液体溶液或悬浮液、适于在使用前在液体中溶解或悬浮的固体形式、或作为乳液。这些组合物还任选地含有少量无毒的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等。

在一些实施方案中，包含一种或多种选自结构(I)的化合物的化合物的药物组合物示例性地采取液体形式，其中药剂存在于溶液、悬浮液或两者中。通常，当组合物作为悬浮液施用时，药剂的第一部分存在于溶液中，并且药剂的第二部分以颗粒状形式存在于液体基质中的悬浮液中。在一些实施方案中，液体组合物包括凝胶调配物。在其它实施方案中，液体组合物是水性的。

在某些实施方案中，水性悬浮液含有一种或多种聚合物作为悬浮剂。聚合物包括水溶性聚合物如纤维素聚合物，例如羟丙基甲基纤维素，以及水不溶性聚合物如交联的含羧基聚合物。本文所描述的某些药物组合物包含粘膜粘附聚合物，其选自例如羧甲基纤维素、卡波姆(丙烯酸聚合物)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、聚卡波非、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、藻酸钠和葡聚糖。

药物组合物还任选地包括增溶剂以帮助一种或多种选自结构(I)的化合物的化合物的溶解。术语“增溶剂”通常包括引起形成所述药剂的胶束溶液或真溶液的药剂。某些可接受的非离子表面活性剂例如聚山梨醇酯80可用作增溶剂，眼科可接受的二醇、聚二醇(例如，聚乙二醇400)和二醇醚也可以用作增溶剂。

此外，药物组合物任选地包括一种或多种pH调节剂或缓冲剂，包括酸，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠、三羟甲基氨基甲烷；以及缓冲液，如柠檬酸盐/葡萄糖、碳酸氢钠和氯化铵。此类酸、碱和缓冲液以将组合物的pH维持在可接受范围内所需的量被包括在内。

组合物还任选地包括使组合物的渗透压达到可接受范围所需的量的一种或多种盐。此类盐包括具有钠、钾或铵阳离子以及氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的那些盐；合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。

其它药物组合物任选地包括一种或多种防腐剂以抑制微生物活性。合适的防腐剂包括含汞物质，如硼酸苯汞和硫柳汞；稳定的二氧化氯；以及季铵化合物，如苯扎氯铵、十六烷基三甲基溴化铵和十六烷基氯化吡啶鎓。

组合物可以包括一种或多种表面活性剂以增强物理稳定性或用于其它目的。合适的非离子表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；以及聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛氧基醇10、辛氧基醇40。

组合物可以包括一种或多种抗氧化剂以在需要时增强化学稳定性。合适的抗氧化剂包括，仅作为实例，抗坏血酸和焦亚硫酸钠。

在某些实施方案中，水性悬浮液组合物包装在单剂量不可再封闭的容器中。可替代地，使用多剂量可重新封闭的容器，在这种情况下，通常在组合物中包括防腐剂。

在可替代的实施方案中，使用用于疏水性药物化合物的其它递送系统。脂质体和乳液是可用于本文的递送媒剂或载体的实例。在某些实施方案中，还使用有机溶剂如N-甲基吡咯烷酮。在另外的实施方案中，使用如含有治疗剂的固体疏水聚合物的半透性基质等持续释放系统递送本文所描述的化合物。各种持续释放材料可用于本文。在一些实施方案中，持续释放胶囊释放化合物，持续数周至100天以上。根据治疗试剂的化学性质和生物稳定性，使用另外的蛋白质稳定化策略。

在某些实施方案中，本文所描述的调配物包含一种或多种抗氧化剂、金属螯合剂、含硫醇化合物和/或其它通用稳定剂。此类稳定剂的实例包括但不限于：(a)约0.5％至约2％w/v甘油，(b)约0.1％至约1％w/v甲硫氨酸，(c)约0.1％至约2％w/v一硫代甘油，(d)约1mM至约10mM EDTA，(e)约0.01％至约2％w/v抗坏血酸，(f)0.003％至约0.02％w/v聚山梨醇酯80，(g)0.001％至约0.05％w/v聚山梨醇酯20，(h)精氨酸，(i)肝素，(j)硫酸葡聚糖，(k)环糊精，(l)戊聚糖多硫酸酯和其它肝素类，(m)二价阳离子如镁和锌；或(n)其组合。

在一些实施方案中，本公开的药物组合物中提供的选自结构(I)的化合物的一种或多种化合物的浓度大于90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19.75％、19.50％、19.25％、19％、18.75％、18.50％、18.25％、18％、17.75％、17.50％、17.25％、17％、16.75％、16.50％、16.25％、16％、15.75％、15.50％、15.25％、15％、14.75％、14.50％、14.25％、14％、13.75％、13.50％、13.25％、13％、12.75％、12.50％、12.25％、12％、11.75％、11.50％、11.25％、11％、10.75％、10.50％、10.25％、10％、9.75％、9.50％、9.25％、9％、8.75％、8.50％、8.25％、8％、7.75％、7.50％、7.25％、7％、6.75％、6.50％、6.25％、6％、5.75％、5.50％、5.25％、5％、4.75％、4.50％、4.25％、4％、3.75％、3.50％、3.25％、3％、2.75％、2.50％、2.25％、2％、1.75％、1.50％、125％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或0.0001％w/w、w/v或v/v。

在一些实施方案中，本公开的药物组合物中提供的选自结构(I)的化合物的一种或多种化合物的浓度在大约0.0001％至大约50％、大约0.001％至大约40％、大约0.01％至大约30％、大约0.02％至大约29％、大约0.03％至大约28％、大约0.04％至大约27％、大约0.05％至大约26％、大约0.06％至大约25％、大约0.07％至大约24％、大约0.08％至大约23％、大约0.09％至大约22％、大约0.1％至大约21％、大约0.2％至大约20％、大约0.3％至大约19％、大约0.4％至大约18％、大约0.5％至大约17％、大约0.6％至大约16％、大约0.7％至大约15％、大约0.8％至大约14％、大约0.9％至大约12％、大约1％至大约10％w/w、w/v或v/v的范围内。

在一些实施方案中，本公开的药物组合物中提供的选自结构(I)的化合物的一种或多种化合物的量等于或小于10g、9.5g、9.0g、8.5g、8.0g、7.5g、7.0g、6.5g、6.0g、5.5g、5.0g、4.5g、4.0g、3.5g、3.0g、2.5g、2.0g、1.5g、1.0g、0.95g、0.9g、0.85g、0.8g、0.75g、0.7g、0.65g、0.6g、0.55g、0.5g、0.45g、0.4g、0.35g、0.3g、0.25g、0.2g、0.15g、0.1g、0.09g、0.08g、0.07g、0.06g、0.05g、0.04g、0.03g、0.02g、0.01g、0.009g、0.008g、0.007g、0.006g、0.005g、0.004g、0.003g、0.002g、0.001g、0.0009g、0.0008g、0.0007g、0.0006g、0.0005g、0.0004g、0.0003g、0.0002g或0.0001g。

在一些实施方案中，本公开的药物组合物中提供的选自结构(I)的化合物的一种或多种化合物的量在0.0001-10g,0.0005-9g、0.001-8g、0.005-7g、0.01-6g、0.05-5g、0.1-4g、0.5-4g或1-3g的范围内。

用于包装本文所描述的药物组合物的包装材料包括可见于例如美国专利第5,323,907号、第5,052,558号和第5,033,252号中的包装材料。药物包装材料的实例包括但不限于泡罩包装、瓶、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶和适于所选调配物和预期施用和治疗模式的任何包装材料。例如，容器包括一种或多种本文所描述的化合物，任选地在组合物中或与本文所公开的另一种药剂组合。容器任选地具有无菌入口(例如，容器是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。此类试剂盒任选地包含具有与其在本文所描述的方法中的用途相关的鉴定描述或标签或说明的化合物。

例如，试剂盒通常包括一个或多个额外的容器，每个容器具有一种或多种从商业和用户观点来看对于本文所描述的化合物的使用所需的各种材料(如试剂，任选地呈浓缩形式，和/或装置)。此类材料的非限制性实例包括但不限于缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器；载体、包装、容器、小瓶和/或列出内容物和/或使用说明的管标签，以及带有使用说明的包装插页。通常还将包括一组说明书。标签任选地在容器上或与容器相关联。例如，当将形成标签的字母、数字或其它字符附着、模制或蚀刻到容器本身中时，标签位于容器上；当标签存在于也容纳容器的接收器或载体中例如作为包装插页时，标签与容器相关。另外，标签用于指示内容物将用于特定的治疗应用。另外，标签指示内容物的使用说明，如在本文所描述的方法中。在某些实施方案中，药物组合物存在于含有一个或多个含有本文提供的化合物的单位剂型的包装或分配器装置中。包装例如含有金属或塑料箔，如泡罩包装。在一些实施方案中，包装或分配器装置附有施用说明。在某些实施方案中，包装或分配器附有与容器相关联的告示，其形式由规范药品的生产、使用或销售的政府机构规定，所述告示反映了所述机构对人用或兽用药品形式的批准。例如，此类告示是美国食品和药物管理局批准的处方药标签，或批准的产品插页。在一些实施方案中，制备在相容的药物载体中调配的含有本文提供的化合物的组合物，将其置于合适的容器中，并标记用于治疗指定的病症。

一个实施方案提供了一种治疗神经内分泌前列腺癌(NEPC)的方法。一些实施方案提供了一种治疗N-MYC或MCL-1过表达的方法。一些实施方案提供了一种治疗转移性去势抵抗性前列腺癌或CRPC的方法。在一些实施方案中，病症或疾病包括治疗具有耐药性的肿瘤。在一些实施方案中，NEPC由前列腺腺癌、雄激素剥夺疗法(ADT)或各种激酶的异常表达和激活引起。一些实施方案提供了一种用于治疗血液肿瘤或实体瘤的方法。

在一些实施方案中，所述方法包括抑制pCDK9、pSer2、P-TEFb、MYC癌基因转录活性或使其沉默，或抑制活性超级增强子复合物。

在一些实施方案中，所述方法包括促进前列腺癌细胞死亡和克服耐药性(例如化疗抗性和其它当前的靶向治疗剂)。

在某些实施方案中，所述方法包括抑制CDK9、N-MYC、C-MYC和其相关的超级增强子基因表达谱。在一些实施方案中，所述方法包括将(中位)存活时间增加到大于12、13、13.5、13.6、13.7、14、18、20或36个月。在一些实施方案中，所述方法进一步包含将结构(I)的化合物与另一种化疗剂(例如，多西他赛(docetaxel)、阿比特龙(abiraterone)、恩杂鲁胺(enzalutamide))组合施用。

在一些实施方案中，所述方法包括抑制CDK9作为前列腺肿瘤的治疗。在一些实施方案中，所述方法包括增加前列腺癌细胞死亡并克服由于化学和当前靶向治疗剂引起的抗性。在一些实施方案中，所述方法包括抑制CDK9-细胞周期蛋白T复合物，其使负延伸因子(NELF)复合物、DRB敏感性诱导因子(DSIF)和RNAPII的CTD的Ser2磷酸化，从而影响延伸阻断的去除。

在一些实施方案中，所述方法包括可逆地结合和抑制CDK9。在一些实施方案中，所述方法包括治疗恶性前列腺癌细胞，尤其是CRPC、mCRPC、NEPC和治疗抗性亚型来源的恶性前列腺癌细胞，同时还表明对正常前列腺细胞没有毒性。在一些实施方案中，所述方法包括调节N-MYC、C-MYC和MCL-1转录(例如，在NEPC细胞中，如来自前列腺癌患者的22RV1、LASCPC-01、C4-2和C4-2B)。在某些实施方案中，所述方法包括口服施用结构(I)的化合物。在一些实施方案中，所述方法包括全局调节转录、沉默和抑制CDK9。在一些实施方案中，所述方法包括双重抑制CDK9、MYC和相关的超级增强子基因。在一些实施方案中，所述方法包括抑制肿瘤生长。

在某些实施方案中，所述方法包括结合或靶向CDK9 ATP结合位点内的残基，例如守门员(gate keeper)Phe103，铰链残基Asp104、Phe105、Cys106和DFG环(167、168、169个残基)，包括后袋K48和糖结合袋残基Glu107、His108和Asp109。

如上所述，本公开的化合物和组合物将用于广泛范围的由蛋白激酶介导的疾病和病症，包括由激酶介导的疾病和病症。此类疾病可以包括例如但不限于癌症，如肺癌、NSCLC(非小细胞肺癌)、燕麦细胞癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、隆突性皮肤纤维肉瘤、头颈癌、皮肤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、结直肠癌、肛门癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、妇科肿瘤(例如子宫肉瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌或外阴癌)、霍奇金氏病(Hodgkin'sDisease)、肝细胞癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌症(例如甲状腺癌、胰腺癌、甲状旁腺癌或肾上腺癌)、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌(尤其是激素难治性的)、慢性或急性白血病、儿童实体瘤、嗜酸性粒细胞增多症、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌(例如肾细胞癌、肾盂癌)、儿科恶性肿瘤、中枢神经系统肿瘤(例如原发性CNS淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、髓母细胞瘤、脑干胶质瘤或垂体腺瘤)、巴雷特食管(Barrett's esophagus)(癌前综合征)、肿瘤性皮肤病、牛皮癣、蕈样肉芽肿和良性前列腺肥大、糖尿病相关疾病如糖尿病视网膜病变、视网膜缺血和视网膜新生血管、肝硬化、血管生成、心血管疾病如动脉粥样硬化、免疫性疾病如自身免疫性疾病和肾病。

在一些实施方案中，药物组合物具有上述化合物和药学上可接受的载体，包括例如任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂，这些已被美国食品和药品管理局批准用于人类或家畜。

在一些实施方案中，一种治疗疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文所描述的化合物或药物组合物。

在一些实施方案中，所述疾病或病症为表达激酶的癌症。在一些具体实施方案中，癌症为膀胱癌。在一些其它具体实施方案中，癌症为前列腺癌。在一些其它具体实施方案中，癌症为血液系统恶性病，如急性髓性白血病。在一些其它具体实施方案中，疾病或病症为自身免疫性或炎性疾病。

化合物的制备

上述化合物和组合物的制备方法如下文所描述和/或本领域已知。本领域技术人员将了解，本文所描述的过程中，中间体化合物的官能团可能需要由合适的保护基团保护。此类官能团包括羟基、氨基、巯基和羧酸。羟基的合适保护基团包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)、四氢吡喃基、苄基等。氨基、脒基和胍基的合适保护基团包括叔丁氧基羰基、苄氧基羰基等。巯基的合适保护基团包括-C(O)-R"(其中R"是烷基、芳基或芳烷基)、对-甲氧基苄基、三苯甲基等。羧酸的合适保护基团包括烷基、芳基或芳基烷基酯。可以根据本领域技术人员已知的并且如本文所描述的标准技术添加或去除保护基团。保护基团的用途详细地描述于以下中：Green,T.W.和P.G.M.Wutz,《有机合成中的保护基(Protective Groups inOrganic Synthesis)》(1999),第3版,威利出版社(Wiley)。如本领域技术人员将理解的，保护基团也可以是聚合物树脂，如Wang树脂、Rink树脂或2-氯三苯甲基-氯树脂。

本领域的技术人员还将理解，尽管本公开的化合物的此类受保护的衍生物本身可能不具有药理学活性，但是所述衍生物可以施用于哺乳动物，并且之后在体内代谢形成具有药理学活性的本公开的化合物。此类衍生物因此可以被描述为“前药”。本公开的化合物的所有前药都包括在本公开的范围内。

此外，通过本领域技术人员已知的方法，用适当的无机或有机碱或酸处理，可以将本公开中以游离碱或酸形式存在的所有化合物转化成其药学上可接受的盐。本公开的化合物的盐可以通过标准技术转化成器游离碱或酸形式。

以下反应方案说明了制备本公开的化合物的方法，即，结构(I)的化合物：

或其盐(例如药学上可接受的盐)或立体异构体，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p、m和n如本文所定义。应当理解，本领域技术人员能够通过类似的方法或通过结合本领域技术人员已知的其它方法来制备这些化合物。还应当理解，本领域技术人员能够以如下文所描述的类似方式，通过使用适当的起始组分并根据需要改变合成参数，制备下文未具体说明的结构(I)的其它化合物。通常，起始组分可以从来源获得(如西格玛-奥德里奇公司(SigmaAldrich)、兰卡斯特合成公司(Lancaster Synthesis,Inc.)、梅布里奇公司(Maybridge)、基质科学公司(Matrix Scientific)、TCI公司和美国Fluorochem公司等)，或者根据本领域技术人员已知的来源合成(参见例如，《高级有机化学：反应、机制和结构(AdvancedOrganic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure)》,第5版(威利出版社,2000年12月))，或者如本公开中所描述制备。

提供以下实施例是出于说明而非限制的目的。

缩略词：

℃(摄氏度)；¹H NMR(质子核磁共振)；DCM(二氯甲烷)；DMSO(二甲亚砜)；eq(等量)；EtOAc(乙酸乙酯)；g(克)；h(小时)；MeOH(甲醇)；mg(毫克)；min(分钟)；mL(毫升)；mmol(毫摩尔)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氢呋喃)；TLC(薄层色谱法)；LDA(二异丙基氨基锂)；AcOH(乙酸)；mCPBA(3-氯过苯甲酸)。

实施例1

化合物I-1的合成

合成3-羟基-3-(2-甲硫基嘧啶-4-基)丙酸乙酯(3)

在-78℃下向二异丙基氨基锂(LDA，THF/庚烷/乙苯中2M)(2.25mL，4.5mmol，1.5当量)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸乙酯(2)(793mg，9.0mmol，3.0当量)。将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后将溶解于THF中的2-(甲硫基)嘧啶-4-甲醛(1)(460mg，3.0mmol，1.0当量)逐滴添加到反应混合物中。在-78℃下搅拌2小时之后，将溶液倒入饱和NH₄Cl水溶液中。将混合物用乙酸乙酯萃取。并且将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供粗产物，将所述粗产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈棕色油的粗产物3-羟基-3-(2-甲硫基嘧啶-4-基)丙酸乙酯(3)(540mg，产率：74％)。TLC系统：己烷:EtOAc(1:1)，R_f值：～0.3。

合成3-(2-甲硫基吡啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)

在0℃下向3-羟基-3-(2-甲硫基嘧啶-4-基)丙酸乙酯(3)(440mg，1.82mmol，1.0当量)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martine periodinane)(925mg，2.18mol，1.2当量)，随后添加H₂O(40mg，2.18mol，1.2当量)。在室温下搅拌16小时后，将饱和硫代硫酸钠水溶液(Na₂S₂O₃)添加到反应液中。将混合物用乙酸乙酯萃取。并且将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供粗产物，将所述粗产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的粗产物3-(2-甲硫基吡啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)(320mg，产率：73％)。TLC系统：己烷:EtOAc(2:1)，R_f值：～0.5。

合成3-环丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5a)

在室温下向3-(2-甲硫基吡啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)(75mg，0.31mmol，1.0当量)于乙酸(AcOH)(5mL)中的搅拌溶液中添加3-氨基-4-环丙基-1H-吡唑(46mg，0.37mmol，1.2当量)。将反应混合物加热到120℃，持续16小时。然后将反应混合物蒸发以去除乙酸后，添加水。将混合物用乙酸乙酯萃取。并且将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供呈棕色固体的粗产物3-环丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5a)(93mg，产率：100％)。TLC系统：DCM:MeoH(10:1)，R_f值：～0.4。

合成7-氯-3-环丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6a)

在室温下向3-环丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5a)(93mg，0.31mmol，1.0当量)于氯氧化磷(V)(POCl₃)(5mL)中的搅拌溶液中添加N,N-二甲基苯胺(82mg，0.68mmol，2.2当量)。将反应混合物加热到100℃，持续3小时。将反应混合物逐滴添加到冰中后，添加饱和NaHCO₃水溶液以将pH调节为7-8。将混合物用乙酸乙酯萃取，并且然后将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的7-氯-3-环丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6a)(55mg，产率：56％)。TLC系统：己烷:EtOAc(4:1)，R_f值：～0.3。

合成3-环丙基-5-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7a)

在室温下向7-氯-3-环丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6a)(60mg，0.19mmol，1.0当量)于乙醇(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸钠(18mg，0.21mmol，1.1当量)和10％ Pd/C(6mg，10％的6a)。将反应混合物在H₂气氛下搅拌24小时。将混合物经(即，硅藻土)过滤，用乙酸乙酯洗涤，经硫酸钠干燥并且然后并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的3-环丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7a)(35mg，产率：65％)。TLC系统：己烷:EtOAc(2:1)，R_f值：～0.3。

合成3-环丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8a)

向3-环丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7a)(35mg，0.12mmol，1.0当量)于冷却到0℃的DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加3-氯过苯甲酸(mCPBA)(纯度，77％)(36mg，0.16mmol，1.3当量)。将反应混合物在0℃下搅拌4小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，以得到呈黄色固体的3-环丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的粗混合物(8a)(36mg，产率：89％)。TLC系统：EtOAc(100％)R_f值：～0.01和0.6。

合成反式-N¹-[4-[(3-环丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]-N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺(化合物I-1)

在室温下向3-环丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8a)(25mg，0.08mmol，1当量)以及(1R*,4R*)-N¹-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺二盐酸盐(33mg，0.12mmol，1.5当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加三甲胺(Et₃N)(33mg，0.32mmol，4当量)，并且将反应混合物在130℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用H₂O淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-N¹-[4-[(3-环丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]-N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺(化合物I-1)(15mg，43％)。TLC系统：DCM:MeOH(2:1)，Rf值：～0.3；¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.82(d,J＝7.3Hz,1H),8.39(d,J＝5.0Hz,1H),7.94(s,1H),7.84(d,J＝7.3Hz,1H),7.57(d,J＝5.0Hz,1H),3.99-3.95(m,2H),3.92-3.82(m,1H),3.47-3.41(m,2H),3.04-2.97(m,1H),2.87-2.81(m,1H),2.21-2.11(m,3H),2.10-2.04(m,2H),1.91-1.87(m,2H),1.50-1.34(m,6H),1.02-0.97(m,4H)；HRMS(ESI)m/z:C₂₄H₃₁N₇O的[M+H]⁺计算值，434.2663，实验值，434.2668。

实施例2

化合物I-2的合成

前体3-(2-甲硫基吡啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)根据实施例1中在步骤1和2之后描述的合成制备。

合成3-环丁基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5b)

在室温下向3-(2-甲基磺酰基吡啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)(150mg，0.65mmol，1.0当量)于乙酸(AcOH)(5mL)中的搅拌溶液中添加4-环丁基-1H-吡唑-5-胺(103mg，0.75mmol，1.2当量)。将反应混合物加热到120℃，持续16小时。将反应混合物蒸发以去除乙酸后，添加水。将混合物用乙酸乙酯萃取。并且将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供呈棕色固体的粗产物3-环丁基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5b)(194mg，产率：100％)。TLC系统：DCM:MeoH(10:1)，R_f值：～0.3。

合成7-氯-3-环丁基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6b)

在室温下向3-环丁基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5b)(194mg，0.62mmol，1.0当量)于氯氧化磷(V)(POCl₃)(5mL)中的搅拌溶液中添加N,N-二甲基苯胺(165mg，1.36mmol，2.2当量)。将反应混合物加热到100℃，持续3小时。将反应混合物逐滴添加到冰中后，添加饱和NaHCO₃水溶液以将pH调节为7-8。将混合物用乙酸乙酯萃取，并且然后将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的7-氯-3-环丁基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6b)(150mg，产率：73％)。TLC系统：己烷:EtOAc(4:1)，R_f值：～0.3。

合成3-环丁基-5-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7b)

在室温下向7-氯-3-环丁基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6b)(150mg，0.45mmol，1.0当量)于乙醇(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸钠(41mg，0.50mmol，1.1当量)和10％ Pd/C(15mg，10％的6b)。将反应混合物在H₂气氛下搅拌24小时。然后将混合物经(即，硅藻土)过滤，用乙酸乙酯洗涤，经硫酸钠干燥并且然后并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的3-环丁基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7b)(95mg，产率：71％)。TLC系统：己烷:EtOAc(4:1)，R_f值：～0.2。

合成3-环丁基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丁基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8b)

向3-环丁基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7b)(95mg，0.32mmol，1.0当量)于冷却到0℃的DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(纯度，77％)(94mg，0.42mmol，1.3当量)。将反应混合物在0℃下搅拌4小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，以得到呈黄色固体的3-环丁基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丁基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的粗混合物(8b)(100mg，产率：100％)。TLC系统：EtOAc(100％)R_f值：～0.05。

合成反式-N¹-[4-[(3-环丁基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]-N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺(化合物I-2)

在室温下向3-环丁基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丁基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8b)(25mg，0.08mmol，1当量)以及(1R*,4R*)-N¹-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺二盐酸盐(33mg，0.12mmol，1.5当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加三甲胺(Et₃N)(33mg，0.32mmol，4当量)，并且将反应混合物在100℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用H₂O淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-N¹-[4-[(3-环丁基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]-N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺(化合物I-2)(15mg，42％)。TLC系统：DCM:MeOH(5:1)，Rf值：～0.3；¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.83(d,J＝7.3Hz,1H),8.38(d,J＝5.0Hz,1H),8.10(s,1H),7.85(d,J＝7.3Hz,1H),7.57(d,J＝5.0Hz,1H),3.99-3.95(m,2H),3.90-3.84(m,2H),3.46-3.40(m,2H),3.06-3.00(m,1H),2.90-2.82(m,1H),2.46-2.40(m,4H),2.16-2.00(m,6H),1.91-1.87(m,2H),1.51-1.35(m,6H)；HRMS(ESI)m/z:C₂₅H₃₃N₇O的[M+H]⁺计算值，448.2819，实验值448.2852。

实施例3

化合物I-3的合成

合成3-异丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5c)

在室温下向3-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)(150mg，0.62mmol，1.0当量)于乙酸(AcOH)(5mL)中的搅拌溶液中添加4-异丙基-1H-吡唑-5-胺(94mg，0.75mol，1.2当量)。将反应混合物加热到120℃，持续16小时。然后将反应混合物蒸发以去除AcOH后，添加水。将混合物用乙酸乙酯萃取。并且将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供呈棕色固体的粗产物3-异丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5c)(187mg，产率：100％)。TLC系统：DCM:MeoH(10:1)，R_f值：～0.3。

合成7-氯-3-异丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6c)

在室温下向3-异丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5c)(187mg，0.62mmol，1.0当量)于氯氧化磷(V)(POCl₃)(5mL)中的搅拌溶液中添加N,N-二甲基苯胺(165mg，1.36mmol，2.2当量)。将反应混合物加热到100℃，持续3小时。将反应混合物逐滴添加到冰中后，添加饱和NaHCO₃水溶液以将pH调节为7-8。将混合物用乙酸乙酯萃取，并且然后将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的7-氯-3-异丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6c)(130mg，产率：66％)。TLC系统：己烷:EtOAc(4:1)，R_f值：～0.3。

合成3-异丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7c)

在室温下向7-氯-3-异丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6c，3020-03_CDK9-P5-A)(130mg，0.41mmol，1.0当量)于乙醇(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸钠(67mg，0.82mmol，1.1当量)和10％ Pd/C(13mg，10％的6c)。将反应混合物在H₂气氛下在60℃下搅拌24小时。将混合物经(即，硅藻土)过滤，用乙酸乙酯洗涤，经硫酸钠干燥并且然后并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的3-异丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7c，3020-04_CDK9-P7-A)(90mg，产率：77％)。TLC系统：己烷:EtOAc(2:1)，R_f值：～0.3。

合成3-异丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-异丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8c)

向3-异丙基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7c)(95mg，0.33mmol，1.0当量)于冷却到0℃的DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加3-氯过苯甲酸(mCPBA)(纯度，77％)(96mg，0.43mmol，1.3当量)。将反应混合物在0℃下搅拌4小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，以得到呈黄色固体的3-异丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-异丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的粗混合物(8c)(80mg，产率：81％)。TLC系统：DCM:MeOH(10:1)R_f值：～0.3和0.7。

合成反式-N¹-[4-[(3-异丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]-N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺(化合物I-3)

在室温下向3-异丙基-5-(2-甲基亚磺酰基-嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-异丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8c)(25mg，0.08mmol，1当量)以及(1R*,4R*)-N¹-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺二盐酸盐(33mg，0.12mmol，1.5当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加碳酸氢钠(NaHCO₃)(32mg，0.32mmol，4当量)，并且将反应混合物在100℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-N¹-[4-[(3-异丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]-N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺(化合物I-3)(14mg，40％)。TLC系统：DCM:MeOH(5:1)，Rf值：～0.3；¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.86(d,J＝7.3Hz,1H),8.39(d,J＝5.0Hz,1H),8.08(s,1H),7.88(d,J＝7.3Hz,1H),7.60(d,J＝5.0Hz,1H),3.98-3.95(m,2H),3.90-3.83(m,1H),3.47-3.41(m,2H),3.39-3.34(m,1H),3.08-3.00(m,1H),2.89-2.80(m,1H),2.24-2.15(m,2H),2.11-2.05(m,2H),1.90-1.87(m,2H),1.49-1.36(m,12H)；HRMS(ESI)m/z:C₂₄H₃₃N₇O的[M+H]⁺计算值，436.2819，实验值436.2853。

实施例4

化合物I-4的合成

前体3-环丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(8a)根据实施例1中在步骤1-6之后描述的合成制备。

合成反式-4-[4-[(3-环丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9a)

在室温下向3-环丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8a)(18mg，0.06mmol，1当量)于叔丁醇(5mL)中的搅拌溶液中添加反式-1-Boc-4-氨基甲基-3-羟基哌啶(20mg，0.09mmol，1.5当量)，并且将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-4-[4-[(3-环丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9a)(20mg，71％)。TLC系统：EtOAc(100％)，Rf值：～0.2。合成反式-5-[2-(3-羟基哌啶-4-基)甲基氨基嘧啶-4-基]-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(化合物I-4)

在室温下向反式-4-[4-[(3-环丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9a)(20mg，0.04mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。将混合物用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-5-[2-(3-羟基哌啶-4-基)甲基氨基嘧啶-4-基]-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(化合物I-4)(15mg，93％)。TLC系统：MeOH(100％，具有1％ Et3N)，Rf值：～0.2；¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.81(d,J＝7.3Hz,1H),8.39(d,J＝5.1Hz,1H),7.93(s,1H),7.88(d,J＝7.3Hz,1H),7.58(d,J＝5.1Hz,1H),3.75-3.67(m,1H),3.62-3.57(m,1H),3.49-3.45(m,1H),3.21-3.17(m,1H),3.09-3.05(m,1H),2.67-2.61(m,1H),2.54-2.49(m,1H),2.17-2.08(m,1H),1.95-1.89(m,1H),1.78-1.72(m,1H),1.49-1.37(m,1H),1.02-0.95(m,4H)；HRMS(ESI)m/z:C₁₉H₂₃N₇O的[M+H]⁺计算值，366.2037，实验值366.2044。

实施例5

化合物I-5的合成

前体3-环丁基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(8b)根据实施例1中在步骤1-4之后和实施例2中在步骤5-6之后描述的合成制备。

合成反式-4-[4-[(3-环丁基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9b)

在室温下向3-环丁基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丁基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8b)(25mg，0.08mmol，1当量)于叔丁醇(5mL)中的搅拌溶液中添加反式-1-Boc-4-氨基甲基-3-羟基哌啶(28mg，0.12mmol，1.5当量)，并且将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-4-[4-[(3-环丁基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9b)(35mg，92％)。TLC系统：EtOAc(100％)，Rf值：～0.3。合成反式-5-[2-(3-羟基哌啶-4-基)甲基氨基嘧啶-4-基]-3-环丁基吡唑并[1,5-a]嘧啶(化合物I-5)

在室温下向反式-4-[4-[(3-环丁基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9b)(25mg，0.05mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物反式-5-[2-(3-羟基哌啶-4-基)甲基氨基嘧啶-4-基]-3-环丁基吡唑并[1,5-a]三氟乙酸嘧啶(化合物I-5)(30mg，100％)；¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.92(d,J＝7.3Hz,1H),8.46(d,J＝5.6Hz,1H),8.18(s,1H),7.97(宽峰,1H),7.79(宽峰,1H),4.07-3.80(m,2H),3.79-3.60(m,2H),3.45-3.35(m,2H),3.03-2.96(m,1H),2.87-2.81(m,1H),2.54-2.38(m,4H),2.25-2.10(m,2H),2.07-1.92(m,2H),1.68-1.59(m,1H)；HRMS(ESI)m/z:C₂₀H₂₅N₇O的[M+H]⁺计算值，380.2193，实验值380.2222。

实施例6

化合物I-6的合成

前体3-异丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(8c)根据实施例1中在步骤1-4之后和实施例3中在步骤5-6之后描述的合成制备。

合成反式-4-[4-[(3-异丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9c)

在室温下向3-异丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-异丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8c)(25mg，0.08mmol，1当量)于叔丁醇(5mL)中的搅拌溶液中添加反式-1-Boc-4-氨基甲基-3-羟基哌啶(20mg，0.09mmol，1.5当量)，并且将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-4-[4-[(3-异丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9c)(30mg，81％)。TLC系统：EtOAc(100％)，Rf值：～0.2。合成反式-5-[2-(3-羟基哌啶-4-基)甲基氨基嘧啶-4-基]-3-异丙基吡唑并[1,5-a]三氟乙酸嘧啶(化合物I-6)

在室温下向反式-4-[4-[(3-异丙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9c)(25mg，0.05mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中将出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物反式-5-[2-(3-羟基哌啶-4-基)甲基氨基嘧啶-4-基]-3-异丙基吡唑并[1,5-a]三氟乙酸嘧啶(化合物I-6)(30mg，100％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.93(d,J＝7.3Hz,1H),8.46(d,J＝5.6Hz,1H),8.13(s,1H),7.99(宽峰,1H),7.80(宽峰,1H),3.97(宽峰,1H),3.79-3.59(m,2H),3.45-3.35(m,2H),3.03-2.96(m,1H),2.87-2.81(m,1H),1.69-1.59(m,1H),1.46(d,J＝6.9Hz,1H)；HRMS(ESI)m/z:C₁₉H₂₅N₇O的[M+H]⁺计算值，368.2193，实验值368.2225。

实施例7

化合物I-7的合成

前体3-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)根据实施例1中在步骤1-2之后描述的合成制备。

合成5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5d)

在室温下向3-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)(680mg，2.83mmol，1.0当量)于乙酸(AcOH)(10mL)中的搅拌溶液中添加1H-吡唑-5-胺(282mg，3.4mmol，1.2当量)。将反应混合物加热到120℃，持续16小时。然后将反应混合物蒸发以去除AcOH后，添加水。将混合物用乙酸乙酯萃取。并且将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供粗产物5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5d)(734mg，产率：100％)。TLC系统：DCM:MeOH(10:1)，R_f值：～0.3。

合成7-氯-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6d)

在室温下向5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5d)(734mg，2.83mmol，1.0当量)于氯氧化磷(V)(POCl₃)(5mL)中的搅拌溶液中添加N,N-二甲基苯胺(755mg，6.23mmol，2.2当量)。将反应混合物加热到100℃，持续3小时。将反应混合物逐滴添加到冰中后，添加饱和NaHCO₃水溶液以将pH调节为7-8。将混合物用乙酸乙酯萃取，并且然后将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的7-氯-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6d)(420mg，产率：53％)。TLC系统：己烷:EtOAc(4:1)，R_f值：～0.3。

合成5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7d)

在室温下向7-氯-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6d)(400mg，1.44mmol，1.0当量)于乙醇(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸钠(236mg，2.88mmol，2.0当量)和10％ Pd/C(40mg，10％的6)。将反应混合物在H₂气氛下在60℃下搅拌24小时。将混合物经(即，硅藻土)过滤，用乙酸乙酯洗涤，经硫酸钠干燥并且然后并浓缩以提供产物，将所述产物通过combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7d)(210mg，产率：60％)。TLC系统：己烷:EtOAc(4:1)，R_f值：～0.2。

合成5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8d)

向5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7d)(60mg，0.25mmol，1.0当量)于冷却到0℃的DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加3-氯过苯甲酸(mCPBA)(纯度，77％)(74mg，0.33mmol，1.3当量)。将反应混合物在0℃下搅拌4小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，以得到呈黄色固体的5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的粗混合物(8d)(65mg，产率：100％)。TLC系统：EtOAc(100％)R_f值：～0.01和0.4。合成反式-3-羟基-4-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

(9d)

在室温下向5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8d)(25mg，0.01mmol，1当量)于叔丁醇(5mL)中的搅拌溶液中添加反式-1-Boc-4-氨基甲基-3-羟基哌啶(32mg，0.14mmol，1.5当量)，并且将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-3-羟基-4-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9d)(28mg，68％)。TLC系统：EtOAc(100％)，Rf值：～0.2。

合成反式-5-[2-(3-羟基哌啶-4-基)甲基氨基嘧啶-4-基]吡唑并[1,5-a]三氟乙酸嘧啶(化合物I-7)

在室温下向反式-3-羟基-4-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9d)(25mg，0.06mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物反式-5-[2-(3-羟基哌啶-4-基)甲基氨基嘧啶-4-基]吡唑并[1,5-a]三氟乙酸嘧啶(化合物I-7)(25mg，96％)；¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ9.03(d,J＝7.3Hz,1H),8.47(d,J＝5.4Hz,1H),8.26(s,1H),8.04(d,J＝7.3Hz,1H),7.75(d,J＝5.4Hz,1H),6.87(s,1H),3.89(宽,1H),3.72-3.63(m,2H),3.48-3.34(m,2H),3.02-2.96(m,1H),2.87-2.81(m,1H),2.19-2.15(m,1H),2.01-1.96(m,1H),1.68-1.60(m,1H)；HRMS(ESI)m/z:C₁₆H₁₉N₇O的[M+H]⁺计算值，326.1724，实验值326.1729。

实施例8

化合物I-8的合成

前体5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(8d)根据实施例1中在步骤1-2之后和实施例7中在步骤3-6之后描述的合成制备。

合成反式-4-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9e)

在室温下向5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8d)(25mg，0.10mmol，1当量)于叔丁醇(5mL)中的搅拌溶液中添加4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(28mg，0.14mmol，1.5当量)，并且将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-4-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9e)(25mg，66％)。TLC系统：己烷:EtOAc(1:1)，Rf值：～0.2。

合成反式-5-[2-(哌啶-4-基)氨基嘧啶-4-基]吡唑并[1,5-a]三氟乙酸嘧啶(化合物I-8)

在室温下向反式-4-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(9e)(25mg，0.06mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中将出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物反式-5-[2-(哌啶-4-基)氨基嘧啶-4-基]吡唑并[1,5-a]三氟乙酸嘧啶(化合物I-8)(20mg，77％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ9.01(d,J＝7.3Hz,1H),8.50(d,J＝5.2Hz,1H),8.24(d,J＝2.1Hz,1H),8.02(d,J＝7.3Hz,1H),7.72(d,J＝5.2Hz,1H),6.84(d,J＝2.1Hz,1H),4.27(s,1H),3.51-3.48(m,2H),3.26-3.19(m,2H),2.35-2.31(m,2H),1.92-1.83(m,2H)；HRMS(ESI)m/z:C₁₅H₁₇N₇的[M+H]⁺计算值，296.1618，实验值296.1609。

实施例9

化合物I-9的合成

合成(1S,3R)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9f)

在室温下向5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8d)(25mg，0.10mmol，1当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加(1S,3R)-3-氨基-1-(BOC-氨基)环戊烷(28mg，0.14mmol，1.5当量)和氟化铯(21mg，0.14mmol，1.5当量)。然后将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的(1S,3R)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9f)(22mg，58％)。TLC系统：己烷:EtOAc(1:1)，Rf值：～0.2。

合成(1S,3R)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-9)

在室温下向(1S,3R)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9f)(20mg，0.05mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物(1S,3R)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-9)(20mg，100％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ9.03(d,J＝7.3Hz,1H),8.48(d,J＝5.5Hz,1H),8.25(d,J＝2.1Hz,1H),8.00(d,J＝7.3Hz,1H),7.75(d,J＝5.5Hz,1H),6.86(d,J＝2.1Hz,1H),4.51-4.48(m,1H),3.74-3.70(m,1H),2.76-2.69(m,1H),2.28-2.17(m,2H),1.98-1.86(m,2H),1.75-1.68(m,1H)；HRMS(ESI)m/z:C₁₅H₁₇N₇的[M+H]⁺计算值，296.1618，实验值296.1616。

实施例10

化合物I-10的合成

前体3-环丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(8d)根据实施例1中在步骤1-4之后和实施例7中在步骤5-6之后描述的合成制备。

合成反式-N¹-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]-N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-

二胺(化合物I-10)

在室温下向5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(8d)(26mg，0.10mmol，1当量)的混合物以及(1R*,4R*)-N1-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺二盐酸盐(41mg，0.15mmol，1.5当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加碳酸氢钠(NaHCO₃)(34mg，0.40mmol，4当量)，并且将反应混合物在100℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的反式-N¹-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]-N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)环己烷-1,4-二胺(化合物I-10)(4mg，8％)。TLC系统：MeOH(100％)，Rf值：～0.1；¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.97(d,J＝7.3Hz,1H),8.41(d,J＝5.1Hz,1H),8.20(d,J＝2.0Hz,1H),7.96(d,J＝7.3Hz,1H),7.57(d,J＝5.1Hz,1H),6.79(d,J＝2.0Hz,1H),3.99-3.95(s,2H),3.90-3.85(m,1H),3.47-3.41(m,2H),3.06-3.00(m,1H),2.89-2.82(m,1H),2.19-2.15(m,2H),2.09-2.05(m,2H),1.91-1.88(m,2H),1.51-1.36(m,6H)；HRMS(ESI)m/z:C₂₁H₂₇N₇O的[M+H]⁺计算值，394.2350，实验值394.2336。

实施例11

化合物I-11的合成

合成(1S,3S)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9g)

在室温下向5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8d)(25mg，0.10mmol，1当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加(1S,3S)-3-氨基-1-(BOC-氨基)环戊烷(28mg，0.14mmol，1.5当量)和氟化铯(21mg，0.14mmol，1.5当量)。然后将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的(1S,3S)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9g)(28mg，74％)。TLC系统：EtOAc:己烷(1:1)，Rf值：～0.2。

合成(1S,3S)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-11)

在室温下向(1S,3S)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9g)(25mg，0.06mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中将出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物(1S,3S)-[3-[4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-11)(30mg，94％)。¹HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.04(d,J＝7.1Hz,1H),8.50(d,J＝4.9Hz,1H),8.27(d,J＝2.0Hz,1H),8.04(d,J＝7.1Hz,1H),7.74(d,J＝4.9Hz,1H),6.87(d,J＝2.0Hz,1H),4.66(s,宽,1H),3.87-3.83(m,1H),2.41-2.35(m,2H),2.22-2.18(m,2H),1.85-1.73(m,2H)；HRMS(ESI)m/z:C₁₅H₁₇N₇的[M+H]⁺计算值，296.1618，实验值296.1609。

实施例12

化合物I-12的合成

合成3-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5h)

在室温下向3-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)(240mg，1.0mmol，1.0当量)于乙酸(AcOH)(10mL)中的搅拌溶液中添加4-甲基-1H-吡唑-5-胺(100mg，1.2mmol，1.2当量)。将反应混合物加热到120℃，持续16小时。然后将反应混合物蒸发以去除AcOH后，添加水。将混合物用乙酸乙酯萃取。并且将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供粗产物3-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5h)(273mg，产率：100％)。TLC系统：DCM:MeoH(10:1)，R_f值：～0.3。

合成7-氯-3-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6h)

在室温下向3-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5h)(273mg，1.0mmol，1.0当量)于氯氧化磷(V)(POCl₃)(5mL)中的搅拌溶液中添加N,N-二甲基苯胺(267mg，2.2mmol，2.2当量)。将反应混合物加热到100℃，持续3小时。将反应混合物逐滴添加到冰中后，添加饱和NaHCO₃水溶液以将pH调节为7-8。将混合物用乙酸乙酯萃取，并且然后将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供产物，将所述产物通过combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的7-氯-3-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6h)(260mg，产率：89％)。TLC系统：己烷:EtOAc(4:1)，R_f值：～0.3。

合成3-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7h)

在室温下向7-氯-3-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6h)(260mg，0.89mmol，1.0当量)于乙醇(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸钠(146mg，1.78mmol，2.0当量)和10％ Pd/C(26mg，10％的6h)。将反应混合物在H₂气氛下在60℃下搅拌24小时。将混合物经(即，硅藻土)过滤，用乙酸乙酯洗涤，经硫酸钠干燥并且然后并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到3-甲基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7h)(117mg，产率：51％)。TLC系统：己烷:EtOAc(2:1)，R_f值：～0.3。

合成3-甲基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-甲基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8h)

向3-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7h)(110mg，0.43mmol，1.0当量)于冷却到0℃的DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加3-氯过苯甲酸(mCPBA)(纯度，77％)(126mg，0.56mmol，1.3当量)。将反应混合物在0℃下搅拌4小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，以得到呈黄色固体的3-甲基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-甲基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的粗混合物(8h)(118mg，产率：100％)。TLC系统：EtOAc(100％)R_f值：～0.01和0.4。

合成(1S,3S)-[3-[4-[3-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9h)

在室温下向3-甲基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-甲基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8h)(27mg，0.10mmol，1当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加(1S,3S)-3-氨基-1-(BOC-氨基)环戊烷(30mg，0.15mmol，1.5当量)和氟化铯(23mg，0.15mmol，1.5当量)。然后将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的(1S,3S)-[3-[4-[3-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9h)(22mg，54％)。TLC系统：己烷:EtOAc(1:1)，Rf值：～0.2。

合成(1S,3S)-[3-[4-[3-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-12)

在室温下向(1S,3S)-[3-[4-[3-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9h)(22mg，0.05mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中将出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物(1S,3S)-[3-[4-[3-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-12)(29mg，9100％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.90(d,J＝7.3Hz,1H),8.47(d,J＝5.3Hz,1H),8.08(s,1H),7.96(d,J＝7.3Hz,1H),7.76(d,J＝5.3Hz,1H),4.66-4.59(m,1H),3.86-3.80(m,1H),2.44(s,3H),2.40-2.32(m,2H),2.20-2.16(m,2H),1.81-1.71(m,2H)；HRMS(ESI)m/z:C₁₆H₁₉N₇的[M+H]⁺计算值，310.1775，实验值：310.1730。

实施例13

化合物I-13的合成

合成2-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5i)

在室温下向3-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-3-氧代-丙酸乙酯(4)(240mg，1.0mmol，1.0当量)于乙酸(AcOH)(10mL)中的搅拌溶液中添加5-甲基-1H-吡唑-5-胺(100mg，1.2mmol，1.2当量)。将反应混合物加热到120℃，持续16小时。然后将反应混合物蒸发以去除AcOH后，添加水。将混合物用乙酸乙酯萃取。并且将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供粗产物2-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5i)(273mg，产率：100％)。TLC系统：DCM:MeOH(10:1)，R_f值：～0.3。

合成7-氯-2-甲基-5-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)吡唑并吡唑并[1,5-a]嘧啶(6i)

在室温下向2-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(5i)(273mg，1.0mmol，1.0当量)于氯氧化磷(V)(POCl₃)(5mL)中的搅拌溶液中添加N,N-二甲基苯胺(267mg，2.2mmol，2.2当量)。将反应混合物加热到100℃，持续3小时。将反应混合物逐滴添加到冰中后，添加饱和NaHCO₃水溶液以将pH调节为7-8。将混合物用乙酸乙酯萃取，并且然后将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的7-氯-2-甲基-5-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6i)(140mg，产率：48％)。TLC系统：己烷:EtOAc(4:1)，R_f值：～0.3。

合成2-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7i)

在室温下向7-氯-2-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(6i)(140mg，0.48mmol，1.0当量)于乙醇(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸钠(79mg，0.96mmol，2.0当量)和10％ Pd/C(14mg，10％的6i)。将反应混合物在H₂气氛下在60℃下搅拌24小时。将混合物经(即，硅藻土)过滤，用乙酸乙酯洗涤，经硫酸钠干燥并且然后并浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到2-甲基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7i)(88mg，产率：71％)。TLC系统：己烷:EtOAc(2:1)，R_f值：～0.3。

合成2-甲基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和2-甲基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8i)

向2-甲基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(7i)(80mg，0.31mmol，1.0当量)于冷却到0℃的DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加3-氯过苯甲酸(mCPBA)(纯度，77％)(90mg，0.40mmol，1.3当量)。将反应混合物在0℃下搅拌4小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，以得到呈黄色固体的2-甲基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和2-甲基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的粗混合物(8i)(85mg，产率：100％)。TLC系统：EtOAc(100％)R_f值：～0.01和0.4。

合成(1S,3S)-[3-[4-[2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9i)

在室温下向2-甲基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和2-甲基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8i)(25mg，0.10mmol，1当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加(1S,3S)-3-氨基-1-(BOC-氨基)环戊烷(28mg，0.14mmol，1.5当量)和氟化铯(21mg，0.14mmol，1.5当量)。然后将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的(1S,3S)-[3-[4-[2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9i)(14mg，38％)。TLC系统：己烷:EtOAc(1:1)，Rf值：～0.2。

合成(1S,3S)-[3-[4-[2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-13)

在室温下向(1S,3S)-[3-[4-[2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9i)(11mg，0.027mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中将出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物(1S,3S)-[3-[4-[2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-13)(8mg，53％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.87(d,J＝7.2Hz,1H),8.46(d,J＝5.2Hz,1H),7.93(d,J＝7.2Hz,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),6.63(s,1H),4.64-4.57(m,1H),3.84-3.79(m,1H),2.53(s,3H),2.37-2.31(m,2H),2.18-2.15(m,2H),1.80-1.70(m,2H)；HRMS(ESI)m/z:C₁₆H₁₉N₇的[M+H]⁺计算值，310.1775，实验值：310.1726。

实施例14

化合物I-14的合成

合成(1S,3S)-[3-[4-[3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9j)

在室温下向3-异丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-异丙基-5-(2-甲基磺酰基-嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8c)(21mg，0.07mmol，1当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加(1S,3S)-3-氨基-1-(Boc-氨基)环戊烷(22mg，0.11mmol，1.5当量)和氟化铯(17mg，0.11mmol，1.5当量)。然后将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的(1S,3S)-[3-[4-[3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9j)(25mg，81％)。TLC系统：己烷:EtOAc(1:1)，Rf值：～0.3。

合成(1S,3S)-[3-[4-[3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-14)

在室温下向(1S,3S)-[3-[4-[3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9j)(25mg，0.057mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物(1S,3S)-[3-[4-[3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-14)(25mg，81％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.91(d,J＝7.4Hz,1H),8.47(d,J＝5.3Hz,1H),8.11(s,1H),7.96(d,J＝7.4Hz,1H),7.75(d,J＝5.3Hz,1H),4.69-4.61(m,1H),3.86-3.79(m,1H),3.45-3.37(m,1H),2.39-2.32(m,2H),2.20-2.16(m,2H),1.84-1.73(m,2H),1.46(d,J＝7.0Hz,6H)；C₁₈H₂₃N₇的HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺计算值，338.2088，实验值：338.2037。

实施例15

化合物I-15的合成

合成(1S,3S)-[3-[4-[3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9k)

在室温下向3-环丙基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丙基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8a)(20mg，0.07mmol，1当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加(1S,3S)-3-氨基-1-(BOC-氨基)环戊烷(20mg，0.10mmol，1.5当量)和氟化铯(15mg，0.10mmol，1.5当量)。然后将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的(1S,3S)-[3-[4-[3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9k)(20mg，69％)。TLC系统：EtOAc:己烷(1:1)，Rf值：～0.2。

合成(1S,3S)-[3-[4-[3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-15)

在室温下向(1S,3S)-[3-[4-[3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9k)(20mg，0.046mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中将出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物(1S,3S)-[3-[4-[3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-15)(18mg，69％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.87(d,J＝7.3Hz,1H),8.46(d,J＝5.3Hz,1H),7.99(s,1H),7.92(d,J＝7.3Hz,1H),7.73(d,J＝5.3Hz,1H),4.65-4.60(m,1H),3.86-3.80(m,1H),2.40-2.32(m,2H),2.20-2.15(m,3H),1.84-1.71(m,2H),1.07-0.99(m,4H)；HRMS数据:C₁₈H₂₁N₇的HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺计算值，336.1931，实验值：336.1914。

实施例16

化合物I-16的合成

合成(1S,3S)-[3-[4-[3-环丁基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9l)

在室温下向3-环丁基-5-(2-甲基亚磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-环丁基-5-(2-甲基磺酰基嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的混合物(8b)(23mg，0.07mmol，1当量)于DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加(1S,3S)-3-氨基-1-(BOC-氨基)环戊烷(22mg，0.11mmol，1.5当量)和氟化铯(17mg，0.11mmol，1.5当量)。然后将反应混合物在95℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且然后浓缩以提供产物，将所述产物通过Combiflash色谱法(4g柱)纯化，以得到呈黄色固体的(1S,3S)-[3-[4-[3-环丁基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9l)(28mg，90％)。TLC系统：EtOAc:己烷(1:1)，Rf值：～0.3。

合成(1S,3S)-[3-[4-[3-环丁基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-16)

在室温下向(1S,3S)-[3-[4-[3-环丁基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(9l)(28mg，0.06mmol，1当量)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加三氟乙酸(TFA)(2mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过TLC反应完成后，将溶剂在真空中去除。然后将二乙醚添加到反应液中，并且反应液中将出现大量黄色固体。将混合物离心，用二乙醚洗涤并在室温下干燥以提供呈黄色固体的产物(1S,3S)-[3-[4-[3-环丁基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]嘧啶-2-基]氨基环戊烷-1-基]-1,3-三氟乙酸二胺(化合物I-16)(27mg，75％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.90(d,J＝7.4Hz,1H),8.47(d,J＝5.3Hz,1H),8.17(s,1H),7.95(d,J＝7.4Hz,1H),7.74(d,J＝5.3Hz,1H),4.67-4.60(m,1H),3.98-3.89(m,1H),3.86-3.80(m,1H),2.50-2.44(m,4H),2.40-2.32(m,2H),2.20-2.16(m,2H),2.15-2.10(m,1H),2.06-2.00(m,1H),1.83-1.71(m,2H)；HRMS数据:C₁₉H₂₃N₇的HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺计算值，350.2088，实验值：350.2075。

实施例17

化合物I-17的合成

在室温下向(1S,3S)-N1-(4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)环戊烷-1,3-二胺(40mg，0.14mmol，1当量)于DCM(0.5mL)中的搅拌溶液中添加Ac₂O(0.1mL)并且搅拌4小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物在真空中浓缩，通过反相柱纯化并且冻干，以得到呈白色固体的期望产物(33mg，产率：70％)。TLC系统：MeOH:DCM(10:90)，R_f值：～0.4；LCMS(m/z):338.2(M+H)+；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.28(d,J＝7.2Hz,1H),8.49(d,J＝4.8Hz,1H),8.32(d,J＝2.4Hz,1H),7.93–7.90(br,2H),7.52(d,J＝7.2Hz,1H),7.49(d,J＝5.2Hz,1H),6.89(dd,J＝2.4&0.8Hz,1H),4.45–4.42(br,1H),4.24–4.15(m,1H),2.19–2.15(br,1H),2.08–2.19(m,1H),1.91–1.82(m,2H),1.79(s,3H),1.58–1.51(m,1H),1.46–1.39(m,1H)。

实施例18

化合物I-18的合成

合成5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(步骤1)

在室温下向5-(三丁基锡烷基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(400mg，0.98mmol，1当量)和2,4,5-三氯嘧啶(197mg，1.08mmol，1.1当量)于甲苯(4mL)中的搅拌溶液中添加Pd(PPh₃)₄(56mg，0.05mmol，0.05当量)、CuI(37mg，0.19mmol，0.2当量)、LiCl(82mg，1.95mmol，2当量)并且在100℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应液用水和乙酸乙酯稀释，通过(即，硅藻土)过滤。将有机层分离并用水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，蒸发并且通过二氧化硅(100-200目)柱(洗脱液：0-15％ EtOAc/己烷)纯化，以得到呈棕色固体的5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(150mg，产率：57％)。TLC系统：EtOAc:己烷(20:80)，R_f值：^～0.3；LCMS(m/z):266.0(M+H)⁺；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.85(dd,J＝7.2&0.8Hz,1H),8.78(s,1H),8.25(d,J＝2.4Hz,1H),7.58(d,J＝7.2Hz,1H),6.90(d,J＝2.4Hz,1H)。

合成((1S,3S)-3-((5-氯-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(步骤2)

将5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(140mg，0.53mmol，1当量)和((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(211mg，1.06mmol，2当量)于异丙醇(2.8mL)中的溶液在110℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将挥发物在真空下去除，用水稀释，并且用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na₂SO₄干燥，蒸发并且通过二氧化硅(100-200目)柱(洗脱液：0-20％ EtOAc/己烷)纯化，以得到呈棕色固体的((1S,3S)-3-((5-氯-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，61％)。TLC系统：EtOAc:己烷(40:60)，R_f值：^～0.25；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.79(d,J＝7.2Hz,1H),8.40(s,1H),8.21(d,J＝2.4Hz,1H),7.36(d,J＝7.2Hz,1H),6.85(d,J＝2.4Hz,1H),5.28(d,J＝7.2Hz,1H),4.53(s,1H),4.42–4.36(m,1H),4.14(brs,1H),2.30–2.22(m,2H),1.98–1.94(m,2H),1.51–1.47(m,2H),1.44(s,9H)。

合成(1S,3S)-N1-(4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)环戊烷-1,3-二胺HCl盐(化合物

I-18)

在0℃下向((1S,3S)-3-((5-氯-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，0.33mmol，1当量)于DCM(1.4mL)中的搅拌溶液中添加含2MHCl的Et₂O(0.7mL，5体积)，并且在室温下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物蒸发并通过与正戊烷、乙醚和含10％ DCM的乙醚研磨来纯化，以得到呈HCl盐形式的化合物I-18。化合物表现为黄色固体(80mg，产率：74％)。TLC系统：MeOH:DCM(5:95)，R_f值：^～0.2；LCMS(m/z)：330.2(M+H)⁺；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ:9.05(d,J＝7.2Hz,1H),8.47(s,1H),8.27(d,J＝2.4Hz,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),6.84(d,J＝2.4Hz,1H),4.54–4.51(m,1H),3.81–3.77(m,1H),2.35–2.26(m,2H),2.12(d,J＝7.2Hz,2H),1.79–1.71(m,2H)。

实施例19

化合物I-19的合成

合成5-(三丁基锡烷基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(步骤1)

在室温下向5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶(2g，13.1mmol，1当量)和双(三丁基锡)(11.2g，19.6mmol，1.5当量)于1,4-二噁烷(40mL)中的搅拌溶液中添加PCy₃(360mg，1.31mmol，0.1当量)、Pd₂(dba)₃(600mg，0.66mmol，0.05当量)并且在90℃下搅拌36小时。反应液不干净，在TLC上观察到多个斑点。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将有机层经无水Na₂SO₄干燥，在真空中浓缩并且通过二氧化硅(100-200目)柱(洗脱液：0-10％ EtOAc/己烷)纯化，以得到呈黄色油的5-(三丁基锡烷基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(700mg，17％)。TLC系统：EtOAc:己烷(10:90)，R_f值：～0.6；LCMS(m/z):410.1(M+H)⁺；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.48(d,J＝6.8Hz,1H),8.05(d,J＝2.4Hz,1H),6.89(d,J＝6.8Hz,1H),6.67(d,J＝2.4Hz,1H),1.67–1.55(m,6H),1.36–1.30(m,6H),1.21–1.17(m,6H),0.94–0.87(m,9H)。

合成5-(2-氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(步骤2)

在室温下向5-(三丁基锡烷基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(700mg，1.71mmol，1当量)和2,4-二氯嘧啶(305mg，2.05mmol，1.2当量)于DMF(14mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl₂(70mg，0.08mmol，0.05当量)并且在100℃下搅拌16小时。通过TLC反应完成后，用水稀释并且用乙酸乙酯(2×70mL)萃取。将有机层经无水Na₂SO₄干燥，蒸发并且通过二氧化硅(100-200目)柱(洗脱液：0-30％ EtOAc/己烷)纯化，以得到呈黄色固体的5-(2-氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(110mg，产率：28％)。TLC系统：EtOAc:己烷(30:70)，R_f值：～0.3；LCMS(m/z):232.1(M+H)⁺；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.83(d,J＝7.2Hz,1H),8.81(d,J＝4.8Hz,1H),8.41(d,J＝5.2Hz,1H),8.24(d,J＝2.4Hz,1H),8.03(d,J＝7.2Hz,1H),6.86–6.85(m,1H)。

合成((1S,3S)-3-((4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯

(步骤3)

将5-(2-氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(120mg，0.52mmol，1当量)和((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(207mg，1.04mmol，2当量)于异丙醇(2mL)中的溶液在110℃下搅拌26小时。通过TLC反应完成后，将挥发物在真空下去除，并且将所得混合物用水稀释并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层经无水Na₂SO₄干燥并且蒸发，以得到呈棕色固体的((1S,3S)-3-((4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(130mg)。TLC系统：EtOAc:己烷(50:50)，R_f值：^～0.3；LCMS(m/z):396.2(M+H)⁺。

合成(1S,3S)-N1-(4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)环戊烷-1,3-二胺(步骤4)

在0℃下向((1S,3S)-3-((4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.33mmol，1当量)于1,4-二噁烷(1.3mL)中的搅拌溶液中添加含4M HCl的二噁烷(0.75mL，1.5体积)，并且在室温下搅拌3小时。通过TLC反应完成后，将反应混合物蒸发，用饱和NaHCO₃水溶液稀释，并且用含20％甲醇的DCM(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na₂SO₄干燥并且蒸发，以得到呈棕色固体的(1S,3S)-N1-(4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)嘧啶-2-基)环戊烷-1,3-二胺(40mg，产率：40％)。TLC系统：MeOH:DCM(5:95)，R_f值：^～0.2。

生物实施例1

细胞毒性测定

多重化LDH-Glo细胞毒性测定和CellTiter-Glo 2D细胞活力测定。使用BLX-3030和AZD-4573以10剂量IC₅₀模式一式两份处理RWPE-1正常前列腺细胞，其中从100μM开始进行3倍连续稀释，以96孔格式5000细胞/孔，持续72小时。通过将50μL稀释样品与50μL LDH检测试剂合并，并且在温育1小时后记录发光，使用LDH-Glo细胞毒性测定测量毒性变化。在取出样品用于LDH测量后，将等体积的CellTiter Glo 2D试剂添加到剩余的细胞悬浮液中，并且在30分钟温育时间段后记录发光。

生物实施例2

C_ELL T_ITER-G_LO测定

2.0发光细胞活力测定试剂购自普洛麦格公司(Promega)，并且22Rv1和LASCPC-01细胞系购自ATCC。测试化合物以10剂量IC₅₀模式一式两份给药，其中从100μM开始进行3倍连续稀释，以96孔格式4000细胞/孔(贴壁)，并且所有选定细胞系使用72小时的处理时间。将等体积的CellTiter-Glo 2D试剂添加到细胞悬浮液中，并且在30分钟温育时间段后记录发光。结果可以说明结构(I)的代表性化合物在不同浓度下在六种前列腺癌细胞系中的细胞抗增殖功效。

生物实施例3

菌落形成测定

对2种不同的NEPC细胞系进行菌落形成测定。将细胞以每孔800个细胞接种在6孔板中，并且在完全生长培养基中粘附24小时。用结构(I)的代表性化合物处理的范围为NT至10.0μM，持续14天。将细胞用3:1甲醇/乙酸混合物固定并用亚甲蓝染色。来自两个独立实验的SEM。(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005相对于DMSO对照)。结果可以表明，结构(I)的代表性化合物显著抑制22Rv1的增殖和菌落形成。

生物实施例4

膜联蛋白V/7-AAD凋亡测定

通过膜联蛋白V/7-AAD双重染色和使用GUAVA流式细胞仪的FACS分析来评估由结构(I)的代表性化合物诱导的细胞凋亡。结构(I)的代表性化合物处理可以以剂量依赖性方式增加细胞凋亡。使用IncuCyte S3活细胞分析系统测定前列腺癌细胞中由结构(I)化合物诱导的凋亡的实时测量结果。另外，还通过膜联蛋白V/7-AAD双重染色和FACS分析来评估由结构(I)的代表性化合物诱导的细胞凋亡。根据膜联蛋白V/7-AAD染色结果，结构(I)的代表性化合物可以以剂量依赖性方式增加细胞凋亡。

生物实施例5

蛋白质印迹

将两种NEPC细胞系(22Rv1和LASCPC-01)用结构(I)的代表性化合物处理6和24小时。使用NE-PER细胞核和细胞质提取试剂盒(赛默飞世尔公司(ThermoFisher))分离来自这些细胞的细胞质和细胞核提取物。将细胞提取物在4-12％ Bis-Tris NuPAGE凝胶上分离，并且然后转移到0.45硝酸纤维素膜上，随后用Pierce快速封闭缓冲液封闭30分钟，并且然后与指定抗体在4℃下温育过夜。通过GraphPad Prism 8和ImageJ软件RT-PCR基因对CDK9、N-Myc和其它下游信号传导的相对蛋白质表达进行定量。

生物实施例6

表达

使用RNeasy微型试剂盒(凯杰公司(Qiagen))提取总RNA。使用iScript cDNA合成试剂盒(加利福尼亚州赫拉克勒斯的伯乐公司(Bio-Rad,Hercules,CA))合成cDNA。使用SsoAdvanced SYBR绿色超混合物(伯乐公司)在CFX96实时PCR检测系统(伯乐公司)上进行定量RT-PCR。将数据相对于GUS归一化，并且通过ΔCt方法测定基因表达的百分比。

生物实施例7

ADP-G_LO激酶测定

ADP-Glo测定试剂盒购自普洛麦格公司，并且CDK9/CycT1蛋白和PDKtide底物购自新格诺康公司(SignalChem)。结构(I)的化合物以10剂量IC₅₀模式一式两份给药，其中从100μM开始进行3倍连续稀释。通过将4μL蛋白质(20nM)、2μL底物(100μM)和2μL连续稀释药物在1×测定缓冲液(50mM HEPES，3mM MgCl₂，3mM MnCl₂和1mM DTT)中预温育30分钟来开始反应。预温育后，向每个孔中添加4μL ATP(1μM)并且另外温育90分钟。向每个孔中添加ADP-Glo试剂(10μL)和激酶检测试剂(20μL)，并且按照普洛麦格公司的建议温育。通过测量发光对反应进行定量并且使用GraphPad Prism软件计算IC₅₀。

生物实施例8

免疫荧光染色

将LASCPC-01NEPC细胞用结构(I)的代表性化合物从NT、1.1、3.3、10和30μM开始处理6小时。6小时后，将细胞用4％甲醛固定并且用一级N-Myc抗体探测过夜。然后将细胞与和Alexa Fluor 488缀合的二级抗体一起温育，并且用Hoechst 33342复染。图像使用尼康(Nikon)自动宽场CCD相机拍摄，并且使用ImageJ和GraphPad Prism 8软件进行定量。

生物实施例9

细胞周期阻滞测定

将NEPC细胞用结构(I)的代表性化合物从NT、1和3.16μM开始处理8小时。然后将细胞用PBS采集并且用冰冷的70％乙醇在-20℃下固定过夜。然后用冰冷的PBS 2×洗涤细胞，并且然后重悬于DAPI染色缓冲液中并在黑暗中温育30分钟。使用BD Fortessa流式细胞仪分析细胞，并且使用FlowJo和GraphPad Prism 8软件分析细胞周期分布。核提取物的蛋白质印迹分析可能显示结构(I)的代表性化合物抑制CDK9下游靶标。来自22Rv1和LASCPC-01的印迹用于显示功效。

生物实施例10

细胞周期阻滞测定

动物：雄性BALB/c裸鼠(8周龄)。NEPC细胞系：22Rv1和LASCPC-01。细胞数量：22Rv1(1.2×10⁶)和LASCPC-01(10⁶)。皮下注射。通过卡尺每周测量两次肿瘤体积，并且通过长度×(宽度²)/2计算。当肿瘤达到大约100-500mm³时，将小鼠随机化并选择用18-mg/kg口服剂量的结构(I)的代表性化合物(例如，作为TFA、HCl或甲酸盐)进行处理。

如果有必要，则可以对实施方案的各方面进行修改以采用各个专利、申请和出版物的概念来提供又另外的实施方案。考虑以上详细描述，可以对实施方案进行这些和其它改变。通常，在以下权利要求中，所使用的术语不应被解释为将权利要求限制于说明书和权利要求中所公开的具体实施方案，而是应被解释为包括所有可能的实施方案连同这种权利要求所要求的等效物的全部范围。因此，权利要求不受本公开的限制。

Claims

1.一种具有以下结构(I)的化合物：

或其立体异构体或盐，其中：

R³为C₃-C₈环烷基或3-10元杂环基；

m为0、1或2；

n为0、1、2、3或4；并且

p为0、1或2，

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为氢、C₁-C₆烷基或C₃-C₈环烷基。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的化合物，其中R¹为氢、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、异丙基、甲基或乙基。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R¹为氢、环丙基、环丁基、异丙基或甲基。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R¹未被取代。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R²为氢或C₁-C₆烷基。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R²为C₁-C₆烷基。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R²为-CH₃。

9.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R²为氢。

10.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R²未被取代。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R¹或R²中的至少一个为氢。

12.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R¹和R²两者均为氢。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中n为0或1。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物，其中n为0。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中R³为C₃-C₈环烷基。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R³为C₅-C₆环烷基。

17.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中R³为3-10元杂环基。

18.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中R³为5-6元杂环基。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，其中R³被取代。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物，其中R³被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：羟基、氨基、氰基、卤代、C₁-C₆烷基、C₃-C₈环烷基、C₁-C₆卤代烷基或-N(R^3b)R^3a，其中：

R^3a为-C(＝O)烷基、3-10元杂环基或3-10元杂芳基；并且

R^3b为氢或C₁-C₆烷基。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物，其中R³被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：羟基、氨基或-N(H)R^3c，其中：

R^3c为-C(＝O)CH₃或5-6元杂环基。

22.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，其中R³未被取代。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中R³具有以下结构中的一种结构：

24.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中R³具有以下结构中的一种结构：

25.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中R³具有以下结构：

26.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中R³具有以下结构：

27.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中R³具有以下结构：

28.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中R³具有以下结构：

29.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中R³具有以下结构：

30.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中R³具有以下结构：

31.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中m为1或2。

32.根据权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中R⁴在每次出现时为卤代。

33.根据权利要求1至31中任一项所述的化合物，其中R⁴在每次出现时独立地为氟、氯或溴。

34.根据权利要求1至32中任一项所述的化合物，其中R⁴在每次出现时为氟。

35.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其中p为0。

36.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其中p为1或2。

37.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其中p为1，并且R⁵为卤代。

38.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其中p为1，并且R⁵为氯。

39.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构中的一种结构：

或其盐。

40.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物，其中所述化合物呈游离碱形式。

41.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物，其中所述化合物为药学上可接受的盐。

42.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物，其中所述化合物为三氟乙酸盐。

43.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物，其中所述化合物为盐酸盐。

44.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物，其中所述化合物为甲酸盐。

45.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至44中任一项所述的化合物或盐以及药学上可接受的载体。

46.一种治疗疾病或病症的方法，所述方法包含向有需要的受试者施用有效量的根据权利要求1至44中任一项所述的化合物或根据权利要求45所述的药物组合物。

47.根据权利要求46所述的方法，其中所述疾病或病症为表达激酶的癌症。

48.根据权利要求47所述的方法，其中所述癌症为膀胱癌。

49.根据权利要求47所述的方法，其中所述癌症为前列腺癌。

50.根据权利要求47所述的方法，其中所述癌症为血液系统恶性病。

51.根据权利要求50所述的方法，其中所述血液系统恶性病为急性髓系白血病。

52.根据权利要求46所述的方法，其中所述疾病或病症为自身免疫性或炎性疾病。