[go: up one dir, main page]

CN119080938B - 抗25羟维生素d抗体、检测25羟维生素d的试剂和试剂盒 - Google Patents

抗25羟维生素d抗体、检测25羟维生素d的试剂和试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN119080938B
CN119080938B CN202310659938.3A CN202310659938A CN119080938B CN 119080938 B CN119080938 B CN 119080938B CN 202310659938 A CN202310659938 A CN 202310659938A CN 119080938 B CN119080938 B CN 119080938B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
functional fragment
seq
amino acid
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202310659938.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN119080938A (zh
Inventor
钟冬梅
孟媛
梁碧
唐丽娜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd filed Critical Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Priority to CN202310659938.3A priority Critical patent/CN119080938B/zh
Publication of CN119080938A publication Critical patent/CN119080938A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN119080938B publication Critical patent/CN119080938B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/82—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving vitamins or their receptors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了抗25羟维生素D的抗体或检测25羟维生素D的试剂和试剂盒，涉及抗体领域。本发明公开的抗25羟维生素D抗体包括重链互补决定区和轻链互补决定区，该抗体为25羟维生素D的检测提供了重要的原料来源，且具有良好的亲和力和活性。

Description

抗25羟维生素D抗体、检测25羟维生素D的试剂和试剂盒
技术领域
本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种抗25羟维生素D抗体、检测25羟维生素D的试剂和试剂盒。
背景技术
25羟维生素D是维生素D在体内的主要存在形式。维生素D为类固醇衍生物，属脂溶性维生素，为环戊烷多氢菲类化合物。维生素D主要由人体皮肤经紫外线照射后合成，少部分从食物或补充品中摄入。维生素D不仅仅影响钙磷代谢，而且具有广泛的生理作用，是维持人体健康、细胞生长和发育的必不可少的物质，与多种疾病密切相关。维生素D在肝脏中通过羟基化作用转化成25-羟基维生素D(25-OH-VD)，血清中25-OH-VD的高低可以反映人体维生素D的储存水平，并且与维生素D缺乏的临床症状是相关的，如果指标过高可能是维生素D中毒，指标过低可能是维生素D缺乏。
25羟维生素D可用于确定维生素D浓度，25羟维生素D的浓度被认为是维生素D的最佳指标，可以判断体内的维生素D含量是否异常。如果检查发现25羟维生素D含量过低，常见于钙、磷吸收障碍，可能表现为骨骼、牙齿无法正常发育，出现骨质疏松、出牙延迟等症状，严重时可能还会导致佝偻病、软骨病等，表现为骨质疏松、肌肉酸痛，会增加腿抽筋、跌倒及骨折的风险。如果25羟维生素D偏高，可能会造成维生素D中毒，引起高钙血症，表现为食欲不振、呕吐、腹泻等症状。
目前，常用的25羟基维生素D的检测方法有化学发光法、酶联免疫法、电化学发光法、免疫层析法等，以上检测方法都需要相关抗体才能实现，因此，本领域对于有良好的活性和亲和力的相关抗体存在强烈需求。
发明内容
本申请提供一种抗体或其功能性片段，为25羟维生素D的检测提供重要的原料来源，且有良好的活性和亲和力。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:17重链可变区的三个互补决定区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:18轻链可变区的三个互补决定区。
为了实现上述目的，根据本发明的第二个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
HCDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或由其组成。
为了实现上述目的，根据本发明的第三个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
为了实现上述目的，根据本发明的第四个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，包括重链和/或轻链，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
为了实现上述目的，根据本发明的第五个方面，提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段。
为了实现上述目的，根据本发明的第六个方面，提供了一种试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物。
为了实现上述目的，根据本发明的第七个方面，提供了一种检测25羟维生素D的方法，包括：a)在足以发生抗体/抗原结合反应的条件下，使上述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物，或者试剂或试剂盒与待检测样品中的25羟维生素D接触形成免疫复合物；和b)检测所述免疫复合物的存在，所述复合物的存在指示所述测试样品中所述抗原的存在。
为了实现上述目的，根据本发明的第八个方面，提供了一种核酸，所述核酸编码上述的抗体或其功能性片段。
为了实现上述目的，根据本发明的第九个方面，提供了一种载体，所述载体包括上述的核酸。
为了实现上述目的，根据本发明的第十个方面，提供了细胞，所述细胞包括上述的核酸、载体或表达上述的抗体或其功能性片段。
为了实现上述目的，根据本发明的第十一个方面，提供了一种制备上述抗体或其功能性片段的方法，所述方法包括培养上述的细胞。
为了实现上述目的，根据本发明的第十二个方面，提供了一种上述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒在检测或制备检测25羟维生素D产品中的用途。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为Anti-25-OH-VD 9C9 Rmb的还原性SDS-PAGE的结果。
具体实施方式
第一方面，本发明实施例提供一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:17重链可变区的三个互补决定区和具有氨基酸序列SEQID NO:18轻链可变区的三个互补决定区。
需要说明的是，在Kabat定义下，重链可变区SEQ ID NO:17的HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示，则所述抗体或其功能性片段的HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列也分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3所示。
在Kabat定义下，轻链可变区SEQ ID NO:18的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示，则所述抗体或其功能性片段的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列也分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。
在本发明中，术语“抗体”在最广义上使用，其可以包括全长单克隆抗体，双特异性或多特异性抗体，以及嵌合抗体，只要它们展示所需的生物学活性。
在本发明中，术语“互补性决定区”、“CDR”或“CDRs”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体或抗原结合片段与其识别的抗原或表位的结合起作用的主要氨基酸残基的区域。在本发明具体实施方式中，CDRs是指所述抗体的重链和轻链的高度可变区。
在本发明中，重链互补决定区用HCDR表示，其包括HCDR1、HCDR2和HCDR3；轻链互补决定区用LCDR表示，其包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。
CDR的定义方法是本领域公知的，CDR定义方法包括：Kabat定义、Chothia定义、IMGT定义、Contact定义和AbM定义。如本文所述，“Kabat定义”是指Kabat等，U.S.Dept.ofHealth and Human Services，“Sequence of Proteins of Immunological Interest”(1983)所述的定义系统。“Chothia定义”参见Chothia等，J Mol Biol 196：901-917(1987)。还有其他CDR定义方法可能不严格遵循上述方案之一，但仍会与Kabat定义的CDR区的至少一部分重叠，尽管根据特定残基或残基组的预测或实验结果可能会缩短或延长它们。示例性的定义的CDR列于下表1中,不同文献中的标注略有不同。在给定抗体的可变区氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可以常规地确定哪些残基包含特定CDR。需要说明的是，不限于表1中的其他方法定义的CDR也属于本公开的保护范围。
表1：CDR定义1
1表1中所有CDR定义的编号是依据Kabat编号系统(参见下文)，重链上的氨基酸编号用“H+数字”表示，轻链上的氨基酸编号用“L+数字”表示。本领域普通技术人员可以明确地将该Kabat编号系统对应到任何可变区序列，而不依赖于序列本身之外的任何实验数据。如本文所述，
“Kabat编号”是指Kabat等，U.S.Dept.of Health and HumanServices，“Sequenceof Proteins of Immunological Interest”(1983)所述的编号系统。
2如表1中使用的“AbM”具有小写“b”，是指通过Oxford Molecular的“AbM”抗体建模软件定义的CDR。
3如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在35位；如果只有H35A存在时，那么CDR-H1结束在35A位；如果H35A和H35B同时存在，那么CDR-H1结束在35B位。
4如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在32位；如果只有H35A存在时，那么CDR-H1结束在33位；如果H35A和H35B同时存在，那么CDR-H1结束在34位。
5如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在33位；如果只有H35A存在时，那么CDR-H1结束在34位；如果H35A和H35B都存在时，那么CDR-H1结束在35位。
根据本发明的实施例，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2或LCDR3由Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact任意一种系统或多种系统组合定义。
在本发明的一些可选实施例中，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3由Kabat系统定义。
在本发明的一些可选实施例中，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3由Chothia系统定义。
在本发明的一些可选实施例中，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3由IMGT系统定义。
在本发明的一些可选实施例中，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3由AbM系统定义。
在本发明的一些可选实施例中，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3由Contact系统定义。
在本发明的一些可选实施例中，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3由Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact系统组合定义。
根据本发明的实施例，所述Kabat、Chothia、AbM或IMGT系统定义的HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2或LCDR3的氨基酸序列对应的Kabat编号位置如下：
根据本发明的实施例，所述HCDRs和LCDRs由Kabat系统定义。
在可选的实施方式中，本发明实施例提供了一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
HCDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或由其组成。
HCDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或由其组成。
HCDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或由其组成。
LCDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或由其组成。
LCDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或由其组成。
LCDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或由其组成。
在本发明中，“框架区”或“FR”区包括重链框架区和轻链框架区，是指抗体重链可变区和轻链可变区中除CDR之外的区域；其中，重链框架区可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4框架区；轻链框架区可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含LFR1、LFR2、LFR3和LFR4框架区。
在本发明中，重链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4；轻链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段还具有HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一；
所述HFR1包括/如SEQ ID NO:7或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述HFR2包括/如SEQ ID NO:8或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述HFR3包括/如SEQ ID NO:9或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述HFR4包括/如SEQ ID NO:10或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述LFR1包括/如SEQ ID NO:11或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述LFR2包括/如SEQ ID NO:12或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述LFR3包括/如SEQ ID NO:13或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述LFR4包括/如SEQ ID NO:14或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
需要说明的是，在其他的实施例中，本发明提供的抗体或其功能性片段的各框架区氨基酸序列可以与上述对应框架区(SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13或14)具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段以KD＜7.42×10-8M的亲和力结合25羟维生素D。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段以KD≤10-8M、KD≤10-9M、KD≤10-10M、KD≤10-11M或KD≤10-12M的亲和力结合25羟维生素D。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段以KD≤2.21×10-9M的亲和力结合25羟维生素D。
抗体亲和力(KD)测定方法有很多种，根据检测原理可分为热力学检测方法、动力学检测方法和动态平衡检测方法。其中，热力学检测方法常见如等温滴定量热法(ITC)；动力学检测方法常见如表面等离子共振(SPR)及生物膜光干涉法(BLI)；动态平衡检测方法常见如酶联免疫吸附(ELISA)等。
在可选的实施方式中，KD的测定采用动力学检测方法；可选为，表面等离子共振，例如通过使用诸如系统的生物传感器系统。
第二方面，本发明实施例提供一种抗体或其功能性片段，包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段还包含恒定区。
在可选的实施方式中，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区。
在可选的实施方式中，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区，所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。
在可选的实施方式中，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
在可选的实施方式中，所述恒定区的种属来源为小鼠。
在可选的实施方式中，所述重链恒定区序列(CH)如SEQ ID NO:15所示，所述轻链恒定区(CL)序列如SEQ ID NO:16所示。
需要说明的是，在其他的实施例中，所述恒定区序列可以与上述恒定区(SEQ IDNO:15或16)具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在可选的实施方式中，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
上述抗体的功能性片段通常具有与其来源抗体相同的结合特异性。本领域技术人员根据本发明记载的内容容易理解到，上述抗体的功能性片段可以通过比如酶消化的方法(包括胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)和/或通过化学还原分裂二硫键的方法获得。在本发明公开了完整抗体的结构基础上，本领域技术人员容易获得上述的功能性片段。
上述抗体的功能性片段还可以通过也是本领域技术人员所知的重组遗传学技术或通过例如自动肽合成仪，比如Applied BioSystems等销售的自动肽合成仪合成获得。
第三方面，本发明提供一种抗体或其功能性片段，包括重链和/或轻链，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
第四方面，本发明提供一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段。
在可选的实施方式中，上述抗体偶联物还包括与所述抗体或其功能性片段偶联的生物素或生物素衍生物。
在可选的实施方式中，所述抗体偶联物还包括与所述抗体或其功能性片段偶联的标记物。
在可选的实施方式中，上述标记物是指具有能够被肉眼直接观察或被仪器检测或探测到的特性例如发光、显色、放射性等特性的一类物质，通过该特性可以实现对相应目标物的定性或定量检测。
在可选的实施方式中，所述标记物包括但不限于荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。
在实际的使用过程中，本领域技术人员可以根据检测条件或实际需要选择合适的标记物，无论使用何种标记物，其均属于本发明的保护范围。
在可选的实施方式中，所述荧光染料包括但不限于荧光素类染料及其衍生物(例如包括但不限于异硫氰酸荧光素(FITC)羟基光素(FAM)、四氯光素(TET)等或其类似物)、罗丹明类染料及其衍生物(例如包括但不限于红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等或其类似物)、Cy系列染料及其衍生物(例如包括但不限于Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy3等或其类似物)、Alexa系列染料及其衍生物(例如包括但不限于AlexaFluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、33、647、680、700、750等或其类似物)和蛋白类染料及其衍生物(例如包括但不限于藻红蛋白(PE)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)、多甲藻黄素-叶绿素蛋白(preCP)等)。
在可选的实施方式中，所述酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。
在可选的实施方式中，所述放射性同位素包括但不限于212Bi、131I、111In、90Y、186Re、211At、125I、188Re、153Sm、213Bi、32P、94mTc、99mTc、203Pb、67Ga、68Ga、43Sc、47Sc、110mIn、97Ru、62Cu、64Cu、67Cu、68Cu、86Y、88Y、121Sn、161Tb、166Ho、105Rh、177Lu、172Lu和18F。
在可选的实施方式中，所述化学发光试剂包括但不限于鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物和过氧草酸盐及其衍生物。
在可选的实施方式中，所述纳米颗粒类标记物包括但不限于纳米颗粒、胶体、有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒。
在可选的实施方式中，所述胶体包括但不限于胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶。
在可选的实施方式中，所述胶体金属包括但不限于胶体金、胶体银和胶体硒。
在可选的实施方式中，所述胶体金属为胶体金。
在可选的实施方式中，上述抗体偶联物还包括与所述抗体或其功能性片段偶联的固相载体。
在可选的实施方式中，所述固相载体选自微球、板和膜。
在可选的实施方式中，所述固相载体包括但不限于磁性微球、塑料微球、塑胶微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜。
第五方面，本发明提供一种试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物。
如前所述，本发明一些实施方式或实施例中的抗体或其功能性片段能够有效与25羟维生素D进行结合，因此，包含所述25羟维生素D抗体或其功能性片段的试剂或试剂盒能够有效的对25羟维生素D进行定性或定量检测。应用本发明提供的试剂或试剂盒，例如可以用于免疫印迹、免疫沉淀等涉及到利用25羟维生素D和其抗体特异性结合性能的检测。如前所述，本发明一些实施方式或实施例中的抗体或其功能性片段具有与25羟维生素D更高的结合活性或亲和力，因此包含所述抗体或其功能性片段的试剂或试剂盒具有更高的检测灵敏度或特异性。
第六方面，本发明提供一种检测25羟维生素D的方法，包括：a)在足以发生抗体/抗原结合反应的条件下，使上述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物，试剂或试剂盒与待检测样品中的25羟维生素D接触形成免疫复合物；和b)检测所述免疫复合物的存在，所述复合物的存在指示所述测试样品中所述抗原的存在；
在可选的实施方式中，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合。
在可选的实施方式中，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与25羟维生素D结合。
第七方面，本发明提供一种编码上述抗体或其功能性片段的核酸分子。
第八方面，本发明提供含有上述核酸分子的载体。
第九方面，本发明提供含有上述载体的细胞。
第十方面，本发明提供一种制备抗体或其功能性片段的方法，其包括：培养如上所述的细胞。
第十一方面，本发明提供上述抗体或其功能性片段、抗体偶联物或上述的试剂或试剂盒在检测25羟维生素D或制备检测25羟维生素D的产品中的用途。
在本发明公开了抗体或其功能性片段的氨基酸序列的基础上，本领域技术人员容易想到采用基因工程技术或其他技术(化学合成、重组表达)制备得到该抗体或其功能性片段，例如从能够重组表达如上任一项所述的抗体或其功能性片段的重组细胞的培养产物中分离纯化得到该抗体或其功能性片段，这对本领域技术人员来说是容易实现的，基于此，无论采用何种技术制备本发明的抗体或其功能性片段，其均属于本发明的保护范围。
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本文的制剂或单位剂量的实践或测试，但现在描述一些方法和材料。除非另有说明，否则本文采用或考虑的技术是标准方法。材料、方法和实例仅是说明性而非限制性的。
除非另外指明，否则实践本发明将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述常规技术在本领域技术人员的能力范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(OligonucleotideSynthesis)》(M.J.Gait编，1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编，1987)；《酶学方法(Methods in Enzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene Transfer Vectors forMammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编，1987)；《当代分子生物学方法(CurrentProtocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编，1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:The Polymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编，1994)；以及《当代免疫学方法(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编，1991)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文中。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1Anti-25-OH-VD 9C9单克隆抗体的制备
本实施例中限制性内切酶、Prime Star DNA聚合酶购自Takara公司。MagExtractor-RNA提取试剂盒购自TOYOBO公司。BD SMARTTMRACE cDNA Amplification Kit试剂盒购自Takara公司。pMD-18T载体购自Takara公司。质粒提取试剂盒购自天根公司。引物合成和基因测序由Invitrogen公司完成。分泌Anti-25-OH-VD 9C9单克隆抗体的杂交瘤细胞株为已有的杂交瘤细胞株，复苏备用。
(1)抗体基因制备
从分泌Anti-25-OH-VD 9C9单克隆抗体的杂交瘤细胞株中提取mRNA，通过RT-PCR方法获得DNA产物，该产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中，长出菌落后分别取Heavy Chain及Light Chain基因克隆，各4个克隆送基因测序公司进行测序。
(2)Anti-25-OH-VD 9C9抗体可变区基因的序列分析
将上述测序得到的基因序列放在kabat抗体数据库中进行分析，并利用VNTI11.5软件进行分析确定重链和轻链引物对扩增出的基因都是正确的，其中Light Chain扩增出的基因片段中，VL基因序列为336bp，其前方有57bp的前导肽序列；Heavy Chain引物对扩增出的基因片段中，VH基因序列为348bp，属于VH1基因家族，其前方有57bp的前导肽序列。
(3)重组抗体表达质粒的构建
pcDNATM3.4vector为构建的重组抗体真核表达载体，该表达载体已经引入HindIII、BamHI、EcoRI等多克隆酶切位点，并命名为pcDNA3.4A表达载体，后续简称3.4A表达载体；根据上述pMD-18T中抗体可变区基因测序结果，设计该抗体的VL和VH基因特异性引物，两端分别带有HindIII、EcoRI酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增方法扩出0.74kb的Light Chain基因片段和1.40kb的Heavy Chain基因片段。
Heavy Chain和Light Chain基因片段分别采用HindIII/EcoRI双酶切，3.4A载体采用HindIII/EcoRI双酶切，将片段和载体纯化回收后Heavy Chain基因和Light Chain基因分别连接3.4A表达载体中，分别得到Heavy Chain和Light Chain的重组表达质粒。
2.重组抗体生产
提前复苏HEK293细胞，传代培养到200ml体系，使细胞密度达到3～5×106cells/ml细胞密度达到挑选抗体浓度及细胞，细胞活力>95％；离心清洗细胞，用培养基复溶，同时将细胞密度调整到2.9×106cells/ml洗细胞，用培养基复溶，同时，作为细胞稀释液。用培养基分别配制质粒DNA和转染试剂稀释液。将转染试剂稀释液加入到质粒DNA稀释液中，混匀后室温静置放置15min；将该混合物在1min内缓慢加入细胞稀释液中，混匀后取样计数，记录并观察细胞转染后的活力，并将其放置于35℃恒温培养箱中培养，转速120rmp，CO2含量8％，13天后离心收样。将离心上清用proteinA亲和层析柱进行亲和纯化。取6ug层纯化的抗体进行还原性SDS-PAGE，电泳图如图所示。在还原性SDS-PAGE后显示两条带，1条Mr为50KD(重链)，另一条Mr为28KD(轻链)。
所得抗体命名为Anti-25-OH-VD 9C9Rmb1,对Anti-25-OH-VD 9C9Rmb1进行突变，得到突变抗体，上述抗体的重链(H)和轻链(L)的序列如下表所示：
表2抗体序列
抗体名称 重链 轻链
Anti-25-OH-VD 9C9Rmb1 SEQ ID NO:19 SEQ ID NO:20
实施例2抗体的性能检测
1.亲和力分析
提前稀释纯化抗体，同时对25-OH-VD抗原进行梯度稀释；利用已提前耦联羊抗鼠IgG的CM5芯片，在Biacore 8K+设备上测试抗原抗体的结合解离曲线，仪器自动拟合获得亲和力常数、结合速率、解离速率。(KD表示平衡解离常数即亲和力常数；ka表示结合速率；kd表示解离速率)
表3亲和力数据
样品名称 KD ka kd
对照 7.42E-08 5.76E+03 4.27E-04
Anti-25-OH-VD 9C9Rmb 2.21E-09 2.82E+04 6.22E-05
2.活性鉴定
包被液(主要成分NaHCO3)稀释25-OH-VD抗原至3ug/ml，每孔100uL，4℃过夜；次日，洗涤液(主要成份Na2HPO4+Nacl)清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120uL，37℃，1h，拍干；加入稀释后的纯化抗体和对照抗体，100uL/孔，37℃,30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗鼠IgG-HRP，每孔100uL，37℃,30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入显色液A液(50uL/孔)，加入显色液B液(50uL/孔)，10min；加入终止液，50uL/孔；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。
备注：A液(主要成份柠檬酸+醋酸钠+乙酰苯胺+过氧化脲)；B液(主要成份柠檬酸
+EDTA·2Na+TMB+浓HCL)；终止液(EDTA·2Na+浓H2SO4)
表4活性数据
浓度(ng/ml) 2.441 1.221 0.610 0.305 0.153 0.000
对照 1.103 0.765 0.341 0.164 0.018 0.011
Anti-25-OH-VD 9C9Rmb 1.687 1.072 0.624 0.336 0.185 0.023
3.稳定性考核
将上述抗体置于4℃(冰箱)、-80℃(冰箱)、37℃(恒温箱)放置21天，取7天、14天、21天样品进行状态观察，并对21天样品进行活性检测，结果显示三种考核条件下抗体放置21天均未见明显蛋白状态变化，活性也未随考核温度的升高呈下降趋势，说明上述抗体稳定。下表5为抗体Anti-25-OH-VD 9C9Rmb考核21天的酶免活性检测OD结果。
表5稳定性数据
样品浓度(ng/ml) 1.221 0.610 0.000
4℃，21天样品 1.074 0.637 0.042
-80℃，21天样品 1.068 0.644 0.031
37℃，21天样品 1.084 0.651 0.041
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
本申请涉及的部分氨基酸序列如下所示：

Claims (26)

1.一种抗25羟维生素D抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段具有氨基酸序列SEQ ID NO:17重链可变区的三个互补决定区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:18轻链可变区的三个互补决定区；
所述可变区的HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2或LCDR3由Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact任意一种系统或多种系统组合定义。
2.一种抗25羟维生素D抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；
LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；
LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还具有HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一。
4.根据权利要求3所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，
所述HFR1包括SEQ ID NO:7或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述HFR2包括SEQ ID NO:8或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述HFR3包括SEQ ID NO:9或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述HFR4包括SEQ ID NO:10或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述LFR1包括SEQ ID NO:11或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述LFR2包括SEQ ID NO:12或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述LFR3包括SEQ ID NO:13或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列；
所述LFR4包括SEQ ID NO:14或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1或2所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段以KD＜7.42×10-8M的亲和力结合25羟维生素D。
6.一种抗25羟维生素D抗体或其功能性片段，包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQID NO:18所示。
7.根据权利要求1至2、4、6任一所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还包含恒定区。
8.根据权利要求7所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区。
9.根据权利要求8所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区；所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。
10.根据权利要求7所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区的种属来源为牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或人。
11.根据权利要求7所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区的种属来源为小鼠。
12.根据权利要求8所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述重链恒定区序列如SEQ ID NO:15所示或与其具有至少80％同一性，所述轻链恒定区序列如SEQ ID NO:16所示或与其具有至少80％同一性。
13.根据权利要求1至2、4至6任一项所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
14.一种抗25羟维生素D抗体或其功能性片段，包括重链和轻链，其特征在于，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
15.一种抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物包括权利要求1至13任一项所述的抗体或其功能性片段或权利要求14所述的抗体和与所述抗体或其功能性片段偶联的生物素或生物素衍生物或标记物。
16.根据权利要求15所述的偶联物，其特征在于，所述标记物选自荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。
17.一种抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物还包括权利要求1至13任一项所述的抗体或其功能性片段或权利要求14所述的抗体和与所述抗体或其功能性片段偶联的固相载体。
18.根据权利要求17所述的偶联物，其特征在于，所述固相载体选自微球、板和膜。
19.一种试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1至13任一项所述的抗体或其功能性片段或权利要求14所述的抗体或权利要求15至18任一项所述的抗体偶联物。
20.权利要求1至13任一项所述的抗体或其功能性片段、权利要求14所述的抗体、权利要求15至18任一项所述的抗体偶联物或者权利要求19所述的试剂或试剂盒在制备检测25羟维生素D产品中的用途，其特征在于，包括：
a)在足以发生抗体/抗原结合反应的条件下，使权利要求1至13任一项所述的抗体或其功能性片段、权利要求14所述的抗体、权利要求15至18任一项所述的抗体偶联物，或者权利要求19所述的试剂或试剂盒与待检测样品中的25羟维生素D接触形成免疫复合物；和
b)检测所述免疫复合物的存在，所述复合物的存在指示所述测试样品中所述抗原的存在。
21.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合。
22.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与25羟维生素D结合。
23.一种核酸，其特征在于，其编码权利要求1至13任一项所述的抗体或其功能性片段或权利要求14所述的抗体。
24.一种载体，其特征在于，其含有权利要求23所述的核酸。
25.一种细胞，其特征在于，其含有权利要求23所述的核酸或权利要求24所述的载体。
26.一种制备权利要求1至13任一项所述的抗体或其功能性片段或权利要求14所述抗体的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求25所述的细胞。
CN202310659938.3A 2023-06-05 2023-06-05 抗25羟维生素d抗体、检测25羟维生素d的试剂和试剂盒 Active CN119080938B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310659938.3A CN119080938B (zh) 2023-06-05 2023-06-05 抗25羟维生素d抗体、检测25羟维生素d的试剂和试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310659938.3A CN119080938B (zh) 2023-06-05 2023-06-05 抗25羟维生素d抗体、检测25羟维生素d的试剂和试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN119080938A CN119080938A (zh) 2024-12-06
CN119080938B true CN119080938B (zh) 2025-06-24

Family

ID=93697913

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310659938.3A Active CN119080938B (zh) 2023-06-05 2023-06-05 抗25羟维生素d抗体、检测25羟维生素d的试剂和试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN119080938B (zh)

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001021649A2 (en) * 1999-09-22 2001-03-29 Cedars-Sinai Medical Center Nucleic acids encoding vitamin d response element binding proteins, products related thereto, and methods of using same
US7087395B1 (en) * 2001-01-16 2006-08-08 Quest Diagnostics Investments Incorporated Vitamin D assay
TWI320716B (en) * 2002-10-14 2010-02-21 Abbott Lab Erythropoietin receptor binding antibodies
US7396913B2 (en) * 2002-10-14 2008-07-08 Abbott Laboratories Erythropoietin receptor binding antibodies
WO2007001969A1 (en) * 2005-06-27 2007-01-04 The General Hospital Corporation Vitamin d deficiency and dialysis
US7883705B2 (en) * 2007-02-14 2011-02-08 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti FGF23 antibody and a pharmaceutical composition comprising the same
US8785603B2 (en) * 2011-05-20 2014-07-22 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Antibodies to 25-hydroxyvitamin D2 and D3 and uses thereof
EP2759550B1 (en) * 2013-01-28 2018-08-15 DiaSorin S.p.A. Method and kit for detecting 1,25-dihydroxyvitamin D and related antibodies
CN103163306B (zh) * 2013-02-05 2015-06-17 北京九强生物技术股份有限公司 25羟维生素d检测试剂盒及其制备方法
SI3333191T1 (sl) * 2014-12-11 2021-03-31 Pierre Fabre Medicament Proti C10ORF54 protitelesa in uporaba le-teh
EP3954376A1 (en) * 2016-01-22 2022-02-16 Affimedix, Inc. Method for quantification of vitamin d metabolites
CN106244562B (zh) * 2016-05-20 2019-07-23 杭州奥泰生物技术股份有限公司 杂交瘤细胞株及其分泌的抗25羟基维生素d3单克隆抗体和应用
CN115286695A (zh) * 2016-06-03 2022-11-04 英韦克泰斯公司 抗hla-g特异性抗体
CN106674347B (zh) * 2016-08-16 2019-12-13 滨州医学院 一种新型耳抑素抗体
JP6908709B2 (ja) * 2017-01-06 2021-07-28 エービーエル バイオ インコーポレイテッド 抗α−ｓｙｎ抗体およびその使用
CN113999311B (zh) * 2020-07-28 2022-11-04 东莞市朋志生物科技有限公司 可特异性结合25-羟基维生素d的抗体、其应用以及诊断试剂盒
CN115925891A (zh) * 2022-07-05 2023-04-07 东莞市朋志生物科技有限公司 抗乙型流感病毒抗体、检测乙型流感病毒的试剂和试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Development of ZnCdSe/ZnS quantum dot-based fluorescence immunochromatographic assay for the rapid visual and quantitative detection 25-hydroxyvitamins D in human serum;Jianfa Wang等;《Frontiers in Bioengineering and Biotechnology》;20231222;第11卷;第1326254篇 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN119080938A (zh) 2024-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN119490592B (zh) 一种抗κ型轻链抗体及其应用
CN119192387B (zh) 抗25-oh-vd及其抗体复合物的抗体、检测25-oh-vd的试剂和试剂盒
CN119490593B (zh) 一种抗κ型轻链抗体及其应用
CN118725124B (zh) 抗胃蛋白酶原ⅱ抗体、检测胃蛋白酶原ⅱ的试剂和试剂盒
CN119306830B (zh) 抗皮质醇抗体、检测皮质醇的试剂和试剂盒
CN119019555B (zh) 抗白介素6抗体、检测白介素6的试剂和试剂盒
CN118725123B (zh) 抗胃蛋白酶原ⅱ抗体、检测胃蛋白酶原ⅱ的试剂和试剂盒
CN119080938B (zh) 抗25羟维生素d抗体、检测25羟维生素d的试剂和试剂盒
CN119306826A (zh) 抗白介素-6抗体、检测白介素-6的试剂和试剂盒
CN119019551B (zh) 抗cTnI抗体、检测cTnI的试剂和试剂盒
CN119285761B (zh) 抗幽门螺杆菌抗体、检测幽门螺杆菌的试剂和试剂盒
CN119529077B (zh) 一种抗血红蛋白的抗体及其应用
CN119285762B (zh) 抗cTnI抗体、检测cTnI的试剂和试剂盒
CN119192380B (zh) 抗涎液化糖链抗原-6抗体、检测涎液化糖链抗原-6的试剂和试剂盒
CN119285763B (zh) 抗铁蛋白抗体、检测铁蛋白的试剂和试剂盒
CN119529088B (zh) 一种抗甲状旁腺激素的抗体及其应用
CN119306828B (zh) 抗降钙素原抗体、检测降钙素原的试剂和试剂盒
CN119490595B (zh) 一种抗免疫球蛋白e的抗体及其应用
CN119591702B (zh) 一种抗铁蛋白的抗体及其应用
CN119306833B (zh) 抗降钙素原抗体、检测降钙素原的试剂和试剂盒
CN119504985B (zh) 一种抗呼吸道合胞病毒抗体及其应用
CN119591703B (zh) 一种抗铁蛋白的抗体及其应用
CN118240085B (zh) 抗纤维蛋白降解产物抗体、检测纤维蛋白降解产物的试剂和试剂盒
CN119462922B (zh) 一种抗人绒毛膜促性腺激素的抗体及其应用
CN119306842B (zh) 抗甲基苯丙胺抗体、检测甲基苯丙胺的试剂和试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant