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CN118922721A - 用于2型与1型急性心肌梗死的早期辨别的cMyBPC标志物组合 - Google Patents

用于2型与1型急性心肌梗死的早期辨别的cMyBPC标志物组合 Download PDF

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CN118922721A
CN118922721A CN202380028389.8A CN202380028389A CN118922721A CN 118922721 A CN118922721 A CN 118922721A CN 202380028389 A CN202380028389 A CN 202380028389A CN 118922721 A CN118922721 A CN 118922721A
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H·迪费尔
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P·卡斯特纳
U·库尔特卡亚
亚历山大·皮勒
U-H·温休斯-泰伦
A·齐格勒
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Abstract

本发明涉及一种用于评定心肌梗死的方法，所述方法包括以下步骤：确定受试者的样品中第一生物标志物的量，所述第一生物标志物为cMyBPC；确定所述受试者的样品中第二生物标志物的量，其中所述第二生物标志物选自由以下项组成的组：BMP10型肽(骨形态发生蛋白10型肽)、FGF23(成纤维细胞生长因子23)、BNP型肽(脑利尿钠肽型肽)、GDF‑15(生长分化因子15)、ANG2(血管生成素2)、CRP(C反应蛋白)、ESM1(内皮细胞特异性分子1)或诸如胆固醇、LDL(低密度脂蛋白)或APOAT(载脂蛋白A‑1)的脂质生物标志物；将所述生物标志物的量与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于所述生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及基于比较和/或计算来评定所述受试者。本发明还涉及以下项的用于评定心肌梗死的用途：第一生物标志物和第二生物标志物，所述第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物选自由以下项组成的组：BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；或针对所述第一生物标志物的至少一种检测剂和针对所述第二生物标志物的至少一种检测剂。此外，本发明进一步涉及一种用于评定心肌梗死的计算机实现的方法以及一种用于评定心肌梗死的装置和试剂盒。

Description

用于2型与1型急性心肌梗死的早期辨别的cMyBPC标志物组合
本发明涉及一种用于评定心肌梗死的方法，所述方法包括以下步骤：确定受试者的样品中第一生物标志物的量，所述第一生物标志物为cMyBPC；确定所述受试者的样品中第二生物标志物的量，其中所述第二生物标志物选自由以下项组成的组：BMP10型肽(骨形态发生蛋白10型肽)、FGF23(成纤维细胞生长因子23)、BNP型肽(脑利尿钠肽型肽)、GDF-15(生长分化因子15)、ANG2(血管生成素2)、CRP(C反应蛋白)、ESM1(内皮细胞特异性分子1)或诸如胆固醇或LDL(低密度脂蛋白)的脂质生物标志物；将所述生物标志物的量与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及基于比较和/或计算来评定所述受试者。本发明还涉及以下项的用于评定心肌梗死的用途：第一生物标志物和第二生物标志物，该第一生物标志物为cMyBPC，该第二生物标志物选自由以下项组成的组：BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；或针对所述第一生物标志物的至少一种检测剂和针对所述第二生物标志物的至少一种检测剂。此外，本发明进一步涉及一种用于评定心肌梗死的计算机实现的方法以及一种用于评定心肌梗死的装置和试剂盒。
现代医学的目的是提供个性化或个体化的治疗方案。这些是考虑到患者的个体需求或风险的治疗方案。对于其中需要在短时间内决定可能的治疗方案的紧急措施，甚至应考虑个性化或个体化的治疗方案。在这种情况下，通过血液测试测量循环生物标志物可以帮助诊断疾病状态(诸如通过肌钙蛋白测试所测量的心肌细胞的损伤)、从机制上了解疾病风险(例如，高血脂和动脉粥样硬化)以及识别所涉及的生物通路(例如，BMP10在动脉粥样硬化斑块方面的保护作用；Upton PD等人,J Cell Sci2020；133:jcs239715；doi:10.1242/jcs.239715)，并从而有助于提高治疗效果。
疑似患有AMI(急性心肌梗死)的患者的诊断检查需要入住急诊科、记录12导联心电图(ECG)、进行血液测试以诊断或排除心肌损伤、评定临床症状和病史、进行体格检查以及用于诊断AMI或鉴别诊断的其他诊断测试。
根据AMI的统一定义(Thygesen K等人,Circulation 2018；138:e618-e651.doi:10.1161/CIR.0000000000000617)，基于AMI背后的不同机制通路定义了五种不同类型的AMI，其中1型心肌梗死和2型心肌梗死将在以下更详细地说明。根据指南，技术人员在临床上可以针对3种特定的临床情况很好地鉴别3-5型AMI，诸如3型(定义为“在可能获取血液用于心脏生物标志物确定之前死亡；或者在症状出现后、生物标志物值升高发生之前，患者可能很快死亡”)、4型(PCI和支架相关AMI)和5型(CABG相关AMI)。因此，本发明针对诊断疑似AMI(1型和2型)的最常见情况，其鉴别(1型与2型)与疗法的选择非常相关：
1型心肌梗死(T1MI)：由一根或多根冠状动脉中的斑块破裂和斑块侵蚀及/或由远端栓塞引发的冠状动脉粥样硬化血栓形成，导致管腔内血栓形成以及随后的心肌灌注减少和坏死。
2型心肌梗死(T2MI)：继发于急性心肌氧供需失配的严重失衡。减少的心肌灌注可以归因于稳定的冠状动脉粥样硬化(无斑块破裂)、冠状动脉痉挛、微血管功能障碍、冠状动脉栓塞或夹层以及全身血流动力学受损包括低血压、高血压、心动过速或低氧血症(DeFilippis等人,Circulation2019:140；1661-1678)。
2型MI在女性中更为常见，并已经被描述为比1型MI具有更高的短期死亡率和长期死亡率，因为它通常与其他潜在合并症的存在相关(Thygesen等人,Eur Heart J 2018:40(3)；246-247)。2型MI患者的五年生存率已经被描述为低至40％或更低(McCarthy等人,JAMA 2018:320(5)；433)。
1型心肌梗死和2型心肌梗死的治疗有很大不同，因为2型MI的心肌损伤不是由动脉粥样硬化和不稳定冠状动脉疾病(CAD)引起的，使得治疗应解决根本原因和潜在原因(例如，在低氧血症情况时的氧气疗法或低血压情况下的容量替代)。这与1型心肌梗死相反，在1型心肌梗死中，取决于梗死程度和经皮冠状动脉介入(PCI)的可用性，需要立即进行侵入性治疗或纤溶。对于2型MI，冠状动脉检查可以有助于确定是否存在潜在的CAD(Thygesen等人,Eur Heart J 2018:40(3)；246-247)。使用针对1型MI的特定疗法对2型MI进行默认治疗目前尚无临床证据支持，甚至可能对结果产生不利影响(Collinson等人,ACC 2016年5月18日,Diagnosing Type2Myocardial Infarction)，因此，区别就显得尤为重要。虽然T1 MI中的肌钙蛋白峰值水平往往高于T2 MI中的肌钙蛋白峰值水平，但临床环境中的辨别力仍然不足(Smilowitz等人,Coronary Artery Medicine 2018；29(1)；46-52)。因此，识别和区分2型MI患者与1型MI患者一项尚未满足的重要需求(Nagele 2020Circulation.2020；141:1431–1433.DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.119.044996)。
cMyBPC为MyBP的心脏同种型，并且为心肌细胞的结构肌蛋白。MYBP-C具有高心脏特异性，并且在心肌坏死后释放到血流中。据介绍，患有急性心肌梗死的患者的血液样品中的心肌坏死生物标志物的浓度升高。
此外，从1型MI患者与2型MI患者中的差异浓度观察到包括肌钙蛋白和cMyBPC的心肌坏死生物标志物(参见例如Nestelberger等人,2021JAMACardiol.doi:10.1001/jamacardio.2021.0669)。
然而，在Nestelberger等人(2021)的研究(仅显示中等临床表现)中描述了包括肌钙蛋白和cMyBPC的心肌坏死生物标志物。
因此，识别和区分2型MI患者与1型MI患者一项尚未满足的重要需求(Nagele2020Circulation.2020；141:1431–1433.DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.119.044996)。
因此，本发明提供了满足这些需要的工具和方法。
有利地，在本发明的研究中已经发现，生物标志物cMyBPC与第二生物标志物和优选的第三生物标志物的组合允许对心肌梗死的患者进行可靠且早期的评定。在这些研究中，在急诊科就诊的患者进行了调查。为此，将确诊心肌梗死患者细分为患有1型心肌梗死和2型心肌梗死的患者。已确定了各种生物标志物的量，并经由逻辑回归分析对该生物标志物进行分析并将其数学地组合。接受者操作特征曲线下面积(AUC)用于评估生物标志物性能。AUC值为函数f(x)在区间[a][b]内的数学整数。还进行了生物标志物对和三联体的AUC研究。确定了与最佳单一生物标志物AUC相比，一起显示改善的AUC的生物标志物组合。结果描述于下面所附的实例中。
有利地，在本发明的研究中显示，与作为单一标志物的cMyBPC相比，cMyBPC与BMP10型肽(骨形态发生蛋白10型肽)、FGF23(成纤维细胞生长因子23)、BNP型肽(脑利尿钠肽型肽)、GDF-15(生长分化因子15)、ANG2(血管生成素2)、CRP(C反应蛋白)、ESM1(内皮细胞特异性分子1)或诸如胆固醇或LDL(低密度脂蛋白)的脂质生物标志物的组合显著改善了T1MI与T2MI之间的区分。针对BMP10型肽(诸如NT-proBMP10)、FGF23和BNP型肽(诸如NT-proBNP)获得了最佳改善。
此外，研究显示添加第三生物标志物可进一步改善区分。例如，cMyBPC和BMP10型肽与脂质生物标志物或与CRP的组合允许改善的评定。实例部分中的表2显示了不同脂质生物标志物(胆固醇、TAG、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1)的结果。
此外，向cMyBPC和FGF23的组合中添加脂质生物标志物(诸如CHOL、LDL或HDL)允许改善的区分。
此外，在本发明的研究中显示，cMyBPC和ANG2的组合在患有糖尿病的患者中是有利的。
本发明的其他有利的标志物组合可以在实例部分的表2和5中找到。
特别是，如果疑似心肌梗死的患者例如出现在急诊室等，则对患者的早期评定对于启动治疗措施(包括给药、物理治疗或其他治疗的介入)是至关重要的。特别是，区分1型心肌梗死和2型心肌梗死非常重要，因为1型和2型心肌梗死的治疗有很大不同(见上文)。得益于本发明，可以预防危及生命的发展，因为可以在早期通过生物标志物的确定来评定AMI患者的识别，这对于预防心肌损伤至关重要(Collet JP等人,Eur Heart J2021；42:1289-1367.doi:10.1093/eurheartj/ehaa575)。在本发明的研究中识别的生物标志物对和三联体是医疗决策的可靠基础，并且可以以时间和成本有效的方式进行评定。
本发明涉及用于评定受试者心肌梗死的方法：
(a)确定受试者的样品中第一生物标志物的量，所述第一生物标志物为cMyBPC；
(b)确定受试者的样品中第二生物标志物的量，所述第二生物标志物为BMP10型肽(骨形态发生蛋白10型肽)、FGF23(成纤维细胞生长因子23)、BNP型肽(脑利尿钠肽型肽)、GDF-15(生长分化因子15)、ANG2(血管生成素2)、CRP(C反应蛋白)、ESM1(内皮细胞特异性分子1)或诸如胆固醇或LDL(低密度脂蛋白)的脂质生物标志物；
(c)将所述生物标志物的量与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于所述生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及
(d)基于在步骤(c)中进行的比较和/或计算来评定心肌梗死。
在本发明方法的实施例中，该方法进一步包括第三生物标志物的量的确定。特别地，在本发明方法的步骤(b)中
(i)如果确定BMP10型肽作为第二生物标志物的量，则该方法可以进一步包括确定CRP或至少一种脂质生物标志物的量，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1；或者
(ii)如果确定FGF23作为第二生物标志物的量，则该方法可以进一步包括确定BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果确定BNP型肽作为第二生物标志物的量，则该方法可以进一步包括确定胆固醇或ANG2的量，或者
(iv)如果确定ANG-2作为第二生物标志物的量，则该方法可以进一步包括确定APOAT或LDL作为第三生物标志物的量。
因此，本发明涉及用于评定受试者的心肌梗死的方法：
(a)确定受试者的样品中第一生物标志物的量，所述第一生物标志物为cMyBPC，
(b)确定在受试者的样品中的如上所述的第二生物标志物和第三生物标志物的量，
(c)将所述生物标志物的量与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于所述生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及
(d)基于在步骤(c)中进行的比较和/或计算来评定心肌梗死。
应当理解，如说明书和权利要求书中所用，“一”或“一个”可意指一个或多个，取决于其所用的上下文。因此，例如，对“一个”项目的提及可意指能够利用至少一个项目。
如下文所使用，术语“具有”、“包含”或“包括”或它们的任意语法变型以非排他性方式使用。因此，这些术语既可以指除了由这些术语引入的特征之外，在此上下文中描述的实体中不存在其他特征的情况，也可以指存在一个或多个其他特征的情况。作为示例，表述“A具有B”、“A包括B”和“A包含B”既可以指其中除B之外，A中不存在其他要素的情况(即，其中A由B单独且唯一地组成的情况)；也可以指其中除B之外，实体A中还存在一个或多个其他要素(诸如要素C、要素C和要素D或甚至其他要素)的情况。术语“包含”还涵盖其中仅存在所提及的项目的实施方案，即，其具有在“由……组成”的意义上的限制性含义。
进一步地，如下文所使用的，术语“特别地”、“更特别地”、“通常地”和“更通常地”或类似的术语与附加/替代特征结合使用，而不限制替代的可能性。因此，由这些术语引入的特征是附加/替代特征，并且无意以任何方式限制权利要求的范围。如技术人员将认识到的，本发明可以通过使用替代特征来执行。类似地，由“在本发明的实施例中”引入的特征或类似表述意图成为附加/替代特征，而对本发明的替代实施例没有任何限制，对本发明的范围没有任何限制，并且对将以这种方式引入的特征与本发明的其他附加/替代或非附加/替代特征相结合的可能性也没有任何限制。
进一步地，应当理解，如本文所用的术语“至少一个”意指根据本发明可以使用该术语后面提及的项目中的一者或多者。例如，如果该术语指示应当使用至少一个采样单元，则可以被理解为一个采样单元或多于一个采样单元，即两个、三个、四个、五个或任何其他数量。根据该术语所指的项目，技术人员将理解该术语可以指代的上限(如果有的话)。
如本文所用的术语“约”意指相对于所述术语之后引用的任何数字，存在能够实现技术效果的区间精度。因此，本文所述的“约”优选地是指精确数值或所述精确数值±20％、优选地±15％、更优选地±10％、或甚至更优选地±5％的范围。
更进一步地，说明书和权利要求中的术语“第一”、“第二”、“第三”等用于区分相似的元件，而不一定用于描述顺序或时间次序。例如，第二生物标志物的量可以在第一生物标志物的量之前确定。
本发明的方法可以由上述步骤组成，或者可以包括额外的步骤，诸如进一步评估步骤(d)中获得的评定的步骤、推荐或启动诸如治疗的医治措施的步骤等。此外，它可以包括步骤(a)之前的步骤，诸如与样品预处理有关的步骤。然而，优选地，设想上述方法为离体方法，其不需要在人体或动物体上实施任何步骤。因此，该方法应为体外的方法。此外，该方法可由自动化辅助。通常，生物标志物的确定可以由机器人设备支持，而比较和评定可以由数据处理设备诸如计算机支持。
根据本发明，应评定心肌梗死。术语“心肌梗死”在本领域是众所周知的。如本文所用，该术语是指急性心肌梗死(缩写为“AMI”)。急性心肌梗死的临床标准是指在有急性心肌缺血的证据的情况下存在急性心肌损伤(即心肌肌钙蛋白(cTn)值高于第99个百分位数参考上限(URL)，包括cTn值的上升和/或下降)。急性心肌缺血的证据包括临床体征和症状、缺血性ECG变化、病理性Q波的发展以及新的存活心肌丧失或以与缺血性病因一致的模式的新的节段性室壁运动异常的影像学证据(Thygesen等人,Eur J Heart 2019:40(3)；237-269,DOI:10.1093/eurheartj/ehy462)。
在本发明的实施例中，术语“评定心肌梗死”涉及1型心肌梗死和2型心肌梗死之间的区分。因此，确定受试者是患有1型心肌梗死，还是患有2型心肌梗死。
因此，本发明涉及区分1型心肌梗死与2型心肌梗死的方法：
(a)确定受试者的样品中第一生物标志物的量，所述第一生物标志物为cMyBPC，
(b)确定在受试者的样品中的如上所述的第二生物标志物和任选地第三生物标志物的量，
(c)将生物标志物的量与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/
或者基于生物标志物的量来计算用于区分1型心肌梗死与2型心肌梗死的评分；以及
(d)基于步骤(c)中进行的比较和/或计算来区分1型心肌梗死与2型心肌梗死。
术语“1型心肌梗死”在本领域是众所周知的。如本文所用，该术语是指具有动脉粥样斑块破裂/糜烂的潜在缺血性病因并且在一个或多个冠状动脉中形成闭塞性或非闭塞性血栓的AMI。因此，1型AMI的标准包括先前提到的AMI标准，包括例如通过血管造影(包括冠状动脉内成像)或尸检鉴定冠状动脉血栓，作为急性心肌缺血的证据(Thygesen等人,Eur JHeart 2019:40(3)；237-269,DOI:10.1093/eurheartj/ehy462)。
术语“2型心肌梗死”在本领域是众所周知的。如本文所用，该术语是指具有由于a)需氧量增加(例如，持续性快速心律失常或重度高血压)或b)由于供氧量减少(例如，低血压、心动过缓、呼吸衰竭、重度贫血、冠状血管痉挛、冠状动脉夹层或微血管功能障碍)导致的受损氧供需平衡的潜在缺血性病因的AMI。因此，2型AMI的标准包括先前提到的AMI标准，包括与急性动脉粥样硬化血栓形成无关的心肌氧供需之间不平衡的证据(Thygesen等人,Eur J Heart 2019:40(3)；237-269,DOI:10.1093/eurheartj/ehy462)。
在本发明的另一个实施例中，术语“评定心肌梗死”涉及2型心肌梗死的诊断。
因此，本发明涉及用于诊断2型心肌梗死的方法：
(a)确定受试者的样品中第一生物标志物的量，所述第一生物标志物为cMyBPC，
(b)确定在受试者的样品中的如上所述的第二生物标志物和任选地第三生物标志物的量，
(c)将生物标志物的量与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/
或者基于生物标志物的量来计算用于诊断2型心肌梗死的评分；
以及
(d)基于在步骤(c)中进行的比较和/或计算来诊断2型心肌梗死。
如本文所用的术语“诊断”是指评定根据本发明的方法所指的受试者是否患有2型心肌梗死。
在本发明的另一个实施例中，术语“评定心肌梗死”涉及优选地在患病的受试者中评定心肌梗死的疗法或心肌梗死的疗法。基于本发明，可以做出治疗决定并且可以相应地治疗受试者。例如，可以决定患者是接受旨在治疗2型心肌梗死的治疗还是接受旨在治疗1型心肌梗死的治疗。
如本文所用的术语“诊断”是指评定根据本发明的方法所指的受试者是否患有2型心肌梗死。
如本领域技术人员将理解的，尽管根据本发明做出的评定(诸如鉴别或诊断)是优选的，但该评定可能不会对被研究的受试者都是100％正确的。该术语通常要求能够正确地评定统计上显著部分的受试者。本领域技术人员可使用各种众所周知的统计评估工具(例如，确定置信区间、确定p值、学生t检验、曼-惠特尼检验等)毫不费力地确定一部分是否具有统计学意义。详细信息可以参见Dowdy和Wearden,Statistics for Research,JohnWiley&Sons,New York 1983。通常设想的置信区间为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％。p值通常为0.2、0.1、0.05。
根据本发明，心肌梗死的评定典型地被理解为对心肌梗死评定的辅助，例如，区分2型心肌梗死和1型心肌梗死的辅助，或诊断2型心肌梗死的辅助。因此，本发明的方法和用途可以是完整评定的一部分。完整的评定可能包括对其他标志物、临床参数和/或ECG(其例如可能有助于评分)的评定。原则上，最终评定(诸如鉴别)将由医师进行。
如本文所用的术语“受试者”是指动物，优选地是指哺乳动物，并且更典型地指人。待通过本发明的方法研究的受试者应疑似患有心肌梗死或者应患有心肌梗死。优选地，受试者患有心肌梗死，诸如患有非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)。在实施例中，受试者为男性。在另一个实施例中，受试者为女性。
然而，待测试的受试者优选不患有3型心肌梗死、4型心肌梗死或5型心肌梗死。Thygesen K等人对这些类型的AMI进行了概述(Circulation2018；138:e618-e651.doi:10.1161/CIR.0000000000000617)，其以引用方式并入本文。3型(定义为“在可以获取血液用于心脏生物标志物确定之前死亡；或者在症状出现后、生物标志物值升高发生之前，患者可能很快死亡”)、4型(PCI和支架相关AMI)和5型(CABG相关AMI)。因此，受试者将患有1型心肌梗死或2型心肌梗死。替代性地，受试者应被怀疑患有1型心肌梗死或2型心肌梗死。
在优选的实施例中，受试者为糖尿病患者，即患有糖尿病。例如，受试者可能患有1型糖尿病或2型糖尿病。典型地，糖尿病受试者患有2型糖尿病。实例中的表5示出了用于评定患有糖尿病的患者的优选标志物和标志物组合，诸如cMyBPC与ANG2的组合。因此，糖尿病患者的第二生物标志物优选为ANG2。
如本文所用的术语“样品”是指在生理条件下包含本文所述的第一、第二和/或第三生物标志物的任何样品。更典型地，样品为体液样品，例如，血液样品或由其衍生的样品(例如，血清或血浆)、尿液样品、间质液、唾液样品、淋巴液样品等。最典型地，所述样品为血液样品、血清样品或血浆样品。
进一步地，设想血液样品为干血斑样品。将血滴施加至吸水性滤纸上即可获得干血斑样品。让血液彻底浸透纸并风干数小时。血液可能是已经用柳叶刀从被测受试者身上抽取的，例如从手指。
在一个优选实施方案中，样品为血液(即，全血)、血清或血浆样品。血清是在使血液凝固后所获得的全血的液体级分。为了获得血清，通过离心去除血块并收集上清液。血浆是血液中无细胞的流体部分。为了获得血浆样品，将全血收集在抗凝处理过的试管(例如柠檬酸盐处理过的试管或EDTA处理过的试管)中。通过离心将细胞从样品中取出，并获得上清液(即血浆样品)。
血液样品包括毛细血管血样品。例如，可以从手指上的刺破的孔获得这样的样品。
优选地，测试受试者在获得样品时患有心肌梗死，尽管受试者当时可能尚未被诊断患有心肌梗死。诊断可以稍后进行(例如，基于在第一样品后一到三个小时从受试者获得的第二样品中心肌肌钙蛋白的确定)。如何诊断心肌梗死是本领域众所周知的，并且例如由Collet JP等人描述(ESC Guidelines for the management of acute coronarysyndromes in patients presenting without persistent ST-segment elevation.EurHeart J.2020年8月29日：ehaa575.doi:10.1093/eurheartj/ehaa575.Epub ahead ofprint.PMID:32860058)。目前用于诊断非ST抬高型ACS的可用方案结合了就诊时和稍后时间点(诸如1小时、2小时或3小时后)的生物标志物浓度。
有利地，本发明的方法允许对心肌梗死进行早期评定。可以基于在就诊时从受试者获得的样品(优选地单个样品)中第一生物标志物、第二生物标志物和第三生物标志物的量来可靠地做出本文所指的评定。在实施例中，样品因此是已在急诊室就诊时从受试者获得的样品。
根据本发明，应在就诊时从受试者获得的样品中(优选在单个样品中)确定至少三种生物标志物的量：第一生物标志物、第二生物标志物和任选地第三生物标志物。在下文中，公开了第一、第二和任选的第三生物标志物的组合。该组合适用于本文公开的整个主题，诸如本发明的方法、用途、装置等。
生物标志物组合
第一标志物为cMyBPC。
第二标志物应为选自由以下项组成的组的至少一种生物标志物：BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物。
在实施例中，第二生物标志物为BMP10型肽型肽(骨形态发生蛋白10型肽)，诸如N末端proBMP10或proBMP10。
在一替代性实施例中，第二生物标志物为FGF23。
在一替代性实施例中，第二生物标志物为BNP型肽。优选地，BNP型肽为NT-proBNP、proBNP或BNP，更优选为NTproBNP或BNP，并且最优选为NT-proBNP。
BNP型肽可以糖基化，也可以不糖基化(如本文别处所述)。
在一替代性实施例中，第二生物标志物为ANG2。与ANG2的组合可以有利地用于糖尿病患者(但不限于此类患者)。
在一替代性实施例中，第二生物标志物为GDF15。
在一替代性实施例中，第二生物标志物为CRP，诸如hsCRP。
在一替代性实施例中，第二生物标志物为ESM1。
在一替代性实施例中，第二生物标志物为脂质生物标志物。
例如，脂质生物标志物(作为第二标志物)可以为胆固醇。可替代地，脂质生物标志物可以为LDL。
此外，可以使用第三生物标志物。第三生物标志物的选择可以取决于第二生物标志物。
例如，如果确定BMP10型肽作为第二生物标志物的量，则在实施例中，该方法可以进一步包括确定CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物的量，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1。如实例中所示，脂质生物标志物与BMP10型肽的组合的使用改善了对患者的评定。
如果确定FGF23作为第二生物标志物的量，则在实施例中，该方法可以包括确定BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL。
如果确定BNP型肽作为第二生物标志物的量，则该方法进一步包括确定胆固醇或ANG2作为第三生物标志物的量。
如果确定ANG2作为第二生物标志物的量，则在实施例中，该方法可以包括确定APOAT或LDL作为第三生物标志物的量。
因此，本发明设想两种或三种标志物的以下组合。
在实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为BMP10型肽。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为FGF23。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为NTproBNP或BNP，特别是NT-proBNP。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为tNTproBNP。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为GDF15。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为ANG2。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为CHOL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为ESM1。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为CRP，特别是hsCRP。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，并且第二标志物为LDL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为BMP10型肽，并且第三标志物为CHOL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为BMP10型肽，并且第三标志物为LDL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为BMP10型肽，并且第三标志物为TRIGL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为BMP10型肽，并且第三标志物为CRP。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为BMP10型肽，并且第三标志物为APOAT。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为BMP10型肽，并且第三标志物为ANG2。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为BMP10型肽，并且第三标志物为HDL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为TRIGL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为BMP10型肽。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为NTproBNP或BNP，特别是NT-proBNP。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为tNTproBNP。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为CHOL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为HDL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为LDL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为CRP。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为FGF23，并且第三标志物为ANG2。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为NTproBNP，并且第三标志物为CHOL。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为NTproBNP，并且第三标志物为ANG2。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为ANG2，并且第三标志物为APOAT。
在一替代性实施例中，第一标志物为cMyBPC，第二标志物为ANG2，并且第三标志物为LDL。
生物标志物的定义
根据本发明的第一生物标志物为cMyBPC(心肌肌球蛋白结合蛋白C)。肌球蛋白结合蛋白C为肌球蛋白相关蛋白，存在于A带在横纹肌中的跨桥承载区(C区)中。
根据本发明，应确定心脏同种型的量，即cMYBPC(心肌肌球蛋白结合蛋白C)(也称为MYBPC3、CMD1MM、CMH4、FHC、LVNC10、MYBP-C、肌球蛋白结合蛋白C，心脏的、cMyBP-C、肌球蛋白结合蛋白C3)的量。cMyBPC在心肌中产生。cMyBPC由MYBPC3基因编码。有关人cMYBPC的进一步的信息可见于UniProtKB数据库中，登录号为Q14896(MYPC3_HUMAN)。
BMP10型肽在本领域是众所周知的。优选的BMP10型肽例如公开于Susan-Resiga等人(J Biol Chem.2011Jul 1；286(26):22785-94)，其以引用方式整体并入本文(例如参见，Susan-Resiga等人的图3A，或US 2012/0213782)。
BMP型肽优选地为NT-proBMP10、proBMP10或BMP，更优选地为NT-proBMP10或proBMP10，并且最优选地为NT-proBMP10。
在实施例中，BMP10型肽是未处理的preproBMP10。在另一个实施例中，BMP10型肽是前肽proBMP10。该标志物包括N端前区段和BMP10。在另一个实施例中，BMP10型肽为BMP10的N端前区段(N端proBMP10)。在另一个实施例中，BMP10型肽为BMP10。
在一个实施例中，BMP10型肽是同二聚体或异二聚体复合物的一部分。
人preproBMP10(即，未加工的preproBMP10)的长度为424个氨基酸。人preproBMP10的氨基酸序列例如显示于WO 2020/035605 A1的SEQ ID NO:1或US2012/0213782的图3中，其以引用方式整体并入本文。WO 2020/035605A1的SEQ ID NO:1与本申请序列表中的SEQ ID NO：2相同。进一步地，preproBMP10的氨基酸序列可以通过Uniprot(参见登录号O95393-1下的序列)进行评定。人preproBMP10包括短信号肽(氨基酸1至21)，该短信号肽在被酶促地裂解，以释放proBMP10。因此，人proBMP10包括人preproBMP10(即，具有WO 2020/035605 A1的SEQ ID NO 1所示序列的多肽)的氨基酸22至424。人proBMP10被进一步切割成BMP10和活性形式的(非糖基化的)BMP10的N端前区段。BMP10的N端前区段包括具有WO 2020/035605 A1的SEQ ID NO 1所示序列的多肽(即人preproBMP10的)的氨基酸22至316。BMP10包括具有WO 2020/035605A1的SEQ ID NO 1所示序列的多肽的氨基酸317至424。
优选的BMP10型肽为BMP10和N端proBMP10。在proBMP10切割后，BMP10和N端proBMP10保持结构接近，形成BMP10的同二聚体或异二聚体，或与其他BMP家族蛋白组合(Yadin等人,CYTOGFR 2016,27(2016)13–34)。通过在两个结合配偶体的C端肽中形成Cys-Cys桥或强粘附发生二聚化。因此，形成了由两个亚单元组成的架构。
由于proBMP10以等摩尔比例裂解为BMP10和N端前区段，因此BMP10的量反映了N端前区段的量。因此，BMP10的量可以通过确定N端前区段的量来确定，并且反之亦然。
优选地，通过使用一种或多种与BMP10型肽特异性结合的抗体(或其抗原结合片段)来确定BMP10型肽的量。
例如，可以使用一种或多种特异性结合到BMP10的N端前区段的抗体。由于这样的抗体(或片段)也将结合到proBMP10和preproBMP10，因此在本发明方法的步骤a)中确定BMP10、proBMP10和preproBMP10的N端前区段的量的总和。因此，表述“确定BMP10的N端前区段的量”也应意指“确定BMP10的N端前区段、proBMP10和preproBMP10的量的总和”。
基于来自其他BMP型蛋白(例如，作为BMP9)的发现的结构预测显示BMP10与proBMP10保持在复合物中，因此对N端前区段的检测也反映了BMP10的量。
例如，可以使用一种或多种特异性结合BMP10的抗体。由于此类抗体(或片段)也将结合proBMP10和preproBMP10，所以在本发明方法的步骤a)中确定BMP10、proBMP10和preproBMP10的量的总和。因此，表述“确定BMP10的量”也应意指“确定BMP10、proBMP10和preproBMP10的量的总和”。
基于来自其他BMP型蛋白(例如，作为BMP9)的发现的结构预测显示BMP10与proBMP10保持在复合物中，因此BMP10的检测也反映了与N端前区段的量。
进一步地，设想确定如上所述所有四种BMP10型肽(即BMP10、BMP10的N端前区段、proBMP10和preproBMP10)的量的总和。
因此，可以根据本发明确定以下BMP10型肽的量：
·BMP10的量
·BMP10 N端前区段的量
·proBMP10的量
·preproBMP10的量
·BMP10、proBMP10和preproBMP10量的总和
·BMP10的N端前区段、proBMP10和preproBMP10的量的总和，
或
·BMP10、BMP10的N端前区段、proBMP10和preproBMP10的量的总和
在实施例中，BMP10型肽的量如WO 2020/035605 A1中所描述的那样确定，其以引用方式整体并入本文。在另一个实施例中，BMP10型肽的量如WO 2021/165465 A1中所述的那样确定，其以引用方式整体并入本文。在本申请的实例部分中，通过使用与NT-proBMP10结合的抗体确定BMP10型肽的量。
在另一个实施例中，第二生物标志物为FGF23。生物标志物的成纤维细胞生长因子-23(缩写为FGF-23)在本领域中是众所周知的。FGF-23是调节磷酸钙和维生素D代谢的关键因素，并且在左心室肥厚(心血管事件和肾脏疾病的主要决定因素)的发病机制中起因果作用。优选地，FGF-23为人FGF-23。人FGF-23的序列是本领域众所周知的，例如，氨基酸序列可以通过GenBank登录号NM_020638.1GI:10190673进行评定。此外，该序列还公开于Shimada等人,2001,PNAS,卷98(11)第6500页至第6505页。
脑利尿钠肽型肽(本文也称为BNP型肽)优选地选自由pre-proBNP、proBNP、NT-proBNP和BNP组成的组。前体原肽(在pre-proBNP的情况下为134个氨基酸)包含短信号肽，其被酶裂解以释放前导肽(在proBNP的情况下为108个氨基酸)。将前导肽进一步裂解为N端前导肽(NT-pro肽，在NT-proBNP的情况下为76个氨基酸)和活性激素(在BNP的情况下为32个氨基酸)。优选地，根据本发明的脑利尿钠肽为NT-proBNP、BNP及它们的变体。BNP为活性激素，并且具有比其相应的非活性对比物NT-proBNP短的半衰期。优选地，脑利尿钠肽型肽为BNP(脑利尿钠肽)，并且更优选为NT-proBNP(激素原脑利钠肽的N端)。
在实施例中，BNP型肽为BNP。
在另一个实施例中，BNP型肽为NT-proBNP。
NT-proBNP可以是“总NT-proBNP”(本文也称为tNT-proBNP)或“未糖基化的NT-proBNP”，诸如在位置S44处未糖基化的NT-proBNP。
人NT-proBNP的序列是本领域众所周知的，并且已经在现有技术中进行了详细描述，例如，WO 02/089657、WO 02/083913、Bonow 1996,New Insights into the cardiacnatriuretic peptides.Circulation 93:1946-1950。优选地，人NT-proBNP具有如SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列。
NT-proBNP以及其前体proBNP可以被O-糖基化。概述是关于的NT-proBNP的O-糖基化，并且proBNP例如由Schellenberger和Halflinger等人提供，两者的全部公开内容均以引用方式并入本文(Schellenberger等人,Arch Biochem Biophys 2006；451；Halfinger等人,Clinical Chemistry 63:1,359–368(2017))。
术语“O-连接糖基化”是本领域众所周知的(本文也称为“糖基化”)。O-连接糖基化为糖分子，即碳水化合物与丝氨酸或苏氨酸残基的附着。其为蛋白质合成后发生的翻译后修饰。例如，Schellenberger等人和Halflinger等人(上文引用)描述了NT-proBNP和proBNP如何糖基化。
下文提供了关于NT-proBNP的O-糖基化位点的概述。以下序列为人NT-proBNP序列(SEQ ID NO:1，在此作为参考序列)。O-糖基化位点加有下划线：
因此，人NT-proBNP(如SEQ ID NO:1中所示)至少包含以下糖基化位点：T36、S37、S44、T48、S53、T58和T71。
优选地，如本文所用，术语“未糖基化NT-proBNP”是指在选自由以下项所组成的组的一个或者多个位置处没有被糖基化的(即没有被O-糖基化的)NT-proBNP：人NT-proBNP的T36、S37、S44、T48、S53、T58和T71。因此，人NT-proBNP的以下氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基没有被糖基化，即不包含O-糖基化：T36、S37、S44、T48、S53、T58和T71。
在一些实施例中，术语“未糖基化NT-proBNP”是指其中(即T36、S37、S44、T48、S53、T58和T71中的)上述氨基酸残基中的至少两个没有被糖基化的NTproBNP。在一些实施例中，术语“未糖基化NT-proBNP”是指其中上述氨基酸残基中的至少三个没有被糖基化的NTproBNP。在一些实施例中，术语“未糖基化NT-proBNP”是指其中上述氨基酸残基中的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个或所有上述氨基酸残基没有被糖基化的NTproBNP。在一些实施例中，术语“未糖基化NT-proBNP”是指其中至少位置44处的丝氨酸残基(即S44)没有被糖基化的NTproBNP。因此，未糖基化NT-proBNP可能在位置S44(即Ser44)处未糖基化。
在优选实施例中，确定来自受试者的样品中未糖基化NT-proBNP的量包含使样品与特异性地检测未糖基化NT-proBNP的抗体或其抗原结合片段接触。优选地，特异性地检测未糖基化NT-proBNP的抗体或其抗原结合片段与NT-proBNP的表位特异性结合，该表位包括糖基化位点，但在糖基化位点处没有被糖基化。抗体(或片段)与生物标志物之间形成的复合物应与未糖基化NT-proBNP的量成比例。
在一些实施例中，特异性地检测未糖基化NT-proBNP的抗体或其抗原结合片段与NT-proBNP的表位特异性结合，该表位包含T36氨基酸残基，其中所述T36氨基酸残基没有被糖基化。优选地，所述抗体或片段基本上不结合包含糖基化T36氨基酸残基的NT-proBNP。
在一些实施例中，所述抗体或其片段与NT-proBNP的表位特异性结合，该表位包含S37氨基酸残基，其中所述S37氨基酸残基没有被糖基化。优选地，所述抗体或片段基本上不结合包含糖基化S37氨基酸残基的NT-proBNP。
在一些实施例中，所述抗体或其片段与NT-proBNP的表位特异性结合，该表位包含S44氨基酸残基，其中所述S44氨基酸残基没有被糖基化。优选地，所述抗体或片段基本上不结合包含糖基化S44氨基酸残基的NT-proBNP。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段的表位包括人NT-proBNP的氨基酸残基42至46(如SEQ ID NO:1中所示)。
在优选实施例中，特异性地检测未糖基化NT-proBNP的抗体为WO2004099253A1中公开的单克隆抗体MAB 1.21.3，或包含所述抗体的六个CDR的抗体。进一步地，设想使用所述抗体的抗原结合片段。
在一些实施例中，所述抗体或其片段与NT-proBNP的表位特异性结合，该表位包含T48氨基酸残基，其中所述T48氨基酸残基没有被糖基化。优选地，所述抗体或片段基本上不结合包含糖基化T48氨基酸残基的NT-proBNP。
在一些实施例中，所述抗体或其片段与NT-proBNP的表位特异性结合，该表位包含S53氨基酸残基，其中所述S53氨基酸残基没有被糖基化。优选地，所述抗体或片段基本上不结合包含糖基化S53氨基酸残基的NT-proBNP。
在一些实施例中，所述抗体或其片段与NT-proBNP的表位特异性结合，该表位包含T58氨基酸残基，其中所述T58氨基酸残基没有被糖基化。优选地，所述抗体或片段基本上不结合包含糖基化T58氨基酸残基的NT-proBNP。
在一些实施例中，所述抗体或其片段与NT-proBNP的表位特异性结合，该表位包含T71氨基酸残基，其中所述T71氨基酸残基没有被糖基化。优选地，所述抗体或片段基本上不结合包含糖基化T71氨基酸残基的NT-proBNP。
优选地，如本文所用，术语“糖基化NT-proBNP”优选地是指在选自由以下项所组成的组的一个或多个位置(即氨基酸残基)处被糖基化(即O-糖基化)的NT-proBNP：人NT-proBNP的T36、S37、S44、T48、S53、T58和T71。因此，人NT-proBNP的以下氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基被糖基化，即包含O-糖基化：T36、S37、S44、T48、S53、T58和T71。
在一些实施例中，术语“糖基化NT-proBNP”是指其中上述氨基酸残基(即T36、S37、S44、T48、S53、T58和T71)中的至少两个被糖基化的NTproBNP。在一些实施例中，术语“糖基化NT-proBNP”是指其中上述氨基酸残基中的至少三个被糖基化的NTproBNP。在一些实施例中，术语“糖基化NT-proBNP”是指其中上述氨基酸残基中的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个或所有上述氨基酸残基被糖基化的NTproBNP。在一些实施例中，术语“糖基化NT-proBNP”是指其中至少44位置处的丝氨酸残基(即S44)被糖基化的NTproBNP。
“NT-proBNP的总量”优选为糖基化和未糖基化NT-proBNP的量。因此，该术语是指糖基化NT-proBNP和未糖基化NT-proBNP的量之和。
优选地，确定总NT-proBNP的量包含使样品与特异性地检测总NT-proBNP的抗体或其抗原结合片段接触。更优选地，特异性地检测总NT-proBNP的所述抗体或其抗原结合片段与不能被糖基化的人NT-proBNP的区域结合。因此，所述抗体(或其片段)应与NT-proBNP的不携带糖基化位点(即O-糖基化位点)的区域特异性地结合，特别是人NT-proBNP的区域。抗体(或片段)与生物标志物之间形成的复合物应与总NT-proBNP的量成比例。
特别地，所述抗体(或其片段)应与不携带(人NT-proBNP的)T36、S37、S44、T48、S53、T58或T71糖基化位点的NT-proBNP的区域特异性地结合。例如，已知前35个氨基酸残基，即N端氨基酸残基1至35不携带O-糖基化位点。优选地，特异性地检测总NT-proBNP的抗体或其抗原结合片段与NT-proBNP的存在有前35个氨基酸内的表位结合，更优选地，与NT-proBNP的存在有前20个氨基酸内的表位结合，最优选地，与人NT-proBNP的存在有氨基酸残基10至20内的表位结合。在优选实施例中，所述抗体或其抗原结合片段的表位包括人NT-proBNP的氨基酸残基13至16。人NT-proBNP的序列如上所示(参见SEQ ID NO:1)。
在优选实施例中，特异性地检测总NT-proBNP的抗体为WO2004099253A1中公开的单克隆抗体MAB 17.3.1，或包含所述抗体的六个CDR的抗体。进一步地，设想使用所述抗体的抗原结合片段。
生物标志物血管生成素-2(缩写为“ANG2”，通常也称为ANGPT2)在本领域中是众所周知的。其为Ang-1和TIE2两者的天然存在的拮抗剂(参见例如Maisonpierre等人,Science277(1997)55-60)。在没有ANG-1的情况下，该蛋白可诱导TEK/TIE2的酪氨酸磷酸化。在没有血管生成诱导物(诸如VEGF)的情况下，细胞基质接触的ANG2介导松动可以诱导内皮细胞凋亡以及随之发生的血管退化。通过与VEGF的配合，其可促进内皮细胞的迁移和增殖，从而作为允许性血管生成信号。人血管生成素的序列在本领域中是众所周知的。Uniprot列出了血管生成素-2的三种同种型：同种型1(Uniprot标识符：O15123-1)、同种型2(标识符：O15123-2)和同种型3(O15123-3)。在一个优选实施例中，测定血管生成素-2的总量。总量优选为复合和游离血管生成素-2的量之和。
术语“生长分化因子-15”或“GDF-15”涉及一种多肽，该多肽为转化生长因子(TGF)细胞因子超家族的成员。术语多肽、肽和蛋白质在整个说明书中可互换使用。GDF-15最初被克隆为巨噬细胞抑制性细胞因子1，后来也被确定为胎盘转化生长因子-15、胎盘骨形态发生蛋白、非甾体抗炎药活化基因1和前列腺衍生因子(Bootcov loc cit；Hromas,1997Biochim Biophys Acta 1354:40-44；Lawton 1997,Gene 203:17-26；Yokoyama-Kobayashi1997,J Biochem(Tokyo),122:622-626；Paralkar 1998,J Biol Chem 273:13760-13767)。GDF-15的氨基酸序列公开于WO99/06445,WO00/70051,WO2005/113585,Bottner 1999,Gene 237:105-111,Bootcov loc.cit,Tan loc.cit.,Baek 2001,MolPharmacol 59:901-908,Hromas loc cit,Paralkar loc cit,Morrish 1996,Placenta17:431-441。
CRP(C反应蛋白)为一种急性时相蛋白，在超过75年以前被发现为一种与肺炎双球菌C多糖结合的血液蛋白。CRP被称为反应性炎症标志物，由远端器官(即肝脏)对源自原发病变部位的趋化因子或白介素作出应答或反应而产生。已知CRP由五个单一亚基组成，这些亚基非共价地连接并组装成分子量约为110-140kDa的环状五聚体。优选地，如本文所使用，CRP涉及人CRP。人CRP的序列为众所周知的并且例如由Woo等人公开(J.Biol.Chem.1985.260(24),13384-13388)。正常个体中CRP水平通常较低，但由于炎症、感染或损伤，CRP水平可能升高100至200倍或更高(Yeh(2004)Circulation.2004；109:11-11-11-14)。已知CRP为用于预测心血管风险的独立因素。CRP可以通过免疫测定法例如本领域众所周知的并且可商购的ELISA来确定。在优选的实施例中，CRP为hsCRP(高敏感性CRP)。
生物标志物内皮细胞特异性分子1(缩写为ESM-1)是本领域众所周知的。生物标志物通常也被称为内皮细胞特异分子。ESM-1是分泌蛋白，其主要在人肺和肾组织的内皮细胞中表达。公共领域数据表明，甲状腺、肺和肾中也表达，但在心脏组织中也表达，参见例如蛋白Atlas数据库中ESM-1的条目(Uhlén M.等人,Science 2015；347(6220):1260419)。该基因的表达受细胞因子调节。ESM-1是由20kDa成熟多肽和30kDa O-连接的聚糖链构成的蛋白聚糖(Bechard D等人,J Biol Chem 2001；276(51):48341-48349)。在本发明的一个优选实施例中，在来自受试者的样品中测定人ESM-1多肽的量。人ESM-1多肽的序列是本领域众所周知的(例如参见Lassale P.等人，J.Biol.Chem.1996；271:20458-20464并且可以例如通过Uniprot数据库进行评定，参见条目Q9NQ30(ESM1_HUMAN)。通过选择性剪接产生ESM-1的两种同工型，即同工型1(具有Uniprot标识符Q9NQ30-1)和同工型2(具有Uniprot标识符Q9NQ30-2)。同工型1的长度为184个氨基酸。在同工型2中，缺少同工型1的氨基酸101至150。氨基酸1至19形成信号肽(可能会被裂解)。
在一个优选实施例中，测定ESM-1多肽的同工型1、即具有如UniProt登录号Q9NQ30-1所示的序列的同工型1的量。
在另一个优选实施例中，测定ESM-1多肽的同工型2、即具有如UniProt登录号Q9NQ30-2所示的序列的同工型2的量。
在另一个优选实施例中，测定ESM-1多肽的同工型1和同工型2、即总ESM-1的量。
根据本发明，可以确定一种或多种脂质生物标志物的量。
本文提及的脂质生物标志物优选为选自以下项组成的租的脂质生物标志物：胆固醇(本文也称为“CHOL”)、TAG(甘油三酯，本文也称为“TRIGLY”)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1(本文也称为“APOAT”)。因此，可以确定来自前述标记物组的一个或多个标志物。
在实施例中，脂质生物标志物为胆固醇。胆固醇是一种在C3位具有仲羟基的类固醇。胆固醇在许多类型的组织中合成，但特别是在肝脏和肠壁中合成。大约四分之三的胆固醇是新合成的，四分之一来自饮食摄入。胆固醇试验用于筛查动动脉粥样硬化血栓形成风险以及诊断和治疗涉及胆固醇水平升高以及脂质和脂蛋白代谢紊乱的病症。
在另一个实施例中，脂质生物标志物为载脂蛋白A-1。载脂蛋白是脂蛋白的蛋白质成分。脂蛋白根据它们的超离心浮选密度进行分类。载脂蛋白A-1是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白质成分。载脂蛋白A-1激活卵磷脂-胆固醇-酰基转移酶(LCAT)，该卵磷脂-胆固醇-酰基转移酶催化胆固醇的酯化，从而增强脂蛋白的脂质携带能力。进一步的信息是在UniProt登录号UniProtKB-P02647(APOA1_HUMAN)下的载脂蛋白A-1。
在又一个实施例中，脂质生物标志物为甘油三酯。甘油三酯是三元醇甘油与三个长链脂肪酸的酯。甘油三酯在肝脏中部分地合成，并且部分地在食物中摄入。甘油三酯的确定用于诊断和治疗患有糖尿病、肾病、肝梗阻、脂质代谢紊乱和许多其他内分泌疾病的患者。
在又一个实施例中，脂质生物标志物为LDL。由此，LDL含量得以确定。低密度脂蛋白(LDL)在引起和影响动脉粥样硬化血栓形成、特别是冠状动脉硬化的进展中发挥着关键作用。LDL是脂蛋白的五个主要组之一，这五个主要组通过细胞外水将所有脂肪分子运输到身体各处。血液测试通常报告LDL-胆固醇：使用弗里德瓦尔德方程(Friedewald equation)估计LDL颗粒中平均含有的胆固醇量。更进一步地，可以经由LDL中的胆固醇含量来评定LDL的含量。
在又一个实施例中，脂质生物标志物为HDL。HDL由肠和肝脏合成。高密度脂蛋白(HDL)负责将胆固醇从外周细胞反运输到向肝脏。监测血清或血浆中的HDL胆固醇具有临床意义，因为HDL胆固醇浓度对于评定动脉粥样硬化血栓形成风险很重要。
如本文所使用，术语“确定”是指对根据本发明提及的生物标志物的定性和定量确定，即该术语涵盖对所述生物标志物的存在或不存在的确定或者对所述生物标志物的绝对或相对量的确定。
如本文所使用，术语“量”是指本文提及的化合物的绝对量、所述化合物的相对量或浓度以及与其相关或可从其得出的任何值或参数。此类值或参数包括来自通过直接测量从所述化合物获得的所有具体物理或化学性质的强度信号值，例如质谱或NMR谱中的强度值。此外，所包含的是通过在本说明书别处指定的间接测量获得的所有值或参数，例如，响应于化合物或从特异性地结合的配体获得的强度信号而从生物读出系统确定的反应水平。应理解的是，与上述量或参数相关的值也可以通过所有标准数学运算获得。
在本发明的方法中确定该量可以通过允许在所述第二分子从第一分子释放时检测所述第二分子的存在或不存在或量的任何技术来进行。合适的技术取决于生物标志物的分子性质和特性，并且在本文别处更详细地讨论。
典型地，特别是如果生物标志物为蛋白生物标志物(诸如BNP型肽、BMP10型肽、GDF-15、ANG2、CRP或ESM1、APOAT)，则根据本发明提及的生物标志物的量可以通过使用夹心、竞争或其他测定形式的免疫测定来确定。所述测定将产生指示生物标志物的存在或不存在或量的信号。其他合适方法包括测量生物标志物特有的物理或化学特性，诸如其精确的分子质量或NMR谱。所述方法包括，优选地，生物传感器、耦合到免疫确定的光学器件、生物芯片、分析装置(诸如质谱仪、NMR分析仪、表面等离子体共振测量装置或色谱装置)。进一步地，方法包括基于微量板ELISA的方法、全自动或机器人免疫测定(例如，可从罗氏获得)。根据本发明的合适的测量方法还可以包括沉淀(特别是免疫沉淀)、电化学发光(电致化学发光)、RIA(放射免疫确定)、ELISA(酶联免疫吸附确定)、电化学发光夹心免疫确定(ECLIA)、解离增强的镧系元素荧光免疫确定(DELFIA)、闪烁邻近确定(SPA)、比浊法、浊度法、乳胶增强比浊法或浊度法、或固相免疫测试。本领域已知的其他方法诸如凝胶电泳、2D凝胶电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)或蛋白质印迹。更通常地，特别设想用于确定本文提及的生物标志物的技术在下面所附实例中描述。
待根据本发明确定的生物标志物为本领域众所周知的。此外，用于确定生物标志物的量的方法是已知的。例如，可以如实例部分中所述测量生物标志物(参见实例1)。
一些生物标志物为脂质生物标志物HDL、LDL、胆固醇和甘油三酯。这些生物标志物的量可以例如酶促地确定。
(总)甘油三酯的量的酶促确定优选地包括以下步骤：
a)将样品与脂肪酶在足以允许转化成甘油和游离脂肪酸的条件和时间下接触；
b)将包含甘油的样品与甘油激酶在足以允许转化成甘油-3-磷酸的条件和时间下接触；
c)将包含甘油-3-磷酸的样品与甘油磷酸氧化酶在足以允许转化为二羟丙酮磷酸和H2O2的条件和时间下接触；以及
d)酶促地或化学地确定生成的H2O2的量，从而确定甘油三酯的量。
因此，甘油三酯的检测剂为酶：甘油激酶、甘油磷酸氧化酶和甘油磷酸氧化酶。优选地，这些酶组合使用。
胆固醇的量可以经由胆固醇酯在样品中的量来评定。优选地，酶促确定胆固醇酯的量包括以下步骤：
a)将样品与胆固醇酯酶在足以允许转化为胆固醇的条件和时间下接触；
b)将包含胆固醇的样品与胆固醇氧化酶在足以允许生成H2O2的条件和时间下接触；以及
c)酶促地或化学地确定生成的H2O2的量，从而确定胆固醇的量。
因此，胆固醇酯的检测剂为酶：胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶。优选地，这些酶组合使用。
如上所述，可以通过确定LDL胆固醇和胆固醇酯来评定LDL的量。
优选地，酶促确定LDL胆固醇和胆固醇酯的量包括以下步骤：
a)在选择性地溶解LDL的非离子去污剂存在下，将样品与胆固醇酯酶在足以允许转化为胆固醇的条件和时间下接触；
b)将包含胆固醇的样品与胆固醇氧化酶在足以允许生成H2O2的条件和时间下接触；以及
c)酶促地或化学地确定生成的H2O2的量，从而确定LDL胆固醇和胆固醇酯的量，从而确定LDL的量。
因此，HDL的检测剂为酶：胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶。优选地，这些酶组合使用。
如上所述，HDL的量可以通过确定HDL胆固醇和胆固醇酯(即HDL中存在的胆固醇和胆固醇酯的量)来评定。LDL胆固醇和胆固醇酯的量的酶促确定优选包括以下步骤：
a)在选择性地溶解LDL的非离子去污剂存在下，将样品与胆固醇酯酶在足以允许转化为胆固醇的条件和时间下接触；
b)将包含胆固醇的样品与胆固醇氧化酶在足以允许生成H2O2的条件和时间下接触；以及
c)酶促地或化学地确定生成的H2O2的量，从而确定LDL胆固醇和胆固醇酯的量，从而确定LDL的量。
因此，LDL的检测剂为酶：胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶。优选地，这些酶组合使用。
H2O2的量可以例如通过在进一步的步骤(步骤e或d)中进行转化来酶促地确定，在该进一步的步骤中，样品与过氧化物酶(诸如辣根过氧化物酶)和显色底物接触。使用H2O2作为氧化剂，通过过氧化物酶典型地氧化底物。在H2O2、过氧化物酶和底物存在下的催化反应典型地会产生可通过分光光度法检测到的特征变化。例如，过氧化物酶催化显色底物转化为有色产物，并在作用于化学发光底物时产生光。例如，DAOS(N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺)加4-氨基安替比林在H2O2和氧化物酶存在下会导致DAOS和4-氨基安替比林氧化偶联，以形成蓝色色原。该色原可例如通过测量约590nm处的光吸光度来检测。替代性地，10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪可用作过氧化物酶的底物，该底物能够检测H2O2。这种非荧光试剂与H2O2反应，以生成试卤灵(一种荧光化合物)。在另一种替代方案中，4-氨基比林加4-氯酚在H2O2和过氧化物酶存在下导致形成4-(对-苯醌-单亚氨基)-安替比林(一种红色产物)，4-(对-苯醌-单亚氨基)-安替比林可以通过光度法确定。
应理解，本发明不限于上述标志物(第一标志物、第二标志物和第三标志物)。相反，本发明可以涵盖另外标志物的测定。
本文使用的术语“参考”优选地指允许将受试者分配到患有疾病或病症(例如，2型心肌梗死或1型心肌梗死(MI))的受试者组中的量或评分。这种参考可以是将这些组彼此分开的阈值(或截止)量或评分。因此，参考应当是允许将受试者分配到患有1型心肌梗死或2型心肌梗死受试者组中的量或评分。例如，参考应当是允许将受试者分配到患有2型心肌梗死或未患有2型心肌梗死的受试者组中的量或评分。
在实施例中，参考为参考量。在实施例中，参考为参考评分。
术语“至少一位受试者”是指一位受试者或多于一位受试者，诸如至少10、50、100、200或1000位受试者。
原则上，可以基于给定参数诸如生物标志物的平均值或均值，通过应用标准统计方法来计算受试者队列的参考量。特别是，测试(诸如旨在诊断发生事件或未发生事件的方法)的准确性通过其接收器操作特性(ROC)而被最好地描述(特别地参见Zweig 1993,Clin.Chem.39:561-577)。ROC曲线图是在观察到的整个数据范围内连续改变决策阈值所产生的所有灵敏度/特异性对的图。诊断方法的临床性能取决于其准确性，即其正确地将受试者分配到某一预后或诊断中的能力。ROC曲线通过将适用于区分的整个阈值范围的敏感性对比1-特异性绘制成曲线而显示了两种分布之间的重叠。y轴上是敏感性，即真阳性分数，其被定义为真阳性测试结果数与真阳性测试结果数和假阴性测试结果数之积的比率。这也被称为存在疾病或病况时的阳性。其仅从受影响的子组计算。x轴上为假阳性分数，即1-特异性，其被定义为假阳性结果数与真阴性结果数和假阳性结果数之积的比率。这是一个特异性指数，并且完全由未受影响的子组计算得出。由于真阳性分数和假阳性分数是完全分开计算的，因此通过使用来自两个不同子组的测试结果，ROC曲线与队列中事件的患病率无关。ROC图上的各点代表与对应于特定决策阈值的灵敏度/-特异性对。有完全辨别(两种结果分布没有重叠)的测试具有穿过左上角的ROC曲线，其中真阳性分数为1.0或100％(完全敏感性)，并且假阳性分数为0(完全特异性)。无辨别(两个组的结果分布相同)的测试的理论曲线是从左下角到右上角的45°对角线。大多数曲线落在这两个极端之间。如果ROC曲线完全落到低于45°对角线，则可以通过将“阳性”的标准从“大于”逆转为“小于”或反之亦然来轻松纠正。定性地，曲线越接近左上角，则测试的总体准确度就越高。根据期望的置信区间，可以从ROC曲线导出阈值，从而允许分别在敏感性与特异性的适当平衡下对某一病症的疾病进行诊断。例如，通常，通过建立如上所述的所述队列的ROC并由此从中导出阈值量，可以生成用于本发明的上述方法的参考(即允许区别1型心肌梗死与2型心肌梗死的阈值)。根据诊断方法所需的灵敏性和特异性，ROC曲线允许得出合适的阈值。
应当理解，参考应允许进行本文提及的评定。例如，应允许区分1型心肌梗死和2型心肌梗死，或允许做出适当的治疗决定。
本发明方法的步骤c)包括：将生物标志物(即第一生物标志物、第二生物标志物和任选地第三生物标志物)的量与所述生物标志物的参考进行比较及/或计算用于基于生物标志物的量来评定心肌梗死的评分。
因此，第一生物标志物、第二生物标志物和任选的第三生物标志物的量可以分别与第一生物标志物的参考、第二生物标志物的参考和任选的第三生物标志物的参考进行比较。
替代性地，可以基于生物标志物的量(即基于第一生物标志物、第二生物标志物和任选地第三生物标志物的量)来计算评分。所述评分应允许评定心肌梗死，诸如用于区分1型心肌梗死和2型心肌梗死。任选地，可以将所述评分与合适的参考分数进行比较。
本文所用的术语“比较”涵盖将本文提及的生物标志物的确定量与参考进行比较(或将计算的评分与参考评分进行比较)。应当理解，本文所用的比较是指在数量的值与参考之间做出的任何类型的比较。然而，应理解，优选地，相同类型的值彼此比较，例如，如果在本发明的方法中确定绝对量并进行比较，则参考也应为绝对量，如果在本发明的方法中确定相对量并进行比较，则参考也应为相对量等。替代性地，如本文所使用，术语“比较”涵盖将计算的评分与合适的参考评分进行比较。可手动或计算机辅助进行比较。例如，可以将量的值或评分和参考相互比较，并且可以由执行比较的算法的计算机程序自动执行所述比较。执行所述评估的计算机程序将以适当的输出格式提供所需的评定。
如上所述，还设想基于第一生物标志物和第二生物标志物或者第一生物标志物、第二生物标志物或第三生物标志物的量(即单一评分)来将多个生物标志物组合到单一评分(即单一评分)，并且将该评分与参考评分进行比较。因此，计算评分。优选地，评分基于在来自测试受试者的样品中第一和第二生物标志物的量，并且如果确定第三生物标志物的量，则基于在来自测试受试者的样品中第一、第二和第三生物标志物的量。尽管评分应当基于前述生物标志物的量，但是另外的生物标志物或另外的患者特定参数可以对评分有贡献。
所计算的评分结合了关于至少两种生物标志物的量的信息。此外，在评分中，优选地根据生物标志物对建立评定的贡献对生物标志物进行加权。因此，个体标志物的值通常被加权，并且将经过加权的值用于计算评分。合适的系数(权重)可以由本领域技术人员毫不费力地确定。还可以从已在至少两个生物标志物上训练的决策树或决策树集(集合)来计算评分。基于本发明方法中应用的生物标志物的组合，个体生物标志物的权重以及决策树的结构可以是不同的。
该评分可以被视为用于评定本文所阐述的受试者的分类器参数。特别地，它使人能够基于单一评分来提供评定。参考评分优选地为一值，特别是允许评定如本文所阐述的心肌梗死的截止值。优选地，参考为单一值。因此，人们不必解释有关单个生物标志物含量的全部信息。使用如本文所述的评分系统，有利地，可以使用生物标志物的不同量纲或单位的值，因为这些值将被数学地转换成评分。因此，例如绝对浓度的值可以与峰面积比率组合成评分。可以基于期望的灵敏性或期望的特异性来选择待应用的参考评分。如何选择合适的参考评分为本领域众所周知的。
该评分应允许对心肌梗死的评定，诸如区分2型心肌梗死和1型心肌梗死。如何计算评分是本领域众所周知的。实例部分提供了实例，(请参见实例2，cMyBPC和BMP10组合的使用的实例)。技术人员也可以建立合适的诊断算法。例如，大于参考评分的计算评分指示受试者患有2型MI，而低于参考评分的计算评分则指示受试者患有1型MI。
对于本文所述的具体标志物，优选的改变(“方向”)见下表。
表A：生物标志物的方向
因此，心肌肌钙蛋白、cMyBPC、LDL、TRIGL(甘油三酯，TAG)、CHOL、ANG2和BMP10在1型MI患者中增加(与参考相比)，并且在2型MI患者中减少(与参考相比)。表A中显示的其余标志物在1型MI患者中减少(与参考相比)，在2型MI患者中增加(与参考相比)。
本发明的方法可以进一步包括建议或启用合适的治疗性措施。通常，所述合适的治疗措施取决于本文所述的评定结果，即取决于受试者是否患有1型心肌梗死或2型心肌梗死。例如，可以决定患者是接受旨在治疗2型心肌梗死的治疗还是接受旨在治疗1型心肌梗死的治疗。被确定患有2型MI的患者接受旨在治疗2型MI的治疗。被确定患有1型MI的患者接受旨在治疗1型MI的治疗。
本发明的方法可以进一步根据从AMI亚型的生物标志物获得的各种信息来指导疗法选项的紧迫性和时机。
在实施例中，如果患者已被评定患有1型心肌梗死，则推荐或启用的治疗措施是采用再灌注策略的紧急疗法，以用药物(抗血小板、抗凝剂)和侵入性血运再生手术(诸如经皮冠状动脉介入[PCI]、药物洗脱支架置入或冠状动脉旁路移植术[CABG]解决动脉粥样硬化血栓形成斑块破裂问题)。
在实施例中，如果患者已被评定患有2型心肌梗死，则推荐或启动的治疗措施是改善心肌氧供需的手术，诸如解决心肌氧供应减少的状况(低血压、贫血、缓慢性心律失常、呼吸衰竭)，并通过手术和药物(诸如β受体阻滞剂、血管扩张剂、抗凝剂和利尿剂)解决心肌需氧量增加(心动过速、快速性心律失常、严重高血压、其他合并症)的病症问题。在实施例中，如果已经用高生物标志物评分评定了患者，则推荐或启动的治疗措施可以指导介入的适当时机(立即、早期或延迟)。
上文给出的定义经过必要的修正适用于以下。
本发明还涉及用于评定受试者的心肌梗死的计算机实现的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)接收针对受试者的样品中第一生物标志物的量的值，所述第一生物标志物为cMyBPC；
(b)接收针对受试者的样品中第二生物标志物的量的值，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；
(c)将针对生物标志物的量的值与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及
(d)基于在步骤(c)中进行的比较和/或计算来评定心肌梗死。
如本文所使用，术语“计算机实现”意为该方法以自动化方式在数据处理单元上执行，该数据处理单元通常包括在计算机或类似的数据处理装置中。数据处理单元应接收生物标志物的量的值。此类值可以是量、相对量或反映如本文别处详细描述的量的任何其他计算值。因此，应理解，上述方法不需要确定生物标志物的量，而是使用已经预定的量的值。
通常，在所述方法的步骤(b)中
(i)如果接收针对BMP10型肽作为第二生物标志物的量的值，则该方法可以进一步包括接收针对CRP或至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量的值，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1；或者
(ii)如果接收针对FGF23作为第二生物标志物的量的值，则该方法可以进一步包括接收针对BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量的值，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果接收针对BNP型肽作为第二生物标志物的量的值，则该方法可以进一步包括接收针对胆固醇或ANG2的量的值，或者
(iv)如果接收针对ANG-2作为第二生物标志物的量的值，则该方法进一步包括接收针对APOAT或LDL作为第三生物标志物的量的值。
原则上，本发明还设想了一种计算机程序、计算机程序产品或具有有形嵌入所述计算机程序的计算机可读存储介质，其中该计算机程序包括指令，该指令当在数据处理装置或计算机上运行时执行本发明的上述方法。具体地，本公开进一步包括：
-计算机或计算机网络，其包括至少一个处理器，其中处理器被适配成进行根据本说明书中所描述的实施例之一的方法，
-计算机可加载数据结构，该计算机可加载数据结构适于当在计算机上正在执行该数据结构时，执行根据本说明书中所述的实施例之一的方法，
-计算机脚本，其中该计算机程序适于当在计算机上执行该程序时，执行根据本说明书中所述的实施例之一的方法，
-计算机程序，该计算机程序包括程序装置，该程序装置用于当在计算机上或在计算机网络上正执行该计算机程序时，执行根据本说明书中所述的实施例之一的方法，
-计算机程序，该计算机程序包括根据前述实施例的程序装置，其中该程序装置存储在计算机可读的存储介质上，
-存储介质，其中数据结构存储在该存储介质上并且其中该数据结构适于在被加载到计算机或计算机网络的主存储装置和/或工作存储装置之后，执行根据本说明书中所述的实施例之一的方法，
-计算机程序产品，该计算机程序产品具有程序代码工具，其中这些程序代码工具可以存储或被存储在存储介质上，以用于在计算机上或在计算机网络上执行这些程序代码工具的情况下，执行根据本说明书中所述的实施例之一的方法，
-数据流信号，通常是加密的，包括本文别处定义的参数的数据，以及
-数据流信号，通常是加密的，包括由本发明的方法提供的评定。
本发明涉及用于评定患有心肌梗死的受试者的心肌梗死的装置，所述装置包括：
(a)测量单元，该测量单元用于确定受试者的样品中的第一生物标志物和第二生物标志物的量，该第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物，所述测量单元包括用于第一生物标志物和第二生物标志物的检测系统；以及
(b)评估单元，该评估单元可操作地连接到该测量单元，该评估单元包括：数据库，该数据库具有针对第一生物标志物和第二生物标志物的存储的参考，优选地，如上文所指定的；以及数据处理器，该数据处理器包括指令，所述指令用于执行第一生物标志物和第二生物标志物的量与参考的比较，并且/或者用于基于生物标志物的量或基于所计算的评分执行对用于评定心肌梗死的评分的计算，优选地，如上文所指定的，并且用于基于与参考量(或参考评分)的比较来评定心肌梗死，所述评估单元能够自动从该测量单元接收生物标志物的量的值。
如本文所使用，术语“装置”涉及包括上述单元的系统，上述单元彼此可操作地连接的以允许根据本发明的方法确定生物标志物的量并对其进行评估，从而可以提供评定。
分析单元通常包括至少一个反应区，该反应区具有用于第一和第二生物标志物以及优选地还有第三生物标志物的生物标志物检测剂，该检测剂以固定形式固定在待与样品接触的固体支持物或载体上。此外，在反应区中，可以应用允许检测剂与在样品中包含的生物标志物特异性结合的条件。
反应区可以直接进行样品施加，或者它可以连接到施加样品的上样区。在后一种情况下，样品可以经由上样区和反应区之间的连接主动或被动地输送至反应区。此外，反应区还应连接到检测器。连接应使得检测器能够检测生物标志物与其检测剂的结合。合适的连接取决于用于测量生物标志物的存在或量的技术。例如，对于光学检测，在检测器与反应区之间可能需要光的传输，而对于电化学确定，例如在反应区与电极之间可能需要流体连接。
检测器应适合于检测生物标志物的量的确定。随后可以将所确定的量传送至评估单元。所述评估单元包括数据处理元件，诸如计算机，该数据处理元件具有用于确定在样品中存在的量的实现算法。
如根据本发明方法所指的处理单元通常包括中央处理单元(CPU)和/或一个或多个图形处理单元(GPU)和/或一个或多个专用集成电路(ASIC)和/或一个或多个张量处理单元(TPU)和/或一个或多个现场可编程门阵列(FPGA)等。例如，数据处理元件可以是通用计算机或便携式计算装置。还应理解，多个计算装置可以诸如在网络上或通过其他传输数据的方法一起使用，以进行本文所公开的方法的一个或多个步骤。示例性计算装置包括台式计算机、膝上型计算机、个人数据助理(“PDA”)、蜂窝装置、智能或移动装置、平板计算机、服务器等。一般而言，数据处理元件包括能够执行多个指令(诸如软件的程序)的处理器。
评估单元通常包括或可以访问存储器。存储器为计算机可读介质并且可以包括例如位于计算装置本地或者计算装置可通过网络访问的单一存储装置或多个存储装置。计算机可读介质可以是可由计算装置访问的任何可用介质并且包括易失性和非易失性介质两者。进一步地，计算机可读介质可以是可移动和不可移动介质中的一者或两者。作为示例而非限制，计算机可读介质可以包括计算机存储介质。示例性计算机存储介质包括但不限于RAM、ROM、EEPROM、闪存或任何其他存储技术、CD-ROM、数字多功能盘(DVD)或其他光盘存储、磁卡、磁带、磁盘存储器或其他磁存储装置，或者可以用于存储能够被计算装置访问并被计算装置的处理器执行的多个指令的任何其他介质。
根据本公开的实施例，软件可包括指令，该指令当由计算装置的处理器执行时可进行本文公开的方法的一个或多个步骤。一些指令可以适合于产生控制其他机器的操作的信号，并且因此可以通过这些控制信号来操作以转换远离计算机本身的素材。这些描述和表示是数据处理领域的技术人员用来例如最有效地将其的工作内容传达给本领域的其他技术人员的手段。
该多个指令还可以包括通常被认为是导致期望结果的自洽步骤序列的算法。这些步骤为那些需要对物理数量进行物理操作的步骤。通常，但不一定，这些数量采用能够被存储、传输、转换、组合、比较和以其他方式操纵的电或磁脉冲或信号的形式。有时，主要出于通用的原因，将这些信号称为值、字符、显示数据、数字等，作为对其中体现或表达这些信号的物理项目或表现形式的参考，被证明是方便的。然而，应该记住，所有这些和类似的术语都与适当的物理数量相关联，并且在这里仅用作应用于这些数量的方便标记。
评估单元还可以包括或者可以访问输出装置。示例性输出装置包括例如传真机、显示器、打印机和文件。根据本公开的一些实施例，计算装置可以进行本文公开的方法的一个或多个步骤，并且此后经由输出装置提供与该方法的结果、指示、比率或其他因素相关的输出。
通常，所述测量单元确定并包括用于第三生物标志物的检测系统，并且其中所述数据库包括第三生物标志物的存储的存储的参考，所述第三生物标志物为：
(i)如果BMP10型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为CRP或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1，
(ii)如果FGF23为第二生物标志物，则第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG
(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果BNP型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为胆固醇或ANG2，或者
(iv)如果ANG-2为第二生物标志物，则第三生物标志物为APOAT或LDL。
更通常地，所述检测系统包括至少一种能够特异性检测该生物标志物中的每一者的检测剂。
本发明进一步考虑用于评定受试者的心肌梗死的装置，所述装置包括：评估单元，该评估单元包括：数据库，该数据库具有针对第一生物标志物和第二生物标志物的存储的参考，该第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；以及数据处理器，该数据处理器包括指令，该指令用于执行第一生物标志物和第二生物标志物的量与参考的比较，优选地，如上述所指定的，并且用于基于该比较来评定心肌梗死，所述评估单元能够接收在受试者的样品中确定的生物标志物的量的值。
通常，所述数据库包括第三生物标志物的存储的参考，所述第三生物标志物
(i)如果BMP10型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为CRP或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1；或者
(ii)如果FGF23为第二生物标志物，则第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG
(甘油三酯)、LDL和HDL，
(iii)如果BNP型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为胆固醇或ANG2，
(iv)如果ANG-2为第二生物标志物，则第三生物标志物为APOAT或LDL。
原则上，本发明还涉及以下项的用于评定受试者的心肌梗死的用途：i)第一生物标志物和第二生物标志物，该第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物，ii)或针对所述第一生物标志物的至少一种检测剂以及针对所述第二生物标志物的至少一种检测剂。
本文使用的术语“检测剂”是指特异性检测生物标志物的试剂。特别地，该术语是指与生物标志物特异性结合的任何试剂，即不与在样品中存在的其他组分发生交叉反应的试剂。通常，如本文所提及的特异性结合生物标志物的检测剂可以是抗体、抗体片段或衍生物、适体、生物标志物的配体、生物标志物的受体、已知结合和/或转化生物标志物的酶、或已知与生物标志物特异性结合的小分子。例如，本文中被称为检测剂的抗体包括能够结合抗原或半抗原的多克隆和单克隆抗体及其片段，诸如Fv、Fab和F(ab)2片段。本发明还包括单链抗体和人源化杂合抗体，其中表现出所需抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人受体抗体的序列组合。供体序列通常将至少包括供体的抗原结合氨基酸残基，但也可以包括供体抗体的其他结构和/或功能相关的氨基酸残基。此类杂合体可以通过本领域熟知的几种方法来制备。适体检测剂例如可以是核酸或肽适体。制备此类适体的方法为本领域众所周知的。例如，可以将随机突变引入作为适体基础的核酸或肽中。然后可以根据本领域已知的筛选程序，例如噬菌体展示，来测试这些衍生物的结合。检测剂的特异性结合意为它不应与在待分析样品中存在的另一种肽、多肽或物质实质上结合，即交叉反应。优选地，特异性结合的生物标志物应以比样品的任何其他成分高至少3倍、更优选至少10倍、甚至更优选至少50倍的亲和力结合。如果非特异性结合可以例如根据其在蛋白质印迹上的大小、或根据其在样品中相对较高的丰度而仍然明确地被区分和测量，则非特异性结合可以是可容忍的。
在优选的实施例中，检测剂是特异性结合标志物的抗体或其抗原结合片段。
检测剂可以永久地或可逆地融合或连接到可检测的标记。合适的标签为技术人员众所周知的。合适的可检测的标签是可通过合适的检测方法检测到的任何标签。典型的标签包括金颗粒、乳胶珠粒、吖啶酯(acridan ester)、鲁米诺、钌复合物、酶活性标签、放射性标签、磁性标签(“例如磁珠”，包括顺磁标签和超顺磁标签)和荧光标签。酶活性标签包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶，以及它们的衍生物。用于检测的合适底物包括二氨基联苯胺(DAB)、3,3'-5,5'-四甲基联苯胺、NBT-BCIP(4-硝基蓝四唑氯化物和5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐，可作为现成储备溶液从罗氏诊断公司购得)、CDP-StarTM(Amersham Bio-sciences)、ECFTM(Amersham Biosciences)。合适的酶-底物组合可产生有色反应产物、荧光或化学发光，该有色反应产物、荧光或化学发光可根据本领域已知的方法(例如使用感光胶片或合适的摄像系统)来测量。对于酶反应的测量，上述给定的标准类似地适用。典型的荧光标记包括荧光蛋白(诸如GFP及其衍生物)、Cy3、Cy5、德克萨斯红、荧光素和Alexa染料(例如Alexa 568)。进一步的荧光标签可从Molecular Probes(Oregon)购得。同样，还考虑使用量子点作为荧光标签。典型的放射性标记包括35S、125I、32P、33P等。放射性标签可以通过任何已知且适当的方法检测，所述方法为例如感光胶片或磷光成像仪。合适的标记可以是或包括标签，诸如生物素、洋地黄毒苷、His标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc标签、甲型流感病毒血凝素(HA)、麦芽糖结合蛋白等。
通过酶促试验对脂质生物标志物的确定在本文别处描述。还公开了这些标志物的优选检测剂。
如本文所阐述的生物标志物的确定可以包括在分离步骤(例如通过LC或HPLC)之后进行的质谱法(MS)。如本文所使用，质谱法涵盖允许确定对应于待根据本发明确定的化合物(即生物标志物)的分子量(即质量)或质量变量的所有技术。优选地，如本文所使用的质谱法涉及GC-MS、LC-MS、直接输注质谱法、FT-ICR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四极杆质谱法、任何顺序耦合的质谱法，诸如MS-MS或MS-MS-MS、ICP-MS、Py-MS、TOF或使用上述技术的任何组合方法。如何应用这些技术为本领域技术人员众所周知的。此外，合适的装置是可商购的。更优选地，本文所用的质谱法涉及LC-MS和/或HPLC-MS，即涉及与先前的液相色谱分离步骤可操作地连接的质谱法。优选地，质谱法为串联质谱法(也称为MS/MS)。串联质谱法，也称为MS/MS，涉及两个或多个质谱步骤，并且在阶段之间发生碎裂。在串联质谱分析中，两台质谱仪通过碰撞池串联连接。质谱仪与色谱装置耦合。已通过色谱法分离的样品在第一质谱仪中进行分选和称重，然后在碰撞池中通过惰性气体碎裂，并在第二质谱仪中对一个或多个片段进行分选和称重。在第二台质谱仪中对碎片进行分类和称重。通过MS/MS进行的鉴定更准确。
在一实施例中，如本文所使用，质谱法涵盖四极MS。最优选地，所述四极MS如下进行：a)选择通过在质谱仪的第一分析四极中电离作用产生的离子的质量/电荷商(m/z)；b)通过在另外的后续四极中施加加速电压来将在步骤a)中选择的离子碎裂，该另外的后续四极填充有碰撞气体并充当碰撞室；c)在另外的后续四极中选择在步骤b)中通过碎裂过程产生的离子的质量/电荷商，由此该方法的步骤a)至c)至少进行一次；并且分析由于电离过程而存在于物质混合物中的所有离子的质量/电荷商，由此该四极填充碰撞气体，但分析过程中不施加加速电压。待根据本发明使用的所述最优选的质谱法的细节可以在WO2003/073464中找到。
更优选地，所述质谱法为液相色谱(LC)MS，诸如高效液相色谱(HPLC)MS，特别是HPLC-MS/MS。如本文所使用，液相色谱法是指允许在液相或超临界相中分离化合物(即代谢物)的所有技术。
对于质谱分析，样品中的分析物被电离以产生带电分子或分子碎片。然后，测量被电离的分析物、特别是被电离的生物标志物或其片段的质荷比。在电离之前，可以用蛋白酶例如用胰蛋白酶对样品进行切割。蛋白酶将蛋白质生物标志物切割成更小的碎片。
因此，质谱分析步骤优选地包括电离步骤，其中待确定的生物标志物被电离。当然，样品/洗出物中存在的其他化合物也被电离。生物标志物的电离可以通过任何认为合适的方法进行，特别是通过电子轰击电离、快原子轰击、电喷雾电离(ESI)、大气压化学电离(APCI)、基质辅助激光解吸电离(MALDI)。
在一优选的实施例中，电离步骤(对于质谱法)通过电喷雾电离(ESI)进行。因此，质谱优选地为ESI-MS(或者如果进行串联MS：ESI-MS/MS)。电喷雾为一种软电离方法，其可在不破坏任何化学键的情况下形成离子。
更典型地，另外使用第三生物标志物或用于所述第三生物标志物的至少一种检测剂，所述第三生物标志物为：
(i)如果BMP10型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为CRP或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1，
(ii)如果FGF23为第二生物标志物，则第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG
(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果BNP型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为胆固醇或ANG2，或者
(iv)如果ANG-2为第二生物标志物，则第三生物标志物为APOAT或LDL。
本发明还涉及用于评定受试者的心肌梗死的试剂盒，所述试剂盒包括：用于第一生物标志物的至少一种检测剂，所述第一生物标志物为cMyBPC；以及用于第二生物标志物的至少一种检测剂，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物。
如本文所使用，术语“试剂盒”是指上述组分的集合，通常是分开提供的或者单独或在单一容器内提供的。容器通常还包括用于进行本发明方法的说明。这些说明可以是手册的形式，或者可以由计算机程序代码提供，该计算机程序代码当在计算机或数据处理装置上实现时能够进行或支持在本发明的方法中提及的生物标志物的确定。计算机程序代码可提供于数据存储介质或装置诸如光学存储介质(例如，光盘)上或直接提供于计算机或数据处理装置上或可以以下载格式提供，诸如链接至可访问的服务器或云。此外，试剂盒通常可以包括用于校准目的的生物标志物参考量的标准品，如本文别处所详细描述。根据本发明的试剂盒还可以包括进行本发明的方法所必需的其他组分，诸如检测所释放的第二分子所需的溶剂、缓冲液、洗涤溶液和/或试剂。进一步地，其可以部分地或以其整体构成本发明的装置。
更典型地，所述试剂盒进一步包括用于第三生物标志物的至少一种检测剂，所述第三生物标志物为，
(i)如果BMP10型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为CRP或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1，或者
(ii)如果FGF23为第二生物标志物，则第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG
(甘油三酯)、LDL和HDL，
(iii)如果BNP型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为胆固醇或ANG2，
(iv)如果ANG-2为第二生物标志物，则第三生物标志物为APOAT或LDL。
应理解，上述术语的定义和解释相应地适用于本说明书和所附权利要求中描述的所有实施例。以下实施例为根据本发明设想的特定实施例：
1.一种用于评定受试者的心肌梗死的方法：
(a)确定所述受试者的样品中第一生物标志物的量，所述第一生物标志物为cMyBPC(心肌肌球蛋白结合蛋白C)；
(b)确定所述受试者的样品中第二生物标志物的量，所述第二生物标志物为诸如胆固醇或LDL(低密度脂蛋白)的脂质生物标志物、BMP10型肽(骨形态发生蛋白10型肽)、FGF23
(成纤维细胞生长因子23)、BNP型肽(脑利尿钠肽型肽)、GDF-15(生长分化因子15)、ANG2(血管生成素2)、或CRP(C反应蛋白)、ESM1(内皮细胞特异性分子1)；
(c)将所述生物标志物的量与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于所述生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及
(d)基于在步骤(c)中进行的比较和/或计算来评定心肌梗死。
2.根据实施例1所述的方法，其中在步骤(b)中
(i)如果确定BMP10型肽作为所述第二生物标志物的量，则所述方法进一步包括确定至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量或者确定CRP作为第三生物标志物的量，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1；或者
(ii)如果确定FGF23作为所述第二生物标志物的量，则所述方法进一步包括确定以下项作为第三生物标志物的量：至少一种脂质生物标志物，其选自由胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL组成的组；或者BMP10型肽、BNP型肽、CRP或ANG2，或者
(iii)如果确定BNP型肽作为所述第二生物标志物的量，则所述方法进一步包括确定胆固醇或ANG2的量，或者
(iv)如果确定ANG2作为所述第二生物标志物的量，则所述方法进一步包括确定LDL或APOAT作为第三生物标志物的量。
3.根据实施例1或2所述的方法，其中样品已从在急诊科就诊时的受试者获得。
4.根据实施例1至3中任一项所述的方法，其中所述样品为血液、血清或血浆样品。
5.根据实施例1至4中任一项所述的方法，所述受试者为人。
6.一种用于评定受试者的心肌梗死的计算机实现的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)接收针对受试者的样品中第一生物标志物的量的值，所述第一生物标志物为cMyBPC；
(b)接收针对受试者的样品中第二生物标志物的量的值，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；
(c)将针对生物标志物的量的值与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及
(d)基于在步骤(c)中进行的比较和/或计算来评定心肌梗死。
7.根据实施例6所述的方法，其中在步骤(b)中
(i)如果接收针对作为所述第二生物标志物的BMP10型肽的量的值，则所述方法进一步包括接收针对CRP或至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量的值，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)
和载脂蛋白A-1；或者
(ii)如果接收针对FGF23作为所述第二生物标志物的量的值，则所述方法进一步包括接收针对BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量的值，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果接收针对BNP型肽作为所述第二生物标志物的量的值，则所述方法进一步包括接收针对胆固醇或ANG2的量的值，或者
(iv)如果接收针对ANG2作为第二生物标志物的量的值，则该方法进一步包括接收针对APOAT或LDL作为第三生物标志物的量的值。
8.根据实施例1至7中任一项所述的方法，其中对心肌梗死的评定是1型心肌梗死和2型心肌梗死之间的区分。
9.根据实施例1至7中任一项所述的方法，其中对心肌梗死的评定是2型心肌梗死的诊断。
10.根据实施例1至7中任一项所述的方法，其中对心肌梗死的评定是心肌梗死疗法的指导。
11.一种用于评定具有心肌梗死的受试者的心肌梗死的装置，所述装置包括：
(a)测量单元，该测量单元用于确定受试者的样品中的第一生物标志物和第二生物标志物的量，该第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物，所述测量单元包括用于第一生物标志物和第二生物标志物的检测系统；以及
(b)评估单元，所述评估单元可操作地连接到所述测量单元，所述评估单元包括：数据库，所述数据库具有针对第一生物标志物和第二生物标志物的存储的参考，优选地，如实施例1至10所指定的；以及数据处理器，所述数据处理器包括指令，所述指令用于执行第一生物标志物和第二生物标志物的量与参考的比较，并且/或者用于基于生物标志物的量或基于所计算的评分执行用于评定心肌梗死的评分的计算，优选地，如实施例1至10所指定的，并且用于基于所述比较来评定心肌梗死，所述评估单元能够自动从所述测量单元接收生物标志物的量的值。
12.根据实施例11所述的装置，其中所述测量单元确定并包括用于第三生物标志物的检测系统，并且其中所述数据库包括用于第三生
物标志物的存储的参考，所述第三生物标志物为：
(i)如果BMP10型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为CRP或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1，
(ii)如果FGF23为第二生物标志物，则第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，
(iii)如果BNP型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为胆固醇或ANG2，或者
(iv)如果ANG2为第二生物标志物，则第三生物标志物为APOAT或LDL。
13.根据实施例11或12的装置，其中所述检测系统包括用于所述第一生物标志物的至少一种检测剂、用于所述第二生物标志物的至少一种检测剂、和任选地用于所述第三生物标志物的至少一种检测剂。
14.一种用于评定受试者的心肌梗死的装置，所述装置包括：评估单元，所述评估单元包括数据库，所述数据库具有针对第一生物标志物和第二生物标志物的存储的参考，所述第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；以及数据处理器，所述数据处理器包括指令，所述指令用于执行第一生物标志物和第二生物标志物的量与参考的比较，优选地，如实施例1至10中任一项所指定的，并且用于基于所述比较来评定心肌梗死，所述评估单元能够接收针对在所述受试者的样品中确定的生物标志物的量的值。
15.根据实施例14所述的装置，其中所述数据库包括第三生物标志物的存储的参考，所述第三生物标志物
(i)如果BMP10型肽为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为CRP或至少一种脂质生物标志物，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)
和载脂蛋白A-1；
(ii)如果FGF23为第二生物标志物，则第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果BNP型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为胆固醇或ANG2，或者
(iv)如果ANG2为第二生物标志物，则第三生物标志物为APOAT或LDL。
16.以下项的用于评定受试者的心肌梗死的用途：i)第一生物标志物和第二生物标志物，所述第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；或者ii)针对所述第一生物标志物的至少一种检测剂，针对所述第二生物标志物的至少一种检测剂。
17.根据实施例16所述的用途，其中另外使用第三生物标志物或用于第三生物标志物的检测剂，所述第三生物标志物为：
(i)如果BMP10型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为CRP或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1，
(ii)如果FGF23为第二生物标志物，则第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，
(iii)如果BNP型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为胆固醇或ANG2，或者
(iv)如果ANG2为第二生物标志物，则第三生物标志物为APOAT或LDL。
18.一种用于评定受试者的心肌梗死的试剂盒，所述试剂盒包括：针对第一生物标志物的至少一种检测剂和针对第二生物标志物的至少一种检测剂，所述第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物。
19.根据实施例18所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包括用于第三生物标志物的检测剂，所述第三生物标志物为，
(i)如果BMP10型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为CRP或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1，或者
(ii)如果FGF23为第二生物标志物，则第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，该至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果BNP型肽为第二生物标志物，则第三生物标志物为胆固醇或ANG2，
(iv)如果ANG2为第二生物标志物，则第三生物标志物为APOAT或LDL。
20.根据前述实施例中任一项所述的方法、装置、用途或试剂盒，其中，例如对于患有糖尿病的受试者，
a)所述第二标志物为胆固醇，
b)所述第二标志物为BMP-10型肽，
c)所述第二标志物为FGF23，
d)所述第二标志物为ANG2，
e)所述第二标志物为BMP10型肽，并且所述第三标志物为选自由以下项组成的组的至少一种脂质生物标志物：胆固醇、TAG、LDL、APOAT和HDL，
f)所述第二标志物为BMP10型肽，并且所述第三标志物为
CRP，
g)所述第二标志物为FGF23，并且所述第三标志物为选自由以下项组成的组的至少一种脂质生物标志物：胆固醇、TAG、LDL和HDL，
h)所述第二标志物为FGF23，并且所述第三标志物为CRP，或者
i)所述第二标志物为ANG2，并且所述第三标志物为LDL。
21根据前述实施例中任一项所述的方法、装置、用途或试剂盒，其中所述BMP10型肽为BMP10、proBMP10或NT-proBMP10。
22.根据前述实施例中任一项所述的方法、装置、用途或试剂盒，其中所述BNP型肽为NT-proBNP、proBNP或BNP。
本说明书通篇引用的所有参考文献均就上文具体提及的公开内容并且以其整体并入本文。
实例
实例应仅说明本发明。它们不得被解释为限制本发明的范围。
1.生物标志物的确定
1.1.在cobasECLIA平台上通过夹心测定确定生物标志物(ECLIA测定来自德国罗氏诊断公司)
下面简要介绍了用于确定GDF-15的电化学发光(ECL)技术和测定方法。GDF-15的浓度通过cobas e801分析仪确定。用cobas e801分析仪检测GDF-15是基于电化学发光(ECL)技术。简而言之，生物素标记和钌标记的抗体与相应量的未稀释样品结合，并在分析仪上温育。随后，在仪器上添加涂有链霉亲和素的磁性微粒并温育，以便促进生物素标记的免疫复合物的结合。在该温育步骤之后，将反应混合物转移到测量池中，在测量池中，磁珠被磁性捕获在电极的表面上。然后将含有用于后续ECL反应的三丙胺(TPA)的ProCell M缓冲液引入到测量池中，以便将结合的免疫测定复合物与游离的剩余颗粒分离。工作电极和对电极之间的电压感应然后引发反应，引致钌复合物以及TPA发射光子。所得的电化学发光信号由光电倍增管记录并转换为指示相应分析物的浓度水平的数值。
使用夹心免疫测定测量EDTA血浆样品中的cTNThs(高敏心肌肌钙蛋白T)、NTpBNP(脑利尿钠肽的N端激素原)、GDF15(生长/分化因子15)、cMyBPC(心肌肌球蛋白结合蛋白C)、BMP10(骨形态发生蛋白10型肽)、FGF23(成纤维细胞生长因子23)、ANG2(血管生成素2)和ESM-1(内皮细胞特异性分子1)。
cTNThs(高敏心肌肌钙蛋白T)、NTpBNP(脑利尿钠肽的N端激素原)和GDF15(生长/分化因子15)使用商业ECLIA测定测量，这些商业ECLIA测定根据cobas ECLIA免疫测定平台(Roche Diagnostics,Germany)上的制造商说明在EDTA血浆样品中开发用于cobas ECLIA平台(来自Roche Diagnostics,Germany的ECLIA测定)。
使用以下测定：
cTNThs：(肌钙蛋白T hs Elecsys G5)，电化学发光免疫确定。
NTproBNP:(proBNP-II Elecsys)，电化学发光免疫确定。
GDF15：(GDF-15Elecsys)，电化学发光免疫确定。
使用强大的原型ECLIA测定测量cMyBPC(心肌肌球蛋白结合蛋白C)、BMP10(骨形态发生蛋白10型肽)、FGF23(成纤维细胞生长因子23)、ANG2(血管生成素2)和ESM-1(内皮细胞特异性分子1)。这些夹心免疫测定是为cobas ECLIA平台(德国罗氏诊断公司的ECLIA测定)内部开发的。该试验包括生物素化和钌酰化的单克隆抗体，该生物素化和钌酰化的单克隆抗体与EDTA血浆样品中的分析物特异性结合，并在cobas ECLIA免疫确定平台分析仪(德国罗氏诊断公司)上进行测量。例如，对使用与NT-proBMP10结合的抗体的BMP10使用试验。因此，该试验检测NT-proBMP10和包括NT-proBMP10序列的BMP10型肽。
1.2.在临床化学分析仪平台(德国罗氏诊断公司)上确定生物标志物
根据临床化学分析仪平台cobas c 501(Roche Diagnostics,Germany)上的制造商说明，通过使用商业测定(Roche Diagnostics,Germany)在EDTA血浆样品中测量CRPhs(高敏感C反应蛋白)、CysC2(血清胱抑素C)和脂质生物标志物CHOL(胆固醇)、TRIGL(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和APOAT(载脂蛋白A-1)。
使用以下测定：
CRPhs：(分类号04628918 190Cardiac-C反应蛋白(乳胶)hs)，颗粒增强比浊免疫法试验
APOAT：(分类号03032566载脂蛋白A-1ver 2)，比浊免疫法试验
CHOL：(分类号03039773胆固醇Gen.2)，酶比色试验
HDL：(分类号07528566HDL-C Gen)，均相酶比色试验
LDL：(分类号07005717LDL-C Gen3)，均相酶比色试验
TRIGL：(分类号20767107甘油三酯)，酶比色试验
2.患者队列，APACE研究
急性冠状动脉综合征评估(APACE)研究的有利预测因素描述于Nestelberger等人JAMACardiol.2021；6(7):771-780.doi:10.1001/jamacardio.2021.0669。简而言之，该研究是一项国际多中心前瞻性队列研究，该项研究招募在过去12小时内因静息时出现急性胸痛而前往急诊科(ED)就诊并在ClinicalTrials.gov上注册(标识符：NCT00470587)的未经选择的患者入组。急性心肌梗死(AMI)的诊断是使用所有临床信息(包括心脏成像和高敏感肌钙蛋白的连续测量)根据临床参考标准(最终诊断)对连续入组的患者进行的，由2名独立心脏病专家根据AMI的通用定义(Thygesen K等人,Eur Heart J.2019；40:226)进行集中裁决。
当心肌坏死的证据与和心肌缺血一致的临床环境有关联时，即可诊断出AMI。心肌坏死是通过至少一个hs-cTnT/I值高于第99个百分位以及显著上升和/或下降来诊断的。高敏肌钙蛋白T和I(hs-cTnT/I)的绝对变化用于根据绝对变化相对于相对变化的诊断优势来确定显著变化。所有其他患者均被分类为不稳定型心绞痛、非心源性胸痛、心脏但非冠状动脉疾病(例如，心肌炎、takotsubo综合征、心力衰竭)以及hs-cTnT/I水平正常但来源不明的症状。
1型心肌梗死和2型心肌梗死的定义：
1型AMI(T1MI)和2型AMI(T2MI)根据AMI的通用定义(第4版,Thygesen K等人,EurHeart J.2019；40:226)进行定义。简而言之，两种诊断(T1 AMI和T2 AMI)都需要急性心肌缺血的临床证据，诸如心肌肌钙蛋白的变化，但T1MI诊断需要动脉粥样硬化血栓形成起源，而T2MI诊断需要非动脉粥样硬化血栓形成起源。更详细地说，临床环境中心肌坏死的证据与急性心肌缺血一致，1型MI被定义为与原发性动脉粥样硬化血栓形成冠状动脉事件(诸如斑块侵蚀或破裂、腔内冠状动脉血栓或远端微栓塞)相关的自发性MI。2型MI被定义为由于氧气供需不匹配而发生的继发性MI。反映心肌氧供需失衡的病症包括缓慢心律失常或快速心律失常、低氧血症、低血压、高血压、严重贫血、冠状动脉痉挛、夹层和冠状动脉栓塞。潜在的冠状动脉疾病是可能的，但不是诊断T2MI所必需的。为了符合T2MI的诊断标准，hs-cTnT/I的动态变化需要与T1MI的相同。根据建议，针对明显触发的记录对于T2MI的诊断至关重要。冠状动脉造影对于T1MI的诊断不是强制性的，以限制由于临床转诊冠状动脉造影而导致的选择偏倚的可能影响。没有报告其他MI子类型。
实例1：APACE研究中的AMI患者
在APACE研究的总共4216名患者中，N＝874名患者被诊断为AMI(20.7％)。其中，708名患者被诊断为1型MI(564名患者为非ST段抬高型AMI，144名患者为ST段抬高型心肌梗死)，166名患者被诊断为2型MI(164名患者为非ST段抬高型心肌梗死，2名患者为ST段抬高型心肌梗死)。
·病例(N＝166)：因氧气需求增加或供应减少而继发缺血的2型MI患者。其中，58名患者为女性，108名患者为男性。
·对照(N＝708)：1型MI自发性MI患者与因原发性冠状动脉事件(诸如斑块侵蚀和/或破裂、裂隙或夹层)引起的缺血有关。其中，191名患者为女性，517名患者为男性。
将标志物值转换为以2为底数的对数，并通过逻辑回归进行数学组合。“接收者操作特征曲线下面积”(AUC)被用作标志物性能的一般衡量标准。
1型心肌梗死或2型心肌梗死中的生物标志物有不同程度的升高
表1：1型MI患者和2型MI患者中出现的生物标志物的单变量的AUC及它们的平均动态(升高或降低)
表2显示了与单一标志物cMyBPC相比AUC提高的标志物对(双变量标志物组合)和标志物三联体(三变量标志物组合)的组合。表3显示了与单一标志物cMyBPC相比AUC没有提高的标志物对(双变量标志物组合)和标志物三联体(三变量标志物组合)的组合。
表2：cMyBPC(AUC)的单变量性能，考虑了所有患者亚组以及与单一标志物cMyBPC相比具有提高的AUC的cMyBPC与第二标志物(双变量标志物组合)和第三标志物(三变量标志物组合)的组合，其中AUC至少提高2.0(AUC提高)。
表2总结了APACE研究的患者中单一生物标志物cMyBPC与包括cMyBPC在内的标志物组合的性能。
表2中显示的结果显示了在评定T1MI与T2MI时使用生物标志物组合的增量值。
有趣的是，与单一标志物cMyBPC相比，cMyBPC与选自指示血管改变的多种生物标志物(包含BMP10、FGF23、NTproBNP、tNTproBNP、GDF15、ANG2、胆固醇(CHOL)或ESM1)的第二生物标志物的组合的性能有所提高，AUC变化(Δ)高于2(分别为4.922、4.920、4.375、3.853、3.574、3.119、3.073或2.357)。
包括第三生物标志物的cMyBPC的标志物组合甚至将性能提高为AUC变化(Δ)高达6.8。
选择BMP-10、FGF-23或BNP型蛋白(NTproBNP或tNTproBNP)作为第二生物标志物在1型MI与2型MI的诊断评估中特别有用，观察到的与cMyBPC相比的AUC变化(Δ)分别为4.922、4.920或(4.375或3.853)。
从上述数据得出的结论是，添加第三生物标志物进一步改善了1型MI与2型MI的评定(与单一生物标志物cMyBPC相比，AUC变化(Δ)高达6.8)。
令人惊讶的发现涉及选择作为第三生物标志物的脂质生物标志物对cMyBPC和BMP10的标志物组合的有益作用(例如，CHOL、LDL、TRIGL、HDL或APOAT)。
如上表所示，除了BMP10和cMyBPC的组合之外，选择CHOL、LDL、TRIGL、CRPhs、APOAT、ANG2或HDL与单一标志物cMyBPC相比产生了进一步有意义的提高，AUC变化(Δ)为6.838、6.239、5.762、5.657、5.258、5.212或4.880(AUC 70.754分别为AUC 77.592、76.993、76.516、76.411、76.012、75.966或75.634)。
令人惊讶的发现涉及选择作为第三生物标志物的脂质生物标志物对cMyBPC和FGF23的标志物组合的有益作用(例如CHOL、LDL或HDL)。
如上表所示，除了FGF23和cMyBPC的组合之外，选择BMP10、NTproBNP、tNTproBNP、
CHOL、HDL、LDL、CRPhs或ANG2与单一标志物cMyBPC相比产生了进一步有意义的提高(AUC变化(Δ)为6.415、6.181、5.688、6.012、5.536、5.489、5.297或5.257；AUC 70.754分别为AUC 77.169、76.935、76.442、76.766、76.290、76.243、76.051或76.011)。
接下来，选择cMyBPC作为第一生物标志物，NTproBNP作为第二生物标志物，并且Chol或ANG2作为第三生物标志物，与单一标志物cMyBPC相比，产生提高的性能(AUC 70.754分别为76.314或75.516)。
总之，通过向cMyBPC中添加选自BMP10、FGF23或BNP型标志物的至少第二生物标志物，有利于改善1型MI与2型MI的评定。使用选自脂质标志物(例如CHOL、LDL、TRIGL、APOAT或HDL)或ANG2或hsCRP的第三生物标志物可以实现甚至提高更多的性能。
特别有趣的是，上述数据为包含cMyBPC和BMP10或cMyBPC和FGF23的组中脂质参数对评定1型MI与2型MI的有益影响提供了有力的证据。
表3：cMyBPC(AUC)的单变量性能，考虑了所有患者亚组以及与单一生物标志物cMyBPC相比不具有至少2.0的提高的AUC(AUC提高)的cMyBPC与第二标志物(双变量标志物组合)和第三标志物(三变量标志物组合)的组合。
如表3所示，在评定1型MI与2型MI时，几种生物标志物组合相对于单一标志物cMyBPC没有提高AUC值。
实例2：cMyBPC和BMP10组合的使用实例
以下实例展示了在实践中如何从分别患有1型MI的患者和患有2型MI的患者测量的生物标志物浓度获得评分。
令cMyBPC1型和BMP101型表示从分别测量1型AMI患者的cMyBPC和BMP10的测定中获得的浓度。令cMyBPC2型cMyBPC型2表示从分别测量2型AMI患者的cMyBPC和BMP10的测定中获得的浓度。令β0表示偏移量，并且βcMyBPC和βBMP10表示用于组合所获得的浓度的数学模型的加权因子(系数)。
进一步地，令α表示预定的截止值，该预定的截止值可以最佳地分离1型患者和2型AMI患者。
表示为评分1型型AMI患者的测量生物标志物浓度评分通过计算
评分1型＝β0+βcMyBPC log2(cMyBPC1型)+βBMP10 log2(BMP101型)。
这里，log2()表示以2为底数的对数函数。
表示为评分1型型AMI患者的测量生物标志物浓度评分通过计算
评分2型＝β0+βcMyBPC log2(cMyBPC2型)+βBMP10 log2(BMP102型)。
如果获得的评分大于预定的截止值α，则表明患者患有2型AMI。如果获得的评分小于预定的截止值α，则表明患者患有1型AMI。
实例3：APACE研究中的糖尿病患者
·病例(N＝166)：因氧气需求增加或供应减少而继发缺血的2型MI患者。其中，37名患者有糖尿病史，129名患者没有糖尿病史。
·对照(N＝708)：1型MI自发性MI患者与因原发性冠状动脉事件(诸如斑块侵蚀和/或破裂、裂隙或夹层)引起的缺血有关。其中，196名患者有糖尿病史，512名患者没有糖尿病史。
表4：有糖尿病史或无糖尿病史的1型MI患者和有糖尿病史或无糖尿病史的2型MI患者
表5：cMyBPC(AUC)的单变量性能，考虑了所有具有糖尿病史的患者以及cMyBPC与第二标志物(双变量标志物组合)和第三标志物(三变量标志物组合)的组合。与无糖尿病史的患者相比，有糖尿病史的患者的所有双变量和三变量组合的AUC至少提高3.0。针对组合中使用的标志物，报告了两个亚组中与cMyBPC的单变量性能相比，AUC至少有3.0提高的所有双变量和三变量组合，以供参考。
表5提供了有糖尿病史的患者与无糖尿病史的患者的标志物组合的性能。表5显示了cMyBPC与多种生物标志物组的组合的性能提高。特别有趣的是，提高cMyBPC性能的生物标志物组都包含ANG2。在糖尿病患者中，cMyBPC和ANG2的生物标志物组显示了与cMyBPC相比的提高，其中有意义的AUC变化(Δ)为在糖尿病患者亚组中，向cMyBPC和ANG2中添加第三生物标志物LDL产生了与cMyBPC相比进一步的提高，其中AUC变化(Δ)为
从这些结果得出结论是，在糖尿病患者亚组中使用cMyBPC与第二生物标志物ANG2的生物标志物组合是有益的。
表6：cMyBPC(AUC)的单变量性能，考虑了所有具有糖尿病史的患者以及cMyBPC与第二标志物(双变量标志物组合)和第三标志物(三变量标志物组合)的组合。与无糖尿病史的患者相比，有糖尿病史的患者的所有双变量和三变量组合的AUC都没有至少3.0的提高。对于组合使用的标志物，报告两个亚组中的单变量表现，以供参考。

Claims (16)

1.一种用于评定受试者的心肌梗死的方法：
(a)确定所述受试者的样品中第一生物标志物的量，所述第一生物标志物为cMyBPC(心肌肌球蛋白结合蛋白C)；
(b)确定所述受试者的样品中第二生物标志物的量，所述第二生物标志物为诸如胆固醇或LDL(低密度脂蛋白)的脂质生物标志物、BMP10型肽(骨形态发生蛋白10型肽)、FGF23(成纤维细胞生长因子23)、BNP型肽(脑利尿钠肽型肽)、GDF-15(生长分化因子15)、ANG2(血管生成素2)、或CRP(C反应蛋白)、ESM1(内皮细胞特异性分子1)；
(c)将所述生物标志物的量与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于所述生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及
(d)基于在步骤(c)中进行的比较和/或计算来评定心肌梗死。
2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(b)中
(i)如果确定BMP10型肽作为所述第二生物标志物的量，则所述方法进一步包括确定至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量或者确定CRP或ANG2作为第三生物标志物的量，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1；或者
(ii)如果确定FGF23作为所述第二生物标志物的量，则所述方法进一步包括确定以下项作为第三生物标志物的量：至少一种脂质生物标志物，其选自由胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL组成的组；或者BMP10型肽、BNP型肽、CRP或ANG2，或者
(iii)如果确定BNP型肽作为所述第二生物标志物的量，则所述方法进一步包括确定胆固醇或ANG2的量，或者
(iv)如果确定ANG2作为所述第二生物标志物的量，则所述方法进一步包括确定LDL或APOAT作为第三生物标志物的量。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述样品已从在急诊科就诊时的受试者获得。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述样品为血液样品、血清样品或血浆样品。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，所述受试者为人。
6.一种用于评定受试者的心肌梗死的计算机实现的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)接收针对所述受试者的样品中第一生物标志物的量的值，所述第一生物标志物为cMyBPC；
(b)接收针对所述受试者的样品中第二生物标志物的量的值，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；
(c)将针对所述生物标志物的量的值与针对所述生物标志物的参考进行比较，并且/或者基于所述生物标志物的量来计算用于评定心肌梗死的评分；以及
(d)基于在步骤(c)中进行的比较和/或计算来评定心肌梗死。
7.根据权利要求6所述的方法，其中在步骤(b)中
(i)如果接收针对BMP10型肽作为所述第二生物标志物的量的值，则所述方法进一步包括接收针对CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量的值，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1；或者
(ii)如果接收针对FGF23作为所述第二生物标志物的量的值，则所述方法进一步包括接收针对BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物作为第三生物标志物的量的值，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果接收针对BNP型肽作为所述第二生物标志物的量的值，则所述方法进一步包括接收针对胆固醇或ANG2的量的值，或者(iv)如果接收针对ANG2作为所述第二生物标志物的量的值，则所述方法进一步包括接收针对APOAT或LDL作为第三生物标志物的量的值。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中心肌梗死的评定是1型心肌梗死与2型心肌梗死之间的区分。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中心肌梗死的评定是2型心肌梗死的诊断，或者其中心肌梗死的评定是心肌梗死疗法的指导。
10.一种用于评定受试者的心肌梗死的装置，所述装置包括评估单元，所述评估单元包括：数据库，所述数据库具有针对第一生物标志物和第二生物标志物的存储的参考，所述第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；以及数据处理器，所述数据处理器包括指令，所述指令用于执行所述第一生物标志物和所述第二生物标志物的量与参考的比较，优选地如权利要求1至9中任一项所述，并且用于基于所述比较来评定心肌梗死，所述评估单元能够接收针对在所述受试者的样品中确定的所述生物标志物的量的值，
其中任选地，所述数据库包括针对第三生物标志物的存储的参考，
(i)如果BMP10型肽为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1；
(ii)如果FGF23为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：
胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果BNP型肽为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为胆固醇或ANG2，或者
(iv)如果ANG2为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为APOAT或LDL。
11.以下项的用于评定受试者的心肌梗死的用途：i)第一生物标志物和第二生物标志物，所述第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物；或ii)针对所述第一生物标志物的至少一种检测剂，针对所述第二生物标志物的至少一种检测剂。
12.根据权利要求11所述的用途，其中另外使用第三生物标志物或针对第三生物标志物的检测剂，
(i)如果BMP10型肽为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1，
(ii)如果FGF23为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：
胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，
(iii)如果BNP型肽为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为胆固醇或ANG2，或者
(iv)如果ANG2为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为APOAT或LDL。
13.一种用于评定受试者的心肌梗死的试剂盒，所述试剂盒包括针对第一生物标志物的至少一种检测剂和针对第二生物标志物的至少一种检测剂，所述第一生物标志物为cMyBPC，所述第二生物标志物为BMP10型肽、FGF23、BNP型肽、GDF15、ANG2、CRP(C反应蛋白)、ESM1或诸如胆固醇或LDL的脂质生物标志物，
其中任选地，所述试剂盒进一步包括针对第三生物标志物的检测剂，
(i)如果BMP10型肽为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白)、HDL(高密度脂蛋白)和载脂蛋白A-1，或者
(ii)如果FGF23为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为BMP10型肽、BNP型肽、CRP、ANG2或至少一种脂质生物标志物，所述至少一种脂质生物标志物选自由以下项组成的组：
胆固醇、TAG(甘油三酯)、LDL和HDL，或者
(iii)如果BNP型肽为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为胆固醇或ANG2，
(iv)如果ANG2为所述第二生物标志物，则所述第三生物标志物为APOAT或LDL。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法、装置、用途或试剂盒，其中，例如对于患有糖尿病的受试者，
a)第二标志物为胆固醇，
b)所述第二标志物为BMP-10型肽，
c)所述第二标志物为FGF23，
d)所述第二标志物为ANG2，
e)所述第二标志物为BMP10型肽，并且第三标志物为选自由以下项组成的组的至少一种脂质生物标志物：胆固醇、TAG、LDL、APOAT和HDL，
f)所述第二标志物为BMP10型肽，并且所述第三标志物为CRP，
g)所述第二标志物为FGF23，并且所述第三标志物为选自由以下项组成的组的至少一种脂质生物标志物：胆固醇、TAG、LDL和HDL，
h)所述第二标志物为FGF23，并且所述第三标志物为CRP，或者i)所述第二标志物为ANG2，并且所述第三标志物为LDL。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法、装置、用途或试剂盒，其中所述BMP10型肽为BMP10、proBMP10或NT-proBMP10，并且/或者其中所述BNP型肽为NT-proBNP、proBNP或BNP。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的试剂盒，其中所述检测剂为特异性地结合所述生物标志物的抗体或其抗原结合片段。
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