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CN118845772A - 一种黄连素维生素c盐组合物、制备方法及其应用 - Google Patents

一种黄连素维生素c盐组合物、制备方法及其应用 Download PDF

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CN118845772A
CN118845772A CN202410398599.2A CN202410398599A CN118845772A CN 118845772 A CN118845772 A CN 118845772A CN 202410398599 A CN202410398599 A CN 202410398599A CN 118845772 A CN118845772 A CN 118845772A
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acid
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CN202410398599.2A
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张洪涛
许瑶
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Hangzhou Juweiye Biopharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Hangzhou Juweiye Biopharmaceutical Co ltd
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Abstract

本发明公开了一种黄连素维生素C盐组合物，包括黄连素维生素C盐，以及凝胶剂基底成分、pH调节剂、保湿剂、螯合剂、乳化剂、促渗剂、溶剂中的一种或多种。本发明还提供了该组合物的应用。本发明的组合物具有降低血糖、血脂、血压，以及降体重、降体脂的作用，用于体外涂覆时，可有效降低体重，同时于脂肪处有效富集，并可直接作用于腹部脂肪细胞，使脂肪细胞体积减小，发生白色脂肪褐色变化；用于口服时，同样可有效降低体重、体脂、血脂。

Description

一种黄连素维生素C盐组合物、制备方法及其应用
技术领域
本发明属于药物研究技术领域，具体是涉及一种黄连素维生素C盐组合物、制备方法及其应用。
背景技术
小檗碱，亦称黄连素，是从中药黄连中分离的一种季铵生物碱，是黄连抗菌的主要有效成分。1826年M.-E.夏瓦利埃和G.佩尔坦从Xanthoxylonclava树皮中首次获得。
近年来的药理研究发现，小檗碱盐酸盐除用于抗菌和消炎外，还具有改善心血管疾病和降血糖、降血脂等多种药理活性。但由于小檗碱结构上为强极性季铵碱，难以穿透肠道的亲酯脂性的屏障，加上其盐酸盐的水溶性很小，导致口服后在人体内吸收很差[余琛、张慧、潘俊芳等，健康志愿者口服盐酸小檗碱后尿液中代谢产物的检测和初步研究，中国临床药理学杂志，2000：(16)36-39。]。
专利文献CN 101323613 A公开了一种小檗碱加成物，该小檗碱的加成物作为前体药物提高了小檗碱药物在体内的血药浓度，从而提高小檗碱生物利用度。
专利文献US20220185807A1公开了一种黄连素抗坏血酸盐(名称：9，10-二甲氧基-5，6-二氢-[1，3]二氧杂环己烷[4，5-克]异喹啉[3，2-a]异喹啉-7-鎓.(R)-2-((S)-1，2二羟基乙基)-4-羟基-5-氧代-2，5-二氢呋喃-3-醇酯，分子量：367.14)，结构如下：
但该文献对该盐的进一步应用没有进一步描述。
发明内容
本发明提供一种黄连素维生素C盐组合物，制剂，制备方法和应用。
一种黄连素维生素C盐组合物，包括黄连素维生素C盐，以及凝胶剂基底成分、pH调节剂、保湿剂、螯合剂、乳化剂、促渗剂、溶剂和其他添加剂中的一种或多种。
一种黄连素维生素C盐组合物，包括：黄连素维生素C盐、保湿剂、乳化剂和其他添加剂。
作为一种实施方案，所述黄连素维生素C盐组合物按照重量百分比计，包括：
上述组合物可以制备凝胶剂。
另外一种可实施的方案，一种黄连素维生素C盐组合物，按照重量百分比计，包括：
上述组合物可以用于制备乳液制剂等。
其特征在于，按照重量百分比计，包括：
另外一种可实施的方案，一种黄连素维生素C盐组合物，按照重量百分比计：
上述组合物可以用于制备贴剂等。
所述黄连素维生素C盐为组合物的有效成分。作为优选，所述黄连素维生素C盐的重量百分比为5～20％。进一步的，所述黄连素维生素C盐的重量百分比为10～20％。
凝胶剂基底成分具有生物降解性、生物相容性、无毒性、抑菌、抗癌、降脂、增强免疫等多种生理功能。作为一种实施方式，所述凝胶剂基底成分选自壳聚糖、甲壳素、甲壳素衍生物、几丁糖、普鲁兰多糖、阿拉伯胶等其他高分子天然活性多糖中的一种或多种。作为进一步优选，所述凝胶剂为壳聚糖。作为优选，所述凝胶剂基底成分的重量百分比含量为0.5～5％；进一步为1～5％。更进一步为2～5％。
所述pH调节剂选自乳酸、柠檬酸、柠檬酸钠、琥珀酸、琥珀酸二钠、丙酸、丁酸、壬二酸等其他有机酸调节剂中的一种或多种。作为优选，所述pH调节剂的重量百分比含量为0.1～8％；更进一步，所述pH调节剂的重量百分比含量为0.5～8％；更进一步，所述pH调节剂的重量百分比含量为1～8％；再进一步，所述pH调节剂的重量百分比含量为2～8％。
所述保湿剂选自乳酸、甘油、透明质酸、尿素、鸸鹋油、麦卢卡油、橄榄油、甘氨酸、棕榈酸异丙酯等其他常见保湿剂中的一种或多种。作为优选，所述保湿剂的重量百分比含量为0.1～5％；更进一步，所述保湿剂的重量百分比含量为0.5～5％；更进一步，所述保湿剂的重量百分比含量为1～5％；再进一步，所述保湿剂的重量百分比含量为2～5％。作为具体的实施方案，当制备凝胶剂时，所述保湿剂选自乳酸、以及与甘油、透明质酸、尿素中的一种或多种。当制备乳液剂时，所述保湿剂选自鸸鹋油、麦卢卡油、橄榄油、棕榈酸异丙酯、甘氨酸中的一种或多种。
在某些情况下，所述pH调节剂和所述保湿剂可以选择同一种物质，即该物质，既可以实现对组合物pH的调整，有同时具有保湿的作用，此时，所述pH调节剂和所述保湿剂加入总量为0.1～8％(wt)；进一步为1～8％。
所述螯合剂起稳定作用，协同防腐、抗氧化作用。作为优选，所述螯合剂选自乙二胺四乙酸、三磷酸钠、六偏磷酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、三乙醇胺、二乙醇胺、聚丙烯酸钠盐等其他常见螯合剂中的一种或多种。作为优选，所述螯合剂的重量百分比含量为0.5-5％；作为进一步优选，所述螯合剂的重量百分比含量为0.5-4％；进一步的所述螯合剂的重量百分比含量为0.5-3％。
作为优选，所述乳化剂选自Tween 80、硬脂醇聚醚-6、甘油硬脂酸酯、二十二醇、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、花生醇、丙烯酸羟乙酯、甘油、山梨糖酸、聚山梨酯20等常见乳化剂中的一种或多种。作为优选，所述乳化剂的重量百分比含量为0.1-5％；进一步为1～5％。作为具体的实施方案，制备凝胶剂时，优选的乳化剂选自Tween 80、硬脂醇聚醚-6、甘油硬脂酸酯、二十二醇、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、花生醇、丙烯酸羟乙酯、甘油中的一种或多种；制备乳液剂时，所述优选的乳化剂选自山梨糖酸、聚山梨酯20中的一种或者两种的混合。
作为优选，所述促渗剂选自月桂氮酮、环己六醇、异山梨醇二甲醚、四氢胡椒碱、N-正烷基苯并异噻酮唑酮、丙二醇、尿素、乙醇、苯扎氯铵、聚山梨酯80等常见促渗剂中的一种或多种。作为优选，所述促渗剂的重量百分比为0.1-5％。
在某些场合下，所述乳化剂或所述促渗剂中某些组份，既可以起到乳化作用，同时也可以起到促渗作用，具有多种综合性效能。
作为优选，所述溶剂为水、乙醇、甘油中的一种或多种。同样的，某些溶剂，在作为溶剂的同时，也可以做到保湿、促渗、乳化、pH调节等作用。
作为优选，所述其他添加剂包括防腐剂、抗氧化剂、增溶剂、增稠剂、着色剂、粘合剂中的一种或多种。所述防腐剂包括丙二醇、苯甲酸、山梨酸、尼泊金酯类、脱氢乙酸和其对应的盐类等。所述抗氧化剂包括磷脂络合类黄酮(卵磷脂)、含黄酮类提取物(芍药叶提取物或金盏花提取物)或者维生素C、羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠中的一种或多种。所述增溶剂选自菊粉月桂基氨基甲酸酯等；所述增稠剂包括甘油等。制备乳液剂时，所述其他添加剂包括防腐剂、抗氧化剂、增溶剂、增稠剂。进一步，所述防腐剂的重量百分比为0.3～5％；进一步为0.5～5％；更进一步为0.8～4％。进一步，所述抗氧化剂的重量百分比为1～15％。所述增溶剂或增稠剂的重量百分比为1～8％。
一种制剂，由上述任一项技术方案所述组合物制备得到。
作为优选，所述制剂为外涂膏剂。
进一步的，为外涂凝胶剂、乳液剂、或膏剂等。更进一步，可以用于人体皮肤外涂膏剂或凝胶剂、乳液剂。比如可以是人体脂肪堆积较为明显的腹部，腰部，背部，臀部，四肢皮肤等。
作为优选，所述制剂为内服水溶剂、膏剂、片剂、粉剂、胶囊剂等。
一种所述凝胶剂的制备方法，包括：将凝胶剂基底成分溶于溶剂中，加入螯合剂、乳化剂或促渗剂，再将黄连素维生素C盐、pH调节剂或保湿剂，加入剩余溶剂，搅拌，得到所述制剂。
一种上述任一项技术方案所述组合物在制备治疗或改善心血管疾病和降血糖、降血脂、降体重、降体脂中的一种或多种的药物中的应用。
一种上述任一项技术方案所述组合物在制备治疗或改善心血管疾病药物、降血糖药物、降血脂药物、降体重药物、降体脂药物中的应用。
一种上述任一项技术方案所述组合物在治疗或者改善心血管疾病、降血糖、降体重、降体脂中的应用。
上述组合物使用时，可以通过外涂、外部贴剂、内服的方式使用。
用于动物治疗或改善上述症状(改善心血管疾病和降血糖、降血脂、降体重、降体脂)时，外用(涂覆或者贴剂等)时，给药剂量可以为100mg/kg以上，进一步的，给药剂量为10mg/kg～1000mg/kg。口服时，给药剂量为50mg/kg/天以上，进一步的口服给药剂量为50mg/kg～500mg/kg/天。
用于人治疗或改善上述症状(改善心血管疾病和降血糖、降血脂、降体重、降体脂)时，外用(涂覆或者贴剂等)时，给药剂量可以为3mg/kg以上，进一步的，给药剂量为1mg/kg～30mg/kg。口服时，给药剂量为3mg/kg/天以上，进一步的口服给药剂量为1mg/kg～30mg/kg/天。
本发明的组合物具有降低血糖、血脂、血压，用于体外涂覆时，于脂肪处有效富集，减小脂肪体积。
本发明的组合物具有降低血糖、血脂、血压，以及降体重、降体脂的作用，用于体外涂覆时，可有效降低体重，同时于脂肪处有效富集，并可直接作用于腹部脂肪细胞，使脂肪细胞体积减小，发生白色脂肪褐色变化；用于口服时，同样可有效降低体重、体脂、血脂。
一种黄连素维生素C盐的应用，用于制备改善人或动物心血管疾病、降血糖、降血脂药物、降体重药物、降体脂药物中的应用。
一种黄连素维生素C盐属于单晶，空间群为P21(no.4)，晶胞参数为α＝90°,β＝94.3(3)°,γ＝90°，最小不对称单元中包含两种目标分子各2个，且相同分子空间构象不同，互相不具有对称性关系，每个晶胞中有两种目标分子各4个。
同时，实验结果表明，高脂模型小鼠在口服给药黄连素新盐的条件下，黄连素新盐可以帮助小鼠抵抗高脂饮食诱导的体重增长，有效降低体重，同时降低体脂，并且黄连素新盐从脂肪细胞水平直接参与肥胖发生的能量代谢，促使白色脂肪细胞体积变小。
另外，实验表明，肥胖猫在口服给药黄连素新盐的条件下，黄连素新盐可以降低肥胖猫的体重，且有一定剂量依赖性，高剂量的效果更加明显；同时，口服黄连素新盐能够有效降低肥胖猫的血脂。
附图说明
图1SD大鼠腹部给予200mg/kg小檗碱新盐后血浆平均药时曲线图。
图2小檗碱新盐后组织药物浓度平均柱状图。
图3小鼠给药后腹部脂肪示意图。
图4小鼠给药后腹部脂肪细胞病理染色示意图(比例尺寸均为50μm)。
图5高脂模型小鼠腹部给药后体重变化曲线图。
图6高脂模型小鼠口服给药后体重变化曲线图。
图7高脂模型小鼠口服给药后核磁检测体脂数据图。
图8高脂模型小鼠口服给药停药组和继续给药组体重变化曲线图。
图9高脂模型小鼠口服给药后iWAT组织电镜图(比例尺寸均为500nm)。
图10高脂模型小鼠口服给药后eWAT组织染色图(比例尺寸均为50μm)。
图11高脂模型小鼠口服给药后iWAT组织染色图(比例尺寸均为50μm)。
图12对照组猫的体重变化曲线图。
图13高剂量用药组猫的体重变化曲线图。
图14低剂量用药组猫的体重变化曲线图。
图15猫的TG甘油三酯变化曲线图。
图16黄连素新盐分子的立体结构椭球图。
图17黄连素新盐晶胞分子堆积图(沿a轴和b轴投影)。
具体实施方式
实施例1黄连素新盐的外用制剂(凝胶剂)制备：
黄连素维生素C盐凝胶制剂(10％w/w)配方：
组份 W(g or mL)
黄连素维生素C盐 1.0g
壳聚糖 0.3g
H2O 约9mL
乳酸 0.5g或0.5mL
0.5M EDTA(乙二胺四乙酸) 0.1mL
Tween 80 0.1mL
加水至 10mL
其中，黄连素维生素C盐可以按照US20220185807A1的制备方法得到。
黄连素维生素C盐凝胶制剂的制备：
称适量壳聚糖溶于水，加入EDTA溶液和Tween 80，搅拌均匀成混合液。另取适量黄连素维生素C盐加入上述混合液，再加入适量乳酸，加水至最终体积，搅拌溶解，即得。
实施例2(乳液剂)
黄连素维生素C盐乳液制剂的制备：
称取适量维生素C、菊粉月桂基氨基甲酸酯、甘氨酸、卵磷脂和金盏花提取物溶于丙二醇和水的混合溶剂，再加入黄连素维生素C盐和甘油，充分搅拌均匀成混合液。另取适量山梨糖酸、橄榄油和棕榈酸异丙酯混合均匀，将该混合液慢慢加入上述黄连素维生素C盐混合溶液中，边加边搅使体系均匀。再加入聚山梨酯20，充分搅拌，即得。
实施例3(凝胶剂)
成分 质量(g)
主有效成分：黄连素VC盐 20
乳化剂：甘油 4
凝胶剂基底成分：卡波姆940 3
促渗剂：聚山梨酯80 0.4
螯合剂：三乙醇胺 0.6
溶剂：乙醇 4ml
溶剂：水 68
按照实施例1的类似方法制备得到凝胶剂。
实施例4(贴剂)
得到实施例1的凝胶剂后，再加入适量聚丙烯酸钠，搅拌均匀，干燥，后续以敷贴辅助，即得到该盐的贴剂制剂。
实施例5黄连素新盐的口服内用制剂(水溶液剂)的制备
取适量黄连素维生素C盐固体，于水中搅拌溶解，即得到该盐的水溶液剂。
以实施例1得到的凝胶剂进行如下性能检测
(一)本实验考察SD大鼠在腹部表皮给药小檗碱新盐条件下，小檗碱新盐在大鼠体内的药代动力学行为情况。
1、样品配置：
供试品配制终浓度为109mg/mL，用于腹部给药。
供试品配制溶剂为CMC-Na(羧甲基纤维素钠)，配制后呈均匀黄色悬液。
2、实验系统
(1)实验动物
种属&品系：SD大鼠
实验动物来源：济南朋悦实验动物繁育有限公司。
计划给药时周龄：给药开始时6-8周。
计划给药时体重：给药开始时180-250g。
动物数与性别：4只，雄性，其中1只为备用大鼠。
(2)饲养与管理
动物饲养于透明树脂塑料鼠笼(530mm x 400mm x 200mm)中。
日光灯照明，每天12小时照明(08:00-20:00)及12小时无照明。动物房环境温度和相对湿度要分别控制在20-26℃和40-70％范围内。
实验期间所有动物自由饮水。
(3)动物标记
使用优质Mark笔在鼠尾上直接写编号，碱性品红在背部标记。动物笼具外附标签，标记研究编号、动物号、组别号和性别等信息。
3、实验方法简述
(1)组别与剂量
给药前测定动物体重，选择体重相近的健康动物纳入实验。
给药频率：单次给药。
(2)样品采集
使用乙醚将实验动物麻醉后，颈静脉采血至少0.2mL，加入抗凝剂：肝素钠。
采集时间：
给药前0min，给药后15min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、36h。
36h采血后，采集肝脏和腹部脂肪，随后放入-80℃冰箱保存。
样品处理
血液样本采集后放置于标记好的离心管中，迅速离心分离出血浆，离心条件：
3000转/分钟，15分钟，4℃，血浆置于-40℃以下条件保存待测。
4、标准曲线及质控样品
(1)小檗碱标准曲线及质控样品的配制：以50％甲醇水为稀释溶剂配制标准曲线工作溶液(浓度分别为4ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，200ng/mL，500ng/mL，1000ng/mL)和质控工作溶液(浓度分别为8ng/mL，80ng/mL，800ng/mL)。取工作溶液各5μL与45μL空白血浆混合，配制成血浆标准曲线和质控样品。在上述配制完成的标曲及质控样品中加入300μL的内标工作液(200g/mL，甲醇，甲基多巴)，涡旋混匀1min后，4℃，15400g条件下离心10min。取上清液进样分析。样本分析随行的标准曲线、质控结果显示，检测分析批满足设定标准。
(2)样品前处理
小檗碱新盐血浆样品前处理：血浆样品室温解冻后分别取30μL，加入180μL的内标(200ng/mL，甲醇，甲基多巴)，涡旋约1min后，4℃，15400g条件下离心10min，取上清液进样分析。
(3)肝脏、肠、腹部脂肪样品前处理：肝脏、肠、腹部脂肪组织样品匀浆后(组织：50％甲醇水＝1g:5mL)，分别取60μL组织样品匀浆液，加入360μL的内标工作液(200ng/mL，甲醇，甲基多巴)，涡旋混匀1min后，4℃，15400g条件下离心10min。取上清液进样分析。
5、数据采集和统计分析
Analyst 1.6.3软件输出原始图谱、浓度、准确度等数据。
Microsoft Excel 2007软件计算均值，标准差，变异系数等。
WinNonlin软件非房室模型方法(NCA)进行AUC、Cmax、t1/2等主要药代动力学参数的计算。
GraphPad Prism 9进行C-T绘图。
具体步骤：
实验选用体重相近的4只SD大鼠，分成2组，1-3号大鼠腹部表皮涂抹小檗碱新盐，给药剂量为200mg/kg，单次给药。给药前0min，给药后15min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、36h时间点采集血液。并在36h后，采集肝脏组织和腹部脂肪，其余大鼠编为第2组，作为备用组，用于备用及采取空白基质。血液样本采集后放置于标记好的离心管中，迅速离心(离心条件：3000转/分钟，15分钟，4℃)分离出血浆，血浆置于-40℃以下条件保存待测。采用LC-MS/MS分析方法检测血浆中小檗碱的含量，方法的定量下限为4ng/mL。使用代谢动力学数据分析软件WinNonlin 7.0对血浆浓度数据进行统计，利用非房室模型法(NCA)计算药代参数。
黄连素维生素C盐凝胶制剂涂覆后SD大鼠血浆药物浓度见表1；
表1小檗碱新盐后SD大鼠血浆药物浓度时间表(剂量：200mg/kg)
针对肝脏、肠、腹部脂肪组织样品匀浆后(组织：50％甲醇水＝1g:5mL)，分别取60μL组织样品匀浆液，加入360μL的内标工作液(200ng/mL，甲醇，甲基多巴)，涡旋混匀1min后，4℃，15400g条件下离心10min。取上清液进样分析。同样采用LC-MS/MS分析方法检测上清液中小檗碱的含量，方法的定量下限为4ng/mL。使用代谢动力学数据分析软件WinNonlin7.0对血浆浓度数据进行统计，利用非房室模型法(NCA)计算药代参数。
黄连素维生素C盐给药后动物组织内药物浓度见表2：
表2给药后动物组织内药物浓度
黄连素维生素C盐(小檗碱新盐)在SD大鼠体内的主要药代动力学参数见表3：
表3小檗碱新盐在SD大鼠体内的主要药代动力学参数
结论：SD大鼠在腹部给药200mg/kg小檗碱新盐透皮制剂后，如图1体内药动学数据显示，小檗碱血药浓度明显升高，小檗碱新盐可通过透皮方式吸收入体循环；如图2组织内药物浓度显示，小檗碱新盐透皮制剂可到达肝脏与脂肪，且能够在脂肪上大量富集。另外，与口服给药相比，透皮给药途径小檗碱原型在血液中的峰浓度较低，吸收程度较低，但半衰期较长。
以实施例4得到的贴剂进行如下性能检测
(一)本实验考察小鼠在腹部表皮给药小檗碱新盐条件下，小檗碱新盐凝胶剂对小鼠腹部脂肪细胞的影响。
1、实验对象
普通小鼠。
温度和相对湿度受控(22±2℃，55±5％)，12小时明暗循环，自由获取食物和水。
2、实验方案
对照组正常饲养，实验组为贴剂使用组(剂量约22mg/只小鼠)
3、检测指标
药物浓度，病理分析。
4、实验结果
在小鼠实验中，在贴用了含有黄连素新盐的贴剂(贴于腹部表皮)之后，我们观察到小檗碱(BBR)在小鼠内脏脂肪里的富集。在贴用含黄连素新盐的贴剂1天后，脂肪中小檗碱的含量为0.036－0.14μg/g；在连续贴用贴剂5天后，脂肪中小檗碱的含量可达1.44－10.92μg/g(见表4)。
表4腹部给药后小鼠腹部脂肪细胞中黄连提取物小檗碱浓度变化表
图3为小鼠贴剂给药后腹部脂肪示意图，其中1、2编号样本为连续5天给药组，3、4号编号样本为1天给药组。从内脏脂肪的颜色可以看出，贴用5天黄连素新盐的小鼠脂肪，比只贴用过1天的脂肪颜色更深，表明脂肪随着贴用黄连素的时间而“褐化”。因此，实验结果表明，小檗碱可以透皮被脂肪细胞吸收，直接作用于脂肪细胞，腹部脂肪细胞出现白色脂肪细胞褐色变化，且颜色随给药时间增长而加深。图4为小鼠给药后腹部脂肪细胞病理染色示意图。我们在病理染色后观察使用小檗碱前后脂肪细胞变化，可以发现使用小檗碱后，小鼠腹部脂肪细胞明显变小，这与白色脂肪细胞褐化的预期一致。
5、实验结论
我们的实验结果表明，小鼠在腹部表皮给药小檗碱新盐凝胶剂后，小檗碱被透皮吸收，并可直接作用于腹部脂肪细胞，使腹部脂肪细胞体积减小，发生白色脂肪褐色变，从脂肪细胞水平直接参与肥胖发生的代谢。
(二)本实验考察高脂模型小鼠在腹部表皮给药小檗碱新盐条件下，小檗碱新盐凝胶剂对小鼠体重以及腹部脂肪细胞的影响。
1、实验对象
HFD(高脂饮食)喂养的DIO模型小鼠，共10只。分为对照组和用药组，对照组和用药组各5只。
温度和相对湿度受控(22±2℃，55±5％)，12小时明暗循环，自由获取食物和水。
2、实验方案
对照组小鼠正常饲养，用药组小鼠为小檗碱新盐凝胶剂使用组(剂量约22mg/只小鼠)
3、检测指标
体重。
4、实验结果
目前关于中药黄连药小檗碱通过在脂肪细胞作用减轻体重的机制研究国内外报道较少，且小檗碱通过皮肤吸收直接作用于腹部脂肪细胞的研究没有相关文献报导。我们在高脂饮食导致肥胖的小鼠模型中，对贴用黄连素新盐凝胶剂之后小鼠的体重变化进行了观察。结果发现，如图5所示，腹部贴用了黄连素新盐凝胶剂的小鼠4天后体重较对照组有明显减轻。
5、实验结论
我们的实验结果表明，高脂饮食导致肥胖的小鼠模型，在腹部表皮给药小檗碱新盐凝胶剂后，小檗碱被透皮吸收，能有效减轻小鼠体重。
以实施例5制备的黄连素维生素C盐的水溶液作为口服剂进行如下性能检测
(一)本实验考察高脂模型小鼠在口服小檗碱新盐水溶液条件下，小檗碱新盐口服剂对小鼠体重和脂肪细胞的影响。
1、实验对象
HFD(高脂饮食)喂养的DIO模型小鼠。共20只，实验组和对照组各10只。
温度和相对湿度受控(22±2℃，55±5％)，12小时明暗循环，自由获取食物和水。
2、实验方案
实验组DIO小鼠口服给药黄连素新盐100mg/kg/天(药物溶于小鼠饮用水)，持续给药50天后，剂量调整为500mg/kg/天。持续给药77天后，实验组平分为两个小组，停药组停止饮水给药，继续给药组继续正常给药。
3、检测指标
体重，体脂，病理分析。
4、实验结果
如图6所示，高脂模型小鼠在口服给药黄连素新盐的条件下，在50天后，即给药剂量调整为500mg/kg/天开始，实验组(BBR)和对照组(NC)小鼠体重出现分化，并产生较大体重差别，至77天体重相差有10％。结果显示，黄连素新盐饮水口服给药可以帮助小鼠抵抗高脂饮食诱导的体重增长，有效降低体重。同时，我们核磁检测两组小鼠的体脂数据fat mass(脂肪体重)和lean mass(除脂肪组织以外的瘦体重)，如图7所示，口服给药黄连素新盐的实验组(BBR)与对照组(WT)比较，体脂明显下降。
77天后，实验组平分为两个小组，停药组(WATER)和继续给药组(BBR)，由图8结果可以看出，停药组小鼠停药后体重有略微回升，而继续给药组小鼠体重持续下降，说明体重下降结果是由黄连素新盐给药引起，再次验证口服给药效果。
实验结束后(77+5天后)，我们采集小鼠的附睾白色脂肪组织(eWAT)和腹部脂肪组织(iWAT)样品。我们对iWAT组织进行电镜观察，图9为iWAT组织电镜图，如图所示，对照组(WT)和实验组(BBR)各展示了上下2张不同区域的电镜图，可以看出高脂模型小鼠在口服给药黄连素新盐的条件下，腹部白色脂肪iWAT中的线粒体数量和大小有所增加。
将小鼠的iWAT和eWAT样品进行HE染色：取样品于4％多聚甲醛固定，梯度糖溶液脱水，OCT包埋，冷冻切片，常规HE染色，封片后光学显微镜下观察并摄片。图10为eWAT组织染色图，对照组和实验组各展示2张不同区域视野的示图，可以看出实验组腹股沟白色脂肪eWAT的细胞大小明显减小；图11为iWAT组织染色图，对照组和实验组各展示2张不同区域视野的示图，可以看出实验组腹部白色脂肪iWAT组织的细胞大小同样明显减小。图10和图11的结果都说明了口服给药黄连素新盐可能影响脂肪细胞能量代谢并促使白色脂肪细胞体积变小。
5、实验结论
我们的实验结果表明，高脂模型小鼠在口服给药黄连素新盐的条件下，黄连素新盐可以帮助小鼠抵抗高脂饮食诱导的体重增长，有效降低体重，同时降低体脂，并且黄连素新盐从脂肪细胞水平直接参与肥胖发生的能量代谢，促使白色脂肪细胞体积变小。
以该黄连素维生素C盐粉末作为口服剂进行如下性能检测
(一)本实验考察猫在口服小檗碱新盐条件下，小檗碱新盐口服剂对猫体重和体内生化指标的影响。
1、实验对象
猫。
2、实验方案
实验猫分为健康对照组，肥胖对照组，高剂量用药组，低剂量用药组。实验分组见表5：
表5实验猫高低剂量分组表
将黄连素新盐粉末直接用胶囊包装，用于口服。
对大体重肥胖猫进行口服黄连素新盐用药，高剂量用药组用药剂量为100mg/天，低剂量用药组用药剂量为50mg/天。健康对照组和肥胖对照组的猫正常饲养。
3、检测指标
体重，血液生化指标
4、实验结果
用药两个月后，统计各组猫的体重，如图12，肥胖对照组和健康对照组的猫的体重保持稳定；如图13，高剂量用药组的猫的体重随时间有所下降；如图14，低剂量用药组的猫的体重随时间有缓慢下降。可以看出，口服黄连素新盐能够降低肥胖猫的体重，口服高剂量黄连素新盐(100mg/天)的效果更加明显。在实验过程中我们采取猫的血样进行血液中TG甘油三酯指标的检测，如图15所示，肥胖对照的猫的甘油三酯指标随时间上升，健康对照的猫的甘油三酯稳定在0.33mmol/L，而在口服黄连素新盐的条件下，肥胖猫的甘油三酯指标有所下降。这个结果显示，口服黄连素新盐能够降低肥胖猫的血脂。
5、实验结论
我们的实验结果表明，肥胖猫在口服给药黄连素新盐的条件下，黄连素新盐可以降低肥胖猫的体重，且有一定剂量依赖性，高剂量的效果更加明显；同时，口服黄连素新盐能够有效降低肥胖猫的血脂。
最后以微晶电子衍射(MicroED)技术测定黄连素维生素C盐固体样品中微晶的结构和晶型
1、检测样品
黄连素维生素C盐粉末
2、检测设备
Talos F200C冷冻电镜，CetaD相机
3、检测与解析过程
微晶电子衍射(MicroED)数据使用Talos F200C型冷冻电镜结合CetaD型探测器完成收集。经过对微晶质量的检查，挑选了其中19颗晶体，并在液氮冷冻条件下完成数据收集。数据分析过程中，使用8套最好的数据进行晶胞参数确定及数据合并。
结构解析过程中，使用电子(波)的原子散射因子用于理论结构因子计算，并使用SHELXT软件完成结构解析，得到初始结构。使用基于最小二乘法精修的SHELXL程序完成后续精修。结合化合物分子式信息，完成所有非氢原子的指认及各向异性精修，所有氢原子通过计算加氢获得。
4、实验结果与结论
我们用微晶电子衍射(MicroED)技术测定黄连素维生素C盐固体样品中微晶的结构和晶型，结果如图所示，图16为黄连素新盐分子的立体结构椭球图，图17为黄连素新盐晶胞分子堆积图(沿a轴和b轴投影)，这些结构精修结果表明，该结构属于单斜晶系，空间群为P21(no.4)，晶胞参数为β＝
94.3(3)°,γ＝90°，最小不对称单元中包含两种目标分子各2个，且相同分子空间构象不同，互相不具有对称性关系，每个晶胞中有两种目标分子各4个。

Claims (16)

1.一种黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，包括黄连素维生素C盐，以及凝胶剂基底成分、pH调节剂、保湿剂、螯合剂、乳化剂、促渗剂、其他添加剂和溶剂中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，按照重量百分比计，包括：
3.根据权利要求1所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，按照重量百分比计，包括：
4.根据权利要求1所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，包括：黄连素维生素C盐、保湿剂、乳化剂和其他添加剂。
5.根据权利要求4所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，按照重量百分比计，包括：
6.根据权利要求1、2、4、5任一项所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，所述黄连素维生素C盐的重量百分比为5～20％。
7.根据权利要求6所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，所述黄连素维生素C盐的重量百分比为10～20％。
8.根据权利要求1～3任一项所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，所述凝胶剂基底成分选自壳聚糖、甲壳素、甲壳素衍生物、几丁糖、普鲁兰多糖、阿拉伯胶、卡波姆940或其他高分子天然活性多糖中的一种或多种；所述pH调节剂选自乳酸、柠檬酸、柠檬酸钠、琥珀酸、琥珀酸二钠、丙酸、丁酸、壬二酸或其他有机酸调节剂汇总的一种或多种；所述螯合剂选自乙二胺四乙酸、三磷酸钠、六偏磷酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、三乙醇胺、二乙醇胺、聚丙烯酸钠盐、其他螯合剂中的一种或多种；所述促渗剂选自月桂氮酮、环己六醇、异山梨醇二甲醚、四氢胡椒碱、N-正烷基苯并异噻酮唑酮、丙二醇、尿素、乙醇、苯扎氯铵、聚山梨酯80中的一种或多种；所述溶剂为水。
9.根据权利要求1～5任一项所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，所述保湿剂选自乳酸、甘油、透明质酸、尿素、鸸鹋油、麦卢卡油、橄榄油、棕榈酸异丙酯、甘氨酸或其他常见保湿剂的一种或多种；所述乳化剂选自Tween 80、硬脂醇聚醚-6、甘油硬脂酸酯、二十二醇、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、花生醇、丙烯酸羟乙酯、甘油、山梨糖酸、聚山梨酯20中的一种或多种。
10.根据权利要求1～5任一项所述的黄连素维生素C盐组合物，其特征在于，所述其他添加剂包括防腐剂、抗菌剂、抗氧化剂、增溶剂、增稠剂、着色剂、粘合剂中的一种或多种。
11.一种制剂，其特征在于，由权利要求1～10任一项所述组合物制备得到。
12.根据权利要求11所述的制剂，其特征在于，为外涂凝胶剂、外涂乳液剂、外涂膏剂、内服水溶剂、内服膏剂、内服片剂、内服粉剂、内服胶囊剂。
13.一种权利要求12所述凝胶剂的制备方法，其特征在于，包括：将凝胶剂基底成分溶于溶剂中，加入螯合剂、乳化剂或促渗剂，再将黄连素维生素C盐、pH调节剂或保湿剂，加入剩余溶剂，搅拌，得到所述制剂。
14.一种权利要求1～10任一项所述组合物在制备改善人或动物心血管疾病、降血糖、降血脂药物、降体重药物、降体脂药物中的应用。
15.一种黄连素维生素C盐的应用，其特征在于，用于制备改善人或动物心血管疾病、降血糖、降血脂药物、降体重药物、降体脂药物中的应用。
16.一种黄连素维生素C盐单晶，其特征在于，空间群为P21(no.4)，晶胞参数为β＝94.3(3)°,γ＝90°。
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