[go: up one dir, main page]

CN118843644A - Gip、glp-1和glp-2的肽三重激动剂 - Google Patents

Gip、glp-1和glp-2的肽三重激动剂 Download PDF

Info

Publication number
CN118843644A
CN118843644A CN202280091971.4A CN202280091971A CN118843644A CN 118843644 A CN118843644 A CN 118843644A CN 202280091971 A CN202280091971 A CN 202280091971A CN 118843644 A CN118843644 A CN 118843644A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
peptide
aib
preceding items
glp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280091971.4A
Other languages
English (en)
Inventor
D·里伯
M·M·罗森基尔德
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bainan Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Bainan Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bainan Biotechnology Co ltd filed Critical Bainan Biotechnology Co ltd
Publication of CN118843644A publication Critical patent/CN118843644A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)

Abstract

本发明涉及GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)、GLP‑1R(胰高血糖素样肽‑1受体)和GLP‑2R(胰高血糖素样肽‑2受体)的肽三重激动剂，以及它们在医药中的用途。

Description

GIP、GLP-1和GLP-2的肽三重激动剂
技术领域
本发明涉及GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)、GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)和GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的肽三重激动剂，以及它们在医药中的用途。
背景技术
胃肠肽和脂肪因子是参与控制全身能量稳态的关键信号分子。这些循环激素调节多种生物反应，如饥饿、饱腹感和葡萄糖摄取。体内实验证实这些激素也调节骨代谢，而在人体临床研究中也观察到这些激素与骨量之间的关联。
肠促胰岛素是胃肠道激素，其有助于调节响应于食物摄入的碳水化合物代谢。两种主要的肠促胰岛素是葡萄糖依赖性促胰岛素肽(GIP)和胰高血糖素样肽-1(GLP-1)，均由肠上皮细胞分泌。肠道胰高血糖素样肽-2(GLP-2)在营养摄入后与GLP-1一起共分泌。
膳食摄入后释放的胃肠激素，如GIP和GLP-2，已被证明调节骨转换；GIP对骨骼有积极作用，而GLP-2调节骨骼稳态并对骨量有积极贡献。
GLP-1R也可能参与骨代谢。
骨质疏松症可以定义为骨量减少和骨质量改变的结合，导致骨强度降低和骨折风险增加。包括GIP和GLP-2在内的胃肠激素都与骨代谢有关，并且是治疗骨质疏松症的潜在疗法。
WO 2018/069442和WO 2020/169792均公开了GIPR和GLP-2R的双重肽激动剂。
难以靶向同一受体家族的特定受体，如家族B GPCR，而不靶向其他受体。迄今为止尚未公开同时为GIPR、GLP-1R和GLP-2R的激动剂的强效肽。
发明概述
本文提供了结合了GIP、GLP-1和GLP-2受体激动剂的性质的三重激动剂。本发明人设计了靶向GIPR、GLP-1R和GLP-2R的肽三重激动剂，其具有出乎意料的高效力。
本发明的三重GIPR、GLP-1R和GLP-2R激动剂与人GIP相比诱导更少的GIPR内化。这可导致GIPR的激活时间延长，并因此产生更持久的效果。此外，本发明的一些三重GIPR、GLP-1R和GLP-2R激动剂与人GLP-1和/或GLP-2相比还诱导更少的GLP-1R和/或GLP-2R内化。GIPR、GLP-1R和/或GLP-2R中任一个的内化更少均可导致延长的激活，并因此产生更持久且更大的效果。
本公开的一个方面涉及肽三重激动剂，其包含以下序列或由以下序列组成：
X1X2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:42)-J
其中
X1是H或Y
X2是A或Aib，
X3是D或E，
X7是I、S或T，
X11是S或A，
X12是T或I，
X13是I、Aib或E，
X15是D或E，
X16是N、L、A、K或E，
X17是L、K或I，
X20是R或K，
X21是D、E或K，
X24是N或E，
X28是Q、A或K，
X29是T、Q或K，
X30是R或K，
X31是I或G，且
X32是T或K，
其中J为包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)的一个或多个氨基酸残基的肽或被省略，
条件是当X7是I时，则X2是Aib，且当X2是A时，则X7是S或T，
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，并且
其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂，为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
本公开的另一个方面涉及根据前述权利要求中任一项所述的肽三重激动剂，其用作药物，例如用于抑制骨吸收和/或刺激骨形成的方法和/或用于治疗骨病症的方法和/或用于治疗特发性骨质疏松症(iodiopathic osteoporosis)的方法和/或用于治疗患有杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)或脑瘫(cerebral Palsy)的个体的骨质疏松症的方法。
附图说明
图1：图1以雷达图显示了三重肽激动剂对人GIPR、GLP-1R和GLP-2R的总体效力。这里显示了化合物20、21、22、28、30、31、32、33、34、35在Gs激活中的效力，其以cAMP积累来测量，以雷达图的形式描绘。这些数字是指-pLog EC50值。还描绘了对人胰高血糖素受体(GCGR)的相应值，但其效力均低于100nM(-pLog EC50值<7)。外圈对应于更高的效力，内圈对应于更低的效力。
发明详述
定义
术语“亲和力”是指配体与其受体之间的结合强度。
本上下文中的术语“激动剂”是指能够结合并激活受体的本文定义的肽。
术语“三重激动剂”是指能够结合并激活至少三种受体的本文所定义的肽，其中至少三种受体是不同的受体。在本上下文中，三重激动剂是GIPR的激动剂、GLP-2R的激动剂和GLP-1R的激动剂。此处定义的三重激动剂也可具有针对额外的受体的激动剂活性，其中三重激动剂是至少GIPR、GLP-2R和GLP-1R的激动剂。
“氨基酸残基”可以是通过肽键或不同于肽键的键连接的天然或非天然氨基酸残基。氨基酸残基可以是D构型，也可以是L构型。氨基酸残基包含氨基末端部分(NH2)和羧基末端部分(COOH)，它们被包含一个碳原子或碳原子链的中心部分隔开，其中至少一个碳原子或碳原子链包含至少一个侧链或官能团。NH2是指存在于氨基酸或肽的氨基末端的氨基，并且COOH是指存在于氨基酸或肽的羧基末端的羧基。通用术语氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸。J.Biol.Chem.,243:3552-59(1969)中列出并被37C.F.R.,1.822(b)(2)部分采纳的标准命名的天然氨基酸属于此处列出的氨基酸组：Y、G、F、M、A、S、I、L、T、V、P、K、H、Q、E、W、R、D、N和C。非天然氨基酸是刚才未列出的那些氨基酸。此外，非天然氨基酸残基包括但不限于修饰的氨基酸残基、L氨基酸残基和D氨基酸残基的立体异构体。
“等效氨基酸残基”是指能够替代多肽中的另一个氨基酸残基而基本上不改变该多肽的结构和/或功能的氨基酸残基。因此，等效氨基酸具有相似的性质，例如侧链的体积、侧链极性(极性或非极性)、疏水性(疏水性或亲水性)、pH值(酸性、中性或碱性)和碳分子的侧链组织(芳香族/脂肪族)。因此，“等价氨基酸残基”可以视为“保守氨基酸取代”。
在本文所用的术语“等效氨基酸取代”的含义内，在一个实施方案中，在本文下面所示的氨基酸组中，一个氨基酸可以被另一个氨基酸取代：
具有极性侧链的氨基酸(Asp、Glu、Lys、Arg、His、Asn、Gln、Ser、Thr、Pro和Cys)；具有非极性侧链的氨基酸(Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Tyr和Met)；具有脂肪族侧链的氨基酸(Gly、Ala、Val、Leu、Ile)；具有环状侧链的氨基酸(Trp、His、Pro)；具有芳香族侧链的氨基酸(Phe、Tyr、Trp)；具有酸性(例如带负电荷的)侧链的氨基酸(Asp、Glu)；具有碱性(例如带正电荷的)侧链的氨基酸(Lys、Arg、His)；具有酰胺侧链的氨基酸(Asn、Gln)；具有羟基侧链的氨基酸(Ser、Thr)；具有含硫侧链的氨基酸(Cys、Met)；中性、弱疏水性氨基酸(Pro、Ala、Gly、Ser、Thr)；亲水性酸性氨基酸(Gln、Asn、Glu、Asp)；和疏水性氨基酸(Leu、Ile、Val)。
当没有指定L或D形式(光学异构体)时，应理解为所讨论的氨基酸具有天然的L形式，参见Pure&Appl.Chem.Vol.(56(5)pp 595-624(1984)或D形式，因此形成的肽可能由L形式、D形式的氨基酸或混合的L形式和D形式的序列构成。
肽的“功能变体”是能够与是其功能变体的肽执行基本上相同的功能的肽。具体而言，功能变体可以与是其功能变体的肽结合相同的分子，优选具有相同的亲和力。
“生物活性剂”(即具有生物活性的物质/剂)是提供一些可以在体内或体外得到证明的药理(通常是有益的)作用的任何药剂、药物、化合物、物质组合物或混合物。其是指本文定义的肽序列、包含这些肽的化合物或组合物以及编码所述肽的核酸构建体。如本文所用，该术语还包括在个体中产生局部或全身作用的任何生理或药理活性物质。本文使用的“生物活性剂”统称肽、编码所述肽的核酸构建体以及包含肽的组合物。
本文所用的术语“药物(drug)”和“药物(medicament)”包括在人体或动物体内局部或全身起作用的生物、生理或药理活性物质。
本文使用的术语“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”是指为了对抗病况、疾病或病症而对患者进行的管理和护理。该术语旨在包括针对患者所患的特定病况的全谱治疗，并且同等是指治愈性疗法、预防性或防止性疗法以及改善性或姑息性疗法，例如施用肽或组合物以达到以下目的：缓解或减轻症状或并发症；延迟病况的进展、部分抑制临床表现、疾病或病症；治愈或消除病况、疾病或病症；改善或减轻病况或症状，以及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的；和/或防止或降低罹患该病况、疾病或病症的风险，其中“预防”或“防止”应理解为是指出于阻碍病况、疾病或病症发展的目的对患者进行管理和护理，并且包括施用活性化合物以防止或降低症状或并发症发作的风险。本文所用的术语“缓解”及其变体是指与不施用本发明的组合物相比，生理病况或症状的程度和/或不良表现减轻和/或进展的时间过程减慢或延长。
术语“个体”是指脊椎动物，特别是哺乳动物物种的成员，优选灵长类动物，包括人类。本文所用的“受试者”和“个体”可以互换使用。然而，对诸如小鼠、大鼠、狗、猫、牛、马、羊和猪之类的动物的治疗也在本发明的范围内。
“有需要的个体”是指可能受益于治疗的个体。在一个实施方案中，所述有需要的个体是患病个体，其中所述疾病可以是骨病症。
如果所治疗的病况发生变化，则表现出“治疗效果”或“治疗作用”，如按照构成术语“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”定义的标准来衡量。如果有至少5％的改善、优选地10％的改善、更优选地至少25％的改善、甚至更优选地至少50％的改善、例如至少75％的改善、并且最优选地至少100％的改善，则所治疗的病况存在“变化”。这种变化可以基于个体所治疗病况的严重程度的改善，或基于使用和未使用生物活性剂治疗或使用生物活性剂与本发明的药物组合物联合治疗的个体群体中病况改善频率的差异。
根据本发明的治疗可以是预防性的、改善性的和/或治愈性的。
“生物活性剂”的“药理学有效量”、“药学有效量”或“生理学有效量”是本文所述药物组合物中存在的生物活性剂的量，当施用此类组合物时，该量需要在待治疗的个体的血流中或作用部位(例如肺、胃系统、结肠直肠系统、前列腺等)提供所需水平的活性剂以给出预期的生理反应。
本文所用的“共同施用”或“共同给药”是指施用一种或多种激动剂和最新式的药物组合物。所述至少两种组分可以单独、顺序或同时施用。
本文中使用的与本公开的肽三重激动剂有关的“偏向”是指肽三重激动剂相对于同源的内源性肽激素对三种受体GIPR、GLP-1R和GLP-2R中的一个(或多个)例如在效力、激活、功效和/或内化方面是不成比例的。本公开的偏向肽三重激动剂可能对某些应用是有益的。
GIP是指葡萄糖依赖性促胰岛素多肽，又称胃抑制肽(或多肽)。本文使用的缩写hGIP是人GIP(Uniprot登录号P09681)。GIP来源于153个氨基酸的前蛋白，并以具有生物活性的42个氨基酸的肽(第52-93μ)的形式循环。它是由胃肠道十二指肠和空肠粘膜的K细胞合成的。
在生理条件下，42个氨基酸的激素GIP被酶二肽基肽酶4(DPP-4)降解，该酶在GIP分子的第三个位置裂解，产生GIP3-42。GIP1-30是翻译后加工产生的。如果GIP1-30被分泌到人体循环系统中，则DPP-4催化的裂解将产生GIP3-30。
hGIP的序列为：
YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:37)。
GIPR(或GIP受体)是指葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体。发现这些七跨膜蛋白至少存在于胰腺的β细胞中。本文使用的缩写hGIPR是人GIPR(Uniprot登录号P48546)。
GIP的几种生理效应已被鉴定。GIP在营养摄入后由肠内分泌K细胞分泌并诱导胰岛素分泌。口服施用葡萄糖时分泌的胰岛素量比静脉内施用葡萄糖时要大。GIP还被认为通过刺激脂肪细胞中的脂蛋白脂肪酶活性对脂肪酸代谢有显著影响。GIP近期被认为是骨重塑的主要参与者，并且GIP受体的缺乏与骨质量急剧下降和随后的骨折风险增加有关。
胰高血糖素样肽-2(GLP-2)是人体中的一种33个氨基酸的肽，在还会释放相关的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和胰高血糖素本身的过程中由胰高血糖素原的特定翻译后蛋白水解性裂解而生成。GLP-2由肠内分泌L细胞和中枢神经系统的各种神经元产生。营养摄入后，肠道GLP-2与GLP-1一起分泌。外部施用时，GLP-2对人类和啮齿动物产生多种作用，包括肠道生长、增强肠道功能、减少骨损耗和神经保护。GLP-2及相关类似物具有治疗短肠综合征、克罗恩病、骨质疏松症以及作为癌症化疗期间的辅助疗法的潜力。
hGLP-2的序列是：
HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD(SEQ ID NO:41)
GLP-2受体(GLP-2R)是G蛋白偶联受体超家族成员。GLP-2R在肠道中表达，并与胰高血糖素受体(GCGR)和GLP1受体(GLP-1R)密切相关。本文使用的缩写hGLP-2R是人GLP-2R(例如Uniprot登录号O95838)。本文使用的缩写hGLP-2是人GLP-2(Uniprot登录号不可用)。本文使用的缩写hGLP-1R是人GLP-1R(GLP-1受体)(例如Uniprot登录号P43220)。
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)来源于胰高血糖素原的组织特异性翻译后加工。它是由肠道肠内分泌L细胞和脑干孤束核内的某些神经元在消耗食物后产生和分泌的。在肠道L细胞中，胰高血糖素原被加工为C末端酰胺化的GLP-1(7-36)和少量的C末端甘氨酸延伸的GLP-1(7-37)，并响应于膳食/葡萄糖摄入而释放。活性GLP-1由来自于氨基酸位置13-20和24-35的两个α-螺旋组成，这两个α-螺旋被接头区域分开。
GLP-1通过增强胰岛素的分泌，以葡萄糖依赖性方式降低血糖水平。除了促胰岛素作用外，GLP-1还与多种调节和保护作用相关。GLP-1的作用在2型糖尿病患者中得以保留，因此大量的药物研究都致力于开发基于GLP-1的治疗方法。内源性GLP-1主要被二肽基肽酶4(DPP-4)迅速降解，但也被中性内肽酶24.11(NEP 24.11)和肾脏清除所降解，导致半衰期约为2分钟。因此，只有10-15％的GLP-1以完整形式进入循环，导致空腹血浆水平仅为0-15pmol/L。为了克服这个问题，采用了与DPP-4抑制剂的结合以及开发抗降解的GLP-1变体。
天然hGLP-1的序列为：
hGLP-1(1-37)：HDEFERHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKG RG(SEQ ID NO:38)
hGLP-1(7-36)：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(SEQ ID NO:39)
hGLP-1(7-37)：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG(SEQ ID NO:40)
GIPR、GLP-1R和GLP-2R肽三重激动剂
本发明人设计了新型肽，其为GIPR、GLP-1R和GLP-2R的三重激动剂，并具有出乎意料且前所未有的高效力。这些肽基于hGIP和hGLP-2的序列。GIPR、GLP-1R和GLP-2R的三重激动剂意指该肽结合和/或激活至少GIPR、GLP-1R和GLP-2R。这使得它们潜在可用于一系列治疗应用中。
该肽是通过组合来自GIP肽(SEQ ID NO:37)和GLP-2肽(SEQ ID NO:41)的氨基酸/氨基酸片段而设计的。来自GLP-1肽(SEQ ID NO:38)的氨基酸残基/片段也可存在于本公开的三重激动剂中。这些氨基酸优选参与受体结合、受体亲和力、受体活性和/或与肽的激动剂活性相关的其他方面中的一种或多种。在一些实施方案中，所述肽被设计为包含不源自任何GIP肽(SEQ ID NO:37)、GLP-1肽(SEQ ID NO:38)和GLP-2肽(SEQ ID NO:41)的氨基酸残基，但是其可以使得本公开的所述肽与包含仅源自GIP肽(SEQ ID NO:37)和GLP-2肽(SEQID NO:41)的残基或仅源自GIP肽(SEQ ID NO:37)、GLP-1肽(SEQ ID NO:38)和GLP-2肽(SEQID NO:41)的残基的肽双重激动剂相比更稳定和/或更有效力和/或更具选择性。
一个方面是提供一种肽三重激动剂，其包含以下序列或由以下序列组成：
X1X2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:42)-J
其中：
X1是H或Y
X2是A或Aib，
X3是D或E，
X7是I、S或T，
X11是S或A，
X12是T或I，
X13是I、Aib或E，
X15是D或E，
X16是N、L、A、K或E，
X17是L、K或I，
X20是R或K，
X21是D、E或K，
X24是N或E，
X28是Q、A或K，
X29是T、Q或K，
X30是R或K，
X31是I或G，且
X32是T或K，
其中J为包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)的一个或多个氨基酸残基的肽或被省略，
条件是当X7为I时，则X2为Aib，且当X2为A时，则X7为S或T，
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，并且
其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂、为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂并且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
一个方面是提供一种肽三重激动剂，其包含以下序列或由以下序列组成：
X1X2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:43)-J
其中
X1是H或Y
X2是Aib，
X3是D或E，
X7是I、S或T，
X11是S或A，
X12是T或I，
X13是I、Aib或E，
X15是D或E，
X16是N、L、A、K或E，
X17是L、K或I，
X20是R或K，
X21是D、E或K，
X24是N或E，
X28是Q、A或K，
X29是T、Q或K，
X30是R或K，
X31是I或G，且
X32是T或K，
其中J为包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)的一个或多个氨基酸残基的肽或被省略，
其中所述肽通过在SEQ ID NO:43的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，
并且其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂、为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
一个方面是提供一种肽三重激动剂，其包含以下序列或由以下序列组成：
X1X2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:44)-J
其中
X1是H或Y
X2是A或Aib，
X3是D或E，
X7是S或T，
X11是S或A，
X12是T或I，
X13是I、Aib或E，
X15是D或E，
X16是N、L、A、K或E，
X17是L、K或I，
X20是R或K，
X21是D、E或K，
X24是N或E，
X28是Q、A或K，
X29是T、Q或K，
X30是R或K，
X31是I或G，且
X32是T或K，
其中J为包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)的一个或多个氨基酸残基的肽或被省略，
其中所述肽通过在SEQ ID NO:44的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，并且
其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂、为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
SEQ ID NO:42、43和SEQ ID NO:44(例如SEQ ID NO:42至44)中的编号与所述序列中的氨基酸残基的编号相对应，使得：
X1是所述SEQ ID NO：42至44的1位残基，X2是2位残基，X3是3位残基，G是4位残基，T是5位残基，F是6位残基，X7是7位残基，S是8位残基，D是9位残基，Y是10位残基，X11是11位残基，X12是12位残基，X13是13位残基，L是14位残基，X15是15位残基，X16是16位残基，X17是17位残基，A是18位残基，A是19位残基，X20是20位残基，X21是21位残基，F是22位残基，I是23位残基，X24是24位残基，W是25位残基，L是26位残基，I是27位残基，X28是28位残基，X29是29位残基，X30是30位残基，X31是31位残基，X32是32位残基，K是33位残基。
类似地，J是作为残基1-33的延续而编号的肽，因此J(NDWKHNITQK；SEQ ID NO：29)的一个或多个氨基酸残基例如被编号为N是34位，D是35位，W是36位，K是37位，H是38位，N是39位，I是40位，T是41位，Q是42位，K是43位。
然而，在一个实施方案中，J可以仅由一个氨基酸残基组成，并且在这种情况下，所述氨基酸残基是34位，例如即使所述氨基酸残基不是N。例如，在一个实施方案中，J可以仅由一个K组成，并且在这种情况下，所述K是34位。
本公开的肽三重激动剂(例如SEQ ID NO:42至44的肽三重激动剂)的C末端区域由从SEQ ID NO:42至44的16位延伸至C端的氨基酸残基组成。例如，本公开的肽三重激动剂(例如SEQ ID NO:42至44的肽三重激动剂)的C末端区域由从SEQ ID NO:42至44的16位至33位、例如从SEQ ID NO:42至44的16位至34位、例如从SEQ ID NO:42至44的16位至42位、例如从SEQ ID NO:42至44的16位至43位的氨基酸残基组成。
本公开的肽三重激动剂(例如SEQ ID NO:42至44的肽三重激动剂)的C末端区域由SEQ ID NO:42至44的氨基酸残基16至33和J(SEQ ID NO:29)的氨基酸残基组成。
因此，在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的16至33位中的任一个位置上和/或J(SEQ ID NO:29)的任一个位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
此外，在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的16至43位中的任一个位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的16至33位中的任一个位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开涉及GIPR、GLP-1R和GLP-2R的肽三重激动剂，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:42至44，或其功能变体，或其功能片段。
SEQ ID NO:42至44也可写为
(H/Y)(A/Aib)(D/E)GTF(I/S/T)SDY(S/A)(I/T)(E/Aib/I)L(D/E)(E/L/K/A/N)(L/K/I)AA(R/K)(D/E/K)FI(N/E)WLI(Q/A/K)(T/Q/K)(R/K)(I/G)(T/K)K-J；或其功能变体，或其功能片段。
所述肽三重激动剂是GIPR的激动剂、GLP-1R的激动剂和GLP-2R的激动剂，意味着肽三重激动剂是GIPR、GLP-1R和GLP-2R的激动剂。这并不排除肽三重激动剂可以结合和/或激活其他受体。然而，本公开的肽三重激动剂被设计为以高效力激活GIPR、GLP-1R和GLP-2R。
本发明人实际上已发现，在本公开的肽三重激动剂的C末端区域(例如在SEQ IDNO:42至44的肽的16至43位的氨基酸残基中的任一个处)连接脂肪酸导致所述肽具有以高效力结合和/或激活GIPR、GLP-1R和GLP-2R的能力。
对本文通篇使用的GIPR、GLP-2R和GLP-1R的提及可以用hGIPR、hGLP-2R和hGLP-1R取代。
在一个实施方案中，肽三重激动剂包括：
a.N端的来自hGLP-2(SEQ ID NO:41)和/或hGIP(SEQ ID NO:37)的氨基酸，
b.主要来自hGIP(SEQ ID NO:37)的中央/N末端氨基酸段，
c.主要来自hGLP-2(SEQ ID NO:41)的中央/C末端氨基酸段，以及
d.任选地，C端的主要来自hGIP(SEQ ID NO:37)的氨基酸。
在一个实施方案中，12至20位或12至30位的氨基酸主要来自hGLP-2(SEQ ID NO:41)。
在一个实施方案中，5至11位或7至11位的氨基酸主要来自hGIP(SEQ ID NO:37)。
在一个实施方案中，7位和/或8位的氨基酸主要来自hGLP-1(SEQ ID NO:38)。这些残基的存在可增加GLP-1R的效力。
在一个实施方案中，当氨基酸被定义为“主要来自”时，这意指至少50％的氨基酸来自所讨论的肽，例如至少55％、例如至少60％、例如至少65％、例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如100％来自所讨论的肽(即来自hGIP、来自hGLP-1或来自hGLP-2)。
在一个实施方案中，当氨基酸被定义为“主要来自”时，这意指50-55％的氨基酸来自所讨论的肽，例如55-60％、例如60-65％、例如65-70％、例如70-75％、例如75-80％、例如80-85％、例如85-90％、例如90-95％、例如95-100％来自所讨论的肽(即来自hGIP、来自hGLP-1或来自hGLP-2)。
当氨基酸来自hGIP或来自hGLP-2时，这意味着肽三重激动剂的某个位置上的氨基酸对应于hGIP或hGLP-2相同位置上的氨基酸。例如，如果1位氨基酸来自GIP，这意指该氨基酸是“Y”。如果1位氨基酸来自GLP-2，这意指该氨基酸是“H”。
在一个实施方案中，肽三重激动剂包含如本文所定义的20至43个连续氨基酸；例如20至22个氨基酸，例如22至24个氨基酸，例如24至26个氨基酸，例如26至28个氨基酸，例如28至30个氨基酸，例如30至32个氨基酸，例如32至34个氨基酸，例如34至36个氨基酸，例如36至38个氨基酸，例如38至40个氨基酸，例如40至42个，例如38至43个连续氨基酸，或由其组成
在一个实施方案中，肽三重激动剂包含20至43个连续氨基酸；例如20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43个连续氨基酸；或由其组成。
在一个实施方案中，肽三重激动剂包含20至33个连续氨基酸，例如20-21、例如21-22、例如22-23、例如23-24、例如24-25、例如25-26、例如26-27、例如27-28、例如28-29、例如29-30、例如30-31、例如31-32、例如32-33、例如33-34、例如34-35、例如35-36、例如36-37、例如37-38、例如38-39、例如39-40、例如40-41、例如41-42、例如42-43个连续氨基酸；或由其组成
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含33个连续氨基酸或由33个连续氨基酸组成。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含34个连续氨基酸或由34个连续氨基酸组成。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含42个连续氨基酸或由42个连续氨基酸组成。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含43个连续氨基酸或由43个连续氨基酸组成。
在一个实施方案中，1位上存在酪氨酸(Y)导致肽三重激动剂对GIPR的效力增加。在一个实施方案中，1位上存在酪氨酸(Y)导致肽三重激动剂对GLP-1R的效力降低。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X2是Aib，并且其中所述肽通过在SEQ ID NO:42-44的C端连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X2是Aib，并且其中所述肽通过在SEQ ID NO:42-44的33位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X2是Aib，并且其中所述肽通过在SEQ ID NO:42-44的34位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X2是Aib，并且其中所述肽通过在SEQ ID NO:42-44的42位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X2是Aib，并且其中所述肽通过在SEQ ID NO:42-44的43位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，在11位存在丝氨酸(S)，即其中X11是S，导致肽三重激动剂对GLP-2R具有增加的效力，因此是偏向于GLP-2R的三重激动剂。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X16为N、L、A或E，并且
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42-44的C端连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X16为N、L、A或E，并且
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42-44的33位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X16为N、L、A或E，并且其中所述肽通过在SEQ IDNO:42-44的34位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X16是N、L、A或E，并且其中所述肽通过在SEQ IDNO:42-44的42位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X16是N、L、A或E，并且其中所述肽通过在SEQ IDNO:42-44的43位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X17为L或I。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X20为R。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X7是T。7位上存在T，例如将hGIP 7位上的I用T取代，导致提高了对GLP-1R的效力。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X7是S。7位上存在S，例如将hGIP 7位上的I用S取代，导致提高了对GLP-1R的效力。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X13是Aib。因此，在一个实施方案中，hGIP的13位上的丙氨酸或hGLP-2的13位上的异亮氨酸被2-氨基异丁酸取代。13位存在Aib增加了对GIPR、GLP-1R和GLP-2R中至少一个的效力。
一般而言，一个或多个Aib残基的存在使得本公开的肽三重激动剂的3D结构更加刚性，这可以提高对GIPR、GLP-1R和/或GLP-2R的效力和选择性。在一个实施方案中，2位上存在Aib与GIPR内化的更高减少(即减少的GIPR内化)相关。在一个实施方案中，13位上存在Aib与GIPR内化的更高减少(即，减少的GIPR内化)相关。在一个实施方案中，在2位和/或13位包含Aib的本公开的肽三重激动剂偏向于减少GIPR的内化。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X16为N、A或K。在一个实施方案中，16位存在丙氨酸(A)，即其中X16为A，产生对GIPR具有增加的活性的肽三重激动剂。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X28为Q。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X29为T。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X30为K。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X2为Aib，X31为I，且X32为T。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X2为Aib，X31为G且X32为K。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X7为T或S，X31为G且X32为K。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X7是T，X31是G，且X32是K。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ IDNO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中33位氨基酸残基不是D。事实上发现，用K或另一个氨基酸残基取代GLP-2 33位上的D是有利的并且导致针对GIPR和/或GLP-2R的效力提高。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中X31X32选自IT、GK、GT、IK和IT。在一个实施方案中，X31X32为IT。在一个实施方案中，X31X32为GK。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中J被省略。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID 42-44或由氨基酸序列SEQ ID 42-44组成，其中J选自：
ND、NDW、KDW、NDW、NDK、NDWK、NDWKH、NDWKHN、NDWKHNI、NDWKHNIT、NDWKHNITQ和AEWKHAITQ或包含一个氨基酸取代的变体。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中J为K。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含氨基酸序列SEQ ID NO:42-44或由氨基酸序列SEQ ID NO:42-44组成，其中J选自NDWKHNITQ、NDWKHNITQK。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂包含选自以下的氨基酸序列：
化合物1：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:1)，
化合物2：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:2)，
化合物3：H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:3)，
化合物4：H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:4)，
化合物5：H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:5)，
化合物6：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:6)，
化合物7：H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:7)，
化合物8：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:8)，
化合物9：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:9)，
化合物10：H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:10)，
化合物11：H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:11)，
化合物12：H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:12)，
化合物13：H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:13)，
化合物14：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-NH2(SEQ ID NO:14)，
化合物15：H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:15)，
化合物16：Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:16)，
化合物17：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:1)，
化合物18：HADGTFTSDYSTILDNLAAKDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:17)，
化合物19：HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:18)，
化合物20：HADGTFTSDYSIILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKH NITQ-OH(SEQ ID NO:19)，
化合物21：HADGTFTSDYSTILD-KLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:20)，
化合物22：HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKND WKHNITQ-OH(SEQ IDNO:21)，
化合物23：HADGTFTSDYSTILDKKAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:22)，
化合物24：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:23)，
化合物25：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:24)，
化合物26：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQK-OH(SEQ ID NO:25)，
化合物27：HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKND WKHNITQK-OH(SEQ IDNO:26)，
化合物28：H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:27)，
HADGTFISDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:45)，
HADGTFISDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:46)，
HADGTFISDYSTILDNKAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:47)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:48)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKKK-OH(SEQ ID NO:49)，和
HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKGKKK-OH(SEQ ID NO:50)，
或其功能变体，其中所述功能变体包含1或2个单独的氨基酸取代。
在一个方面，本公开涉及肽三重激动剂，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：
化合物1：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:1)，
化合物2：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:2)，
化合物3：H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:3)，
化合物4：H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:4)，
化合物5：H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:5)，
化合物6：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:6)，
化合物7：H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:7)，
化合物8：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:8)，
化合物9：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:9)，
化合物10：H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:10)，
化合物11：H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:11)，
化合物12：H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:12)，
化合物13：H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:13)，
化合物14：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-NH2(SEQ ID NO:14)，
化合物15：H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:15)，
化合物16：Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:16)，
化合物17：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:1)，
化合物18：HADGTFTSDYSTILDNLAAKDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:17)，
化合物19：HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:18)，
化合物20：HADGTFTSDYSIILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:19)，
化合物21：HADGTFTSDYSTILD-KLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:20)，
化合物22：HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKND WKHNITQ-OH(SEQ IDNO:21)，
化合物23：HADGTFTSDYSTILDKKAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:22)，
化合物24：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:23)，
化合物25：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:24)，
化合物26：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQK-OH(SEQ ID NO:25)，
化合物27：HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKND WKHNITQK-OH(SEQ IDNO:26)，
化合物28：H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:27)，
化合物30：BB-153HADGTFISDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH，
化合物31：BB-154HADGTFISDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKG KK-OH，
化合物32：BB-155HADGTFISDYSTILDNKAARDFINWLIQTKGKK-OH，
化合物33：BB-157HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH，
化合物34：BB-159HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK K-OH，
化合物35：BB-160HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKG KKK-OH，
或其功能变体，其中所述功能变体包含1至3个单独的氨基酸取代，
其中所述肽通过在上述序列的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，并且
其中所述肽是GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂、是GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂且是GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
在一个方面，本公开涉及肽三重激动剂，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：
化合物1：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:1)，
化合物2：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:2)，
化合物3：H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:3)，
化合物4：H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:4)，
化合物5：H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:5)，
化合物6：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:6)，
化合物7：H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:7)，
化合物8：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:8)，
化合物9：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:9)，
化合物10：H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:10)，
化合物11：H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:11)，
化合物12：H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:12)，
化合物13：H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:13)，
化合物14：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-NH2(SEQ ID NO:14)，
化合物15：H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:15)，
化合物16：Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:16)，
化合物17：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:1)，
化合物18：HADGTFTSDYSTILDNLAAKDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:17)，
化合物19：HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:18)，
化合物20：HADGTFTSDYSIILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:19)，
化合物21：HADGTFTSDYSTILD-KLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:20)，
化合物22：HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKND WKHNITQ-OH(SEQ IDNO:21)，
化合物23：HADGTFTSDYSTILDKKAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:22)，
化合物24：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:23)，
化合物25：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ ID NO:24)，
化合物26：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQK-OH(SEQ ID NO:25)，
化合物27：HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKND WKHNITQK-OH(SEQ IDNO:26)，
化合物28：H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:27)。
化合物30：BB-153HADGTFISDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH，
化合物31：BB-154HADGTFISDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKG KK-OH，
化合物32：BB-155HADGTFISDYSTILDNKAARDFINWLIQTKGKK-OH，
化合物33：BB-157HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH，
化合物34：BB-159HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGK KK-OH，和
化合物35：BB-160HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKG KKK-OH，
或其功能变体，其中所述功能变体包含1至3个单独的氨基酸取代，条件是2位氨基酸残基为Aib和/或7位氨基酸残基为T或S，
其中所述肽通过在上述序列的C末端区域的任一个位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，并且
其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂，为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂，且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂是C末端酰胺化的(-NH2)。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂，肽的C端是羧酸。
在一个实施方案中，肽三重激动剂的功能变体与所述肽三重激动剂具有至少60％序列同一性，例如至少70％序列同一性，例如至少75％序列同一性，例如至少80％序列同一性，例如至少85％序列同一性，例如至少90％序列同一性，例如至少95％序列同一性，例如至少97％序列同一性。
在一个实施方案中，肽三重激动剂的功能变体与所述肽三重激动剂具有60至65％序列同一性，例如65至70％序列同一性，例如70至75％序列同一性，例如75至80％序列同一性，例如80至85％序列同一性，例如85至90％序列同一性，例如90至95％序列同一性，例如95至99％序列同一性，例如99至100％序列同一性。“同一性”和“序列同一性”在本文中可以互换使用
在一个实施方案中，功能变体包含一个或多个氨基酸取代，例如1至8个氨基酸取代，例如1至2、2至3、3至4、4至5、5至6、6至7或7至8个氨基酸取代。
在一个实施方案中，功能变体包括一个氨基酸取代、两个氨基酸取代、三个氨基酸取代、四个氨基酸取代或五个氨基酸替代。
在一个实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。在一个实施方案中，所述功能变体包含一个或多个保守氨基酸取代。
保守取代(或同义取代)是用侧链具有相似生化性质并因此不会影响肽的功能的氨基酸进行的取代。
氨基酸序列之间的同一性可以使用众所周知的算法来计算，例如BLOSUM 30、BLOSUM 40、BLOSUM 45、BLOSUM 50、BLOSUM 55、BLOSUM 60、BLOSUM 62、BLOSUM 65、BLOSUM70、BLOSUM 75、BLOSUM 80、BLOSUM 85或BLOSUM 90，或者通过简单比较要比较的两个肽序列中相应位置上存在的特定氨基酸来计算。同源性可以作为同一性/序列同一性的同义词使用。
可以在根据本公开的肽的任何一个或多个位置引入保守取代，只要变体保持功能即可。然而，也可能需要在一个或多个位置引入非保守取代(非同义取代)。
本文定义的任何氨基酸可以是L-或D-构型。若未特别说明，则优选指L-异构体形式。
标准和/或非标准氨基酸可以通过肽键(以形成线性肽链)或通过非肽键(例如经由氨基酸的可变侧链)连接。优选地，本发明的氨基酸通过肽键连接。
术语“肽”和“分离肽”在本文中可以互换使用。术语“变体”和“功能变体”在本文中可以互换使用。术语“片段”和“功能片段”在本文中可以互换使用。当本文提及“肽”时，该术语既包括对肽本身的提及，也包括对用于本文定义的用途的肽的提及。
在一个实施方案中，肽是非天然存在的。
在一个实施方案中，肽是合成的。
在一个实施方案中，肽是分离的肽。
在一个实施方案中，肽是标记的肽，例如放射性标记或荧光标记的肽。
在另一个实施方案中，本文定义的变体包括这样的序列：其中烷基氨基酸被烷基氨基酸取代，其中芳香族氨基酸被芳香族氨基酸取代，其中含硫氨基酸被含硫氨基酸取代，其中含羟基氨基酸被含羟基氨基酸取代，其中酸性氨基酸被酸性氨基酸取代，其中碱性氨基酸被碱性氨基酸取代，和/或其中二元单羧氨基酸被二元单羧氨基酸取代。
术语肽还包括通过化学或酶催化反应引入的翻译后修饰，如本领域所已知的。这些包括一个或多个氨基酸残基的乙酰化、磷酸化、甲基化、糖基化、糖化、酰胺化、羟基化、脱亚胺化、脱酰胺化、氨基甲酰化和硫酸化，以及通过已知蛋白酶(包括溶酶体组织蛋白酶)以及钙蛋白酶、分泌酶和基质-金属蛋白酶进行的蛋白水解修饰。
此外，肽的功能等同物可以包括化学修饰，例如泛素化、标记(例如用放射性核素、各种酶等)、聚乙二醇化(用聚乙二醇衍生化)，或通过插入(或通过化学合成取代)氨基酸(例如鸟氨酸)，这些氨基酸通常不会出现在人蛋白中(非蛋白原性)。
可以创制空间相似的化合物来模拟肽结构的关键部分。这可以通过本领域技术人员已知的建模和化学设计技术来实现。例如，可以采用酯化和其他烷基化来修饰例如二精氨酸肽骨架的氨基末端，以模拟四肽结构。应当理解，所有此类空间相似的构建体均落在本发明的范围内。具有N末端和C末端烷基化和酯化的肽也涵盖在本发明内。
连续或连贯的肽序列是通过肽键线性连接的连续氨基酸序列。连续和连贯的氨基酸序列在本文中可互换使用。
连接至少一个脂肪酸分子
本公开的肽三重激动剂的特征在于通过在所公开的氨基酸序列的C末端区域的氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。事实上，将脂肪酸连接在所公开的氨基酸序列的C末端区域上，例如在所公开的序列的16至43位中的任一个上，产生了hGIPR、hGLP-1R和hGLP-2R的三重肽激动剂，其针对hGIPR、hGLP-1R和hGLP-2R中的一种或多种具有高效力。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42、43和SEQ IDNO:44(例如SEQ ID NO:42至44)的C末端区域的任一个位置上的赖氨酸(K)处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的16位、17位、18位、19位、20位、21位、22位、23位、24位、25位、26位、27位、28位、29位、30位、31位、32位、33位、34位、35位、36位、37位、38位、39位、40位、41位、42位或43位中的任一个位置连接至少一个氨基酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的16位、17位、20位、33位、34位、37位或43位中的任一个位置连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的16、17、20至43位中的任一个位置的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的16位的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。在16位连接脂肪酸看起来特别适合获得对所有三种受体均具有高效力的GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的17位的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的20位的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的43位的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂通过在SEQ ID NO:42至44的C端连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
在一个实施方案中，在本公开的肽三重激动剂的残基33或34上的C端连接一个或多个脂肪酸导致肽三重激动剂具有降低的GLP-2R激活。相比之下，在一个实施方案中，在本公开的肽三重激动剂的残基42或43上的C端连接一个或多个脂肪酸导致肽三重激动剂具有高GLP-2R激活。
在本公开的一个实施方案中，脂肪酸分子为直链脂肪酸。
在本公开的一个实施方案中，所述脂肪酸分子是支链脂肪酸。
在本公开的一个实施方案中，所述脂肪酸分子为单酰基脂肪酸分子，包含一个脂肪酸。
在本公开的一个实施方案中，所述脂肪酸分子为二酰基脂肪酸分子。
在本公开的一个实施方案中，所述脂肪酸分子包含选自以下的酰基：CH3(CH2)8CO-(癸酰基(capriyl)，C10)、CH3(CH2)10CO-(月桂酰基，C12)、CH3(CH2)12CO-(肉豆蔻酰基，C14)、CH3(CH2)14CO-(棕榈酰基，C16)、CH3(CH2)16CO-(硬脂酰基，C18)和CH3(CH2)18CO-(花生酰基(arachidyl)，C20)。
在本公开的一个实施方案中，所述脂肪酸分子包含两个酰基，所述两个酰基独立地选自：HOOC-CH3(CH2)8CO-(癸酰基，C10)、HOOC-CH3(CH2)10CO-(十二酰基，C12)、HOOC-CH3(CH2)12CO-(1-十四酰基，C14)、HOOC-CH3(CH2)14CO-(十六酰基，C16)、HOOC-CH3(CH2)15CO-(15-羧基-十五酰基，C17)、HOOC-CH3(CH2)16CO-(十八酰基，C18)、HOOC-CH3(CH2)17CO-(17-羧基-十七酰基，C19)、HOOC-CH3(CH2)18CO-(二十酰基，C20)和HOOC-CH3(CH2)19CO-(19-羧基-十九酰基，C21)。
在一个实施方案中，所述脂肪酸分子是C16(棕榈酰基)。
在一个实施方案中，所述脂肪酸分子包含选自以下的酰基：COOH(CH2)8CO-(C10二酸)、COOH(CH2)10CO-(C12二酸)、COOH(CH2)12CO-(C14二酸)、COOH(CH2)14CO-(C16二酸)、COOH(CH2)16CO-(C18二酸)、COOH(CH2)18CO-(C20二酸)和COOH(CH2)20CO-(C22二酸)。
在本公开的一个实施方案中，所述脂肪酸分子直接连接至氨基酸残基，例如不存在间隔物或接头。
在本公开的一个实施方案中，所述脂肪酸分子经由间隔物或接头连接至氨基酸残基。
在一个实施方案中，间隔物是亲水性接头。在一个实施方案中，间隔物是非天然氨基酸亲水接头。
在一个实施方案中，间隔物是单独的间隔物部分的重复。在一个实施方案中，间隔物是相同间隔物部分的重复。在一个实施方案中，间隔物是不同间隔物部分的重复。
在一个实施方案中，脂肪酸分子经由间隔物以使间隔物的羧基与脂肪酸分子的氨基形成酰胺键的方式连接至氨基酸残基。
在一个实施方案中，间隔物包含一个或多个部分，所述多个部分独立地选自：
一个或多个氨基酸，所述氨基酸选自琥珀酸、Lys、Glu、Asp、4-Abu、γ-氨基丁酸；
γ-氨基丁酰基(γ-氨基丁酸)、γ-谷氨酰基(γ-谷氨酸)、β-天冬酰基、β-丙氨酰基和甘氨酰基中的一个或多个，以及
[γ-谷氨酸-8-氨基-3,6-二氧杂辛酸]n(γGlu-AEEAcn，)，其中，n为1至50之间的整数，例如1-2、2-3、3-4、4-5、5-6、6-7、7-8、8-9、9-10、10-11、11-12、12-13、13-14、14-15、15-20、20-25、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50之间的整数。
在本公开的一个实施方案中，间隔物或接头包含yGlu。
在本公开的一个实施方案中，间隔物包含yGlu或yGlu-yGlu或由yGlu或yGlu-yGlu组成。
在本公开的一些实施方案中，本文公开的肽双重激动剂被酰化，这在一些实施方案中增加了半衰期和体内稳定性，此外还使得肽双重激动剂成为GIPR和GLP-2R而非GLP-1R的选择性激动剂，并保留了它们的激动效力。
在一个实施方案中，本公开的肽三重激动剂选自：
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:1)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-OH(SEQ ID NO:2)，
H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-OH(SEQ ID NO:3)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:4)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:5)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:6)，
H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:7)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:8)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:9)，
H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:10)，
H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:11)，
H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:12)，
H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:13)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGK-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:14)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:15)，
Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:16)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(γGlu-C10)-NH2(SEQ ID NO:1)，
HADGTFTSDYSTILDNLAA-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-DFINWLIQT KGKK-OH(SEQ IDNO:17)，
HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGK-K(γGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:18)，
HADGTFTSDYSIILD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTK GKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:19)，
HADGTFTSDYSTILD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTK GKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:20)，
HADGTFTSDYST-Aib-LD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:21)，
HADGTFTSDYSTILDK-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-AARDFINWLIQTK GKKNDWKHNITQ-OH SEQ ID NO:22)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGK-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-NDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:23)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDW-K(2xAEEA-γGl u-C18-二酸)-HNITQ-OH(SEQ ID NO:24)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-K(2xA EEA-γGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:25)，
HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-OH SEQ ID NO:26)，和
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKIT-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-OH(SEQID NO:27)，
HADGTFISDYSTILDK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTK GKK-OH(SEQ IDNO:45)，
HADGTFISDYST-Aib-LDK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLI QTKGKK-OH(SEQID NO:46)，
HADGTFISDYSTILDNK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-AARDFINWLIQTK GKK-OH(SEQ IDNO:47)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQ IDNO:48)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQ IDNO:49)，
HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKGKKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQID NO:50)，
或其功能变体，其中所述功能变体包含1或2个单独的氨基酸取代。
肽三重激动剂的活性
在一个实施方案中，功能变体或片段保留与天然肽或其衍生的肽相同的生物活性或能力。
在一个实施方案中，肽三重激动剂(包括其功能变体或片段)能够实现以下一项或多项：
a.结合GIPR、GLP-1R和GLP-2R，和/或
b.激活GIPR、GLP-1R和GLP-2R，和/或
c.刺激GIPR、GLP-1R和GLP-2R激活，例如GIPR-、GLP-1R-和GLP-2R-介导的cAMP产生，和/或
d.抑制骨吸收，和/或
e.刺激骨形成。
在一个实施方案中，与天然hGIP相比，肽三重激动剂(包括其功能变体或片段)能够减少GIPR内化。这种效果可能是期望的，因为它可能导致长期治疗(数周、数月、数年)中持续的药理作用，并且不会导致GIPR脱敏。在Sameer等人.Mol Cell Biol.2014年10月1日；34(19):3618-29.doi:10.1128/MCB.00256-14中讨论了GIPR脱敏。
在一个实施方案中，与天然hGLP-1相比，肽三重激动剂(包括其功能变体或片段)能够减少GLP-1R内化。
在一个实施方案中，与天然hGLP-2相比，肽三重激动剂(包括其功能变体或片段)能够减少GLP-2R内化。
因此，本公开的肽三重激动剂可能偏向于一种受体，例如：
-与天然hGIP、hGLP-1、hGLP-2相比，本公开的一些肽三重激动剂可能能够减少GIPR、GLP-1R和GLP-2R中仅一种的内化，例如，它们可能能够仅减少GIPR的内化，或仅减少GLP-1R的内化，或仅减少GLP-2R的内化，从而偏向GIPR或GLP-1R或GLP-2R；
-本公开的一些肽三重激动剂可能能够减少GIPR、GLP-1R和GLP-2R中两种的内化，例如，它们可能能够减少GIPR和GLP-1R的内化，但它们可能无法减少GLP-2R的内化，因此偏向GLP-2R；
-本公开的一些肽三重激动剂可能能够减少所有三种GIPR、GLP-1R和GLP-2R的内化；因此本公开的此类肽三重激动剂是无偏向的。
在一个实施方案中，肽三重激动剂以及其功能变体或片段是GIPR、GLP-1R和GLP-2R的完全激动剂。
在一个实施方案中，肽三重激动剂能够结合并激活GIPR。在一些实施例中，GIPR是人GIPR(Uniprot编号P48546)。在一个实施方案中，肽三重激动剂能够结合并激活GLP-1R。在一些实施方案中，GLP-1R是人GLP-1R(Uniprot登录号P43220)。在一个实施方案中，肽三重激动剂能够结合并激活GLP-2R。在一些实施方案中，GLP-2R是人GLP-2R(Uniprot编号O95838)。
可以通过cAMP测定法实验评估本公开的肽三重激动剂的活性，如本文“实施例”中所描述的。这种cAMP测定法可用于确定EC50和Emax，以及其他相关参数。
在一个实施方案中，本文提供的肽三重激动剂能够
a.激活人GIPR，其功效(Emax值)为天然人GIP激活人GIPR的功效的至少65％，例如为天然人GIP激活人GIPR的功效的至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％；以及
b.激活人GLP-2R，其功效(Emax值)为天然人GLP-2激活人GLP-2R的功效的至少65％，例如为天然人GLP-2激活人GLP-2R的功效的至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％，并且
a.激活人GLP-1R，其功效(Emax值)为天然人GLP-1激活人GLP-1R的功效的至少65％，例如为天然人GLP-1激活人GLP-1R的功效的至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％。
在一个实施方案中，本文提供的肽三重激动剂能够
-以与天然GIP激活GIPR相同或增加的效力激活GIPR；
-以与天然GLP-1激活GLP-1R相同或增加的效力激活GLP-1R；以及
-以与天然GLP-2激活GLP-2R相同或增加的效力激活GLP-2R。
在一个实施方案中，本文提供的肽三重激动剂
a.对人GIPR的EC50为10nM或更少；
b.对人GLP-2R的EC50为50nM或更少，以及
c.对人GLP-1R的EC50为12nM或更少，例如为10nM或更少，例如为9nM或更少。
在一个实施方案中，本文提供的肽三重激动剂
a.对人GIPR的EC50为10nM或更少，例如9nM或更少；例如8nM或更少，例如7nM或更少，例如6nM或更少，例如5nM或更少，例如4nM或更少，例如3nM或更少，例如2nM或更少，例如1nM或更少；
b.对人GLP-2R的EC50为50nM或更少，例如40nM或更少，例如30nM或更少，例如25nM或更少，例如20nM或更少，例如15nM或更少，例如10nM或更少；且
c.对人GLP-1R的EC50为12nM或更少，例如10nM或更少，例如9nM或更少，例如8nM或更少，例如7nM或更少，例如6nM或更少，例如5nM或更少，例如4nM或更少，例如3nM或更少。
药物/医疗用途
本公开的一个方面是提供如本文其他地方所定义的肽三重激动剂、编码肽三重激动剂的核酸构建体、包含编码肽三重激动剂的核酸构建体的递送载体以及包含肽三重激动剂的组合物，其用作药物。
因此，本公开的一个方面是提供如本文所定义的肽三重激动剂，其用于抑制骨吸收和/或刺激骨形成的方法。
本公开的另一个方面是提供如本文所定义的肽三重激动剂，其用于抑制骨吸收和/或刺激骨形成的方法。
还提供了本文所定义的肽三重激动剂在制造用于抑制骨吸收和/或刺激骨形成的药物中的用途。
还提供了抑制骨吸收和/或刺激骨形成的方法，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的本文所定义的肽三重激动剂。
本公开的另一方面是提供如本文所定义的肽三重激动剂，其用于治疗骨病症的方法。在一个实施方案中，骨病症是与骨吸收增加和/或骨形成减少相关的病症。在一个实施方案中，骨病症与骨密度差或降低相关。
还提供了如本文所定义的肽三重激动剂，其用于治疗骨病症(包括治疗、预防和缓解所述骨病症)的方法。
还公开了本文所公开的肽三重激动剂，其用于治疗骨病症的方法。
骨密度或骨矿物质密度(BMD)是骨组织中的骨矿物质的量。该概念是每体积骨的矿物质质量(与物理意义上的密度有关)，尽管临床上它是根据成像时骨骼表面每平方厘米的光密度来替代测量的。骨密度测量在临床医学中用于作为骨质疏松症/骨质减少和骨折风险的间接指标。它是通过一种称为密度测定法的程序来测量的。骨密度较低与骨折概率较高之间存在统计学关联。骨密度测量用于筛查人们患骨质疏松症的风险，并确定哪些人可以从提高骨强度的措施中受益。
T分数是筛查骨质疏松症时的相关指标。它是与年轻正常参考平均值相比时部位的骨矿物质密度(BMD)。世界卫生组织的标准是：
正常是T分数为-1.0或更高
骨质减少定义为介于-1.0至-2.5之间
骨质疏松症的定义是-2.5或更低，即骨密度比年轻正常参考值的平均值低两个半标准差。
在一个实施方案中，骨病症与-1.0或更低的T分数相关，例如介于-1.0和-2.5之间，例如-2.5或更低。
在一个实施方案中，提供了如本文所定义的肽三重激动剂在制造用于治疗骨病症的药物中的用途。
还提供了治疗骨病症的方法，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的本文所定义的肽三重激动剂。
本文所提及的有需要的个体是可以从三重激动剂肽的施用中受益的个体。这样的个体可以患有骨病症或具有患有骨病症的风险。个体可以是任何人，男性或女性、婴儿、中年或老年人。个体中待治疗或预防的病症可能与个体的年龄、个体的总体健康状况、用于治疗个体的药物以及个体是否有患有可能诱发或已诱发骨密度病症的疾病或病症的既往病史有关。
在一个实施方案中，骨病症选自骨质减少(osteopenia)、骨质疏松症(osteoporosis)、重度骨质疏松症(severe osteoporosis)、绝经后骨质疏松症(post-menopausal osteoporosis)、特发性骨质疏松症(iodiopathic osteoporosis)、骨软化症(osteomalacia)、佝偻病(rickets)、囊性纤维性骨炎(osteitis fibrosa cystic，OFC)和佩吉特骨病(Paget's disease of bone)。
在一个实施方案中，骨病症是骨质减少。
在一个实施方案中，骨病症是骨质疏松症。
在一个实施方案中，骨病症是绝经后骨质疏松症。
在一个实施方案中，骨病症是特发性骨质疏松症，例如青少年特发性骨质疏松症。
本公开的另一方面是提供如本文所定义的肽三重激动剂，其用于治疗患有杜氏肌营养不良症(DMD)或脑瘫的个体的骨质疏松症(例如特发性骨质疏松症)的方法。
在一个实施方案中，骨病症是继发性病症，例如患有杜氏肌营养不良症(DMD)或脑瘫的个体的继发性病症。
在一个实施方案中，骨病症是继发性病症，例如正在接受类固醇(例如糖皮质激素)治疗和/或无法活动的个体的继发性病症。
特发性骨质疏松症是指年轻、健康、未绝经或没有其他可识别的骨质疏松症继发原因的个体在轻微创伤或无创伤的情况下发展出骨质减少和骨折。
还公开了选自SEQ ID NO:XXX的肽三重激动剂，或其功能变体，或其功能片段，其用于治疗骨病症的方法，所述骨病症选自骨质减少、骨质疏松症、重度骨质疏松症、骨软化症、佝偻病、囊性纤维性骨炎(OFC)和佩吉特骨病。
在一个实施方案中，提供了选自SEQ ID NO:42至44的肽三重激动剂，或其功能变体，或其功能片段，其用于治疗骨质减少的方法。
在一个实施方案中，提供了选自SEQ ID NO:42至44的肽三重激动剂，或其功能变体，或其功能片段，其用于治疗骨质疏松症的方法。
在一个实施方案中，提供了选自SEQ ID NO:42至44的肽三重激动剂，或其功能变体，或其功能片段，其用于治疗患有杜氏肌营养不良症(DMD)或脑瘫的个体的骨质疏松症的方法。
联合疗法
本发明的另一个方面是提供如本文所定义的肽三重激动剂，其用于与另外的活性药物成分联合使用。在一个实施方案中，所述另外的活性成分可用于治疗骨病症，例如与骨密度降低相关的骨病症。
在一个实施方案中，另外的活性药物成分选自：双膦酸盐，包括阿仑膦酸盐(Fosamax)、利塞膦酸盐(Actonel、Atelvia、Benet)、伊班膦酸盐(Boniva)、唑来膦酸(Reclast、Aclasta、Zometa)、依替膦酸(Didronel)、帕米膦酸(Aredia/Pamimed)、替鲁膦酸(Skelid)；雌激素替代疗法；激素疗法；激素样药物，包括雷洛昔芬(Evista)；降钙素(Fortical和Miacalcin)、地诺单抗(Prolia)；特立帕肽(Forteo)；维生素D(阿法骨化醇或骨化三醇)；钙或磷补充剂。
在一个实施方案中，另外的活性药物成分增加本发明肽三重激动剂的半衰期。在一个实施方案中，另外的活性药物成分是二肽基肽酶4的抑制剂(DPP-4/DDP-IV抑制剂)或格列汀类药物(gliptins)。实例包括西他列汀(Sitagliptin)、维达列汀(Vildagliptin)、沙格列汀(Saxagliptin)、利拉利汀(Linagliptin)、吉米列汀(Gemigliptin)、阿拉格列汀(Anagliptin)、特力利汀(Teneligliptin)、阿格列汀(Alogliptin)、曲格列汀(Trelagliptin)、度格列汀(Dutogliptin)和奥格列汀(Omarigliptin)(MK-3102)
编码三重激动剂肽的核酸构建体
在一个实施方案中，提供了编码如本文所定义的三重激动剂肽的核酸构建体。在一个实施方案中，所述核酸构建体将能够长时间持续表达所述肽；例如至少1个月，例如至少2个月，例如至少3个月，例如至少4个月，例如至少5个月，例如至少6个月，例如至少7个月，例如至少8个月，例如至少9个月，例如至少12个月。
因此，一方面是提供编码如本文所定义的肽三重激动剂的核酸构建体。
在一个实施方案中，提供了编码SEQ ID NO:42至44或其功能变体、或其功能片段的肽三重激动剂或本文公开的任何肽三重激动剂的核酸构建体。
另一个方面是提供编码本文所定义的三重激动剂肽的核酸构建体，其用于治疗骨病症的方法。
核酸构建体理解为基因工程核酸。核酸构建体可以是非复制性的线性核酸、环状表达载体或自复制质粒。核酸构建体可包含若干元件，例如但不限于基因或其片段、启动子、增强子、终止子、多聚腺苷酸尾、接头、多聚接头、有效接头、多克隆位点(MCS)、标志物、终止密码子、内部核糖体进入位点(IRES)和用于整合的宿主同源序列或其他定义的元件。应当理解，根据本发明的核酸构建体可以包含上述元件的全部或任何组合的子集。
工程化核酸构建体的方法是本领域众所周知的(参见例如Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Sambrook等人编辑,Cold Spring Harbor Laboratory,第2版,ColdSpring Harbor,N.Y.,1989)。此外，本发明的核酸构建体可以不用模板来合成，并且可以从各个商业供应商(例如Genscript Corporation)处获得。
在一个实施方案中，核酸构建体是包含编码三重激动剂肽的序列的裸DNA构建体。
递送载体(Delivery vehicles)
另一个方面是提供包含在递送载体内的如上所述的核酸构建体。递送载体是一种可将核苷酸序列或多肽或这两者从至少一种介质运输到另一种介质的实体。递送载体通常用于表达核酸构建体内编码的序列和/或用于细胞内递送构建体或其中编码的多肽。
在一个实施方案中，提供了包含如本文所定义的核酸构建体的递送载体。递送载体可以选自：基于RNA的媒介物、基于DNA的媒介物/载体、基于脂质的媒介物(例如脂质体)、基于聚合物的媒介物(例如阳离子聚合物DNA运载体)、胶体金颗粒(涂层)和病毒衍生的DNA或RNA媒介物或载体。
非病毒递送的方法包括物理方法(无载体递送)和化学方法(基于合成载体的递送)。
物理方法，包括针注射、基因枪、喷射注射、电穿孔、超声波和流体动力学递送，利用穿透细胞膜并促进细胞内基因转移的物理力。所述物理力可以是电力或机械力。
化学递送载体的实例包括但不限于：可生物降解的聚合物微球、基于脂质的制剂如脂质体载体、带阳离子电荷的分子如脂质体、钙盐或树枝状聚合物、脂多糖、多肽和多糖。
另一个实施方案包括一种载体，其在本文中被称为病毒载体(即不是病毒)作为递送载体。根据本发明的病毒载体由修饰的病毒基因组(即形成病毒基因组的实际DNA或RNA)制成，并以裸形式引入。因此，由病毒或非病毒蛋白构成的围绕病毒基因组的任何包被结构都不属于病毒载体的一部分。
病毒载体所来源的病毒可以选自以下非穷尽组：腺病毒、逆转录病毒、慢病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、牛痘病毒、泡沫病毒、巨细胞病毒、塞姆利基森林病毒、痘病毒、RNA病毒载体和DNA病毒载体。此类病毒载体是本领域中众所周知的。
在一个实施方案中，所述病毒载体可以选自腺病毒、慢病毒、腺相关病毒(AAV)和重组腺相关病毒(rAAV)。在一个优选实施方案中，所述病毒载体是治疗性rAAV载体，例如治疗性rAAV载体。
腺病毒是一组含有双链DNA的病毒。腺病毒可以通过基因改造变得无法复制或有条件地无法复制。以这种形式，作为腺病毒构建体或腺病毒载体，它们可以用作疫苗接种或基因疗法的基因递送载体。
重组细胞
另一方面涉及包含如本文所定义的核酸构建体的细胞。这种重组细胞可以用作体外研究的工具、核酸构建体的递送载体或基因疗法方案的一部分。核酸构建体可以通过本领域众所周知的技术引入细胞，包括将DNA显微注射到细胞核中、转染、电穿孔、脂质转染/脂质体融合和粒子轰击。合适的细胞包括自体细胞和非自体细胞，并且可以包括异种细胞。
制备方法(肽)
本文所定义的三重激动剂肽可以通过本领域已知的任何方法制备；例如通过标准肽制备技术，包括溶液合成或Merrifield型固相合成。
在一个实施方案中，根据本发明的肽是合成制造或生产的。肽的合成生产方法是本领域众所周知的。关于生产合成肽的详细描述以及实用建议可以在以下文献中找到：Synthetic Peptides:AUser's Guide(Advances in Molecular Biology),Grant G.A.编,Oxford University Press,2002，或Pharmaceutical Formulation:Development ofPeptides and Proteins,Frokjaer和Hovgaard编,Taylor and Francis,1999。
在一个实施方案中，本发明的肽或肽序列是合成产生的，特别是通过序列辅助肽合成(SAPS)方法、通过溶液合成、通过固相肽合成(SPPS)例如Merrifield型固相合成、通过重组技术(由包含编码肽的第一核酸序列的宿主细胞产生，所述第一核酸序列与能够指导所述宿主细胞中表达的第二核酸有效地结合)或酶法合成。这些对于本领域技术人员而言是众所周知的。
肽可以采用全自动肽合成仪分批合成，所述全自动肽合成仪使用9-芴甲氧羰基(Fmoc)或叔丁氧羰基(Boc)作为N-a-氨基保护基，并使用合适的常见侧链官能性的保护基。
通过反相HPLC等方法纯化后，可以进一步加工肽以获得例如C末端或N末端修饰的亚型。末端修饰的方法是本领域中众所周知的。
例如，可以使用下列缀合脂肪酸的方法。除去最后一个N末端N-Fmoc后，在3当量HATU和6当量DIPEA的存在下，通过3当量1,16-十六烷二酸处理对N末端氨基进行酰化。作为替代方案，在酰化位置使用具有Dde保护的侧链的赖氨酸进行固相肽合成。肽链组装完成后，在6当量DIPEA的存在下，用3当量Boc2O对N末端氨基进行封端。然后通过2％肼/DMF(v/v)处理去除保护基团Dde。作为替代方案，可以使用3当量棕榈酰氯在6当量DIPEA存在下进行棕榈酰化。或者3当量1,16-十六烷二酸可以被HATU/DIPEA活化，然后与赖氨酸侧链缀合。作为另一种替代方案，使用DIC/HOBT标准方案将Fmoc-γ-Glu(tBu)-OH或Fmoc-4-Abu-OH或Fmoc-β-Ala-OH或Fmoc-AEEAc-OH缀合至Lys侧链。然后在6当量DIPEA的存在下，通过3当量棕榈酰氯处理对非天然氨基酸的N末端氨基进行棕榈酰化。
药物组合物及制剂
尽管可以将本文所定义的三重激动剂肽作为原始化学品(肽)进行施用，但有时优选以药物制剂的形式呈现它们。这样的药物制剂可以称为药物组合物、药学上可接受的组合物或药学上安全的组合物。
因此，还提供了一种药物制剂，其包含本文所定义的三重激动剂肽，或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的运载体、赋形剂和/或稀释剂。可以通过常规技术，例如，如Remington:The Science and Practice of Pharmacy 2005,Lippincott,Williams&Wilkins中所述，来制备药物制剂。
还旨在涵盖本发明的肽化合物的药学上可接受的盐(当它们可以被制备时)。这些盐是在其应用于制药用途时可接受的盐。这意味着该盐将保留母体化合物的生物活性，并且该盐在其应用和用于治疗疾病时不会产生不良或有害的作用。
药学上可接受的盐以标准方式制备。如果母体化合物是碱，则在合适的溶剂中用过量的有机或无机酸进行处理。如果母体化合物是酸，则在合适的溶剂中用无机或有机碱处理。
肽化合物可以以其碱金属或碱土金属盐的形式与药学上可接受的载体或稀释剂同时或一起施用，尤其且优选以其药物组合物的形式，无论是通过口服、直肠或肠胃外(包括皮下)途径，以有效量施用。
药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自矿物酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸)和有机酸(例如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸、对甲苯磺酸和芳基磺酸)的盐。
本发明的肽的药学上可接受的盐优选处于具有生理学可接受的pH的溶液中，即，包含肽盐的溶液优选具有临床使用可接受的pH。
本文提供了包含本文所定义的肽三重激动剂；或包含所述肽三重激动剂的多聚化合物；或包含/编码所述肽三重激动剂的核酸构建体的组合物。
给药和剂量
在本公开的一个实施方案中，以药学有效剂量或治疗有效量向需要治疗的个体施用本文所定义的肽或编码所述肽的核酸构建体或包含肽的组合物。剂量要求将随着使用的具体药物组合物、给药途径和所治疗的具体受试者而变化，这取决于病症的严重程度和类型以及受试者的体重和一般状态。本领域技术人员还应当认识到，个体剂量的最佳数量和间隔将由所治疗的病况的性质和程度；给药形式、途径和部位以及所治疗的特定患者决定，并且这种最佳量可以通过常规技术确定。本领域技术人员还应当理解，最佳疗程，即在规定天数内每天给予的化合物的剂量数可以使用常规疗程确定试验来确定。
在一个实施方案中，每天至少一次，例如每天一次、例如每天两次、例如每天三次、例如每天四次、例如每天五次，施用肽或组合物。
还可以以间歇性间隔或间隔方式施用剂量，由此不是每天都施用剂量。相反地，可以每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周或者在这些范围内的间隔(诸如每2至4周或者4至6周)施用一个或多个剂量。
在一个实施方案中，每周一次施用肽或组合物。利用这样的给药方式可以获得持续暴露于本公开的肽三重激动剂的效果。
本领域技术人员知道，如果增加每天给药次数，则每次给药所要施用的剂量可以相应减少。同样，如果每次给药的持续时间减少，则可以相应增加剂量。
给药途径
应当理解，优选的给药途径将取决于待治疗的受试者的一般状况和年龄、待治疗的病况的性质、待治疗的组织的体内位置和所选的活性成分。
全身治疗
对于全身治疗，给药途径能够将肽、编码所述肽的核酸构建体或包含该肽的组合物引入血流中，以最终靶向所需作用的部位。
此类给药途径是任何合适的途径，例如肠内途径(包括口服、直肠、鼻腔、肺、口腔、舌下、透皮、脑池内和腹膜内给药)和/或肠胃外途径(包括皮下、肌肉内、鞘内、脑内、静脉内和皮内给药)。
肠胃外给药
肠胃外给药是指除口服/肠内途径之外的任何给药途径，通过这种方式药物可以避免在肝脏中的首过降解。因此，肠胃外给药包括任何注射和输注，例如推注注射或持续输注，例如静脉内给药、肌内给药或皮下给药。此外，肠胃外给药包括吸入和外用给药。
因此，化合物可以外用给药以穿过要给予生物活性物质的动物的任何粘膜，例如鼻、阴道、眼、口、生殖道、肺、胃肠道或直肠中的粘膜，优选鼻或口的粘膜，并且因此，肠胃外给药还可以包括颊、舌下、鼻、直肠、阴道和腹膜内给药以及通过吸入或装置的肺和支气管给药。此外，该药剂也可以外用给药以穿过皮肤。
局部治疗
在一个实施方案中，本文所定义的肽、或编码所述肽的核酸构建体或包含肽的组合物可以用作局部治疗，即，直接引入到作用部位。因此，它可以直接应用于皮肤或粘膜，或者可以注射到作用部位，例如注射到患病组织中或注射到直接通向患病组织的末端动脉中。
多部分试剂盒
本发明还涉及多部分试剂盒，其包含一种或多种上述药剂(肽、核酸构建体或组合物)以及至少一种额外或另外的组分。
在一个实施方案中，多部分试剂盒包含一种或多种本文所定义的用于治疗、预防或缓解骨病症、骨质疏松症和骨质减少的药剂。本文所定义的试剂盒允许同时、连续或单独施用根据本发明的活性剂和/或本文其他地方描述的一种或多种第二活性成分。
实施例
实施例1.GIPR、GLP-2R和GLP-1R的肽三重激动剂
材料和方法
材料
所有应用的肽均由中国上海WuXi AppTec合成，纯度经HPLC分析测定为至少95％或以上，并使用质谱法检查正确的分子量。体外实验应用的人GIPR、GLP-2R、GLP-1R均购自美国Rockville市的Origene公司。人N末端SNAP标记的GIPR由法国Codolet市的Cisbio公司定制生产。
如表1所提供的，在16、17、20、30、33、37位或C末端氨基酸残基(C末端)添加C10、C12或C16或C16-二酸酰基，以提高三重激动剂的效力。
结果：
获得了表1所列的肽三重激动剂。
实施例2.效力
方法
COS-7细胞在补充有10％胎牛血清(FBS)、2mM谷氨酰胺、180单位/ml青霉素和45μg/ml链霉素的杜氏改良Eagle培养基(DMEM)1885中在10％ CO2和37℃的条件下培养。在实验前使用先前描述的磷酸钙沉淀法(van der Velden等人,2021)进行COS-7细胞的瞬时转染。
转染后第二天将表达人GIPR、GLP-2R或GLP-1R的瞬时转染的COS-7细胞接种在白色96孔板中，密度为35,000个细胞/孔。第二天，通过用HEPES缓冲盐水(HBS)清洗，然后用测定缓冲液(HBS添加1mM异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX))在37℃下孵育30分钟开始测定。然后添加配体，并在37℃下再孵育30分钟。配体孵育后，根据制造商的说明进行cAMP测定(Eurofins DiscoverX，Fremont，150USA)。采用PerkinElmerTMEnVision 2014多标签读取器(PerkinElmer，Waltham，MA)测量发光。使用GraphPad Prism 9(San Diego，California，USA)通过非线性回归确定效力(EC50值)。S形曲线是经过逻辑拟合的。通过标准化到每个受体所应用的内源性配体的最高浓度来确定功效(Emax值)。
结果
从表2、3和4可以看出，通过在C末端区域的某个位置(例如16、17、20、33、37位及最C末端的氨基酸)连接一个脂肪酸分子，可以获得强效GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂。参见比较化合物编号29，其在例如N末端区域的11位脂化，导致GLP-1R活性很小或没有活性。
在具有1-33或1-34骨架的化合物的C端连接脂肪酸导致GLP-2R激活降低(参见例如化合物19)。对于在具有较长骨架(1-43或1-44)的化合物的42或43位的C端连接脂肪酸的化合物，没有观察到同样的激活损失，参见例如化合物24-26。
用谷氨酸(E)取代3位的天冬氨酸(D)看起来降低了对所有三种受体GIPR、GLP-2R和GLP-1R的效力，并因此给出不太有效力的GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂，参见例如化合物11。类似地，用谷氨酸(E)取代13位的异亮氨酸(I)看起来降低了对所有三种受体GIPR、GLP-2R和GLP-1R的效力，并因此给出不太有效力的GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂，参见例如化合物13。
用酪氨酸(Y)取代1位的组氨酸(H)看起来增加了GIPR的激活，同时看起来降低了GLP-1R的激活，参见例如化合物16。
7位的苏氨酸看起来被所有三种受体GIPR、GLP-2R和GLP-1R高度接受，并因此给出强效GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂，特别是增加GLP-1R活性。
11位的丝氨酸(S)看起来增加了对GLP-2R的效力，并因此给出偏向于GLP-2R的强效GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂。
在16位连接脂肪酸看起来特别适合获得对所有三种受体均具有高效力的GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂。与16位连接脂肪酸相比，参见例如化合物30，在17位连接脂肪酸，参见例如化合物32，看起来导致了cAMP中GIP效力的损失(>10倍)以及GLP-2R激活的轻微损失，但不会导致GLP-1R激活的损失。
16位的丙氨酸看起来非常适合获得GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂，尤其是增加GLP-1R活性。
包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:Z)(hGIP(34-42)的C末端部分)的肽看起来非常适合获得强效GIPR/GLP-2R/GLP-1R三重激动剂。
C末端羧化(-COOH)看起来增加了GIPR和GLP-1R激活并降低GLP-2R激活，参见例如化合物2。
表2.所测试的GIPR、GLP-2R和GLP-1R肽三重激动剂关于人GIPR的EC50(效力)和Emax(功效)。
表3.所测试的GIPR、GLP-2R和GLP-1R肽三重激动剂关于人GLP-2R的EC50(效力)和Emax(功效)。
表4.所测试的GIPR、GLP-2R和GLP-1R肽三重激动剂关于人GLP-1R的EC50(效力)和Emax(功效)。
实施例3：内化方法
HEK293A细胞在补充有10％ FBS、180单位/mL青霉素和45μg/mL链霉素的DMEM-GlutaMAXTM-I中在10％ CO2和37℃下进行培养。根据制造商关于受体内化测定的说明，使用来自Thermo Fischer Scientific(Massachusetts，USA)的Lipofectamine 2000转染这些细胞。
转染当天将瞬时表达人SNAP标记的GIPR、人SNAP标记的GLP-1R或人SNP标记的GLP-2R的HEK293A细胞以15,000个细胞/孔的密度接种在白色384孔板中。第二天，除去培养基并添加新的新鲜培养基。第三天，运行测定。首先，在OptiMEM中在37℃下用100nM Tag-Lite SNAP-Lumi4-Tb(供体)标记细胞60分钟。接下来，用内化缓冲液(补充有1mM CaCl2、1mM MgCl2和20mM HEPES的HBBS)清洗细胞四次，然后加入100μM预热的荧光素-O'-乙酸(受体)。在配体刺激之前将板放入37℃培养箱中5分钟，以调节温度，然后读取板。然后用37℃预热的配体溶液刺激细胞，并在37℃下在PerkinElmerTMEnVision 2014多标记读取器(PerkinElmer，Waltham，MA)中每三分钟测量一次内化情况，持续60分钟。类似地，计算了浓度最高至1μM的S形曲线的AUC值。
结果
总体而言，数据表明，尽管程度不同，但测试的三重激动剂比天然GIP诱导更少的GIPR内化，并且比天然GLP-2诱导更少的GLP-2R内化。一些测试的三重激动剂还比天然GLP-1诱导更少的GLP-1R内化，而其他测试的三重激动剂比天然GLP-1诱导略微更多的内化。
内化的减少通常与β-拦阻蛋白2的募集减少相关联。
脂肪酸连接于本公开的三重激动剂肽的33位的C末端与总体上较低的内化和对GIPR受体的内化偏向相关联，其中GLP-1R和GLP-2R的内化非常低或没有内化。参见例如化合物编号1-17、19、28、33-35(部分数据报告于表5-7中)。相比之下，在43位的C端脂化的化合物编号26和27引起更高程度的GIPR内化。
数据还表明，具有1-42或1-43骨架的化合物在16位脂化，例如化合物20、21、22，导致对GLP-1和GLP-2受体的无偏向内化(与天然GLP-1和GLP-2相当)，但导致对GIPR的偏向内化(与天然GIP相比内化减少)。
数据还表明，具有1-33、1-34骨架的化合物在16位脂化，参见例如化合物30、31、32，也导致对GLP-1R的偏向内化，但对GLP-2R的偏向较少。不受理论束缚，i)短肽骨架比长肽骨架相对于内源性激动剂GIP、GLP-1R和/或GLP-2R更能产生针对GIPR之一的偏向，并且ii)C端脂化与最多的偏向(就内化损失而言)相关。
13位存在Aib导致略微更大的GIPR内化损害(更多的偏向)，参见例如化合物26相较于化合物27以及化合物30相较于化合物31。
2位存在Aib，例如化合物28，导致内化增加，其中内源性GIP的相对AUC为58％，与之相比，化合物35和化合物34为39％。然而，与内源性激动剂GIP相比，它们具有更低的内化偏向。
表5.关于人GIPR，所测试的GIPR、GLP-1R和GLP-2R肽三重激动剂的绝对(AUC＝曲线下面积)和相对(％)hGIPR内化。
表6.关于人GLP-1R，所测试的GIPR、GLP-1R和GLP-2R肽三重激动剂的绝对(AUC＝曲线下面积)和相对(％)hGLP-1R内化。
表7.关于人GLP-2R，所测试的GIPR、GLP-1R和GLP-2R肽三重激动剂的绝对(AUC＝曲线下面积)和相对(％)hGLP-2R内化。
实施例4.序列概述
本文提供的K(γGlu-C16)应理解为经由γGlu接头将脂肪酸C16连接至赖氨酸的侧链氨基。因此，yGlu接头直接与赖氨酸侧链上的氨基连接，而脂肪酸直接与yGlu连接。这同样适用于下文括号中列出的其他脂肪酸和接头。
化合物1：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:1)，
化合物2：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:2)，
化合物3：H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:3)，
化合物4：H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:4)，
化合物5：H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:5)，
化合物6：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:6)，
化合物7：H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:7)，
化合物8：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:8)，
化合物9：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:9)，
化合物10：H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:10)，
化合物11：H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:11)，
化合物12：H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:12)，
化合物13：H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:13)，
化合物14：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-NH2(SEQ ID NO:14)，
化合物15：H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:15)，
化合物16：Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:16)，
化合物17：H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK-NH2(SEQ ID NO:1)，
化合物18：HADGTFTSDYSTILDNLAAKDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:17)，
化合物19：HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:18)，
化合物20：HADGTFTSDYSIILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHN ITQ-OH(SEQ ID NO:19)，
化合物21：HADGTFTSDYSTILD-KLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHN ITQ-OH(SEQ ID NO:20)，
化合物22：HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQ-OH(SEQ IDNO:21)，
化合物23：HADGTFTSDYSTILDKKAARDFINWLIQTKGKKNDWKH NITQ-OH(SEQ ID NO:22)，
化合物24：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHN ITQ-OH(SEQ ID NO:23)，
化合物25：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHN ITQ-OH(SEQ ID NO:24)，
化合物26：HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNI TQK-OH(SEQ ID NO:25)，
化合物27：HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWK HNITQK-OH(SEQ IDNO:26)，
化合物28：H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:27)，
化合物29：H-Aib-DGTFISDY-KTILDNLAARDFINWLIQTKITK-OH(SEQ ID NO:28)，
化合物30：HADGTFISDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:45)，
化合物31：HADGTFISDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:46)，
化合物32：HADGTFISDYSTILDNKAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:47)，
化合物33：HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:48)，
化合物34：HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKKK-OH(SEQ ID NO:49)，
化合物35：HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKGKKK-OH(SEQ ID NO:50)，
NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)
NDWK(SEQ ID NO:30)
NDWKH(SEQ ID NO:31)
NDWKHN(SEQ ID NO:32)
NDWKHNI(SEQ ID NO:33)
NDWKHNIT(SEQ ID NO:34)
NDWKHNITQ(SEQ ID NO:35)
AEWKHAITQ(SEQ ID NO:36)
YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:37)
HDEFERHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG(SEQ ID NO:38)
HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(SEQ ID NO:39)
HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG(SEQ ID NO:40)
HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD(SEQ ID NO:41)
HX2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:42)
HX2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:43)
HX2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:44)
参考文献
Van der Velden et al.2021.GLP-1Val8:A Biased GLP-1R Agonist withAltered Binding Kinetics and Impaired Release of Pancreatic Hormones inRats
项目
1.一种肽三重激动剂，其包含以下序列或由以下序列组成：
X1X2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:42)-J，
其中
X1是H或Y
X2是A或Aib，
X3是D或E，
X7是I、S或T，
X11是S或A，
X12是T或I，
X13是I、Aib或E，
X15是D或E，
X16是N、L、A、K或E，
X17是L、K或I，
X20是R或K，
X21是D、E或K，
X24是N或E，
X28是Q、A或K，
X29是T、Q或K，
X30是R或K，
X31是I或G，且
X32是T或K，
其中J为包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)的一个或多个氨基酸残基的肽或被省略，
条件是当X7为I时，则X2为Aib，并且当X2为A时，则X7为S或T，
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，并且
其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂、为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂，且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
2.一种肽三重激动剂，其包含以下序列或由以下序列组成：
X1X2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:43)-J
其中
X1是H或Y
X2是Aib，
X3是D或E，
X7是I、S或T，
X11是S或A，
X12是T或I，
X13是I、Aib或E，
X15是D或E，
X16是N、L、A、K或E，
X17是L、K或I，
X20是R或K，
X21是D、E或K，
X24是N或E，
X28是Q、A或K，
X29是T、Q或K，
X30是R或K，
X31是I或G，且
X32是T或K，
其中J为包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)的一个或多个氨基酸残基的肽或被省略，
其中所述肽通过在SEQ ID NO:43的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，并且
其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂、为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂，且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
3.一种肽三重激动剂，其包含以下序列或由以下序列组成：
X1X2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:44)-J
其中
X1是H或Y
X2是A或Aib，
X3是D或E，
X7是S或T，
X11是S或A，
X12是T或I，
X13是I、Aib或E，
X15是D或E，
X16是N、L、A、K或E，
X17是L、K或I，
X20是R或K，
X21是D、E或K，
X24是N或E，
X28是Q、A或K，
X29是T、Q或K，
X30是R或K，
X31是I或G，且
X32是T或K，
其中J为包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)的一个或多个氨基酸残基的肽或被省略，
其中所述肽通过在SEQ ID NO:44的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，并且
其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂，为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
4.根据项目1所述的肽三重激动剂，其中所述SEQ ID NO:42的C末端区域由SEQ IDNO:42的16位至C端的氨基酸残基组成。
5.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述SEQ ID NO:42的C末端区域由SEQ ID NO:42的氨基酸残基16至33组成。
6.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述SEQ ID NO:42的C末端区域由SEQ ID NO:42的氨基酸残基16至43组成。
7.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的16至33位中的任一个位置上和/或J(SEQ ID NO:29)的任一个位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
8.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X2是Aib，并且
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C端连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
9.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X2是Aib，并且
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的33位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
10.根据前述项目中任一项所述的肽，其中X16为N、L、A或E，并且
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C端连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
11.根据前述项目中任一项所述的肽，其中X17是L或I。
12.根据前述项目中任一项所述的肽，其中X20是R。
13.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X7为T。
14.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X7是S。
15.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X13是Aib。
16.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X16是N、A或K。
17.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X28是Q。
18.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X29为T。
19.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X30是K。
20.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X2为Aib，X31为I，且X32为T。
21.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X2为Aib，X31为G，且X32为K。
22.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X7为T或S，X31为G，且X32为K。
23.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X7为T，X31为G，且X32为K。
24.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中J被省略。
25.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中J选自K、NDWKHNITQ、NDWKHNITQK。
26.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽选自：
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:1)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:2)，
H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:3)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:4)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:5)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:6)，
H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:7)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:8)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKITK(SEQ ID NO:9)，
H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:10)，H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:11)，
H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:12)，
H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:13)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK(SEQ ID NO:14)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:15)，
Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:16)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:1)，
HADGTFTSDYSTILDNLAAKDFINWLIQTKGKK(SEQ ID NO:17)，HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK(SEQ ID NO:18)，
HADGTFTSDYSIILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:19)，
HADGTFTSDYSTILD-KLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:20)，
HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:21)，
HADGTFTSDYSTILDKKAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:22)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:23)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:24)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQK(SEQ ID NO:25)，
HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ K(SEQ ID NO:26)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:27)，
HADGTFISDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:45)，
HADGTFISDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:46)，
HADGTFISDYSTILDNKAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:47)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:48)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKKK-OH(SEQ ID NO:49)，和
HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKGKKK-OH(SEQ ID NO:50)，
或其功能变体，其中所述功能变体包含1个或2个单独的氨基酸取代。
27.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽是C末端酰胺化的(-NH2)或其中C端是羧酸。
28.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C末端区域的任一位置上的赖氨酸(K)处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
29.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的16位、17位、18位、19位、20位、21位、22位、23位、24位、25位、26位、27位、28位、29位、30位、31位、32位、33位、34位、35位、36位、37位、38位、39位、40位、41位、42位或43位中的任一个位置连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
30.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的16位、17位、20位、33位、34位、37位或43位中的任一个位置连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
31.根据项目1、9至11中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ IDNO:42的16、17、20至43位中的任一个位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
32.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子是直链脂肪酸。
33.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子是支链脂肪酸。
34.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子是包含一个脂肪酸的单酰基脂肪酸分子。
35.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子是二酰基脂肪酸分子。
36.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子包含选自以下的酰基：CH3(CH2)8CO-(癸酰基，C10)、CH3(CH2)10CO-(月桂酰基，C12)、CH3(CH2)12CO-(肉豆蔻酰基，C14)、CH3(CH2)14CO-(棕榈酰基，C16)、CH3(CH2)16CO-(硬脂酰基，C18)和CH3(CH2)18CO-(花生酰基，C20)。
37.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子包含两个酰基，所述两个酰基独立地选自HOOC-CH3(CH2)8CO-(癸酰基，C10)、HOOC-CH3(CH2)10CO-(十二酰基，C12)、HOOC-CH3(CH2)12CO-(1-十四酰基，C14)、HOOC-CH3(CH2)14CO-(十六酰基，C16)、HOOC-CH3(CH2)15CO-(15-羧基-十五酰基，C17)、HOOC-CH3(CH2)16CO-(十八酰基，C18)、HOOC-CH3(CH2)17CO-(17-羧基-十七酰基，C19)、HOOC-CH3(CH2)18CO-(二十酰基，C20)和HOOC-CH3(CH2)19CO-(19-羧基-十九酰基，C21)。
38.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子经由间隔物连接至氨基酸残基。
39.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述间隔物包含yGlu。
40.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述间隔物包含yGlu或yGlu-yGlu或者由yGlu或yGlu-yGlu组成。
41.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽
a.激活人GIPR，其功效(Emax值)为天然人GIP激活人GIPR的功效的至少65％，例如为天然人GIP激活人GIPR的功效的至少70％，例如至少75％，例如至少80％，例如至少85％，例如至少90％，例如至少95％；
b.激活人GLP2-R，其功效(Emax值)为天然人GLP-2激活人GLP-2R的功效的至少65％，例如为天然人GLP-2激活人GLP-2R的功效的至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％；
c.激活人GLP-1R，其功效(Emax值)为天然人GLP-1激活人GLP-1R的功效的至少65％，例如为天然人GLP-1激活人GLP-1R的功效的至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％。
42.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽
a.对人GIPR具有10nM或更低的EC50；
b.对人GLP-2R具有50nM或更低的EC50；以及
c.对人GLP-1R具有12nM或更低的EC50。
43.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽选自：
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:1)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-OH(SEQ ID NO:2)，
H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-OH(SEQ ID NO:3)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:4)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:5)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:6)，
H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:7)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:8)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:9)，
H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:10)，
H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:11)，
H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:12)，
H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:13)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGK-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:14)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:15)，
Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:16)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(γGlu-C10)-NH2(SEQ ID NO:1)，
HADGTFTSDYSTILDNLAA-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-DFINWLIQTKGKK-OH(SEQ IDNO:17)，
HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGK-K(γGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:18)，
HADGTFTSDYSIILD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:19)，
HADGTFTSDYSTILD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:20)，
HADGTFTSDYST-Aib-LD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:21)，
HADGTFTSDYSTILDK-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-AARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OH SEQ ID NO:22)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGK-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-NDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:23)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDW-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-HNITQ-OH(SEQ ID NO:24)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:25)，
HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:26)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKIT-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-OH(SEQID NO:27)，
HADGTFISDYSTILDK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ IDNO:45)，
HADGTFISDYST-Aib-LDK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQID NO:46)，
HADGTFISDYSTILDNK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-AARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ IDNO:47)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQ IDNO:48)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQ IDNO:49)，和
HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKGKKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQID NO:50)，
或其功能变体，其中所述功能变体包含1个或2个单独的氨基酸取代。
44.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用作药物。
45.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用于抑制骨吸收和/或刺激骨形成的方法。
46.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用于治疗骨病症的方法。
47.根据前述项目中任一项所述用途的肽三重激动剂，其中所述骨病症选自骨质减少、骨质疏松症、重度骨质疏松症、绝经后骨质疏松症、特发性骨质疏松症、骨软化症、佝偻病、囊性纤维性骨炎(OFC)和佩吉特骨病。
48.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用于治疗特发性骨质疏松症的方法。
49.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用于治疗患有杜氏肌营养不良症(DMD)或脑瘫的个体的骨质疏松症的方法。

Claims (46)

1.一种肽三重激动剂，其包含以下序列或由以下序列组成：
X1X2X3GTFX7SDYX11X12X13LX15X16X17AAX20X21FIX24WLIX28X29X30X31X32K(SEQ ID NO:42)-J
其中
X1是H或Y
X2是A或Aib，
X3是D或E，
X7是I、S或T，
X11是S或A，
X12是T或I，
X13是I、Aib或E，
X15是D或E，
X16是N、L、A、K或E，
X17是L、K或I，
X20是R或K，
X21是D、E或K，
X24是N或E，
X28是Q、A或K，
X29是T、Q或K，
X30是R或K，
X31是I或G，且
X32是T或K，
其中J为包含序列NDWKHNITQK(SEQ ID NO:29)的一个或多个氨基酸残基的肽或被省略，
条件是当X7为I时，则X2为Aib，并且当X2为A时，则X7为S或T，
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C末端区域的任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰，其中所述SEQ ID NO:42的C末端区域由SEQ ID NO:42的16位至C端的氨基酸残基组成，并且
其中所述肽为GIPR(葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体)的激动剂、为GLP-2R(胰高血糖素样肽-2受体)的激动剂，且为GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)的激动剂。
2.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述SEQ ID NO:42的C末端区域由SEQ ID NO:42的氨基酸残基16至33组成。
3.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述SEQ ID NO:42的C末端区域由SEQ ID NO:42的氨基酸残基16至43组成。
4.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的16至33位中的任一个位置上和/或J(SEQ ID NO:29)的任一个位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
5.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X2是Aib，并且
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C端连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
6.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X2是Aib，并且
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的33位氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
7.根据前述项目中任一项所述的肽，其中X16为N、L、A或E，并且
其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C端连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
8.根据前述项目中任一项所述的肽，其中X17为L或I。
9.根据前述项目中任一项所述的肽，其中X20为R。
10.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X7是T。
11.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X7是S。
12.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X13是Aib。
13.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X16是N、A或K。
14.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X28是Q。
15.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X29是T。
16.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X30是K。
17.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X2是Aib，X31是I，且X32是T。
18.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X2是Aib，X31是G，且X32是K。
19.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X7是T或S，X31是G，且X32是K。
20.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中X7是T，X31是G，且X32是K。
21.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中J被省略。
22.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中J选自K、NDWKHNITQ、NDWKHNITQK。
23.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽选自：
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:1)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:2)，
H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:3)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:4)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:5)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:6)，
H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:7)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:8)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKITK(SEQ ID NO:9)，
H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:10)，
H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:11)，
H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:12)，
H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:13)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK(SEQ ID NO:14)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:15)，
Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:16)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:1)，
HADGTFTSDYSTILDNLAAKDFINWLIQTKGKK(SEQ ID NO:17)，
HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK(SEQ ID NO:18)，
HADGTFTSDYSIILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:19)，
HADGTFTSDYSTILD-KLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:20)，
HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:21)，
HADGTFTSDYSTILDKKAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:22)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:23)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ(SEQ ID NO:24)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQK(SEQ ID NO:25)，
HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ K(SEQ ID NO:26)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKITK(SEQ ID NO:27)，
HADGTFISDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:45)，
HADGTFISDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:46)，
HADGTFISDYSTILDNKAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:47)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:48)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKKK-OH(SEQ ID NO:49)，和
HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKGKKK-OH(SEQ ID NO:50)，
或其功能变体，其中所述功能变体包含1或2个单独的氨基酸取代。
24.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽是C末端酰胺化的(-NH2)或其中C端是羧酸。
25.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的C末端区域的任一位置上的赖氨酸(K)处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
26.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的16位、17位、18位、19位、20位、21位、22位、23位、24位、25位、26位、27位、28位、29位、30位、31位、32位、33位、34位、35位、36位、37位、38位、39位、40位、41位、42位或43位中的任一个位置连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
27.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的16位、17位、20位、33位、34位、37位或43位中的任一个位置连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
28.根据项目1、9至11中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽通过在SEQ ID NO:42的16、17、20至43位中任一位置上的一个或多个氨基酸残基处连接至少一个脂肪酸分子进行修饰。
29.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子是直链脂肪酸。
30.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子是支链脂肪酸。
31.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子是包含一个脂肪酸的单酰基脂肪酸分子。
32.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子是二酰基脂肪酸分子。
33.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子包含选自以下的酰基：CH3(CH2)8CO-(癸酰基，C10)、CH3(CH2)10CO-(月桂酰基，C12)、CH3(CH2)12CO-(肉豆蔻酰基，C14)、CH3(CH2)14CO-(棕榈酰基，C16)、CH3(CH2)16CO-(硬脂酰基，C18)和CH3(CH2)18CO-(花生酰基，C20)。
34.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子包含两个酰基，所述两个酰基独立地选自：HOOC-CH3(CH2)8CO-(癸酰基，C10)、HOOC-CH3(CH2)10CO-(十二酰基，C12)、HOOC-CH3(CH2)12CO-(1-十四酰基，C14)、HOOC-CH3(CH2)14CO-(十六酰基，C16)、HOOC-CH3(CH2)15CO-(15-羧基-十五酰基，C17)、HOOC-CH3(CH2)16CO-(十八酰基，C18)、HOOC-CH3(CH2)17CO-(17-羧基-十七酰基，C19)、HOOC-CH3(CH2)18CO-(二十酰基，C20)和HOOC-CH3(CH2)19CO-(19-羧基-十九酰基，C21)。
35.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述脂肪酸分子经由间隔物连接至氨基酸残基。
36.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述间隔物包含yGlu。
37.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述间隔物包含yGlu或yGlu-yGlu或由yGlu或yGlu-yGlu组成。
38.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽
a.激活人GIPR，其功效(Emax值)为天然人GIP激活人GIPR的功效的至少65％，例如为天然人GIP激活人GIPR的功效的至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％；
b.激活人GLP2-R，其功效(Emax值)为天然人GLP-2激活人GLP-2R的功效的至少65％，例如为天然人GLP-2激活人GLP-2R的功效的至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％；
c.激活人GLP-1R，其功效(Emax值)为天然人GLP-1激活人GLP-1R的功效的至少65％，例如为天然人GLP-1激活人GLP-1R的功效的至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％。
39.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽
d.对人GIPR具有10nM或更低的EC50；
e.对人GLP-2R具有50nM或更低的EC50；且
f.对人GLP-1R具有12nM或更低的EC50。
40.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其中所述肽选自：
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:1)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-OH(SEQ ID NO:2)，
H-Aib-DGTFISDYATILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-OH(SEQ ID NO:3)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDLLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:4)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:5)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:6)，
H-Aib-DGTFISDYSTILENLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:7)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAAREFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:8)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFIEWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:9)，
H-Aib-DGTFISDYSIILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:10)，
H-Aib-EGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:11)，
H-Aib-DGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:12)，
H-Aib-DGTFISDYSTELDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:13)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGK-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:14)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNIAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:15)，
Y-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(C10)-NH2(SEQ ID NO:16)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKIT-K(γGlu-C10)-NH2(SEQ ID NO:1)，
HADGTFTSDYSTILDNLAA-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-DFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:17)，
HADGTFTSDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGK-K(γGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:18)，
HADGTFTSDYSIILD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:19)，
HADGTFTSDYSTILD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:20)，
HADGTFTSDYST-Aib-LD-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:21)，
HADGTFTSDYSTILDK-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-AARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-OHSEQ ID NO:22)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGK-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-NDWKHNITQ-OH(SEQ ID NO:23)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDW-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-HNITQ-OH(SEQ ID NO:24)，
HADGTFTSDYSTILDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:25)，
HADGTFTSDYST-Aib-LDKLAARDFINWLIQTKGKKNDWKHNITQ-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-OH SEQ ID NO:26)，
H-Aib-DGTFISDYSTILDALAARDFINWLIQTKIT-K(2xAEEA-γGlu-C18-二酸)-OH(SEQ IDNO:27)，
HADGTFISDYSTILDK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:45)，
HADGTFISDYST-Aib-LDK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-LAARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ IDNO:46)，
HADGTFISDYSTILDNK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-AARDFINWLIQTKGKK-OH(SEQ ID NO:47)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:48)，
HADGTFISDYSTILDNLAARDFINWLIQTKGKKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQ ID NO:49)，和
HADGTFISDYST-Aib-LDNLAARDFINWLIQTKGKKK-(2xAEEA-yGlu-C18-二酸)-OH(SEQ IDNO:50)，
或其功能变体，其中所述功能变体包含1或2个单独的氨基酸取代。
41.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用作药物。
42.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用于抑制骨吸收和/或刺激骨形成的方法。
43.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用于治疗骨病症的方法。
44.根据前述项目中任一项所述用途的肽三重激动剂，其中所述骨病症选自骨质减少、骨质疏松症、重度骨质疏松症、绝经后骨质疏松症、特发性骨质疏松症、骨软化症、佝偻病、囊性纤维性骨炎(OFC)和佩吉特骨病。
45.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用于治疗特发性骨质疏松症的方法。
46.根据前述项目中任一项所述的肽三重激动剂，其用于治疗患有杜氏肌营养不良症(DMD)或脑瘫的个体的骨质疏松症的方法。
CN202280091971.4A 2021-12-17 2022-12-16 Gip、glp-1和glp-2的肽三重激动剂 Pending CN118843644A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP21215550 2021-12-17
EP21215550.1 2021-12-17
PCT/EP2022/086376 WO2023111278A2 (en) 2021-12-17 2022-12-16 Peptides triple agonists of gip, glp-1 and glp-2

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN118843644A true CN118843644A (zh) 2024-10-25

Family

ID=78957166

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280091971.4A Pending CN118843644A (zh) 2021-12-17 2022-12-16 Gip、glp-1和glp-2的肽三重激动剂

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP4448098A2 (zh)
JP (1) JP2024546994A (zh)
KR (1) KR20240134891A (zh)
CN (1) CN118843644A (zh)
CA (1) CA3240735A1 (zh)
MX (1) MX2024007449A (zh)
WO (1) WO2023111278A2 (zh)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10774127B2 (en) * 2016-10-12 2020-09-15 University Of Copenhagen Peptide dual agonists of GIPR and GLP2R
WO2018103868A1 (en) * 2016-12-09 2018-06-14 Zealand Pharma A/S Acylated glp-1/glp-2 dual agonists
EP3699187A1 (en) * 2019-02-21 2020-08-26 Universite D'angers Peptide targeting gip and glp-2 receptors for treating bone disorders

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023111278A3 (en) 2023-07-27
CA3240735A1 (en) 2023-06-22
MX2024007449A (es) 2024-08-28
EP4448098A2 (en) 2024-10-23
KR20240134891A (ko) 2024-09-10
JP2024546994A (ja) 2024-12-26
WO2023111278A2 (en) 2023-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI707865B (zh) Gip衍生物及其用途
US11725037B2 (en) Peptide dual agonists of GIPR and GLP2R
CA2686803C (en) Unacylated ghrelin as therapeutic agent in the treatment of metabolic disorders
CN105722526A (zh) 选择性pyy化合物及其用途
JP2013537879A (ja) 部位特異的ｐｅｇ修飾エキセンディン−４アナログ及びその使用
EP3891174A1 (en) Modified gip peptide analogues
ZA200607492B (en) Y2/Y4 selective receptor agonists for therapeutic interventions
US11572399B2 (en) Long-acting GIP peptide analogues
US20200261543A1 (en) Combination therapy for treatment of bone disorders
KR20150005904A (ko) 강력한 작용제 효과를 지닌 신규한 ｇｈ-ｒｈ 유사체
KR102520348B1 (ko) 페길화 생활성 펩타이드 및 그의 용도
CN115226391A (zh) 胰高血糖素和glp-1受体的钉合三唑共激动剂
CN118843644A (zh) Gip、glp-1和glp-2的肽三重激动剂
CA3230915A1 (en) New peptides as potent and selective gip receptor agonists
CN118843639A (zh) Gipr和glp2r的肽双重激动剂
WO2022007805A1 (zh) 新型多肽及其治疗用途
Chichura Design, Synthesis, and Characterization of Monomeric Peptide Multi-agonists for the Mitigation of CNS-Associated Side Effects in the Treatment of Type II Diabetes and Obesity

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination