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CN118755805A - 一种唾液酸化酶qPCR芯片及其应用 - Google Patents

一种唾液酸化酶qPCR芯片及其应用 Download PDF

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CN118755805A
CN118755805A CN202411245237.6A CN202411245237A CN118755805A CN 118755805 A CN118755805 A CN 118755805A CN 202411245237 A CN202411245237 A CN 202411245237A CN 118755805 A CN118755805 A CN 118755805A
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CN
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seq
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forward primer
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CN202411245237.6A
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廖盼
贾东东
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Tianjin Sheweisi Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Tianjin Sheweisi Biotechnology Co ltd
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Abstract

本发明提供了一种唾液酸化酶qPCR芯片，所述的唾液酸化酶qPCR芯片包括检测唾液酸化酶基因的引物组。本发明所述的唾液酸化酶qPCR芯片用于高通量检测，可分析样本中唾液酸化酶家族的基因表达水平。

Description

一种唾液酸化酶qPCR芯片及其应用
技术领域
本发明属于检测领域，尤其是涉及一种唾液酸化酶qPCR芯片及其应用。
背景技术
唾液基转移酶在折叠结构、底物特异性与供体和受体底物相互作用的性质以及催化作用方面是一种特定类型的糖基转移酶。有趣的是，唾液基转移酶的失调导致了唾液化表位的表达改变，而唾液化表位是肿瘤和疾病的标志。迄今为止，它们的化学生物学和在药物发现方面的潜力还未被探索。这是由于在结构、机制和细胞研究中缺乏唾液基转移酶特异性抑制剂导致的。此外，唾液基转移酶抑制剂的进展缓慢可能归因于糖基转移酶在其多特异性、重叠特异性和多底物催化机制方面的复杂性。此外，三维结构数据相对较少，并且直到过去几年才对其催化作用有了有限的了解。
定量PCR（quantitative PCR，qPCR）芯片是一种用于分子生物学实验中的关键工具，它能够快速、精确地测量DNA或RNA样本中的特定序列。目前，qPCR技术已经在许多领域得到广泛应用，包括基因表达分析、病原体检测、环境监测等。随着技术的进步，qPCR芯片的灵敏度、速度和多重检测能力不断提高，使其在临床诊断和实验室研究中越来越受欢迎。市场上已经有多家公司提供qPCR芯片产品，如生物技术公司和医疗设备制造商，这些产品通常与自动化仪器和软件集成，以提高操作效率和数据分析的准确性。qPCR芯片已广泛应用于基础科学研究、临床诊断、药物开发等领域。特别是在快速疾病检测和个性化医疗方面，其应用潜力巨大。尽管qPCR芯片有诸多优势，如高效、高灵敏度和低样本消耗，但仍面临一些挑战，如复杂样本中的干扰物质、标准化和标定的需求等。未来的发展趋势可能包括更快速的实时检测技术、更广泛的多重检测能力以及更简化的工作流程。总体来说，qPCR芯片作为分子生物学和医学诊断中的重要工具，其技术和应用领域正不断发展和扩展，未来有望在个性化医疗和快速疾病检测等方面发挥越来越重要的作用。
在本领域内并无唾液酸化酶qPCR芯片，只能低通量的单个依次进行唾液酸化酶基因qpcr实验，不具有高通量、全局表达观测、组间差异小、重复性高、灵敏性强、操作便捷等优点。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种唾液酸化酶qPCR芯片及其应用。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供了一种唾液酸化酶qPCR芯片，所述的唾液酸化酶qPCR芯片包括检测唾液酸化酶基因的引物组，所述的引物组如下：
基因ST3GAL1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
基因ST3GAL2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
基因ST3GAL3的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
基因ST3GAL4的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；
基因ST3GAL5的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；
基因ST3GAL6的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
基因ST6GAL1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
基因ST6GAL2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；
基因ST6GALNAC1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；
基因ST6GALNAC2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；
基因ST6GALNAC3的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示；
基因ST6GALNAC4的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示；
基因ST6GALNAC5的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示；
基因ST6GALNAC6的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示；
基因ST8SIA1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.30所示；
基因ST8SIA2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；
基因ST8SIA3的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示；
基因ST8SIA4的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.35所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.36所示；
基因ST8SIA5的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.37所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.38所示；
基因ST8SIA6的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.39所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.40所示。
本发明还提供了一种唾液酸化酶基因的检测方法，包括如下步骤：
步骤1是提取样本中的RNA；
步骤2是使用所述的qPCR芯片进行qPCR扩增；
步骤3是对扩增产物进行定性和/或定量分析。
进一步，所述的步骤2中的扩增步骤的扩增体系如下：
荧光定量PCR扩增试剂 550μL，
cDNA X μL
无酶纯水 补至总体积1100 μL。
进一步，所述的步骤2中的扩增步骤的扩增程序如下：95℃聚合酶激活10分钟； 95℃15秒→60℃1分钟，收集荧光，进行40个循环。
本发明还提供了一种含有所述的唾液酸化酶qPCR芯片的检测试剂盒。
本发明还提供了一种唾液酸化酶qPCR芯片的应用，所述的qPCR芯片在基因检测和/或病毒检测领域中的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下优势：
本发明所述的唾液酸化酶qPCR芯片用于高通量检测，可分析样本中唾液酸化酶家族的基因表达水平。
本发明所述的唾液酸化酶qPCR芯片含20个目的基因和2个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。该芯片具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。
附图说明
图1为本发明实施例2所述的扩增曲线；
图2为本发明实施例2所述的熔融曲线；
图3为本发明实施例2所述的单独基因的扩增曲线：其中，A图为ST3GAL1，B图为ST3GAL2，C图为ST3GAL3，D图为ST3GAL4；
图4为本发明实施例2所述的单独基因的扩增曲线：其中，A图为ST3GAL5，B图为ST3GAL6，C图为ST6GAL1，D图为ST6GAL2；
图5为本发明实施例2所述的单独基因的扩增曲线：其中，A图为ST6GALNAC1，B图为ST6GALNAC2，C图为ST6GALNAC3，D图为ST6GALNAC4；
图6为本发明实施例2所述的单独基因的扩增曲线：其中，A图为ST6GALNAC5，B图为ST6GALNAC6，C图为ST8SIA1，D图为ST8SIA2；
图7为本发明实施例2所述的单独基因的扩增曲线：其中，A图为ST8SIA3，B图为ST8SIA4，C图为ST8SIA5，D图为ST8SIA6；
图8为本发明实施例2所述的单独基因的熔融曲线：其中，A图为ST3GAL1，B图为ST3GAL2，C图为ST3GAL3，D图为ST3GAL4；
图9为本发明实施例2所述的单独基因的熔融曲线：其中，A图为ST3GAL5，B图为ST3GAL6，C图为ST6GAL1，D图为ST6GAL2；
图10为本发明实施例2所述的单独基因的熔融曲线：其中，A图为ST6GALNAC1，B图为ST6GALNAC2，C图为ST6GALNAC3，D图为ST6GALNAC4；
图11为本发明实施例2所述的单独基因的熔融曲线：其中，A图为ST6GALNAC5，B图为ST6GALNAC6，C图为ST8SIA1，D图为ST8SIA2；
图12为本发明实施例2所述的单独基因的熔融曲线：其中，A图为ST8SIA3，B图为ST8SIA4，C图为ST8SIA5，D图为ST8SIA6。
数据分析说明：综上，图1至图12单个基因的qpcr实验中的熔解曲线和扩增曲线和唾液酸化酶qPCR芯片相比较，整体稳定性和协调性是远不如唾液酸化酶qPCR芯片好，单个基因的qpcr实验的熔解曲线和扩增曲线差异明显、相互之间的可比性不好、数据可比较性很差。所以唾液酸化酶qPCR芯片的优势很明显。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例来详细说明本发明。
实施例1 样品处理与质检
一、样品RNA提取
试剂： TRIZOL试剂（Invitrogen）、氯仿、异丙醇、无水乙醇、75%乙醇（以DEPC处理的水配制）、无RNA酶的水、无RNA酶的糖原（Ambion），（注：未特别注明的化学试剂购自国药集团化学试剂有限公司）。
操作步骤：
1.匀浆
A、组织匀浆
每50mg组织样品（组织样品来源：SV40T转化人脐静脉内皮细胞，来自普诺赛公司，货号：CL-0675），加入1mL的TRIZOL试剂，用电动匀浆器进行匀浆。所加样品体积不能超过匀浆此样品所使用的TRIZOL试剂体积的10％。
B、单层贴壁细胞匀浆
直接在3.5cm直径的培养盘中加入1mL TRIZOL试剂裂解细胞，裂解时用枪吸打几次。加入TRIZOL试剂的量取决于培养盘的面积（每10cm2加1mL）而不是培养细胞的数量。
C、悬浮细胞的匀浆
离心沉淀细胞。加入TRIZOL试剂反复吹打使细胞裂解。每5×106的动物植物或酵母细胞或者每1×107的细菌使用1mL TRIZOL试剂，避免在加入TRIZOL试剂进行裂解前清洗细胞，因为清洗会很可能导致mRNA的降解。对于某些酵母和细菌的细胞，需要使用匀浆器来破碎细胞。
2.两相分离
匀浆后样品于室温放置5分钟，以便核酸蛋白复合体完全解离。每1mL的TRIZOL试剂匀浆的样品中加入0.2mL的氯仿，盖紧EP管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，室温放置2到3分钟。4℃下12,000g离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层和上层的无色的水相。RNA全部被分配于水相中。水相的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
3.RNA沉淀
将水相转移到新离心管中。水相与异丙醇混合以沉淀其中的RNA，加入异丙醇的量为每个样品匀浆时加入1mL TRIZOL试剂的此时加0.5mL的异丙醇。混匀后室温放置10分钟后，于4℃ 12,000 g离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
4.RNA清洗
移去上清液，每1mL TRIZOL试剂匀浆的样品中加入至少1mL的75%乙醇，清洗RNA沉淀。振荡后，4℃ 7,500g离心5分钟。
5.重新溶解RNA沉淀
去除乙醇溶液，空气中干燥RNA沉淀5-10分钟，切勿真空离心干燥。注意RNA沉淀不要完全干燥，否则将大大降低RNA的可溶性。部分溶解的RNA样品A260/280比值将小于1.6。溶解RNA时，先加入无RNA酶的水用枪反复吹打几次，然后55到60℃孵育10分钟。获得的RNA溶液保存于-70℃。
6.小量RNA的抽提：
从少量的组织（1mg）或者细胞（102）样品中抽提RNA：加入800μL的TRIZOL试剂至样品中，样品裂解后，按步骤2加氯仿进行两相分离。在加异丙醇沉淀RNA前，加5μg的无RNA酶的糖原作为水相载体。为降低溶液粘度，在加氯仿前先将样品两次过26号针头以剪切基因组DNA。两相分离后糖原留在水相中并和RNA共沉淀。只要糖原浓度不高于4mg/mL，不会影响cDNA的合成，同样也不会对PCR过程产生影响。
二、DNase I 消化RNA 样品
DNase I消化RNA样品，去除其中可能含有的基因组DNA，具体如下：
1.配制反应液：
表1 反应液
2.37℃温育30分钟。
三、RNA纯化
试剂：RNeasy Mini Kit（Qiagen）、80%乙醇、无水乙醇
操作步骤：
1.用无RNA酶的水将经过DNase I消化的RNA样品（RNA≤45μg）的体积调整为200μL。随后加700μL buffer RLT，充分混匀。
如果是RNA沉淀，则先加试剂盒提供的无RNA酶水溶解RNA后，再加Buffer RLT。
2.加500μL无水乙醇，用移液器轻轻吸打数次混匀后，直接进入步骤3.
3.取700μL步骤2得到的溶液过柱，轻轻盖上管盖，室温10000rpm离心15秒，去除收集管中的液体。
4.重复步骤3，将剩余样品过柱，每次所加的样品体积≤700μL。
5.将柱子转移到新的2mL收集管后，加500μL Buffer RPE洗柱子，轻轻盖上管盖，室温10000rpm离心15秒，去除收集管中的液体，将柱子放回收集管中。
注意：试剂盒提供的Buffer RPE是浓缩型的，使用前加4倍体积的无水乙醇。
6.加500μL 80%乙醇到柱子中，轻轻盖上管盖，室温10000rpm离心2分钟，将收集管及液体丢弃。
注意：离心后，小心将柱子从收集管中取出，避免沾上收集管中的乙醇。
7.将柱子转移到一新的2mL收集管，打开柱子的盖子，最大转速离心5分钟，将收集管及液体丢弃。
8.洗脱，将柱子转移到一新的1.5mL收集管，取14μL无RNA酶的水悬空加到柱子的膜中央，轻轻盖上盖子，最大转速离心1分钟洗脱RNA。
四、RNA质量检测
试剂：TE缓冲液，0.4M MOPS（pH7.0），甲醛，溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB），琼脂糖
操作步骤：
1.紫外吸收测定法
使用微量紫外分光光度计测RNA浓度和纯度，测量前先用溶解RNA用的DEPC水调零，操作方法如下：
a)滴加1μL DEPC水或者RNA样品至测量基座的表面。
b)液滴会自动在上下基座之间形成液柱并自动完成测定，RNA浓度及质量的各种参数将在电脑中自动生成文件。
c)一次测定完成后，用柔软的擦镜纸擦去上下基座表面上的样本液，便可进行下一个样品的测量。
d)测定结果。
浓度测定：
260nm处读值为1表示40ng RNA/µl。样品RNA浓度计算公式为：A260 ×40ng/μL。
纯度检测：
RNA溶液的A260/A280的比值是一种RNA纯度检测方法，比值范围1.8到2.1。即使比值超出这个范围，RNA样品也一样可以用于荧光定量PCR检测。
2.变性琼脂糖凝胶电泳
a)制胶
1g琼脂糖溶于72mL水中，冷却至60℃，10mL的10×MOPS电泳缓冲液和18mL的37%甲醛溶液(12.3 M)。
表2 制胶
灌制凝胶板，预留加样孔至少可以加入25μL溶液。胶凝后取下梳子，将凝胶板放入电泳槽内，加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。
b)准备RNA样
取0.5μg RNA，加3倍体积的甲醛上样染液，加EB于甲醛上样染液中至终浓度为10μg/mL。加热至70°C孵育5分钟使样品变性。
c)电泳
上样于胶孔中，5V/cm电压下电泳至溴酚兰指示剂进胶至少2-3cm。
d)紫外透射光下观察并拍照
28S和18S核糖体RNA的带非常亮而浓（其大小决定于用于抽提RNA的物种类型），上面一条带的密度大约是下面一条带的2倍。还有可能观察到一个更小稍微扩散的带，它由低分子量的RNA（tRNA和5S核糖体RNA）组成。在18S和28S核糖体带之间一般可以看到一片弥散的EB染色物质，可能是由mRNA和其它异型RNA组成。RNA制备过程中如果出现DNA污染，将会在28S核糖体RNA带的上面出现，即更高分子量的弥散迁移物质或者带。RNA的降解表现为核糖体RNA带的弥散。
3.荧光定量PCR质检
降解的RNA是否能用于荧光定量PCR，或者提取的RNA中是否存在PCR抑制物，最佳的质检方法是使用荧光定量PCR对样本检测合适的内参基因的检测。
实施例2 反转录及定量PCR检测
一、反转录
反转录试剂的配方：RN酶抑制剂 (RNasin)：20-40 units/μl；反转录引物（Oligo(dT)18 primer）：500 ng/μl；蛋白负荷缓冲液（5X RT Buffer）；脱氧核苷酸的混合物（dNTPMix；10 mM each）：2.5 mM each；反转录酶（M-MLV Reverse Transcriptase）：200-400units/μl；超纯去离子水（DEPC-treated water）。
操作步骤：
1.从冰箱取出反转录试剂，叩击混匀，离心机低速离心甩底，置于冰盒备用。对于单个反应体系：准备PCR反应管,冰上配制反应体系如下表：
表3 反应体系
2.盖好管盖，叩击混匀，离心机低速离心甩底，至PCR仪进行反应，参数如下：
表4 PCR
3.反应结束后，用于后续荧光定量PCR，若需保存，置于-20℃。
4.后续荧光定量PCR反应的cDNA用量：10ng/反应。
二、荧光定量PCR
试剂：荧光定量PCR扩增试剂（染料法）(Cat.XY001080)、RNA定量检测芯片（PCR-荧光染料法）
操作步骤：
1.样品准备：（以96孔芯片为例）
表5 荧光定量PCR
2.加样
a)从冰箱取出芯片，室温平衡5-10分钟。
b)加20μL混合液到芯片对应的每个孔中。贴膜，离心。
c)实时定量PCR程序设置完后，将芯片置于实时定量PCR仪进行检测。程序设置如下：
表6 PCR程序
如图1-2所示，本发明所述的qpcr芯片的扩增曲线和熔解曲线整体稳定协调的在固定范围内，误差小、精确度高、可行性好，有良好的高通量检测唾液酸化酶家族的基因家族的表达水平的性能。单独基因的扩增曲线和熔解曲线如图3-图12所示，熔融温度如表7所示，唾液酸化酶qPCR芯片中各个基因的熔融温度相差都在79℃左右，相差小于2℃，整体稳定性和协调性显著优于单个基因的qpcr实验结果。
表7 熔融温度
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种唾液酸化酶qPCR芯片，其特征在于：所述的唾液酸化酶qPCR芯片包括检测唾液酸化酶基因的引物组，所述的引物组如下：
基因ST3GAL1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
基因ST3GAL2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
基因ST3GAL3的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
基因ST3GAL4的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；
基因ST3GAL5的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；
基因ST3GAL6的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
基因ST6GAL1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
基因ST6GAL2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；
基因ST6GALNAC1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；
基因ST6GALNAC2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；
基因ST6GALNAC3的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示；
基因ST6GALNAC4的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示；
基因ST6GALNAC5的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示；
基因ST6GALNAC6的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示；
基因ST8SIA1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.30所示；
基因ST8SIA2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；
基因ST8SIA3的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示；
基因ST8SIA4的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.35所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.36所示；
基因ST8SIA5的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.37所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.38所示；
基因ST8SIA6的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.39所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.40所示。
2.一种唾液酸化酶基因的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1是提取样本中的RNA；
步骤2是使用权利要求1所述的qPCR芯片进行qPCR扩增；
步骤3是对扩增产物进行定性和/或定量分析。
3.根据权利要求2所述的唾液酸化酶基因的检测方法，其特征在于：所述的步骤2中的扩增步骤的扩增体系如下：
荧光定量PCR扩增试剂 550μL，
cDNA X μL
无酶纯水 补至总体积1100 μL。
4.根据权利要求2所述的唾液酸化酶基因的检测方法，其特征在于：所述的步骤2中的扩增步骤的扩增程序如下：95℃聚合酶激活10分钟； 95℃15秒→60℃1分钟，收集荧光，进行40个循环。
5.一种含有权利要求1所述的唾液酸化酶qPCR芯片的检测试剂盒。
6.权利要求1所述的唾液酸化酶qPCR芯片的应用，其特征在于：所述的qPCR芯片在基因检测和/或病毒检测领域中的应用。
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