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CN118649222B - 高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液及制备方法和应用 - Google Patents

高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液及制备方法和应用 Download PDF

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CN118649222B CN202411131565.3A CN202411131565A CN118649222B CN 118649222 B CN118649222 B CN 118649222B CN 202411131565 A CN202411131565 A CN 202411131565A CN 118649222 B CN118649222 B CN 118649222B
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Abstract

高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液及制备方法和应用，属于乳液制备技术领域。本发明为解决人体蛋白含量不均衡的技术问题，提供了一种高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液及制备方法，通过将松茸提取物、多肽混合物、氨基酸混合物、微量元素混合物、玉米胚芽油、包埋脂肪酸、菊粉、麦芽糊精和β‑环糊精制备获得含松茸提取物的多肽复合皮克林乳液。本发明提供的多肽复合皮克林乳液具有稳定性强、安全性高、毒性低的优势，所述的多肽复合皮克林乳液可应用于制备蛋白补充药剂，用于快速补充蛋白含量，增强免疫力，加快身体各项技能的恢复。

Description

高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液及制备方法和应用
技术领域
本发明属于乳液制备技术领域，涉及一种皮克林乳液及其制备方法和应用。
背景技术
蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16.3％。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。被食入的蛋白质在体内经过消化分解成氨基酸，吸收后在体内主要用于重新按一定比例组合成人体蛋白质，同时新的蛋白质又在不断代谢与分解，时刻处于动态平衡中。因此，食物蛋白质的质和量、各种氨基酸的比例，关系到人体蛋白质合成的量，尤其是青少年的生长发育、孕产妇的优生优育、老年人的健康长寿，都与人体蛋白质含量有着密切的关系。
皮克林乳液是一种仅由位于油水界面的固体颗粒稳定的乳液，用于稳定该乳液的颗粒被称为皮克林颗粒或稳定剂。与传统乳液相比，皮克林乳液具有稳定性强、安全性高、毒性低等优势，可广泛应用于食品、药品和化妆品等领域。开发环境友好型、天然来源、可再生和可生物降解的颗粒用于稳定皮克林乳液己逐渐成为研究热点。科研工作者以多糖、蛋白质和小分子物质等一系列可食用固体颗粒，通过高速均质、高压均质、超声等乳化技术制备稳定的食品级皮克林乳液，使其具有生物相容性高、稳定性好和环境友好等优点。同时，将其应用于生物活性物质在食品加工中的运输和保存，开发合适的负载和输送体系，这将对活性物质高效利用具有重要意义。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，提供了一种高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液及制备方法和应用。
本发明的目的之一在于提供一种高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液，所述多肽复合皮克林乳液按重量份包括下述组分：松茸提取物5份、多肽混合物140份、氨基酸混合物23份、微量元素混合物0.5份、玉米胚芽油1-30份、包埋脂肪酸1-10份、菊粉50份、麦芽糊精20份、β-环糊精3份。
在本发明的一个优选实施例中，所述多肽混合物按重量份包括下述组分：大豆蛋白肽100份、乳清蛋白肽20份和蛋清肽20份；所述氨基酸混合物按重量份包括下述组分：谷氨酰胺20份、亮氨酸1份、异亮氨酸1份和缬氨酸1份；所述微量元素混合物按重量份包括下述组分：维生素A 0.1份、葡萄糖酸钙0.1份、硫酸亚铁0.1份、硫酸锌0.1份和牛磺酸0.1份。
本发明的目的之二在于提供一种高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液的制备方法，上述多肽复合皮克林乳液的制备方法包括以下步骤：
S1：选取新鲜松茸，清洗除去杂质后进行切片或粉碎，获得松茸片/松茸粉；
S2：将S1中获得的松茸片/松茸粉放入提取容器中，加入提取溶剂，搅拌，提取反应结束后，对获得的松茸提取混合物进行过滤，获得松茸提取物；
S3：将S2中获得的松茸提取物进行浓缩处理，对上述浓缩后的松茸提取物进行干燥，通过粉碎机对上述干燥后的松茸提取物进行粉碎，获得松茸提取物粉末；
S4：对大豆蛋白肽、乳清蛋白肽和蛋清肽进行酶解反应，待酶解反应后，对上述酶解后的多肽进行分离纯化处理，再进行浓缩、干燥和粉碎，获得多肽混合物粉末；
S5：将S3中获得的松茸提取物粉末、S4中获得的多肽混合物粉末、氨基酸混合物、微量元素混合物、玉米胚芽油、包埋脂肪酸、菊粉、麦芽糊精和β-环糊精按照重量份数混合均匀，获得多肽复合皮克林乳液。
在本发明的一个优选实施例中，S2中所述的提取溶剂为乙醇或水，所述提取反应的提取温度为≤60℃，提取时间为6 h-24 h。
在本发明的一个优选实施例中，S2中所述的过滤步骤为：使用筛网或滤布对上述松茸提取混合物进行过滤，分离出固体残渣和松茸粗提物；使用滤纸或微孔滤膜，对上述获得的松茸粗提物进行二次过滤。
在本发明的一个优选实施例中，S3中所述的浓缩处理是使用旋转蒸发仪在30-60℃条件下进行溶剂的蒸发；所述的干燥处理是使用喷雾干燥或冷冻干燥的方法。
在本发明的一个优选实施例中，S4中所述的酶解反应是将酶与大豆蛋白肽、乳清蛋白肽和蛋清肽按照1：（20-60）：（10-20）：（10-20）的质量添加比例进行反应，在40-70°C、pH=8-10的条件下进行酶解反应，所述酶解反应的反应时间为3 h-7 h。
在本发明的一个优选实施例中，所述酶解反应中的酶为中性蛋白酶、菠萝蛋白酶或碱性蛋白酶中的任意一种。
在本发明的一个优选实施例中，S4中所述的分离纯化处理步骤为：首先在10000-15000×g、4℃条件下离心10-30 min，然后采用膜分离方法进行透析，先经过微滤去除悬浮颗粒和大分子物质，再控制透析过程中的参数，流量为1-1000 L/h、压力为0.1-0.4 mPa、温度为15-30℃、pH值为6-8。
本发明的目的之三在于提供上述高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液在制备蛋白补充药剂中的应用。
本发明的有益效果：松茸（Tricholoma matsutake），又名松口蘑、松菌，属担子菌门担子菌纲伞菌目口蘑科口蘑属真菌，其子实体就是我们所说的食用菌“松茸”。松茸含有丰富的营养成分和活性物质，主要包括多糖、甾体、皂苷、油脂、三萜、多种必需氨基酸和维生素等。
本发明提供了一种高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液，通过将松茸提取物、多肽混合物、氨基酸混合物、微量元素混合物、玉米胚芽油、包埋脂肪酸、菊粉、麦芽糊精和β-环糊精制备获得；本发明在制备松茸提取物的过程中，通过将提取温度控制在60℃以下，从而防止提取物热敏感成分的损失；在酶解处理过程中，通过控制酶解处理的pH值和离子强度，从而维持酶的活性和蛋白质的稳定性。
本发明提供的高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液具有降低CRP、PCT、IL-6和IL-4含量的功能，从而减少由CRP、PCT、IL-6和IL-4含量较高引起的炎症；所述多肽复合皮克林乳液能够提高血白蛋白细胞数量和血白蛋白浓度，从而改善由缺少血白蛋白而导致的营养不良；所述多肽复合皮克林乳液能够提高前白蛋白浓度，从而提高体内甲状腺激素和维生素A的运输和分布；所述多肽复合皮克林乳液能够提高转铁白蛋白浓度，从而改善由缺少转铁白蛋白而导致的缺乏性贫血或铁过载症；所述多肽复合皮克林乳液能够提高血红蛋白浓度，从而改善由缺少血红蛋白而导致的贫血。
本发明提供的高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液与传统乳液相比具有较高的安全性，避免了有毒表面活性剂的使用；所述的多肽复合皮克林乳液稳定性较强，不易受体系pH值、盐浓度、温度及油相组成等因素的影响；所述的多肽复合皮克林乳液可应用于制备蛋白补充药剂，用于快速补充蛋白含量，增强免疫力，加快身体各项技能的恢复。
附图说明
图1为待测血液样本中C反应蛋白含量检测结果图；
图2为待测血液样本中降钙素原含量检测结果图；
图3为待测血液样本中白细胞介素6含量检测结果图；
图4为待测血液样本中白细胞介素4含量检测结果图；
图5为待测血液样本中白细胞数量统计图；
图6为待测血液样本中红细胞数量统计图；
图7为待测血液样本中血白蛋白浓度含量检测结果图；
图8为待测血液样本中前白蛋白浓度检测结果图；
图9为待测血液样本中转铁白蛋白浓度检测结果图；
图10为待测血液样本中血红蛋白浓度检测结果图。
具体实施方式
本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明当中。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体的实施方式及说明书附图对本发明进行进一步详细说明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明均为常规方法，所用材料、试剂、方法和仪器，未经特殊说明，均为本领域常规材料、试剂、方法和仪器，本领域技术人员均可通过商业渠道获得。
实施例1
S1：选取新鲜松茸，清洗除去杂质后进行切片或粉碎，获得松茸片/松茸粉；
S2：将S1中获得的松茸片/松茸粉放入提取容器中，加入水提取溶剂，搅拌，提取反应的提取温度为≤60℃，提取时间为12 h，提取反应结束后，使用筛网或滤布对上述松茸提取混合物进行过滤，分离出固体残渣和松茸粗提物；使用滤纸或微孔滤膜，对上述获得的松茸粗提物进行二次过滤，获得松茸提取物；
S3：将S2中获得的松茸提取物放置在旋转蒸发仪中，45℃条件下进行溶剂的蒸发浓缩，使用喷雾干燥或冷冻干燥对上述浓缩后的松茸提取物进行干燥，通过粉碎机对上述干燥后的松茸提取物进行粉碎，获得松茸提取物粉末；
S4：对大豆蛋白肽、乳清蛋白肽和蛋清肽进行酶解反应，所述酶解反应是将中性蛋白酶与大豆蛋白肽、乳清蛋白肽和蛋清肽按照1：40：10：10的质量添加比例进行反应，在37°C、pH=8条件下进行酶解反应，所述酶解反应的反应时间为6 h；然后在10000-15000×g、4℃条件下对上述酶解反应后的多肽混合物进行离心，所述离心时间为15 min，采用膜分离方法对上述离心后的多肽混合物进行透析，先经过微滤去除悬浮颗粒和大分子物质，再控制透析过程中的参数，流量为1-1000 L/h、压力为0.1-0.4 mPa、温度为15-30℃、pH值为6-8，获得分离纯化后的多肽混合物，再进行浓缩、干燥和粉碎，获得多肽混合物粉末；
S5：将S3中获得的松茸提取物粉末、S4中获得的多肽混合物粉末、氨基酸混合物、微量元素混合物、玉米胚芽油、包埋脂肪酸、菊粉、麦芽糊精和β-环糊精按照一定添加比例混合均匀，获得高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液。
本实施例所制备的高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液按重量份包括下述组分：：松茸提取物5份、多肽混合物140份、氨基酸混合物23份、微量元素混合物0.5份、玉米胚芽油3份、包埋脂肪酸2份、菊粉50份、麦芽糊精20份、β-环糊精3份。
所述多肽混合物按重量份包括下述组分：大豆蛋白肽100份、乳清蛋白肽20份和蛋清肽20份；所述氨基酸混合物按重量份包括下述组分：谷氨酰胺20份、亮氨酸1份、异亮氨酸1份和缬氨酸1份；所述微量元素混合物按重量份包括下述组分：维生素A 0.1份、葡萄糖酸钙0.1份、硫酸亚铁0.1份、硫酸锌0.1份和牛磺酸0.1份。
对比例1
S1：对大豆蛋白肽、乳清蛋白肽和蛋清肽进行酶解反应，所述酶解反应是将中性蛋白酶与大豆蛋白肽、乳清蛋白肽和蛋清肽按照1：40：10：10的质量添加比例进行反应，在37°C、pH=8条件下进行酶解反应，所述酶解反应的反应时间为6 h；然后在10000-15000×g、4℃条件下对上述酶解反应后的多肽混合物进行离心，所述离心时间为15 min，采用膜分离方法对上述离心后的多肽混合物进行透析，先经过微滤去除悬浮颗粒和大分子物质，再控制透析过程中的参数，流量为1-1000 L/h、压力为0.1-0.4 mPa、温度为15-30℃、pH值为6-8，获得分离纯化后的多肽混合物，再进行浓缩、干燥和粉碎，获得多肽混合物粉末；
S2：将S1中获得的多肽混合物粉末、氨基酸混合物、微量元素混合物、玉米胚芽油、包埋脂肪酸、菊粉、麦芽糊精和β-环糊精按照一定添加比例混合均匀，获得多肽复合皮克林乳液。
本实施例所制备的高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液包括下述组分：多肽混合物140份、氨基酸混合物23份、微量元素混合物0.5份、玉米胚芽油12份、包埋脂肪酸2份、菊粉50份、麦芽糊精20份、β-环糊精3份。
所述多肽混合物包括大豆蛋白肽100份、乳清蛋白肽20份和蛋清肽20份；所述氨基酸混合物包括谷氨酰胺20份、亮氨酸1份、异亮氨酸1份和缬氨酸1份；所述微量元素混合物包括维生素A 0.1份、葡萄糖酸钙0.1份、硫酸亚铁0.1份、硫酸锌0.1份和牛磺酸0.1份。
效果实验：
本发明选取40名志愿者，实验组分别服用实施例1所制备高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液，分为低剂量服用组100 ml/天和高剂量服用组400 ml/天；对照组服用对比例1所制备的不含松茸提取物的多肽复合皮克林乳液，服用剂量为100 ml/天，分别对服用14天后的志愿者进行血液的取样，获得待测血液样本。
使用MULTI SCIENCES联科生物公司的Human C-Reactive Protein ELISA Kit检测试剂盒（酶联免疫吸附法）对上述获得的待测样本中C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素4（IL-4）含量进行质谱分析，具体操作步骤参考试剂盒说明书。
结果分析：
如图1、表1所示，相较于对照组待测血液样本，低/高剂量实验组待测血液样本中CRP含量显著降低；并且，服用高剂量多肽复合皮克林乳液的待测血液样本中CRP的含量低于服用低剂量多肽复合皮克林乳液；CRP含量正常范围一般小于10 mg/L，本申请提供的多肽复合皮克林乳液能够有效降低CRP含量的功能；其中，高剂量补充皮克林乳液组检测结果表明，已将CRP含量降低至正常范围内。
表1
如图2、表2所示，相较于对照组待测血液样本，低/高剂量实验组待测血液样本中PCT含量显著降低；并且，服用高剂量多肽复合皮克林乳液的待测血液样本中PCT的含量低于服用低剂量多肽复合皮克林乳液；PCT含量正常范围一般小于0.1 ng/mL，本申请提供的多肽复合皮克林乳液能够有效降低PCT含量的功能；其中，高剂量补充皮克林乳液组检测结果表明，已将PCT含量降低至正常范围内。
表2
如图3-4、表3-4所示，相较于对照组待测血液样本，低/高剂量实验组待测血液样本中IL-6和IL-4含量均显著降低；并且，服用高剂量多肽复合皮克林乳液的待测血液样本中IL-6和IL-4的含量均低于服用低剂量多肽复合皮克林乳液；IL-6和IL-4含量正常范围一般小于5 pg/mL，本申请提供的多肽复合皮克林乳液能够有效降低；IL-6和IL-4含量的功能，并且将IL-6和IL-4含量降低至正常范围内。
表3
表4
本发明提供的多肽复合皮克林乳液同时具有降低CRP、PCT、IL-6和IL-4含量的功能，具有减少由CRP、PCT、IL-6和IL-4含量较高引起的炎症。
如图5-6、表5-6所示，相较于对照组待测血液样本，低/高剂量实验组待测血液样本中白细胞和红细胞数量均升高；并且，服用高剂量多肽复合皮克林乳液的待测血液样本中白细胞和红细胞数量均高于服用低剂量多肽复合皮克林乳液；可见，本申请提供的多肽复合皮克林乳液能够有效提高白细胞和红细胞数量。
表5
表6
如图7-8、表7-8所示，相较于对照组待测血液样本，低/高剂量实验组待测血液样本中前白蛋白浓度显著提高，血白蛋白浓度有所提高；并且，服用高剂量多肽复合皮克林乳液的待测血液样本中血白蛋白和前白蛋白浓度均高于服用低剂量多肽复合皮克林乳液；可见，本申请提供的多肽复合皮克林乳液能够有效提高血白蛋白和前白蛋白浓度，具有改善由缺少血白蛋白而导致的营养不良，以及提高体内甲状腺激素和维生素A的运输和分布。
表7
表8
如图9、表9所示，相较于对照组待测血液样本，低/高剂量实验组待测血液样本中转铁白蛋白浓度有所提高，其中服用高剂量与低剂量多肽复合皮克林乳液的待测血液样本中转铁白蛋白浓度差异不显著；可见，本申请提供的多肽复合皮克林乳液能够提高转铁白蛋白浓度，但服用剂量的提高对于转铁白蛋白浓度的提高效果不显著，具有改善由缺少转铁白蛋白而导致的缺乏性贫血或铁过载症。
表9
如图10、表10所示，相较于对照组待测血液样本，低/高剂量实验组待测血液样本中血红蛋白浓度有所提高，服用低剂量多肽复合皮克林乳液的待测血液样本中血红蛋白浓度与对照组差异不显著；可见，本申请提供的多肽复合皮克林乳液能够提高血红蛋白浓度，但服用剂量较低对于血红蛋白浓度的提高效果不显著，服用剂量为400 ml/天时能够充分发挥提高血红蛋白浓度的功能，具有改善由缺少血红蛋白而导致的贫血。
表10
本发明说明书中未详细描述内容为本领域技术人员公知技术。虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (4)

1.一种高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液，其特征在于，所述多肽复合皮克林乳液按重量份由下述成分组成：松茸提取物5份、多肽混合物140份、氨基酸混合物23份、微量元素混合物0.5份、玉米胚芽油1-30份、包埋脂肪酸1-10份、菊粉50份、麦芽糊精20份、β-环糊精3份；
所述多肽混合物按重量份由下述成分组成：大豆蛋白肽100份、乳清蛋白肽20份和蛋清肽20份；
所述氨基酸混合物按重量份由下述成分组成：谷氨酰胺20份、亮氨酸1份、异亮氨酸1份和缬氨酸1份；
所述微量元素混合物按重量份由下述成分组成：维生素A 0.1份、葡萄糖酸钙0.1份、硫酸亚铁0.1份、硫酸锌0.1份和牛磺酸0.1份；
所述多肽复合皮克林乳液的制备方法包括以下步骤：
S1：选取新鲜松茸，清洗除去杂质后进行粉碎，获得松茸粉；
S2：将S1中获得的松茸粉放入提取容器中，加入提取溶剂，搅拌，提取反应结束后，对获得的松茸提取混合物进行过滤，获得松茸提取物；
S3：将S2中获得的松茸提取物进行浓缩处理，对上述浓缩后的松茸提取物进行干燥，通过粉碎机对上述干燥后的松茸提取物进行粉碎，获得松茸提取物粉末；
S4：对大豆蛋白肽、乳清蛋白肽和蛋清肽进行酶解反应，待酶解反应后，对上述酶解后的多肽进行分离纯化处理，再进行浓缩、干燥和粉碎，获得多肽混合物粉末；
S5：将S3中获得的松茸提取物粉末、S4中获得的多肽混合物粉末、氨基酸混合物、微量元素混合物、玉米胚芽油、包埋脂肪酸、菊粉、麦芽糊精和β-环糊精按照重量份数混合均匀，获得高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液；
S2中所述的提取溶剂为乙醇或水；所述提取反应的提取温度为≤60℃，提取时间为6h-24 h；
S2中所述过滤的步骤为：使用筛网或滤布对上述松茸提取混合物进行过滤，分离出固体残渣和松茸粗提物；使用滤纸或微孔滤膜，对上述获得的松茸粗提物进行二次过滤；
S4中所述的酶解反应是将酶与大豆蛋白肽、乳清蛋白肽和蛋清肽按照1：（20-60）：（10-20）：（10-20）的质量添加比例进行反应，在40-70°C、pH=8-10的条件下进行酶解反应，所述酶解反应的反应时间为3 h-7 h；所述酶解反应中的酶为中性蛋白酶、菠萝蛋白酶或碱性蛋白酶中的任意一种。
2.根据权利要求1所述的多肽复合皮克林乳液，其特征在于，所述多肽复合皮克林乳液的制备方法S3中所述浓缩的步骤为：使用旋转蒸发仪在30-60℃条件下进行溶剂的蒸发；所述干燥为喷雾干燥或冷冻干燥中的任意一种方法。
3. 根据权利要求1所述的多肽复合皮克林乳液，其特征在于，所述多肽复合皮克林乳液的制备方法S4中所述分离纯化处理的步骤为：在10000-15000×g、4℃条件下离心10-30min，然后采用膜分离方法进行透析，先经过微滤去除悬浮颗粒和大分子物质，再控制透析过程中的参数，流量为1-1000 L/h、压力为0.1-0.4 mPa、温度为15-30℃、pH值为6-8。
4.权利要求1至3任一项所述高效补充蛋白质的多肽复合皮克林乳液在制备蛋白补充药剂中的应用。
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