CN118599010A - 一种hpv16/18/52治疗性疫苗、制备方法和应用 - Google Patents
一种hpv16/18/52治疗性疫苗、制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物工程技术领域，特别是一种HPV16/18/52治疗性疫苗、制备方法和应用，本发明公开了一种融合蛋白，是如下a)或b)的蛋白：a)氨基酸序列是SEQ ID No.2的融合蛋白；b)将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有结合HPV16/18/52E6‑E7活性的融合蛋白。本申请设计的HPV治疗性疫苗KDTV001是以非复制型Ad5为载体，针对HPV16/18/52E6‑E7蛋白的HPV治疗性疫苗，KDTV001肌肉注射后在机体内发挥免疫效应的机制是腺病毒疫苗编码的抗原经由抗原提呈细胞呈递到T细胞，特异性地攻击HPV16/18/52的游离病毒以及整合了HPV16/18/52E6和E7基因的宫颈上皮细胞，最终清除病毒，逆转CIN的进展。主要应用人群为HPV持续感染、宫颈、肛门及外阴内瘤变。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，特别是一种HPV16/18/52治疗性疫苗、制备方法和应用。
背景技术
粘膜和皮肤是HPV最常见的感染区域。尤其是性活动活跃的育龄期女性，可能通过与受感染的伴侣性接触而感染HPV。HPV通过破损的上皮细胞感染基底上皮细胞，引起宫颈发育不良和CIN，高危型HPV持续感染导致宫颈癌的发生。大多数自然的HPV感染局限于粘膜的上皮内层，不会发展成癌症。大约90％的HPV感染患者在病毒感染后的几个月内在固有免疫反应和特异性体液免疫介导下清除病毒。10％的患者持续感染，约1％的患者患癌症的风险增加。持续性HPV感染是最终导致宫颈癌发生的一个重要原因。因此及时清除HPV病毒的感染并逆转宫颈上皮内瘤变的对于最终阻止发展为宫颈癌至关重要。但是迄今为止HPV没有特效药。临床上治疗HPV的一些传统疗法如：激光、冷冻、手术等，存在治疗不彻底、疗程较长、易留疤痕等弊端。其中，最难以克服的就是治疗后HPV反复复发的难题。目前所有的HPV疫苗均为预防性疫苗，对已有感染或者病变无任何治疗作用。并且现有疫苗也不能预防所有高危型HPV持续性感染及引起的宫颈病变，即使接种了HPV疫苗，也应该按照相关部门的建议，需要定期宫颈癌筛查。因此，开发治疗性疫苗在HPV的治疗中具有广阔的应用前景。
与预防性HPV疫苗相比，治疗性HPV疫苗的开发进展迄今为止非常缓慢。虽然一些研究报道有希望的临床反应，但诱导免疫反应和临床反应之间没有明确的关系。可能的原因是现阶段我们对控制和清除宿主中HPV感染细胞的免疫反应机制缺乏了解，对肿瘤微环境和免疫逃避机制的研究也不清楚。但是随着对抗HPV感染的免疫机制的深入的研究，我们有信心设计出更好的疫苗联合佐剂的使用，引导未来有效疫苗开发，填补国内治疗性HPV疫苗研究和市场的空白。
研究证实，高危型HPV的基因型分布及感染率在不同国家地区、不同地理环境、不同种族和人群间存在明显差异。高危型HPV16和HPV18是研究明确的致癌性最强的两种基因型。HPV16/18/58/33和52是我国宫颈癌中最主要的5种亚型。HPV52在北美、亚洲及非洲的感染率尤其高。国内研究报道HPV52在女性中的总体感染率高达2.4％，而在华中地区更加高达3.1％，是所有高危型HPV感染率最高的一种基因型，且在宫颈癌女性中的感染率高达3.6％。研究表明，随着宫颈病变的加重，高危型HPV的混合感染率增加，HPV的多重混合感染与宫颈癌预后不良有关，这可能与HPV多重混合感染的宫颈癌患者治疗失败率高于单一感染的患者有关。因此，应加强多重混合感染患者的治疗和检测。现在临床实验的HPV治疗性疫苗的抗原基本全部集中在单一HPV16E6-E7或者HPV18 E6-E7以及HPV16和HPV18两种型别，没有针对除了HPV16和HPV18其他基因型，尤其是HPV52/58/33/31等。因此开发针对多种型别的治疗性HPV疫苗对提高高级别宫颈内瘤变治愈率同样重要。
近期非复制性腺病毒载体作为主要抗击新冠病毒疫苗的载体再次引起大家的高度重视。非复制腺病毒载体的主要优点是高滴度生长能力，易于操作，不整合人类基因组，强大的免疫原性，易于临床大规模生产等。并且现在针对COVID-19的Ad载体疫苗已获批准并在全球范围内使用。大规模的临床数据显示出Ad载体作为新发和再发传染病疫苗平台的巨大潜力和安全性。基于现阶段HPV的感染和治疗现状，以及我们实验室的研究背景，设计的HPV治疗性疫苗KDTV001是以非复制型Ad5为载体，针对HPV16/18/52E6-E7蛋白的HPV治疗性疫苗，KDTV001肌肉注射后在机体内发挥免疫效应的机制是腺病毒疫苗编码的抗原经由抗原提呈细胞呈递到T细胞。激活的CD4+细胞分化为特异性Th细胞，活化的CD8+细胞分化为特异性的CTL细胞，以及分泌的IFN-γ，IL-4等细胞因子的作用下，特异性地攻击HPV16/18/52的游离病毒以及整合了HPV16/18/52E6和E7基因的宫颈上皮细胞，最终清除病毒，逆转CIN的进展。主要应用人群为HPV持续感染、宫颈、肛门及外阴内瘤变。
发明内容基于上述目的，本发明提供了一种用于编码HPV16、HPV18和HPV52的E6和E7融合蛋白的基因优化的多核苷酸，所述的多核苷酸的序列如SEQ ID No.1所示。所述多核苷酸以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺病毒E1基因的HEK293细胞为包装细胞系，经包装获得重组腺病毒载体新型HPV16/18/52治疗性疫苗。
发明内容
本发明首先提供了一种融合蛋白，是如下a)或b)的蛋白：
a)氨基酸序列是SEQ ID No.2的融合蛋白；
b)将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有结合HPV16/18/52E6-E7活性的融合蛋白。
本发明还提供了与上述融合蛋白相关的生物材料，为下述B1)至B8)中的任一种：
B1)编码上述融合蛋白的核酸分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体，
B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；
B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；
B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；
B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；
B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；
任选地，所述载体包括腺病毒载体；
任选地，所述重组微生物包括HEK293A细胞。
在某些实施例中，所述核酸分子为如下1)或2)或3)或4)所示的核酸分子：
1)编码序列是序列表中SEQ ID No.2的DNA分子或cDNA分子；
2)核酸序列是序列表中SEQ ID No.1的DNA分子；
3)与1)或2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码上述蛋白的cDNA分子或基因组DNA分子；
4)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码上述融合蛋白的cDNA分子或基因组DNA分子。
本发明还提供了上述的融合蛋白在制备治疗HPV16/18/52的疫苗或药物中的应用。
本发明还提供了上述的生物材料在制备治疗HPV16/18/52的疫苗或药物中的应用。
本发明还提供了扩增编码上述融合蛋白的核酸分子片段的引物对。
在某些实施例中，所述扩增引物对为：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物为SEQ ID NO.4所示。
本发明还提供了一种上述生物材料的制备方法，包含以下步骤：(1)克隆HPV16/18/52序列；(2)将步骤1的序列进行同源重组构建新的质粒。
本发明还提供了一种治疗HPV16/18/52的疫苗或药物的制备方法，利用上述的生物材料进行克隆，繁殖，纯化得到。
本发明最后提供了一种治疗HPV16/18/52的疫苗或药物，所述产品包括上述的蛋白或上述的生物材料。
本发明与现有技术相比，至少具有如下有益效果：
本申请设计的HPV治疗性疫苗KDTV001是以非复制型Ad5为载体，针对HPV16/18/52E6-E7蛋白的HPV治疗性疫苗，KDTV001肌肉注射后在机体内发挥免疫效应的机制是腺病毒疫苗编码的抗原经由抗原提呈细胞呈递到T细胞。激活的CD4+细胞分化为特异性Th细胞，活化的CD8+细胞分化为特异性的CTL细胞，以及分泌的IFN-γ，IL-4等细胞因子的作用下，特异性地攻击HPV16/18/52的游离病毒以及整合了HPV16/18/52E6和E7基因的宫颈上皮细胞，最终清除病毒，逆转CIN的进展。主要应用人群为HPV持续感染、宫颈、肛门及外阴内瘤变。
附图说明
图1质粒信息；
图2WB检测BESA-2B转染KDTV001后抗原的表达以及P53和RB蛋白的表达；
图3Elispot检测KDTV001接种C57BL/6J小鼠后特异性的IFN-γ的产生；
图4Elispot检测KDTV001接种CD1(ICR)小鼠后特异性的IFN-γ的产生；
图5Elispot检测KDTV001接种人MHCI类分子基因型B-HLA-A 2.1、B-HLA-A24.2、B-HLA-A 11.1转基因小鼠后特异性的IFN-γ的产生；
图6A.KDTV001和MATV0接种后TC-1皮下瘤的生长曲线。B.在上述没有成瘤的KDTV001组中再次接种TC-1细胞，观察并测量肿瘤的大小；
图7接种不同剂量的KDTV001对TC-1皮下的生长抑制曲线；
图8A.KDTV001在C57BL/6J小鼠体内对HPV16 E7特异性的杀伤效应。B.KDTV001在C57BL/6J小鼠体内对HPV18 E6特异性的杀伤效应。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。
重组蛋白的核苷酸序列SEQ ID No.1：
ATGCACGGAGACACTCCCACGCTGCATGAGTACATGCTGGATCTACAGCCTGAGACCACAGACTTGTACGGCTACGGCCAGCTGAATGACAGCTCTGAGGAAGAGGACGAGATCGACGGCCCAGCCGGACAGGCTGAACCGGACCGGGCCCACTACAATATCGTGACATTCTGTTGCAAATGTGACTCTACGCTGAGACTGTGTGTACAGTCCACCCACGTGGATATTCGGACACTGGAGGATCTGCTGATGGGAACTCTGGGCATTGTGGGACCCATCTGCTCCCAAAAACCCATGCATGGCCCTAAGGCCACCCTGCAAGACATCGTACTGCACCTGGAGCCCCAGAACGAGATTCCCGTGGATCTTCTGGGTCACGGTCAGCTGAGCGACAGCGAAGAAGAGAACGATGAAATCGACGGCGTCAACCACCAGCACTTGCCAGCCAGACGGGCAGAGCCACAGAGACACACCATGCTGTGTATGTGCTGTAAGTGTGAGGCCCGCATCGAACTGGTGGTCGAATCCAGTGCTGATGACCTGAGAGCTTTCCAGCAACTGTTCCTGAACACACTGAGCTTCGTTGGCCCCTGGTGTGCCATGAGAGGCGACAAAGCCACCATTAAGGACTACATCCTGGACTTACAGCCCGAGACAACCGACTTACACGGTTACGGCCAGCTAGGTGACTCTTCTGACGAAGAGGACACAGATGGTGTGGACCGACCTGATGGCCAGGCTGAGCAGGCCACTAGCAACTATTACATTGTAACCTACTGTCATAGCTGTGATAGCACCCTCAGACTGTGTATTCACTCCACTGCTACCGATCTGCGGACACTGCAGCAGATGCTGCTGGGAACCTTGCAAGTTGTGGGGCCCGGCTGCGCCAGGCTTATGCATCAGAAGAGGACAGCTATGTTCCAGGACCCGCAAGAACGGCCTCGTAAGCTGCCTCAGCTGTGCACAGAGCTGCAGACGACCATCCATGACATCATCCTTGAATGTGTGTACTGTAAACAACAGCTGCTGCGAAGAGAAGTCTATGACTTTGCTTTCCGAGATCTGTGCATAGTCTATCGTGACGGAAACCCCTATGCCGTGGGTGATAAGTGCCTGAAGTTTTATTCCAAAATCTCGGAATACCGGCACTACTGCTACAGCCTTTACGGCACAACCCTGGAGCAGCAGTATAACAAACCTTTATGCGATCTTCTGATCAGATGCATCAATGGACAGAAGCCTCTCTGCCCTGAAGAAAAGCAGCGCCACCTCGACAAGAAACAGAGGTTCCATAACATCAGAGGACGCTGGACAGGCCGGTGCATGTCTTGCTGCAGATCAAGCAGAACCAGGATGGCTAGGTTTGAAGATCCCACCCGGAGGCCATACAAGCTCCCTGACCTATGCACCGAACTGAACACCTCCTTGCAGGACATTGAAATCACCTGCGTGTACTGCAAGACAGTACTCGAGCTGACAGAAGTGTTCGAGTTCGCCTTCAAGGACCTCTTCGTGGTGTATAGAGACAGCATCCCTCACGCAGCCGGCCACAAGTGCATTGACTTTTACTCTAGAATCCGTGAGCTGCGTCACTACAGCGACTCTGTGTACGGAGACACCCTGGAGAAACTCACCAACACGGGCCTGTACAACTTGCTGATTCGATGCCTCAGAGGCCAAAAGCCACTCAACCCTGCCGAAAAACTGCGACACCTTAATGAAAAGAGGCGTTTTCACAATATCGCAGGACACTACAGAGGACAGTGCCACAGCTGCTGCAACAGGGCCAGACAGGAGAGACTGCAGAGACGCATGTTTGAGGACCCTGCCACAAGACCTAGAACCCTGCACGAGCTTTGTGAGGTGCTCGAAGAGAGTGTGCATGAAATCAGATTGCAGTGTGTTCAGTGCAAGAAGGAGCTGCAGAGAAGAGAGGTTTACAAGTTCCTGTTCACCGACCTGCGAATCGTGTACAGGGACAACAACCCTTACGGCGTGGGCATCATGTGTCTGAGATTCCTTAGCAAGATTAGCGAGTACAGACATTACCAGTACAGCCTTTATGGCAAGACCCTGGAGGAACGTGTGAAGAAGCCTCTGAGTGAGATCACCATCCGGTGCATTATTGGTCAAACTCCCCTGTGCCCAGAGGAGAAAGAAAGACATGTGAACGCAAACAAGCGGTTCCACAATATCATGGGCAGATGGACCGGCCGGTGCTCAGAATGCTGGCGGCCAAGATGA；
重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2：
MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVGPICSQKPMHGPKATLQDIVLHLEPQNEIPVDLLGHGQLSDSEEENDEIDGVNHQHLPARRAEPQRHTMLCMCCKCEARIELVVESSADDLRAFQQLFLNTLSFVGPWCAMRGDKATIKDYILDLQPETTDLHGYGQLGDSSDEEDTDGVDRPDGQAEQATSNYYIVTYCHSCDSTLRLCIHSTATDLRTLQQMLLGTLQVVGPGCARLMHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGNPYAVGDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINGQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRMARFEDPTRRPYKLPDLCTELNTSLQDIEITCVYCKTVLELTEVFEFAFKDLFVVYRDSIPHAAGHKCIDFYSRIRELRHYSDSVYGDTLEKLTNTGLYNLLIRCLRGQKPLNPAEKLRHLNEKRRFHNIAGHYRGQCHSCCNRARQERLQRRMFEDPATRPRTLHELCEVLEESVHEIRLQCVQCKKELQRREVYKFLFTDLRIVYRDNNPYGVGIMCLRFLSKISEYRHYQYSLYGKTLEERVKKPLSEITIRCIIGQTPLCPEEKERHVNANKRFHNIMGRWTGRCSECWRPR；
实施例1腺病毒构建发明技术：
本发明设计一种基于基因合成技术、体外连接技术和BJ5183同源重组技术组合应用构建KDTV001非复制性5型腺病毒载体，具体如下：基于AdEasy系统中Padeasy-1和Pshuttle-CMV两个质粒，
(1.1)使用点突变技术构建获得Pshuttle-BstBI；构建体系如下：Fastmutagenesis system(Transgene，货号：FM111)，引物如表1所示：
表1引物序列
(1.2)反应体系如表2：
表2反应体系
(1.3)PCR运行程序设置如下：
(1.4)通过测序鉴定正确的克隆，获得Pshuttle-CMV-BstBI质粒。
(2)利用BJ5183同源重组技术将Pshuttle-CMV-BstBI与Padeasy-1两个质粒共转染在BJ5183内实现同源重组，获得Pad-BstBI；
(2.1)PmeI酶切Pshuttle-BstBI获得线性化质粒；
(2.2)线性化的Pshuttle-BstBI转染入Bj5183-AD-1感受态中，同源重组获得pad-CMV-BstBI；
(2.3)测序鉴定正确的克隆，提取质粒；
(2.4)转入高拷贝感染态中T1，再次鉴定，获得pad-CMV-BstBI菌种和质粒。(3)体外基因合成HPV16+18+52E6 E7(密码子优化后基因序列)；
(4)构建KDTV001质粒：
(4.1)BstBI酶切pad-CMV-BstBI质粒；
(4.2)以HPV16+18+52E6 E7为模板，PCR获得体外连接片段，引物如下：斜体为PCR引物HPVE6E7段，下划线为同源重组重合段；引物如表3所示：
表3引物序列
(4.3)体外连接上述(4.1)和(4.2)产物，体系如表4所示：
表4反应体系
(4.4)将上述产物取5ul转入T1中，进行克隆筛选和鉴定；
(4.5)获得KDTV001质粒，PacI酶切KDTV001质粒后纯化，转染HEK293A细胞最终获得KDTV001非复制性腺病毒载体，参见图1。
实施例2、鉴定KDTV001的免疫效应。
(1)KDTV001抗原的表达。
在体外MOI＝50感染BESA-2B细胞，WB检测KDTV001表达融合蛋白，上样顺序是PBS、MATV0和KDTV001如图2，结果显示用HPV16 E6、HPV16E7、HPV18 E、HPV18 E7和HPV52 E7抗体检测融合蛋白基本都在一个位置，大小在100KD附近。由于缺少商品化的HPV52 E6和HPV52E7的抗体，由普健生物公司合成抗HPV52 E7抗体。
(2)KDTV001在不同种属小鼠体内的免疫原性。
(2.1)KDTV001在C57BL/6J小鼠体内的免疫反应。
健康8周龄的C57BL/6J雌性小鼠肌肉注射KDTV001病毒，滴度为108pfu/只，间隔1月后接种相同剂量的病毒加强针。对照组为空载病毒MATV0。加强针1周后处死小鼠。分离脾脏淋巴细胞，多肽池刺激淋巴细胞，Elispot实验检测淋巴细胞针对抗原的特异性IFN-γ的产生。结果如图3所示，实验组KDTV001在小鼠体内能产生针对抗原的特异性免疫反应，其中针对HPV16 E6、HPV16 E7、HPV18 E6以及HPV52 E7达到阳性标准，最显著的是HPV16 E7、HPV18 E6，和其他文献报道的HPV治疗性疫苗在C57BL/6J小鼠体内的反应类似。
(2.2)KDTV001在CD1(ICR)小鼠体内免疫原性
健康8周龄的CD1雌性小鼠肌肉注射KDTV001病毒，滴度为108pfu/只，间隔1月后接种相同剂量的病毒加强针。对照组为空载病毒MATV0。加强针1周后处死小鼠。分离脾脏淋巴细胞，多肽池刺激淋巴细胞，Elispot实验检测淋巴细胞针对抗原的特异性IFN-γ的产生。结果如图4所示，实验组KDTV001在CD1小鼠体内能产生针对抗原的特异性免疫反应，其中针对HPV16 E6、HPV16 E7、HPV18 E7以及HPV52 E6达到阳性标准。
(2.3)人源化转基因小鼠体内的免疫反应
选取人群中分布最多的三种MHCI类分子基因型B-HLA-A2.1、B-HLA-A24.2、B-HLA-A 11.1的转基因小鼠验证KDTV001的6个抗原的免疫原性。转基因小鼠接种KDTV001 I针和间隔一月加强针后1周处死后分离小鼠脾脏淋巴细胞，行Elispot检测小鼠体内特异性免疫反应。结果如下图5所示，在B-HLA-A2.1转基因小鼠体内产生针对HPV18 E6和HPV52 E6的免疫反应；在B-HLA-A24.2转基因小鼠体内产生针对HPV16 E6、HPV18 E6和HPV52 E6的免疫反应；在B-HLA-A11.1转基因小鼠体内产生针对HPV16 E7、HPV18 E6、HPV18 E7和HPV52 E7的免疫反应。
综上在CD1小鼠体内疫苗，可以检测出针对HPV16 E6、HPV16 E7、HPV18E7和HPV52E6特异性的免疫反应，在大鼠体内接种疫苗能产生针对HPV16E6和HPV18 E6特异性的免疫反应，在C57BL/6J小鼠体内可以检测到针对HPV16 E7和HPV18 E6的特异性，互补验证MAT44的免疫性。以及在三种MHC I类分子人源化转基因小鼠体内能产生针对6个抗原的免疫反应。
实施例3MATV44正在C57BL/6J小鼠体内对TC-1的抑瘤效应。
TC-1细胞，一种转基因HPV16 E6和HPV16 E7以及ras基因的小鼠肺上皮细胞，建立臀部皮下瘤模型。随机分组MATV44和MATV0组，于接种皮下瘤的第10左右接种疫苗KDTV0013X108pfu/ml，隔天测量皮下瘤大小记录，如图6A所示，结果显示KDTV001在3X108pfu时能有效的抑制TC-1肿瘤的生长,疫苗接种1周后实验组肿瘤明显缩小，截止到对照组小鼠体积全部超过2000Mm3，MATV44的抑瘤率有100％。建立TC-1记忆模型。在上述没有成瘤的KDTV001组中再次接种TC-1细胞，观察并测量肿瘤的大小，如图6B所示：KDTV001疫苗的记忆效应能100％保护小鼠肿瘤的复发。
(1)KDTV001疫苗的抑瘤效果和剂量的相关性
建立TC-1臀部皮下瘤模型，分组接种105、106、5X106和107pfu/只的KDTV001，测量并纪录TC-1肿瘤的大小。肿瘤生长曲线如下107pfu、5X106pfu和106pfu的抑瘤率分别是80％，62％和31.6％，参见图7。
(2)体内杀伤实验检测KDTV001在小鼠体内对HPV16 E7和HPV18 E6特异性的杀伤效应。
C57BL/6J健康小鼠接种105、106、5X106和107pfu/只的MATV44两周后行体内杀伤实验，结果如下。体内杀伤实验针对HPV16 E7肽段在106pfu/只时杀伤率60％左右，针对HPV18E6肽段在105pfu/只的杀伤率高达90％左右，参见图8。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种融合蛋白，是如下a)或b)的蛋白：
a)氨基酸序列是SEQ ID No.2的融合蛋白；
b)将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有结合HPV16/18/52E6-E7活性的融合蛋白。
2.与权利要求1所述融合蛋白相关的生物材料，为下述B1)至B8)中的任一种：
B1)编码权利要求1所述融合蛋白的核酸分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体，
B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；
B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；
B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；
B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；
B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；
任选地，所述载体包括腺病毒载体；
任选地，所述重组微生物包括HEK293A细胞。
3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于：所述核酸分子为如下1)或2)或3)或4)所示的核酸分子：
1)编码序列是序列表中SEQ ID No.2的DNA分子或cDNA分子；
2)核酸序列是序列表中SEQ ID No.1的DNA分子；
3)与1)或2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1所述蛋白的cDNA分子或基因组DNA分子；
4)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1所述融合蛋白的cDNA分子或基因组DNA分子。
4.权利要求1所述的融合蛋白在制备治疗HPV16/18/52的疫苗或药物中的应用。
5.权利要求2所述的生物材料在制备治疗HPV16/18/52的疫苗或药物中的应用。
6.扩增编码权利要求1所述融合蛋白的核酸分子片段的引物对。
7.如权利要求6所述的引物对，其特征在于，所述扩增引物对为：正向引物如SEQ IDNO.3所示，反向引物为SEQ ID NO.4所示。
8.一种权利要求2所述生物材料的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)克隆HPV16/18/52序列；(2)将步骤1的序列进行同源重组构建新的质粒。
9.一种治疗HPV16/18/52的疫苗或药物的制备方法，其特征在于，利用权利要求2所述的生物材料进行克隆，繁殖，纯化得到。
10.一种治疗HPV16/18/52的疫苗或药物，所述产品包括权利要求1所述的蛋白或权利要求2所述的生物材料。
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