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CN118561966A - 人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体、截短体及其用途 - Google Patents

人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体、截短体及其用途 Download PDF

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CN118561966A
CN118561966A CN202410621371.5A CN202410621371A CN118561966A CN 118561966 A CN118561966 A CN 118561966A CN 202410621371 A CN202410621371 A CN 202410621371A CN 118561966 A CN118561966 A CN 118561966A
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mutant
herv
seq
sequence
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CN202410621371.5A
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徐荣臻
李梦圆
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Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
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Publication date
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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体、截短体及其用途。本发明人基于HERVs设计的包膜蛋白突变体和截短体能诱导免疫系统产生强力免疫反应，不仅可以用于各种治疗性和预防性疫苗如mRNA疫苗、蛋白亚单位疫苗、多肽疫苗等，治疗性和诊断用抗体的设计，特异性治疗性细胞产品的设计，如CAR‑T细胞、特异性细胞毒T细胞、CAR‑NK细胞、特异性NK细胞等，用于疾病的诊断、预防和治疗。

Description

人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体、截短体及其用途
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体、截短体及其用途。
背景技术
人内源性逆转录病毒(HERVs)是逆转录病毒在几百万年前感染人类并整合到人类基因组中，以孟德尔方式遗传至今的残余物，约占人类基因组8％。其中，大部分HERVs由于突变、缺失和编码序列中存在终止密码等原因，已失去编码能力，以往被认为是垃圾DNA。但近年来随着对HERVs生物学功能研究深入，发现一些HERVs不仅在一些特定组织和器官中具有重要生理功能，而且，可能还与血液和实体肿瘤、自身免疫性疾病、神经退行性疾病等发生发展密切相关。已知，HERVs包膜蛋白(envelope，Env)C端跨膜区(TM)具有多个免疫抑制结构域，如融合肽区(Fusion Peptide，FP)，免疫抑制区(Immunosuppressive Domains，ISD)，跨膜区(Transmembrane Domain，TMD)，具有强大免疫抑制功能，是肿瘤免疫耐受的重要病因。包膜蛋白N端(SU)参与多种炎症反应。
因此，研究HERVs包膜蛋白是否具有人类可利用和改造的重要生理功能，从而将其应用于疾病的诊断、预防和治疗是目前行业研究的痛点和热点。
发明内容
本发明涉及针对HERV-K、HERV-H和HERV-F包膜蛋白突变体和截短体及其在制备用于疾病诊断和/或治疗的药物中的用途，所述包膜蛋白突变体的突变位点，截短体的截短结构域为不受不同亚型(HERV-K、HERV-H和HERV-F)影响的保守区。
人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体或截短体，所述的突变体或截短体免疫抑制结构域中的单个或多个氨基酸进行突变。
优选的，所述的免疫抑制结构域为免疫抑制区。
优选的，所述的人内源性逆转录病毒为HERV-K、HERV-H或HERV-F中的任意一种。
优选的，所述的HERV-K为HERV-K108或HERV-K102中的任意一种，每种人内源性逆转录病毒分型对应的氨基酸序列为：
HERV-K108包膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:1所示，
HERV-K108包膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:5所示，
HERV-K102包膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:3所示，
HERV-K102包膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:7所示，
HERV-F包膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:9所示，
HERV-F包膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:11所示，
HERV-H包膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:13所示，
HERV-H包膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:15所示。
优选的，所述的突变体或截短体是人内源性逆转录病毒包膜蛋白经弗林蛋白酶水解后形成的跨膜蛋白，其对应的氨基酸序列为：
HERV-K108跨膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:2所示，
HERV-K108跨膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:6所示，
HERV-K102跨膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:4所示，
HERV-K102跨膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:8所示，
HERV-F跨膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:10所示，
HERV-F跨膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:12所示，
HERV-H跨膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:14所示，
HERV-H跨膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:16所示。
包膜蛋白突变体或截短体的用途，包括前述任一所述的人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体或截短体，在制备用于诱导免疫系统产生强力免疫反应的诊断和/或治疗的药物中的应用。
优选的，所述的诱导免疫系统产生强力免疫反应的诊断和/或治疗的药物为mRNA疫苗、蛋白亚单位疫苗、重组基因疫苗、动物源性抗体、包膜蛋白特异性细胞中的任意一种。
优选的，所述的重组基因疫苗为质粒载体疫苗、病毒载体疫苗或活细胞载体疫苗中的任意一种。
优选的，动物源性抗体为小鼠、大鼠、兔子或羊驼动物源性抗体中的任意一种。
优选的，所述的羊驼动物源性抗体为羊驼纳米抗体。
优选的，所述的包膜蛋白特异性细胞为细胞毒性T细胞、NK细胞、浆细胞、B细胞中的任意一种。
优选的，所述的细胞毒性T细胞为CD8+或CD4+中的任意一种。
根据前述任一所述的包膜蛋白突变体或截短体抗原制备的抗体的用途，在制备特异性细胞药物中的应用。
优选的，所述的特异性细胞药物为CAR-T、CAR-NK,或CAR-VAC细胞药物中的任意一种。
本发明的有益效果主要在于：
本发明人基于HERVs设计的包膜蛋白突变体和截短体能诱导免疫系统产生强力免疫反应，不仅可以用于各种治疗性和预防性疫苗如mRNA疫苗、蛋白亚单位疫苗、多肽疫苗等，治疗性和诊断用抗体的设计，特异性治疗性细胞产品的设计，如CAR-T细胞、特异性细胞毒T细胞、CAR-NK细胞、特异性NK细胞等，用于疾病的诊断、预防和治疗。
附图说明
图1为pCW-Cas9载体质粒图谱；
图2为pcDNA3.1(+)载体质粒图谱；
图3为HERV-K跨膜蛋白K-TM在不同血液肿瘤和正常血细胞中的表达；
图4为HERV-W跨膜蛋白W-TM在不同血液肿瘤和正常血细胞中的表达；
图5为ERVFRD包膜蛋白FRD-Env在不同肿瘤和正常血细胞中的表达；
图6为K-TM和W-TM对肿瘤细胞免疫逃逸影响；
图7为K-TM与T细胞CD3分子相互作用；
图8为HERVs包膜蛋白突变体、截短体和野生型对小鼠免疫反应影响。
具体实施方式
1、名词解释：
人内源性逆转录病毒(HERVs)；
包膜蛋白(envelope，Env)；
C端跨膜区(TM)，TM是Env经弗林蛋白酶(furin protease)水解后形成的跨膜蛋白；
融合肽区(Fusion Peptide，FP)；
免疫抑制区(Immunosuppressive Domains，ISD)；
跨膜区(Transmembrane Domain，TMD)；
HERV-W-Env(W-Env)；
HERV-F-Env(FRD-Env)；
HERV-K跨膜蛋白(K-TM)；
HERV-W跨膜蛋白(W-TM)；
包膜蛋白N端(SU)。
2、主要仪器和设备
3、主要试剂
4、细胞培养
本专利内所使用的Kasumi-1，KM3，NB4，Raji，Jurkat，K562，K562/adr，KG1，MV4-11，Mia，Panc-1，Hunh7，HepG2，SW620，U2OS，L02，Nalm6，LY3，Jeko1，THP-1，HL-60，MOLM13，ARP-1，8226，MM1.S，U266，H9，A549，H1975，IMR-32，U87，HT-29等细胞株，均购自于ATCC细胞库并保存于浙江大学肿瘤研究所细胞库。细胞使用1640完全培养基或DMEM完全培养基进行培养。培养过程中将细胞放置于37℃，含有5％CO2的恒温培养箱中，且定期进行检测，排除细菌，真菌，支原体污染等情况。根据实验计划及细胞状态，每2-3天进行细胞换液及细胞传代，维持细胞处于对数生长期状态。
5、从原代样本外周血中分离、培养单个核细胞
(1)抽取患者外周血，在EDTA抗凝管中轻柔摇晃防止血液凝固，置于冰盒中带回实验室。(2)在超净台中操作：首先将样本移入干净的15mL离心管中，用滴管轻柔吹打混匀。再向样本中加入等体积预冷的1×PBS缓冲液，轻柔混匀稀释。随后缓慢加入2倍样本体积的人淋巴细胞分离液。室温2500rpm水平离心20分钟，调整离心机升速2降速1。(3)吸取中间的白色单个核细胞层，用预冷的1×PBS缓冲液洗1次。室温下1500rpm离心5分钟。
(4)弃上清，加入2mL红细胞裂解液，室温裂解10分钟后，1000rpm离心5分钟。用
1×PBS缓冲液洗涤1次。
(5)收集细胞，加入蛋白裂解液，提取原代样本PBMC细胞总蛋白，用于后续westernblot实验。
实施例1HERV-K跨膜蛋白K-TM在不同血液肿瘤和正常血细胞中的表达
通过western blot技术检测HERV-K跨膜蛋白K-TM在血液肿瘤细胞株、原代肿瘤细胞样本、正常血细胞样本及一例白血病患者治疗前(UT)和治疗缓解(CR)后骨髓样本中的表达情况。
具体实验步骤如下：
(1)细胞蛋白提取及定量
a收集细胞，1000rpm离心5min，弃上清，加入1mL预冷的PBS重悬，并转移到1.5mLEP
管中，1000rpm，5min，离心弃上清；
b提前配置好蛋白裂解液，按照每1mL M-PER裂解液加入10μL蛋白酶抑制剂混合物以及10μL EDTA的比例进行配置。向细胞沉淀中加入适量的蛋白裂解液，冰上裂解30min。c在4℃，13000rcf条件下离心15min后，吸取上清置于0.6mL离心管中。取5μL，按照说明书用BCA试剂盒定量蛋白浓度。其余上清按照，上清：loading 4:1的比例加入
5×Loading Buffer，涡旋混匀，100℃金属浴加热10min，置于冰上备用或者放在-80℃冰箱长期保存。
(2)Western blot实验
a配置SDS-PAGE胶：根据目的蛋白分子量，配置浓度为10％的分离胶。依次向50mL
离心管中加入：ddH2O 4.0mL、30％丙烯酰胺3.3mL、1.5M Tris-HCl(pH 8.8)2.5mL、10％SDS 0.1mL、10％AP 0.1mL、TEMED 0.004mL。快速混匀后加入玻板中，并立即加入0.2mL异丙醇压平胶面。室温静置30min后，等待分离胶完全凝固。洗去异丙醇，静置晾干。同时配置浓缩胶，依次向50mL离心管中加入：ddH2O 1.72mL、30％丙烯酰胺0.5mL、0.5MTris-HCl(pH 6.8)0.76mL、10％SDS 0.03mL、10％AP 0.03mL、TEMED 0.003mL。共10mL，混匀后加到分离胶上，立即插入梳子。室温静置30min
后，浓缩胶完全凝固。保存于4℃冰箱留作实验备用。
b SDS-PAGE凝胶电泳：组装电泳设备，加入提前配置好的1×电泳液。拔掉梳子，向泳道中加入等质量的蛋白样品，同时取5μL蛋白预染marker在泳道两侧上样。跑浓缩胶时，
电压调至80V，电泳至分离胶时，再将电压调至130V。待溴酚蓝跑到分离胶底部时，停止电泳。
c转膜：将SDS-PAGE凝胶从电泳装置中取出，并浸泡于转膜液中。取出PVDF膜，在甲醇中浸泡10s。安装转膜装置，从下至上顺序依次是：转膜夹正极、海绵垫、双层滤纸、PVDF膜、凝胶、双层滤纸、海绵垫、转膜夹负极，同时排净凝胶和PVDF膜之间的气泡。固定转膜装置，加入转膜液，冰浴，恒流250mA转膜100min。
d封闭：取出PVDF膜，并在右上角剪角标记正面。将膜放入封闭液中，室温封闭1h。结束后，1×TBST洗膜，室温摇床上慢摇洗膜，10min，重复3次。
e一抗孵育：将PVDF膜放入提前配好的一抗中，4℃摇床孵育过夜。
f二抗孵育：次日，取出PVDF膜，先用1×TBST洗膜，10min洗3次。再将PVDF膜放入配置好的二抗中，室温摇床孵育1h。
g显色：二抗孵育结束后，1×TBST洗膜，10min洗3次。同时以1:1的比例配置显影A
液及B液，混匀后覆盖PVDF膜，在显影仪中进行显色。
实施例2HERV-W跨膜蛋白W-TM在不同血液肿瘤和正常血细胞中的表达
通过western blot技术检测HERV-W跨膜蛋白W-TM在血液肿瘤细胞株、白血病原代肿瘤细胞样本、正常血细胞样本中的表达情况。
具体实验步骤同实施例1。
实施例3ERVFRD包膜蛋白FRD-Env在不同肿瘤和正常血细胞中的表达
通过western blot技术检测HERV-FRD跨膜蛋白FRD-Env在不同血液肿瘤细胞株、实体肿瘤细胞株、白血病原代肿瘤细胞样本、正常血细胞样本中的表达情况。
具体实验步骤同实施例1。
实施例4HERV-K-TM和W-TM对肿瘤细胞免疫逃逸影响
(1)pCW-K-TM-HA及pCW-W-TM-HA可诱导慢病毒过表达质粒构建
全长K-TM氨基酸序列来源于人逆转录病毒K家族成员6Env蛋白(ENK-6，UniProt，Q69384)的跨膜区466-699aa，同时在序列氨基端融合信号肽(Signal Peptide，UniProt，Q69384，1-89aa)，羧基端融合HA标签。
全长W-TM氨基酸序列来源于人逆转录病毒W家族成员Syncytin-1蛋白(ERVW-1，UniProt，Q9UQF0)的跨膜区291-538aa，同时在序列氨基端融合信号肽(Signal Peptide，UniProt，Q9UQF0，1-20aa)，羧基端融合HA标签。
使用OptimumGene密码子优化技术对氨基酸序列进行人源密码子优化，并将得到的核酸序列插入pCW-Cas9载体(质粒图谱如图1所示)的EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点之间，构建得到质粒pCW-K-TM-HA和pCW-W-TM-HA。
(2)K-TM，W-TM可诱导过表达稳转细胞株构建
a将构建好的pCW-K-TM-HA及pCW-W-TM-HA质粒包装成病毒液。
b使用1mL 1640完全培养基重悬MCA205细胞，加入十二孔板中，需提前一天铺板使
MCA205细胞贴壁。
c向培养板中加入250μL病毒液和10μg/mL Polybrene，感染细胞24h。
d弃病毒上清，更换新鲜培养基后将细胞转入培养瓶，并加入2μg/mL工作浓度的嘌呤霉素筛选阳性细胞。
e待细胞达到一定生长密度时，取少量细胞用western blot验证K-TM-HA及W-TM-HA的表达情况。其余细胞继续使用嘌呤霉素持续筛选14day，即构建得到MCA205-K-TM-HA，
MCA205-W-TM-HA稳转过表达细胞株。
(3)MCA205异基因肿瘤模型构建
a动物实验使用由上海斯莱克动物实验有限公司提供的BALB/c小鼠(雌性，6周龄，体重20g左右)。实验动物饲养在浙江中医药大学动物实验中心的SPF清洁级环境中，动物实验方案及操作过程得到浙江大学医学院附属第二医院伦理委员会批准。
b过表达K-TM蛋白及W-TM蛋白的MCA205细胞经2μg/mL Dox诱导48h后，收集细胞，PBS洗涤1次，然后用PBS重悬细胞，使细胞悬液密度为5×106/mL。
c将BALB/c小鼠随机分为2组，每组5只。在小鼠左侧腋下分别接种0.2mL的MCA205-K-TM-HA和MCA205-W-TM-HA稳转过表达细胞株。接种瘤液后，2组小鼠给予100mg/kg剂量的Dox以诱导K-TM和W-TM蛋白表达，每日1次灌胃给药，连续给药20天。
d每周两次监测小鼠状态和皮下肿瘤生长状况，实验结束后将小鼠安乐死，解剖取皮下瘤，并拍照。
实施例5HERV-K-TM与T细胞CD3分子相互作用
(1)K-TM可诱导过表达Jurkat稳转细胞株构建
a将构建好的pCW-K-TM-HA质粒及pCW空载质粒包装成病毒液。
b使用1mL 1640完全培养基重悬Jurkat细胞，并加入十二孔板中。
c向培养板中加入250μL病毒液和10μg/mL Polybrene，感染细胞24h。
d弃病毒上清，更换新鲜培养基后将细胞转入培养瓶，并加入2μg/mL工作浓度的嘌呤霉素筛选阳性细胞。
e待细胞达到一定生长密度时，取少量细胞用western blot验证K-TM-HA的表达情况。其余细胞继续使用嘌呤霉素持续筛选14day，即构建得到Jurkat-K-TM-OE稳转过表达细胞株。
(2)K-TM和CD3ε免疫荧光共定位实验
a收集Jurkat-K-TM-OE细胞，用1×PBS洗涤细胞一次后，用胎牛血清重悬细胞至合适的密度。
b在载玻片上涂片，使用4％多聚甲醛固定细胞，10％兔抗血清封闭。
c加入CD3ε一抗，4℃孵育过夜。
d次日，从冰箱中取出玻片，用1×PBS洗片3次后，加入带Alexa Fluor 594荧光标记的抗鼠二抗在室温避光染色1h。
e用DAPI染细胞核，室温避光染色10min。用蔡司共聚焦激光扫描显微镜拍照观察，使用ZEN软件进行图像采集和分析。
实施例6HERVs包膜蛋白突变体、截短体和野生型对小鼠免疫反应影响
(1)抗原制备：发明人方制备包括野生型，突变体，截短体在内的H-Env包膜蛋白全长真核过表达质粒，pcDNA3.1(+)-H-Env，pcDNA3.1(+)-Mutant-H-Env，pcDNA3.1(+)
-Truncated-H-Env。全长H-Env氨基酸序列来源于人逆转录病毒H(简称HERV-H)家族成员Env蛋白(ENH1，UniProt，Q9N2K0)的1-584aa。突变H-Env氨基酸序列参照附录No7-1-XUHMV序列，截短H-Env氨基酸序列参照附录No8-1-XUHMV序列。使用OptimumGene密码子优化技术对氨基酸序列进行人源密码子优化，并将得到的核酸序列插入pcDNA3.1(+)载体(质粒图谱如图2所示)的EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点之间，构建得到质粒pcDNA3.1(+)-H-Env，pcDNA3.1(+)-Mutant-H-Env和pcDNA3.1(+)
-Truncated-H-Env。
(2)免疫及血清评价：按照常规小鼠免疫流程，采用上述质粒分别免疫6周龄Balb/c小鼠。采用滴度分析小鼠血清中抗体的效价，1:8000稀释OD450nm>1.0，同时效价>72900
(P/N>2.1)。效价合格后，用稳转细胞株、人肿瘤细胞系等流式验证，最后挑选免疫效果好的小鼠进行融合。
(3)细胞融合：根据免疫血清效价及流式，western blot等实验验证结果，进行评估确认后，选择最优的一只小鼠安排进入融合。
(4)阳性细胞单克隆化：细胞融合后，经预筛检测，更换培养基以减少检测背景，一周后进行ELISA初筛，挑选ELISA阳性克隆，进行两步有限稀释法进行亚克隆化，ELISA检测的5-10个阳性克隆进行扩大培养，用稳转细胞株、人肿瘤细胞系等流式验证，最终选择的阳性克隆进行扩大培养，冻存。
(5)腹水制备，纯化抗体：将阳性克隆进行腹水制备，采用间接ELISA分析腹水中抗体的效价，同时进行亚型的分析。并进行腹水的抗体亲和纯化。
(6)western blot技术检测抗体效价：具体实验步骤同实施例1。
实验结果
实施例1结果显示：A：K-TM在不同血液肿瘤细胞株中的表达；B：K-TM在不同原代白血病细胞中的表达。Jurkat为阳性对照；C：K-TM在正常血液细胞样本中的表达，K562为阳性对照；D：K-TM在一例白血病患者治疗前(UT)和治疗缓解(CR)后骨髓样本表达情况。
实施例2结果显示：A：W-TM在不同肿瘤细胞株中的表达；B：W-TM和PD-L1在不同原代白血病细胞中的表达。KG1为阳性对照；C：W-TM和PD-L1在正常血液细胞样本中的表达。
实施例3结果显示：A：FRD-Env在不同肿瘤细胞株中的表达；B：FRD-Env在不同原代白血病细胞中的表达。THP1为阳性对照；C：FRD-Env在正常血液细胞样本中的表达。THP1为阳性对照。
实施例4结果显示：表达K-TM蛋白MCA-205细胞接种BALB/C小鼠，可见肿瘤细胞快速生长，而表达W-TM的MCA-205细胞不能在BALB/c小鼠体内生长。
实施例5结果显示：A：K-TM蛋白与T细胞表面CD3分子结合；B：K-TM抑制T细胞活化模式图。K-TM与T细胞表面CD3分子结合，阻断其与TCR受体结合，从而抑制T细胞活化。
实施例6结果显示：A：突变体包膜蛋白质粒免疫小鼠后能产生6种不同类型抗体，如黑色箭头所示；B：截短体包膜蛋白质粒免疫小鼠后能产生2种特异性抗体，如黑色箭头所示；C：野生型包膜蛋白质粒免疫小鼠后仅产生1种特异性抗体，如黑色箭头所示。
结果与分析
本发明人应用Western blot技术检测多个不同肿瘤细胞株、白血病患者原代肿瘤细胞样本以及正常血细胞样本HERV-K跨膜蛋白(K-TM)。结果发现，多数肿瘤细胞株和原代肿瘤细胞样本高表达K-TM，而正常外周血细胞样本低表达或不表达K-TM(实施例1，图3A-C)。值得关注的是，一些高表达K-TM的白血病患者，经过治疗获得完全缓解后K-TM也显著减少(实施例1，图3D)。
HERV-W被认为在胎盘发育过程中具有重要生理功能的人内源性逆转录病毒。最近有文献报道，一些COVID-19新冠病毒感染患者也存在严重T细胞功能耗竭现象。这些患者外周血T淋巴细胞异常高表达HERV-W-Env(W-Env)，其表达水平不仅与T细胞耗竭标志PD-1水平以及炎症因子IL-6和IL-10的水平呈显著正相关，而且与疾病严重程度密切相关。这些结果提示，W-Env异常活化与COVID-19患者T细胞功能耗竭可能密切相关。本发明人应用Western blot检测HERV-W-Env基因编码的W-TM蛋白在不同肿瘤细胞株、原代肿瘤细胞样本以及正常血细胞样本中表达情况。结果发现，W-TM蛋白在多数肿瘤细胞株(实施例2，图4A)和原代肿瘤细胞样本中呈高表达状态(实施例2，图4B)，而正常血细胞样本低表达或不表达(实施例2，图4C)。值得关注的是，一些高表达W-TM蛋白肿瘤样本同时表达细胞源性免疫检查点PD-L1(实施例2，图4B)。这些结果提示，W-TM有可能直接或间接参与肿瘤免疫逃逸。
HERV-F是另一个正常情况下只在胎盘组织中表达的人内源性逆转录病毒，其编码的包膜蛋白样本FRD-Env(C端是TM蛋白)具有显著免疫抑制功能。目前，有关样本FRD-Env和TM(F-TM)在肿瘤中的作用知道的很少。由于目前没有针对F-TM蛋白抗体，本发明人应用Western blot检测HERV-F的样本FRD-Env蛋白在不同肿瘤细胞株、原代肿瘤细胞样本以及正常血细胞样本中表达情况。结果发现，21株不同肿瘤细胞株都存在不同程度样本FRD-Env表达(实施例3，图5A)，20例白血病患者原代肿瘤细胞样本9例存在FRD-Env表达(45％)(实施例3，图5B)，而20例健康人血细胞样本FRD-Env不表达或低表达(实施例3，图5C)。
为验证K-TM和W-TM是否具有帮助肿瘤细胞逃逸免疫功能，本发明人用MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞(C57BL/6小鼠来源)分别构建K-TM和W-TM高表达细胞，然后，分别接种免疫功能正常的野生型BALB/c小鼠，观察这2个内源性逆转录病毒蛋白对MCA-205细胞在BALB/c小鼠体内生长影响。对BALB/c小鼠来说，MCA-205细胞属于异基因细胞，接种到BALB/c小鼠体内会被其免疫细胞清除，不能在BALB/c小鼠体内生长。但如果MCA-205细胞带有免疫抑制功能蛋白，抑制小鼠免疫细胞功能，则能在小鼠体内生长。实验结果发现，表达W-TM的MCA-205细胞不能在BALB/c小鼠体内生长，而表达K-TM的MCA-205细胞能在BALB/c小鼠体内快速生长(实施例4，图6)。这些结果表明，K-TM具有强大免疫抑制功能，能赋予MCA-205肿瘤细胞免疫逃逸功能。
与大多数人类肿瘤相类似，一些逆转录病毒感染引起的肿瘤也常常伴有T细胞高表达PD1/PDL1、CTLA-4等细胞源性ICI，出现T细胞免疫功能耗竭和肿瘤免疫逃逸现象，如鼠类白血病、牛白血病和HTLV-1成人T细胞白血病。尽管其确切病因和分子机制还不十分清楚，但病毒包膜蛋白Env和TM蛋白可能是最关键的调控分子。逆转录病毒TM是Env经弗林蛋白酶(furin protease)水解后形成的跨膜蛋白，包含如融合肽FP、ISD和TMD多个免疫抑制功能域，其中ISD在不同逆转录病毒高度保守。成熟有功能的TM蛋白主要分布在细胞膜上，具有强大免疫抑制功能，是逆转录病毒逃避宿主免疫系统攻击的有力武器。尤其需要指出的是，一些内源性逆转录病毒的包膜蛋白及其跨膜蛋白TM包含多个具有免疫抑制功能的结构域。在HTLV-1gp21和HIV-gp41 TM中，FP、ISD和TMD已证实能干扰CD3与TCR受体结合，抑制T细胞功能。已知，K-TM能显著抑制T细胞生长，上调免疫抑制性炎症因子IL-6和IL-10。我们应用co-IP和免疫荧光共定位实验发现，K-TM能与T细胞CD3分子结合(实施例5，图7A)。这些初步结果提示K-TM可能具有直接抑制T细胞功能，其作用机制可能阻止CD3活化T细胞(实施例5，图7B)。
为验证HERVs包膜蛋白是否具有免疫抑制功能，本发明人设计了不同类型的包膜蛋白突变体和截短体，然后通过质粒基因免疫技术将表达这些突变体、截短体和野生型的质粒注射到小鼠体内，每隔1周免疫一次，共进行3次免疫。免疫小鼠后获得腹水制备抗体，通过western blot实验对制备所得抗体进行效价检测，然后分别观察和比较突变体、截短体和野生型的质粒对小鼠的免疫反应效果。结果发现，通过三次免疫，突变体包膜蛋白和截短体包膜蛋白免疫产生的特异性抗体种类和效价显著高于野生型包膜蛋白。尤其是突变体包膜蛋白能产生6种不同类型抗体(实施例6，图8A)，截短体能产生2种特异性抗体(实施例6，图8B)，而野生型包膜蛋白质粒免疫的小鼠，特异性抗体的产生不仅种类少(仅1种)，而且效价很低(实施例6，图8C)。这一结果表明，本发明人设计的包膜蛋白突变体和截短体能诱导免疫系统产生强力免疫反应，不仅可以用于各种治疗性和预防性疫苗如mRNA疫苗、蛋白亚单位疫苗、多肽疫苗等，治疗性和诊断用抗体的设计，特异性治疗性细胞产品的设计，如CAR-T细胞、特异性细胞毒T细胞、CAR-NK细胞、特异性NK细胞等，用于疾病的诊断、预防和治疗。
人内源性逆转录病毒(HERVs)包膜蛋白突变体和截短体序列设计
所述HERV-K包膜蛋白(Env)突变体指本发明人对Env免疫抑制结构域ISD保守区氨基酸(L(A)A(G)NQINDLRQTVIW(R)MGD)的L522A(或其他氨基酸)，A523G(或其他氨基酸)，W535R(或其他氨基酸)单个或多个氨基酸进行突变生成的Env突变体。优选突变位点氨基酸L522A，A523G和W535R，更优选的是包膜蛋白突变体C端跨膜蛋白TM。
所述HERV-K包膜蛋白截短体指本发明人对包膜蛋白的融合肽区(fusionpeptide，FP)FIFTLIAVIMGLIAVTATAAV和/或免疫抑制区(immunosuppressive domains，ISD)
LANQINDLRQTVIWMGD和/或跨膜区(transmembrane domain，TMD)
IGSTTIINLILILVCLFCLLL单个或多个进行缺失突变而生成的包膜蛋白截短体，优选的是包膜蛋白截短体C端跨膜蛋白TM。
所述HERV-H包膜蛋白突变体指本发明人对包膜蛋白免疫抑制结构域ISD保守区氨基酸(L(A)Q(A)NRRGLDLLTAEK(R)GGL)的L454A(或其他氨基酸)，Q455A(或其他氨基酸)，K467R(或其他氨基酸)单个或多个氨基酸进行突变生成的包膜蛋白突变体。优选突变位点氨基酸L454A，Q455A和K467R，更优选的是包膜蛋白突变体C端跨膜蛋白TM。
所述HERV-H包膜蛋白截短体指本发明人对包膜蛋白的融合肽区(fusionpeptide，FP)VIPLIPLMVGLGLSASTVALG和/或免疫抑制区(immunosuppressive domains，ISD)
LQNRRGLDLLTAEKGGLCIF和/或跨膜区(transmembrane domain，TMD)
LPIVSPLIPIFLLLLFGPCIF单个或多个进行缺失突变而生成的包膜蛋白截短体，优选的是包膜蛋白截短体C端跨膜蛋白TM。
所述HERV-F包膜蛋白突变体指本发明人对包膜蛋白免疫抑制结构域ISD保守区氨基酸L(A)Q(A)NRRGLDMLTAAQ(R)GGICLA(F)的L414A(或其他氨基酸)，Q415A(或其他氨基酸)Q427R(或其他氨基酸)，A433F(或其他氨基酸)单个或多个氨基酸进行突变生成的包膜蛋白突变体。优选突变位点氨基酸L414A，Q415A，Q427R和A433F，更优选的是包膜蛋白突变体C端跨膜蛋白TM。
所述HERV-F包膜蛋白截短体指本发明人对包膜蛋白的融合肽区(fusionpeptide，FP)AIHFIPLLAGLGILAGTGTGIAGITK和/或免疫抑制区(immunosuppressivedomains，ISD)LQNRRGLDMLTAAQGGI和/或跨膜区(transmembrane domain，TMD)
WFSWVLPLTGPLVSLLLLLLF。单个或多个进行缺失突变而生成的包膜蛋白截短体，优选的是包膜蛋白截短体C端跨膜蛋白TM。
具体氨基酸序列如下：
SEQ ID NO:1No1-1-XUKMV(mutant)(K108-Env Mutant，K108包膜蛋白突变体)
MNPSEMQRKAPPRRRRHRNRAPLTHKMNKMVTSEEQMKLPSTKKAEPPTWAQLKKLTQLATKY
LENTKVTQTPESMLLAALMIVSMVVSLPMPAGAAAANYTYWAYVPFPPLIRAVTWMDNPTEVYVNDS
VWVPGPIDDRCPAKPEEEGMMINISIGYHYPPICLGRAPGCLMPAVQNWLVEVPTVSPICRFTYHMVSGM
SLRPRVNYLQDFSYQRSLKFRPKGKPCPKEIPKESKNTEVLVWEECVANSAVILQNNEFGTIIDWAPRGQF
YHNCSGQTQSCPSAQVSPAVDSDLTESLDKHKHKKLQSFYPWEWGEKGISTPRPKIVSPVSGPEHPELWRL
TVASHHIRIWSGNQTLETRDRKPFYTIDLNSSLTVPLQSCVKPPYMLVVGNIVIKPDSQTITCENCRLLTCID
STFNWQHRILLVRAREGVWIPVSMDRPWEASPSVHILTEVLKGVLNRSKRFIFTLIAVIMGLIAVTATAAVA
GVALHSSVQSVNFVNDWQKNSTRLWNSQSSIDQKAGNQINDLRQTVIRMGDRLMSLEHRFQLQCDWNT
SDFCITPQIYNESEHHWDMVRRHLQGREDNLTLDISKLKEQIFEASKAHLNLVPGTEAIAGVADGLANLNP
VTWVKTIGSTTIINLILILVCLFCLLLVCRCTQQLRRDSDHRERAMMTMAVLSKRKGGNVGKSKRDQIVT
VSV(699aa).
SEQ ID NO:2No1-2-XUKMV(mutant)(K108-TM Mutant，K108跨膜蛋白突变体)FIFTLIAVIMGLIAVTATAAVAGVALHSSVQSVNFVNDWQKNSTRLWNSQSSIDQKAGNQINDLRQTVIRMGDRLMSLEHRFQLQCDWNTSDFCITPQIYNESEHHWDMVRRHLQGREDNLTLDISKLKEQIFEASKAHLNLVPGTEAIAGVADGLANLNPVTWVKTIGSTTIINLILILVCLFCLLLVCRCTQQLRRDSDHRERAMMTMAVLSKRKGGNVGKSKRDQIVTVSV(234aa).
SEQ ID NO:3No2-1-XUKMV(mutant)(K102-Env Mutant，K102包膜蛋白突变体)MVTPVTWMDNPIEIYVNDSVWVPGPIDDRCPAKPEEEGMMINISIGYRYPPICLGRAPGCLMPAVQNWLVEVPTVSPISRFTYHMVSGMSLRPRVNYLQDFSYQRSLKFRPKGKPCPKEIPKESKNTEVLVWEECVANSAVILQNNEFGTIIDWAPRGQFYHNCSGQTQSCPSAQVSPAVDSDLTESLDKHKHKKLQSFYPWEWGEKGISTPRPKIVSPVSGPEHPELWRLTVASHHIRIWSGNQTLETRDCKPFYTIDLNSSLTVPLQSCVKPPYMLVVGNIVIKPDSQTITCENCRLLTCIDSTFNWQHRILLVRAREGVWIPVSMDRPWEASPSVHILTEVLKGVLNRSKRFIFTLIAVIMGLIAVTATAAVAGVALHSSVQSVNFVNDWQKNSTRLWNSQSSIDQKAGNQINDLRQTVIRMGDRLMSLEHRFQLQCDWNTSDFCITPQIYNESEHHWDMVRRHLQGREDNLTLDISKLKEQIFEASKAHLNLVPGTEAIAGVADGLANLNPVTWVKTIGSTTIINLILILVCLFCLLLVCRCTQQLRRDSDHRERAMMTMAVLSKRKGGNVGKSKRDQIVTVSV(588aa).
SEQ ID NO:4No2-2-XUKMV(mutant)(K102-TM Mutant，K102跨膜蛋白突变体)FIFTLIAVIMGLIAVTATAAVAGVALHSSVQSVNFVNDWQKNSTRLWNSQSSIDQKAGNQINDLRQTVIRMGDRLMSLEHRFQLQCDWNTSDFCITPQIYNESEHHWDMVRRHLQGREDNLTLDISKLKEQIFEASKAHLNLVPGTEAIAGVADGLANLNPVTWVKTIGSTTIINLILILVCLFCLLLVCRCTQQLRRDSDHRERAMMTMAVLSKRKGGNVGKSKRDQIVTVSV(234aa)
SEQ ID NO:5No3-1-XUKTV(truncated)(K108-Env Truncation，K108包膜蛋白截短体)MNPSEMQRKAPPRRRRHRNRAPLTHKMNKMVTSEEQMKLPSTKKAEPPTWAQLKKLTQLATKYLENTKVTQTPESMLLAALMIVSMVVSLPMPAGAAAANYTYWAYVPFPPLIRAVTWMDNPTEVYVNDSVWVPGPIDDRCPAKPEEEGMMINISIGYHYPPICLGRAPGCLMPAVQNWLVEVPTVSPICRFTYHMVSGMSLRPRVNYLQDFSYQRSLKFRPKGKPCPKEIPKESKNTEVLVWEECVANSAVILQNNEFGTIIDWAPRG
QFYHNCSGQTQSCPSAQVSPAVDSDLTESLDKHKHKKLQSFYPWEWGEKGISTPRPKIVSPVSGPEHPEL
WRLTVASHHIRIWSGNQTLETRDRKPFYTIDLNSSLTVPLQSCVKPPYMLVVGNIVIKPDSQTITCENCRLL
TCIDSTFNWQHRILLVRAREGVWIPVSMDRPWEASPSVHILTEVLKGVLNRSKRAGVALHSSVQSVNFV
NDWQKNSTRLWNSQSSIDQKRLMSLEHRFQLQCDWNTSDFCITPQIYNESEHHWDMVRRHLQGREDNL
TLDISKLKEQIFEASKAHLNLVPGTEAIAGVADGLANLNPVTWVKTVCRCTQQLRRDSDHRERAMMTM
AVLSKRKGGNVGKSKRDQIVTVSV(640aa)
SEQ ID NO:6No3-2-XUKTV(truncated)(K108-TM Truncation，K108跨膜蛋白截短体)
AGVALHSSVQSVNFVNDWQKNSTRLWNSQSSIDQKRLMSLEHRFQLQCDWNTSDFCITPQIYNESEHH
WDMVRRHLQGREDNLTLDISKLKEQIFEASKAHLNLVPGTEAIAGVADGLANLNPVTWVKTVCRCTQQ
LRRDSDHRERAMMTMAVLSKRKGGNVGKSKRDQIVTVSV(175aa)
SEQ ID NO:7No4-1-XUKMV(truncated)(K102-Env Truncation，K102包膜蛋白截短体)
MVTPVTWMDNPIEIYVNDSVWVPGPIDDRCPAKPEEEGMMINISIGYRYPPICLGRAPGCLMPAVQNWLV
EVPTVSPISRFTYHMVSGMSLRPRVNYLQDFSYQRSLKFRPKGKPCPKEIPKESKNTEVLVWEECVANSA
VILQNNEFGTIIDWAPRGQFYHNCSGQTQSCPSAQVSPAVDSDLTESLDKHKHKKLQSFYPWEWGEKGIS
TPRPKIVSPVSGPEHPELWRLTVASHHIRIWSGNQTLETRDCKPFYTIDLNSSLTVPLQSCVKPPYMLVVG
NIVIKPDSQTITCENCRLLTCIDSTFNWQHRILLVRAREGVWIPVSMDRPWEASPSVHILTEVLKGVLNRS
KRAGVALHSSVQSVNFVNDWQKNSTRLWNSQSSIDQKRLMSLEHRFQLQCDWNTSDFCITPQIYNESEH
HWDMVRRHLQGREDNLTLDISKLKEQIFEASKAHLNLVPGTEAIAGVADGLANLNPVTWVKTVCRCTQ
QLRRDSDHRERAMMTMAVLSKRKGGNVGKSKRDQIVTVSV(529aa)
SEQ ID NO:8No4-2-XUKMV(truncated)(K102-TM Truncation，K102跨膜蛋白截短体)
AGVALHSSVQSVNFVNDWQKNSTRLWNSQSSIDQKRLMSLEHRFQLQCDWNTSDFCITPQIYNESEHH
WDMVRRHLQGREDNLTLDISKLKEQIFEASKAHLNLVPGTEAIAGVADGLANLNPVTWVKTVCRCTQQ
LRRDSDHRERAMMTMAVLSKRKGGNVGKSKRDQIVTVSV(175aa)
SEQ ID NO:9No5-1-XUFMV(F-Env Mutant，F包膜蛋白突变体)
MGLLLLVLILTPSLAAYRHPDFPLLEKAQQLLQSTGSPYSTNCWLCTSSSTETPGTAYPASPREWTSIEAEL
HISYRWDPNLKGLMRPANSLLSTVKQDFPDIRQKPPIFGPIFTNINLMGIAPICVMAKRKNGTNVGTLPST
VCNVTFTVDSNQQTYQTYTHNQFRHQPRFPKPPNITFPQGTLLDKSSRFCQGRPSSCSTRNFWFRPADYN
QCLQISNLSSTAEWVLLDQTRNSLFWENKTKGANQSQTPCVQVLAGMTIATSYLGISAVSEFFGTSLTPLF
HFHISTCLKTQGAFYICGQSIHQCLPSNWTGTCTIGYVTPDIFIAPGNLSLPIPIYGNSPLPRVRRAIHFIPLL
AGLGILAGTGTGIAGITKASLTYSQLSKEIANNIDTMAKALTTMQEQIDSLAAVVAANRRGLDMLTAARG
GICLFLDEKCCFWVNQSGKVQDNIRQLLNQASSLRERATQGWLNWEGTWKWFSWVLPLTGPLVSLLLL
LLFGPCLLNLITQFVSSRLQAIKLQTNLSAGRHPRNIQESPF(538aa)
SEQ ID NO:10No5-2-XUFMV(F-TM Mutant，F跨膜蛋白突变体)
AIHFIPLLAGLGILAGTGTGIAGITKASLTYSQLSKEIANNIDTMAKALTTMQEQIDSLAAVVAANRRGLD
MLTAARGGICLFLDEKCCFWVNQSGKVQDNIRQLLNQASSLRERATQGWLNWEGTWKWFSWVLPLTG
PLVSLLLLLLFGPCLLNLITQFVSSRLQAIKLQTNLSAGRHPRNIQESPF(188aa)
SEQ ID NO:11No6-1-XUFTV(F-Env Truncation，F包膜蛋白截短体)
MGLLLLVLILTPSLAAYRHPDFPLLEKAQQLLQSTGSPYSTNCWLCTSSSTETPGTAYPASPREWTSIEAEL
HISYRWDPNLKGLMRPANSLLSTVKQDFPDIRQKPPIFGPIFTNINLMGIAPICVMAKRKNGTNVGTLPST
VCNVTFTVDSNQQTYQTYTHNQFRHQPRFPKPPNITFPQGTLLDKSSRFCQGRPSSCSTRNFWFRPADYN
QCLQISNLSSTAEWVLLDQTRNSLFWENKTKGANQSQTPCVQVLAGMTIATSYLGISAVSEFFGTSLTPLF
HFHISTCLKTQGAFYICGQSIHQCLPSNWTGTCTIGYVTPDIFIAPGNLSLPIPIYGNSPLPRVRRASLTYSQ
LSKEIANNIDTMAKALTTMQEQIDSLAAVVCLALDEKCCFWVNQSGKVQDNIRQLLNQASSLRERATQG
WLNWEGTWKGPCLLNLITQFVSSRLQAIKLQTNLSAGRHPRNIQESPF(474aa)
SEQ ID NO:12No6-2-XUFTV(F-TM Truncation，F跨膜蛋白截短体)
ASLTYSQLSKEIANNIDTMAKALTTMQEQIDSLAAVVCLALDEKCCFWVNQSGKVQDNIRQLLNQASSLRERATQGWLNWEGTWKGPCLLNLITQFVSSRLQAIKLQTNLSAGRHPRNIQESPF(124aa)
SEQ ID NO:13No7-1-XUHMV(H-Env Mutant，H包膜蛋白突变体)
MIFAGKAPSNTSTLMKFYSLLLYSLLFSFPFLCHPLPLPSYLHHTINLTHSLLAASNPSLVNNCWLCISLSSS
AYTAVPAVQTDWATSPISLHLRTSFNSPHLYPPEELIYFLDRSSKTSPDISHQQAAALLRTYLKNLSPYINST
PPIFGPLTTQTTIPVAAPLCISWQRPTGIPLGNLSPSRCSFTLHLRSPTTNINETIGAFQLHITDKPSINTDKLK
NISSNYCLGRHLPCISLHPWLSSPCSSDSPPRPSSCLLIPSPENNSERLLVDTRRFLIHHENRTFPSTQLPHQS
PLQPLTAAALAGSLGVWVQDTPFSTPSHLFTLHLQFCLAQGLFFLCGSSTYMCLPANWTGTCTLVFLTPKI
QFANGTEELPVPLMTPTQQKRVIPLIPLMVGLGLSASTVALGTGIAGISTSVMTFRSLSNDFSASITDISQT
LSVLQAQVDSLAAVVAANRRGLDLLTAERGGLCIFLNEECCFYLNQSGLVYDNIKKLKDRAQKLANQAS
NYAEPPWALSNWMSWVLPIVSPLIPIFLLLLFGPCIFRLVSQFIQNRIQAITNHSIRQMFLLTSPQYHPLPQDLPSA(584aa)
SEQ ID NO:14No7-2-XUHMV(H-TM Mutant，H跨膜蛋白突变体)
VIPLIPLMVGLGLSASTVALGTGIAGISTSVMTFRSLSNDFSASITDISQTLSVLQAQVDSLAAVVAANRRG
LDLLTAERGGLCIFLNEECCFYLNQSGLVYDNIKKLKDRAQKLANQASNYAEPPWALSNWMSWVLPIVSPLIPIFLLLLFGPCIFRLVSQFIQNRIQAITNHSIRQMFLLTSPQYHPLPQDLPSA(197aa)
SEQ ID NO:15No8-1-XUHTV(H-Env Truncation，H包膜蛋白截短体)
MIFAGKAPSNTSTLMKFYSLLLYSLLFSFPFLCHPLPLPSYLHHTINLTHSLLAASNPSLVNNCWLCISLSSS
AYTAVPAVQTDWATSPISLHLRTSFNSPHLYPPEELIYFLDRSSKTSPDISHQQAAALLRTYLKNLSPYINST
PPIFGPLTTQTTIPVAAPLCISWQRPTGIPLGNLSPSRCSFTLHLRSPTTNINETIGAFQLHITDKPSINTDKLK
NISSNYCLGRHLPCISLHPWLSSPCSSDSPPRPSSCLLIPSPENNSERLLVDTRRFLIHHENRTFPSTQLPHQS
PLQPLTAAALAGSLGVWVQDTPFSTPSHLFTLHLQFCLAQGLFFLCGSSTYMCLPANWTGTCTLVFLTPKI
QFANGTEELPVPLMTPTQQKRTGIAGISTSVMTFRSLSNDFSASITDISQTLSVLQAQVDSLAAVVLNEEC
CFYLNQSGLVYDNIKKLKDRAQKLANQASNYAEPPWALSNWMSWVRLVSQFIQNRIQAITNHSIRQMFLLTSPQYHPLPQDLPSA(522aa)
SEQ ID NO:16No8-2-XUHTV(H-TM Truncation，H跨膜蛋白截短体)
RTGIAGISTSVMTFRSLSNDFSASITDISQTLSVLQAQVDSLAAVVLNEECCFYLNQSGLVYDNIKKLKDR AQKLANQASNYAEPPWALSNWMSWVRLVSQFIQNRIQAITNHSIRQMFLLTSPQYHPLPQDLPSA(136aa)
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。同时，在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。

Claims (14)

1.人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体或截短体，其特征在于，所述的突变体或截短体免疫抑制结构域中的单个或多个氨基酸进行突变。
2.根据权利要求1所述的人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体或截短体，其特征在于，所述的免疫抑制结构域为免疫抑制区。
3.根据权利要求1所述的人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体或截短体，其特征在于，所述的人内源性逆转录病毒为HERV-K、HERV-H或HERV-F中的任意一种。
4.根据权利要求3所述的人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体或截短体，其特征在于，所述的HERV-K为HERV-K108或HERV-K102中的任意一种，每种人内源性逆转录病毒分型对应的氨基酸序列为：
HERV-K108包膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:1所示，
HERV-K108包膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:5所示，
HERV-K102包膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:3所示，
HERV-K102包膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:7所示，
HERV-F包膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:9所示，
HERV-F包膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:11所示，
HERV-H包膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:13所示，
HERV-H包膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:15所示。
5.根据权利要求4所述的人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体或截短体，其特征在于，所述的突变体或截短体是人内源性逆转录病毒包膜蛋白经弗林蛋白酶水解后形成的跨膜蛋白，其对应的氨基酸序列为：
HERV-K108跨膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:2所示，
HERV-K108跨膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:6所示，
HERV-K102跨膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:4所示，
HERV-K102跨膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:8所示，
HERV-F跨膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:10所示，
HERV-F跨膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:12所示，
HERV-H跨膜蛋白突变体的序列如SEQ ID NO:14所示，
HERV-H跨膜蛋白截短体的序列如SEQ ID NO:16所示。
6.包膜蛋白突变体或截短体的用途，其特征在于，包括权利要求1～5任一所述的人内源性逆转录病毒包膜蛋白突变体或截短体，在制备用于诱导免疫系统产生强力免疫反应的诊断和/或治疗的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的包膜蛋白突变体或截短体的用途，其特征在于，所述的诱导免疫系统产生强力免疫反应的诊断和/或治疗的药物为mRNA疫苗、蛋白亚单位疫苗、重组基因疫苗、动物源性抗体、包膜蛋白特异性细胞中的任意一种。
8.根据权利要求7所述的包膜蛋白突变体或截短体的用途，其特征在于，所述的重组基因疫苗为质粒载体疫苗、病毒载体疫苗或活细胞载体疫苗中的任意一种。
9.根据权利要求7所述的包膜蛋白突变体或截短体的用途，其特征在于，动物源性抗体为小鼠、大鼠、兔子或羊驼动物源性抗体中的任意一种。
10.根据权利要求9所述的包膜蛋白突变体或截短体的用途，其特征在于，所述的羊驼动物源性抗体为羊驼纳米抗体。
11.根据权利要求7所述的包膜蛋白突变体或截短体的用途，其特征在于，所述的包膜蛋白特异性细胞为细胞毒性T细胞、NK细胞、浆细胞、B细胞中的任意一种。
12.根据权利要求11所述的包膜蛋白突变体或截短体的用途，其特征在于，所述的细胞毒性T细胞为CD8+或CD4+中的任意一种。
13.根据权利要求1～5任一所述的包膜蛋白突变体或截短体抗原制备的抗体的用途，其特征在于，在制备特异性细胞药物中的应用。
14.根据权利要求13所述的抗体的用途，其特征在于，所述的特异性细胞药物为CAR-T、CAR-NK,或CAR-VAC细胞药物中的任意一种。
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