CN118512441A - Cbl0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用，属于医药用途技术领域。气道平滑肌层增厚是哮喘气道重塑最典型的病理变化，而气道平滑肌细胞的异常增殖是气道平滑肌层增厚的基础条件，因此我们需要干预气道平滑肌细胞的增殖。CBL0137是组蛋白分子伴侣FACT的抑制剂，有研究表明CBL0137通过多个作用机制对肿瘤细胞发挥强大的抑制增殖、促进凋亡和增加自噬作用，可显著抑制肿瘤细胞生长，但CBL0137对气道平滑肌细胞的作用尚无报道。本申请通过研究CBL0137对哮喘小鼠模型气道平滑肌的作用，为哮喘气道重塑提供新的治疗选择。

Description

CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用

【技术领域】

本发明属于医药用途技术领域，涉及CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用。

【背景技术】

支气管哮喘是一种常见的慢性呼吸道疾病。据全球哮喘倡议(GINA)的数据，全球哮喘患者已达3亿，预计到2025年将超过四亿。可预见哮喘将会给社会和个人带来巨大的经济负担。它已成为严重威胁全人类健康的慢性疾病之一。深入研究其发病机制，探索有效的干预措施是学术界关注的焦点。传统上，长期反复的气道炎症是哮喘致病的关键因素，气道炎症慢性发展的必然结果为气道重塑。在各种炎症因子的共同作用下，气道的损伤和修复功能紊乱，导致气道上皮形态变化、杯状细胞增生、肺实质胶原纤维沉积、平滑肌细胞增生、细胞外基质沉积和新生血管形成等一系列病理变化。据报道，气道平滑肌层增厚是哮喘最典型的病理变化之一，气道平滑肌细胞(Airway Smooth Muscle Cells，ASMCs)作为哮喘的被动细胞，可以积极参与气道重塑的整个过程。因ASMCs在哮喘发病机制中的关键作用，目前对其功能障碍机制的干预是研究热点。

CBL0137(Curaxin-137hydrochloride，音译名：库拉辛137)化学结构式如下：

CBL0137可以被归类为curaxin化合物，这种化合物属于组蛋白伴侣促进染色质转录(FACT)抑制剂，可通过多个作用机制对肿瘤细胞发挥强大的抑制增殖、促进凋亡和增加自噬作用。研究报道CBL0137通过影响P53和NF-kB(Nuclear Factor-Kappa B)抑制肝癌细胞增殖，同时调节PARP，Caspase-3，Caspase-7，Caspase-8和Caspase-9等凋亡相关蛋白促进其凋亡。除此之外CBL0137在卵巢细胞癌、非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)治疗中也发挥了抑制增殖，促进凋亡或自噬的作用。

但CBL0137对气道平滑肌的作用尚无报道，有必要研究CBL0137通过影响气道平滑肌细胞的增殖或凋亡，从而减少气道重塑中气道平滑肌层的增厚。

发明人所在的课题组前期在CBL0137调控ASMCs生理行为上进行了初步探索，发现CBL0137对大鼠原代ASMCs有细胞毒性，细胞存活率随药物浓度和作用时间的增加而下降。结合文献报道CBL0137可显著抑制肿瘤细胞增殖并促其凋亡，发明人计划使用卵清蛋白构建哮喘小鼠模型，并用CBL0137进行干预，通过肺功能、肺组织切片病理染色和特殊染色等手段评估CBL0137对哮喘气道重塑的作用。同时用CBL0137作用大鼠气道平滑肌后，通过增殖、凋亡相关实验检测，探究CBL0137对大鼠ASMCs增殖和凋亡的影响极其背后的机制，为哮喘气道重塑的治疗提供新的药物选择。

气道平滑肌层增厚是哮喘气道重塑最典型的病理变化，而气道平滑肌细胞(Airway Smooth Muscle Cells，ASMCs)的异常增殖是气道平滑肌层增厚的基础条件，因此研究人员需要干预气道平滑肌细胞的增殖。CBL0137(Curaxin-137hydrochloride)是组蛋白分子伴侣FACT(Facilitate Chromatin Transcription)的抑制剂，有研究表明CBL0137通过多个作用机制对肿瘤细胞发挥强大的抑制增殖、促进凋亡和增加自噬作用，可显著抑制肿瘤细胞生长，但CBL0137对气道平滑肌细胞的作用尚无报道。

【发明内容】

针对现有技术中尚无CBL0137治疗气道平滑肌增生的研究，本发明提供了CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用，本发明为哮喘药物治疗提供新的选择。本申请通过研究CBL0137对哮喘小鼠模型气道平滑肌的作用，为哮喘气道重塑提供新的治疗选择。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用。

进一步的，所述的CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用，所述药物是以CBL0137为主要成分，加上药学中可接受的辅料或辅助性成分制备成临床上可接受的药物制剂。

进一步的，所述的CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用，所述药物制剂包括口服制剂和注射制剂两种剂型。

进一步的，所述的CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用，所述口服制剂为口服胶囊，所述注射制剂为静脉注射液。

通常而言，作为药物，均是在制备成制剂后才临床应用。本发明所述的药物，作为药物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明药物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明所述的CBL0137在其药物中的含量通常为0.01-95％(w/w)。

本发明药物或含有它的药物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明药物可以制成普通制剂、也可以制成缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。为了将本发明药物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；润湿剂可以是水、乙醇、异丙醇等；黏合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明药物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明药物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明药物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明药物的胶囊剂。

为将本发明药物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其他添加剂。

和现有技术相比，本发明具有如下优点：

糖皮质激素和某些抗炎药在减少轻度至中度哮喘的炎症和发作率方面有积极作用。然而，目前还没有证实吸入或口服糖皮质激素与气道重塑有关的益处，在气道重塑发生机制中，气道平滑肌细胞是关键角色，控制肌肉张力，调节气道腔和气道的开放，在气道重塑的多重病理改变中扮演重要角色。CBL0137是一种组蛋白伴侣促进染色质转录(FACT)抑制剂，以往的研究表明其对多种肿瘤细胞有抑增殖、促凋亡作用，可显著抑制肿瘤组织生长，但CBL0137对气道平滑肌的作用尚无研究报道，本申请表明该药能抑制气道重塑中气道平滑肌的增生，对治疗气道重塑发挥积极作用。

【附图说明】

图1是本发明实验例中哮喘小鼠模型评价的图；

图2是本发明实验例中CBL0137对哮喘小鼠模型肺功能的影响的图；

图3是本发明实验例中CBL0137对哮喘小鼠模型气道上皮杯状细胞的影响的图；

图4是本发明实验例中CBL0137对哮喘小鼠模型肺实质胶原纤维沉积的影响的图；

图5是本发明实验例中CBL0137对哮喘小鼠模型气道平滑肌的影响的图。

【具体实施方式】

以下结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步说明。

实施例：

CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用：

按照现有的工艺要求，制备成注射剂。

实验例：

CBL0137对哮喘小鼠气道平滑肌的影响：

一、目的：

探索CBL0137对哮喘小鼠气道平滑肌异常增生的影响。

二、材料和方法：

哮喘模型建立：选取8周大小，体重约为18-22g的雌性C57BL/⁶J小鼠(n＝25)，随机分配为以下几组(每组5只)：

①对照组：PBS；

②OVA组：OVA；

③实验组：OVA+CBL0137(15mg/kg)；

④实验组：OVA+CBL0137(30mg/kg)；

⑤阳性对照组：OVA+布地奈德；

致敏期：于第1、14、21日予每只小鼠0.1mgOVA(卵清蛋白)腹腔注射致敏；

激发期：第22日开始每周1/3/5予CBL013715或30mg/kg腹腔注射后5％OVA雾化吸入30min(对照组均以PBS替代)，激发十周后于第92日测肺功能后处死小鼠；

小鼠右肺四片肺叶分割后冻存，以供后续提取肺组织RNA和蛋白。左肺4％多聚甲醛浸泡固定后送病理科包埋，做成病理切片后分别行苏木精-伊红染色、Masson三色染色、糖原染色、α-SMA免疫荧光染色。

三、结果：

1、通过行为学观察发现哮喘组小鼠较空白对照组单位时间内活动距离下降，静息状态下常表现烦躁不安，每分钟摸鼻次数明显增多。小鼠直立时可观察到呼吸时胸廓颤动增加，还可闻及小鼠用力呼吸发出的声音。经过H&E染色的肺组织切片显示，与空白对照组相比，OVA组小鼠的肺泡、管腔、管壁及伴行血管周围存在大量炎细胞浸润，支气管黏膜皱襞增多且延长，气道平滑肌层增厚，如图1(肺组织H&E染色)。

2、为了明确CBL0137对哮喘小鼠模型肺功能的影响，分别予0、3.125、6.25、12.5、25、50mg/ml浓度的乙酰胆碱雾化激发实验小鼠，用肺功能仪实时监测小鼠气道阻力值，数据汇总分析后得出实验小鼠气道阻力变化情况(图2)；

图2小鼠肺功能气道阻力变化分析(注：乙酰胆碱(0、3.125、6.25、12.5、25、50mg/ml)雾化吸入3min，实时记录气道阻力值，根据阻力变化制作线性图。同一乙酰胆碱浓度下相邻两组比较的统计学差异(a与b、b与c、c与d存在统计学差异，P＜0.05))；

结果示各实验组小鼠气道阻力随雾化吸入乙酰胆碱浓度增加而升高，当乙酰胆碱浓度达6.25mg/ml及以上时OVA组和三个用药组小鼠气道阻力值均高于空白对照组，且三个用药组小鼠气道阻力值均低于OVA组(P＜0.05)。当乙酰胆碱浓度为6.25mg/ml时，经不同药物治疗的三组小鼠气道阻力值无明显差异，当乙酰胆碱浓度达12.5mg/ml及以上时，CBL0137低剂量组(15mg/kg)小鼠气道阻力高于CBL0137高剂量组(30mg/kg)和布地奈德组(P＜0.05)，但CBL0137高剂量组(30mg/kg)和布地奈德组小鼠气道阻力无明显差异。

3、为了明确CBL0137对哮喘小鼠模型气道上皮的影响，对小鼠肺组织切片行PAS染色(图3A)。根据实验方法中的评分规则，空白对照组评分为0或1分，OVA组评分为3或4分，用药组评分为1或2分。结果示哮喘模型组小鼠较空白对照组气道上皮蓝紫色着色明显增多，三个药物治疗组小鼠气道上皮细胞染色数量均低于OVA组，与空白对照组相比无明显差异，三治疗组之间两两比较无明显差异；

图3肺组织PAS染色(注：图3A.小鼠肺组织切片PAS染色(放大倍数分别为200X和400X)；B.PAS染色评分统计学分析(造模组与空白对照组相比，##：P＜0.01，CBL低剂量组与造模组对比**：P＜0.01，CBL高剂量组与造模组对比*：P＜0.05，BD与造模组对比*：P＜0.05))。

4、为了明确CBL0137对哮喘小鼠模型肺组织胶原纤维沉积的影响，对小鼠肺组织切片行Masson三色染色(图4A)。结果表示，较空白对照组，哮喘模型组小鼠气道内皮基层和气道旁肺泡组织大量胶原纤维沉积，三个药物治疗组较哮喘模型组胶原纤维沉积明显减轻，但较空白对照组仍有增高，三个药物组间两两对比无明显差异(图4B)；

图4肺组织Masson三色染色(注：图4A.小鼠肺组织切片Masson染色(放大倍数分别为200X和400X)；B.胶原纤维沉积面积统计学分析(造模组与空白对照组相比，##：P＜0.05，CBL低剂量组与造模组对比**：P＜0.01，CBL高剂量组与造模组对比**：P＜0.01，BD与造模组对比*：P＜0.05))。

5、为了明确CBL0137对哮喘小鼠模型气道平滑肌的影响，对小鼠肺组织切片行H&E染色和α-SMA免疫荧光染色(图5A)。H&E染色结果示，较空白对照组哮喘造模组小鼠气道周围有增厚的平滑肌层环绕，局部放大可见气道平滑肌细胞增生肥大，细胞核型状拉长，且增大的气道平滑肌出现堆叠，平滑肌层增厚。我们进一步行α-SMA免疫荧光染色，结果示哮喘造模组小鼠气道平滑肌细胞特异性α-SMA平均荧光强度明显高于空白对照组，而三个治疗组小鼠气道平滑肌层厚度和α-SMA平均荧光强度均小于哮喘造模组，表达强度低于哮喘造模组，且值得注意的是CBL0137治疗组和BD治疗组间两两比较无明显差异(图5B)；

图5肺组织H&E染色和α-SMA免疫荧光染色(注：图5A.小鼠肺组织切片H&E染色和α-SMA免疫荧光染色(放大倍数分别为200X和400X)；B.α-SMA平均免疫荧光强度统计学分析(造模组与空白对照组相比，##：P＜0.01，CBL低剂量组与造模组对比**：P＜0.01，CBL高剂量组与造模组对比**：P＜0.01，BD与造模组对比**：P＜0.01))。

四、结论：

1.CBL0137降低哮喘小鼠模型气道高反应。

2.CBL0137抑制哮喘小鼠模型气道重塑。

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[15]

上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (3)

1.CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用，其特征在于：所述药物是以CBL0137为主要成分，加上药学中可接受的辅料或辅助性成分制备成临床上可接受的药物制剂，所述的CBL0137在其药物中的含量为0.01-95％w/w。

2.根据权利要求1所述的CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用，其特征在于：所述药物制剂包括口服制剂和注射制剂两种剂型。

3.根据权利要求2所述的CBL0137在制备抑制哮喘气道平滑肌增生药物中的应用，其特征在于：所述口服制剂为口服胶囊，所述注射制剂为静脉注射液。