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CN118434741A - 一种药物连接体偶联物的制备方法 - Google Patents

一种药物连接体偶联物的制备方法 Download PDF

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CN118434741A
CN118434741A CN202380015521.1A CN202380015521A CN118434741A CN 118434741 A CN118434741 A CN 118434741A CN 202380015521 A CN202380015521 A CN 202380015521A CN 118434741 A CN118434741 A CN 118434741A
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CN
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compound
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salt
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tetrahydrofuran
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Application number
CN202380015521.1A
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宋帅
李军栋
闫彬
掌效舟
王子振
蔡家强
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Suzhou Yilian Biomedical Co ltd
Original Assignee
Suzhou Yilian Biomedical Co ltd
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Abstract

本发明提供一种药物连接体偶联物的制备方法。本发明还提供所用中间体或其盐的制备方法和中间体或其盐的用途。本发明所述制备方法涉及的原料易得，操作简单，产品纯度高，适合放量合成。

Description

一种药物连接体偶联物的制备方法
本申请要求申请日为2022/1/26的中国专利申请2022100957718的优先权。本申请引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
本申请属于药物化学领域，具体而言，本申请涉及一种药物连接体偶联物或其盐的制备方法及相关中间体或其盐。
背景技术
抗体药物偶联物(ADC)是抗体和小分子药物的偶联体，融合了抗体的肿瘤靶向作用和生物活性分子的活性，成为一种生物导弹，具有非常可期待的疗效和安全性优势。抗体引导ADC结合到靶细胞/组织，随后小分子药物在细胞内/组织中通过特定酶作用下释放，治疗疾病。在这其中，药物连接体偶联物(包含细胞毒性载荷(payload)和连接子(linker))，在ADC的制备中扮演着极为重要的角色。因此，发展简便高效、成本低廉，适合放量合成的药物连接体偶联物的合成方法对于ADC药物的开发和应用，有着重要意义。
发明内容
本申请提供一种药物连接体偶联物式I化合物的制备方法以及所用中间体或其盐的制备方法和中间体或其盐的用途。本申请所述制备方法涉及的原料易得，操作简单，产品纯度高，适合放量合成。
一方面，本申请提供一种式I化合物或其盐的制备方法，
其包括如下步骤：
c)使式6化合物或其盐和式7化合物或其盐反应得到式8化合物或其盐，
d)从式8化合物或其盐反应得到式9化合物或其盐，
e)使式9化合物或其盐和式10化合物反应得到式I化合物或其盐，
其中，
R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
R3选自羟基和卤素；
PG1选自氨基保护基。
在一些实施方案中，所述式I化合物或其盐的制备方法还包括以下步骤：
a)使式3化合物或其盐和式4化合物反应得到式5化合物或其盐，
b)从式5化合物或其盐反应得到式6化合物或其盐，
其中，PG2选自氨基保护基。
另一方面，本申请提供一种制备式7化合物或其盐的方法，所述方法包括如下步骤：
f-1)式7-A1化合物和式7-A2化合物或其盐反应得到式7-A3化合物，
f-2)从式7-A3化合物反应得到式7-A4化合物或其盐，
f-3)从式7-A4化合物或其盐反应得到式7化合物或其盐，
其中，
R1和R2各自独立地选自C1-4烷基；
PG1、PG3各自独立地选自氨基保护基，且PG1和PG3不同。
另一方面，本申请提供一种制备式7化合物或其盐的方法，所述方法包括如下步骤：
g-1)从式7-B1化合物或其盐反应得到式7-B2化合物或其盐，
g-2)从式7-B2化合物或其盐得到式7-B3化合物或其盐，
g-3)使式7-B3化合物或其盐和式7-A1化合物反应得到式7化合物或其盐，
其中，
R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
PG1、PG4各自独立地选自氨基保护基。
另一方面，本申请提供一种制备式3化合物或其盐的方法，所述方法包括如下步骤：
h)使式1化合物或其盐和式2化合物反应得到式3化合物或其盐，
其中,
R4、R5各自独立地选自-OC1-4烷基、-SC1-4烷基和-NHC1-4烷基；
或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成羰基；
或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成其中X、Y各自独立地选自O、S、NH和NC1-4烷基，n选自1、2和3。
另一方面，本申请提供一种制备式1化合物的制备方法，所述方法包括如下步骤：
步骤i-1)使式1-A1化合物和式1-A2化合物反应得到式1-A3化合物；
步骤i-2)从式1-A3化合物反应得到式1化合物或其盐；
另一方面，本申请提供一种制备式1化合物或其盐的制备方法，所述方法包括如下步骤：
步骤j-1)使式1-B1化合物和式1-B2化合物反应得到式1-B3化合物；
步骤j-2)从式1-B3化合物反应得到式1-B4化合物；
步骤j-3)从式1-B4化合物反应得到式1-B5化合物或其盐；
步骤j-4)从式1-B5化合物或其盐反应得到式1化合物或其盐；
其中，X选自卤素。
在一些实施方案中，所述R1、R2各自独立地选自甲基、乙基和丙基，优选R1、R2相同。
在一些实施方案中，所述R1、R2均为丙基。
在一些实施方案中，所述R3选自羟基、氟、氯、溴和碘。
在一些实施方案中，所述R3选自羟基和氯。
在一些实施方案中，所述X选自氟、氯、溴和碘。
在一些实施方案中，所述X为氯。
在一些实施方案中，所述PG1选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)。
在一些实施方案中，所述PG2选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)。
在一些实施方案中，所述PG3选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选叔丁氧羰基(Boc)。
在一些实施方案中，所述PG4选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)。
在一些实施方案中，所述R4、R5各自独立地选自甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲硫基、乙硫基、丙硫基、甲胺基、乙胺基和丙胺基；
或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成羰基；
或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成其中X和Y各自独立地选自O、S、NH和NC1-4烷基，n选自1、2和3。
在一些实施方案中，所述R4和R5和与其相连的碳原子一起形成羰基，或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成
在一些实施方案中，在步骤a)中，反应在酸性条件下进行。所述酸选自氯化氢、氢溴酸、硫酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸、对甲苯磺酸吡啶嗡盐、醋酸锌、三氯化铝(AlCl3)、三氯化铁(FeCl3)和三氟化硼乙醚(BF3·Et2O)；例如氯化氢或三氟化硼乙醚；优选氯化氢、对甲苯磺酸或醋酸锌。
在一些实施方案中，在步骤a)中，式3化合物或其盐与反应所选酸的摩尔比选自1：0.2～1：2。
在一些实施方案中，在步骤a)中，反应在碱性条件下进行。所述碱选自氢氧化钠、叔丁醇钾、碳酸钾、三乙胺(Et3N)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)和吡啶；优选叔丁醇钾或氢氧化钠。
在一些实施方案中，在步骤a)中，式3化合物或其盐与反应所选碱的摩尔比选自1：0.5～1：3。
在一些实施方案中，在步骤a)中，式3化合物或其盐与式4化合物的摩尔比选自1：1～1：10；优选1：2～1：6。
在一些实施方案中，在步骤a)中，反应溶剂选自非质子性溶剂；优选醚类、卤代烷烃类、酮类、腈类、酰胺类或砜类溶剂；更优选乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、乙二醇二乙醚、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或二甲亚砜；进一步优选异丙醚、四氢呋喃、1,4-二氧六环或N,N-二甲基甲酰胺。
在一些实施方案中，在步骤a)中，式3化合物或其盐与所选溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；优选1：8～1：30。
在一些实施方案中，在步骤a)中，反应温度选自-10～110℃；优选0～60℃。
在一些实施方案中，在步骤b)中，从式5化合物或其盐脱除氨基上的保护基PG2得到式6化合物或其盐。
在一些实施方案中，在步骤b)中，所述从式5化合物或其盐脱除氨基上的保护基PG2的反应可以采用本领域技术人员所熟知的常规反应条件进行，例如：在酸性条件下脱除；在碱性条件下脱除；在 钯催化剂的催化下脱除。
在一些实施方案中，在步骤b)中，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式5化合物或其盐在碱性条件下脱除保护基PG2。所述碱选自哌啶、二乙胺、吗啉、二异丙胺、DBU、三乙胺和N,N-二异丙基乙胺；优选哌啶、二乙胺或吗啉。
在一些实施方案中，在步骤b)中，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式5化合物或其盐与所选碱的摩尔比选自1：0.2～1：40；优选1：1～1：10。
在一些实施方案中，在步骤b)中，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应溶剂选自DMF、DMAc、二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、甲醇和乙醇中的其中一种或其任意组合；优选DMF和二氯甲烷的其中一种或其任意组合。
在一些实施方案中，在步骤b)中，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式5化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；优选1：10～1：30。
在一些实施方案中，在步骤b)中，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应温度选自0～50℃；优选10～30℃。
在一些实施方案中，在步骤c)中，式6化合物或其盐和式7化合物或其盐在缩合剂的作用下得到式8化合物或其盐。所述缩合剂选自DMTMM、HATU、HBTU、HOBt/EDCI和T3P；优选DMTMM或HOBt/EDCI。
在一些实施方案中，在步骤c)中，式6化合物或其盐与所述缩合剂的摩尔比选自1：0.7～1：5；优选1：0.7～1：2。
在一些实施方案中，在步骤c)中，式6化合物或其盐与式7化合物或其盐的摩尔比选自1：0.7～1：3；优选1：0.7～1：2。
在一些实施方案中，在步骤c)中，反应溶剂选自DMF、DMAc、NMP、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈和二氯甲烷的其中一种或其任意组合；优选DMF、二氯甲烷和四氢呋喃的其中一种或其任意组合。
在一些实施方案中，在步骤c)中，式6化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50。
在一些实施方案中，在步骤c)中，反应温度选自-20～50℃；优选-5～25℃。
在一些实施方案中，在步骤d)中，从式8化合物或其盐脱除氨基上的保护基PG1得到式9化合物或其盐。该步骤可以与步骤b)中相同的方式进行。
在一些实施方案中，在步骤d)中，所述PG1为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式8化合物或其盐在碱性条件下脱除保护基PG1。所述碱选自哌啶、二乙胺、吗啉、二异丙胺、DBU、三乙胺和N,N-二异丙基乙胺；例如二乙胺或N,N-二异丙基乙胺；优选哌啶、二乙胺或吗啉。
在一些实施方案中，在步骤d)中，所述PG1为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应溶剂选自DMF、DMAc、二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、甲醇和乙醇中的其中一种或其任意组合。
在一些实施方案中，在步骤d)中，所述PG1为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式8化合物或其盐 与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50。
在一些实施方案中，在步骤d)中，所述PG1为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，所选碱与所选反应溶剂的体积比选自1：5～1：50。
在一些实施方案中，在步骤d)中，所述PG1为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应温度选自-10～50℃；优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为羟基时，式9化合物或其盐和式10化合物在缩合剂的作用下得到式I化合物。该步骤可以与步骤c)中相同的方式进行。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为羟基时，所述缩合剂选自DMTMM、HATU、HBTU、HOBt/EDCI和T3P；优选DMTMM或HOBt/EDCI。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为羟基时，式9化合物或其盐与所述缩合剂的摩尔比选自1：1～1：5；优选1：1～1：2。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为羟基时，式9化合物或其盐与式10化合物的摩尔比选自1：0.8～1：2.0。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为羟基时，反应溶剂选自DMF、四氢呋喃和二氯甲烷中的其中一种或其任意组合。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为羟基时，式9化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为羟基时，反应温度选自-20～50℃；优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3选自卤素(例如氯、氟或溴)时，其为羟基与卤代试剂经卤代反应转化而来。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3选自卤素(例如氯、氟或溴)时，式9化合物或其盐和式10化合物在碱性条件下反应。所述碱选自三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、DBU、N-甲基哌啶和N-甲基吗啉。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为氯时，其为羟基经与氯代试剂经氯代反应转化而来。所述氯代试剂选自氯化亚砜、草酰氯和三氯氧磷；优选氯化亚砜。氯代反应溶剂选自四氢呋喃和二氯甲烷；优选二氯甲烷。氯代温度选自0～50℃；优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为卤素(例如氯、氟或溴)时，式9化合物或其盐与反应所述的碱的摩尔比选自1：1～1：5。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为卤素(例如氯、氟或溴)时，式9化合物或其盐与式10化合物的摩尔比选自1：0.8～1：2.0；优选1：1～1：1.5。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为卤素(例如氯、氟或溴)时，反应溶剂选自DMF、四氢呋喃、二氯甲烷中的一种或任意组合。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为卤素(例如氯、氟或溴)时，式9化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50。
在一些实施方案中，在步骤e)中，当R3为卤素(例如氯、氟或溴)时，反应温度选自-20～50℃；优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤f-1)中，反应在碱性条件下进行。所述碱选自碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯和碳酸氢钾；例如碳酸氢钠或碳酸钠；优选碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸钾。
在一些实施方案中，在步骤f-1)中，反应溶剂选自四氢呋喃、丙酮、乙腈、1，4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜和水中的其中一种或其任意组合；优选四氢呋喃、丙酮、乙腈和水中的其中一种或其任意组合。
在一些实施方案中，在步骤f-1)中，式7-A1化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20。
在一些实施方案中，在步骤f-1)中，式7-A1化合物与式7-A2化合物或其盐的摩尔比选自1：1～1：3。
在一些实施方案中，在步骤f-1)中，反应温度选自0～50℃；优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤f-2)中，从式7-A3化合物脱除氨基上的保护基PG3得到式7-A4化合物。
在一些实施方案中，在步骤f-2)中，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，式7-A3化合物在酸性条件下脱除保护基PG3。所述酸选自三氟乙酸、氯化氢、氢溴酸和硫酸；优选氯化氢或三氟乙酸。
在一些实施方案中，在步骤f-2)中，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，反应溶剂选自四氢呋喃、1，4-二氧六环、乙酸乙酯和甲基叔丁基醚的其中一种或其任意组合；优选四氢呋喃或1，4-二氧六环。
在一些实施方案中，在步骤f-2)中，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，式7-A3化合物与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：4～1：20；优选1：5～1：15。
在一些实施方案中，在步骤f-2)中，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，式7-A3化合物与所选酸的摩尔比选自1：5～1：50；优选1：10～1：30。
在一些实施方案中，在步骤f-2)中，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，反应温度选自0～50℃；优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤f-3)中，式7-A4化合物或其盐在还原剂和酸的作用下与醛发生还原胺化反应得到式7化合物或其盐。所述还原剂选自硼氢化钠，氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠和Pd/C-H2；优选氰基硼氢化钠和或三乙酰氧基硼氢化钠。所述酸选自醋酸、甲酸、丙酸、三氟乙酸和盐酸；优选醋酸或丙酸。
在一些实施方案中，在步骤f-3)中，反应溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、四氢呋喃、1，4-二氧六环和乙酸乙酯的其中一种或其任意组合；优选甲醇或乙醇。
在一些实施方案中，在步骤f-3)中，式7-A4化合物或其盐与所选溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20；优选1：6～1：15。
在一些实施方案中，在步骤f-3)中，式7-A4化合物或其盐与所选还原剂的摩尔比选自1：2～1：10；优选1：3～1：8。
在一些实施方案中，在步骤f-3)中，式7-A4化合物或其盐与醛的摩尔比选自1：2～1：10；优选1：4～1：8。
在一些实施方案中，在步骤f-3)中，加入所述还原剂的温度选自-20～30℃；优选0℃。反应温度选自-20～50℃，优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤g-1)中，从式7-B1化合物或其盐在还原剂和酸的作用下与醛发生还原胺化反应得到式7-B2化合物或其盐。该步骤可以与步骤f-3)中相同的方式进行。
在一些实施方案中，在步骤g-1)中，所述还原剂选自硼氢化钠，氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠和Pd/C-H2；优选氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠。
在一些实施方案中，在步骤g-1)中，所述酸选自醋酸、甲酸、丙酸、三氟乙酸和盐酸；优选醋酸或丙酸。
在一些实施方案中，在步骤g-1)中，反应溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、四氢呋喃、1，4-二氧六环和乙酸乙酯的其中一种或其任意组合；优选甲醇或乙醇。
在一些实施方案中，在步骤g-1)中，式7-B1化合物或其盐与所选溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20。
在一些实施方案中，在步骤g-1)中，式7-B1化合物或其盐与所选还原剂的摩尔比选自1：2～1：10。
在一些实施方案中，在步骤g-1)中，式7-B1化合物或其盐与醛的摩尔比选自1：2～1：10。
在一些实施方案中，在步骤g-1)中，加入所述还原剂的温度选自-20～30℃。反应温度选自-20～50℃，优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤g-2)中，从式7-B2化合物或其盐脱除氨基上的保护基PG4得到式7-B3化合物或其盐。该步骤可以与步骤b)中相同的方式进行。
在一些实施方案中，在步骤g-2)中，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式7-B2化合物或其盐在碱性条件下脱除保护基PG4。所述碱选自哌啶、二乙胺、吗啉、二异丙胺、DBU、三乙胺和N,N-二异丙基乙胺；优选哌啶、二乙胺或吗啉。
在一些实施方案中，在步骤g-2)中，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应溶剂选自DMF、DMAc、二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、甲醇和乙醇中的其中一种或其任意组合；优选DMF、四氢呋喃和二氯甲烷的其中一种或其任意组合。
在一些实施方案中，在步骤g-2)中，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式7-B2化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：2～1：20。
在一些实施方案中，在步骤g-2)中，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，所选碱与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50。
在一些实施方案中，在步骤g-2)中，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应温度选自0～50℃；优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤g-3)中，反应在碱性条件下进行。所述碱选自碳酸氢钠、碳酸钠、碳 酸钾、碳酸铯和碳酸氢钾；优选碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸钾。
在一些实施方案中，在步骤g-3)中，反应溶剂选自四氢呋喃、丙酮、乙腈、1，4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜和水中其中一种或其任意组合；优选水、四氢呋喃、丙酮和乙腈中其中一种或其任意组合；更优选丙酮与水的组合。
在一些实施方案中，在步骤g-3)中，反应溶剂选自丙酮和水的组合，其中，丙酮与水的体积比选自1：0.2～1：10。
在一些实施方案中，在步骤g-3)中，式7-B3化合物或其盐与7-A1化合物的摩尔比选自1：1～1：5。
在一些实施方案中，在步骤g-3)中，反应温度选自0～50℃。
在一些实施方案中，在步骤h)中，反应在酸性条件下进行。所述酸选自对甲苯磺酸一水合物、对甲苯磺酸吡啶盐、三氟乙酸和醋酸中的一种或其任意组合；优选对甲苯磺酸一水合物。
在一些实施方案中，在步骤h)中，式2化合物与所选酸的摩尔比选自1：0.2～1：2；优选1：0.2～1：0.4。
在一些实施方案中，在步骤h)中，反应溶剂选自四氢呋喃、1,4-二氧六环、甲苯、邻甲基苯酚、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮中其中一种或其任意组合；优选甲苯、邻甲基苯酚和N-甲基吡咯烷酮中其中一种或其任意组合；更优选N-甲基吡咯烷酮。
在一些实施方案中，在步骤h)中，式2化合物和所选溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：1～1：60。
在一些实施方案中，在步骤h)中，式1化合物或其盐和式2化合物的摩尔比选自3：1～1：1；优选2：1～1：1。
在一些实施方案中，在步骤h)中，式1化合物分批加入反应体系中；较佳的，以总添加量计，在酸性条件下，25～35mol％的式1化合物或其盐和式2化合物在100～120℃下反应，其余的式1化合物分2～5次加入至反应体系中；更佳的，以总添加量计，在酸性条件下，25～35mol％的式1化合物或其盐和式2化合物在100～120℃下反应20～40min，其余的式1化合物分2～5次加入至反应体系中，每次间隔20～40min，加毕继续反应30～90min。
在一些实施方案中，在步骤h)中，反应温度选自70～130℃；优选80～120℃；更优选为100～120℃。
在一些实施方案中，在步骤i-1)中，式1-A1化合物与式1-A2化合物在钯催化剂、铜催化剂和碱的作用下得到式1-A3化合物；所述钯催化剂选自Pd(PPh3)4、Pd(OAc)2、Pd(PPh3)2Cl2和Pd2(dba)3，优选Pd(PPh3)2Cl2；所述铜催化剂选自CuI、CuBr和CuCl，优选CuI；所述碱选自三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、DBU、碳酸钾和碳酸铯，优选三乙胺或N,N-二异丙基乙胺。
在一些实施方案中，在步骤i-1)中，反应所述钯催化剂与式1-A1化合物的摩尔比选自0.01：1～0.2：1；优选0.01：1～0.10：1；更优选0.01：1～0.03：1。
在一些实施方案中，在步骤i-1)中，反应所述铜催化剂与式1-A1化合物的摩尔比选自0.01：1～0.2：1；优选0.02：1～0.10：1；更优选0.02：1～0.05：1。
在一些实施方案中，在步骤i-1)中，式1-A1化合物与式1-A2化合物的摩尔比选自1：1～1：5；优选1：1～1：3；更优选1：1～1：2。
在一些实施方案中，在步骤i-1)中，反应所述碱与式1-A1化合物的摩尔比选自10：1～1：1；优选5：1～2：1。
在一些实施方案中，在步骤i-1)中，反应溶剂选自四氢呋喃、1,4-二氧六环、甲苯、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺和N,N-二甲基乙酰胺的其中一种或其任意组合；例如反应溶剂选自四氢呋喃、1,4-二氧六环、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺和N,N-二甲基乙酰胺的其中一种或其任意组合；又例如四氢呋喃、N-甲基吡咯烷酮或N,N-二甲基甲酰胺；优选四氢呋喃或1,4-二氧六环。
在一些实施方案中，在步骤i-1)中，式1-A1化合物和所选溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20；优选1：10～1：20。
在一些实施方案中，在步骤i-1)中，反应温度选自40～80℃；优选40～60℃。
在一些实施方案中，在步骤i-2)中，式1-A3化合物在Sn和Na2S的作用下得到式1化合物或其盐；Na2S以Na2S·2H2O和/或Na2S·9H2O的形式加入体系中。
在一些实施方案中，在步骤i-2)中，所述Sn与式1-A3化合物的摩尔比选自5：1～1：1；优选3：1～1：1。
在一些实施方案中，在步骤i-2)中，所述Na2S与式1-A3化合物的摩尔比选自0.1：1～2：1；优选0.2：1～1：1。
在一些实施方案中，在步骤i-2)中，反应溶剂选自四氢呋喃、丙酮、乙腈、1，4-二氧六环、甲醇、乙醇、丙醇和水中其中一种或其任意组合；优选四氢呋喃、乙醇和甲醇中其中一种或其任意组合；更优选乙醇与水的组合，其中，乙醇与水的体积比选自20：1～1：1，优选10：1～5：1。
在一些实施方案中，在步骤i-2)中，反应温度选自40～100℃；例如50～80℃，优选60～90℃。
在一些实施方案中，在步骤j-1)中，式1-B1化合物和式1-B2化合物发生格氏反应得到式1-B3化合物。
在一些实施方案中，在步骤j-1)中，式1-B1化合物和式1-B2化合物的摩尔比选自1：0.8～1：2；优选1：1～1：1.5。
在一些实施方案中，在步骤j-1)中，反应溶剂选自四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、异丙醚和乙醚中的其中一种或其任意组合；优选四氢呋喃或异丙醚。
在一些实施方案中，在步骤j-1)中，反应温度选自-20～60℃；优选-20～50℃；更优选0～30℃。
在一些实施方案中，在步骤j-2)中，式1-B3化合物通过硝化反应得到式1-B4化合物。
在一些实施方案中，在步骤j-2)中，反应硝化体系选自浓硝酸、浓硝酸/醋酸，浓硫酸/硝酸钾。
在一些实施方案中，在步骤j-2)中，式1-B3化合物和硝化体系的质量体积比(g/mL)选自1：4～1：20；优选1：6～1：15。
在一些实施方案中，在步骤j-2)中，反应温度选自-20～30℃；优选-20～0℃。
在一些实施方案中，在步骤j-3)中，还原式1-B4化合物的硝基为氨基得到式1-B5化合物或其盐； 可以采用本领域技术人员所熟知的常规反应条件进行。
在一些实施方案中，在步骤j-3)中，反应的还原剂选自氢气、TiCl3、SnCl2、连二亚硫酸钠、锌粉和铁粉；优选氢气、SnCl2或连二亚硫酸钠。
在一些实施方案中，在步骤j-3)中，反应在氢气氛围下，加入过渡金属催化剂。所述过渡金属催化剂选自二氧化铂、钯碳、铑碳和兰尼镍。
在一些实施方案中，在步骤j-3)中，反应在氢气-二氧化铂体系下进行时，式1-B4化合物与二氧化铂的质量比选自1：0.01～1：0.4；优选1：0.01～1：0.1。
在一些实施方案中，在步骤j-3)中，反应在氢气-二氧化铂体系下进行时，氢气压力选自1～10个大气压，优选1～5个大气压。
在一些实施方案中，在步骤j-3)中，反应在氢气-二氧化铂体系下进行时，反应温度选自-10～100℃；优选-10～80℃。
在一些实施方案中，在步骤j-3)中，反应在氢气-二氧化铂体系下进行时，反应溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃和1，4-二氧六环中的其中一种或其任意组合；优选乙酸乙酯或四氢呋喃。
在一些实施方案中，在步骤j-4)中，反应在碱性条件下进行。所述碱选自碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸铯和碳酸钠，例如所述碱选自碳酸钾、氢氧化钠、碳酸铯和碳酸钠，又例如碳酸钾或氢氧化钾；优选碳酸钾或碳酸钠。
在一些实施方案中，在步骤j-4)中，式1-B5化合物和所述碱的摩尔比选自1：1～1：5；优选1：1～1：3。
在一些实施方案中，在步骤j-4)中，反应溶剂选自水、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、六甲基膦酰三胺、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜的其中一种或任意组合；优选水、乙腈、四氢呋喃、二甲基亚砜和六甲基膦酰三胺的其中一种或任意组合。
在一些实施方案中，在步骤j-4)中，反应溶剂选自乙腈和水的组合，其中，乙腈与水的体积比选自1：5～10：1；优选1：2～5：1。
在一些实施方案中，在步骤j-4)中，式1-B5化合物或其盐与反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20；优选1：5～1：10。
在一些实施方案中，在步骤j-4)中，反应温度选自20～100℃；优选40～80℃。
中间体
另一方面，本申请提供如下式1-B4化合物、式1-B5化合物或其盐、式1化合物或其盐、式7化合物或其盐、式8化合物或其盐、式9化合物或其盐，
其中，
R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
X选自卤素；
PG1选自氨基保护基；
式7化合物不为
另一方面，本申请提供如式1-B4化合物或其盐、式1-B5化合物在制备式1化合物或其盐或式3 化合物或其盐或式I化合物或其盐中的用途，
其中，
R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
X选自卤素。
另一方面，本申请提供如式1化合物或其盐在制备式3化合物或其盐或式I化合物或其盐中的用途，
其中，
R1、R2各自独立地选自C1-4烷基。
另一方面，本申请提供如式7化合物或其盐、式8化合物或其盐、式9化合物或其盐在制备式I化合物中的用途，
其中，
R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
PG1选自氨基保护基。
在一些实施方案中，上述中间体或其用途中，所述R1、R2各自独立地选自甲基、乙基和丙基，优选R1、R2相同。
在一些实施方案中，上述中间体或其用途中，所述R1、R2均为丙基。
在一些实施方案中，上述中间体或其用途中，所述X选自氟、氯、溴和碘。
在一些实施方案中，上述中间体或其用途中，所述X为氯。
在一些实施方案中，所述PG1选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)。
在本申请的一些实施方案中，所述式1-B4化合物选自：
在本申请的一些实施方案中，所述式1-B5化合物或其盐选自：
在本申请的一些实施方案中，所述式7化合物或其盐选自：
在本申请的一些实施方案中，所述式8化合物或其盐选自：
在本申请的一些实施方案中，所述式9化合物或其盐选自：
定义和术语
除非另有说明，本文所用的术语和短语具有下文所列的含义。特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域技术人员通常理解的含义进行解释。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
在本申请中，单数形式的词包括其复数形式，除非另有说明或上下文暗示。因此，提及的单数术语和“该”、“所述”通常包括各术语的复数。术语“包括”和“包含”应解释为包含在内，而不应进行排除性解释。
在本申请中，除非另有说明或上下文暗示，否则本申请使用的术语“其盐”是指化合物的盐形式(例如，式1化合物等)。盐形式的化合物具有一种或多种内盐形式和/或包括另一种分子，例如乙酸根离 子，琥珀酸根离子或其他抗衡离子。盐形式的化合物的抗衡离子通常是有机或无机部分，其稳定母体化合物上的电荷。化合物的盐形式在其结构中具有一个或多于一个带电原子。在多个带电原子是盐形式的一部分的情况下，存在多个抗衡离子和/或多个带电抗衡离子。因此，化合物的盐形式通常具有一个或多个带电原子，其对应于化合物的非盐形式和一个或多个抗衡离子。在一些方面，化合物的非盐形式含有至少一个氨基或其他碱性部分，因此在酸存在下，获得具有碱性部分的酸加成盐。在其他方面，化合物的非盐形式含有至少一个羧酸基团或其他酸性部分，因此在碱的存在下，获得羧酸盐或其他阴离子部分。
在本申请中，化合物盐形式中的示例性抗衡阴离子和抗衡阳离子包括但不限于：硫酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即1,1’-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐))。
在本申请中，术语“C1-4烷基”表示直链或支链的含有1-4个碳原子的烷基。具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、1-正丁基、2-正丁基、异丁基、叔丁基等。
在本申请中，术语“室温”是指25±5℃。
在本申请中，所述保护基及其连接或脱除方法可以采用本领域的常规方法实现，该方法可以是一步反应，也可以是多步反应，例如但不限于参照Wiley出版社的《Greene's Protective Groups in Organic Synthesis-4th Edition》或化学工业出版社的《保护基化学》实现。
在本申请中，术语“氨基保护基”是指保护化合物中氨基的基团，可以选自本领域中已知的氨基保护基团。本申请所述保护反应的介质优选选自非质子溶剂、优选二氯甲烷。对氨基进行保护的上保护基反应可以采用本领域技术人员所熟知的常规反应条件进行。脱除氨基上的保护基的反应可以采用本领域技术人员所熟知的常规反应条件进行。优选地，本发明中使用的氨基保护基选自烷氧羰基类保护基，其可以是未被取代的或是取代的，如苄氧羰基、叔丁氧羰基、笏甲氧羰基、烯丙氧羰基、三甲基硅乙氧羰基、甲氧羰基或乙氧羰基。
在本申请中，当术语“约”与数值或数值范围一起使用时，其通过向上和/或向下延长所述数值的边界来调整该数值或数值范围。例如，术语“约”旨在将数值向所述值的上和下修正≤20％、更优选≤10％。
在本申请中，如果针对一个化合物同时给出了该化合物的名称和结构式，在二者不一致的情况下，以化合物的结构为准，除非上下文表明化合物的结构不正确、而名称正确。
在本申请中，化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本申请设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体过量的混合物，所有这些混合物都属于本申请的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本申请的制备方法的原料易得且价格低廉。中间体及产物的分离纯化操作简便。反应条件温和，在常压下进行，反应温度易于控制。终产品的纯度高。且本申请所述的制备方法可进行放大，适合放量合成。且本申请所制得的药物连接体偶联物可与抗体偶联，得到抗体药物偶联物(ADC)，具有良好的抗肿瘤活性。
具体实施方式
序列信息
本申请涉及的序列的信息描述于下面的表中。
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例中采用的实施条件可以根据具体要求做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
其中，在以下实施例中用到的化学试剂均为市购的化学试剂。
在常规的合成法以及实施例和中间体合成例中，各缩写或英文的含义如下表所示：
在本发明的示例性实施方式中，化合物1采用如下路线来合成：
路线(1)
路线(2)
在本发明的示例性实施方式中，化合物3采用如下路线来合成：
路线(1)
路线(2)
在本发明的示例性实施方式中，化合物7a采用如下路线来合成：
在本发明的示例性实施方式中，药物连接体偶联物Ia采用如下路线来合成：
实施例1制备4-(6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基)丁-3-炔-1-醇(化合物1-A3)
方法1：将化合物1-A1(100g，408mmol)和1-A2(57.2g，816mmol)，溶在THF(1.5L)中，加入CuI(3.88g，20.4mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(8.60g，12.24mmol)，三乙胺(102g，1.02mol，141mL)，氮气保护，50℃下反应过夜。LCMS监测反应。反应液趁热在硅藻土上过滤，滤液经浓缩后得到粗品，粗品经乙酸乙酯(300ml)打浆，得到目标产物1-A3(65g,收率：67％,纯度：98.9％)。
方法2：将化合物1-A1(100g，408mmol)和1-A2(11.4g，163mmol)，溶在NMP(300mL)中，加入三乙胺(102g，1.02mol，141mL)，氮气保护。再依次加入CuI(3.88g，20.4mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(2.9g，4.1mmol)，50℃下反应0.5h。滴加1-A2(22.8g，326mmol)，滴加完毕，50℃下继续反应4h。反应液降至室温，倒入含有氨水(3.26mol)的水中(4.5L)，析出固体，搅拌0.5h。抽滤，将滤饼加入水中(4.5L)，搅拌0.5h。抽滤，将滤饼加入水中(4.5L)，搅拌0.5h。滤饼干燥，得到目标产物1-A3(85.0g，收率88％，纯度96.4％)。
方法3：将化合物1-A1(100g，408mmol)和1-A2(34.1g，490mmol)，溶在DMF(0.5L)中，加入CuI(1.55g，8.16mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(2.87g，4.08mmol)。滴加三乙胺(204g，2.02mol)，滴毕50℃下反应3h。反应液降温至30℃以下，将反应液加入到含1％氨水(1L)中，搅拌30min；抽滤，滤饼用水(500mL)打浆20min，抽滤；滤饼干燥得到目标产物1-A3(86g,收率：90％，纯度96.6％)。
化合物1-A3：LCMS(ESI)[M+H]+＝236.0.
化合物1-A3：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.66(s,1H),7.18(s,1H),6.25(s,2H),4.91(t,J＝5.6Hz,1H),3.59(dd,J＝12.6,6.7Hz,2H),2.59(t,J＝6.9Hz,2H).
实施例2制备1-(6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基)-4-羟基丁烷-1-酮(化合物1)
方法1：将化合物1-A3(8.42g，35.79mmol)溶于EtOH：H2O＝9:1(v:v,152mL)的溶液中，加入Sn(8.46g，71.58mmol)，Na2S·2H2O(0.84g，10.74mmol)，然后加入浓盐酸(30mL，358mmol)，78℃搅拌1h，LCMS监测反应，将反应液趁热在硅藻土上抽滤，滤液浓缩得到粗品。加入乙酸乙酯(20ml)打浆，然后抽滤，滤饼用乙酸乙酯(5ml)洗涤两次，得到化合物1的粗品。将化合物1的粗品(5.0g)加入水(50mL)，滴加入碳酸氢钠饱和溶液至pH值约8.0，室温搅拌1小时。抽滤，得滤饼和滤液；滤液再用乙酸乙酯萃取(50mL*2)，浓缩后得固体；浓缩所得固体和滤饼经干燥后，共得化合物1(3.55g，收率：51％，纯度99.7％)。
方法2：将化合物1-A3(80g，340mmol)溶于EtOH：H2O＝9:1(v:v,1600mL)的溶液中，加入Sn(80.4g，680mmol)，Na2S·9H2O(24.5g，102mmol)，然后加入浓盐酸(142mL，1.7mol)，55℃搅拌1h。将反应液趁热在硅藻土上抽滤，少量乙醇淋洗，合并滤液，滤液浓缩干，加入乙酸乙酯(800mL)溶解，缓慢稀释入碳酸钠水溶液中，最后调节pH＝8。过滤收集滤液，滤液分层，有机相浓缩至有大量棕色固体析出，冷至室温，抽滤干燥得化合物1(50.1g，收率：66.0％，纯度93.2％)。
化合物1：LCMS(ESI)[M-18+H]+＝206.2.
化合物1：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.18(s,1H),6.24(s,1H),5.87(s,2H),3.62(t,J＝6.7Hz,2H),2.95–2.84(m,2H),1.95–1.82(m,2H).
实施例3制备1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基)-4-氯丁烷-1-酮(化合物1-B3-a)
方法1：向反应瓶中加入镁屑(12.60g,518mmol)，碘粒(0.50g)和磁子。加装回流冷凝管，氮气保护条件下加入THF(200ml)，开启搅拌。首先加入4-溴-1,2-亚甲二氧基苯(10.00g,50mmol,0.12eq)，吹风机热风加热引发，反应体系颜色由淡黄色变成无色。再次加入THF(300ml)，分批加入4-溴 -1,2-亚甲二氧基苯(90.00g,450mmol,1.08eq)，保持反应体系微沸。镁屑大部分被消耗，反应停止放热自然恢复至常温，新制取的格氏试剂1-B2-a备用。
向反应瓶中加入化合物1-B1-a(68.66g,415mmol)，THF(500ml)和磁子。将反应体系降温至0～5℃，开启搅拌，通过恒压加料漏斗缓慢滴加上述现制备的格氏试剂1-B2-a的THF溶液，维持体系温度在0～10℃。加料完成后将体系恢复到室温，反应过夜。
反应结束后，加入饱和氯化铵水溶液(40ml)淬灭反应，加入EtOAc(1000ml)和饱和食盐水(1500ml)稀释反应液。加入2M HCl(250ml)调节pH至6～7振荡分液，无水硫酸钠干燥，过滤后旋蒸除去溶剂，得到粗品。甲叔醚(80ml)溶解粗品，在搅拌下缓慢加入正庚烷(200ml)，有固体析出，将体系降温至-30℃搅拌15分钟，低温抽滤，固体转移后干燥，得到化合物1-B3-a(87.21g,收率：92％,纯度：96.8％)。
方法2：向反应瓶中加入镁屑(14.71g,613mmol)，碘粒(0.58g)和磁子。加装回流冷凝管，氮气保护条件下加入异丙醚(200ml)，开启搅拌。首先加入4-溴-1,2-亚甲二氧基苯(11.66g,58mmol,0.14eq)，吹风机热风加热引发，反应体系颜色由淡黄色变成无色。再次加入异丙醚(300ml)，分批加入4-溴-1,2-亚甲二氧基苯105.1g,523mmol,1.26eq)，保持反应体系微沸。镁屑大部分被消耗，反应停止放热自然恢复至常温，新制取的格氏试剂1-B2-a备用。
向反应瓶中加入化合物1-B1-a(68.66g,415mmol)，异丙醚(500ml)和磁子。将反应体系降温至0～5℃，开启搅拌，通过恒压加料漏斗缓慢滴加上述现制备的格氏试剂1-B2-a的异丙醚溶液，维持体系温度在0～10℃。加料完成后将体系恢复到室温，反应过夜。
反应结束后，加入饱和氯化铵水溶液(40ml)淬灭反应，加入EtOAc(1000ml)和饱和食盐水(1500ml)稀释反应液。加入2M HCl(250ml)调节pH至6～7振荡分液，无水硫酸钠干燥，过滤后旋蒸除去溶剂，得到粗品。甲叔醚(80ml)溶解粗品，在搅拌下缓慢加入正庚烷(200ml)，有固体析出，将体系降温至-30℃搅拌15分钟，低温抽滤，固体转移后干燥，得到化合物1-B3-a(86.52g,收率：91.3％,纯度：95.1％)。
化合物1-B3-a：LCMS(ESI)[M+H]+＝227.2.
化合物1-B3-a：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.43(d,J＝1.7Hz,1H),7.03(d,J＝8.2Hz,1H),6.13(s,2H),3.69(t,J＝6.7Hz,2H),3.09(t,J＝7.1Hz,2H),2.05(p,J＝6.9Hz,2H).
实施例4制备4-氯-1-(6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基)丁酮(化合物1-B4-a)
方法1：将浓硝酸(800mL)缓慢加入2L的反应瓶中，降温到-5℃，称取化合物1-B3-a(80g,0.353mol)分批加入到反应瓶中。-5℃搅拌4h，TLC(PE:EA＝5:1)监测反应。将反应液缓慢加入2L的冰水中，有大量固体析出。过滤，滤饼用饱和食盐水打浆(2L*2)两次。过滤，滤饼用饱和碳酸氢 钠水溶液打浆(1L*2)两次后，再用2L的水打浆一次。过滤，滤饼溶于乙酸乙酯(1L)中，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩蒸干得到目标化合物1-B4-a(81g，收率：76％，纯度：89.3％)。
方法2：将浓硝酸(12mL)缓慢加入反应瓶中，降温到-5℃，称取化合物1-B3-a(4.0g,17.6mmol)溶于醋酸(12mL)，缓慢滴加到反应瓶中。-5℃搅拌4h，TLC(PE:EA＝5:1)监测反应。将反应液缓慢加入100mL的冰水中，有大量固体析出。过滤，滤饼用饱和食盐水打浆(100mL*2)两次。过滤，滤饼用饱和碳酸氢钠水溶液打浆(100mL*2)两次后，再用100mL的水打浆一次。过滤，滤饼溶于乙酸乙酯(100mL)中，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩蒸干得到目标化合物1-B4-a(4g，收率：75.7％，纯度：90.7％)。
化合物1-B4-a：1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,1H),7.27(s,1H),6.30(s,2H),3.70(t,J＝6.7Hz,2H),2.95(t,J＝7.1Hz,2H),2.19–1.93(m,2H).
实施例5制备1-(6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基)-4-氯丁烷-1-酮(化合物1-B5-a)
方法1：化合物1-B4-a(250g，纯度89.3％，0.92mol)加入乙酸乙酯(3L)中再加入二氧化铂(12.5g)，氢气置换三次后，氢气氛围下在室温下反应过夜，LCMS监测反应。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后得到目标化合物1-B5-a粗品(200g)，直接用于下一步转化。
方法2：化合物1-B4-a(5g，纯度89.3％，0.016mol)加入四氢呋喃(50mL)中再加入二氧化铂(0.2g)，氢气置换三次后，氢气氛围下在室温下反应过夜，LCMS监测反应。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后得到目标化合物1-B5-a粗品(4g)，可直接用于下一步转化。
化合物1-B5-a：LCMS(ESI)[M+H]+＝242.0.
化合物1-B5-a：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.15(s,1H),6.27(s,1H),5.93(s,2H),3.66(t,J＝6.3Hz,2H),3.02(t,J＝7.0Hz,2H),2.18(p,J＝6.7Hz,2H).
实施例6制备1-(6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基)-4-羟基丁烷-1-酮(化合物1)
方法1：将化合物1-B5-a(200.0g)溶在乙腈(1L)后再加入水(1L)，再加入碳酸钾(137.3g,0.994mol)。50℃下搅拌反应8小时，LCMS监测反应。反应结束后，浓缩反应液除去乙腈，残余物后加入乙酸乙酯(6L)萃取。有机相用纯水(2L)洗涤两次后，再用饱和食盐水(2L)洗涤一次。有机相经无水Na2SO4干燥后浓缩得粗品。粗品用乙酸乙酯(400ml)打浆1.5h；过滤，滤饼用乙酸乙酯(250ml)打浆2h。过滤后，滤饼经减压干燥，得化合物1(112g，从1-B4-a计算两步收率：54％，纯度97.7％)。
方法2：将化合物1-B5-a(4.0g)溶在乙腈(20mL)后再加入水(20mL)，再加入氢氧化钾(1.12g,0.02mol)。50℃下搅拌反应8小时，LCMS监测反应。反应结束后，浓缩反应液除去乙腈，残余物后加入乙酸乙酯(120mL)萃取。有机相用纯水(120mL)洗涤两次后，再用饱和食盐水(120mL)洗涤一次。有机相经无水Na2SO4干燥后浓缩得粗品。粗品用乙酸乙酯(8mL)打浆1.5h；过滤，滤饼用乙酸乙酯(5mL)打浆2h。过滤后，滤饼经减压干燥，得化合物1(2.2g，从1-B4-a计算两步收率：53％，纯度98.0％)。
化合物1：LCMS(ESI)[M-18+H]+＝206.2.
化合物1：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.18(s,1H),6.24(s,1H),5.87(s,2H),3.62(t,J＝6.7Hz,2H),2.95–2.84(m,2H),1.95–1.82(m,2H).
实施例7制备(S)-7-乙基-7-羟基-14-(3-羟丙基)-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-g] 吡喃并[3',4'；6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(化合物3)
方法1：将化合物1(41.80g,0.19mol)、化合物2a(110.00g,0.42mol)和对甲苯磺酸一水化合物(31.90g,0.17mol)加入三口烧瓶；量取275ml NMP加入烧瓶，氮气保护，110℃加热搅拌；每间隔0.5h向反应体系中加化合物1(31.35g,0.14mol)，共加3次；加毕继续搅拌1h后，HPLC监测反应。反应结束后，向反应液中加入异丙醇(550ml)，搅拌1.0h；将所得混悬液加入至甲基叔丁基醚(11L)中，搅拌1h；抽滤，滤饼用水(5.5L)打浆1h；得滤饼，50℃鼓风干燥16h后，继续80℃减压干燥4小时得化合物3(182.00g，收率：77％，纯度80.2％)。
方法2：将化合物1(41.80g,0.19mol)、化合物2a(110.00g,0.42mol)和对甲苯磺酸一水合物(31.90g,0.17mol)加入三口烧瓶，量取550mLNMP加入烧瓶，氮气保护。110℃加热搅拌，每间隔0.5h向反应体系中加化合物1(31.35g,0.14mol)，共加3次。加毕继续搅拌1h。向反应液中加入异丙醇(110mL)，再滴加水(1.32L)，降至5℃搅拌1.0h。抽滤，滤饼水洗，水(13.75L)打浆2h，抽滤，滤饼再次水洗。将滤饼加入反应瓶中，依次加入DMF(165mL)和甲醇(1.32L)，25℃搅拌12h，抽滤，滤饼用甲醇洗涤，50℃真空干燥48h，得到化合物3(184.0g，收率77.9％，纯度93％)。
对比例1：将化合物1(1.23g,5.5mmol)、化合物2a(1.0g,3.8mmol)和对甲苯磺酸一水化合物(289mg,1.5mmol)加入三口烧瓶；量取2.5mL NMP加入烧瓶，氮气保护，110℃加热搅拌2h。向反应液中加入异丙醇(1.0mL)，再滴加水(20mL)，降至5℃搅拌1.0h。抽滤，滤饼水洗，水(20mL)打浆2h，抽滤，滤饼再次水洗。将滤饼加入反应瓶中，依次加入DMF(1.5mL)和甲醇(12mL)，25℃搅拌12h，抽滤，滤饼用甲醇洗涤，50℃真空干燥48h，得到化合物3(0.68g,收率39.7％,纯度91％)。
对比例2：将化合物1(0.39g,1.7mmol)、化合物2a(1.0g,3.8mmol)和对甲苯磺酸一水化合物 (289mg,1.5mmol)加入三口烧瓶；量取2.5ml NMP加入烧瓶，氮气保护，65℃加热搅拌；每间隔0.5h向反应体系中加化合物1(0.28g,1.26mmol)，共加3次；加毕继续搅拌1h后，HPLC监测反应存在大量未环化中间态，产物较少。
化合物3：LCMS(ESI)[M+H]+＝451.4.
化合物3：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(s,1H),7.49(s,1H),7.25(s,1H),6.49(s,1H),6.30(s,2H),5.54–5.36(m,2H),5.19(s,2H),4.68(t,J＝5.0Hz,1H),3.51(q,J＝5.6Hz,2H),3.14(t,J＝7.6Hz,2H),1.99–1.73(m,4H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例8制备(S)-7-乙基-7-羟基-14-(3-羟丙基)-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-g] 吡喃并[3',4'；6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(化合物3)
将化合物1(0.076g,0.34mmol)、化合物2b(0.2g,0.65mmol)和对甲苯磺酸一水合化合物(0.05g,0.26mmol)加入25ml三口瓶中，加入NMP(0.50mL)，加入磁子，氩气保护，110℃下搅拌。每间隔0.5h补加化合物1，加入化合物1量依次为(0.057g,0.26mmol)、(0.057g,0.26mmol)、(0.038g,0.17mmol)，加毕继续搅拌0.5h；取样LCMS检测；反应结束，搅拌中向反应液中加入2ml异丙醇，搅拌1.0h；将所得混悬液加入至40ml甲基叔丁基醚中，搅拌0.5h；抽滤，滤饼用40ml水打浆0.5h；得滤饼，50℃鼓风干燥12h，得化合物3粗品(0.20g，收率：56％，纯度80％)。
化合物3：LCMS(ESI)[M+H]+＝451.4.
化合物3：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(s,1H),7.49(s,1H),7.25(s,1H),6.49(s,1H),6.30(s,2H),5.54–5.36(m,2H),5.19(s,2H),4.68(t,J＝5.0Hz,1H),3.51(q,J＝5.6Hz,2H),3.14(t,J＝7.6Hz,2H),1.99–1.73(m,4H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例9(9H-芴-9-基)甲基(S)-(2-(((3-(7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧 杂环戊烷并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)丙氧基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲 酸酯(化合物5a)
方法1：室温条件下，向反应瓶中加入DMF(1.75L)；继续依次加入化合物3(175.66g，纯度80.2％,313mmol)、化合物4a(345.93g,939mmol)。氩气置换3次，室温条件下，滴加HCl/EA(2N， 94ml，187.8mmol)；HPLC监测反应。
反应结束后，室温下，将反应液滴至水(17.5L)中。滴加完毕后，继续搅拌1小时。抽滤；将滤饼加入水(8.75L)中，搅拌1小时。抽滤，滤饼加入DCM(3.5L)搅拌溶解。所得DCM体系用水(3.5L*2)洗涤。分出有机相，加入无水硫酸钠(875.00g)干燥。过滤，浓缩，得粗品。粗品经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液为DCM/THF/EA/Acetone)，得化合物5a(198.44g，收率：70％，纯度84％)。
方法2：30℃，向反应瓶中加入DMF(20mL)；继续依次加入化合物3(2.0g，纯度80.2％,3.56mmol)、化合物4a(3.94g,10.7mmol)。氩气置换3次，室温条件下，加入BF3.Et2O(1.01g，7.12mmol)。
反应结束后，室温下，将反应液滴至水(200mL)中。滴加完毕后，继续搅拌1小时。抽滤；将滤饼加入水(100mL)中，搅拌1小时。抽滤，滤饼加入DCM(40mL)搅拌溶解。所得DCM体系用水(40mL*2)洗涤。分出有机相，加入无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，得粗品。粗品经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液为DCM/THF/EA/Acetone)，得化合物5a(2.72g，收率：67.8％，纯度84％)。
化合物5a：LCMS(ESI)[M+H]+＝759.5.
化合物5a：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(t,J＝6.4Hz,1H),7.84(d,J＝7.6Hz,2H),7.68(d,J＝7.4Hz,2H),7.56–7.50(m,2H),7.45(s,1H),7.38(t,J＝7.3Hz,2H),7.29(t,J＝7.3Hz,2H),7.22(s,1H),6.45(s,1H),6.25(s,2H),5.47–5.34(m,2H),5.20–5.03(m,2H),4.60(d,J＝6.5Hz,2H),4.27(d,J＝6.8Hz,2H),4.22–4.16(m,1H),3.66(d,J＝6.0Hz,2H),3.50(t,J＝6.0Hz,2H),3.13–2.95(m,2H),1.94–1.77(m,4H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例10制备(S)-2-氨基-N-((3-(7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊 烷并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)丙氧基)甲基)乙酰胺(化合物6a)
方法1：室温下，反应瓶中加入化合物5a(33.30g,纯度84％，36.9mmol)和DMF(333ml)搅拌溶解，并将上述溶液滴加至含有二乙胺(4.86g，66.42mmol)的DMF(333ml)溶液中。室温下搅拌1h后，将上述反应液滴至已预先冰浴冷却的甲基叔丁基醚(7L)和正庚烷(7L)的混合溶剂中，滴毕，继续搅拌2小时。抽滤，滤固经减压干燥得化合物6a(22.53g，收率88％，纯度77.7％)。
方法2：室温下，反应瓶中加入化合物5a(2.0g,纯度84％，2.2mmol)和DMF(20ml)搅拌溶解，并将上述溶液滴加至含有哌啶(0.34g，4.0mmol)的DMF(20ml)溶液中。室温下搅拌1h后，将上述反应液滴至已预先冰浴冷却的甲基叔丁基醚(40mL)和正庚烷(40mL)的混合溶剂中，滴毕，继续搅拌2小时。抽滤，滤固经减压干燥得化合物6a(1.3g，收率82.6％，纯度75.0％)。
化合物6a：LCMS(ESI)[M+H]+＝537.4.
化合物6a甲酸盐的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(t,J＝6.6Hz,1H),8.23(s,1H),7.60(s,1H),7.51(s,1H),7.25(s,1H),6.49(s,1H),6.29(s,2H),5.43(s,2H),5.22(s,2H),4.62(d,J＝6.5Hz,2H),3.53–3.46(m,2H),3.29(s,2H),3.15–3.06(m,2H),1.98–1.75(m,4H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例11制备N2-((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸 (化合物7-A3-a)
方法1：将化合物7-A1-a(100g,0.229mol)和化合物7-A2-a(56.4g,0.229mol)置于反应瓶中，搅拌条件下，加入丙酮/水＝1：1(v:v，1L)，再加入NaHCO3(76.95g,0.916mol)。室温搅拌过夜。LCMS监测反应。过滤反应液中的固体，将滤液浓缩，浓缩液加入HCl(4N)调节pH至约5，乙酸乙酯萃取(0.75L*2)，合并有机相用饱和食盐水(300mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩后得到目标化合物7-A3-a(117g，收率：90％，纯度：97％)。
方法2：将化合物7-A1-a(100g,0.229mol)和化合物7-A2-a(56.4g,0.229mol)置于反应瓶中，搅拌条件下，加入四氢呋喃/水＝1：1(v:v，1L)，再加入Na2CO3(97.1g,0.916mol)。室温搅拌过夜。LCMS监测反应。过滤反应液中的固体，将滤液浓缩，浓缩液加入HCl(4N)调节pH至约5，乙酸乙酯萃取(0.75L*2)，合并有机相用饱和食盐水(300mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩后得到目标化合物7-A3-a(118.3g，收率：91.0％，纯度：97％)。
化合物7-A3-a：LCMS(ESI)[M+H]+＝568.3.
化合物7-A3-a：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,J＝7.5Hz,2H),7.82–7.73(m,2H),7.64(d,J＝6.9Hz,1H),7.58(d,J＝9.1Hz,1H),7.44(t,J＝7.4Hz,2H),7.40–7.31(m,2H),6.68(brs,1H),4.38–4.21(m,3H),3.99–3.91(m,1H),3.87(dd,J＝8.8,6.8Hz,1H),2.92–2.80(m,2H),2.17–2.01(m,1H),1.70-1.67(m,1H),1.64–1.52(m,1H),1.42–1.16(m,13H),0.93–0.83(m,6H).
实施例12制备(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸-L-赖氨酸·盐酸盐(化合物7-A4-a的 盐酸盐)
化合物7-A3-a(117g，206.2mmol)加入二氧六环(1.5L)搅拌10分钟后再加入HCl(0.75L，4N in dioxane)，在室温下反应过夜。LCMS监测反应。反应液中加入甲基叔丁基醚(2L)搅拌30分钟 后过滤，固体转移至鼓风干燥箱干燥，得到目标化合物7-A4-a的盐酸盐(94g，收率：91％，纯度94％)。
LCMS(ESI)[M+H]+＝468.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝7.3Hz,1H),8.07(brs,3H),7.90(d,J＝7.5Hz,2H),7.77(dd,J＝7.1,3.4Hz,2H),7.47–7.37(m,3H),7.34(td,J＝7.4,1.7Hz,2H),4.34–4.17(m,4H),3.96(dd,J＝8.6,7.4Hz,1H),2.83–2.65(m,2H),2.04(dd,J＝13.5,6.7Hz,1H),1.82–1.52(m,4H),1.51–1.30(m,2H),0.96–0.84(m,6H).
实施例13制备N2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸)-N6,N6-二丙基-L-赖氨酸(化合 物7a)
方法1：将化合物7-A4-a的盐酸盐(55.0g，109.1mmol)和醋酸(10ml)溶在甲醇(500mL)溶液中，冰水浴下，向反应液中加入正丙醛(25.35g，436.4mmol)，室温下搅拌反应30分钟，冰水浴下再向反应液中加入氰基硼氢化钠(27.43g，436.4mmol)，反应在室温下搅拌反应1h。LCMS显示原料未反应完全。补加正丙醛(12.67g，218.2mmol)，氰基硼氢化钠(13.72g，218.2mmol)，继续反应0.5h。反应液过滤，滤液浓缩，浓缩液加入纯净水(300ml)，DCM萃取(300ml*2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥后浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(洗脱液为MeOH和DCM)，得化合物7a(39g，收率：65％，纯度98％)。
方法2：将化合物7-A4-a的盐酸盐(55.0g，109.1mmol)和醋酸(10ml)溶在甲醇(500mL)溶液中，冰水浴下，向反应液中加入氰基硼氢化钠(27.43g，436.4mmol)，室温下搅拌反应30分钟，冰水浴下再向反应液中加入正丙醛(25.35g，436.4mmol)，反应在室温下搅拌反应1h。反应液过滤，滤液浓缩，浓缩液加入水(300ml)，DCM萃取(300ml*2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥后浓缩得粗品。粗品用110mLDCM溶解，滴加至1.1L甲基叔丁基醚中，搅拌30min，抽滤得化合物7a(48g，收率：80％，纯度93％)。
化合物7a：LCMS(ESI)[M+H]+＝552.3.
化合物7a：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95–7.85(m,3H),7.76(t,J＝7.3Hz,2H),7.51–7.40(m,3H),7.35(t,J＝7.4Hz,2H),4.34–4.22(m,3H),4.13(dd,J＝12.6,7.2Hz,1H),3.91(dd,J＝8.8,7.1Hz,1H),2.52–2.41(m,6H),2.03(dt,J＝13.5,6.7Hz,1H),1.79–1.67(m,1H),1.66–1.56(m,1H),1.42-1.36(m,6H),1.36–1.21(m,2H),0.90(t,J＝6.9Hz,6H),0.82(t,J＝6.9Hz,6H).
实施例14制备(9H-芴-9-基)甲基((11S,14S)-11-(4-(二丙基氨基)丁基)-1-((S)-7-乙基-7-羟基-8,11- 二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)- 15-甲基-7,10,13-三氧代-4-氧杂-6,9,12-三氮杂十六烷-14-基)氨基甲酸酯(化合物8a)
方法1：室温条件下，向反应瓶中依次加入化合物6a(19.88g,纯度77.7％，28.79mmol)、化合物7a(19.06g,34.55mmol)和DMF(500ml)；室温下搅拌15分钟，氩气保护，降温至0℃，加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物一水合物(10.17g，34.55mmol)；氩气保护，降温至0℃，加毕，0℃继续反应，LCMS监测反应。
反应结束后，将反应液滴加至甲基叔丁基醚(10L)中，搅拌1.5小时后过滤，滤固用600ml的DCM/MeOH混合溶剂(DCM:MeOH＝10:1)溶解，所得溶液经减压浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱液为DCM：MeOH)，得化合物8a(24.00g，收率74％，纯度95.1％)。
方法2：室温条件下，向反应瓶中依次加入化合物6a(2.0g,纯度77.7％，2.9mmol)、化合物7a(2.08g,3.77mmol)和DMF(50ml)；室温下搅拌15分钟，降温至-5℃，加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物一水合物(1.11g，3.77mmol)；氩气保护，降温至-5℃，加毕，-5℃继续反应，LCMS监测反应。
反应结束后，将反应液滴加至甲基叔丁基醚(1L)中，搅拌1.5小时后过滤，滤固用60ml的DCM/MeOH混合溶剂(DCM:MeOH＝10:1)溶解，所得溶液经减压浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱液为DCM：MeOH)，得化合物8a(2.35g，收率71.9％，纯度95.0％)。
化合物8a：LCMS(ESI)[M+H]+＝1070.7.
化合物8a：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(t,J＝6.6Hz,1H),8.28(t,J＝5.9Hz,1H),8.09(d,J＝7.4Hz,1H),7.88(d,J＝7.5Hz,2H),7.77–7.70(m,2H),7.57(s,1H),7.53–7.37(m,4H),7.36–7.28(m,2H),7.26(s,1H),6.50(s,1H),6.30(s,2H),5.77(s,1H),5.44(d,J＝2.5Hz,2H),5.20(s,2H),4.67–4.53(m,2H),4.36–4.17(m,4H),3.93–3.85(m,1H),3.84–3.70(m,2H),3.52(t,J＝6.1Hz,2H),3.16–3.04(m,2H),3.02–2.80(m,5H),2.01–1.50(m,13H),1.38–1.28(m,2H),0.95–0.80(m,15H).
实施例15制备(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-6-(二丙基氨基)-N-(2-(((3-((S)-7-乙基-7-羟基- 8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14- 基)丙氧基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)己酰胺(化合物9a)
方法1：冰浴条件下，氩气保护，向反应瓶中加入化合物8a(29.50g，27.56mmol)和的DMF(147.5ml)，开启搅拌，滴加二乙胺(7.4ml)。滴毕，移去冰浴，继续反应，LCMS监测。向反应液加入四氢呋喃(295ml)，减压浓缩。此操作重复三次。得化合物9a的DMF溶液，直接用于下一步反应(转化率按照100％计算)。
方法2：向反应瓶中加入化合物8a(2.0g，1.87mmol)和THF(20mL)，开启搅拌，滴加N,N-二异丙基乙胺(2mL)。滴毕，继续室温反应6h。得化合物9a的THF溶液，直接用于下一步反应(转化率按照100％计算)。
化合物9a：LCMS(ESI)[M+H]+＝848.6.
化合物9a：1H NMR(400MHz,DMSO-d6，化合物9a三氟乙酸盐)δ9.22(s,1H),8.68(t,J＝6.5Hz,1H),8.54(d,J＝7.6Hz,1H),8.36(t,J＝5.8Hz,1H),8.08(d,J＝3.6Hz,3H),7.59(s,1H),7.51(s,1H),7.25(s,1H),6.50(brs,1H)，6.29(d,J＝1.1Hz,2H),5.42(s,2H),5.23(s,2H),4.67–4.53(m,2H),4.35(q,J＝7.3Hz,1H),3.83–3.69(m,2H),3.66–3.61(m,1H),3.15–3.06(m,2H),3.04–2.94(m,6H),2.10–1.95(m,1H),1.93–1.78(m,4H),1.76–1.54(m,8H),1.42–1.26(m,2H),0.95–0.85(m,15H).
实施例16制备6-(2-(甲磺酰基)-5-嘧啶基)-5-己炔酰氯(化合物10a)
室温条件下，氩气保护，向反应瓶中加入化合物6-[2-(甲磺酰基)-5-嘧啶基]-5-己炔酸(7.76g,28.95mmol)和DCM(77.6ml)，开启搅拌，滴加氯化亚砜(6.88g,57.83mmol)。滴毕，继续反应1小时。反应结束后，反应液减压浓缩。浓缩液加入DCM(77.6ml)，减压浓缩。此操作重复2次后，浓缩液加入DCM(100ml)，得酰氯中间体10a的DCM溶液，直接用于下一步反应(转化率按照100％计算)。
化合物10a经甲醇淬灭，所得甲酯的LCMS(ESI)[M+H]+＝283.0.
实施例17制备N-((11S,14S)-11-(4-(二丙基氨基)丁基)-1-((S)-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代- 7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)-15-甲基- 7,10,13-三氧代-4-氧杂-6,9,12-三氮杂十六烷-14-基)-6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰胺(化合物Ia)
方法1：
室温条件下，氩气保护，向反应瓶中加入化合物9a的DMF溶液(实施例15的方法1制得，23.36g，27.56mmol)和DIPEA(5.34g,41.38mmol)，开启搅拌。冰浴条件下，开始滴加化合物10a的DCM溶液(实施例16制得，8.30g,28.95mmol)；滴毕，冰浴条件下继续反应，LCMS监测。将反应液加入DCM(1.4L)稀释。有机相依次经2％的碳酸氢钠水溶液洗涤(1.4L*2)、饱和食盐水洗涤(1.4L*2)。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得粗品。粗品经制备HPLC分离纯化，得化合物Ia的甲酸盐(18g，从化合物8a计算收率为57％)，HPLC纯度(方法一)94.4％，手性纯度：98.68％。
方法2：
称取6-[2-(甲磺酰基)-5-嘧啶基]-5-己炔酸(0.5g，1.87mmol)溶解到DMF(5mL)中，加入至9a的THF溶液(实施例15的方法2制得，1.58g，1.87mmol)中，冰浴条件下加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物一水合物(0.55g，1.87mmol)。撤去冰浴，室温反应3h。反应液经制备HPLC分离纯化，得化合物Ia的甲酸盐(1.23g，从化合物8a计算收率为60％)。
化合物Ia的甲酸盐：LCMS(ESI)[M+H]+＝1098.5.
化合物Ia的甲酸盐：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.09(s,2H),8.56(t,J＝6.5Hz,1H),8.17(s,1H),8.14(t,J＝5.7Hz,1H),7.97(d,J＝7.3Hz,1H),7.89(d,J＝8.6Hz,1H),7.58(s,1H),7.50(s,1H),7.24(s,1H),6.45(s,1H),6.28(s,2H),5.48–5.35(m,2H),5.24(s,2H),4.64–4.54(m,2H),4.23–4.07(m,2H),3.79–3.66(m,2H),3.50(t,J＝5.9Hz,2H),3.40(s,3H),3.14–3.08(t,J＝8.22Hz,2H),2.59–2.52(m,2H),2.36–2.27(m,8H),2.00–1.76(m,7H),1.72–1.62(m,1H),1.58–1.48(m,1H),1.40–1.20(m,8H),0.88–0.77(m,15H).
制备HPLC色谱条件
色谱柱：C18制备柱(100mm×250mm,10μm),波长：214nm；流速：250ml/min；
流动相A：0.1％甲酸水溶液；
流动相B：乙腈
梯度表：
HPLC色谱条件(方法一)
手性HPLC色谱条件
通过上述方法合成以下药物连接体偶联物：
实施例18制备2E3-02抗体
将2E3-02的重链氨基酸序列(SEQ ID NO:1)通过密码子优化及基因合成(上海生工生物技术有限公司)，然后构建到PTT5载体上，命名为PPT5-02-CH；将2E3-02的轻链氨基酸序列(SEQ ID NO:2)通过密码子优化及基因合成(上海生工生物技术有限公司)，然后构建到PTT5载体上，命名为PTT5-02-CL；通过PEI max试剂将抗B7H3抗体表达质粒PTT5-02-CH/PTT5-02-CL共转染HEK293F细胞(ATCC)进行表达，37℃5％CO2摇床表达7天，收集上清液，通过ProA磁珠进行纯化，获得抗B7H3抗体2E3-02(其重链序列为SEQ ID NO:1，轻链序列为SEQ ID NO:2)。
实施例19制备ADC
取25ml 2E3-02抗体(抗B7H3抗体，浓度28.5mg/ml，20mM醋酸缓冲液)，向其中加入25ml20mM醋酸缓冲液稀释，随后添加1ml含有0.25M EDTA的水溶液并混匀，用0.5M磷酸氢二钠水溶液调样品pH至7.6后加入抗体4.5倍当量的20mM TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐)溶液并混匀，室温下反应90min。最后加入抗体10倍当量的溶解在DMSO中的Ia，混匀后继续室温反应2h。反应结束后使用30KDa的超滤管将样品置换到pH为5.5的10mM组氨酸缓冲液中并去除低分子物质，最后将样品浓缩以获得含有抗B7H3抗体ADC组合物的溶液(ADC-01)，质谱法测定DAR值为7.98。
其中，Ab为B7H3抗体2E3-02。
测定DAR值方法如下：
色谱条件：
色谱柱：PLRP-S，2.1*50mm,5μm；
流动相A：0.1％FA/H2O；流动相B：0.1％FA/ACN
柱温：30℃样品室温度：8℃流速：0.6ml/min进样量：2μl
样品处理：取ADC-01样品50μg，加入1M DTT2μl，加超纯水至50μl稀释至约1.0mg/ml浓度，混匀，室温还原30min。
LC/MS型号：Agilent 1290-6545XT Q-TOF。
质谱条件：Gas temp：320℃，Drying Gas：Nebulizer：35psi；Sheath Gas Temp：350℃；sheath Gas Flow：11l/min；m/z 500～3000。
结果如下所示：
表中，mAb表示未偶联的抗体；LC代表抗体轻链；HC代表抗体重链；DAR1代表包含轻链或重链偶联1个毒素分子的偶联物；DAR2代表包含轻链或重链偶联2个毒素分子的偶联物；DAR3代表包含轻链或重链偶联3个毒素分子的偶联物；其中，单抗理论分子量以G0F糖型计算。下文中mAb、LC、HC、DAR1、DAR2、DAR3如上说明。
测定2E3-02抗体轻链偶联0～1个毒素分子(LC，DAR1比例分别为1.0％，99.0％)、重链偶联0～3个毒素分子(mAb、DAR1、DAR2、DAR3的比例分别为0％，0％，0％，100％)，由此计算ADC-01的抗体-药物偶联比(DAR值)为7.98。根据轻链偶联0～1个毒素分子和重链偶联0～3个毒素分子的分布推知，n可为1，2，3，4，5，6，7或8。
用上述相同的抗体、方法和反应条件，用不同的药物连接体偶联物得到目标产物，质谱法测定DAR值。
试验例1：ADC对NCI-HT29移植瘤药效测试
1.实验材料
受试化合物：ADC-01、ADC-02
实验细胞：NCI-HT29细胞，购自ATCC；
实验动物：Balb/c nu裸小鼠，雌性，5-6周龄，购自维通利华实验动物有限公司。
2.实验方案
2.1.细胞处理
NCI-HT29细胞用含10％FBS的1640培养基培养于15cm直径培养皿，达80-90％左右融合度时用胰蛋白酶-EDTA消化，用PBS洗两次，然后离心重悬于预冷PBS中，细胞计数仪计数，PBS稀释使细胞浓度为5×107/ml。
2.2.肿瘤细胞移植
Balb/c nu小鼠实验室环境适应2-5天，于右肋部皮下接种NCI-HT29细胞，接种细胞量为5×106/只，接种体积为0.2ml(含50％Matrigel)，待肿瘤生长至250mm3左右时，进行实验。
2.3.动物给药与检测
入组的荷瘤裸鼠，按以下方案给药：
给药周期结束后，继续观察1-2周。最后一次瘤体积测量后，分离肿瘤，准确称取肿瘤重量并拍照记录。
2.4.肿瘤体积及体重测定：
每周测量2次瘤体积及体重，计算TGI％。
肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2×L长×L短2。
3.实验结果
表1.NCI-HT29移植瘤模型数据(肿瘤体积mm3)
结论：如表1所示，本申请的ADC均显示了对肿瘤生长的抑制作用，特别是ADC-01和ADC-02具有很强的抑制肿瘤的效果。给药期间，各组动物无明显体重下降和明显的药物毒性。
本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。

Claims (16)

  1. 一种式I化合物或其盐的制备方法，其包括如下步骤：
    c)使式6化合物或其盐和式7化合物或其盐反应得到式8化合物或其盐，
    d)从式8化合物或其盐反应得到式9化合物或其盐，
    e)使式9化合物或其盐和式10化合物反应得到式I化合物或其盐，
    其中，
    R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
    R3选自羟基和卤素；
    PG1选自氨基保护基。
  2. 如权利要求1所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述R1、R2各自独立地选自甲基、乙基和丙基，优选R1、R2相同；优选地，所述R1、R2 均为丙基；
    (2)所述R3选自羟基、氟、氯、溴和碘；优选地，所述R3选自羟基和氯；
    (3)所述PG1选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；
    (4)在步骤c)中，式6化合物或其盐和式7化合物或其盐在缩合剂的作用下得到式8化合物或其盐；
    进一步地，所述缩合剂选自DMTMM、HATU、HBTU、HOBt/EDCI和T3P；优选DMTMM或HOBt/EDCI；
    进一步地，式6化合物或其盐与所述缩合剂的摩尔比选自1：0.7～1：5；优选1：0.7～1：2；
    (5)在步骤c)中，式6化合物或其盐与式7化合物或其盐的摩尔比选自1：0.7～1：3；优选1：0.7～1：2；
    (6)在步骤c)中，反应溶剂选自DMF、DMAc、NMP、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈和二氯甲烷的其中一种或其任意组合；优选DMF、二氯甲烷和四氢呋喃的其中一种或其任意组合；
    (7)在步骤c)中，式6化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；
    (8)在步骤c)中，反应温度选自-20～50℃；优选-5～25℃；
    (9)在步骤d)中，从式8化合物或其盐脱除氨基上的保护基PG1得到式9化合物或其盐；
    优选地，所述PG1为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式8化合物或其盐在碱性条件下脱除保护基PG1；
    进一步地，所述碱选自哌啶、二乙胺、吗啉、二异丙胺、DBU、三乙胺和N,N-二异丙基乙胺；例如二乙胺或N,N-二异丙基乙胺；优选哌啶、二乙胺或吗啉；
    进一步地，所选碱与所选反应溶剂的体积比选自1：5～1：50；
    进一步地，反应溶剂选自DMF、DMAc、二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、甲醇和乙醇中的其中一种或其任意组合；
    进一步地，式8化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；
    进一步地，反应温度选自-10～50℃；优选0～30℃；
    (10)在步骤e)中，当R3为羟基时，式9化合物或其盐和式10化合物在缩合剂的作用下得到式I化合物；
    进一步地，所述缩合剂选自DMTMM、HATU、HBTU、HOBt/EDCI和T3P；优选DMTMM或HOBt/EDCI；
    进一步地，式9化合物或其盐与所述缩合剂的摩尔比选自1：1～1：5；优选1：1～1：2；
    进一步地，式9化合物或其盐与式10化合物的摩尔比选自1：0.8～1：2.0；
    进一步地，反应溶剂选自DMF、四氢呋喃和二氯甲烷中的其中一种或其任意组合；
    进一步地，式9化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；
    进一步地，反应温度选自-20～50℃；优选0～30℃；
    (11)在步骤e)中，当R3选自卤素(例如氯、氟或溴)时，式9化合物或其盐和式10化合物在碱性条件下反应得到式I化合物或其盐；
    进一步地，所述碱选自三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、DBU、N-甲基哌啶和N-甲基吗啉；
    进一步地，式9化合物或其盐与反应所述的碱的摩尔比选自1：1～1：5；
    进一步地，式9化合物或其盐与式10化合物的摩尔比选自1：0.8～1：2.0；优选1：1～1：1.5；
    进一步地，反应溶剂选自DMF、四氢呋喃和二氯甲烷中的一种或任意组合；
    进一步地，式9化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；
    进一步地，反应温度选自-20～50℃；优选0～30℃。
  3. 如权利要求1所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：
    a)使式3化合物或其盐和式4化合物反应得到式5化合物或其盐，
    b)从式5化合物或其盐反应得到式6化合物或其盐，
    其中，PG2选自氨基保护基。
  4. 如权利要求3所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述PG2选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；
    (2)在步骤a)中，反应在酸性条件下进行；进一步地，所述酸选自氯化氢、氢溴酸、硫酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸、对甲苯磺酸吡啶嗡盐、醋酸锌、三氯化铝(AlCl3)、三氯化铁(FeCl3)和三氟化硼乙醚(BF3·Et2O)；例如氯化氢或三氟化硼乙醚；优选氯化氢、对甲苯磺酸或醋酸锌；进一步地，在步骤a)中，式3化合物或其盐与反应所选酸的摩尔比选自1：0.2～1：2；
    或者，在步骤a)中，反应在碱性条件下进行；进一步地，所述碱选自氢氧化钠、叔丁醇钾、碳酸 钾、三乙胺(Et3N)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)和吡啶；优选叔丁醇钾或氢氧化钠；进一步地，在步骤a)中，式3化合物或其盐与反应所选碱的摩尔比选自1：0.5～1：3；
    (3)在步骤a)中，式3化合物或其盐与式4化合物的摩尔比选自1：1～1：10；优选1：2～1：6；
    (4)在步骤a)中，反应溶剂选自非质子性溶剂；优选醚类、卤代烷烃类、酮类、腈类、酰胺类或砜类溶剂；更优选乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、乙二醇二乙醚、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或二甲亚砜；进一步优选异丙醚、四氢呋喃、1,4-二氧六环或N,N-二甲基甲酰胺；
    进一步地，在步骤a)中，式3化合物或其盐与所选溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；优选1：8～1：30；
    (5)在步骤a)中，反应温度选自-10～110℃；优选0～60℃；
    (6)在步骤b)中，从式5化合物或其盐脱除氨基上的保护基PG2得到式6化合物或其盐；
    优选地，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式5化合物或其盐在碱性条件下脱除保护基PG2；
    进一步地，所述碱选自哌啶、二乙胺、吗啉、二异丙胺、DBU、三乙胺和N,N-二异丙基乙胺；优选哌啶、二乙胺或吗啉；
    进一步地，式5化合物或其盐与所选碱的摩尔比选自1：0.2～1：40；优选1：1～1：10；
    (7)在步骤b)中，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应溶剂选自DMF、DMAc、二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、甲醇和乙醇中的其中一种或其任意组合；优选DMF和二氯甲烷的其中一种或其任意组合；
    (8)在步骤b)中，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式5化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；优选1：10～1：30；
    (9)在步骤b)中，所述PG2为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应温度选自0～50℃；优选10～30℃。
  5. 如权利要求3所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：
    h)使式1化合物或其盐和式2化合物反应得到式3化合物或其盐，
    其中,
    R4、R5各自独立地选自-OC1-4烷基、-SC1-4烷基和-NHC1-4烷基；
    或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成羰基；
    或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成其中X、Y各自独立地选自O、S、NH和 NC1-4烷基，n选自1、2和3。
  6. 如权利要求5所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述R4、R5各自独立地选自甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲硫基、乙硫基、丙硫基、甲胺基、乙胺基和丙胺基；或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成羰基；或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成其中X和Y各自独立地选自O、S、NH和NC1-4烷基，n选自1、2和3；
    进一步地，所述R4和R5和与其相连的碳原子一起形成羰基，或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成
    (2)在步骤h)中，反应在酸性条件下进行；
    进一步地，所述酸选自对甲苯磺酸一水合物、对甲苯磺酸吡啶盐、三氟乙酸和醋酸中的一种或其任意组合；优选对甲苯磺酸一水合物；
    进一步地，式2化合物与所选酸的摩尔比选自1：0.2～1：2；优选1：0.2～1：0.4；
    进一步地，式1化合物分批加入反应体系中；较佳的，以总添加量计，在酸性条件下，25～35mol％的式1化合物或其盐和式2化合物在100～120℃下反应，其余的式1化合物分2～5次加入至反应体系中；更佳的，以总添加量计，在酸性条件下，25～35mol％的式1化合物或其盐和式2化合物在100～120℃下反应20～40min，其余的式1化合物分2～5次加入至反应体系中，每次间隔20～40min，加毕继续反应30～90min；
    (3)在步骤h)中，反应溶剂选自四氢呋喃、1,4-二氧六环、甲苯、邻甲基苯酚、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮中其中一种或其任意组合；优选甲苯、邻甲基苯酚和N-甲基吡咯烷酮中其中一种或其任意组合；更优选N-甲基吡咯烷酮；
    (4)在步骤h)中，式2化合物和反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：1～1：60；
    (5)在步骤h)中，式1化合物或其盐和式2化合物的摩尔比选自3：1～1：1；优选2：1～1：1；
    (6)在步骤h)中，反应温度选自70～130℃；优选80～120℃；更优选为100～120℃。
  7. 如权利要求5所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下方法一或方法二，
    方法一包括如下步骤：
    步骤i-1)使式1-A1化合物和式1-A2化合物反应得到式1-A3化合物；
    步骤i-2)从式1-A3化合物反应得到式1化合物或其盐；
    方法二包括如下步骤：
    步骤j-1)使式1-B1化合物和式1-B2化合物反应得到式1-B3化合物；
    步骤j-2)从式1-B3化合物反应得到式1-B4化合物；
    步骤j-3)从式1-B4化合物反应得到式1-B5化合物或其盐；
    步骤j-4)从式1-B5化合物或其盐反应得到式1化合物或其盐；
    其中，X选自卤素。
  8. 如权利要求7所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述X选自氟、氯、溴和碘；优选为氯；
    (2)在步骤i-1)中，式1-A1化合物与式1-A2化合物在钯催化剂、铜催化剂和碱的作用下得到式1-A3化合物；
    进一步地，所述钯催化剂选自Pd(PPh3)4、Pd(OAc)2、Pd(PPh3)2Cl2和Pd2(dba)3，优选Pd(PPh3)2Cl2；进一步地，所述钯催化剂与式1-A1化合物的摩尔比选自0.01：1～0.2：1；优选0.01：1～0.10：1；更优选0.01：1～0.03：1；
    进一步地，所述铜催化剂选自CuI、CuBr和CuCl，优选CuI；进一步地，反应所述铜催化剂与式1-A1化合物的摩尔比选自0.01：1～0.2：1；优选0.02：1～0.10：1；更优选0.02：1～0.05：1；
    进一步地，所述碱选自三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、DBU、碳酸钾和碳酸铯；优选三乙胺或N,N-二异丙基乙胺；进一步地，反应所述碱与式1-A1化合物的摩尔比选自10：1～1：1；优选5：1～2：1；
    (3)在步骤i-1)中，式1-A1化合物与式1-A2化合物的摩尔比选自1：1～1：5；优选1：1～1：3；更优选1：1～1：2；
    (4)在步骤i-1)中，反应溶剂选自四氢呋喃、1,4-二氧六环、甲苯、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺和N,N-二甲基乙酰胺的其中一种或其任意组合；例如反应溶剂选自四氢呋喃、1,4-二氧六环、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺和N,N-二甲基乙酰胺的其中一种或其任意组合；又例如四氢呋喃、N-甲基吡咯烷酮或N,N-二甲基甲酰胺；优选四氢呋喃或1,4-二氧六环；
    (5)在步骤i-1)中，式1-A1化合物和反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20；优选1：10～1：20；
    (6)在步骤i-1)中，反应温度选自40～80℃；优选40～60℃；
    (7)在步骤i-2)中，式1-A3化合物在Sn和Na2S的作用下得到式1化合物或其盐；Na2S以Na2S·2H2O和/或Na2S·9H2O的形式加入体系中；
    进一步地，所述Sn与式1-A3化合物的摩尔比选自5：1～1：1；优选3：1～1：1；
    进一步地，所述Na2S与式1-A3化合物的摩尔比选自0.1：1～2：1；优选0.2：1～1：1；
    (8)在步骤i-2)中，反应溶剂选自四氢呋喃、丙酮、乙腈、1，4-二氧六环、甲醇、乙醇、丙醇和水中其中一种或其任意组合；优选四氢呋喃、乙醇和甲醇中其中一种或其任意组合；更优选乙醇与水的组合，其中，乙醇与水的体积比选自20：1～1：1，优选10：1～5：1；
    (9)在步骤i-2)中，反应温度选自40～100℃；例如50～80℃，优选60～90℃；
    (10)在步骤j-1)中，式1-B1化合物和式1-B2化合物发生格氏反应得到式1-B3化合物；
    (11)在步骤j-1)中，式1-B1化合物和式1-B2化合物的摩尔比选自1：0.8～1：2；优选1：1～1：1.5；
    (12)在步骤j-1)中，反应溶剂选自四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、异丙醚和乙醚中的其中一种或其任意组合；优选四氢呋喃或异丙醚；
    (13)在步骤j-1)中，反应温度选自-20～60℃；优选-20～50℃；更优选0～30℃；
    (14)在步骤j-2)中，式1-B3化合物通过硝化反应得到式1-B4化合物；
    进一步地，反应硝化体系选自浓硝酸、浓硝酸/醋酸，浓硫酸/硝酸钾；
    进一步地，式1-B3化合物和硝化体系的质量体积比(g/mL)选自1：4～1：20；优选1：6～1：15；
    (15)在步骤j-2)中，反应温度选自-20～30℃；优选-20～0℃；
    (16)在步骤j-3)中，在还原剂的作用下还原式1-B4化合物的硝基为氨基得到式1-B5化合物或其盐；
    进一步地，还原剂选自氢气、TiCl3、SnCl2、连二亚硫酸钠、锌粉和铁粉；优选氢气、SnCl2或连二亚硫酸钠；
    进一步地，反应在氢气氛围下，需加入过渡金属催化剂，所述过渡金属催化剂优选选自二氧化铂、钯碳、铑碳和兰尼镍；进一步地，反应在氢气-二氧化铂体系下进行时，式1-B4化合物与二氧化铂的质量比选自1：0.01～1：0.4；优选1：0.01～1：0.1；反应在氢气-二氧化铂体系下进行时，氢气压力选自1～10个大气压，优选1～5个大气压；反应温度选自-10～100℃；优选-10～80℃；反应溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃和1，4-二氧六环中的其中一种或其任意组合；优选乙酸乙酯或四氢呋喃；
    (17)在步骤j-4)中，反应在碱性条件下进行；进一步地，所述碱选自碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸铯和碳酸钠，例如所述碱选自碳酸钾，氢氧化钠、碳酸铯和碳酸钠；又例如碳酸钾或氢氧化钾；优选碳酸钾或碳酸钠；进一步地，式1-B5化合物和所述碱的摩尔比选自1：1～1：5；优选1：1～1：3；
    (18)在步骤j-4)中，反应溶剂选自水、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、六甲基膦酰三胺、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜的其中一种或任意组合；优选水、乙腈、四氢呋喃、二甲基亚砜和六甲基膦酰三胺的其中一种或任意组合；进一步地，在步骤j-4)中，反应溶剂选自乙腈和水的组合，其中，乙腈与水的体积比选自1：5～10：1；优选1：2～5：1；
    (19)在步骤j-4)中，式1-B5化合物或其盐与反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20； 优选1：5～1：10；
    (20)在步骤j-4)中，反应温度选自20～100℃；优选40～80℃。
  9. 如权利要求1所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下方法一或方法二：
    方法一包括如下步骤：
    f-1)式7-A1化合物和式7-A2化合物或其盐反应得到式7-A3化合物，
    f-2)从式7-A3化合物反应得到式7-A4化合物或其盐，
    f-3)从式7-A4化合物或其盐反应得到式7化合物或其盐，
    其中，
    R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
    PG1、PG3各自独立地选自氨基保护基，且PG1和PG3不同；
    方法二包括如下步骤：
    g-1)从式7-B1化合物或其盐反应得到式7-B2化合物或其盐，
    g-2)从式7-B2化合物或其盐得到式7-B3化合物或其盐，
    g-3)使式7-B3化合物或其盐和式7-A1化合物反应得到式7化合物或其盐，
    其中，
    R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
    PG1、PG4各自独立地选自氨基保护基。
  10. 如权利要求9所述式I化合物或其盐的制备方法，其特征在于，满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述R1、R2选自甲基、乙基和丙基，优选R1、R2相同；优选地，所述R1、R2均为丙基；
    (2)所述PG1选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；
    (3)所述PG3选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc)，甲氧羰基或乙氧羰基；更优选叔丁氧羰基(Boc)；
    (4)所述PG4选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；
    (5)在步骤f-1)中，反应在碱性条件下进行，进一步地，所选碱选自碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯和碳酸氢钾；例如碳酸氢钠或碳酸钠；优选碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸钾；
    (6)在步骤f-1)中，反应溶剂选自四氢呋喃、丙酮、乙腈、1，4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜和水中的其中一种或其任意组合；优选四氢呋喃、丙酮、乙腈和水中的其中一种或其任意组合；
    (7)在步骤f-1)中，式7-A1化合物或其盐与反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20；
    (8)在步骤f-1)中，式7-A1化合物与式7-A2化合物或其盐的摩尔比选自1：1～1：3；
    (9)在步骤f-1)中，反应温度选自0～50℃；优选0～30℃；
    (10)在步骤f-2)中，从式7-A3化合物脱除氨基上的保护基PG3得到式7-A4化合物；
    优选地，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，式7-A3化合物在酸性条件下脱除保护基PG3；
    进一步地，所述酸选自三氟乙酸、氯化氢、氢溴酸和硫酸；优选氯化氢或三氟乙酸；
    进一步地，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，式7-A3化合物与所选酸的摩尔比选自1：5～1：50；优选1：10～1：30；
    (11)在步骤f-2)中，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，反应溶剂选自四氢呋喃、1，4-二氧六环、乙酸乙酯和甲基叔丁基醚的其中一种或其任意组合；优选四氢呋喃或1，4-二氧六环；
    (12)在步骤f-2)中，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，式7-A3化合物与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：4～1：20；优选1：5～1：15；
    (13)在步骤f-2)中，所述PG3为叔丁氧羰基(Boc)时，反应温度选自0～50℃；优选0～30℃；
    (14)在步骤f-3)中，式7-A4化合物或其盐在还原剂和酸的作用下与醛发生还原胺化反应得到式7化合物或其盐；
    进一步地，所述还原剂选自硼氢化钠，氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠和Pd/C-H2；优选氰基硼氢化钠和或三乙酰氧基硼氢化钠；
    进一步地，式7-A4化合物或其盐与所选还原剂的摩尔比选自1：2～1：10；优选1：3～1：8；进一步地，加入所述还原剂的温度选自-20～30℃；优选0℃；
    进一步地，所述酸选自醋酸、甲酸、丙酸、三氟乙酸和盐酸；优选醋酸或丙酸；
    进一步地，式7-A4化合物或其盐与醛的摩尔比选自1：2～1：10；优选1：4～1：8；
    (15)在步骤f-3)中，反应溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、四氢呋喃、1，4-二氧六环和乙酸乙酯的其中一种或其任意组合；优选甲醇或乙醇；
    (16)在步骤f-3)中，式7-A4化合物或其盐与反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20；优选1：6～1：15；
    (17)在步骤f-3)中，反应温度选自-20～50℃，优选0～30℃；
    (18)在步骤g-1)中，从式7-B1化合物或其盐在还原剂和酸的作用下与醛发生还原胺化反应得到式7-B2化合物或其盐；
    进一步地，所述还原剂选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠和Pd/C-H2；优选氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠；
    进一步地，式7-B1化合物或其盐与所选还原剂的摩尔比选自1：2～1：10；
    进一步地，加入所述还原剂的温度选自-20～30℃；
    进一步地，所述酸选自醋酸、甲酸、丙酸、三氟乙酸和盐酸；优选醋酸或丙酸；
    进一步地，式7-B1化合物或其盐与醛的摩尔比选自1：2～1：10；
    (19)在步骤g-1)中，反应溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、四氢呋喃、1，4-二氧六环和乙酸乙酯的其中一种或其任意组合；优选甲醇或乙醇；
    (20)在步骤g-1)中，式7-B1化合物或其盐与反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：20；
    (21)在步骤g-1)中，反应温度选自-20～50℃，优选0～30℃；
    (22)在步骤g-2)中，从式7-B2化合物或其盐脱除氨基上的保护基PG4得到式7-B3化合物或其盐；
    优选地，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式7-B2化合物或其盐在碱性条件下脱除保护基PG4；
    进一步地，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，所述碱选自哌啶、二乙胺、吗啉、二异丙胺、DBU、三乙胺和N,N-二异丙基乙胺；优选哌啶、二乙胺或吗啉；
    进一步地，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，所选碱与反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：5～1：50；
    进一步地，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应溶剂选自DMF、DMAc、二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、甲醇和乙醇中的其中一种或其任意组合；优选DMF、四氢呋喃和二氯甲烷的其中一种或其任意组合；
    进一步地，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，式7-B2化合物或其盐与所选反应溶剂的质量体积比(g/mL)选自1：2～1：20；
    进一步地，所述PG4为9-芴基甲氧羰基(Fmoc)时，反应温度选自0～50℃；优选0～30℃；
    (23)在步骤g-3)中，反应在碱性条件下进行；
    进一步地，所述碱选自碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯和碳酸氢钾；优选碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸钾；
    (24)在步骤g-3)中，反应溶剂选自四氢呋喃、丙酮、乙腈、1，4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜和水中其中一种或其任意组合；优选水、四氢呋喃、丙酮和乙腈中其中一种或其任意组合；更优选丙酮与水的组合；进一步地，反应溶剂选自丙酮和水的组合，其中，丙酮与水的体积比选自1：0.2～1：10；
    (25)在步骤g-3)中，式7-B3化合物或其盐与7-A1化合物的摩尔比选自1：1～1：5；
    (26)在步骤g-3)中，反应温度选自0～50℃。
  11. 一种式3化合物或其盐的制备方法，其包括如下步骤：
    h)使式1化合物或其盐和式2化合物反应得到式3化合物或其盐，
    其中，
    R4、R5各自独立地选自-OC1-4烷基、-SC1-4烷基和-NHC1-4烷基；
    或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成羰基；
    或，R4和R5和与其相连的碳原子一起形成其中X、Y各自独立地选自O、S、NH和NC1-4烷基，n选自1、2和3；
    进一步地，R4和R5的定义独立地如权利要求6所述，
    进一步地，步骤h)的操作和条件独立地如权利要求6所述。
  12. 一种式1化合物的制备方法，其为下列方法一或方法二，
    方法一包括如下步骤：
    步骤i-1)使式1-A1化合物和式1-A2化合物反应得到式1-A3化合物；
    步骤i-2)从式1-A3化合物反应得到式1化合物或其盐；
    方法二包括如下步骤：
    步骤j-1)使式1-B1化合物和式1-B2化合物反应得到式1-B3化合物；
    步骤j-2)从式1-B3化合物反应得到式1-B4化合物；
    步骤j-3)从式1-B4化合物反应得到式1-B5化合物或其盐；
    步骤j-4)从式1-B5化合物或其盐反应得到式1化合物或其盐；
    其中，X选自卤素；
    进一步地，X的定义独立地如权利要求8所述；
    进一步地，步骤i-1)、步骤i-2)、步骤j-1)、步骤j-2)、步骤j-3)和步骤j-4)的操作和条件独立地如权利要求8所述。
  13. 一种式7化合物或其盐的制备方法，其为下列方法一或方法二，
    方法一包括如下步骤：
    f-1)式7-A1化合物和式7-A2化合物或其盐反应得到式7-A3化合物，
    f-2)从式7-A3化合物反应得到式7-A4化合物或其盐，
    f-3)从式7-A4化合物或其盐反应得到式7化合物或其盐，
    其中，
    R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
    PG1、PG3各自独立地选自氨基保护基，且PG1和PG3不同；
    方法二包括如下步骤：
    g-1)从式7-B1化合物或其盐反应得到式7-B2化合物或其盐，
    g-2)从式7-B2化合物或其盐得到式7-B3化合物或其盐，
    g-3)使式7-B3化合物或其盐和式7-A1化合物反应得到式7化合物或其盐，
    其中，
    R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
    PG1、PG4各自独立地选自氨基保护基；
    进一步地，R1、R2、PG1、PG3和PG4的定义独立地如权利要求10所述；
    进一步地，步骤f-1)、步骤f-2)、步骤f-3)、步骤g-1)、步骤g-2)和步骤g-3)的操作和条件独立地如权利要求10所述。
  14. 如下所示化合物或其盐，
    其中，
    R1、R2各自独立地选自C1-4烷基；
    X选自卤素；
    PG1选自氨基保护基；
    式7化合物不为
  15. 如权利要求14所述的如下所示化合物或其盐，其特征在于，满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述R1、R2各自独立地选自甲基、乙基和丙基，优选R1、R2相同；优选地，所述R1、R2均为丙基；
    (2)所述X选自氟、氯、溴或碘；优选地，所述X为氯；
    (3)所述PG1选自烷氧羰基类保护基；优选苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙氧羰基(Alloc)，三甲基硅乙氧羰基(Teoc),甲氧羰基或乙氧羰基；更优选9-芴基甲氧羰基(Fmoc)。
  16. 如权利要求15所述的如下所示化合物或其盐，其特征在于，所述化合物选自：
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