CN118415908A - 一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用 - Google Patents

Abstract

本申请涉及蛋白质工程的技术领域，具体公开了一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用。该重组短肽包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本申请从海水中分离的微生物中提取到的氨基酸序列，并通过巴斯德毕赤酵母菌发酵培养获得重组短肽，进一步证明该重组短肽确实是具有抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化功效，可清除人体中的有害自由基。

Description

一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用

技术领域

本申请涉及蛋白质工程的技术领域，更具体地说，涉及一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用。

背景技术

随着社会的发展和生活水平的提高，人们越来越注重个人形象和皮肤健康。皮肤作为人体最大的器官，不仅起到保护内部组织免受外界环境伤害的作用，也是美丽与健康的外在表现。然而，由于年龄增长、紫外线照射、环境污染以及其他多种因素的影响，皮肤会出现皱纹、色斑、暗沉以及氧化损伤等问题。因此，开发安全有效的护肤成分，用于抗皱、美白、提亮肤色及抗氧化，一直是化妆品和皮肤护理研究领域的重点。

目前，市场上存在多种抗皱和美白产品，它们通常含有各种天然提取物、维生素、抗氧化剂等活性成分。然而，这些成分往往存在稳定性差、透皮吸收效率低、效果有限或者副作用等问题。鉴于此，科学家们一直在寻找更为高效、安全且具有良好稳定性的新型活性成分。

重组短肽作为一种生物工程技术产物，因其分子量小、易于透皮吸收、活性高及安全性好等特点，近年来在皮肤护理领域显示出巨大的潜力。通过基因工程技术，可以设计和合成具有特定氨基酸序列的短肽，这些短肽能够针对性地影响皮肤细胞的生理过程，从而达到改善皮肤问题的目的。

发明内容

本申请提供一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用。

第一方面，本申请提供一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用，采用如下的技术方案：

一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用，所述重组短肽包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

可选地，所述重组短肽浓度为50％时，DPPH自由基清除率达到20％。

可选地，所述重组短肽浓度为0.2％时，所述美白、提亮肤色、抗氧化功效达到50％。

第二方面，本申请提供一种重组短肽在制备用于抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化的制品中的应用，采用如下技术方案：

一种重组短肽在制备用于抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化的制品中的应用，所述重组短肽包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

第三方面，本申请提供一种组合物。该组合物包括上述重组短肽。

第四方面，本申请提供一种基因序列。该组合物包括上述重组短肽。

第五方面，本申请提供一种重组载体。该组合物包括上述基因序列。

第六方面，本申请提供一种重组细胞。该组合物包括上述基因序列。

综上所述，本申请具有以下有益效果：

本申请提供的重组短肽就有明显的抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化功效，并且可实现自身辅酶NADH的再生，还可以作为营养物质被人体吸收利用，提高机体免疫力和抵抗力，对于抗衰老和细胞修复具有有重要的意义。但相同条件下，祛斑功效不明显。

附图说明

图1为本申请的重组短肽的抗皱功效检测结果(待测样品中重组短肽浓度为50％)。

图2为本申请的重组短肽的美白、提亮肤色、抗氧化功效检测结果(A.正常对照组；B.重组短肽浓度0.05％；C.重组短肽浓度0.2％)。

图3为本申请的重组短肽的祛斑功效检测结果(A.正常对照组；B.重组短肽浓度0.05％；C.重组短肽浓度0.2％)。

具体实施方式

在详细描述本申请的实施方案之前，应当理解，本文所用术语仅用于描述特定实施方案的目的。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语与该术语所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。

本申请提供的一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用，该重组短肽包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。当重组短肽浓度为50％时，DPPH自由基清除率达到20％。当重组短肽浓度为0.2％时，所述美白、提亮肤色、抗氧化功效达到50％。

本申请还提供了一种重组短肽在制备用于抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化的制品中的应用。该重组短肽包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。具体地，该制品可以是包括重组短肽的组合物。

本申请还提供了用于合成上述重组短肽的基因序列，以及包括该基因序列的重组载体和重组细胞。

为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本申请的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

以下结合实施例以及检测结果对本申请作进一步详细说明。

实施例

实施例1

本实施例提供了一种重组短肽。

该重组短肽的制备过程具体如下：

(1)菌株分离及检测

以珊瑚共生的菌株中获得的红色菌株为样本，经过电子显微镜观察鉴定为海洋红酵母菌。通过NCBI数据库比对，找到了对应海洋红酵母菌的基因信息，发现其中包括SOD基因，于是我们利用SOD的基因设计引物，通过PCR扩增的方法从该红酵母菌中扩增了一段序列，经过基因测序得到了新的基因片段命名为TXOD，最后通过基因重组的方式将重新获得的TXOD。具体的基因重组方法同相关技术中常用的方法，获得表达后的菌株，保存备用。

利用ROS试剂盒(细胞活性氧检测试剂盒)对得到的TXOD进行测试，测试方法参考试剂盒的说明书。根据测试结果从具有不同引物设计出的TXOD中筛选出一种具有抗氧化活性的基因片段，命名为TXOD-1。该基因序列包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

(2)重组短肽的制备

将上述基因序列连接至重组表达载体(载体pPIC9K)中，再将重组表达载体导入(可以通过电穿孔法、化学方法(如LiCl法)或使用酵母转化试剂盒完成)巴斯德毕赤酵母菌中，筛选阳性克隆菌株并将筛选获得的阳性克隆菌株进行小量表达测试，以评估目标蛋白的表达水平和活性。将表现良好的阳性克隆菌株扩大培养。对培养获得的目标蛋白进行提取和纯化，并送至第三方检测结构进行检测，获得包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，即为重组短肽。

实施例2

本实施例对实施例1提供的重组短肽进行了抗皱功效检测。

具体分析如下：

1.实验原理和依据

根据自由基学说理论，自由基过量产生是导致皮肤自然衰老和光老化，从而产生皱纹的主要原因。因此，是否具有清除自由基的能力是评价延缓衰老、抗皱的化妆品(原料)的重要指标之一。

本试验按照实验室方法(自由基清除法)：QTTZ-XZ-37《化妆品抗皱功效验证检测细则》，试验样品与阴性对照进行DPPH自由基清除率试验结果比对，如试验样品的清除率高于阴性对照的清除率且具有显著性差异(P＜0.05)，则可认为试验样品具有一定的抗皱功效。

2.材料和方法

(1)仪器设备

千分之一电子天平：上海浦春计量仪器有限公司，JA2003。

万分之一电子天平：上海浦春计量仪器有限公司，FA2004。

酶标仪：赛默飞世尔(上海)仪器有限公司，Multiskan FC。

(2)试剂

DPPH：麦克林，C12998355。

抗坏血酸：天津市大茂化学试剂厂，20210715。

无水乙醇：天津市大茂化学试剂厂，20211004。

(3)实验步骤

对样品(重组短肽)进行预处理：将2mL不同浓度的待测样品加入2mL的DPPH工作液中，混合均匀后于室温下避光反应30min，待测样品中重组短肽浓度为5％、10％、30％、50％和100％；

工作液制备：使用2mL 0.2mM DPPH溶液作为工作液，工作液通过将DPPH溶解在95％乙醇中制备而成，待用；

待测样品与DPPH试剂反应，反应后于517nm处测定OD值。

3.检测指标

清除率(％)＝(A2+A3-A1)/A2×100。

其中，A1为样液有DPPH反应体系OD值；A2为无水乙醇有DPPH反应体系OD值；A3为样液无DPPH(无水乙醇替代)反应体系OD值。

本试验结果表征为样品对自由基的清除率，如果试验样品与阴性对照相比有更高的清除率，且试验样品与阴性对照相比具有显著性差异，说明试验产品具有抗皱功效，并且确保试验体系的准确性，应确保阳性对照组的平均清除率大于25％。显著性差异经SPSS软件统计分析，当显著性因子P＜0.05认为具有显著差异。

4.检测结果如表1和图1所示。

表1清除率测定结果

图1为待测样品中重组短肽浓度为50％时与阴性对照、阳性对照的对比结果。

由表1和图1可知，按照实验室方法(自由基清除法)：QTTZ-XZ-37《化妆品抗皱功效验证检测细则》的测试方法，对样品的抗皱功效进行实验室方法(自由基清除法)测试。测试结果表明：在实验室条件下，当待测样品中重组短肽浓度在5-100％范围内时，DPPH自由基清除率均大于11.83±0.70％，与阴性对照相比具有显著性差异(P＜0.05)；尤其是，当待测样品中重组短肽浓度为50％时，DPPH自由基清除率平均值为19.52±1.40％，与阴性对照相比具有显著性差异(P＜0.05)，且阳性对照DPPH自由基清除率＞25％，反应体系有效，说明样品具有抗皱功效。

实施例3

本实施例对实施例1提供的重组短肽进行了美白、提亮肤色、抗氧化功效检测。

具体分析如下：

1.方法名称：斑马鱼美白功效试验方法。

2.方法来源：《斑马鱼美白功效评价实验标准操作规程》。

3.原理方法：斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至24h时黑色素开始从视网膜上皮生长。色素细胞起源于背部外胚层分化的一群细胞——神经嵴细胞，然后增殖、迁徙、分化成色素母细胞。在黑色素形成的过程中进行干预，可抑制黑色素的形成。通过斑马鱼皮肤白度评价样品是否具有美白功效。

4.体积及样本量：用鱼品系——野生型AB品系斑马鱼；斑马鱼鱼龄——受精后6小时(6hpf)；每组实验样本量——15尾(N＝10)：成鱼饲养及繁殖方法：按照实验室标准饲养和繁殖方法，符合国际AAALAC认证(认证编号：001458)的要求。

5.实验步骤

(1)随机选取斑马鱼于6孔板中，每孔15尾。

(2)水溶给予样品，同时设置正常对照组，每孔容量为3mL。

(3)28℃条件下避光孵育45h。

(4)每个实验组随机选取10尾斑马鱼置于解剖显微镜下拍照，用高级图像处理软件分析并采集数据，分析斑马鱼头部黑色素信号强度(S)，根据公式计算样品的美白功效，判断其是否具有美白功效。

美白功效(％)＝(S(正常对照组)-S(样品组))/S(正常对照组)×100。

(6)判定依据：统计学分析p＜0.05，功效值≥20％，判定为有效。

6.检测结果如表2和图2所示。

表2美白、提亮肤色、抗氧化功效测定结果

序号	检测浓度(％)	美白、提亮肤色、抗氧化功效(％)	P值	检测结果
					1	0.05	28	＞0.05	不明显
2	0.2	50	＜0.001	有效

由表2和图2可知，本申请提供的重组短肽的头部黑色素信号强度与正常对照组相比，明显减少，揭示了该重组短肽具有美白、提亮肤色、抗氧化功效。尤其是当本申请提供的重组短肽浓度为0.2％时，具有明显的美白、提亮肤色、抗氧化功效。

实施例4

本实施例对实施例1提供的重组短肽进行了祛斑功效检测。

具体分析如下：

1.方法名称：斑马鱼祛斑功效试验方法。

2.方法来源：《斑马鱼祛斑功效评价实验标准操作规程》。

3.原理方法：色斑的形成与皮肤中黑色素的沉着有关，祛斑功效实质上是对黑色素的清除作用。斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至24h时黑色素开始从视网膜上皮生长，48h逐渐形成稳定并可见的黑色素色斑。通过黑色素的降低程度来评价样品是否具有祛斑功效。

4.体积及样本量：用鱼品系——野生型AB品系斑马鱼；斑马鱼鱼龄——受精后2天(2dpf)；每组实验样本量——15尾(N＝10)：成鱼饲养及繁殖方法：按照实验室标准饲养和繁殖方法，符合国际AAALAC认证(认证编号：001458)的要求。

5.实验步骤

(1)随机选取斑马鱼于6孔板中，每孔15尾。

(2)水溶给予样品，同时设置正常对照组，每孔容量为3mL。

(3)28℃条件下避光孵育24h。

(4)每个实验组随机选取10尾斑马鱼置于解剖显微镜下拍照，用高级图像处理软件分析并采集数据，分析斑马鱼头部黑色素信号强度(S)，根据公式计算样品的祛斑功效，判断其是否具有祛斑功效。

祛斑功效(％)＝(S(正常对照组)-S(样品组))/S(正常对照组)×100。

(6)判定依据：统计学分析p＜0.05，功效值≥20％，判定为有效。

6.检测结果如表3和图3所示。

表3祛斑功效测定结果

序号	检测浓度(％)	美白功效(％)	P值	检测结果
					1	0.05	6	＞0.05	不明显
2	0.2	12	＞0.05	不明显

由表3和图3可知，本申请提供的重组短肽的头部黑色素信号强度与正常对照组相似，揭示了该重组短肽祛斑功效不明显。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1. 一种重组短肽在抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化方面的应用，其特征在于，所述重组短肽包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组短肽浓度为50%时，DPPH自由基清除率达到20%。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组短肽浓度为0.2%时，所述美白、提亮肤色、抗氧化功效达到50%。

4. 一种重组短肽在制备用于抗皱、美白、提亮肤色、抗氧化的制品中的应用，其特征在于，所述重组短肽包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

5.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的重组短肽。

6.一种基因序列，其特征在于，所述基因序列用于合成权利要求1所述的重组短肽。

7.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括权利要求6所述的基因序列。

8.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞包括权利要求6所述的基因序列。