CN118304226A - 一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物及其制备方法和应用，屏障修护组合物，按重量份数计算，包括以下组分：具距石枝藻提取物0.1‑3份，金花茶提取物0.1‑3份，交替单胞菌发酵产物提取物0.01‑3份，疗伤绒毛花花提取物0.01‑3份，植醇0.01‑5份。本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物同时促进了桥粒胶蛋白1、桥粒芯蛋白1、闭锁蛋白1和人过氧化物酶体增殖物激活受体α的基因表达，提高了皮肤中桥粒胶蛋白1、桥粒芯蛋白1、闭锁蛋白1和人过氧化物酶体增殖物激活受体α的含量，进而增强了角质细胞之间的紧密连接和锚定连接，实现了有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的目的。
Description
技术领域
本发明涉及日化领域，更具体地，涉及一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物及其制备方法和应用。
背景技术
人体皮肤分为表皮和真皮，其中，表皮是人体皮肤的浅层结构，是一种可自我更新的分层上皮，由复层扁平上皮构成，从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。表皮直接同外界环境接触，可抵御机械、化学和微生物的侵袭，并通过防止水分从真皮层流失而起到渗透屏障的作用。而角质层是表皮的一种选择性渗透性、异质性、复合的最外层，可将外界环境与人体内部环境隔离开，并为皮肤内部保留足够的水分和养分，是皮肤重要的防御屏障。
皮肤屏障损伤常常是指皮肤受到外界刺激后，破坏了角质层，影响了皮肤的屏障功能。在角质层中，角质细胞彼此之间的重要连接方式包括紧密连接和锚定连接，紧密连接将相邻的角质细胞牢牢固定在一起，而锚定连接通过细胞骨架把全体角质细胞连接在一起，形成了紧密、强韧的防御层；换言之，通过加强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接可提高角质层的抵抗、修复、防御能力，从而达到预防和/或修复皮肤屏障损伤的目的。
目前的修护皮肤屏障损伤的技术大多集中在补充脂质、天然保湿因子，或者按照天然皮肤屏障的脂质的组成，利用相似的成分构建仿生皮脂膜；而这些技术并没有关注皮肤自身角质层的紧密程度，没有改善角质层细胞之间的排列和连接，特别是角质细胞之间的紧密连接和锚定连接，无法形成紧密、强韧角质层，所以并不能构建有效抵御外界刺激的防御屏障，无法有效预防和/或修复皮肤屏障损伤，同时也不能为皮肤内部保留足够的水分和养分。
因此，开发一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物通过增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接来有效预防和/或修复皮肤屏障损伤是具有重要意义的。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术无法通过增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接来有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的不足，而提供一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
第一方面，本发明提供了一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物，按重量份数计算，包括以下组分：
具距石枝藻提取物0.1-3份，金花茶提取物0.1-3份，交替单胞菌发酵产物提取物0.01-3份，疗伤绒毛花花提取物0.01-3份，植醇0.01-5份。
本发明发现，通过提高皮肤中与角质细胞之间的紧密连接和锚定连接相关的蛋白[桥粒胶蛋白1(Desmocollin-1，Dsc 1)、桥粒芯蛋白1(Desmoglein-1，Dsg 1)、闭锁蛋白1(Claudin-1，Cldn-1)]的含量和与角质细胞修复、脂质成分产生相关的人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的含量，可增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接达到有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的目的。
本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物，通过调控具距石枝藻提取物、金花茶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物、疗伤绒毛花花提取物和植醇的配比，同时促进了桥粒胶蛋白1(Desmocollin-1，Dsc 1)、桥粒芯蛋白1(Desmoglein-1，Dsg 1)、闭锁蛋白1(Claudin-1，Cldn-1)和人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的基因表达，提高了皮肤中桥粒胶蛋白1、桥粒芯蛋白1、闭锁蛋白1和人过氧化物酶体增殖物激活受体α的含量，进而增强了角质细胞之间的紧密连接和锚定连接，实现了有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的目的。
在本发明中，具距石枝藻提取物不仅可以促进细胞紧密连接和锚定连接相关的蛋白表达，增强细胞间的连接，在细胞间形成一层不透水的屏障，防止物质通过间隙进出，保障细胞屏障的完整性；还可以促进内源脂质神经酰胺的合成，在修护屏障方面具有出色的效果。
植醇是叶绿素的二萜成分，已被证实可以通过具有抗炎、抗氧化的功效，在生物体内可以由植醇转化为植醛最后转化为植酸，该途径与视黄醇的转化途径类似，且植醇可以激活视黄醇受体RAR和类视黄醇受体RXR，因此具备与视黄醇类似的抗衰功效。更为特殊的是，在本发明中，植醇可以激活与皮肤屏障内源修护息息相关的人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的基因表达，可以促进机体内源的屏障脂质成分的合成。
交替单胞菌发酵产物提取物是从深海庞贝蠕虫共生菌中提取得到的一种生物活性化合物，它可以分散在皮肤表面的角质层上，有效地防止皮肤干燥，具有良好的保湿特性。这种成分可以通过促进胶原蛋白的合成，增加皮肤的弹性，并能刺激皮肤中胶原纤维母细胞的生长，从而加速伤口愈合的过程。
疗伤绒毛花花提取物含有花青素、类胡萝卜素、酚酸、单宁类化合物、黄酮类化合物、皂苷类化合物，三萜类化合物，相对于叶提取物有更好的抗氧化和抗菌活性，可以舒缓肌肤炎症，保湿滋润皮肤，抗氧化，促进胶原蛋白合成，促进愈合伤口等。
金花茶花提取物含有茶多酚、茶多糖、叶酸、脂肪酸、蛋白质、茶色素以及茶氨酸等多种氨基酸，可以有效地促进肌肤吸水保湿，缓解肌肤干燥和紧绷等问题。同时，它还具有中和自由基、减少氧化损伤的能力，对皮肤有很好的抗氧化作用。此外，它还能加速肌肤细胞的再生修复能力，修护肌肤受损处，从而促进肌肤的健康成长。
在本发明中，所述金花茶提取物是从金花茶全株或部分中提取的物质，比如可以是从金花茶花和/或叶中提取的物质。
具体地，按照重量份数计算，所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物包括以下组分：
具距石枝藻提取物0.5-1份，金花茶提取物0.5-1份，交替单胞菌发酵产物提取物0.1-0.5份，疗伤绒毛花花提取物0.5-1份，植醇0.5-1份。
具体地，按照重量份数计算，所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物包括以下组分：
具距石枝藻提取物1-3份，金花茶提取物0.5-3份，交替单胞菌发酵产物提取物0.5-3份，疗伤绒毛花花提取物1-3份，植醇1-5份。
具体地，所述金花茶提取物的重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物、疗伤绒毛花花提取物和植醇的总重量的比例为：金花茶提取物：(具距石枝藻提取物+交替单胞菌发酵产物提取物+疗伤绒毛花花提取物+植醇)＝(0.1-3):3.5。
本发明在多次实验中发现，金花茶提取物的重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物、疗伤绒毛花花提取物和植醇的总重量的比例会影响屏障修护组合物通过增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接来有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的能力，当该比例在(0.1-3):3.5范围内时，含有金花茶提取物的屏障修护组合物能够更好地促进细胞的迁移和增殖，也能够更好地增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接，从而更好地有效预防和/或修复皮肤屏障损伤。
进一步地，所述金花茶提取物的重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物、疗伤绒毛花花提取物和植醇的总重量的比例为：金花茶提取物：(具距石枝藻提取物+交替单胞菌发酵产物提取物+疗伤绒毛花花提取物+植醇)＝(0.5-1):3.5。
具体地，所述金花茶提取物和植醇的总重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和疗伤绒毛花花提取物的总重量的比例为：(金花茶提取物+植醇)：(具距石枝藻提取物+交替单胞菌发酵产物提取物+疗伤绒毛花花提取物)＝(1-4.5):2.5。
本发明在多次实验中发现，金花茶提取物和植醇的总重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和疗伤绒毛花花提取物的总重量的比例也会在一定程度上影响屏障修护组合物通过增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接来有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的能力；当该比例在(1-4.5):2.5范围内时，含有金花茶提取物的屏障修护组合物能够更好地增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接，同时也能够更好地强韧皮肤屏障、增强皮肤抵御外界刺激的能力，从而更好地有效预防和/或修复皮肤屏障损伤。
进一步地，所述金花茶提取物和植醇的总重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和疗伤绒毛花花提取物的总重量的比例为：(金花茶提取物+植醇)：(具距石枝藻提取物+交替单胞菌发酵产物提取物+疗伤绒毛花花提取物)＝(1.5-2):2.5。
具体地，所述金花茶提取物与植醇的重量比为(0.1-1.5):(0.5-1.9)。
本发明在多次实验中发现，金花茶提取物与植醇的重量比在(0.1-1.5):(0.5-1.9)范围内时，能够更加有效地促进细胞的迁移和增殖，更好地增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接、强韧皮肤屏障、增强皮肤抵御外界刺激的能力，从而更好地有效预防和/或修复皮肤屏障损伤。
进一步地，所述金花茶提取物与植醇的重量比为(0.5-1.5):(0.5-1.5)。
在本发明中，具距石枝藻提取物、金花茶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和疗伤绒毛花花提取物均可为水提取物和/或醇提取物，均可根据本领域公知的方法进行制备，抑或通过商业渠道获得。
本发明在此提供一种金花茶提取物的制备方法，包括如下步骤：用乙醇回流提取金花茶的花朵，即得金花茶提取物。
具体地，所述金花茶的花朵与乙醇的固液比为1g:(5-20)mL。
具体地，所述乙醇的体积分数为50％-80％。
具体地，所述回流的温度为60-80℃，时间为1-2h。
具体地，所述金花茶提取物的制备方法，包括如下步骤：清洗金花茶的花朵，烘干，研磨，加入乙醇，回流提取，即得金花茶提取物。
本发明在此提供一种疗伤绒毛花花提取物的制备方法，包括如下步骤：用乙醇超声提取疗伤绒毛花的花朵，即得疗伤绒毛花花提取物。
具体地，所述疗伤绒毛花的花朵与乙醇的固液比为1g:(5-20)mL。
具体地，所述乙醇的体积分数为50％-70％。
具体地，所述超声的温度为50-60℃，时间为30-50min。
具体地，所述疗伤绒毛花花提取物的制备方法，包括如下步骤：清洗疗伤绒毛花的花朵，烘干，研磨，加入乙醇，超声提取，即得疗伤绒毛花花提取物。
第二方面，本发明提供了一种含有金花茶提取物的屏障修护组合的制备方法，包括如下步骤：
混合各组分，即得含有金花茶提取物的屏障修护组合物。
第三方面，本发明提供了一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物在预防和/或修复皮肤屏障损伤的用品中的应用。
具体地，所述用品为护肤品和/或化妆品，且所述含有金花茶提取物的屏障修护组合在所述用品中的质量百分含量为0.3-20％。
在本发明中，本领域常用的护肤品和/或化妆品形态均可用于本发明，比如，所述护肤品和/或化妆品为水剂、乳剂、面膜、啫喱、喷雾、膏霜、精华液中的至少一种。
进一步地，所述用品中还包括增稠剂、保湿剂、乳化剂、防腐剂、pH调节剂、香精、水中的至少一种。
一种护肤品，包括以下质量百分含量的组分：
含有金花茶提取物的屏障修护组合物0.3％-20％、增稠剂0.1％-0.5％、保湿剂3％-10％、乳化剂0.1％-10％、防腐剂0.5％-5％、pH调节剂0.05％-0.5％，余量为水。
具体地，所述护肤品还包括香精，所述香精的质量百分含量为0.01-0.1％。
在本发明中，本领域常用的增稠剂均可用于本发明，比如聚丙烯酸酯交联聚合物-6、卡波姆、卡拉胶、结冷胶、微晶纤维素、纤维素胶、乙基纤维素、刺云实胶、瓜尔胶中的至少一种；所述卡波姆包括卡波姆980。
在本发明中，本领域常用的保湿剂均可用于本发明，比如甘油、D-泛醇、维生素B5、1,3-丁二醇、1,2-己二醇、1,3-丙二醇、透明质酸钠、银耳多糖、海藻糖、甜菜碱、角鲨烷中的至少一种。
在本发明中，本领域常用的乳化剂均可用于本发明，比如乙基己基甘油、聚二甲基硅氧烷、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚、辛酸癸酸甘油三酯、C14-22烷基醇/C12-20烷基葡糖苷、聚甲基倍半硅氧烷、鲸蜡硬脂基葡糖苷中的至少一种。
在本发明中，本领域常用的防腐剂均可用于本发明，比如对羟基苯乙酮和/或多元醇，所述多元醇为丙二醇、戊二醇、己二醇中的至少一种；所述丙二醇包括1,3-丙二醇，所述己二醇包括1,2-己二醇。
在本发明中，本领域常用的pH调节剂均可用于本发明，比如乙二胺四乙酸二钠和/或精氨酸。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物，通过调控具距石枝藻提取物、金花茶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物、疗伤绒毛花花提取物和植醇的配比，同时促进了桥粒胶蛋白1(Desmocollin-1，Dsc 1)、桥粒芯蛋白1(Desmoglein-1，Dsg 1)、闭锁蛋白1(Claudin-1，Cldn-1)和人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的基因表达，提高了皮肤中桥粒胶蛋白1、桥粒芯蛋白1、闭锁蛋白1和人过氧化物酶体增殖物激活受体α的含量，进而增强了角质细胞之间的紧密连接和锚定连接，实现了有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的目的。
附图说明
图1为实施例1和对比例4含有金花茶提取物的屏障修护组合物的细胞划痕实验图，图a～b分别为实施例1和对比例4含有金花茶提取物的屏障修护组合物的细胞划痕实验初始图，图c～d分别为实施例1和对比例4含有金花茶提取物的屏障修护组合物的细胞划痕实验24h图。
图2为志愿者脸颊皮肤的角质贴片图，图a-c分别志愿者使用实施例1含有金花茶提取物的屏障修护组合物制备的乳液状护肤品前、第14天和第28天的脸颊皮肤角质贴片图，图d-f分别志愿者使用对比例2含有金花茶提取物的屏障修护组合物制备的乳液状护肤品前、第14天和第28天的脸颊皮肤角质贴片图。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
本发明各实施例和对比例使用的试剂情况：
具距石枝藻提取物，商品名为Hydrafence TM，宝芸达商贸(上海)有限公司；
植醇，商品名为Phytol，巴斯夫(中国)有限公司；
交替单胞菌发酵产物提取物，商品名为ABYSSINET TM，美国国际香精香料(IFF)公司；
金花茶提取物，其制备方法包括如下步骤：采集金花茶的花朵，清洗干净后放入50℃恒温烘箱干燥至恒重，研磨粉碎后过五号筛，取1g，加入20mL体积分数为75％的乙醇，80℃回流提取1h，即得金花茶提取物；
疗伤绒毛花花提取物，其制备方法包括如下步骤：采集疗伤绒毛花的花朵，清洗干净后放入50℃恒温烘箱干燥至恒重，研磨粉碎后过五号筛，取1g，加入20mL体积分数为50％的乙醇，在50℃下超声30min后，离心提取上清液，减压浓缩干燥，即得疗伤绒毛花花提取物。
实施例1-10和对比例1-10
实施例1-10和对比例1-10提供不同含有金花茶提取物的屏障修护组合物，彼此之间的差别仅在于各组分的重量份数是不同的，按重量份数计算，实施例1-10和对比例1-10包括如表1所示各组分：
表1实施例1-10和对比例1-10含有金花茶提取物的屏障修护组合物的配方
注：上表中，“比例A”是指金花茶提取物的重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物、疗伤绒毛花花提取物和植醇的总重量的比例，即金花茶提取物：(具距石枝藻提取物+交替单胞菌发酵产物提取物+疗伤绒毛花花提取物+植醇)；
“比例B”是指金花茶提取物和植醇的总重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和疗伤绒毛花花提取物的总重量的比例，即(金花茶提取物+植醇)：(具距石枝藻提取物+交替单胞菌发酵产物提取物+疗伤绒毛花花提取物)；
“比例C”是指金花茶提取物与植醇的重量比。
实施例1-10和对比例1-10含有金花茶提取物的屏障修护组合物的制备方法均一致，均包括如下步骤：
混合各组分，即得含有金花茶提取物的屏障修护组合物。
对比例11
本对比例提供一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物，其与实施例1的区别在于用β-葡聚糖代替植醇，其余均与实施例1一致。
应用例
一种护肤品，其包括以下质量百分含量的组分：
表2护肤品中各组分的质量百分含量
一种护肤品的制备方法，包括如下步骤：
S1.将A相中的各成分依次投入水中，待卡波姆980溶胀充分后进行均质混匀，得到均质A相；
S2.均质A相、B相分别加热至80℃，再混合均质乳化，得到AB混合相；
S3.C相加热至对羟基苯乙酮融化后，将其投入AB混合相中搅拌均匀，降温至40℃后，加入D相继续搅拌以形成均一乳液，即得护肤品，该护肤品为乳剂。
效果例1
对各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物进行基因表达促进率实验，具体包括如下步骤：
(1)角质形成细胞(HaCat细胞)购自广州海关技术中心。在37℃含5％ CO2的细胞培养箱中，以添加10％胎牛血清、100mg/mL青霉素和100mg/mL链霉素的DMEM培养基为培养液，按5×103个细胞/孔的密度将HaCat细胞接种于48孔板中连续培。
(2)待细胞贴壁后，弃去培养液；然后，分别在0.3mL培养液中加入5μL10μg/mL各实施例或对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物，再将其加入48孔板中作为测试组，处理HaCaT细胞24h，并以不加含有金花茶提取物的屏障修护组合物的培养液为空白对照组。
(3)收集细胞，用TRIzol试剂提取细胞的总RNA，再用反转录试剂盒PrimeScriptRT合成cRNA；然后用CFX96 Touch Real-Time PCR检测系统(Bio-Rad,Hercules,CA,USA)进行mRNA表达量的相对定量分析，实验条件为：在95℃初始变性5min，然后95℃15s、60℃30s、72℃30s的40个循环；接着，归一化至GAPDH转录物水平后，使用2-ΔΔCt方法计算相对cDNA水平。
(4)分别计算桥粒胶蛋白1(Desmocollin-1，Dsc 1)、桥粒芯蛋白1(Desmoglein-1，Dsg 1)、闭锁蛋白1(Claudin-1，Cldn-1)和人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的基因表达促进率。
Dsc 1的基因表达促进率(％)＝(空白对照组中Dsc 1的相对cDNA水平-测试组中Dsc 1的相对cDNA水平)/空白对照组中Dsc 1的相对cDNA水平×100％；
Dsg 1的基因表达促进率(％)＝(空白对照组中Dsg 1的相对cDNA水平-测试组中Dsg 1的相对cDNA水平)/空白对照组中Dsg 1的相对cDNA水平×100％；
Cldn-1的基因表达促进率(％)＝(空白对照组中Cldn-1的相对cDNA水平-测试组中Cldn-1的相对cDNA水平)/空白对照组中Cldn-1的相对cDNA水平×100％；
PPAR-α的基因表达促进率(％)＝(空白对照组中PPAR-α的相对cDNA水平-测试组中PPAR-α的相对cDNA水平)/空白对照组中PPAR-α的相对cDNA水平×100％；
实验结果如下表所示：
表3各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物的基因表达促进率
从表3可知，本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物同时促进了桥粒胶蛋白1(Desmocollin-1，Dsc 1)、桥粒芯蛋白1(Desmoglein-1，Dsg 1)、闭锁蛋白1(Claudin-1，Cldn-1)和人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的基因表达，可提高皮肤中桥粒胶蛋白1、桥粒芯蛋白1、闭锁蛋白1和人过氧化物酶体增殖物激活受体α的含量，有利于增强角质细胞之间的紧密连接和锚定连接，有助于实现有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的目的。
效果例2
对各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物进行细胞划痕实验，具体包括如下步骤：
(1)用马克笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线；
(2)取处于对数生长期的Hacat细胞，用0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，按2mL/孔将细胞浓度为5×105cells/mL的Hacat细胞接种至6孔板中，加入含10％FBS的DMEM培养基，于37℃、5％CO2的细胞培养箱中培养24h，直至6孔板中张曼单层细胞，此时用200μL枪头比着直尺，垂直于6孔板背后的横线划痕，每孔内划两道，用PBS冲洗3次，除去划下的细胞，加入1.8mL不含FBS的DMEM培养基，拍照，作为细胞划痕实验的初始图；
(3)每孔加入200μL浓度为0.01mg/mL含有金花茶提取物的屏障修护组合物，于37℃、5％CO2细胞培养箱中继续培养24h，取出，拍照，作为细胞划痕实验的24h图；其中，以加200μLPBS为空白对照组；
(4)计算细胞迁移率，具体如下：
细胞迁移率(％)＝(初始划痕面积-24h划痕面积)/初始划痕面积×100％；
其中，用Image J软件对细胞划痕实验的初始图进行图片统计面积分析，得到初始划痕面积；用Image J软件对细胞划痕实验的24h图进行图片统计面积分析，得到24h划痕面积；且细胞迁移率越高，表示本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物越有效预防和/或修复皮肤屏障损伤；
实验结果如下表所示：
表4各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物的细胞迁移率
| 细胞迁移率(％) | 细胞迁移率(％) | ||
| 实施例1 | 64.32 | 对比例1 | 17.28 |
| 实施例2 | 55.23 | 对比例2 | 12.34 |
| 实施例3 | 45.27 | 对比例3 | 17.29 |
| 实施例4 | 46.42 | 对比例4 | 12.79 |
| 实施例5 | 48.87 | 对比例5 | 15.30 |
| 实施例6 | 38.60 | 对比例6 | 11.27 |
| 实施例7 | 49.96 | 对比例7 | 15.61 |
| 实施例8 | 42.92 | 对比例8 | 12.79 |
| 实施例9 | 41.72 | 对比例9 | 17.28 |
| 实施例10 | 51.03 | 对比例10 | 10.32 |
| 对比例11 | 13.94 |
图1为实施例1和对比例4含有金花茶提取物的屏障修护组合物的细胞划痕实验图，图a～b分别为实施例1和对比例4含有金花茶提取物的屏障修护组合物的细胞划痕实验初始图，图c～d分别为实施例1和对比例4含有金花茶提取物的屏障修护组合物的细胞划痕实验24h图。
从图1和表4可知，本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物可有效预防和/或修复皮肤屏障损伤。进一步结合表2可知，本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物，通过调控具距石枝藻提取物、植醇、交替单胞菌发酵产物提取物、疗伤绒毛花花提取物和金花茶提取物的配比，同时促进了桥粒胶蛋白1(Desmocollin-1，Dsc1)、桥粒芯蛋白1(Desmoglein-1，Dsg 1)、闭锁蛋白1(Claudin-1，Cldn-1)和人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的基因表达，提高了皮肤中桥粒胶蛋白1、桥粒芯蛋白1、闭锁蛋白1和人过氧化物酶体增殖物激活受体α的含量，进而增强了角质细胞之间的紧密连接和锚定连接，实现了有效预防和/或修复皮肤屏障损伤的目的。
效果例3
对各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物进行即时皮肤屏障损伤修复实验，具体包括如下步骤：
(1)按照应用例所示方法将各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物分别制备成相应的乳液状护肤品，其中，以用水代替含有金花茶提取物的屏障修护组合物制备的乳液状护肤品为空白组护肤品；
(2)对各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物分别制备的护肤品进行人体实验，具体如下：
A.56名志愿者到访当天受试区(手臂)不能涂抹任何产品，清洗手臂后于温度为21±1℃、湿度为50±10％的空调房中静坐20min，然后随机分为7组，每组8人；
B.在每位志愿者的左右前臂各选择4个10cm2(2.5cm×4cm)的区域作为测试区域，并用皮肤记号笔标记，利用皮肤经皮水分流失探头TM Hex(Courage+Khazaka)以及Colorimeter CL400对选定的手臂区域进行初始TEWL值和初始a*值测量，并取平均值；
C.用3M医用PE胶带在每位志愿者的4个测试区域做撕拉破损处理，然后粘贴0.01％辣椒素贴片至明显泛红，建立皮肤受损模型，30min后，测量TEWL值和a*值，并取平均值，保持手部不同测试区域TEWL值的差值在±3g/hm2范围内，此时的TEWL值和a*值分别为模型建立TEWL值和模型建立a*值；
D.将各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物分别制备的护肤品分配给7组志愿者，每位志愿者的4个测试区域分别涂满3种待测试的护肤品和1种空白组护肤品，同时每种待测试的护肤品会在每组志愿者中至少出现一次，然后分别在20min和40min后，测量TEWL值和a*值，并取平均值，此时的TEWL值和a*值分别为修复后TEWL值和修复后a*值；
E.利用相应的平均值按照下列公式分别计算各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物分别制备的护肤品的TEWL值改善率和a*值改善率，所有实施例和对比例的改善率减去空白基料组的改善率作为基于空白的TEWL值改善率和a*值改善率：
TEWL值改善率(％)＝∣(修复后TEWL值-模型建立TEWL值)/(修复后TEWL值-初始TEWL值)∣×100％；
a*值改善率(％)＝∣(修复后a*值-模型建立a*值)/(修复后a*值-初始a*值)∣×100％；
其中，TEWL值改善率越大，表示护肤品的即时皮肤屏障损伤修复能力越强；a*值改善率越大，表示护肤品的即时褪红能力越强；
实验结果如下表所示：
表5各实施例和对比例含有金花茶提取物的屏障修护组合物的即时皮肤屏障损伤修复实验结果
从表5可知，本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物具有很好的即时皮肤屏障损伤修复能力和即时褪红能力。
效果例4
对实施例1和对比例2含有金花茶提取物的屏障修护组合物进行长效皮肤屏障损伤修复实验，具体包括如下步骤：
(1)按照应用例所示方法将实施例1和对比例2含有金花茶提取物的屏障修护组合物分别制备成相应的乳液状护肤品；
(2)对实施例1和对比例2含有金花茶提取物的屏障修护组合物分别制备的护肤品进行人体实验，具体如下：
A.56名年龄在21-44岁之间、无严重皮肤病史、无化妆品过敏史、且经皮水分散失TEWL值在20g/m2h以上的志愿者，统一用同一瓶氨基酸洁面进行面部清洁，于温度为21±1℃、湿度为50±10％的空调房中静坐5min，然后随机分为2组，每组28人；
B.利用皮肤经皮水分流失探头TM Hex(Courage+Khazaka)以及Colorimeter CL400对志愿者的面部进行初始TEWL值、初始a*值和初始含水量的测量；同一技术人员使用皮肤表面纹理测试系统Visioscan@VC 20puls对不同志愿者的脸颊皮肤表面进行拍摄，通过观察皮肤角质层细胞的脱落情况，以获得初始粘片鳞屑剥脱度(Sesc)值和初始粘片剥脱占有率(Desquamation Index)，并取平均值；其中：
粘片剥脱占有率(Desquamation Index)＝脱落的角质层屑的量/测量区域面积×100％；
TEWL值和a*值越小，含水量越高，表示皮肤的屏障功能越好，皮肤越健康；
Sesc值和Desquamation Index值越小，表示皮肤角质层脱屑越少，新陈代谢快，侧面反映皮肤越水润光滑，皮肤的屏障功能越好；
C.第一组志愿者的脸部早晚各使用一次相同量的实施例1含有金花茶提取物的屏障修护组合物制备的乳液状护肤品，第二组志愿者则使用对比例2距石枝藻组合物制备的乳液状护肤品，然后分别在第14天和第28天时，再次测量面部皮肤的使用后TEWL值、使用后a*值、使用后含水量、使用后Sesc值和使用后Desquamation Index值，并取平均值，再利用相应的平均值按照以下公式计算各自的改善率(％)：
TEWL值改善率(％)＝(初始TEWL值-使用后TEWL值)/初始TEWL值×100％；
a*值改善率(％)＝(初始a*值-使用后a*值)/初始a*值×100％；
含水量改善率(％)＝(使用后含水量-初始含水量)/初始含水量×100％；
Sesc值改善率(％)＝(初始Sesc值-使用后Sesc值)/初始Sesc值×100％；
Desquamation Index值改善率(％)＝(初始Desquamation Index值-使用后Desquamation Index值)/初始Desquamation Index值×100％；
实验结果如下表所示：
表6实施例1和对比例2含有金花茶提取物的屏障修护组合物的长效皮肤屏障损伤修复实验结果
图2为志愿者脸颊皮肤的角质贴片图，图a-c分别志愿者使用实施例1含有金花茶提取物的屏障修护组合物制备的乳液状护肤品前、第14天和第28天的脸颊皮肤角质贴片图，图d-f分别志愿者使用对比例2含有金花茶提取物的屏障修护组合物制备的乳液状护肤品前、第14天和第28天的脸颊皮肤角质贴片图。
从图2和表6可知，本发明含有金花茶提取物的屏障修护组合物具有很好的长效皮肤屏障损伤修复能力。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种含有金花茶提取物的屏障修护组合物，其特征在于，按重量份数计算，包括以下组分：
具距石枝藻提取物0.1-3份，金花茶提取物0.1-3份，交替单胞菌发酵产物提取物0.01-3份，疗伤绒毛花花提取物0.01-3份，植醇0.01-5份。
2.如权利要求1所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物，其特征在于，按照重量份数计算，所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物包括以下组分：
具距石枝藻提取物1-3份，金花茶提取物0.5-3份，交替单胞菌发酵产物提取物0.5-3份，疗伤绒毛花花提取物1-3份，植醇1-5份。
3.如权利要求1所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物，其特征在于，所述金花茶提取物的重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物、疗伤绒毛花花提取物和植醇的总重量的比例为：金花茶提取物：(具距石枝藻提取物+交替单胞菌发酵产物提取物+疗伤绒毛花花提取物+植醇)＝(0.1-3):3.5。
4.如权利要求1所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物，其特征在于，所述金花茶提取物和植醇的总重量与具距石枝藻提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和疗伤绒毛花花提取物的总重量的比例为：(金花茶提取物+植醇)：(具距石枝藻提取物+交替单胞菌发酵产物提取物+疗伤绒毛花花提取物)＝(1-4.5):2.5。
5.如权利要求1或4所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物，其特征在于，所述金花茶提取物与植醇的重量比为(0.1-1.5):(0.5-1.9)。
6.如权利要求1～5任一项所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物在预防和/或修复皮肤屏障损伤的用品中的应用。
7.如权利要求6所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物在预防和/或修复皮肤屏障损伤的用品中的应用，其特征在于，所述用品为护肤品和/或化妆品，且所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物在所述用品中的质量百分含量为0.3-20％。
8.如权利要求7所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物在预防和/或修复皮肤屏障损伤的用品中的应用，其特征在于，所述护肤品和/或化妆品为水剂、乳剂、面膜、啫喱、喷雾、膏霜、精华液中的至少一种。
9.如权利要求7所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物在预防和/或修复皮肤屏障损伤的用品中的应用，其特征在于，所述用品中还包括增稠剂、保湿剂、乳化剂、防腐剂、pH调节剂、香精、水中的至少一种。
10.一种护肤品，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：
权利要求1-5任一所述含有金花茶提取物的屏障修护组合物0.3％-20％、增稠剂0.1％-0.5％、保湿剂3％-10％、乳化剂0.1％-10％、防腐剂0.5％-5％、pH调节剂0.05％-0.5％，余量为水。
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