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CN118255693A - 联苯类化合物及其在制备治疗白血病、肺癌以及乳腺癌药物中的应用 - Google Patents

联苯类化合物及其在制备治疗白血病、肺癌以及乳腺癌药物中的应用 Download PDF

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CN118255693A
CN118255693A CN202410367991.0A CN202410367991A CN118255693A CN 118255693 A CN118255693 A CN 118255693A CN 202410367991 A CN202410367991 A CN 202410367991A CN 118255693 A CN118255693 A CN 118255693A
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CN
China
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alkyl
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breast cancer
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CN202410367991.0A
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王紫千
张志超
宋婷
蒋茂军
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Dalian University of Technology
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Dalian University of Technology
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Abstract

本发明公开了联苯类化合物及其在制备治疗白血病、肺癌以及乳腺癌药物中的应用，属于医药化学技术领域。本发明所述联苯类化合物由对联苯化合物经特定结构的R1、R2和R3修饰而获得。本发明的联苯类化合物能够在体外、细胞内和动物模型内与Hsp70蛋白结合，竞争性解离Hsp70/Bim蛋白二聚体，从而诱导白血病细胞、乳腺癌细胞以及肺癌凋亡，从而达到抑制白血病细胞、乳腺癌细胞以及肺癌生长以及杀伤白血病细胞、乳腺癌细胞以及肺癌细胞的效果，是一类活性非常高的凋亡诱导剂，可作为制备治疗或预防白血病、乳腺癌以及肺癌的潜在药物。

Description

联苯类化合物及其在制备治疗白血病、肺癌以及乳腺癌药物 中的应用
技术领域
本发明属于医药化学技术领域，涉及一类联苯类化合物，特别涉及4-氯-3，5-二甲基苯基联苯类及其衍生物，具体涉及这些化合物在体外、活细胞内和活体内对热休克蛋白Hsp70和Bim蛋白二聚体的解离，从而特异性诱导白血病细胞、肺癌细胞以及乳腺癌细胞凋亡，可作为白血病、肺癌以及乳腺癌治疗药物的应用。
背景技术
Hsp70蛋白作为分子伴侣蛋白，在不同细胞环境和压力因素下通过招募不同的分子伴侣和辅助伴侣蛋白发生构象改变，结合并调控多种客户蛋白，以分子机器的形式和机制维持蛋白质组的稳定。由于其高表达不仅在正常细胞应激中发生，还与多种癌症(包括白血病、乳腺癌和肺癌)以及多种抗癌药的耐药性相关。新近的研究表面，Hsp70与某些辅助伴侣蛋白的复合物，而不是Hsp70的过量表达，是导致肿瘤发生的关键。热休克蛋白能够通过与不同的分子伴侣蛋白和辅助伴侣蛋白的蛋白-蛋白相互作用(protein-proteininteractions，PPIs)，特异性结合并调控某些客户蛋白，激活了与肿瘤发生相关的信号通路。
近年来，凋亡的关键调控因子Bcl-2家族蛋白与Hsp70的相互作用开始被发现。其中，Bcl-2家族中的Bim被发现是Hsp70的辅助伴侣蛋白，结合于Hsp70蛋白NBD区的别构位点，抑制Hsp70的ATP酶活性，影响其SBD区(底物结合区)的构象和客户蛋白的折叠。尤其是，Hsp70/Bim二聚体水平在白血病细胞、乳腺癌以及肺癌中显著高于正常以及其他癌细胞；通过干扰RNA技术下调白血病细胞、乳腺癌以及肺癌中Hsp70和Bim的表达水平，结果下调了Hsp70的致癌客户蛋白Raf-1、AKT、c-Myc、Cyclin D1等并导致细胞大量凋亡，而在其它正常以及其他癌细胞如宫颈癌Hela等中却不能明显影响这些蛋白的水平，也无法导致明显凋亡。
综上所述，Hsp70/Bim二聚体通过稳定Hsp70的致癌客户蛋白Raf-1、AKT和EIF4E等保护白血病细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞逃避凋亡，是白血病、肺癌和乳腺癌的一个治疗靶点。申请人之前研发的S1g-10显示了比较特异的抗CML干细胞活性和良好的安全性，但是菲那烯酮骨架存在合成可及性不理想，可取代位点比较少，难以获得大量衍生物以供新药筛选进一步提高其肿瘤杀伤效果以及改善ADMET性质。
发明内容
为了解决背景技术中存在的问题，申请人使用骨架跃迁策略，使用药物化学中的优势结构联苯替换了原本的菲那烯酮，获得了化学结构不同于菲那烯酮的新骨架化合物联苯类衍生物，提供一类联苯类化合物，作为Hsp70/Bim蛋白-蛋白相互作用抑制剂，能够靶向性、高亲和力的抑制Hsp70/Bim蛋白相互作用，从而特异性诱导白血病细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞凋亡，可作为治疗白血病、肺癌、乳腺癌的药物。
本发明提供一类联苯类化合物，具有如下通式I的结构：
其中：
R1选自取代或未取代的C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8环烷基、C3-8环烯基，所述的取代选自下述基团：C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、苯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、萘基、OH、I、Br、Cl、F、NO2、NHCH3、N(CH3)2、CN、CF3；
R2选自C1-8烷基、取代的C1-8烷基或XR4；
所述取代的C1-8烷基是由下述基团任意取代的C1-8烷基：OH、OCH3、I、Br、Cl、NO2、NH2、NHCH3、N(CH3)2、CH(OCH3)2、CHO、CN、COOH、COOCH3、COOC2H5、吗啉基、硫吗啉基或哌嗪基；
所述的X选自(CH2)m、(CH2)mCONH(CH2)n或m、n为1-6的整数；
所述R4选自取代或未取代的苯基、萘基、苯并呋喃基、噻吩基或吲哚基，所述取代选自下述基团：C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、苯基、OH、I、Br、Cl、NO2、NHCH3、N(CH3)2、CN、CF3、COOH、SO3H、COOR5、CONHR5、SO3R5、SO2NHR5或OR5，其中，R5选自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基；
R3选自-OH,C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、苯基、OH、I、Br、Cl、NO2、NHCH3、N(CH3)2、CN、CF3、COOH、CH2COOH、SO3H、COOR4、CONHR4。
进一步的，R1为4-氯-3，5-二甲基苯基。
进一步的，所述的联苯类化合物，选自下述结构的化合物：
本发明进一步提供上述联苯类化合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)2,6-二氟-4-溴苯腈与苯甲醇按照投料摩尔比1:1.1-1:1.2反应，NaH作为拔氢试剂，制得化合物II；或者，2,6-二氟-4-溴苯腈与丙二酸二甲酯按照投料摩尔比1:1.1-1:1.2反应，制得化合物Ⅲ；反应时间为3-12h，反应温度为0-25℃，反应溶剂为THF；
(2)将化合物II或III或2,6-二氟-4-溴苯腈与R2NH2按照投料摩尔比1:1.1-1:20反应，碳酸钾作为缚酸剂，得到化合物Ⅳ或Ⅴ或Ⅵ；反应时间为3-20h，反应温度为20-110℃，反应溶剂为1,4-二氧六环；
(3)R1(OH)2与4-羟基苯硼酸频哪醇酯按照投料摩尔比1:1.1-1:20反应，醋酸铜作为催化剂，三乙胺缚酸剂，得到化合物Ⅶ；
(4)将化合物Ⅳ或Ⅴ或Ⅵ与Ⅶ或(4-环己氧基)苯基硼酸或4-苯氧基苯基硼酸按照投料摩尔比1:1.1-1:20进行suzuki偶联反应，直接得到或脱去保护或脱去保护后引入苯磺酸酯，最后得到化合物Ⅰ。
本发明的另一目的是提供上述的式I的化合物的立体异构体、可药用盐、溶剂合物、体内可水解的前体。
本发明的另一方面提供一种药物组合物，其包含前述至少一项化合物。
进一步的，所述化合物是组合物药物中唯一的活性成分或主要的活性成分。
进一步的，所述的药物组合物包括优选少于80％，更优选少于50％重量的本发明的化合物，以及混合有惰性可药用稀释剂、润滑剂或载体。
进一步的，对于片剂和锭剂，所述稀释剂、润滑剂和载体包括：乳糖、淀粉、滑石、硬脂酸；
进一步的，对于胶囊剂，所述稀释剂、润滑剂和载体包括：酒石酸或乳糖；
进一步的，对于注射液(液体剂)，所述稀释剂、润滑剂和载体包括：水、醇、甘油、植物油；
进一步的，对于栓剂，所述稀释剂、润滑剂和载体包括：天然或硬化油或蜡。
这些药物组合物可以经口服、胃肠道或通过局部施用于皮肤或粘膜局部给药，或经静脉内或肌内注射给药。
这些组合物可以为固体或液体，并且可以为通常在人类医学中使用的所有药物形式，例如简单的或糖包衣的片剂、锭剂、滴剂、可注射制剂、颗粒剂、霜剂、软膏剂、凝胶剂或凝胶胶囊；它们是根据常规方法来制备的。在本申请中，可以将活性成分混合至通常用于这些药物组合物的辅料中，诸如阿拉伯胶、滑石、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、可可豆脂、动物或植物源性脂质、石蜡衍生物、水性或非水性载体、二醇、各种分散剂、润湿剂、乳化剂或防腐剂。
本发明进一步提供制备上述药物组合物的方法，该方法包括：将各成分混合或复合在一起，并且使混合的各成分形成片剂或栓剂，或将各成分装入胶囊，或将成分溶解以形成注射液。
本发明还提供所述化合物或所述组合物用于制备治疗或预防受益于调节Hsp70蛋白、Hsp70/Bim蛋白二聚体的疾病的药物中的应用。
进一步的，本发明的化合物在用于治疗疾病时，与体内的Hsp70蛋白结合，竞争性解离Hsp70/Bim蛋白二聚体，导致白血病细胞、肺癌细胞以及乳腺癌细胞大量凋亡，从而达到抑制白血病细胞、肺癌细胞以及乳腺癌细胞生长以及杀伤白血病细胞、肺癌细胞以及乳腺癌的效果。
进一步的，本发明的化合物可以为单独或联合使用用于治疗白血病、乳腺癌以及肺癌。
进一步的，所述的白血病包括K562、BV173、KCL22细胞系；所述的乳腺癌包括MFC7、T47D细胞系；所述的肺癌包括A549、H23细胞系。
进一步的，本发明的产品可以特别是单独给药或与化学治疗或放射治疗或者其组合联合给药，例如，与其它治疗药物联合给药，这样的其它治疗药物可以为通常使用的抗肿瘤药物。
在使用本发明的化合物治疗疾病时，给予患者治疗有效量的式I的化合物、其立体异构体、可药用盐、溶剂合物、体内可水解的前体或包含前述至少一项的组合物，其中所述治疗有效的量优选为0.01-10mg/kg，优选0.3-7mg/kg，更优选0.5-5mg/kg，更优选2-5mg/kg。
基于以上的发现，对于体重30千克至100千克的患者，可以将使用本发明的化合物制成单位剂量药物组合物。单位剂量的药物组合物包含0.3mg至1g的药物活性成分；优选单位剂量的药物组合物包含9mg至700mg。更优选单位剂量的药物组合物包含15mg至500mg的药物活性成分；更优选单位剂量的药物组合物包含60mg至500mg的药物活性成分。以上所述的剂量即为患者每日的剂量。然而，取决于所使用的药物化合物、所治疗的个体和出现问题的病症，该剂量式是可变的。
对于本申请所提及的用途、方法、药物和组合物，化合物的用量和给药的剂型当然可以随所使用化合物、给药模式和预期治疗目的而变化。当本发明的化合物以约0.01-10mg/kg体重的每日剂量给药时，通常得到满意的结果。这些剂量可以按分份剂量以每日1至4次给予，也可以以缓释的形式给予。对于人类，每日总剂量的范围为9mg至700mg，更优选地为15mg至500mg，适于口服给药的单位剂型包括9mg至700mg化合物以及混有固态或液态可药用载体、润滑剂或稀释剂。
附图说明
图1为小鼠急性毒性实验中三组小鼠平均体重变化趋势图。
图2为化合物14-16，19在荷瘤小鼠模型体内抑制人白血病细胞系K562细胞(A-B)、乳腺癌细胞系MCF7细胞(C-D)和肺癌细胞系A549细胞(E-F)肿瘤生长实验中的小鼠体重和瘤组织重量的对比图。
具体实施方式
本发明以上所述及的所有技术方案中，使用的术语“烷基/烯基/炔基”包括直链烷基和支链烷基。如提及单个烷基如“丙基”，则只特指直链烷基，如提及单个支链烷基如“异丙基”，则只特指支链烷基。又如“C1-4烷基”包括、甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基。类似的规则也适用于本说明书中使用的其它基团。
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用原料和试剂等均可从化学或生物试剂公司购买或从已公开的方法制备。
实施例1：4'-(环己基氧基)-3-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-5-氟-[1,1'-联苯]-4-碳腈(化合物1)的制备
(1)中间体A1的合成
向2,6-二氟-4-溴苯腈(200mg，0.92mmol)在异丙醇(10mL)中的溶液中加入N，N-二甲基乙二胺(88mg，1.01mmol)。将混合物在50℃下搅拌16小时。在减压下蒸发挥发物，并通过快速色谱法(梯度：石油中的0–16％EtOAc)纯化残留物，得到白色固体(149mg，57％产率)。
(2)化合物1的合成
向A1(236mg，0.83mmol)在1.4-二氧六环/水＝10(10mL)中的溶液中加入K2CO3(230mg，1.66mmol)、Pd2(dba)3(76mg，0.083mol)和4-环己基氧基苯硼酸(218mg，0.99mmol)。将混合物在100℃、氩气下搅拌16小时。减压蒸发挥发物，通过快速色谱法(梯度：0–5％MeOH在DCM中)纯化残留物，得到白色固体1(180mg，57％产率)。化合物1的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.64(d,J＝8.5Hz,2H),7.00(d,J＝8.4Hz,2H),6.81(d,J＝11.0Hz,1H),6.77(s,1H),6.13(t,J＝5.2Hz,1H),4.39(tt,J＝8.5,3.7Hz,1H),3.37(q,J＝6.0Hz,2H),2.52(d,J＝6.4Hz,2H),2.23(s,6H),1.98-1.83(m,2H),1.70(tt,J＝8.4,4.4Hz,2H),1.51-1.19(m,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ158.70,152.21,147.82,143.13,134.90,128.85,116.44,114.04,104.77,100.63,82.50,82.32,74.85,57.48,45.40,31.70,25.56,23.55.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C23H29FN3O[M+H]+,382.2295；found,382.2280。
实施例2：化合物2的制备
(1)中间体A2的合成
在0℃下，向搅拌的NaH(238mg，5.96mmol)在20mL THF(15mL)中的悬浮液中缓慢加入苯甲醇(545mg，5.05mmol)。将该混合物在室温下搅拌(30分钟)。然后加入2,6-二氟-4-溴苯腈(1g，4.59mmol)，将混合物在室温下搅拌16小时。通过过滤去除无机物，在减压下蒸发挥发物，并通过快速色谱法(梯度：石油中的0–16％EtOAc)纯化残留物，得到白色固体A2(488mg，35％产率)。
(2)中间体B1的合成
向A2(459mg，1.51mmol)在1.4-二恶烷(10mL)中的溶液中加入K2CO3(418mg，3.03mmol)和N，N-二甲基乙二胺(147mg，1.67mmol)。将混合物在110℃下搅拌16小时。在减压下蒸发挥发物，并通过快速色谱法(梯度：0–5％MeOH在DCM中)纯化残留物，得到白色固体B1(360mg，64％产率)。
(3)中间体C1的合成
向B1(309mg，0.83mmol)在1.4-二氧六环/水＝10(10mL)中的溶液中加入K2CO3(230mg，1.66mmol)、Pd2(dba)3(76mg，0.083mol)和4-环己基氧基苯硼酸(218mg，0.99mmol)。将混合物在100℃、氩气下搅拌16小时。减压蒸发挥发物，通过快速色谱法(梯度：0–5％MeOH在DCM中)纯化残留物，得到白色固体C1(253mg，65％产率)。
(4)化合物2的合成
向C1(81mg，0.17mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入钯-碳(10mg，0.09mmol)将混合物在氢气气氛(1atm)下鼓泡，并在室温下搅拌16小时。将混合物过滤并浓缩，得到粗产物。通过薄层色谱法(DCM/MeOH＝15)纯化粗产物，得到白色固体2(58mg，90％产率)。
化合物2的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.51(d,J＝8.3Hz,2H),7.00(d,J＝8.4Hz,2H),6.35(d,J＝17.4Hz,2H),5.53(t,J＝5.1Hz,1H),4.38(tt,J＝8.4,3.7Hz,1H),3.27(q,J＝6.0Hz,2H),2.51(d,J＝12.3Hz,2H),2.21(s,6H),1.99-1.85(m,2H),1.72(dt,J＝14.1,4.5Hz,2H),1.55-1.23(m,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.81,158.15,151.92,146.90,132.35,128.43,116.67,116.47,101.52,99.87,83.09,74.87,57.64,45.44,40.64,31.75,25.58,23.59.HRMS(ESI):m/z calcd for ChemicalFormula:C23H28N3O2[M-H]-,378.2187；found,378.2184.
实施例3：化合物3-4的制备
(1)中间体A3的合成
与实施例2中A2类似，只需将苯甲醇换成丙二酸二甲酯，得白色固体(590mg,39％产率)。
(2)中间体B2的合成
与实施例2中B1类似，得白色固体(343mg,57％产率)。
(3)中间体C2的合成
与实施例2中C1类似，白色固体(225mg,55％产率)。
(4)化合物3，4的合成
C2(200mg，0.41mmol)溶于6N HCl水溶液(约8eq)中，将溶液加热至100℃12小时。将混合物冷却至室温并静置半小时。将混合物倒入水中并用EtOAc萃取。有机层用水洗涤两次并用无水Na2SO4干燥，然后过滤并浓缩。通过薄层色谱法(DCM/MeOH＝20)纯化粗产物，得到白色固体3(30mg，20％产率)。将水层过滤并干燥以获得4白色固体(40mg，24％产率)。化合物3和4的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：
4’-(环己基氧基)-3-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-5-甲基-[1，1'-联苯]-4-碳腈(化合物3)：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.60(d,J＝8.2Hz,2H),7.01(d,J＝8.2Hz,2H),6.79(d,J＝32.5Hz,2H),5.75-5.50(m,1H),4.39(s,1H),3.22(s,2H),2.54(s,2H),2.39(s,3H),2.23(s,6H),1.94(d,J＝10.2Hz,2H),1.72(s,2H),1.58-1.15(m,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ158.19,151.46,145.65,142.83,131.93,128.67,117.68,116.48,116.09,106.30,94.20,88.77,74.82,57.56,45.40,31.74,25.58,23.57,20.97.HRMS(ESI):m/z calcd forChemical Formula:C24H30N3O[M-H]-,376.2394；found,376.2393.
2-(4-氰基-4'-(环己基氧基)-5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-[1，1'-联苯]-3-基)乙酸(化合物4)：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.58(d,J＝8.3Hz,2H),7.00(d,J＝8.2Hz,2H),6.84(s,1H),6.75(s,1H),5.55(d,J＝5.1Hz,1H),4.38(td,J＝8.7,4.2Hz,1H),3.31(q,J＝5.9Hz,4H),2.38(s,2H),2.22(s,6H),1.97-1.82(m,2H),1.79-1.60(m,2H),1.52-1.25(m,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ172.38,158.08,151.23,145.15,132.13,128.61,117.73,116.68,116.48,106.29,95.26,81.98,74.82,57.66,45.48,43.17,39.36,31.75,25.59,23.58.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C25H30N3O3[M-H]-,420.2293；found,420.2281.
实施例4：化合物5的制备
(1)中间体D1的合成
向间甲苯基硼酸(1g，7.36mmol)在DCM(50ml)中的溶液中加入TEA(2.23g，22.07mmol)、Na2SO4(适量)、4-羟基苯硼酸频哪醇酯(1.78g，8.09mmol)和Cu(OAc)2(2g，11.03mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。在减压下蒸发挥发物，并通过快速色谱法(梯度：石油中的0–5％EtOAc)纯化残留物，得到无色油状物(114mg，5％产率)。
(2)中间体B1的合成
参见实施例2。
(3)中间体C3的合成
中间体C3与C1类似，将原料4-环己基氧基苯硼酸替换成D1，即得白色固体(44mg，43％产率)。
(4)化合物5的合成
与化合物2类似，将C1换成C3，即得5(26mg，80％产率)，化合物5的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.64-7.58(m,2H),7.31(d,J＝7.8Hz,1H),7.28(d,J＝6.8Hz,1H),7.09-7.04(m,2H),6.90(t,J＝2.1Hz,1H),6.86(dd,J＝8.2,2.5Hz,1H),6.42-6.35(m,2H),5.60(t,J＝5.0Hz,1H),3.28(d,J＝5.9Hz,2H),2.57-2.53(m,2H),2.31(s,3H),2.24(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.76,157.76,156.66,151.95,146.52,140.37,135.21,130.32,128.93,125.06,120.05,119.04,116.59,101.70,100.27,83.44,57.55,49.07,45.38,21.39.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C24H24N3O2[M-H]-,386.1874；found,386.1973.
实施例5：化合物6、8、12、14-16的制备
与化合物5的制备方法类似，合成化合物6、8、12、14-16。其中化合物6、8、12、14-16的产率和表征数据等如下：
化合物6:61mg产率93％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.65-7.55(m,2H),7.07-7.02(m,2H),6.82(s,1H),6.68(s,2H),6.39(d,J＝10.7Hz,2H),5.57(t,J＝5.1Hz,1H),3.29(d,J＝5.8Hz,2H),2.53(d,J＝6.3Hz,2H),2.26(s,6H),2.23(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.84,157.84,156.65,151.96,146.53,139.95,135.13,128.87,125.88,119.01,117.15,116.57,101.76,100.20,83.47,57.60,45.42,40.60,21.33.HRMS(ESI):m/z calcd forChemical Formula:C25H26N3O2[M-H]-,400.2030；found,400.2024.
化合物8:55mg产率88％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.25-7.22(m,1H),7.03(d,J＝8.4Hz,2H),6.90(d,J＝1.7Hz,2H),6.39(d,J＝13.8Hz,2H),5.57(t,J＝5.1Hz,1H),3.29(q,J＝6.0Hz,2H),2.58-2.51(m,2H),2.23(s,6H),1.27(s,18H).13CNMR(101MHz,DMSO)δ161.92,158.14,155.80,153.05,151.94,146.50,134.74,128.84,118.30,118.13,114.07,101.74,100.06,83.42,74.00,57.55,45.37,35.15,31.59,25.42.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C31H38N3O2[M-H]-,484.2969；found,484.2965.
化合物12:74mg产率90％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(d,J＝8.3Hz,2H),6.94(s,2H),6.38(d,J＝8.5Hz,2H),5.57(t,J＝5.1Hz,1H),3.28(q,J＝5.9Hz,4H),2.32(s,6H),2.21(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.88,157.56,154.64,151.98,146.45,137.99,135.43,128.96,128.93,119.68,119.03,116.57,101.75,100.19,83.48,57.64,45.47,40.26,20.80.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C25H25ClN3O2[M-H]-,434.1640；found,434.1636.
化合物14:61mg产率84％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(d,J＝8.3Hz,2H),6.94(s,2H),6.38(d,J＝14.2Hz,2H),5.67(t,J＝5.0Hz,1H),3.26-3.16(m,2H),2.67(t,J＝6.2Hz,2H),2.26(s,6H),1.08(s,4H),0.99(t,J＝7.1Hz,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.79,157.54,154.66,152.09,146.45,137.98,135.44,128.94,119.64,119.03,116.50,101.75,100.30,83.58,74.00,50.97,46.80,25.41,20.79,12.31.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C27H31ClN3O2[M+H]+,464.2104；found,464.2103.
化合物15:68mg产率89％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.66-7.54(m,2H),7.07(d,J＝8.6Hz,2H),6.94(s,2H),6.38(d,J＝7.8Hz,2H),5.72(t,J＝5.3Hz,1H),3.36-3.28(m,2H),2.71(t,J＝6.4Hz,2H),2.54(d,J＝5.8Hz,4H),2.32(s,6H),1.71(q,J＝3.4Hz,4H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.92,157.56,154.64,152.04,146.41,137.99,135.44,128.96,128.93,119.68,119.02,116.58,101.73,100.17,83.56,54.26,53.92,41.79,23.59,20.81.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C27H27ClN3O2[M-H]-,460.1797；found,460.1797.
化合物16:113mg产率90％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(d,J＝8.3Hz,2H),6.93(s,2H),6.39(d,J＝18.3Hz,2H),5.73(q,J＝4.9Hz,1H),3.30(q,J＝6.0Hz,2H),2.59(t,J＝6.4Hz,2H),2.44(s,4H),2.31(s,6H),1.52(q,J＝5.6Hz,4H),1.40(q,J＝5.7Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.82,157.53,154.67,152.08,146.45,137.96,135.47,128.95,128.92,119.63,119.02,116.51,101.84,100.34,83.67,56.51,54.06,25.92,24.33,20.79.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C28H29ClN3O2[M-H]-,474.1953；found,474.1952.
实施例6：化合物7的制备
化合物7的合成
与化合物C1类似，将4-环己基氧基苯硼酸换成D2即得7(113mg，50％产率)，化合物7的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.78-7.68(m,2H),7.09-7.00(m,2H),6.86(dd,J＝10.9,1.3Hz,1H),6.84-6.78(m,2H),6.69(s,2H),6.16(t,J＝5.2Hz,1H),3.39(d,J＝6.1Hz,2H),2.53(s,2H),2.26(s,6H),2.22(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ163.12,158.46,156.42,152.29,147.44,139.99,133.45,129.28,126.03,118.89,117.27,113.97,105.28,100.92,82.87,57.58,45.54,40.84,21.38.HRMS(ESI):m/z calcdfor Chemical Formula:C25H27FN3O[M+H]+,404.2138；found,404.2140.
实施例7：化合物9的制备
(1)中间体E1的合成
向金刚烷醇(690mg，4.53mmol)和吡啶(394mg，4.99mmol)在DCM(30mL)中的0℃溶液中滴加氯二苯基膦(1000mg，4.53mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。在减压下蒸发挥发物，并通过快速色谱法(梯度：石油中的0–5％EtOAc)纯化残留物，得到无色油状物(1.22g，80％产率)。
(2)中间体D5的合成
向E1(1g，2.97mmol)的DCM(30mL)溶液中滴加DIAD(601mg，2.97mol)。约5分钟后，加入混合物4-羟基苯硼酸频哪醇酯(719mg，3.27mmol)，然后在室温下搅拌1小时。减压蒸发挥发物，通过快速色谱法(梯度：石油中的0-5％EtOAc)纯化残留物，得到无色油状物(73mg，7％产率)。
(3)中间体C10的合成
与C1类似，将4-环己基氧基苯硼酸换成D5即得C10(24mg，30％产率)。
(4)化合物9的合成
与化合物2类似，将C1换成C10即得9(13mg，80％产率)，化合物9的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.80(s,1H),7.58-7.48(m,2H),7.06(d,J＝8.2Hz,2H),6.42(d,J＝5.8Hz,2H),5.96-5.76(m,1H),2.98(s,2H),2.58(s,2H),2.15(s,6H),1.84(d,J＝3.0Hz,6H),1.58(s,3H),1.24(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ163.23,154.79,150.52,146.88,135.36,127.93,125.19,119.48,112.03,102.07,100.17,78.02,63.14,47.71,42.83,40.64,36.04,30.70.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C27H34N3O2[M+H]+,432.2651；found,432.2648.
实施例8：化合物10、13的制备
(1)中间体C11和C12的合成
与C1类似，将4-环己基氧基苯硼酸换成4-苯氧基苯基硼酸后分别与B1和B2进行suzuki偶联，得到白色固体C11(102mg，52％产率)和白色固体C12(115mg，55％产率)。
(2)化合物10和13的合成
与化合物2类似，将C1换成C11即得白色固体10(72mg，90％产率)，换成C12即得白色固体13(69mg，85％产率)，化合物10和13的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：
化合物10:1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.62(d,J＝8.2Hz,2H),7.42(t,J＝7.7Hz,2H),7.18(t,J＝7.5Hz,1H),7.07(d,J＝8.2Hz,4H),6.39(d,J＝19.7Hz,2H),5.57(t,J＝4.8Hz,1H),3.28(q,J＝5.7Hz,2H),2.53(d,J＝6.6Hz,2H),2.22(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ162.11,157.62,156.71,151.95,146.49,135.42,130.60,128.94,124.29,119.50,119.08,116.68,101.88,100.05,83.52,57.57,45.40,40.55.HRMS(ESI):m/z calcd for ChemicalFormula:C23H22N3O2[M-H]-,372.1717；found,372.1715.
化合物13:1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.65-7.57(m,2H),7.42(t,J＝7.7Hz,2H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(d,J＝8.1Hz,4H),6.37(d,J＝12.5Hz,2H),5.64(t,J＝5.0Hz,1H),3.23(q,J＝5.9Hz,2H),2.65(t,J＝6.2Hz,2H),2.53(d,J＝7.2Hz,4H),0.99(t,J＝7.1Hz,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.86,157.62,156.72,152.14,146.49,135.39,130.61,128.92,124.30,119.49,119.09,116.55,101.77,100.28,83.56,51.03,46.79,40.69,12.45.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C25H26N3O2[M-H]-,400.2030；found,400.2029.
实施例9：化合物11的制备
(1)中间体F1的合成
与化合物D1类似，将原料间甲苯基硼酸和4-羟基苯硼酸频哪醇酯换成3,5-二甲基-4-硝基苯酚和4-溴苯硼酸即得F1无色油状物(135mg，7％产率)。
(2)中间体D6的合成
向F1(120mg，0.37mmol)在1.4-二恶烷(5mL)中的溶液中加入KOAc(110mg，1.12mmol)、Pin2B2(113mg，0.45mmol)和(dppf)2PdCl2(27mg，0.037mmol)。将混合物在100℃、氩气下搅拌16小时。减压蒸发挥发物，并通过快速色谱法(梯度：石油中的0–5％EtOAc)纯化残留物，得到无色油状物(83mg，60％产率)。
(3)中间体C13的合成
与C1类似，将4-环己基氧基苯硼酸换成D6后别B2进行suzuki偶联C13为白色固体(83mg，60％产率)。
(4)化合物11的合成
与2类似，将C1换成C13即得11为白色固体(21mg，83％产率)，化合物11的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.56-7.51(m,2H),6.95-6.89(m,2H),6.63(s,2H),6.36(dd,J＝16.2,1.4Hz,2H),5.66-5.56(m,1H),4.48(s,2H),3.33-3.29(m,2H),2.60(q,J＝4.8Hz,2H),2.28(s,6H),2.10(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.83,160.01,151.85,146.75,145.35,141.72,133.65,129.37,128.63,127.27,122.64,120.16,117.09,101.67,100.02,83.27,57.37,45.17,18.35.HRMS(ESI):m/z calcd for ChemicalFormula:C25H27N4O2[M-H]-,415.2139；found,415.2140。
实施例10：化合物17-19的制备
(1)化合物17的合成
向化合物16(100mg，0.21mmol)和4-二甲氨基吡啶(2.57mg，0.021mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入2,4-二氟苯磺酰氯(89mg，0.42mmol)。将混合物在室温下搅拌12小时。在减压下蒸发挥发物，并过薄层色谱法(PE/THF＝2)纯化粗产物，得到白色固体(54mg，40％产率)。化合物17的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.76(d,J＝8.3Hz,1H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.27(d,J＝8.3Hz,1H),7.07(d,J＝8.3Hz,2H),7.03(s,1H),6.93(s,2H),6.39(d,J＝18.3Hz,2H),5.73(q,J＝4.9Hz,1H),3.30(q,J＝6.0Hz,2H),2.59(t,J＝6.4Hz,2H),2.44(s,4H),2.31(s,6H),1.52(q,J＝5.6Hz,4H),1.40(q,J＝5.7Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ164.91,161.82,160.62,157.53,154.67,152.08,146.45,137.96,135.47,131.31,128.95,128.92,126.13,119.63,119.02,116.51,112.48,106.12,101.84,100.34,83.67,56.51,54.06,25.92,24.33,20.79.HRMS(ESI):m/zcalcd for Chemical Formula:C34H32ClF2N3O4 S[M+H]+,652.1848；found,652.1849.
(2)化合物18、19的合成
与17类似，替换成不同得苯磺酰氯即得18、19，化合物18、19的NMR测定结果以及质谱测定结果如下：
化合物18:52mg产率38％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.48(d,J＝8.3Hz,2H),8.09(d,J＝8.3Hz,2H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(d,J＝8.3Hz,2H),6.93(s,2H),6.39(d,J＝18.3Hz,2H),5.73(q,J＝4.9Hz,1H),3.30(q,J＝6.0Hz,2H),2.59(t,J＝6.4Hz,2H),2.44(s,4H),2.31(s,6H),1.52(q,J＝5.6Hz,4H),1.40(q,J＝5.7Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.82,157.53,154.67,152.08,151.73,146.45,141.52,137.96,135.47,130.13,128.95,128.92,123.81,119.63,119.02,116.51,101.84,100.34,83.67,56.51,54.06,25.92,24.33,20.79.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C34H34ClN4O6S[M+H]+,661.1887；found,661.1889.
化合物19:23mg产率22％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.05(s,1H),8.87(d,J＝8.3Hz,1H),8.32(d,J＝8.3Hz,1H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(d,J＝8.3Hz,2H),6.93(s,2H),6.39(d,J＝18.3Hz,2H),5.73(q,J＝4.9Hz,1H),3.30(q,J＝6.0Hz,2H),2.59(t,J＝6.4Hz,2H),2.44(s,4H),2.31(s,6H),1.52(q,J＝5.6Hz,4H),1.40(q,J＝5.7Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.82,157.53,154.67,152.66,152.08,148.93,146.45,144.72,137.96,135.47,131.34,129.93,128.95,128.92,119.63,119.02,116.51,115.51,101.84,100.34,83.67,56.51,54.06,25.92,24.33,20.79.HRMS(ESI):m/z calcd for Chemical Formula:C34H33ClN5O8 S[M+H]+,706.1738；found,706.1740.
实施例11：通过荧光偏振分析法检测上述化合物在体外解离Hsp70/Bim二聚体的能力
合成一个带有21个氨基酸的BimBH3肽段(氨基酸：79-99：QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR)，并在N端标记上6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(FAM)作为荧光标签(FAM-Bim)。竞争结合实验中所用的反应体系为GST-Hsp70蛋白(300nM)，和FAM-Bim多肽(20nM)溶于反应缓冲液中(100mM K3PO4,pH 7.5；100μg/mL牛γ白蛋白；0.02％叠氮化钠)。在96孔板中，每孔加入100μL反应体系，然后加入1μL不同浓度的溶于DMSO的待检测化合物的母液(0-10mM)，终浓度为0-100μM。同时设立两个对照组，一个对照组为反应体系中只含有Hsp70和FAM-Bim(相当于0％抑制率)，另一对照组中的反应体系只含有FAM-Bim肽段。96孔板经过1个小时的避光孵育后，于酶标仪上检测。荧光极化值(mP)在由485nm波长激发产生的发射波长530nm下测量。IC50值通过SPSS计算得到。
按照上述相同的试验方法检测化合物1-19解离Hsp70/Bim二聚体的能力，以已知Hsp70抑制剂MKT-077、S1g-10为对照。结果发现本发明的化合物1-19除3外都能有效解离Hsp70/Bim二聚体，它们与Hsp70蛋白的竞争结合IC50值在60nM-10μM，其中优选技术方案的化合物(2、5、6、8、11-16)与Hsp70蛋白的竞争解离常数小于1.0μM，属于比较强的竞争性解离化合物，说明本发明的化合物确实有较强的与Hsp70蛋白竞争结合Bim的能力。具体结果如表1所示。
表1.本发明的化合物解离Hsp70/Bim二聚体的能力实验结果
实施例12：通过流式细胞技术检测上述化合物诱导白血病细胞系、乳腺癌细胞系和肺癌细胞的凋亡情况
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。膜联蛋白Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。用标记了FITC的膜联蛋白Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。而PI(碘化丙啶)是一种DNA染料，可在535nm左右的紫外光激发，在615nm处发出红色荧光。因此带有膜联蛋白V-FITC的细胞是发生了凋亡的细胞，而染上PI的细胞即为总的细胞量，通过统计不同的细胞数目，从而可以计算出发生凋亡的细胞比例。
本实验通过Annexin-V/propidium iodide staining by flow cytometry试剂盒(碧云天，苏州，中国C1063)检测化合物2、5、6、8、11-19(一系列不同浓度)用于人白血病细胞株(K562、KCL22、BV173)、人白血病TKI耐药细胞株(K562-R3)、人乳腺癌细胞株(MCF7、T47D)、人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株(MCF7/TAM-R、T47D/TAM-R)、人子宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株HepG2、人肺癌细胞株(H23、A549)接近正常体细胞的人巨噬细胞株U937和人胚胎肾细胞株HEK293，24h后细胞凋亡情况。
主要的实验步骤如下：
1.细胞收集：上述化合物处理24小时后的悬浮细胞直接收集到10mL的离心管中，每样本细胞数为5×106/mL，1000r/min离心5min，弃去培养液；
2.用孵育缓冲液洗涤1次，500～1000r/min离心5min；
3.用100μL的标记溶液(Annexin-V/PI)重悬细胞，室温下避光孵育10～15min；
4.500～1000r/min离心5min沉淀细胞，孵育缓冲液洗1次；
5.加入荧光(SA-FLOUS)溶液4℃下孵育20min，避光并不时振动，通过流式细胞仪，检测化合物诱导细胞的凋亡情况。以未加入检测化合物的作为对照组。
流式细胞仪分析：流式细胞仪激发光波长用488nm，用一波长为515nm的通带滤器检测FITC荧光，另一波长大于560nm的滤器检测PI。
结果判断：在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为(FITC-/PI-)；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为(FITC+/PI+)；而右下象限为凋亡细胞，显现(FITC+/PI-)。据此结果统计凋亡细胞占总细胞数的百分比，然后以log10(化合物浓度)为横轴，凋亡细胞所占百分比为纵轴拟合凋亡曲线，利用曲线计算当50％细胞凋亡时化合物浓度，即凋亡诱导半数起效浓度(EC50)。具体结果如表2所示。
结果显示，本发明的化合物2、5、6、8、11-16、19对于白血病细胞系(如K562、BV173、KCL22等)、乳腺癌细胞系(如MFC7、T47D等)和肺癌(如A549、H23等)，能够高效的诱导肿瘤细胞凋亡(EC50＜5μM)，说明本发明的化合物对白血病细胞、乳腺癌细胞和肺癌细胞的抑制和杀伤具有较好的选择性。此外，化合物19作为前药本身在体外解离Hsp70-Bim能力不强，但肿瘤细胞内高表达的谷胱甘肽可以脱去保护而得到化合物16，化合物19实现了与化合物16相当的的诱导肿瘤细胞凋亡能力，进一步提高了本系列化合物的安全性。
实施例13：化合物诱导细胞凋亡依赖Hsp70/Bim二聚体的存在
通过干扰RNA实验验证本发明的化合物诱导白血病细胞、乳腺癌细胞和肺癌细胞的凋亡依赖于Hsp70和Bim。pGenesil质粒用来表达干扰RNA。干扰序列分别为靶向Hsp70：5’-GGG TTTCATCCAGGATCGA-3’，靶向Bim 5’-CAGGACACAGAGGAGGTTT-3’。干扰质粒转染利用Lipofectamine 2000。人白血病细胞K562、人乳腺癌细胞MCF7和人肺癌细胞A549经常规培养，密度达到105/mL后，分别转染2μg Hsp70和Bim干扰质粒24小时后，离心收集细胞。在2％CHAPS裂解缓冲液中4℃裂解10分钟，每个样品取20μL，进行SDS-PAGE电泳，转膜，Hsp70和Bim抗体分别孵育后，ECL显色试剂曝光条带。蛋白相对表达水平通过光密度测定免疫印记条带进行定量，以野生型K562/MCF7/A549细胞中Hsp70和Bim的表达量作为参比，选取转染Hsp70和Bim干扰质粒后Hsp70和Bim蛋白表达量相比野生型明显下降的细胞系，证明该方法能有效干扰Hsp70和Bim蛋白的表达。
人白血病细胞K562、人乳腺癌细胞MCF7和人肺癌细胞A549经常规培养，密度达到105/mL每孔后，分别转染2μg Hsp70和Bim干扰质粒24小时后，分别加入0-20μM化合物2、5、6、8、11-19作用24小时，流式细胞仪检测细胞凋亡，计算凋亡诱导半数起效浓度(EC50)。流式细胞仪的操作方法如实施例12所述，实验结果如表3所示。
实验结果显示，Hsp70和Bim分别缺失的人白血病细胞K562、人乳腺癌细胞MCF7和人肺癌细胞A549中，化合物2、5、6、8、11-19诱导凋亡的能力相比野生型实验组均被阻碍。上述结果表明：本发明的化合物诱导凋亡依赖Hsp70和Bim两种蛋白，即化合物诱导细胞凋亡依赖Hsp70/Bim二聚体的存在。
实施例14：本发明化合物的安全性能
通过小鼠急性毒性试验考察本发明化合物的安全性能，本实验以最具代表性的化合物16为例，说明实验过程。
早晨9:00选取6只雄性Balb/C小鼠(体重在28-29g范围内)随机分为3组，分别称取体重，并计算平均值，当晚9点禁食，不禁水。配制化合物16药物，分为3个剂量组，A组(给药终浓度3mg/kg)、B组(给药终浓度5mg/kg)和对照组C组(50％ DMSO(溶剂))按体重腹腔注射药物，至实验终浓度。C组给予同等量DMSO溶液，各组加药条件如表4所示。
表4.小鼠急性毒性试验中各组小鼠体重和加药剂量
第二天早晨9:30注射药物完毕，并称取各组小鼠的体重，然后每天早晨9:30分别称量各组小鼠的体重并观察小鼠的状态，实验进行7天。
实验结果显示，给药后A，B，C组小鼠均出现状态萎靡，约1小时后均正常进食，实验过程中A、B、C组6只小鼠生活状态良好，皮毛齐整，眼睛红亮，无不良反应，无死亡，进食进水正常，体重有明显增加。小鼠每日体重变化数据如图1。
将上述称量完体重后的小鼠脱臼处死，解剖观察并取肝组织进行下一步实验。
解剖观察：对6只小鼠进行解剖，观察内脏的特点，发现加药组(A、B组)和对照组(C组)的小鼠，没有明显区别；肾脏、心脏的颜色正常，鲜红，无毒理表现；肝脏为正常颜色，形状正常，无畸变，没有发现毒理症状。如表5所示，三组小鼠肝脏平均重量无明显差别，肝脏重量与小鼠体重成正相关。A、B组小鼠肝脏组织石蜡包埋切片，HE染色未见炎症反应。
表5.腹腔注射后第7天解剖6只小鼠的肝脏重量和体重
小鼠急性毒性试验结论：一次性注射高达5mg/kg的化合物16对小鼠无明显毒副作用。解剖实验进一步证明，化合物16对小鼠的内脏没有毒理效应；体重监测，可以看出化合物16对小鼠的体重有没有明显的影响。
化合物14、15、19均使用相同方法测定小鼠急性毒性，结果显示化合物14、15、19对小鼠的内脏均没有毒理效应，且对小鼠的体重没有明显影响。
实施例15.化合物在荷瘤小鼠模型体内抑制白血病细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞生长活性
以白血病荷瘤小鼠模型为例。根据急性毒性测试结果，随机选取5组6周龄裸鼠(每组4只)，皮下移植人白血病细胞系K562细胞，一组作为对照，其它组每天分别注射0.3mg/kg化合物14-16、19。具体实验内容如表6所示。
乳腺癌、肺癌荷瘤小鼠模型以相同方法构建，分别皮下移植乳腺癌细胞系MCF7细胞和肺癌细胞系A549细胞。
表6.化合物对小鼠的体内抑制白血病活性的实验内容
小鼠试验结论：由图1的试验数据看出，本发明的化合物16在5mg/kg的剂量以下对小鼠没有明显毒副作用，以0.3mg/kg的剂量给移植人白血病细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞的裸鼠连续给药14天，发现用药组的小鼠的肿瘤块的重量均明显小于对照组，肿瘤抑制率达到50％(按瘤重计算，图2)，而且相对于对照组体重没有明显变化。
化合物14-15、19均使用相同方法测定在小鼠模型体内抑制白血病细胞、乳腺癌细胞以及肺癌细胞生长活性，结果显示化合物14-15、19的肿瘤抑制率均在50％以上(按瘤重计算，图2)。上述结果表明：本发明中的化合物可以有效抑制白血病细胞、乳腺癌细胞以及肺癌细胞的生长，且无明显毒副作用，可以有效用于白血病、乳腺癌以及肺癌的预防和治疗。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一类联苯类化合物，其特征在于，其结构如通式I所示：
其中：
R1选自取代或未取代的C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8环烷基、C3-8环烯基，所述的取代选自下述基团：C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、苯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、萘基、OH、I、Br、Cl、F、NO2、NHCH3、N(CH3)2、CN、CF3；
R2选自C1-8烷基、取代的C1-8烷基或XR4；
所述取代的C1-8烷基是由下述基团任意取代的C1-8烷基：OH、OCH3、I、Br、Cl、NO2、NH2、NHCH3、N(CH3)2、CH(OCH3)2、CHO、CN、COOH、COOCH3、COOC2H5、吗啉基、硫吗啉基或哌嗪基；
所述的X选自(CH2)m、(CH2)mCONH(CH2)n或m、n为1-6的整数；
所述R4选自取代或未取代的苯基、萘基、苯并呋喃基、噻吩基或吲哚基，所述取代选自下述基团：C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、苯基、OH、I、Br、Cl、NO2、NHCH3、N(CH3)2、CN、CF3、COOH、SO3H、COOR5、CONHR5、SO3R5、SO2NHR5或OR5，其中，R5选自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基；
R3选自-OH,C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、苯基、OH、I、Br、Cl、NO2、NHCH3、N(CH3)2、CN、CF3、COOH、CH2COOH、SO3H、COOR4、CONHR4。
2.根据权利要求1所述的联苯类化合物，其特征在于，所述的R1为4-氯-3，5-二甲基苯基。
3.根据权利要求1或2所述的联苯类化合物，其特征在于，所述的联苯类化合物选自：
4.一种化合物，其特征在于，其包括权利要求1-3中任一项所述联苯类化合物的立体异构体或者其可药用盐。
5.一种药物组合物，其特征在于，其包括权利要求1-4中任一项所述的化合物的一种或两种以上。
6.一种单剂量药物组合物，其特征在于，其包含1-1000mg的权利要求1-4中任一项所述的化合物中的一种或两种以上。
7.一种包含权利要求1-3任一项所述联苯类化合物、权利要求4所述化合物、权利要求5所述药物组合物或权利要求6所述单剂量药物组合物的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂包括片剂、锭剂、滴剂、注射制剂、颗粒剂、霜剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂或胶囊制剂。
8.权利要求1-3中任一项所述联苯化合物的制备方法，其特征在于，其主要包括如下步骤：
(1)2,6-二氟-4-溴苯腈与苯甲醇按照投料摩尔比1:1.1-1:1.2反应，制得化合物II；或者，2,6-二氟-4-溴苯腈与丙二酸二甲酯按照投料摩尔比1:1.1-1:1.2反应，制得化合物Ⅲ；
(2)化合物II或III或2,6-二氟-4-溴苯腈与R2NH2按照投料摩尔比1:1.1-1:20反应，得化合物Ⅳ或Ⅴ或Ⅵ；
(3)R1(OH)2与4-羟基苯硼酸频哪醇酯按照投料摩尔比1:1.1-1:20反应，制得化合物Ⅶ；
(4)将化合物Ⅳ或Ⅴ或Ⅵ与Ⅶ或(4-环己氧基)苯基硼酸或4-苯氧基苯基硼酸按照投料摩尔比1:1.1-1:20反应，直接得到或脱去R3保护基团后或者替换原有R3的保护基团后得到化合物Ⅰ。
9.权利要求1-3任一项所述联苯类化合物、权利要求4所述化合物、权利要求5所述药物组合物或权利要求6所述单剂量药物组合物在制备用于治疗或预防受益于调节Hsp70蛋白/Bim蛋白二聚体的疾病的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的疾病为白血病、乳腺癌或肺癌。
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