CN118190921B - 一种吖啶酯增强发光系统 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种吖啶酯增强发光系统，包括预激发液、激发液以及用于与待测物相联接的吖啶酯，所公开的预激发液为双氧水溶液和硝酸溶液的混合溶液，激发液为含有0.5％～2.0％的增强剂的氢氧化钠溶液，增强剂为月桂醇磺基乙酸酯钠或Zetasperse179中的任意一种；本发明组分简单，不必使用多元醇、金属螯合剂等其他物质做稳定剂，易于配制，适合大批量生产，本发明可以使相对发光强度增强250％以上，同时本发明还可以延长吖啶酯的发光时间，提高检验的可操作性和检验准确度。

Description

一种吖啶酯增强发光系统

技术领域

本发明属于化学发光免疫分析领域，尤其涉及一种吖啶酯增强发光系统。

背景技术

化学发光分析是利用化学发光反应的发光现象，对化学发光物质由激发态跃迁回基态时发出的光信号进行测量的一种分析方法。化学发光免疫分析技术就是利用化学反应释放的自由能激发中间体，使其从激发态回到基态，当中间体从激发态回到基态时释放等能级的光子，再对光子进行测定而进行的定量分析技术。化学发光反应的发光类型通常分为闪光型和辉光型两种。其中，闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。

吖啶酯是第三代化学发光物质，其发光反应类型属于闪光型。用吖啶酯直接标记抗体(或抗原)，与待测标本中相应的抗原(或抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，再在碱性条件下被H₂O₂氧化时，发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，且背景干扰低，检测灵敏度高等优点，但是吖啶酯价格昂贵，所以可以通过增强吖啶值发光，达到减少原料的使用量，进而降低成本的目的。

目前，对吖啶酯的增强发光技术进行了研究。如文献号为202211316032.3的中国发明专利申请《一种吖啶酯底物发光系统》公开了包括预激发液和激发液的吖啶酯底物发光系统，预激发液为含有0.65％～1.65％双氧水和0.315％硝酸的水溶液，激发液为含有0.095％～2％发光增强剂TritonX-100和0.25％～5％发光增强剂十六烷基三甲基氯化铵的氢氧化钠溶液，激发液中还含有乙醇。该文献通过降低空白对照发光值，提高了信号强度，从而提高了吖啶酯底物发光系统的发光效率和稳定性。但是，该文献中并没有解决吖啶酯作为闪光型发光物质的持续时间短等问题。

所以，需要进一步开发一种既可以增强发光，又能够延长发光时间的吖啶酯发光系统。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术所采用的预激发液和激发液对延长吖啶酯发光时间无显著效果、发光强度弱等问题，研究了一种吖啶酯增强发光系统，以增强吖啶酯的发光强度、延长发光持续时间。

本发明采用的技术方案提供了一种吖啶酯增强发光系统，包括预激发液、激发液以及用于与待测物相联接的吖啶酯，关键在于，上述的预激发液为双氧水溶液和硝酸溶液的混合溶液；上述的激发液为含有0.5％～2.0％的增强剂的氢氧化钠溶液，上述的增强剂为月桂醇磺基乙酸酯钠或Zetasperse179中的任意一种。

具体的，上述的双氧水溶液的质量浓度为1％～2％，上述的硝酸溶液的摩尔浓度为0.4mol/L～0.8mol/L。

更具体的，上述的双氧水溶液和硝酸溶液的体积比为1:9～10。

进一步的，上述的氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.4mol/L～0.8mol/L。

优选的，上述的硝酸溶液的摩尔浓度为0.5mol/L，上述的氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.5mol/L。

优选的，上述的激发液为含有1％的增强剂的氢氧化钠溶液。

优选的，上述的用于与待测物相联接的吖啶酯在待测样品中的浓度为3×10^{- 8}mmol/L～5×10^-8mmol/L。

更进一步的，上述的吖啶酯增强发光系统中预激发液、激发液的质量比为1:1.5～2.5。

本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

本发明的增强发光系统中，在预激发液中仅以低浓度的双氧水作为增强剂，以低浓度的硝酸溶液作为稳定剂，二者混合为预激发液，其中不必使用增强剂或其他稳定剂；激发液为成分简单的低浓度氢氧化钠溶液，其中增强剂的含量也不高，仅在0.5％～2.0％，其中也不必使用其他有机溶剂。本申请不论预激发液或者激发液，组分都非常简单，不必使用多元醇、金属螯合剂等其他物质做稳定剂，易于配制，适合大批量生产。

本发明仅在激发液中使用表面活性剂做增强剂，简化了系统的增强发光过程。本发明所选用的增强剂是两种表面活性剂(月桂醇磺基乙酸酯钠或Zetasperse179)，在增强剂含量为0.5％～2.0％时，就可以达到增强相对发光强度250％以上的效果。

其中，月桂醇磺基乙酸酯钠又名鱼腥草素、鱼腥草素钠或新鱼腥草素钠，虽然具有表面活性剂的性质，但是该物质是一种常用的抗菌消炎药物，临床上被广泛用于治疗上呼吸道感染，慢性支气管炎，肺炎及附件炎等多种疾病。该物质能够提高中间体在激发系统中的溶解性，但是低浓度使用时并不容易产生气泡。Zetasperse179是一种新型的醇乙氧基类物质，目前该物质常被作为涂料的分散剂使用。在本发明中因Zetasperse179具有很强空间稳定功能，可以更好的改善基材的润湿性和提高体系的稳定性。

不仅如此，本发明还可以延长吖啶酯的发光时间，可以降低对仪器精密度的要求，同时减少故障的概率。此外，本发明在较低的吖啶酯含量情况下，也可以表现出很好的增强发光的效果，所以本发明能够提高吖啶酯底物发光系统的发光效率，达到减少吖啶酯使用量、降低成本的目的。

附图说明

图1是本发明发光动力学曲线图。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例中未注明具体条件者，可按照常规条件的进行；所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例一

将0.1L质量浓度为1％的双氧水溶液和0.9L摩尔浓度为0.5mol/L的硝酸溶液混合，制备得到预激发液样品1；

将1L摩尔浓度为0.6mol/L的氢氧化钠溶液(密度约1.3g/mL)中，加入13.0g月桂醇磺基乙酸酯钠作为增强剂，配制得到激发液样品1。

实施例二

将0.1L质量浓度为1.5％的双氧水溶液和0.9L摩尔浓度为0.4mol/L的硝酸溶液混合，制备得到预激发液样品2；

将1L摩尔浓度为0.4mol/L的氢氧化钠溶液(密度约1.3g/mL)中，加入26gZetasperse179作为增强剂，配制得到激发液样品2。

实施例三

将0.1L质量浓度为1％的双氧水溶液和0.9L摩尔浓度为0.5mol/L的硝酸溶液混合，制备得到预激发液样品3；

将1L摩尔浓度为0.5mol/L的氢氧化钠溶液(密度约1.3g/mL)中，加入13gZetasperse179作为增强剂，配制得到激发液样品3。

实施例四

将0.1L质量浓度为2％的双氧水溶液和1L摩尔浓度为0.8mol/L的硝酸溶液混合，制备得到预激发液样品4；

将1L摩尔浓度为0.6mol/L的氢氧化钠溶液(密度约1.3g/mL)中，加入19.5gZetasperse179作为增强剂，配制得到激发液样品4。

实施例五

将0.1L质量浓度为2％的双氧水溶液和1L摩尔浓度为0.4mol/L的硝酸溶液混合，制备得到预激发液样品5；

将1L摩尔浓度为0.5mol/L的氢氧化钠溶液(密度约1.3g/mL)中，加入6.5g月桂醇磺基乙酸酯钠作为增强剂，配制得到激发液样品5。

实施例六

将0.1L质量浓度为1.5％的双氧水溶液和1L摩尔浓度为0.6mol/L的硝酸溶液混合，制备得到预激发液样品6；

将1L摩尔浓度为0.8mol/L的氢氧化钠溶液(密度约1.3g/mL)中，加入9.8g月桂醇磺基乙酸酯钠作为增强剂，配制得到激发液样品6。

对比例一

对比例一同实施例一，区别在于配制激发液时，不使用月桂醇磺基乙酸酯钠或Zetasperse179作为增强剂，而分别使用10g、15g和20g的TritonX-100配制，得到激发液对照品1-1、1-2和1-3。

对比例二

对比例二同实施例一，区别在于配制激发液时，不使用月桂醇磺基乙酸酯钠或Zetasperse179作为增强剂，而分别使用20g、30g和40g的十六烷基三甲基氯化铵配制，得到激发液对照品2-1、2-2和2-3。

对比例三

对比例三同实施例一，区别在于配制激发液时，不使用月桂醇磺基乙酸酯钠或Zetasperse179作为增强剂，而分别使用10g的TritonX-100和40g十六烷基三甲基氯化铵、15g的TritonX-100和30g十六烷基三甲基氯化铵、20g的TritonX-100和20g十六烷基三甲基氯化铵配制，得到激发液对照品3-1、3-2和3-3。

空白对照(基本发光系统)

空白对照同实施例一，区别在于配制激发液时，不使用月桂醇磺基乙酸酯钠或Zetasperse179作为增强剂，也不使用任何其他类型的表面活性剂作为增强剂。

分析及测试

1、不同配方的预激发液和激发液，对吖啶酯相对发光强度的影响的试验

在反应杯中加入10μL稀释的吖啶酯，分别标记抗甲胎蛋白抗体、甲状腺球蛋白、肌钙蛋白，吖啶酯含量分别为3×10^-8mmol/L、4×10^-8mmol/L和5×10^-8mmol/L。

使用沈阳医陆生物科技有限公司IC2000型全自动化学发光仪，设定检验时间为0.8s进行测定各个配方的相对发光强度，以基本发光系统的相对发光强度为100％计，分别算出各组配方的相对发光强度及相对活性，结果参见表1、表2和表3。

表1：吖啶酯相对发光强度的测试结果(抗甲胎蛋白)

表2：吖啶酯相对发光强度的测试结果(甲状腺球蛋白)

表3：吖啶酯相对发光强度的测试结果(肌钙蛋白)

由表1、表2和表3结果可见，针对不同的标记底物，在吖啶酯含量为3×10^-8mmol/L、4×10^-8mmol/L和5×10^-8mmol/L时，本发明的增强发光系统均可以使相对发光强度提高至250％以上，当吖啶酯含量5×10^-8mmol/L时，针对不同蛋白最高可以提高至395.94％、332.14％和365.15％。虽然对照品组在吖啶酯含量较低时，增强效果较差，但是当吖啶酯含量较高时，也可达到增强250％以上的效果。

2、不同配方的预激发液和激发液，对吖啶酯发光持续时间的影响的试验

测定吖啶酯的强度随时间的变化，样品1、对照品1-3、对照品2-3、对照品3-2和空白对照的发光动力学曲线参见图1。

由图1可见，本发明可以延长发光时间，降低对检验仪器精度的要求，进而减少在检验过程中仪器发生故障的机率，提高检验效率并扩大适用范围。

3、不同配比下的增强发光系统，对吖啶酯相对发光强度的影响

调整预激发液和激发液的质量比例，在反应杯中加入吖啶酯，标记抗甲胎蛋白抗体，其中吖啶酯含量为4×10^-8mmol/L；设定检验时间为0.8s进行不同配比下的相对发光强度，以基本发光系统的相对发光强度为100％计，分别算出各组配方的相对发光强度及相对活性，试验结果参见表4。

表4：不同配比对对吖啶酯相对发光强度的影响结果

由表4可见，当预激发液与激发液的质量比为1:2是，信号值最优优势，增强发光效果最强。

Claims (3)

1.一种吖啶酯增强发光系统，包括预激发液、激发液以及用于与待测物相联接的吖啶酯，其特征在于，所述的预激发液为双氧水溶液和硝酸溶液的混合溶液；所述的激发液为含有0.5％～2.0％的增强剂的氢氧化钠溶液；所述的增强剂为Zetasperse179；

所述的双氧水溶液的质量浓度为1％～2％；

所述的双氧水溶液和硝酸溶液的体积比为1:9～10；

所述的吖啶酯增强发光系统中预激发液、激发液的质量比为1:1.5～2.5；

所述的硝酸溶液的摩尔浓度为0.5mol/L，所述的氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.5mol/L。

2.根据权利要求1所述的一种吖啶酯增强发光系统，其特征在于，所述的激发液为含有1％的增强剂的氢氧化钠溶液。

3.根据权利要求1所述的一种吖啶酯增强发光系统，其特征在于，所述的用于与待测物相联接的吖啶酯在待测样品中的浓度为3×10^-8mmol/L～5×10^-8mmol/L。