CN118058237B - 一种雌雄蚊蛹的分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种雌雄蚊蛹的分离方法，涉及昆虫饲养领域。分离方法包括取蚊虫的幼虫和蚊蛹混合物浸泡在浓度为15wt％‑35wt％的盐水溶液中，浸泡时间为45min‑75min；过滤，将幼虫和蚊蛹混合物清洗、水中浸泡、静置收集蚊蛹；将蚊蛹采用雌雄蚊蛹分离仪进行雌蛹和雄蛹的分离，分别收集雌蛹和雄蛹。本申请通过盐水浸泡方法来特异性杀死蚊幼虫，实现幼虫与蚊蛹的高效分离，不影响蚊蛹的存活和后续羽化，不仅简化雌雄蚊蛹的分离操作，而且增加单次分离蚊蛹的数量，大大提高分离效率，适用于所有基于蚊蛹雌雄大小差异分离原理的分离仪，操作简单，成本低，盐水可多次重复利用，对环境无污染。
Description
技术领域
本申请涉及昆虫饲养领域，尤其涉及一种雌雄蚊蛹的分离方法。
背景技术
昆虫辐照不育技术(SIT)是指通过大量释放经辐照的绝育雄虫，当其与靶标雌虫交配后，使雌虫产下的后代无法发育。通过持续性释放绝育雄虫，可以在区域内压制甚至根除靶标害虫，是一种安全、环保、高效、规模化为特征的虫害控制技术，同时也是全球性疾病防控关键技术研究的新策略之一。而对于如何分离雌雄蚊虫是SIT蚊虫大规模生产过程中最关键的一环。
由于部分蚊虫的雌、雄蛹存在个体大小差异，且蚊蛹抗压性较强，因此雌雄分离常选择在蛹期，以物理分离为主。当前较为常用的雌雄蛹分离装置为Fay-Morlan雌雄蚊蛹分离仪(如说明书附图1所示)，该分离仪由两块钢化玻璃组成，通过四个固定的旋钮可以调节两块玻璃之间的距离，使两块玻璃可贴近形成一定的夹角(上宽下窄)，当物体落入夹角时，体积大搁置在上方，体积小搁置在下方，形成明显的分割界面。现有分离雌雄蛹的操作流程如说明书附图2所示，由于蚊虫个体差异，其生长发育速度并不一致，存在部分幼虫因发育慢尚未形成蚊蛹，因此在进行雌雄蚊蛹分离时候，收集到的蚊蛹也存在着幼虫。幼虫的体型宽度远低于蚊蛹，因此利用分离仪分离时，会形成三个界面，从下往上分别为：幼虫、雄蛹和雌蛹(如说明书附图3所示)，最后通过水流冲刷，并微调旋钮，可以分别收集幼虫、雄蛹和雌蛹，从而实现分离伊蚊雌、雄蛹的目的。
现有的雌雄蛹分离操作时为保证分离准确度，分离仪每次分离数量约为1500-2000只，因此雌、雄蛹中幼虫的存在不仅会降低单次蚊蛹的分离数量，同时也会增加操作过程包括水流冲刷和幼虫收集，从而降低分离效率。
发明内容
本申请提供了一种雌雄蚊蛹的分离方法，由于目前雌雄蚊蛹分离仪分离时样品掺杂的幼虫影响单次蚊蛹分离数量的问题，导致分离效率和用水量增加，通过预先高效分离幼虫，且分离过程不影响蚊蛹的羽化率，提高单次蚊蛹分离载量，节约水资源。
为了解决上述技术问题，本申请目的提供了一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取蚊虫的幼虫和蚊蛹混合物浸泡在浓度为15wt％-35wt％的盐水溶液中，浸泡时间为45min-75min；
(2)随后过滤去除盐水，将幼虫和蚊蛹混合物清洗后浸泡在水中，静置后收集上浮的蚊蛹；
(3)将收集的蚊蛹采用雌雄蚊蛹分离仪进行雌蛹和雄蛹的分离，分别收集雌蛹和雄蛹。
通过采用上述方案，由于蚊虫个体差异，其生长发育速度并不一致，导致收集的蚊蛹中常掺杂有幼虫，影响后续雌雄蚊蛹分离仪单次分离蚊蛹的载量，本申请预先在雌雄蚊蛹分离前浸泡在特定浓度的盐水溶液中，由于蚊蛹的外壳为几丁质结构，对盐水的耐受度优于幼虫，浸泡盐水的过程中使幼虫体内渗透压发生变化进而死亡，且利用蚊蛹不进食而幼虫需要进食的差异特性，进一步加快幼虫的死亡，死亡的幼虫停止活动并下沉，实现与漂浮在水面的蚊蛹分离，盐水的浓度以及浸泡的时间控制不影响蚊蛹的羽化，后续分离所收集的蚊蛹时，单次蚊蛹分离载量高，提高分离效率。
作为优选方案，在步骤(1)中，所述蚊虫为伊蚊、库蚊或按蚊。
作为优选方案，在步骤(1)中，所述蚊虫为白纹伊蚊或埃及伊蚊。
作为优选方案，在步骤(1)中，幼虫和蚊蛹混合物的获取方法为：将蚊卵孵化出幼虫后，进行幼虫标准化饲养，在孵化的第7-9天，将饲养水体过滤，收集幼虫和蚊蛹混合物。
作为优选方案，幼虫标准化饲养的食物包括质量比为(4-8)：(2-4)：1的牛肝粉、虾粉和酵母粉。
作为优选方案，在步骤(2)中，静置收集上浮的蚊蛹后，将下沉的混合物收集再次加水静置，收集上浮的蚊蛹。
作为优选方案，在步骤(2)中，静置时间在5min以上。
作为优选方案，在步骤(2)中，采用分离装置分离幼虫和蚊蛹混合物，分离装置包括顶部呈敞口设置的分离桶和用于放置分离桶的支架，所述分离桶的底部成封闭设置，所述分离桶的底部连通设置有出水管道，所述出水管道设置有阀门。
作为优选方案，在步骤(2)中，所述分离桶的内底部设置有发出光源的灯。
作为优选方案，在步骤(2)中，所述分离桶呈锥形设置，所述分离桶的底部沿顶部方向的直径逐渐增大。
采用分离装置分离幼虫和蚊蛹混合物时，将幼虫和蚊蛹混合物置于分离桶内，加满水，同时开启灯，静置5min以上，由于幼虫死亡后会自然沉降，而蚊蛹具有避光性，在光源的作用下，幼虫沉降在分离桶的底部，蚊蛹漂浮于水面上方，幼虫跟蚊蛹在分离桶内明显分层。打开分离桶底部出水管道的阀门，使底部的幼虫跟随水流先流出，收集于幼虫收集容器内，待幼虫全部排出后，关闭阀门，更换收集容器，收集蚊蛹，提高分离效率。
作为优选方案，在步骤(3)中，每次取1500-2000只蚊蛹，倒入雌雄蚊蛹分离仪中，加水冲刷，微调旋钮，加水冲刷，待雄蛹下降，收集雄蛹，再微调旋钮，加水冲刷，收集雌蛹。
作为优选方案，在步骤(3)中，收集的雄蛹分装入羽化盒中，雄蛹覆盖面积不超过羽化盒面积的2/3，放入羽化笼，羽化为雄蚊。
作为优选方案，在步骤(3)中，所述雌雄蚊蛹分离仪为Fay-Morlan雌雄蚊蛹分离仪。
相比于现有技术，本申请实施例具有如下有益效果：
本申请通过盐水浸泡方法来特异性杀死蚊幼虫，实现幼虫与蚊蛹的高效分离，而不影响蚊蛹的存活和羽化，不仅简化雌雄蚊蛹的分离操作，而且增加单次分离蚊蛹的数量，大大提高雌雄蚊蛹分离效率，适用于所有基于蚊蛹雌雄大小差异分离原理的分离仪，操作简单，成本低，盐水可多次重复利用，对环境无污染。
附图说明
图1：为本申请使用Fay-Morlan雌雄蚊蛹分离仪的正视图和侧视图；
图2：为现有雌雄蚊蛹分离步骤的流程示意图；
图3：为现有雌雄蚊蛹采用Fay-Morlan雌雄蚊蛹分离仪分离后所体现的雌蛹、雄蛹和幼虫分界面；
图4：为本申请一种雌雄蚊蛹的分离方法流程示意图；
图5：为本申请实施例一中白纹伊蚊雌雄蚊蛹经盐水浸泡后采用Fay-Morlan雌雄蚊蛹分离仪分离后所体现的雌蛹、雄蛹分界面；
图6：为本申请实施例一中一种白纹伊蚊雌雄蚊蛹的分离方法步骤(5)分离装置的数码照片；
图7：为本申请实施例一中一种白纹伊蚊雌雄蚊蛹的分离方法步骤(5)分离装置的整体结构示意图；
图8：为本申请实施例一中一种白纹伊蚊雌雄蚊蛹的分离方法步骤(5)分离装置的剖面结构示意图；
其中，说明书附图7-8的附图标记如下：1、分离桶；2、支架；3、出水管道；4、阀门；5、LED灯。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
本申请为提高伊蚊蚊蛹和幼虫分离效率，通过试验不同试剂或物理手段考察对幼虫的致死率以及对蚊蛹羽化的影响率，探索最高效特异性杀灭幼虫同时保证蚊蛹羽化率的技术手段，提高蚊蛹和幼虫的分离效率，试验方案和结果具体如下。
试验例一
探索不同盐水浓度浸泡不同时间对白纹伊蚊幼虫死亡率的影响：
常温条件，分别制备NaCl浓度为0wt％、5wt％、10wt％、15wt％、20wt％、25wt％、30wt％、35wt％的盐溶液，按照每组100只挑选白纹伊蚊幼虫进行分组，分组后的白纹伊蚊幼虫分别浸泡在不同浓度的1L盐水溶液中15min、30min、45min、60min、75min，每组3个重复，观察溶液中幼虫死亡下沉的概率，统计为幼虫死亡率，统计结果如下表1所示。
表1-不同盐水浓度浸泡白纹伊蚊幼虫不同时间的死亡率(％)
| 浓度/时间 | 0wt％ | 5wt％ | 10wt％ | 15wt％ | 20wt％ | 25wt％ | 30wt％ | 35wt％ |
| 15min | 0 | 55.33 | 82 | 94 | 99.67 | 100 | 100 | 100 |
| 30min | 0 | 62 | 93.33 | 99.33 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 45min | 0 | 69.33 | 96.67 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 60min | 0 | 91.33 | 98 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 75min | 0 | 98 | 99.33 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
试验例二
探索不同盐水浓度浸泡对白纹伊蚊蚊蛹羽化率的影响：
常温条件，分别制备NaCl浓度为0wt％、5wt％、10wt％、15wt％、20wt％、25wt％的盐溶液，按照每组100只挑选白纹伊蚊同等比例雌雄蚊蛹进行分组，分组后的白纹伊蚊蚊蛹分别浸泡在不同浓度的1L盐水溶液中60min，每组3个重复，收集蚊蛹装入羽化盒，覆盖面积不超过羽化盒面积的2/3，放入羽化笼，观察蚊蛹羽化为伊蚊的概率，统计为蚊蛹羽化率，统计结果如下表2所示。
表2-不同盐水浓度浸泡白纹伊蚊蚊蛹的羽化率(％)
| 浓度 | 0wt％ | 5wt％ | 10wt％ | 15wt％ | 20wt％ | 25wt％ |
| 雄蛹 | 97.56 | 97.13 | 96.67 | 96.16 | 95.56 | 93.22 |
| 雌蛹 | 98.33 | 99.17 | 98.46 | 96.67 | 95.83 | 92.17 |
试验例三
探索0℃冰水浸泡不同时间对白纹伊蚊幼虫下沉率的影响：
按照每组100只挑选白纹伊蚊幼虫进行分组，分组后的白纹伊蚊幼虫在0℃1L冰水溶液中分别浸泡15min、30min、45min、60min、75min，每组3个重复，观察溶液中幼虫下沉的概率，统计为幼虫下沉率，统计结果如下表3所示。
表3-冰水浸泡白纹伊蚊幼虫不同时间的下沉率(％)
| 温度/时间 | 常温水(25℃) | 冰水(0℃) |
| 15min | 10.52 | 90.77 |
| 30min | 11.34 | 91.48 |
| 45min | 10.40 | 91.84 |
| 60min | 12.36 | 92.18 |
| 75min | 11.86 | 92.88 |
试验例四
探索0℃冰水浸泡不同时间对白纹伊蚊蚊蛹羽化率的影响：
按照每组100只挑选同等比例雌雄白纹伊蚊蚊蛹进行分组，分组后的白纹伊蚊蚊蛹在0℃1L冰水溶液中分别浸泡60min，每组3个重复，恢复常温后，收集蚊蛹装入羽化盒，覆盖面积不超过羽化盒面积的2/3，放入羽化笼，观察蚊蛹羽化为伊蚊的概率，统计为蚊蛹羽化率，统计结果如下表4所示。
表4-不同温度水浸泡埃及伊蚊蚊蛹的羽化率(％)
| 温度/时间 | 常温水(25℃) | 冰水(0℃) |
| 雄蛹 | 97.58 | 90.33 |
| 雌蛹 | 98.25 | 81.65 |
试验例五
探索不同浓度盐酸浓度浸泡不同时间对白纹伊蚊幼虫死亡率的影响：
分别制备浓度为0wt％、5wt％、10wt％、15wt％、20wt％、25wt％、30wt％、35wt％的盐酸溶液，按照每组100只挑选白纹伊蚊幼虫进行分组，分组后的白纹伊蚊幼虫分别浸泡在不同浓度的1L水溶液中15min，每组3个重复，观察溶液中幼虫死亡的概率，统计为幼虫死亡率，统计结果如下表5所示。
表5-不同浓度盐酸溶液浸泡白纹伊蚊幼虫不同时间的死亡率(％)
| 浓度/时间 | 0wt％ | 5wt％ | 10wt％ | 15wt％ | 20wt％ | 25wt％ | 30wt％ | 35wt％ |
| 15min | 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
实施例一
一种白纹伊蚊雌雄蚊蛹的分离方法，包括以下步骤：
(1)白纹伊蚊蚊卵孵化出幼虫后，将幼虫转移至幼虫饲养间，转移至已经加入2L去氯水，水深1.5cm的幼虫饲养盆中，按照表9中每日幼虫食物添加量表进行幼虫标准化饲养，幼虫食物包括质量比为6：3：1的牛肝粉、虾粉和酵母粉，用水混合制成60g/L的溶液，饲养密度4000只/盘时幼虫每日所需食物量如下表9所示，在孵化的第8天，蚊蛹获得率75％以上且无蛹羽化成蚊，将饲养水体过滤，收集幼虫和蚊蛹的混合物；
表9-饲养密度4000只/盘时每日幼虫食物添加量
| Day 1 | Day 2 | Day 3 | Day 4 | Day 5 | Day 6 | Day 7 | Day 8 |
| 20mL | 0mL | 30mL | 40mL | 40mL | 30mL | 0mL | 0mL |
(2)配制15wt％的盐水溶液：将300g盐加入到水中溶解，并定容至2L；
(3)取约4万只幼虫和蚊蛹的混合物，然后浸泡在2L浓度为15wt％-35wt％的盐水中，浸泡时长为45min-75min；
(4)将混合物与盐水过筛(60目)，滤去盐水，然后将筛网中混合物置于1L的清水中浸泡清洗2-3次；
(5)随后将混合物倒入直径25cm，高35cm的白色容器中，加水至30cm，静置5分钟，死去的幼虫会下沉于容器底部，而蚊蛹会上浮于水面，然后利用分离装置将蚊蛹与幼虫分离，将蚊蛹置于收集盒中，待雌雄蚊蛹分离；
(6)收集白色容器中剩余下沉的蚊蛹及幼虫混合物再次加水至30cm，静置5分钟，然后将上浮蚊蛹轻轻倒出至收集盒中；
(7)每次取1500-2000只蚊蛹，倒入到Fay-Morlan雌雄蚊蛹分离仪中，然后加水冲刷，如图5所示，雌雄蛹分离成两个界面，且不存在有第三个幼虫界面，微调旋钮，加水冲刷，下方放置收集盒，待雄蛹下降，收集雄蛹，再微调旋钮，加水冲刷，收集雌蛹；
(8)将雄蛹根据羽化盒大小分装入适量雄蛹，雄蛹覆盖面积不超过羽化盒面积的2/3，放入羽化笼，羽化为雄蚊。
其中，在步骤(5)中，分离装置的结果如图6所示，包括分离桶1和用于竖直放置分离桶的支架2，分离桶1底部呈锥形设置，分离桶1的顶部呈敞口设置，分离桶1底部呈封闭设置，分离桶1靠近底部的桶体呈锥形设置，且底部的直径沿敞口方向逐渐增大，分离桶1的敞口直径为58cm、高度为80cm、容积约为50L，分离桶1的底部呈封闭设置。分离桶1的底部连通开设有出水管道3，出水管道3设置有阀门2，分离桶1的内底部安装设置有发出光源的LED灯5。将含有蚊蛹和幼虫的混合物倒入分离桶1内，加满水后，打开LED灯5，静置5-10分钟。由于幼虫死亡后会自然沉降，而蚊蛹具有避光性，在光源的作用下，幼虫沉降在分离桶的底部，蚊蛹漂浮于水面上方，幼虫跟蚊蛹在分离桶1内明显分层。打开分离桶1底部出水管道3的阀门4，使底部的幼虫跟随水流先流出，收集于幼虫收集容器内，待幼虫全部排出后，关闭阀门4，更换收集容器，收集蚊蛹，提高分离效率。
以上所述的具体实施例，对本申请的目的、技术方案和有益效果进行了进一步的详细说明，应当理解，以上所述仅为本申请的具体实施例而已，并不用于限定本申请的保护范围。特别指出，对于本领域技术人员来说，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取蚊虫的幼虫和蚊蛹混合物浸泡在浓度为15wt％-35wt％的盐水溶液中，浸泡时间为45min-75min；
(2)随后过滤去除盐水，将幼虫和蚊蛹混合物清洗后浸泡在水中分离，静置后收集上浮的蚊蛹；
(3)将收集的蚊蛹采用雌雄蚊蛹分离仪进行雌蛹和雄蛹的分离，分别收集雌蛹和雄蛹。
2.如权利要求1所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述蚊虫为伊蚊、库蚊或按蚊。
3.如权利要求1所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，在步骤(1)中，幼虫和蚊蛹混合物的获取方法为：将蚊卵孵化出幼虫后，进行幼虫标准化饲养，在孵化的第7-9天，将饲养水体过滤，收集幼虫和蚊蛹混合物。
4.如权利要求3所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，幼虫标准化饲养的食物包括质量比为(4-8)：(2-4)：1的牛肝粉、虾粉和酵母粉。
5.如权利要求1所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，在步骤(2)中，静置收集上浮的蚊蛹后，将下沉的混合物收集再次加水静置5min以上，收集上浮的蚊蛹。
6.如权利要求1所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，在步骤(2)中，采用分离装置分离幼虫和蚊蛹混合物，分离装置包括顶部呈敞口设置的分离桶(1)和用于放置分离桶的支架(2)，所述分离桶(1)的底部成封闭设置，所述分离桶(1)的底部连通设置有出水管道(3)，所述出水管道(3)设置有阀门(4)。
7.如权利要求6所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述分离桶(1)的内底部设置有发出光源的灯。
8.如权利要求6所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述分离桶(1)呈锥形设置，所述分离桶(1)的底部沿顶部方向的直径逐渐增大。
9.如权利要求1所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，在步骤(3)中，每次取1500-2000只蚊蛹，倒入雌雄蚊蛹分离仪中，加水冲刷，微调旋钮，加水冲刷，待雄蛹下降，收集雄蛹，再微调旋钮，加水冲刷，收集雌蛹。
10.如权利要求1所述的一种雌雄蚊蛹的分离方法，其特征在于，在步骤(3)中，收集的雄蛹分装入羽化盒中，雄蛹覆盖面积不超过羽化盒面积的2/3，放入羽化笼，羽化为雄蚊。
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