CN118001274A - ADH-503在制备预防和/或治疗SARS-CoV-2介导的疾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医学和药物领域，公开了ADH‑503在制备预防和治疗SARS‑CoV‑2介导的疾病的药物中的应用。本发明首次展示了ADH‑503对抗SARS‑CoV‑2病毒的显著效力。通过利用表达SARS‑CoV‑2刺突蛋白的荧光素标记的伪病毒来进行评估，揭示了ADH‑503能够有效地阻止SARS‑CoV‑2伪病毒颗粒(SARS2pp)的入侵。这一发现指出了ADH‑503作为一种抗SARS‑CoV‑2新药的可能性，可以作为单药治疗或与其他药物联合使用，以预防或治疗由SARS‑CoV‑2引发的感染。

Description

ADH-503在制备预防和/或治疗SARS-CoV-2介导的疾病的药物 中的应用

技术领域

本发明属于生物医学和药物领域，涉及ADH-503作为新冠病毒抑制剂在制备预防和/或治疗严重急性呼吸综合征疾病的药物中的应用，特别涉及ADH-503在制备预防和治疗SARS-CoV-2介导的疾病的药物中的应用。

背景技术

在疫情发展的过程中，疫苗研发和接种成为控制疫情的关键手段。全球范围内的科研机构和制药公司积极开展疫苗研发工作，取得了令人鼓舞的进展。然而，疫苗的分配不均、疫苗犹豫以及病毒变异导致的免疫逃逸等问题仍然存在，这加大了对有效治疗手段的需求。在药物研究方面，科学家们积极寻找能够抑制病毒复制、减轻症状或改善患者预后的药物。这包括已有的药物重新定位、开发新的抗病毒药物以及使用免疫调节剂等策略。针对COVID-19的药物研究成为各国科研机构和制药公司的重要工作方向，以期为控制疫情提供更多的有效手段。

ADH-503，也被称为(Z)-Leukadherin-1choline，是一种针对CD11b的激动剂。CD11b是细胞黏附分子(CAM)的一部分，属于整合素家族的一员，主要在白细胞表面表达，参与细胞黏附和迁移等过程。在免疫系统中，CD11b在调节炎症反应和免疫细胞的迁移至炎症或肿瘤部位中扮演重要角色。ADH-503具有口服活性，这意味着它可以通过口服的方式进入体内发挥作用，这对于患者来说是一个更方便的给药方式。作为一种变构的激动剂，ADH-503能够与CD11b结合并诱导其结构变化，从而激活CD11b的信号传导功能。在肿瘤微环境中，巨噬细胞是多功能的免疫细胞，可以根据周围环境的信号极化为不同的表型。与肿瘤相关的巨噬细胞(TAMs)通常极化为M2型，这种表型的巨噬细胞具有促进肿瘤生长和免疫抑制的功能。ADH-503通过激活CD11b，可以促使这些巨噬细胞重新极化为M1型，这种表型的巨噬细胞具有抗肿瘤活性和促进免疫应答的功能。此外，ADH-503还能减少肿瘤浸润性免疫抑制骨髓细胞(例如骨髓源性抑制细胞，MDSCs)的数量。MDSCs是一类具有强烈免疫抑制功能的细胞，它们在肿瘤微环境中积聚，并通过多种机制抑制T细胞和其他免疫细胞的功能，从而帮助肿瘤逃避免疫监视。ADH-503还能增强树突状细胞(DCs)的反应。树突状细胞是免疫系统中的主要抗原呈递细胞，对于启动和调节免疫应答至关重要。通过增强DCs的功能，ADH-503可能有助于提高免疫系统对肿瘤的识别和攻击能力。尽管ADH-503的这些作用机制在理论上具有潜在的抗肿瘤效果，但是其在临床上的安全性和疗效仍需通过临床试验进行验证。

ADH-503在抗SARS-CoV-2病毒感染中的应用尚没有相关的研究和报道。

发明内容

本发明的目的是提供ADH-503的医药新用途。

ADH-503，CAS号：2055362-74-6，分子式为C₂₇H₂₈N₂O₅S₂，化学结构式如下所示：

本发明所提供的ADH-503的医药新用途为ADH-503在制备如下产品中的应用：

1)抗新冠病毒感染的药物；

2)新冠病毒抑制剂；

3)预防和/或治疗SARS-CoV-2感染的药物；

4)预防和/或治疗SARS-CoV-2介导的疾病的药物；

上述4)中，所述SARS-CoV-2介导的疾病包括严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)引起的呼吸道疾病，更具体可为COVID-19。

所述应用中，ADH-503的浓度大于8μM，具体可为8μM-20μM，更具体可为10μM-20μM。

本项研究首次展示了ADH-503对抗SARS-CoV-2病毒的显著效力。研究者通过利用表达SARS-CoV-2刺突蛋白的荧光素标记的伪病毒来进行评估，揭示了ADH-503能够有效地阻止SARS-CoV-2伪病毒颗粒(SARS2pp)的入侵。这一发现指出了ADH-503作为一种抗SARS-CoV-2新药的可能性，可以作为单药治疗或与其他药物联合使用，以预防或治疗由SARS-CoV-2引发的感染。

附图说明

图1为本发明实施例1中ADH-503不同浓度对细胞存活率的影响。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法，研究了ADH-503处理24小时后HEK-293T-ACE2细胞的存活率，这些细胞在不同浓度的ADH-503作用下进行测试。

图2表明ADH-503对SARS-CoV-2病毒感染的抑制效果。在图2A和2B中，HEK-293T-ACE2细胞在接触SARS-CoV-2伪病毒颗粒(SARS2pp)前2.5小时被给与ADH-503处理。接着，替换细胞培养基，细胞随后以0.3的多态性感染指数(MOI)被伪病毒颗粒感染，持续24小时。荧光素酶活性(图2A)和免疫荧光强度(图2B)通过免疫荧光技术进行了检测。图像比例尺为100μm。数据表示为生物学重复(CCK-8：n＝3；免疫荧光：n＝6)的平均值±SEM。统计分析结果显示*p<0.05,***p<0.001和n.s.：不显着(单因素方差分析(ANOVA)和Dunnett’s事后检验)

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

材料和方法

实验设计

本研究旨在评估ADH-503对抑制新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染的作用。研究采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)来测试ADH-503对细胞的毒性作用，并运用免疫荧光技术来评价ADH-503对新冠病毒感染能力的影响。

假病毒、细胞和试剂

SARS-CoV-2XBB.1.16假病毒由AMMS生物信息学中心的王学军教授提供，并得到了李恬的实验协助。

HEK-293T-ACE2细胞株在Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM；Gibco,04242)中进行培养，该培养基添加了10％的胎牛血清(FBS；Gibco,FND500)和1％的抗生素混合物(青霉素-链霉素；Macgene)。细胞在37℃、5％ CO₂饱和的湿润孵箱中进行孵育。

将ADH-503(MedChemExpress，目录号HY-15701B)配制成40mM的储备溶液，使用二甲基亚砜(DMSO；Innochem，目录号D3855)作为溶剂，储存在-80℃超低温冰箱中。在实验操作中，该储备溶液被进一步用Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)稀释至所需的实验浓度范围(0、0.5、1、2、4、6、8、10、20、40、60μM)，进行CCK-8细胞毒性评估。对于抗病毒药物的干预实验，ADH-503则是使用opti-MEM(Gibco，目录号31985-070)进行稀释，以获得不同的目标终浓度(0、2、4、6、8、10、20、40μM)。

细胞培养及毒性检测

HEK-293T-ACE2细胞以3×10⁵cells/mL的密度接种于96孔板，每孔体积为100μL，并在37℃的孵化器中过夜培养。然后，用不同浓度的ADH-503(浓度范围0至60μM)处理细胞，37℃条件下孵育24小时。使用Cell Counting Kit-8(CCK-8；Bimake，产品编号C6005M)进行细胞活性评估，依照说明书的指示进行。实验步骤包括将CCK-8试剂与DMEM按1:9比例混合，然后向每个含有细胞的孔中加入70μL的混合试剂。接着，将孔板放入37℃孵化器中继续孵育2小时。最终在450nm的波长下测定各孔的光密度(OD值)，以此来评价细胞的活性。

假病毒感染及药物干预作用

在进行伪型病毒感染实验时，首先将HEK293/hACE细胞按照3×10⁵细胞/mL的浓度接种到96孔板上，每孔加入100μL的细胞悬液，并将孔板放入37℃的孵育器中进行过夜培养。接下来，使用感染度(Multiplicity of Infection,MOI)为0.3的伪型病毒颗粒对细胞进行感染，感染过程持续24小时。感染后，利用Steady-Lumi^TMII Luciferase Assay Kit(Beyotime)来测定细胞中的荧光素酶活性。在探究ADH-503抗病毒入侵及其作用时间的实验中，HEK-293T-ACE2细胞在SARS-CoV-2伪型病毒颗粒(SARS2pp)感染前2.5小时用ADH-503处理细胞。

统计分析

对于多组的比较，使用了单因素方差分析(ANOVA)以及Dunnett's事后检验来进行多重比较(GraphPad Prism软件，美国)。数据表示为平均值±SEM。

实施例1、ADH-503细胞毒性

在研究ADH-503不同浓度对细胞存活率的影响时，进行了细胞活力测试。研究发现，在HEK-293T-ACE2细胞上，ADH-503浓度在20μM以下时，细胞并未表现出毒性效应。ADH-503在HEK-293T-ACE2细胞上的半数致死浓度(CC50)为110.80μM(图1)。

实施例2、ADH-503抑制了SARS-CoV-2病毒的感染

在评价ADH-503对SARS-CoV-2感染影响的研究中，对HEK-293T-ACE2细胞进行了SARS2pp感染实验。实验结果表明，在6μM、8μM、10μM、20μM四个不同浓度的ADH-503组，SARS2pp的感染抑制率分别可达约26％、80％、96％和99％(图2A和2B)。

通过对假病毒的感染性进行评估，观察到ADH-503在安全的浓度范围内显著降低了SARS2pp的感染率。进一步分析显示，ADH-503的半数最大效应浓度(EC50)为6.83μM，这表明ADH-503可能是一个有效的SARS2pp感染阻断剂(如图2A和2B)。计算得出ADH-503的选择性指数为16，说明它在抑制目标活性方面有效，同时对细胞的毒性较低，提供了一个较宽的安全浓度范围。一般来说，选择性指数高于1的化合物被视为具有研究和开发潜力。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。

Claims (9)

1.ADH-503在制备抗新冠病毒感染的药物中的应用。

2.ADH-503在制备新冠病毒抑制剂的药物中的应用。

3.ADH-503在制备预防和/或治疗SARS-CoV-2感染的药物中的应用。

4.ADH-503在制备预防和/或治疗SARS-CoV-2介导的疾病的药物中的应用。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，ADH-503的化学结构式如下所示：

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述SARS-CoV-2介导的疾病包括严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型引起的呼吸道疾病。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述SARS-CoV-2介导的疾病为COVID-19。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的应用，其特征在于，所述应用中，ADH-503的浓度为8μM-20μM。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的应用，其特征在于，所述应用中，ADH-503的浓度为10μM-20μM。