CN117481996B - 一种含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物及其应用，所述温和抗老化组合物包括维A醇、甘醇酸、重组胶原蛋白、裂褶菌多糖和硫酸软骨素。本发明创造性地将维A醇和甘醇酸两种成分进行联合，同时配合重组胶原蛋白共同发挥抗衰老的功效。同时，考虑到维A醇和甘醇酸对皮肤具有一定的刺激性，本发明将重组胶原蛋白、裂褶菌多糖和硫酸软骨素的组合作为抗刺激组分，三者在降低皮肤刺激性方面具有显著的协同增效作用，该组合物能够很好地兼顾优异的抗衰功效和优异的温和性，将其应用于制备化妆品具有前景。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，涉及一种含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物及其应用。
背景技术
衰老又称老化，是生命活动进程中的必经阶段，皮肤衰老在机体衰老过程中表现最为明显。皮肤衰老不仅会出现皱纹、松弛和色素沉着，同时还会出现表皮新陈代谢降低、表皮修复受损能力和屏障保护能力减弱等问题。具有抗衰功效的成分很多，但少有成分能够兼顾高效和温和。例如羟酸类成分能够改善光老化或自然老化的皮肤外观，但是对皮肤有一定的刺激性，使用后会引起不同程度的皮肤发红或刺痛感。
随着化妆品市场的蓬勃发展，消费者不仅对抗衰、美白等功效有需求，对于护肤产品的温和性和无刺激性的要求也越来越高。中国的化妆品市场是全世界最大的新兴市场，护肤美容品的大量涌现使人们目不暇接，人们除了学会用好的化妆品之外，也更加关注化妆品的效果和安全性。
影响皮肤刺激的因素包括种族差别、年龄、皮肤健康状态等内在因素和气候、化妆品刺激性成分等外在因素。皮肤刺激可能造成皮肤屏障受损、神经功能异常和炎症反应等。对于敏感肌肤人群，皮肤刺激可能造成皮肤更为干燥、容易紧绷和发红，甚至轻微刺激即产生瘙痒、脱屑甚至烧灼和刺痛等感觉，严重者产生不良情绪或精神症状。
因此，若能开发一种能够兼顾高效抗老化和温和无刺激功效的产品是非常有意义的。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物及其应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物，所述温和抗老化组合物包括维A醇、甘醇酸、重组胶原蛋白、裂褶菌多糖和硫酸软骨素。
维A醇是一种由3,7-二甲氧基维生素A衍生物组成的脂溶性维生素，是维生素A的一种活性形式。维生素A醇能够促进胶原蛋白的合成，可以促进皮肤新陈代谢，增加皮肤弹性，具有预防和淡化皱纹的作用。
甘醇酸可以渗透到深层肌肤，可以去角质，温和地溶解死皮细胞，改善皮肤纹理、颜色和毛孔大小，还能提高皮肤中胶原蛋白和弹性蛋白的水平，帮助抵御皱纹。
本发明创造性地将维A醇和甘醇酸两种成分进行联合，同时配合重组胶原蛋白共同发挥抗衰老的功效，三者在抗衰方面具有潜在的相互促进作用，无论是维A醇和甘醇酸之间，还是其与重组胶原蛋白之间都具有协同增效作用。同时，考虑到维A醇和甘醇酸对皮肤具有一定的刺激性，本发明将重组胶原蛋白、裂褶菌多糖和硫酸软骨素的组合作为抗刺激组分，三者在降低皮肤刺激性方面具有显著的协同增效作用，该组合物能够很好地兼顾优异的抗衰功效和优异的温和性，将其应用于制备化妆品具有前景。
优选地，所述温和抗老化组合物以质量份数计包括维A醇0.1-0.5份、甘醇酸0.5-2份、重组胶原蛋白0.01-1份、裂褶菌多糖0.1-0.5份和硫酸软骨素0.1-3份。
基于上述各成分之间的潜在相互作用，当上述五种成分以特定的质量配比关系进行组合时，其在降低皮肤刺激性、提高皮肤抗衰性上具有更好的效果。
所述维A醇的质量份数可以选择为0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份、0.35份、0.4份、0.45份、0.5份等；所述甘醇酸的质量份数可以选择为0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、1份、1.2份、1.5份、1.8份、2份等；所述重组胶原蛋白的质量份数可以选择为0.01份、0.03份、0.05份、0.08份、0.1份、0.2份、0.4份、0.5份、0.8份、1份等；所述羧甲基裂褶多糖的质量份数可以选择为0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份、0.35份、0.4份、0.45份、0.5份等；所述硫酸软骨素的质量份数可以选择为0.1份、0.2份、0.3份、0.5份、0.8份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份等；上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，编码所述重组胶原蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的序列。
相较于其他来源的重组胶原蛋白，本发明还发现上述特定来源的重组胶原蛋白在补充皮肤胶原、抗氧化、抗衰老、降低皮肤刺激性方面的效果更优。
SEQ ID NO:1：
GGGCCTCAAGGTATTGCTGGACAGCGTGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTCCTGGCCCCTCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCCTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGTCCCCCTGGTCCCATGGGCCCCCCTGGATTGGCTGGACCCCCTGGTGAATCTGGACGTGAGGGGGCTCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGAGACGGTTCTCCTGGCGCCAAGGGTGACCGTGGTGAGACCGGCCCCGCTGGACCCCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCTGGCCCCGTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCCCGCCGGAGAACGAGGTGGCCCTGGAGGACCTGGCCCTCAGGGTCCTCCTGGAAAGAATGGTGAAACTGGACCTCAGGGACCCCCAGGGCCTACTGGGCCTGGTGGTGACAAAGGAGACACAGGACCCCCTGGTCCACAAGGATTACAAGGCTTGCCTGGTACAGGTGGTCCTCCAGGAGAAAATGGAAAACCTGGGGAACCAGGTCCAAAGGGTGATGCCGGTGCACCTGGAGCTCCAGGAGGCAAGGGTGATGCTGGTGCCCCTGGTGAACGTGGACCTCCTGGATTGGCAGGGGCCCCAGGACTTAGAGGTGGAGCTGGTCCCCCTGGTCCCGAAGGAGGAAAGGGTGCTGCTGGTCCTCCTGGGCCACCTGGTGCTGCTGGTACTCCTGGTCTGCAAGGAATGCCTGGACCTGGTCCTTGCTGTGGTGGTTAA。
第二方面，本发明提供根据第一方面所述的含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物在制备化妆品中的应用。
优选地，所述含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物在所述化妆品中的质量百分含量为0.1-10％，例如0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、7％、8％、9％、10％等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
第三方面，本发明提供一种具有抗衰老功效的精华乳，所述具有抗衰老功效的精华乳的制备原料以质量百分含量计包括：第一方面所述的含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物0.1-10％、乳化剂1-5％、增稠剂0.1-2％、多元醇5-20％和水50-95％。
所述温和抗老化组合物的质量百分含量可以为0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、7％、8％、9％、10％等；所述乳化剂的质量百分含量可以为1％、2％、3％、4％、5％等；所述增稠剂的质量百分含量可以为0.1％、0.5％、0.7％、0.8％、1％、1.2％、1.4％、1.5％、1.6％、1.8％、2％等；所述多元醇的质量百分含量可以为5％、6％、8％、10％、12％、14％、15％、17％、18％、19％、20％等；所述水的质量百分含量可以为50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％等；上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述乳化剂包括鲸蜡醇磷酸酯钾、聚山梨醇酯-60、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、山梨坦硬脂酸酯、山梨醇聚醚-30四油酸酯、聚山梨醇酯-20、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯/山梨坦橄榄油酸酯或鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述增稠剂包括聚丙烯酸钠、聚丙烯酸钠接枝淀粉、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物或黄原胶中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述多元醇包括甘油、1,3-丙二醇、泛醇、1,2-己二醇或丁二醇中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述具有抗衰老功效的精华乳的制备原料以质量百分含量计还包括：植物源调理剂1-10％、pH调节剂0.1-2％、螯合剂0.01-0.5％、抗氧化剂0.05-0.5％、芳香剂0.1-0.5％中的任意一种或至少两种的组合。
所述植物源调理剂的质量百分含量可以选择为1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％等；所述pH调节剂的质量百分含量可以选择为0.1％、0.3％、0.5％、0.8％、1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％等；所述螯合剂的质量百分含量可以选择为0.01％、0.03％、0.05％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％等；所述抗氧化剂的质量百分含量可以选择为0.05％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％等；所述芳香剂的质量百分含量可以选择为0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％等；上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述植物源调理剂选自紫苏叶提取物、水飞蓟提取物、香菇提取物中的任意一种或至少两种的组合；优选紫苏叶提取物、水飞蓟提取物和香菇提取物的组合。
当前述组合物用于制备化妆品时，进一步加入紫苏叶提取物、水飞蓟提取物和香菇提取物成分，能够进一步提高产品的舒缓抗刺激功效。
第四方面，本发明提供根据第三方面所述的具有抗衰老功效的精华乳的制备方法，所述制备方法包括：
将水、部分多元醇混合于水相锅中，加热至60-80℃，保温10-40min，降温至25-40℃，然后与维A醇、甘醇酸、重组胶原蛋白、硫酸软骨素混合，得到水相混合物；
将乳化剂、增稠剂、剩余多元醇、裂褶菌多糖、及剩余原料混合于乳化锅中，在30-50℃下均质5-15min，然后与水相混合物混合，在25-40℃下均质5-30min，得到所述具有抗衰老功效的精华乳。
所述60-80℃中的具体点值可以选择为60℃、65℃、70℃、75℃、80℃等；所述10-40min中的具体点值可以选择为10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min等；所述25-40℃中的具体点值可以选择为25℃、30℃、35℃、40℃等；所述30-50℃中的具体点值可以选择为30℃、32℃、33℃、35℃等；所述5-15min中的具体点值可以选择为5min、6min、7min、8min、10min、13min、15min等；所述5-30min中的具体点值可以选择为5min、6min、7min、8min、10min、13min、15min、20min、25min、30min等；上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明创造性地将维A醇和甘醇酸两种成分进行联合，同时配合重组胶原蛋白共同发挥抗衰老的功效，三者在抗衰方面具有潜在的相互促进作用，无论是维A醇和甘醇酸之间，还是其与重组胶原蛋白之间都具有协同增效作用。同时，考虑到维A醇和甘醇酸对皮肤具有一定的刺激性，本发明将重组胶原蛋白、裂褶菌多糖和硫酸软骨素的组合作为抗刺激组分，三者在降低皮肤刺激性方面具有显著的协同增效作用，该组合物能够很好地兼顾优异的抗衰功效和优异的温和性，将其应用于制备化妆品具有前景。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
下述内容中涉及的组合物产品中各组分的质量份数均以市售原料中实际有效成分含量来计算。
下述内容中涉及的裂褶菌多糖来源于陕西天之诚生物科技有限公司的型号为TZCSW02905的产品；硫酸软骨素来源于广州华钰生物科技有限公司的产品；紫苏叶提取物来源于兰州沃特莱斯生物科技有限公司的产品；水飞蓟提取物来源于兰州沃特莱斯生物科技有限公司的产品；香菇提取物来源于兰州沃特莱斯生物科技有限公司的产品；聚丙烯酸钠来源于广州天佳生物科技有限公司的产品；黄原胶来源于上海谱振生物有限公司的产品。
下述内容中涉及的重组胶原蛋白使用的是制备例制得的产品，制备例中的pET-28a(+)载体购自麦克林；BL21(DE3)化学感受态细胞为购自默克货号为CMC0014-4X40UL的商品。
制备例
本制备例提供一种重组胶原蛋白冻干粉，其制备方法参照ZL 202310123476.3中制备例1公开的方法进行，具体如下：
(1)重组质粒构建：按照SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，选择表达载体大肠杆菌宿主适用的pET-28a(+)载体，送至测序公司进行合成，制得重组胶原蛋白表达载体pET-28a-1。
(2)重组发酵菌株构建：将pET-28a-1表达载体使用化学转化法转至大肠杆菌(BL21(DE3))感受态细胞中，利用琼脂糖凝胶电泳筛选转化后平板菌落中的阳性克隆子，将筛选出的阳性克隆子转接至2mL LB培养基，37℃，200rpm培养12h，培养后的菌液使用体积分数为50％的甘油稀释1倍，分装到冻存管中，冻存在-80℃条件下，制得重组胶原蛋白发酵菌株。
(3)重组发酵菌株发酵培养：将10μL重组胶原蛋白发酵菌液涂布于固体LB平板，37℃培养箱培养12h后，挑选单克隆，接种于50mL含50μg/mL卡那霉素含量的LB液体培养基中，置于摇床中37℃，200rpm培养14h，然后以1:100的比例接种200mL含50μg/mL卡那霉素含量的LB液体培养基中，37℃培养至菌液OD＝0.6后加入IPTG，使终浓度达到1mM，继续培养4h，随后4℃，4000rpm，离心15min收集菌体。
(4)重组胶原蛋白纯化：将菌体超声破碎后离心，沉淀使用TritonX-100洗涤液洗涤，再次离心去除上清，沉淀加入6M盐酸胍，并调节pH到8，充分溶解沉淀后将溶解液过镍亲和层析树脂，使用20mM、50mM、100mM、200mM、500mM浓度梯度咪唑溶液依次洗脱，洗脱液使用蛋白浓缩柱浓缩后，收集浓缩液透析过夜(透析袋，RC膜，14KD，扁平宽度44mm(生工F600112))，随后使用BCA试剂盒检测蛋白浓度，并按每5mg蛋白加入体积浓度5％的甘露醇水溶液0.5mL的比例与甘露醇水溶液混匀，随后使用冻干机在-40℃预冻10min，最后-35℃冻干，得到重组胶原蛋白冻干粉。
实施例1
本实施例提供一种温和抗老化组合物，其以质量份数计由以下组分组成：维A醇0.2份、甘醇酸0.7份、重组胶原蛋白0.05份、裂褶菌多糖0.2份、硫酸软骨素0.3份。
实施例2
本实施例提供一种温和抗老化组合物，其以质量份数计由以下组分组成：维A醇0.1份、甘醇酸1份、重组胶原蛋白0.01份、裂褶菌多糖0.5份、硫酸软骨素1份。
实施例3
本实施例提供一种温和抗老化组合物，其以质量份数计由以下组分组成：维A醇0.4份、甘醇酸0.5份、重组胶原蛋白0.05份、裂褶菌多糖0.1份、硫酸软骨素0.4份。
对比例1
本对比例提供一种组合物，其与实施例1的区别仅在于不含有维A醇，甘醇酸的质量份数为0.9份，其他组分及含量均保持不变。
对比例2
本对比例提供一种组合物，其与实施例1的区别仅在于不含有甘醇酸，维A醇的质量份数为0.9份，其他组分及含量均保持不变。
对比例3
本对比例提供一种组合物，其与实施例1的区别仅在于不含有重组胶原蛋白，将其质量份数分摊至甘醇酸的质量上，其他组分及含量均保持不变。
对比例4
本对比例提供一种组合物，其与实施例1的区别仅在于不含有裂褶菌多糖，硫酸软骨素的质量份数为0.5份，其他组分及含量均保持不变。
对比例5
本对比例提供一种组合物，其与实施例1的区别仅在于不含有硫酸软骨素，裂褶菌多糖的质量份数为0.5份，其他组分及含量均保持不变。
对比例6
本对比例提供一种组合物，其与实施例1的区别仅在于不含有重组胶原蛋白，将其质量份数分摊至裂褶菌多糖的质量上，其他组分及含量均保持不变。
应用例1
本应用例提供一种精华乳，其配方包括如下成分：
其制备方法为：
(1)将水、甘油混合于水相锅中，加热至70℃，保温20min，降温至35℃，然后与组合物中的维A醇、甘醇酸、重组胶原蛋白、硫酸软骨素混合，得到水相混合物；
(2)将乳化剂、增稠剂、剩余多元醇、裂褶菌多糖混合于乳化锅中，在45℃下均质10min，然后与水相混合物混合，在35℃下均质20min，调节pH值，得到精华乳。
应用例2-3
本应用例提供两种精华乳，其配方与应用例1的区别仅在于将实施例1的温和抗老化组合物替换为等量的实施例2-3制得的抗老化组合物，其他组分及含量保持不变。
其制备方法为：
(1)将水、甘油混合于水相锅中，加热至65℃，保温30min，降温至30℃，然后与组合物中的维A醇、甘醇酸、重组胶原蛋白、硫酸软骨素混合，得到水相混合物；
(2)将乳化剂、增稠剂、剩余多元醇、裂褶菌多糖混合于乳化锅中，在40℃下均质15min，然后与水相混合物混合，在30℃下均质25min，调节pH值，得到精华乳。
对比应用例1-6
对比应用例1-6提供六种精华乳，其配方与应用例1的区别仅在于将实施例1的温和抗老化组合物替换为等量的对比例1-6制得的组合物，其他组分及含量保持不变。其制备方法参照应用例1的方法。
应用例4
本应用例提供一种精华乳，其配方包括如下成分：
其制备方法为：
(1)将水、甘油混合于水相锅中，加热至70℃，保温20min，降温至35℃，然后与组合物中的维A醇、甘醇酸、重组胶原蛋白、硫酸软骨素混合，得到水相混合物；
(2)将乳化剂、增稠剂、剩余多元醇、裂褶菌多糖混合于乳化锅中，在45℃下均质10min，然后与水相混合物以及植物提取物混合，在35℃下均质20min，调节pH值，得到精华乳。
应用例5
本应用例提供一种精华乳，其配方与应用例4的区别仅在于缺少紫苏叶提取物，将其质量按比例分配至水飞蓟提取物、香菇提取物的质量上，其他组合及含量保持不变。
应用例6
本应用例提供一种精华乳，其配方与应用例4的区别仅在于缺少水飞蓟提取物，将其质量按比例分配至紫苏叶提取物、香菇提取物的质量上，其他组合及含量保持不变。
应用例7
本应用例提供一种精华乳，其配方与应用例4的区别仅在于缺少香菇提取物，将其质量按比例分配至水飞蓟提取物、紫苏叶提取物的质量上，其他组合及含量保持不变。
测试例1
鸡胚绒毛尿囊膜血管试验：
(1)实验条件
鸡胚：SPF级白莱杭鸡。
培养条件：孵箱温度37.5±0.5℃，相对湿度55％～70％。
试剂和对照：阳性对照(PC1)：1.0％SDS溶液；
阳性对照(PC2)：0.1mol/LNaOH溶液；
阴性对照(NC)：0.9％NaCl溶液；
测试样品(TA)：用去离子水将实施例1-3及对比例1-6制得的产品进行稀释至5％即得。
(2)实验方法
CAM制备：购买0d龄鸡胚，孵化过程中，每天翻动一次，孵化至5d龄时，检查鸡胚发育状态，6天时，剥去蛋壳部分，暴露白色蛋膜；小心用镊子去除内膜，确保血管膜不受损。
正式试验：每组6只鸡胚，取受试物原样粉碎成粉末，在刻度容器中(如微量离心管)经轻挤压后体积为0.3mL，直接作用于CAM，确保至少50％的CAM表面被受试物覆盖，作用3min后，用生理盐水轻轻冲洗CAM膜上的受试物，冲洗操作可能很快将CAM膜上轻度的出血变化掩盖，因此应在30s冲洗完成后观察结果，观察每种毒性效应变化的程度，精确到秒，包括出血、凝血和血管融解3种反应，并记录反应的程度。阳性对照和阴性对照采用相同的操作过程。
数据分析：记录每种反应的严重程度，进行分级和记分，出血根据严重程度不同，可分为无出血(0分)，轻度出血(1分)，中度出血(2分)，重度出血(3分)；凝血根据严重程度分为无凝血(0分)，轻度凝血(1分)，中度凝血(2分)，重度凝血(3分)；血管融解根据严重程度分为无血管融解(0分)，轻度血管融解(1分)，中度血管融解(2分)，重度血管融解(3分)。
根据以下公式计算终点评分(ES)，结果保留小数点后两位：每只鸡胚记分＝每只鸡胚观察到的出血、凝血和血管融解程度的和；ES＝6只鸡胚得分的数学总和。根据ES数值按下表对受试物眼刺激性进行分类。
| 终点评分 | 刺激性分类 |
| 0＜ES＜6 | 无刺激性 |
| 6≤ES≤12 | 轻刺激性 |
| 12＜ES＜16 | 中度刺激性 |
| ES≥16 | 强刺激性/腐蚀性 |
被测样品额终点评分ES值，结果如表1所示。
表1
| 组别 | 终点评分 | 组别 | 终点评分 |
| 阳性对照1 | 18 | 阳性对照2 | 18 |
| 阴性对照 | 0 | 实施例1 | 3 |
| 实施例2 | 4 | 实施例3 | 4 |
| 对比例1 | 3 | 对比例2 | 8 |
| 对比例3 | 13 | 对比例4 | 11 |
| 对比例5 | 9 | 对比例6 | 11 |
由表1数据结果可知，本发明所涉及的组合物刺激分类为无刺激性，与对比例4-6的结果相比，重组胶原蛋白、裂褶菌多糖和硫酸软骨素能够有效降低组合物的刺激性，且裂褶菌多糖和硫酸软骨素之间，以及其与重组胶原蛋白之间存在显著的协同增效作用。
测试例2
透明质酸酶体外抑制试验：
透明质酸是组织基质内限制水分及其他胞外物质扩散的成分，被透明质酸酶水解后，细胞间则变为非粘性，引起细胞脱颗粒和合成的新介质渗出，发挥生物效应，导致速发型过敏反应的发生。透明质酸酶是过敏反应的参与者，与过敏有强相关作用，可通过透明质酸酶的抑制活性来评价产品的抗敏效果。
考察实施例1-3及对比例1-6的体外抗敏功效，采用透明质酸酶抑制法。将实施例1-3及对比例1-6制得的产品分别用去离子水稀释配制成浓度为5％的溶液作为样品溶液。
取0.1mL CaCl2溶液(0.25mmol/L)和0.5mL透明质酸酶液(100U/mL)于37℃水浴反应20min；加入提取液0.5mL，保温20min；再加入0.5mL透明质酸钠溶液(0.5g/L),反应30min后取出冷却5min；加入0.1mL氢氧化钠溶液(0.4mol/L)和0.5mL乙酰丙酮溶液(3.5mL乙酰丙酮溶于50mL的1.0mol/L碳酸钠溶液中)，沸水浴15min后立即转移至冰水浴5min；滴加1mL埃尔利希试剂(0.8g对-二甲基氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15mL无水乙醇中)，并用3mL无水乙醇稀释，25℃放置20min显色，于540nm处测定其吸光度，并以甘草酸二钾为对照。
按照以下公式计算对透明质酸酶抑制率：
透明质酸酶抑制率＝{[(A－B)－(C－D)]/(A-B)}×100％
式中：A——对照溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)；B——对照空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)；C——样品溶液吸光度；D——样品空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。
考察各组样品对透明质酸酶的抑制率，结果如表2所示：
表2
| 样品名称 | 对透明质酸酶的抑制率(％) |
| 实施例1 | 42.7 |
| 实施例2 | 38.4 |
| 实施例3 | 40.5 |
| 对比例1 | 43.4 |
| 对比例2 | 39.6 |
| 对比例3 | 21.7 |
| 对比例4 | 29.1 |
| 对比例5 | 34.3 |
| 对比例6 | 25.5 |
由表2可知，本发明所涉及的组合物对透明质酸酶具有一定程度的抑制效果，抑制率在38％以上，这说明该组合物能够缓解或抑制过敏现象。且组合物中的重组胶原蛋白、裂褶菌多糖和硫酸软骨素在上述功效方面具有显著的协同增效作用。
测试例3
皮肤弹性评价试验：
(1)受试者：年龄18-50岁之间、非体质高敏感的共140名志愿者(男女比例1:4)，随机分为14组，每组2名男性和8名女性。
测试前准备：受试者双手前臂内侧做好测量区域标记，实验区域至少3cm×3cm，每个测试区域之间间隔至少1cm。
受试样品：应用例1-7和对比应用例1-6制得的乳液。
(2)试验过程：将13组受试样品按2ml/cm2的用量进行单次涂布(空白组为纯水)。使用乳胶手套将试样均匀涂布于试验区，轻轻拍打直至吸收。每天使用一次，坚持使用28天，在第14天进行皮肤弹性的测定，使用统一的洁面产品对面部进行彻底清洁后，用纸巾轻轻拭干，在室温为22℃±2℃，相对湿度为40±2％的房间内，静待15分钟后将皮肤弹性测试仪探头垂直轻触待测区域开始测试，直至测试循环结束移开探头。每个待测区域取3三点进行测定，结果如表3所示。在第28天进行抗皱效果的测定，使用统一的洁面产品对面部进行彻底清洁后，用纸巾轻轻拭干，在室温为22℃±2℃，相对湿度为40±2％的房间内，静待15分钟后用VISIA面部图像分析仪拍摄测试者的面部照片，分析区域应尽量避免反光区域和头发的干扰。对受试者面部(包括正面、左侧面、右侧面)进行拍摄，将所得的绝对分值进行数据统计，记录受试者面部的皱纹的检测数据。试验结果如表3所示。
表3
由表3数据结果可知，本发明所涉及的组合物具有较好的恢复皮肤弹性效果，其中甘醇酸、维A醇在促进皮肤弹性功效上相互促进，且与重组胶原蛋白共同发挥作用使其效果达到最优。
测试例4
感官评价试验：
测试例3同一批志愿者，使用后分别对产品的抗衰性和温和性进行评分，其中最高分为5分，最低分为1分，打分区间1-5，评价结果如表4所示(平均分值)：
表4
由表4可知，本发明所涉及的组合物及其制备的化妆品兼具优异的抗衰性和温和性，在化妆品中添加的植物提取物能够进一步提升组合物的温和效果，且紫苏叶提取物、水飞蓟提取物、香菇提取物在提高产品温和性上具有一定的协同增效作用。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的技术方案，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
Claims (11)
1.一种含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物，其特征在于，所述温和抗老化组合物以质量份数计包括维A醇0.1-0.5份、甘醇酸0.5-2份、重组胶原蛋白0.01-1份、裂褶菌多糖0.1-0.5份和硫酸软骨素0.1-3份；编码所述重组胶原蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的序列。
2.根据权利要求1所述的含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物在制备化妆品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物在所述化妆品中的质量百分含量为0.1-10%。
4.一种具有抗衰老功效的精华乳，其特征在于，所述具有抗衰老功效的精华乳的制备原料以质量百分含量计包括：权利要求1所述的含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物0.1-10%、乳化剂1-5%、增稠剂0.1-2%、多元醇5-20%和水50-95%。
5.根据权利要求4所述的具有抗衰老功效的精华乳，其特征在于，所述乳化剂包括鲸蜡醇磷酸酯钾、聚山梨醇酯-60、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、山梨坦硬脂酸酯、山梨醇聚醚-30四油酸酯、聚山梨醇酯-20、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯/山梨坦橄榄油酸酯或鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷中的任意一种或至少两种的组合。
6.根据权利要求4所述的具有抗衰老功效的精华乳，其特征在于，所述增稠剂包括聚丙烯酸钠、聚丙烯酸钠接枝淀粉、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物或黄原胶中的任意一种或至少两种的组合。
7.根据权利要求4所述的具有抗衰老功效的精华乳，其特征在于，所述多元醇包括甘油、1,3-丙二醇、泛醇、1,2-己二醇或丁二醇中的任意一种或至少两种的组合。
8.根据权利要求4所述的具有抗衰老功效的精华乳，其特征在于，所述具有抗衰老功效的精华乳的制备原料以质量百分含量计还包括：植物源调理剂1-10%、pH调节剂0.1-2%、螯合剂0.01-0.5%、抗氧化剂0.05-0.5%、芳香剂0.1-0.5%中的任意一种或至少两种的组合。
9.根据权利要求8所述的具有抗衰老功效的精华乳，其特征在于，所述植物源调理剂选自紫苏叶提取物、水飞蓟提取物、香菇提取物中的任意一种或至少两种的组合。
10.根据权利要求8所述的具有抗衰老功效的精华乳，其特征在于，所述植物源调理剂选自紫苏叶提取物、水飞蓟提取物和香菇提取物的组合。
11.根据权利要求4-10中任一项所述的具有抗衰老功效的精华乳的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将水、部分多元醇混合于水相锅中，加热至60-80℃，保温10-40 min，降温至25-40℃，然后与维A醇、甘醇酸、重组胶原蛋白、硫酸软骨素混合，得到水相混合物；
将乳化剂、增稠剂、剩余多元醇、裂褶菌多糖、及剩余原料混合于乳化锅中，在30-50℃下均质5-15 min，然后与水相混合物混合，在25-40℃下均质5-30 min，得到所述具有抗衰老功效的精华乳。
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| CN202311622947.1A CN117481996B (zh) | 2023-11-29 | 2023-11-29 | 一种含有重组胶原蛋白的温和抗老化组合物及其应用 |
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| KR20140051763A (ko) * | 2012-10-23 | 2014-05-02 | 주식회사 엘지생활건강 | 주름개선을 위한 화장품 조성물 |
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Non-Patent Citations (2)
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| COLLINS, ALLISON.Skin Care Device Line Droplette Raises $15M: Droplette's team aims to bring pharma "rigor" into skin care.《Women's Wear Daily》.2021,第14页. * |
| 重组胶原蛋白的绿色生物制造及其应用;李阳等;《化工进展》;20210131;第第40卷卷(第第3期期);第1262-1275页 * |
Also Published As
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