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CN117003791A - 一种二苯基膦酰氧基双酚a类化合物及其制备美白九肽-1中的应用 - Google Patents

一种二苯基膦酰氧基双酚a类化合物及其制备美白九肽-1中的应用 Download PDF

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CN117003791A
CN117003791A CN202310842932.XA CN202310842932A CN117003791A CN 117003791 A CN117003791 A CN 117003791A CN 202310842932 A CN202310842932 A CN 202310842932A CN 117003791 A CN117003791 A CN 117003791A
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CN
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nonapeptide
terminal
dpbpa
boc
bisphenol
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CN202310842932.XA
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钦传光
石梦楠
杨露
刘淑鑫
乔宇欣
付立文
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Northwestern Polytechnical University
Original Assignee
Northwestern Polytechnical University
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Abstract

本发明涉及一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物及其制备美白九肽‑1中的应用，属于有机合成技术领域。二苯基膦酰氧基双酚A类化合物DPBPA结构通式如下。本发明还提供一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物DPBPA在制备美白九肽‑1H‑Met‑Pro‑DPhe‑Arg‑DTrp‑Phe‑Lys‑Pro‑Val‑NH2中的应用，以及一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物DPBPA辅助美白九肽‑1的制备方法。本发明以DP BPA为载体辅助的九肽‑1液相合成法，利用DPBPA载体的辅助沉淀作用，通过液相反应同与等当量的氨基酸进行偶联和脱Boc保护的策略，优化并简便了九肽‑1的制备方法，验证DPBPA载体的可回收和再利用性。

Description

一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物及其制备美白九肽-1中 的应用
技术领域
本发明属于有机合成技术领域，具体涉及一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物及其制备美白九肽-1中的应用。
背景技术
美白九肽(又称为九肽-1，Nonapeptide-1或Melanostatine)是一种小分子美白亮肤仿生肽，由九个氨基酸分子组成，其氨基酸序列为H-Met-Pro-DPhe-Arg-DTrp-Phe-Lys-Pro-Val-NH2。九肽-1是α-MSH拮抗剂，可以通过与α-MSH竞争结合MC1-R来阻止这一过程，从而对黑色素的产生形成可逆的抑制作用，以高度特异性作用于皮肤，能与各种因子信号竞争性地结合黑色素细胞上的受体，来抑制黑色素细胞对酪氨酸酶的激活，从而降低黑色素的产生，研究结果表明，九肽-1竞争性的封闭黑色素母细胞上受体与各种因子信号的入口，弱化了黑色素母细胞的活性，减少黑色素产生量，14天开始逐步均匀肤色，一个皮肤周期28天后，明显提亮肤色，肌肤红润、白皙，因此九肽-1常被用作化妆品原料。其可抑制黑色素的形成，具有美白淡斑、淡化细纹的功效，近年来在化妆品研发领域广受青睐，除此之外，九肽-1还可用于研究肾上腺类固醇生成的调节、皮肤癌等。
目前的多肽生产方法主要是采用传统的生物合成和固相化学合成法，存在分离纯化步骤繁琐、原料和溶剂浪费量大以及树脂固废多且难降解而造成环境污染严重的问题。
发明内容
为了解决现有技术中的不足，针对现有合成方法的不足，例如污染环境、选择性差、价格高等，本发明提供一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物及其制备美白九肽-1中的应用，主要解决目前九肽-1化学合成方法的液相反应步骤较多、耗时周期长、副产β-型同分异构体的含量高，分离除杂困难，产品纯度低，纯化规模小、生产成本高，而固相反应的生产规模小，原料价格贵、浪费大，树脂类废弃物多和环境污染严重的问题。
本发明提供的一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物，结构通式为：
式中，R1＝R2＝H。
本发明提供一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物在制备美白九肽-1中的应用。
本发明提供一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，包括以下步骤：
以二苯基膦酰氧基双酚A类化合物为辅助基团，依次分别与N-端保护的缬基酸、N-端保护的脯氨酸、N-端和侧链都保护的赖氨酸、N-端保护的苯丙氨酸、N-端保护的D-色氨酸、N-端和侧链都保护的精氨酸、N-端保护的D-苯丙氨酸、N-端保护的脯氨酸进行偶联反应和N-端保护基团脱除处理反应，反应结束后，再与N-端保护的蛋氨酸进行偶联反应，获取九肽的前体C；
将化合物C经剪除辅助基团，同时脱除侧链上的保护基团，再经纯化处理，获得美白九肽-1。
优选的，所述九肽-1的前体C是按照以下步骤制得：
S1、以二苯基膦酰氧基双酚A类化合物为载体，在偶联剂的作用下与N-端保护的缬基酸反应，经纯化后，得到生成物A；
S2、将纯化的生成物A中的N-端保护的基团经脱除处理后，经纯化后，获取生成物B；
S3、重复S1和S2，以生成物B为载体，将N-端保护的缬基酸依次分别替换成N-端保护的脯氨酸、N-端和侧链都保护的赖氨酸、N-端保护的苯丙氨酸、N-端保护的D-色氨酸、N-端和侧链都保护的精氨酸、N-端保护的D-苯丙氨酸、N-端保护的脯氨酸，进行偶联反应和N-端保护基团脱除处理反应，反应结束后，再与N-端保护的蛋氨酸进行偶联反应，获取九肽-1的前体C。
更优选的，N-端保护的基团包括Fmoc或Boc。
更优选的，侧链的保护基团包括Fmoc、Boc、Pbf或tBu。
更优选的，所述生成物B的结构式如下：
更优选的，所述九肽的前体C的结构式如下：
其中，N-端保护的基团为Boc，侧链的保护基团为Fmoc。
更优选的，将化合物C经剪除辅助基团，即获得辅助基团粗品；
将辅助基团粗品溶于适量乙酸乙酯，加入烷烃或醚类溶剂，可将辅助基团与其他杂质分离；对分离后的辅助基团进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的辅助基团。
对比现有技术，本发明的有益效果为：
本发明提供的一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物及其制备美白九肽-1中的应用，主要以DPBPA为载体辅助的九肽-1液相合成法，利用DPBPA载体的辅助沉淀作用，通过液相反应同与等当量的氨基酸进行偶联和脱Boc保护的策略，优化并简便了九肽-1的制备方法，验证DPBPA载体的可回收和再利用性。除此之外，本发明设计发展了两个简化九肽-1合成的新策略。解决目前生物合成和化学合成存在的产率低、副产物多、生产过程复杂等问题，增强了九肽-1合成过程绿色化和规模化，有利于减排降耗、节约成本、保护环境和可持续发展。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进一步的阐述，但应理解，所列实施例仅为便于理解本发明的核心方法和应用领域，但本发明的范围并不限于此。
下述各实施例中所述实验方法和检测方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。
本发明提供的一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物(DPBPA)，结构通式为：
式中，R1＝R2＝H。
在一实施例中，制备二苯基膦酰氧基双酚A小分子载体DPBPA：用二苯基膦酰氯与双酚A在碱性条件下反应，经分离纯化得到DPBPA。
本发明提供一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物在制备美白九肽中的应用。
本发明提供一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，包括以下步骤：
以二苯基膦酰氧基双酚A类化合物为辅助基团，依次分别与N-端保护的缬基酸、N-端保护的脯氨酸、N-端和侧链都保护的赖氨酸、N-端保护的苯丙氨酸、N-端保护的D-色氨酸、N-端和侧链都保护的精氨酸、N-端保护的D-苯丙氨酸、N-端保护的脯氨酸进行偶联反应和N-端保护基团脱除处理反应，反应结束后，再与N-端保护的蛋氨酸进行偶联反应，获取九肽的前体C；
将化合物C经剪除辅助基团，同时脱除侧链上的保护基团，再经纯化处理，获得美白九肽-1。
其中，所述九肽的前体C是按照以下步骤制得：
S1、以二苯基膦酰氧基双酚A类化合物为载体，在偶联剂的作用下与N-端保护的缬基酸反应，经纯化后，得到生成物A；
S2、将纯化的生成物A中的N-端保护的基团经脱除处理后，经纯化后，获取生成物B；
所述生成物B的结构式如下：
S3、重复S1和S2，以生成物B为载体，将N-端保护的缬基酸依次分别替换成N-端保护的脯氨酸、N-端和侧链都保护的赖氨酸、N-端保护的苯丙氨酸、N-端保护的D-色氨酸、N-端和侧链都保护的精氨酸、N-端保护的D-苯丙氨酸、N-端保护的脯氨酸，进行偶联反应和N-端保护基团脱除处理反应，反应结束后，再与N-端保护的蛋氨酸进行偶联反应，获取九肽的前体C；
具体的，N-端保护的基团包括Fmoc或Boc；侧链的保护基团包括Fmoc、Boc、Pbf或tBu。
在一实施例中，一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1、辅助基团与第一个氨基酸的偶联：以辅助基团(DPBPA)替代固相多肽合成中的树脂，在偶联剂的作用下与N-端保护的缬基酸(Boc-Val-OH)在0050℃下搅拌反应103小时，得到生成物A；所述氨基酸与DPBPA的摩尔比为1-1.2:1；所述偶联剂为1-1.2︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；
所述辅助基团为二苯基膦酰氧基双酚A类化合物(DPBPA)；
所述DPBPA与Boc-Val-OH偶联后，生成的中间体化合物为Boc-Val-DPBP A；
步骤2、分离纯化：向生成物A加入10-15倍体积的极性小的烷烃或醚类溶剂，借助DPBPA辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物A与其他杂质分离；
对分离后的生成物A进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物A，Boc-Val-DPBPA；
步骤3、脱除N-端保护基Boc：将纯化的生成物A采用脱Boc试剂处理，在10050℃下搅拌反应0.502小时，或采用脱Boc试剂处理，在10050℃下搅拌反应0.502小时，得到脱Boc的生成物B，H-Val-DPBPA；
向生成物B加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助DPBPA辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物B与其他杂质分离；
对分离后的生成物B进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物B；
所述生成物B的结构式如下：
步骤4：偶联第二个氨基酸与肽链延伸：以纯化的含有辅助基团DPBPA的生成物B作为载体，重复以上步骤(2)和(3)，与将N-端保护的缬基酸依次分别替换成N-端保护的脯氨酸、N-端和侧链都保护的赖氨酸、N-端保护的苯丙氨酸、N-端保护的D-色氨酸、N-端和侧链都保护的精氨酸、N-端保护的D-苯丙氨酸、N-端保护的脯氨酸，进行偶联反应和N-端保护基团脱除处理反应，反应结束后，再与N-端保护的蛋氨酸进行偶联反应，获取九肽-1的前体C；需要说明的是，重复以上步骤(2)和(3)指的是，重复步骤(2)和(3)的偶联反应和N-端保护基团脱除处理反应；
其中，N-端保护的基团为Boc，赖氨酸侧链保护基团为Fmoc；精氨酸侧链保护基团为Pbf，具体的，N-端保护的脯氨酸Boc-Pro-OH、赖氨酸Boc-Lys(Fmo c)-OH、苯丙氨酸Boc-Phe-OH、D-色氨酸Boc-DTrp-OH、精氨酸Boc-Arg(Pbf)-OH、D-苯丙氨酸Boc-DPhe-OH、脯氨酸Boc-Pro-OH进行偶联反应和脱Boc反应后，最后再与蛋氨酸Boc-Met-OH偶联反应，制备九肽的前体C(Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA)；
所述九肽的前体C的结构式如下：
其中，N-端保护的基团为Boc，侧链的保护基团为Fmoc。
步骤5、剪除DPBPA载体并脱除侧链保护基Fmoc：以氨或其衍生物PG-NH2(PG＝BH3,Boc,Fmoc,H)的溶液为剪切剂，所述PG-NH2溶液中的组分比例为：PG-NH2/溶剂＝25％(体积比)，溶剂通常为乙腈、乙醇、甲醇、四氢呋喃、DMF等中的一种或多种。先处理步骤(4)所得化合C，剪除DPBPA辅助基团，同时脱除赖氨酸侧链上的护基团Fmoc，得到化合物D，Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys-Pro-Val-NH-PG。再以鸡尾酒试剂三氟醋酸/三异丙基硅烷/水＝95:2.5:2.5(体积比)为侧链脱保护剂处理化合物D，反应条件为5030℃下，搅拌103小时，“一锅法”全部脱除肽链和侧链上的保护基团如Boc，Pbf，tBu等；
需要说明的是，Fmoc以及DPBPA载体主要通过碱性的脱除剂进行剪除和脱除，而保护基团Boc，Pbf，tBu是通过酸性的脱除剂进行脱除。
将步骤5得到的DPBPA粗品溶于适量乙酸乙酯，加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助DPBPA在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将DPBPA与其他杂质分离；对分离后的DPBPA进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的DPBPA，回收后可以直接或再生后作为辅助基团重复利用。
步骤6、九肽-1的分离纯化：将上述“一锅法”处理后的混合液通过旋蒸浓缩至原体积的三分之一，并用醚类溶剂(乙醚或甲基叔丁基醚)沉淀，过滤或离心分离后，滤饼经冷醚洗涤、干燥，得到纯化的九肽-1E(H-Met-Pro-DPhe-Arg-DTr p-Phe-Lys-Pro-Val-NH2)；
步骤7、DPBPA辅助基团的回收再利用的方法：将步骤6中所得的醚类溶剂相合并，旋蒸浓缩至原体积的三分之一，加入极性小的烃类溶剂，借助DPBPA在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将DPBPA与其他杂质分离；对分离后的沉淀进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的DPBPA，回收后可以直接或再生后作为辅助基团重复利用。
本发明提供的一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，与目前已有的合成方法相比，本发明兼备了液相和固相合成法的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备九肽-1，而且DPBPA载体可以回收并直接再利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。
其中，步骤3中，N-端Boc保护的缬氨酸与载体DPBPA偶联的中间体化合物为生成物A(Boc-Val-DPBPA)及其生成物B，即脱Boc产物，所述Boc-Val-DPBPA及其脱Boc产物生成物B(H-Val-DPBPA)的分子结构式依次分别为：(1)Boc-Val-DPBPA：
(2)H-Val-DPBPA：
步骤4中，脯氨酸Boc-Pro-OH与生成物B(H-Val-DPBPA)偶联的中间体化合物Boc-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-Pro-Val-DPBPA，所述Boc-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-Pro-Val-DPBPA的分子结构式依次分别为：
(3)Boc-Pro-Val-DPBPA：
(4)H-Pro-Val-DPBPA：
赖氨酸Boc-Lys(Fmoc)-OH与上述H-Pro-Val-DPBPA偶联的中间体化合物Bo c-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA，所述Boc-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA的分子结构式依次分别为：
(5)Boc-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
(6)H-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
苯丙氨酸Boc-Phe-OH与上述H-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA偶联的中间体化合物Boc-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA，所述Boc-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA的分子结构式依次分别为：
(7)Boc-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
(8)H-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
D-色氨酸Boc-DTrp-OH与上述H-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA偶联的中间体化合物Boc-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA，所述Boc-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA的分子结构式依次分别为：
(9)Boc-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
(10)H-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
精氨酸Boc-Arg(Pbf)-OH与上述H-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA偶联的中间体化合物Boc-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA，所述Boc-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DP BPA的分子结构式依次分别为：
(11)Boc-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
(12)H-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
D-苯丙氨酸Boc-DPhe-OH与上述H-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA偶联的中间体化合物Boc-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA，所述Boc-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA其脱Boc产物H-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA的分子结构式依次分别为：
(13)Boc-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
(14)H-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
脯氨酸Boc-Pro-OH与上述H-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA偶联的中间体化合物Boc-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DP BPA及其脱Boc产物H-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA，所述Boc-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA及其脱Boc产物H-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA，的分子结构式依次分别为：
(15)Boc-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
(16)H-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
蛋氨酸Boc-Met-OH与上述H-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA偶联的中间体化合物Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA，所述Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBP A的分子结构式为：
(17)Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA：
用氨溶液处理上述九肽-1的前体(17)，得到剪切除掉DPBPA并脱除赖氨酸侧链上的Fmoc后的中间体化合物Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys-Pro-Val-NH2，所述Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys-Pro-Val-NH2分子结构式为：
(18)Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys-Pro-Val-NH2：
需要说明的是，本发明采用的偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐DECI。
根据本发明，将化合物C经剪除辅助基团，即获得辅助基团粗品；
将辅助基团粗品溶于适量乙酸乙酯，加入烷烃或醚类溶剂，可将辅助基团与其他杂质分离；对分离后的辅助基团进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的辅助基团。
在一实施例中，用TFA/TIPS/H2O脱保护试剂处理上述九肽-1的前体(18)，肽链上所有保护基团如N-端的Boc和精氨酸侧链上的Pbf全部脱除后，得到的化合物H-Met-Pro-DPhe-Arg-DTrp-Phe-Lys-Pro-Val-NH2，即为目标产物九肽-1的粗品。经纯化精制后可获得符合质量要求的九肽-1产品。
本发明中一些常用的缩写具有以下含义：
Boc：叔丁氧羰基；Cbz：苄氧羰基(Benzyloxycarbonyl)；DCM：二氯甲烷CH2Cl2；DEA：二乙胺；DMAP:4-二甲氨基吡啶；DMF:N,N-二甲基甲酰胺；DP BPA：二苯基膦酰氧基双酚A(4-Diphenylphosphinoxyl Bisphenol A)；EDC-HCl:1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；Fmoc：芴甲氧羰基；HATU:2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；HBTU:O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐；HOBT:1-羟基苯并三唑；HRMS：高分辨质谱；NMM:N-甲基吗啉；NMP:N-甲基吡咯烷酮；NP-1：九肽-1；PyBop：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷；TEA：三乙胺；TFA：三氟醋酸；THF：四氢呋喃；TIPS：三异丙基硅烷。
下述实施例提供制备上述化合物及所对应的中间化合物的具体合成方法。
实施例1
一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，包括：
合成路线如下：
将DPBPA依次分别与N-端保护的缬氨酸Boc-Val-OH、脯氨酸Boc-Pro-OH、赖氨酸Boc-Lys(Fmoc)-OH、苯丙氨酸Boc-Phe-OH、D-色氨酸Boc-DTrp-OH、精氨酸Boc-Arg(Pbf)-OH、D-苯丙氨酸Boc-DPhe-OH、脯氨酸Boc-Pro-OH进行偶联反应和脱Boc反应，再与蛋氨酸Boc-Met-OH偶联反应，制备九肽的前体C，Bo c-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA进行偶联，合成九肽衍生物，再通过载体的剪切、脱除侧链基团，探索合适的路线，最终得到九肽，依此验证DPBPA在肽合成中的应用及可回收性。
具体合成步骤如下：
DPBPA与第一个氨基酸的偶联：DPBPA载体与首个氨基酸Boc-Val-OH的酯化偶联反应的偶联体系是EDCI偶联剂加DMAP催化剂，其中DPBPA载体、首个氨基酸Boc-Val-OH、EDCI偶联剂与DMAP催化剂的摩尔比例为1:1.2-1.5:1.2-1.5:0.12-0.15。室温下搅拌2小时左右，偶联反应完成后经DPBPA辅助沉淀法分离纯化得到偶联产物(1)Boc-Val-DPBPA
脱Boc保护基团：使用的是25％TFA/DCM体系，约1-1.5h反应完毕。经DPBPA辅助沉淀法分离纯化得到脱Boc的产物(2)H-Val-DPBPA
肽链的延长：H-Val-DPBPA后续酰胺键的形成过程中，氨基酸与偶联剂EDCI、HOBt、DIEA的摩尔比为1:1.2:1.2:0.12，依次称取EDCI、HOBt、DIEA、氨基酸，用适量的二氯甲烷溶解，置于冰水浴中活化0.5h，滴加待偶联化合物，于室温下反应，1.5h反应完毕。依次用饱和NH4Cl溶液、饱和NaHCO3溶液洗涤2次，后使用DCM/MTBE体系进行沉淀(体积比约为10:1)，通过过滤或离心进行固液分离纯化。按照目标序列，依次偶联氨基酸为N-端保护的脯氨酸Boc-Pro-OH、赖氨酸Boc-Lys(Fmoc)-OH、苯丙氨酸Boc-Phe-OH、D-色氨酸Boc-DTrp(Fmoc)-OH、精氨酸Boc-Arg(Fmoc)-OH、D-苯丙氨酸Boc-DPhe-OH、脯氨酸Boc-Pro-OH、蛋氨酸Boc-Met-OH。经适当分离纯化后得到九肽-1的前体化合物(17)Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA。
值得注意的事项：偶联第6个氨基酸Boc-Arg(Pbf)-OH时，按上文操作将氨基酸活化，发现并未偶联成功，尝试调整氨基酸及偶联剂比例，延长反应时间，提高反应温度等反应均未进行，后推断为活化过程中精氨酸发生了自聚反应，因此未能与H-Trp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA顺利偶联。解决方法为省略活化时间，将氨基酸、偶联剂、待偶联原料等同时加入反应体系，于室温下反应，最终成功偶联。合成九肽-1过程中各步中间体及其产率见表1。
表1合成九肽-1过程中各步中间体及其产率
合成九肽-1过程中各步所得中间体化合物的具体结构表征数据如下：
Boc-Val-DPBPA(1)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95–7.82(m,4H),7.68–7.37(m,7H),7.16(s,6H),6.95(d,J＝8.6Hz,2H),4.02(d,J＝7.0Hz,1H),2.15(h,J＝6.8Hz,1H),1.58(s,6H),1.40(d,J＝5.3Hz,9H),0.98(d,J＝6.6Hz,6H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ148.61,146.72,133.16,131.97,131.86,129.44,129.31,128.32,128.03,121.41,120.46,60.18,39.96,30.83,30.00,28.63,19.49；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ28.99；HRMS(ESI)m/zcalc dforC37H42NO6PNa+(M+Na)+650.26420,found650.26392.
H-Val-DPBPA(2)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(s,2H),7.89(dd,J＝12.3,7.
1Hz,4H),7.66–7.53(m,6H),7.25(d,J＝8.7Hz,2H),7.17(s,4H),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),4.22(s,1H),2.36–2.27(m,1H),1.60(s,6H),1.08(dd,J＝12.1,6.9Hz,6H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ168.34,148.89,147.81,133.20,131.85,130.76,129.48,128.35,121.24,120.50,57.78,42.38,30.81,30.04,18.74,18.14；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.00；HRMS(ESI)m/zcalcdforC32H35NO4P+(M+H)+528.22982,found528.22980.
Boc-Pro-Val-DPBPA(3)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),7.89(dd,J＝12.3,7.6Hz,4H),7.65–7.53(m,6H),7.17(d,J＝8.6Hz,6H),6.95(d,J＝8.6Hz,2H),4.27(s,2H),3.27(s,2H),2.21(s,2H),1.77(s,4H),1.58(s,5H),1.36(d,J＝25.5Hz,9H),1.02(d,J＝6.7Hz,6H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ173.71,173.19,170.89,154.06,153.73,148.99,148.90,148.58,148.15,146.71,133.14,132.12,131.96,131.86,130.76,129.45,129.32,128.32,128.04,121.38,120.51,120.46,78.81,59.34,58.44,46.97,42.29,31.45,30.82,28.48,24.29,23.43；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ28.99；HRMS(ESI)m/zcalcdforC42H49N2O7PNa+(M+Na)+747.31696,found747.31671.
H-Pro-Val-DPBPA(4)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.99(d,J＝7.
3Hz,1H),8.62(s,1H),7.90(dd,J＝12.3,7.1Hz,4H),7.65–7.52(m,6H),7.23–7.15(m,6H),6.97(d,J＝8.6Hz,2H),4.39–4.31(m,1H),3.24(ddd,J＝24.5,14.8,9.6Hz,2H),2.31(dh,J＝26.6,6.5Hz,2H),2.04–1.73(m,1H),1.58(s,6H),1.04(dd,J＝6.7,2.4Hz,6H)；HRMS(ESI)m/zcalcdforC42H50N2O7P+(M+H)+625.28000,found625.28290.
Boc-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(5)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝7.0Hz,1H),7.93–7.84(m,6H),7.70–7.53(m,8H),7.41(t,J＝7.5Hz,2H),7.32(dd,J＝13.4,6.2Hz,2H),7.16(d,J＝4.1Hz,6H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),4.35–4.07(m,6H),3.62(dd,J＝13.7,5.2Hz,1H),3.55–3.50(m,1H),2.97(s,2H),2.25–1.75(m,9H),1.57(s,8H),1.35(d,J＝12.9Hz,11H),1.03–0.96(m,6H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.74,156.54,155.93,144.39,133.14,131.96,131.85,129.32,128.31,128.01,127.49,121.38,120.56,120.45,78.33,65.67,59.26,55.38,52.49,47.24,42.29,30.83,28.69,23.00,18.75；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ28.98；HRMS(ESI)m/zcalcdforC63H71N4O10PNa+(M+Na)+1097.48000,found1097.48083.
H-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(6)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝7.
5Hz,1H),8.18(s,2H),7.90(dd,J＝12.8,7.8Hz,6H),7.68(d,J＝7.0Hz,2H),7.63–7.58(m,2H),7.57–7.51(m,4H),7.40(t,J＝7.3Hz,2H),7.34–7.29(m,2H),7.14(q,J＝9.1,8.4Hz,6H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),4.60(s,1H),4.43–4.37(m,1H),4.31(d,J＝6.9Hz,2H),4.22(t,J＝6.5Hz,1H),4.19–4.12(m,1H),3.01(s,2H),2.19(d,J＝32.6Hz,2H),1.97(s,1H),1.84(s,1H),1.74(s,2H),1.55(s,7H),1.44(s,4H),1.23(d,J＝12.2Hz,3H),1.06–0.99(m,6H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ172.15,170.71,167.51,159.12,158.76,156.57,148.98,148.49,148.16,146.70,144.36,141.20,133.14,132.13,131.94,131.84,130.77,128.28,127.99,127.48,125.56,121.34,120.55,117.55,114.66,65.72,58.06,55.32,51.31,47.24,42.26,30.77,30.39,30.10,29.58,25.09,21.40,19.44,18.64；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.05；HRMS(ESI)m/zcalcdforC58H63N4O8PNa+(M+Na)+997.42757,found997.42725.
Boc-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(7)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝7.4Hz,1H),8.04(d,J＝7.6Hz,1H),7.92–7.86(m,6H),7.70–7.52(m,9H),7.40(t,J＝7.3Hz,2H),7.34–7.24(m,7H),7.16(d,J＝12.1Hz,7H),6.93(d,J＝8.5Hz,2H),4.55–4.26(m,5H),4.19(t,J＝6.8Hz,2H),3.68–3.52(m,2H),3.01–2.92(m,3H),2.74–2.66(m,1H),2.20(dt,J＝13.2,6.9Hz,1H),2.09–2.00(m,1H),1.88–1.80(m,2H),1.57(s,6H),1.41–1.36(m,2H),1.29(s,9H),1.23(d,J＝8.8Hz,5H),1.00(dd,J＝6.4,3.4Hz,6H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ174.10,172.57,171.86,171.27,170.75,170.34,156.52,155.65,148.97,148.52,148.14,146.71,144.37,141.18,138.61,135.22,133.16,132.12,131.96,131.86,129.66,128.86,128.01,127.50,126.61,125.61,121.39,120.56,120.45,78.52,65.68,59.29,58.68,58.12,56.08,55.64,50.61,49.07,47.21,42.29,37.90,36.71,31.52,30.82,29.46,28.61,28.29,24.93,22.51,22.49,19.46,18.76；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.00；HRMS(ESI)m/zcalcdforC72H80N5O11PNa+(M+Na)+1244.54842,found1244.54895.
H-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(8)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(d,J＝7.9Hz,1H),8.37(d,J＝7.7Hz,1H),8.14–8.10(m,2H),7.92–7.86(m,6H),7.69–7.61(m,4H),7.58–7.52(m,4H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.35–7.22(m,9H),7.19–7.14(m,5H),6.95–6.91(m,2H),4.51(dd,J＝8.2,3.8Hz,2H),4.36–4.28(m,3H),4.21(t,J＝6.6Hz,1H),4.09(dd,J＝7.1,4.5Hz,1H),3.58(t,J＝6.0Hz,2H),3.11–3.03(m,2H),2.97(dd,J＝11.6,5.3Hz,2H),2.25–1.93(s,3H),1.89–1.65(m,3H),1.57(s,5H),1.40(d,J＝7.4Hz,3H),1.25(d,J＝9.5Hz,3H),1.00(dd,J＝6.7,3.4Hz,6H)；HRMS(ESI)m/zcalcdforC67H72N5O9PNa+(M+Na)+1122.5153,found1122.5140.
Boc-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(9)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),8.34(dd,J＝13.9,7.5Hz,3H),7.93–7.85(m,6H),7.70–7.59(m,4H),7.55(d,J＝3.6Hz,5H),7.40(t,J＝7.3Hz,2H),7.35–7.11(m,15H),7.05(t,J＝7.4Hz,2H),6.96(dd,J＝17.5,8.0Hz,3H),6.87–6.81(m,1H),4.67–4.60(m,1H),4.50(dd,J＝14.8,6.9Hz,1H),4.35–4.25(m,3H),4.22–4.10(m,2H),3.69–3.48(m,2H),3.06–2.75(m,6H),2.25–1.62(m,7H),1.57(s,6H),1.46–1.16(m,13H),1.05–0.98(m,6H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ172.58,170.52(d,J＝48.5Hz),156.51,148.51,148.14,144.37,141.17,133.19,131.91(d,J＝10.3Hz),130.76,129.33,128.32,128.03,128.01,125.61,121.39,120.56,111.70,110.77,78.53,58.14,55.85,50.77,47.20,42.29,30.83,28.55,24.92,22.69,19.45,18.80；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.00；HRMS(ESI)m/zcalcdforC83H90N7O12PNa+(M+Na)+1430.62773,found1430.62781.
H-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(10)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),8.84(d,J＝8.1Hz,1H),8.47(d,J＝7.7Hz,1H),8.36(d,J＝7.4Hz,1H),7.94(s,1H),7.92–7.86(m,6H),7.73–7.52(m,9H),7.39(q,J＝7.5Hz,3H),7.29(dt,J＝12.2,6.7Hz,7H),7.23(dd,J＝6.3,2.0Hz,2H),7.15(d,J＝3.5Hz,6H),7.09(d,J＝7.7Hz,1H),7.03–6.98(m,1H),6.93(d,J＝8.6Hz,2H),4.67(d,J＝5.6Hz,1H),4.55–4.49(m,2H),4.36–4.27(m,3H),4.20(t,J＝6.7Hz,1H),4.02(s,1H),3.68–3.54(m,2H),3.27(s,1H),3.02(dt,J＝21.1,7.7Hz,4H),2.87(dd,J＝14.1,8.7Hz,1H),2.20(dq,J＝13.2,6.7Hz,1H),2.09–1.66(m,6H),1.57(s,6H),1.45–1.31(m,5H),1.00(dd,J＝6.6,3.4Hz,6H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ172.56,170.76,158.56,156.54,148.89,148.52,148.16,146.71,141.18,133.19,131.96,129.79,129.46,129.33,128.32,127.49,125.57,121.38,55.38,47.22,42.29,30.82,19.45；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.01；HRMS(ESI)m/zcalcdforC78H82N7O10P(M+H)+1830.84456,found1830.50460.
Boc-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(11)：1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.77–10.73(m,1H),8.36(d,J＝7.5Hz,1H),8.24(d,J＝7.5Hz,1H),8.06(d,J＝7.8Hz,1H),7.94–7.89(m,6H),7.72–7.55(m,10H),7.42(t,J＝7.5Hz,2H),7.36–7.15(m,16H),7.12–7.03(m,2H),6.96(d,J＝8.2Hz,3H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),4.69–4.49(m,5H),4.39–4.29(m,3H),4.22(t,J＝7.1Hz,1H),3.89(s,1H),3.70–3.54(m,2H),3.13–2.80(m,12H),2.46(s,4H),2.23(dt,J＝13.3,6.6Hz,1H),2.15(s,2H),2.03(d,J＝5.7Hz,4H),1.97–1.79(m,3H),1.59(s,8H),1.40(d,J＝16.0Hz,19H),1.18(s,4H),1.03(dd,J＝6.8,4.6Hz,6H)；13CNMR(126MHz,DMSO-d6)δ172.57,170.73,170.29,157.91,156.54,148.97,148.53,148.14,146.71,144.37,141.18,137.75,136.43,133.17,131.95,130.92,129.44,128.31,125.60,124.77,121.38,118.61,116.73,110.25,86.73,78.63,68.98,65.70,59.31,56.30,50.81,47.23,42.94,42.29,32.58,30.83,30.07,28.75,24.90,22.67,19.44,18.79,18.08,12.75；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.01；HRMS(ESI)m/zcalcdforC102H119N11O16PS+(M+H)+1817.83227,found1817.83496.
H-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(12)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝7.6Hz,1H),8.33–8.15(m,3H),8.00(d,J＝18.6Hz,3H),7.82(dd,J＝12.7,7.5Hz,6H),7.62–7.44(m,10H),7.35–7.04(m,21H),6.85(d,J＝8.2Hz,2H),4.61–4.39(m,4H),4.19(tt,J＝27.8,7.3Hz,4H),3.76–3.40(m,3H),3.09–2.73(m,11H),2.39–2.29(m,3H),2.13(dt,J＝13.3,6.1Hz,1H),2.06–1.87(m,9H),1.77(s,2H),1.59(d,J＝25.3Hz,4H),1.48(s,7H),1.32(d,J＝12.3Hz,10H),1.08(s,2H),0.92(dd,J＝6.8,3.6Hz,6H)；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.02；HRMS(ESI)m/zcalcdforC97H111N11O14PS+(M+H)+1717.77984,found1717.78149.
Boc-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(13)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(d,J＝21.1Hz,1H),8.34(d,J＝7.5Hz,1H),8.18(d,J＝7.8Hz,1H),7.92–7.85(m,7H),7.69–7.59(m,5H),7.54(td,J＝6.5,5.4,2.7Hz,5H),7.38(q,J＝7.5Hz,3H),7.33–7.26(m,5H),7.23–7.14(m,16H),7.03(t,J＝7.9Hz,2H),6.93(d,J＝8.2Hz,3H),4.64–4.47(m,5H),4.30(dd,J＝23.5,7.0Hz,3H),4.19(t,J＝7.1Hz,2H),3.57(d,J＝30.0Hz,2H),3.13–2.74(m,14H),2.43(s,3H),2.12(s,4H),1.98(s,3H),1.82(d,J＝16.4Hz,3H),1.56(s,7H),1.37(s,7H),1.32(s,2H),1.28(d,J＝3.0Hz,9H),1.24(d,J＝5.0Hz,2H),1.15(s,6H),0.99(dd,J＝6.8,3.9Hz,6H)；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.00；HRMS(ESI)m/zcalcdforC111H127N12O17PSNa+(M+Na)+1986.88262,found1986.88708.
H-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(14)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),8.40–8.11(m,7H),7.91(dd,J＝11.7,7.5Hz,7H),7.70–7.59(m,6H),7.58–7.52(m,6H),7.25(ddd,J＝41.1,20.0,8.2Hz,24H),6.94(d,J＝8.2Hz,3H),4.60(d,J＝43.8Hz,4H),4.39–4.12(m,6H),3.58(dd,J＝31.5,15.4Hz,2H),3.15–2.82(m,13H),2.47(d,J＝7.8Hz,3H),2.25–2.16(m,1H),2.16–1.96(m,9H),1.81(s,3H),1.57(s,6H),1.41–1.33(m,12H),1.01(s,6H)；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.04；HRMS(ESI)m/zcalcdforC106H119N12O15PSNa+(M+Na)+1886.83019,found1886.83215.
Boc-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(15)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39–7.97(m,3H),7.90(dd,J＝12.6,7.4Hz,7H),7.71–7.50(m,10H),7.40(t,J＝7.1Hz,2H),7.34–7.28(m,4H),7.25–7.10(m,17H),7.04(t,J＝7.7Hz,2H),6.94(d,J＝7.9Hz,3H),4.67–4.47(m,4H),4.38–3.94(m,7H),3.71–3.49(m,2H),3.20(d,J＝9.8Hz,2H),2.95(d,J＝28.9Hz,12H),2.44(s,3H),2.25–2.16(m,1H),2.13(s,1H),2.00(s,4H),1.94–1.73(m,5H),1.56(s,10H),1.38(t,J＝9.3Hz,18H),1.23(s,3H),1.16(s,2H),1.05(s,3H),1.00(s,6H)；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ29.01；HRMS(ESI)m/zcalcdforC116H134N13O18PSNa+(M+Na)+2083.93539,found2083.93872.
H-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(16)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.85(S,1H),7.89(dd,J＝12.4,7.7Hz,7H),7.70–7.52(m,11H),7.43–7.37(m,3H),7.34–7.14(m,24H),6.93(d,J＝8.0Hz,3H),4.57(d,J＝32.3Hz,4H),4.40–4.20(m,6H),3.59(d,J＝33.1Hz,3H),3.16–2.82(m,15H),2.45(d,J＝8.4Hz,2H),2.10(d,J＝9.2Hz,9H),1.98(d,J＝12.7Hz,4H),1.91–1.80(m,4H),1.57(s,10H),1.38(d,J＝5.3Hz,14H),1.00(s,6H).
Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA(17)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(S,1H),8.26(d,J＝58.6Hz,4H),7.96(d,J＝8.4Hz,1H),7.92–7.85(m,7H),7.65(dt,J＝24.9,7.6Hz,6H),7.54(dq,J＝11.7,7.5,5.5Hz,6H),7.39(t,J＝7.5Hz,3H),7.33–7.27(m,4H),7.25–7.13(m,16H),6.93(d,J＝8.1Hz,2H),4.63–4.43(m,5H),4.36–4.16(m,7H),3.68–3.46(m,4H),3.10–2.78(m,11H),2.43(s,3H),2.19(dd,J＝11.2,4.7Hz,1H),2.12(s,2H),2.06–1.94(m,7H),1.74(s,10H),1.56(s,9H),1.35(d,J＝11.8Hz,20H),1.15(s,8H),0.99(s,6H)；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δ28.99；HRMS(ESI)m/zcalcdforC121H143N14O19PS2Na+(M+Na)+2214.97587,found2214.97778.
九肽-1的制备：取100mg上述得到的九肽-1前体化合物(17)Boc-Met-Pro-DPhe-Arg(Pbf)-DTrp-Phe-Lys(Fmoc)-Pro-Val-DPBPA加入10mL四氢呋喃溶解，滴加1mL氨水，于室温下搅拌，TCL监测(展开剂：DCM:MeOH＝20:1)，反应过程中观察到有芴烯和载体DPBPA产生，表明载体和Fmoc基团被脱除，大约8h后，减压浓缩除去溶剂，一锅法使用TFA/TIS/H2O＝95:5:5(体积比)体系除去Pbf和Boc基团。反应结束后用乙醚沉淀得到目标产物九肽，再用乙醚洗涤3次，真空干燥得到白色粉末46.8mg，产率为85％。乙醚相分离得到回收的载体17.2mg，剪切回收率为88％。
九肽-1的结构表征数据：HRMS(ESI)m/z计算值C61H87N15O9SNa+(M+Na)+1228.64241，实测值为1228.64185，证明所合成的样品与目标化合物的分子质量吻合。
以上实施例仅为便于理解本发明材料的合成及应用方法所列举的部分实施例，并不用于限制本发明。可以理解，相关从业人员很容易在此结构上进行适当的修改，因此凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物，其特征在于，结构通式为：
式中，R1＝R2＝H。
2.一种权利要求1所述的二苯基膦酰氧基双酚A类化合物在制备美白九肽-1中的应用。
3.一种二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
以二苯基膦酰氧基双酚A类化合物为辅助基团，依次分别与N-端保护的缬基酸、N-端保护的脯氨酸、N-端和侧链都保护的赖氨酸、N-端保护的苯丙氨酸、N-端保护的D-色氨酸、N-端和侧链都保护的精氨酸、N-端保护的D-苯丙氨酸、N-端保护的脯氨酸进行偶联反应和N-端保护基团脱除处理反应，反应结束后，再与N-端保护的蛋氨酸进行偶联反应，获取九肽的前体C；
将化合物C经剪除辅助基团，同时脱除侧链上的保护基团，再经纯化处理，获得美白九肽-1。
4.根据权利要求3所述的二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，其特征在于，所述九肽的前体C是按照以下步骤制得：
S1、以二苯基膦酰氧基双酚A类化合物为载体，在偶联剂的作用下与N-端保护的缬基酸反应，经纯化后，得到生成物A；
S2、将纯化的生成物A中的N-端保护的基团经脱除处理后，经纯化后，获取生成物B；
S3、重复S1和S2，以生成物B为载体，将N-端保护的缬基酸依次分别替换成N-端保护的脯氨酸、N-端和侧链都保护的赖氨酸、N-端保护的苯丙氨酸、N-端保护的D-色氨酸、N-端和侧链都保护的精氨酸、N-端保护的D-苯丙氨酸、N-端保护的脯氨酸，进行偶联反应和N-端保护基团脱除处理反应，反应结束后，再与N-端保护的蛋氨酸进行偶联反应，获取九肽的前体C。
5.根据权利要求4所述的二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，其特征在于，N-端保护的基团包括Fmoc或Boc。
6.根据权利要求4所述的二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，其特征在于，侧链的保护基团包括Fmoc、Boc、Pbf或tBu。
7.根据权利要求4所述的二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，其特征在于，所述生成物B的结构式如下：
8.根据权利要求4所述的二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，其特征在于，所述九肽的前体C的结构式如下：
其中，N-端保护的基团为Boc，侧链的保护基团为Fmoc。
9.根据权利要求4所述的二苯基膦酰氧基双酚A类化合物辅助美白九肽-1的制备方法，其特征在于，将化合物C经剪除辅助基团，即获得辅助基团粗品；
将辅助基团粗品溶于适量乙酸乙酯，加入烷烃或醚类溶剂，可将辅助基团与其他杂质分离；对分离后的辅助基团进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的辅助基团。
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