CN117003620A

CN117003620A - 作为AhR激动剂的二苯乙烯衍生物及其用途

Info

Publication number: CN117003620A
Application number: CN202310503869.7A
Authority: CN
Inventors: 陈磊; 田超; 张继磊; 陶睿; 何红艳; 朱丽君; 陆滢炎; 周静; 吴小涛; 李战
Original assignee: Nanjing Gritpharma Co ltd
Current assignee: Nanjing Gritpharma Co ltd
Priority date: 2022-05-07
Filing date: 2023-05-06
Publication date: 2023-11-07
Also published as: WO2023217049A1; EP4524123A1; JP2025516369A

Abstract

本发明涉及作为AhR活化剂的二苯乙烯衍生物及其用途。本发明的化合物、其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体具有优异的AhR活化作用，能被安全地用于治疗与AhR及相关通路靶点活性异常所介导的疾病或相关病症。

Description

作为AhR激动剂的二苯乙烯衍生物及其用途

本申请要求2022年5月7日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202210489648.4，发明名称为“作为AhR激动剂的二苯乙烯衍生物及其用途”在先申请的优先权。该申请的全文通过引用的方式结合于本申请中。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及作为AhR激动剂的二苯乙烯衍生物及其用途。

背景技术

芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor，AhR)属于碱性螺旋-环-螺旋(basichelix-loop-helix,b-HLH)超家族中的b-HLH-PAS(period-aryl hydrocarbon receptornuclear translocator-single minded,Pre-Arnt-Sim)亚家族中的一员。它分布于机体多种组织和细胞中，在脾、胃、卵巢和胎盘中表达最高，同时在免疫细胞中也高表达，尤其是在某些CD4⁺T细胞亚群，如部分造血干细胞、骨髓来源的树突细胞、CD4⁺Th17细胞中表达最高，而在B细胞、CD4⁺Treg细胞中表达最低。Th17细胞的过度活化和IL-17的分泌增加与机体多种慢性炎症疾病和自身免疫性疾病有关，如牛皮鲜、多发性硬化、类风湿性关节炎、强制性脊柱炎和哮喘。Treg细胞在抑制自身免疫性疾病、移植和移植物抗宿主疾病中起着重要作用。研究证明，Th17和Treg二者之间的平衡对宿主的免疫和耐受起着重要作用。例如，有研究证明UC的发病机制与Th17/Treg的失衡有着密切关系。

随着对AhR的研究深入，发现Th17/Treg分化失衡可能与体内的AhR有关，AhR是一种细胞质内的转录因子，参与调节药物的代谢、细胞生长和分化，并且与机体免疫反应性疾病和炎症性疾病的发生密切相关，活化的AhR可以调控体内Th17和Treg的分化。大量实验证明，AhR与机体免疫性疾病的发生有关，如哮喘、吸烟相关的肺部炎症性疾病、特应性皮炎、慢性肾病、干燥综合征、炎症性肠病等。

AhR常见的激动剂有ITE、TCDD和FICZ，其中TCDD作为最早被发现的AhR激动剂，可以调节T细胞分化平衡，但是其在环境和体内的毒性限制了其在临床中的应用。苯烯莫德(Benvitimod)为首个上市的芳香烃受体激动剂药物，作为新一代消炎药物，可用于治疗多种重大自身免疫性疾病，如牛皮癣、湿疹、发脓性结肠炎和多种过敏性疾病。作为首个上市的AhR激动剂药物，苯烯莫德的活性仍有待提高，且苯烯莫德的光照下易被氧化，不易存储，临床应用中需要作用效果更好、生物利用更高、稳定性更强的新型改进化合物和组合物。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体：

其中，X选自卤素，n为1-5的整数；优选X为F或Cl，或者X是F和Cl的多取代情况；

R选自取代或未被取代的3-7元环烷基或环烯基、取代或未被取代的3-7元杂环基；所述取代基例如为：C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素等。

在一些实施方式中，所述X为邻位取代、间位取代、对位取代中的一种、两种或多种。

在一些实施方式中，X是单取代的F，Cl或Br。

在一些实施方式中，X是二取代或三取代的F。

在一些实施方式中，X为F，n为1。

在一些实施方式中，所述取代或未被取代3-7元杂环基为含N杂环基；所述取代为被C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素中的至少一个取代。

在一些实施方式中，所述取代或未被取代的3-7元环烷基为环戊基或环己基。

在一些具体的实施方式中，所述式(I)的化合物选自以下化合物：

本发明还提供式(II)化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体：

本发明还提供式(I)、式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体在制备药物中的用途，所述药物用于治疗癌症、自身免疫失调和其他具有免疫学因素的病症。

根据本发明的实施方案，其中所述自身免疫失调病症选自银屑病、湿疹、特应性皮炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病、溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、慢性肾病、强直性脊柱炎、干燥综合征、多发性肌炎、血管炎、风湿性多肌痛、免疫性血小板减少症、干眼症、1型糖尿病、银屑病和关节炎等中一种或几种。

根据本发明的实施方案，其中所述具有免疫学因素的病症选自哮喘、变态反应、感染、骨质疏松、动脉粥样硬化、2型糖尿病、移植物抗宿主病和移植排异中的一种或几种。

本发明还提供式(I)、式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗由芳基烃受体(AhR)介导的疾病或病况。

本发明还提供式(I)、式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体在制备药物中的用途，所述药物用于调控免疫、炎症相关细胞因子，所述细胞因子选自IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23、TNFα、TGF-β、IFN-γ、IL-1β等；以及用于预防和/或治疗上述细胞因子异常所引起的疾病。

本发明还提供一种药物组合物，该药物组合物包含式(I)、式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，以及药学上可接受的辅料，例如载体或赋形剂等。

本发明还提供一种治疗和/或预防芳基烃受体(AhR)介导的病症或疾病的方法，所述方法包括向治疗对象施用治疗有效量的式(I)、式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

本发明还提供一种式(I)所示的化合物的制备方法：

化合物IMe与化合物SMc反应得到化合物IMf，化合物IMf在酸性条件下反应得到式(I)所示的化合物；

其中X选自卤素，n为1-5的整数；

R选自取代或未被取代的3-7元环烷基或环烯基、取代或未被取代的3-7元杂环基。

进一步的，化合物IMe制备工艺路线如下：

术语解释

本发明所述的“3-7元环烷基或环烯基”包括但不限于“3-7元单环环烷基或单环环烯基”，具体实施例包括但不限于：取代或未被取代的环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基等。

本发明所述的“3-7元杂环基”是指至少含有一个杂原子(例如含有1个、2个、3个。或4个)的且环原子数为3-7个的饱和或部分饱和的单环环状基团，所述杂原子为氮原子、氧原子和/或硫原子；

本发明所述的“立体异构体”是指当本发明化合物含有一个或多个不对称中心，因而可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体。本发明化合物可以有不对称中心，这类不对称中心各自独立地产生两个光学异构体。本发明的范围包括所有可能的光学异构体和它们的混合物。

“药学上可接受载体(药用载体)”是指可用于制备药物组合物的载体，该载体通常与组合物的其他成分相容，对接受者无害，并且既不是生物学上不想要的也不是其他方面不想要的。“药学上可接受载体”包括一种和/或多种载体。实施方式包括用于局部、眼部、肠胃外、静脉内、腹膜内肌内、舌下、鼻和口服施用的载体。“药学上可接受载体”还包括用于制备水性分散体的试剂和用于注射或分散的无菌粉末。

本文中使用时，“赋形剂”包括可用于制备药物组合物的生理学相容的添加剂。药学上可接受载体和赋形剂的实例可以例如在Remington Pharmaceutical Science(第16版)中找到。

有益效果

相比于现有技术，本发明的优点在于：

(1)本发明化合物、其药学上可接受的盐或、互变异构体或立体异构体具有优异的AhR激动作用，能被安全地用于治疗由AhR活性异常所介导的疾病或相关病症。本发明化合物在确认对HepG2细胞活力不明显影响的浓度下测试对AhR激动活性，结果表明本发明化合物AhR激动活性是苯烯莫德或FICZ阳性对照药物的2～9倍，对于治疗由AhR活性异常所介导的疾病或相关病症具有良好的效果。在DSS小鼠溃疡性结肠炎模型中，本发明化合物给药后，在10mg/kg剂量的恢复情况比对照组效果更好。

(2)本发明化合物、其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体具有良好的生物稳定性、代谢稳定性，展现出良好的药代动力学性质，具有良好的临床应用前景。

(3)本发明化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体显示出较低的毒性，耐药性好，安全性高。

(4)本发明化合物稳定性高，不易发生水解、氧化等化学降解反应，在长期室温放置未见变色、杂质增长，无需特殊避光存储，与苯烯莫德比较，在光照条件下光解现象明显降低。

附图说明

图1为受试化合物在1μM浓度下对PBMC细胞活性的影响结果图；

图2为受试化合物在1μM浓度下对HepG2细胞活性的影响结果图；

图3为受试化合物在DSS小鼠溃疡性结肠炎模型中对结肠长度影响的结果(与正常空白组比较，**p<0.01；与模型组比较，#p<0.05.)；

图4为受试化合物在DSS小鼠溃疡性结肠炎模型中对疾病活动指数影响的结果图(与正常空白组比较，**p<0.01；与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01.)。

图5为各组小鼠背部表面观察图。

图6为24h药物透过率的检测结果。

图7为PASI评分图。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

实施例1

以下方法详细描述制备了上文所述的本发明化合物，本发明化合物和对比例的化合物可以通过有机合成领域的技术人员用已知的或市售的原料和试剂制备。

下述合成方法为本发明式(I)化合物的具体合成路线：

其中X选自卤素，n为1-5的整数；优选X为F或Cl，或者X是F和Cl的多取代情况；

R选自取代或未被取代的3-7元环烷基或环烯基、取代或未被取代3-7元杂环基。

实施例2

4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯的合成

(1)4-环戊基-3,5-二甲氧基苯甲酸的合成

向单口瓶中加入3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(20.07g，102.29mmol)，加入浓硫酸(50mL)，搅拌溶解。冰浴下，向单口瓶中逐滴加入环戊醇(21.95g，254.82mmol)。加完环戊醇后，撤去冰浴，升温至70℃，反应4h。TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。反应液冷却至室温，倒入烧杯中。向烧杯中加入饱和碳酸氢钠溶液调节反应液pH值至3-5。用乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥完毕后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得到棕色固体，为4-环戊基-3,5-二甲氧基苯甲酸粗品(24.76g)。产率：96.7％。

(2)4-环戊基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯的合成

向单口瓶中加入4-环戊基-3,5-二甲氧基苯甲酸(24.76g，98.92mmol)，加入甲醇(50mL)，搅拌溶解。冰浴下，向单口瓶中逐滴加入氯化亚砜(17.65g，148.39mmol)，有白烟产生。加完氯化亚砜后，撤去冰浴，升温至60℃，反应1h。TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。反应液冷却至室温，减压浓缩除去甲醇和过量的氯化亚砜。用乙酸乙酯(150mL)和水(150mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得黑色固体：4-环戊基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯粗品(25.95g)。产率：99.2％。

4-环戊基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝15：1。流动相浓缩至干，得黄色固体：4-环戊基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯纯品(18.54g)。纯化收率：71.4％。

(3)4-环戊基-3,5-二甲氧基苄醇的合成

向单口瓶中加入4-环戊基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(18.54g，70.14mmol)，加入四氢呋喃(50mL)，搅拌溶解。冰浴下，向单口瓶中分批加入氢化铝锂(3.99g，105.21mmol)，有大量气泡产生。加完氢化铝锂后，撤去冰浴，室温下反应1.5h。TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。冰浴下，向单口瓶中依次逐滴加入水(3.99mL)、15％氢氧化钠溶液(3.99mL)和水(11.97mL)，搅拌30min，有大量白色固体产生。用硅藻土过滤除去白色沉淀，收集滤液。用少量四氢呋喃洗涤沉淀，过滤，收集洗涤液。合并滤液和洗涤液，减压浓缩除去四氢呋喃。用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得棕色固体：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄醇粗品(15.37g)。产率：92.7％。

(4)4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基氯的合成

向单口瓶中加入4-环戊基-3,5-二甲氧基苄醇(15.37g，65.04mmol)，加入二氯甲烷(30mL)，搅拌溶解。冰浴下，向单口瓶中逐滴加入氯化亚砜(11.61g，97.56mmol)，有白烟出现。加完氯化亚砜后，撤去冰浴，室温下反应2h。TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。反应液减压浓缩除去二氯甲烷和过量的氯化亚砜。用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得黑色油状物：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基氯粗品(15.14g)。产率：91.4％。

4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基氯柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝100：1。流动相浓缩至干，得黄色固体，为4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基氯纯品(12.60g)。纯化收率：83.2％。

(5)4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯的合成

向单口瓶中加入4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基氯(12.60g，49.46mmol)，加入亚磷酸三乙酯(49.31g，296.76mmol)，搅拌溶解。氮气置换3次。反应液升温至160℃，反应5h。点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应，去除溶剂后，得到4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(16.75g)。产率95％。

实施例3

(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成

向三口瓶中加入4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.01g,2.83mmol)，加入四氢呋喃(15mL)，冰浴搅拌溶解。氮气保护下向三口瓶中分批加入氢化钠(452.5mg,11.31mmol)，加毕反应1h，向三口瓶中缓慢滴加苯甲醛(4.24mmol)的四氢呋喃溶液(450.2mg苯甲醛溶于10mL四氢呋喃)，滴加完撤去冰浴，缓慢升温至70℃，反应4h。TLC点板监测反应，原料反应完后降至室温。冰浴下，向三口瓶中加水淬灭至无气体生成，减压浓缩除去四氢呋喃。用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得粗品黄色油状物(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯(804.6mg)。

(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝50：1，流动相浓缩至干，得黄色固体，为(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯纯品(403.2mg)。产率：46.2％。

(2)(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成

向单口瓶中加入(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯(403.2mg,1.31mmol)、盐酸吡啶(3.02g,26.15mmol)。氮气置换3次。缓慢升温至210℃，待盐酸吡啶熔化后保温4h。TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。反应液冷却至室温，用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得粗品(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚(305.4mg)。

(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝30：1。流动相浓缩至干，得棕色固体，为(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚纯品(145.1mg)。产率：39.6％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.10(s,2H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.36(t,J＝8.0Hz,2H),7.25(t,J＝8.0Hz,1H),7.01(d,J＝16.0Hz,1H),6.89(d,J＝16.0Hz,1H),3.51-3.42(m,1H),2.02-1.95(m,2H),1.82-1.75(m,2H),1.66-1.55(m,4H).ESI-MS m/z 279.1[M-H]^-.

实施例4

(E)-2-环戊基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环戊基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例3中的(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.01g，2.83mmol)，对氟苯甲醛(525.7mg，4.24mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(252mg)。产率：27.2％。

(2)(E)-2-环戊基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例3中的(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环戊基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(252.5mg,0.77mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(103.3mg)。产率：44.8％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.09(s,2H),7.64-7.61(m,2H),7.21-7.16(m,2H),6.97(d,J＝16.0Hz,1H),6.88(d,J＝16.0Hz,1H),6.47(s,2H),3.50-3.41(m,1H),1.99-1.96(m,2H),1.80-1.75(m,2H),1.64-1.55(m,4H).ESI-MS m/z 297.1[M-H]^-.

实施例5

(E)-2-环戊基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环戊基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例3中的(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.01g，2.83mmol)反应和对氯苯甲醛(593.6mg，4.24mmol)并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(451.3mg)。产率：46.5％。

(2)(E)-2-环戊基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例3中的(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，采用原料：(E)-2-环戊基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(451.3mg,1.32mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚(251.3mg)。产率：60.6％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.11(s,2H),7.61(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.04(d,J＝16.0Hz,1H),7.88(d,J＝16.0Hz,1H),6.49(s,2H),3.51-3.42(m,1H),2.00-1.95(m,2H),1.80-1.75(m,2H),1.64-1.55(m,4H).ESI-MS m/z 313.1[M-H]^-.

实施例6

(E)-2-环戊基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环戊基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，原料：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.01g，2.83mmol)和对溴苯甲醛(784.4mg，4.24mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(521.7mg)。产率：47.4％。

(2)(E)-2-环戊基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例3中的(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环戊基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(521.7mg,1.35mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-苯二酚(215.2mg)。产率：44.5％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.10(s,2H),7.53(s,2H),7.05(d,J＝16.0Hz,4H),6.85(d,J＝16.0Hz,2H),3.51-3.42(m,1H),1.99 -1.95(m,2H),1.81-1.74(m,2H),1.63-1.54(m,4H).ESI-MS:m/z357.0[M-H]^-.

实施例7

4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯的合成

(1)4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸的合成

向单口瓶中加入3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(20.12g,102.55mmol)和浓硫酸(50mL)，搅拌溶解。冰浴下向单口瓶中逐滴加入环己醇(25.68g,256.37mmol)。加毕撤去冰浴，缓慢升温至70℃，反应4h。TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。反应液冷却至室温，倒入烧杯中。向烧杯中加入饱和碳酸氢钠溶液调节反应液pH值至3-5。用乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得粗品为棕色固体：4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸(27.10g)。产率：100.0％。

(2)4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯的合成

向单口瓶中加入4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸(27.10g，102.53mmol)和甲醇(50mL)，搅拌溶解。冰浴下，向单口瓶中逐滴加入氯化亚砜(18.29g，153.79mmol)，有白烟产生。加完氯化亚砜后，撤去冰浴，升温至60℃，反应1h。点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。反应液冷却至室温，减压浓缩除去甲醇和过量的氯化亚砜。用乙酸乙酯(150mL)和水(150mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥5h。干燥完后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得黑色固体：4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯粗品(28.23g)。产率：98.9％。

4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝15：1。流动相浓缩至干，得黄色固体：4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯纯品(19.51g)。纯化收率：69.1％。

(3)4-环己基-3,5-二甲氧基苄醇的合成

向单口瓶中加入4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(27.10g,97.36mmol)、四氢呋喃(271mL)，搅拌溶解。冰浴下分批缓慢加入四氢铝锂(7.4g,194.73mmol)，加毕撤去冰浴，升至室温反应1h后，点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。冰浴下向反应液中加水淬灭四氢铝锂至溶液变为灰白色，抽滤，滤液用乙酸乙酯(150mL)和水(150mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥完后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得淡黄色固体：4-环己基-3,5-二甲氧基苄醇粗品(20.23g)，产率：83％。

4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝15：1。流动相浓缩至干，得白色固体：4-环己基-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯纯品(16.13g)。纯化收率：66.2％。

(4)4-环己基-3,5-二甲氧基苄基氯的合成

向单口瓶中加入4-环己基-3,5-二甲氧基苄醇(16.13g，64.43mmol)和二氯甲烷(30mL)，搅拌溶解。冰浴下，向单口瓶中逐滴加入氯化亚砜(11.50g，96.65mmol)，有白烟出现。加完氯化亚砜后，撤去冰浴，室温下反应2h。点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。反应液减压浓缩除去二氯甲烷和过量的氯化亚砜。用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥完后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得黑色油状物：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基氯粗品(15.22g)，产率：87.9％。

4-环己基-3,5-二甲氧基苄基氯柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝100：1。流动相浓缩至干，得黄色固体：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基氯纯品(11.81g)。纯化收率：77.6％。

(5)4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯的合成

向单口瓶中加入4-环己基-3,5-二甲氧基苄基氯(11.81g,43.94mmol)，加入亚磷酸三乙酯(43.80g,263.63mmol)，搅拌溶解。氮气置换3次。反应液缓慢升温至160℃，反应5h，TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应，冷却至室温。减压浓缩去除溶剂后，粗品用正己烷(100mL)打浆3次，得淡黄色固体4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(15.62g)。产率95.9％。

实施例8

(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成

向三口瓶中加入4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.08g,2.92mmol)、四氢呋喃(15mL)，搅拌溶解。氮气置换3次。冰浴下向三口瓶中分批加入60％氢化钠(466.5mg,11.66mmol)，加完后，反应1h。向三口瓶中缓慢滴加苯甲醛(4.37mmol)的四氢呋喃溶液(464.1mg苯甲醛溶于10mL四氢呋喃)，加毕缓慢升温至70℃，反应4h。TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。冰浴下，向三口瓶中加水淬灭反应至无气体生成，减压浓缩除去四氢呋喃。用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得黄色油状物：(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯粗品(625.2mg)。

(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝50：1。流动相浓缩至干，得黄色固体：(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯纯品(451.1mg)。产率：48.0％。

(2)(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成

向单口瓶中加入(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯(451.1mg,1.40mmol)，加入盐酸吡啶(3.23g,27.98mmol)。氮气置换3次。缓慢升温至210℃，待盐酸吡啶熔化后，反应4h。TLC点板监测反应，确认原料反应完后，停止反应。反应液冷却至室温凝固，用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)萃取3次。合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后，减压浓缩除去乙酸乙酯，得黑色固体：(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚粗品(215.9mg)。

(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚柱层析纯化，流动相为石油醚：乙酸乙酯＝30：1。流动相浓缩至干，得棕色固体：(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚纯品(109.3mg)。产率：26.5％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.04(s,2H),7.56(d,J＝8.0Hz,2H),7.35(t,J＝8.0Hz,2H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),7.00(d,J＝16.0Hz,1H),6.87(d,J＝16.0Hz,1H),6.5(s,2H),3.08-3.02(m,1H),2.14-2.06(m,2H),1.75-1.65(m,3H),1.44-1.41(m,2H),1.30-1.23(m,3H).ESI-MS m/z 293.0[M-H]^-.

实施例9

(E)-2-环己基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.08g，2.92mmol)和对氟苯甲醛(525.7mg，4.24mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(483mg)。产率：48.7％。

(2)(E)-2-环己基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(483.7mg，1.42mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(4-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(171.8mg)。产率：38.7％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.06(s,2H),7.64-7.61(m,2H),7.20-7.17(m,2H),6.96(d,J＝16.0Hz,1H),6.87(d,J＝16.0Hz,1H),6.46(s,2H),3.08-3.02(m,1H),2.15-2.06(m,2H),1.76-1.65(m,3H),1.44-1.41(m,2H),1.32-1.16(m,3H).ESI-MS m/z 311.1[M-H]^-.

实施例10

(E)-2-环己基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.08g，2.92mmol)和对氯苯甲醛(593.6mg，4.24mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(475.0mg)。产率：45.6％。

(2)(E)-2-环己基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(475mg，1.33mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(4-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚(163.6mg)。产率：37.5％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.07(s,2H),7.60(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.03(d,J＝16.0Hz,1H),6.87(d,J＝16.0Hz,1H),6.47(s,2H),3.08 -3.02(m,1H),2.15-2.06(m,4H),1.76-1.65(m,4H),1.44-1.41(m,2H).ESI-MS m/z 327.0[M-H]^-.

实施例11

(E)-2-环己基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.08g，2.92mmol)和对溴苯甲醛(784.4mg，4.24mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(625.3mg)。产率：53.4％。

(2)(E)-2-环己基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(625.3mg，1.56mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(4-溴苯乙烯基)-1,3-苯二酚(194.0mg)。产率：33.4％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.06(s,2H),7.53(s,4H),7.04(d,J＝16.0Hz,1H),6.85(d,J＝16.0Hz,1H),6.47(s,2H),3.08-3.02(m,1H),2.15-2.06(m,2H),1.75-1.65(m,3H),1.44-1.40(m,2H),1.32-1.19(m,3H).ESI-MS m/z 371.0[M-H]^-.

实施例12

(E)-2-环己基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和3-氟苯甲醛(502.6mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(470.0mg)。产率：51.1％。

(2)(E)-2-环己基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(470mg，1.38mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(150mg)。产率：34.8％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.08(s,2H),7.80(t,J＝7.5Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),7.21(dd,J＝5.7Hz,2H),7.04(dd,J＝16.4Hz,2H),6.50(s,2H),3.06(t,J＝11.5Hz,1H),2.10(dd,J＝11.5Hz,2H),1.70(dd,J＝9.2Hz,3H),1.43(d,J＝11.6Hz,2H),1.36–1.12(m,3H).ESI-MS m/z 311.1[M-H]^-.

实施例13

(E)-2-环己基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2-氟苯甲醛(502.6mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(450mg)。产率：49.0％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(450mg，1.32mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(170mg)。产率：41.2％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.03(s,2H),7.61(dd,J＝5.6Hz,2H),7.18(t,J＝8.8Hz,2H),6.91(q,J＝16.3Hz,2H),6.46(s,2H),3.05(t,J＝12.1Hz,1H),2.10(dd,12.1Hz,2H),1.70(dd,J＝10.1Hz,4H),1.42(d,J＝12.5Hz,2H),1.34–1.17(m,2H).ESI-MSm/z 311.1[M-H]^-.

实施例14

(E)-2-环己基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2-氯苯甲醛(569.2mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(480mg)。产率：49.8％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(480mg，1.34mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚(170mg)。产率：38.4％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.07(s,2H),7.67(dd,J＝5.6Hz,2H),7.53(t,J＝8.8Hz,2H),7.37(q,J＝16.3Hz,2H),7.10(s,2H),3.13(t,J＝12.1Hz,1H),2.26(dd,12.1Hz,2H),2.10(dd,J＝10.1Hz,4H),1.72(d,J＝12.5Hz,2H),1.64–1.37(m,2H).ESI-MSm/z 327.1[M-H]^-.

实施例15

(E)-2-环己基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和3-氯苯甲醛(569.2mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(475mg)。产率：49.3％。

(2)(E)-2-环己基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(475mg，1.33mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚(170mg)。产率：38.8％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.05(s,2H),7.60(d,J＝8.5Hz,2H),7.40(d,J＝8.5Hz,2H),7.03(d,J＝16.3Hz,1H),6.86(d,J＝16.3Hz,2H),6.47(s,1H),3.05(t,J＝12.2Hz,1H),2.10(dd,J＝11.0Hz,2H),1.70(dd,J＝10.3Hz,2H),1.43(d,J＝11.7Hz,2H),1.20(d,J＝13.6Hz,4H).ESI-MS m/z 327.1[M-H]^-.

实施例16

(E)-2-环己基-5-(2,4-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2,4-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2,4-二氟苯甲醛(575.4mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,4-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(470mg)。产率：48.6％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2,4-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2,4-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(470mg，1.31mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,4-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(170mg)。产率：39.2％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.10(s,2H),7.74–7.69(m,1H),7.27(td,J＝9.6,4.7Hz,1H),7.20(d,J＝16.4Hz,1H),7.15(dt,J＝11.8,Hz,1H),6.98(d,J＝16.4Hz,1H),6.50(s,2H),3.08(t,J＝12.1Hz,1H),2.20–2.02(m,2H),1.73(dd,J＝31.4,10.5Hz,3H),1.40(d,J＝12.2Hz,2H),1.25(t,J＝13.4Hz,3H).ESI-MS m/z 329.1[M-H]^-.

实施例17

(E)-2-环己基-5-(2,6-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2,6-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2,6-二氟苯甲醛(575.4mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,6-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(450mg)。产率：46.5％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2,6-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2,6-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(450mg，1.26mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,6-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(150mg)。产率：36.2％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.10(s,2H),7.35(d,J＝7.3Hz,2H),7.17(d,J＝16.3Hz,1H),7.07(t,J＝9.2Hz,1H),6.86(d,J＝16.3Hz,1H),6.48(s,2H),3.06(t,J＝12.0Hz,1H),2.10(dd,J＝11.2Hz,2H),1.70(dd,J＝10.0Hz,3H),1.43(d,J＝11.9Hz,2H),1.27(dd,J＝10.6Hz,3H).ESI-MS m/z 329.1[M-H]^-.

实施例18

(E)-2-环己基-5-(2,5-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2,5-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2,5-二氟苯甲醛(575.4mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,5-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(445mg)。产率：46.0％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2,5-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2,5-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(445mg，1.24mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,5-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(168mg)。产率：41.0％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.06(s,2H),7.86(dd,J＝7.8Hz,1H),7.30–7.23(m,1H),7.12(d,J＝8.4Hz,1H),7.05(d,J＝16.4Hz,1H),6.93(d,J＝16.5Hz,1H),6.48(s,2H),3.11–2.98(m,1H),2.10(dd,J＝12.1Hz,2H),1.70(dd,J＝8.4Hz,3H),1.43(d,J＝11.3Hz,2H),1.19(dd,J＝10.7Hz,3H).ESI-MS m/z 329.1[M-H]^-.

实施例19

(E)-2-环己基-5-(3,4-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(3,4-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和3,4-二氟苯甲醛(575.4mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3,4-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(463mg)。产率：47.9％。

(2)(E)-2-环己基-5-(3,4-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(3,4-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(463mg，1.29mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3,4-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(168mg)。产率：39.4％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.11(s,2H),7.77–7.68(m,1H),7.27(td,J＝9.6Hz,1H),7.19(d,J＝16.4Hz,1H),7.12(dt,J＝11.8,Hz,1H),6.95(d,J＝16.4Hz,1H),6.52(s,2H),3.07(t,J＝12.1Hz,1H),2.20–2.05(m,2H),1.71(dd,J＝10.5Hz,3H),1.44(d,J＝12.2Hz,2H),1.27(t,J＝13.4Hz,3H).ESI-MS m/z 329.1[M-H]^-.

实施例20

(E)-2-环己基-5-(2,3-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2,3-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2,3-二氟苯甲醛(575.4mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,3-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(468mg)。产率：48.4％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2,3-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2,3-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(468mg，1.31mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,3-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(173mg)。产率：40.1％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.10(s,2H),7.72(ddd,J＝9.5Hz,1H),7.27(td,J＝10.1Hz,1H),7.17(t,J＝10.3Hz,1H),7.18–7.08(m,1H),6.94(d,J＝16.6Hz,1H),6.50(s,2H),3.06(t,J＝12.1Hz,1H),2.10(dd,J＝11.2Hz,2H),1.70(dd,J＝10.0Hz,3H),1.43(d,J＝11.1Hz,2H),1.24–1.12(m,3H).ESI-MS m/z 329.1[M-H]^-.

实施例21

(E)-2-环己基-5-(3,5-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(3,5-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和3,5-二氟苯甲醛(575.4mg，4.05mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3,5-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(470mg)。产率：48.6％。

(2)(E)-2-环己基-5-(3,5-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(3,5-二氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(470mg，1.31mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3,5-二氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(165.8mg)。产率：38.3％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.13(s,2H),7.43–7.27(m,2H),7.13(dd,J＝18.5,12.4Hz,2H),6.85(d,J＝16.8Hz,2H),6.48(s,1H),3.06(t,J＝11.7Hz,1H),2.10(dd,J＝13.1Hz,2H),1.70(dd,J＝9.1Hz,3H),1.42(d,J＝12.0Hz,2H),1.35–1.20(t,J＝12.0Hz,3H).ESI-MS m/z 329.1[M-H]^-.

实施例22

(E)-2-环己基-5-(2,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2,4,5-三氟苯甲醛(648mg，4.04mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(478mg)。产率：47.0％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(478mg，1.27mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(163mg)。产率：36.8％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.02(s,2H),7.63(dd,J＝7.3Hz,2H),6.88(dd,J＝16.4Hz,1H),6.81–6.66(m,2H),6.44(s,1H),3.04(t,J＝9.8Hz,1H),2.09(dd,J＝13.0Hz,2H),1.70(dd,J＝9.6Hz,3H),1.42(d,J＝11.2Hz,2H),1.34–1.22(m,3H).ESI-MS m/z347.1[M-H]^-.

实施例23

(E)-2-环己基-5-(2,3,4-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2,3,4-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2,3,4-三氟苯甲醛(648mg，4.04mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,3,4-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(450mg)。产率：44.3％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2,3,4-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2,3,4-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(450mg，1.20mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,3,4-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(161mg)。产率：38.7％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.09(s,2H),7.28–7.12(m,2H),6.84(d,J＝16.2Hz,1H),6.71(d,J＝16.2Hz,1H),6.41(s,2H),4.75–4.69(m,1H),3.09–2.98(m,2H),2.09(dd,J＝12.2Hz,2H),1.69(dd,J＝10.1Hz,2H),1.42(d,J＝12.4Hz,2H),1.33–1.15(m,2H).ESI-MS m/z 347.1[M-H]^-.

实施例24

(E)-2-环己基-5-(3,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(3,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和3,4,5-三氟苯甲醛(648mg，4.04mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(463mg)。产率：45.6％。

(2)(E)-2-环己基-5-(3,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(3,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(463mg，1.23mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(3,4,5-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(157mg)。产率：36.6％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.30(d,J＝16.4Hz,1H),7.55–7.31(m,1H),7.32–7.17(m,1H),7.17(s,1H),6.96(t,J＝16.2Hz,2H),6.90–6.77(m,1H),6.46(s,1H),3.05(dt,J＝11.4,8.3Hz,1H),2.33–1.89(m,2H),1.92–1.60(m,2H),1.44(t,J＝12.6Hz,1H),1.42–1.19(m,5H).ESI-MS m/z 347.1[M-H]^-.

实施例25

(E)-2-环己基-5-(2,4,6-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环己基-5-(2,4,6-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，采用原料：4-环己基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.70mmol)和2,4,6-三氟苯甲醛(648mg，4.04mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,4,6-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(453mg)。产率：44.6％。

(2)(E)-2-环己基-5-(2,4,6-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例8中的(E)-2-环己基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环己基-5-(2,4,6-三氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(453mg，1.20mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环己基-5-(2,4,6-三氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(158mg)。产率：37.7％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.02(s,2H),7.62(dd,J＝12.3Hz,1H),6.92(d,J＝16.5Hz,2H),6.91–6.79(m,1H),6.74(dd,J＝10.7Hz,1H),6.44(s,1H),3.04(dd,J＝10.3Hz,1H),2.09(dd,J＝12.3Hz,2H),1.69(dd,J＝8.3Hz,2H),1.42(d,J＝10.4Hz,2H),1.27(dd,J＝8.3Hz,4H).ESI-MS m/z 347.1[M-H]^-.

实施例26

(E)-2-环戊基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环戊基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，原料：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.81mmol)和3-氟苯甲醛(522.4mg，4.21mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(480mg)。产率：52.4％。

(2)(E)-2-环戊基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环戊基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(480mg，1.47mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(3-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(150mg)。产率：34.2％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.10(s,2H),7.48-7.45(d,1H),7.4-7.38(d,J＝16.0Hz,1H),7.12-7.01(m,J＝16.0Hz,2H),6.91-6.87(d,2H),6.55(s,2H),2.65-2.59(m,1H),2.33-2.29(m,1H),1.99-1.95(m,2H),1.78-1.75(m,1H),1.54-1.50(m,4H).ESI-MS m/z 297.1[M-H]^-.

实施例27

(E)-2-环戊基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环戊基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，原料：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.81mmol)和2-氟苯甲醛(522.4mg，4.21mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(500mg)。产率：54.6％。

(2)(E)-2-环戊基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环戊基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(500mg，1.53mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(2-氟苯乙烯基)-1,3-苯二酚(200mg)。产率：43.8％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.13(s,2H),7.83-7.79(t,J＝16.0Hz 1H),7.34-7.28(t,J＝16.0Hz,1H),7.24-7.19(t,J＝16.0Hz,2H),7.13-7.08(d,1H),7.02-6.98(d,1H),6.5(s,2H),3.51-3.42(m,1H),2.0-1.96(t,2H),1.78(s,2H),1.64-1.55(m,4H).ESI-MS m/z 297.1[M-H]^-.

实施例28

(E)-2-环戊基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环戊基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，原料：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.81mmol)和2-氯苯甲醛(591.6mg，4.21mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(450mg)。产率：46.8％。

(2)(E)-2-环戊基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环戊基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(450mg，1.31mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(2-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚(185mg)。产率：44.8％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.21(s,2H),7.95-7.92(d,1H),7.53-7.50(m,1H),7.42-7.38(d,J＝16.0Hz,1H)，7.35-7.31(m,J＝16.0Hz,1H),7.29-7.25(d,J＝16.0Hz,1H)，7.15-7.11(d,J＝16.0Hz,1H),6.56(s,2H),3.57-3.47(m,1H),1.99-1.96(m,2H),1.86-1.79(m,2H),1.71-1.59(m,4H).ESI-MS m/z 313.1[M-H]^-.

实施例29

(E)-2-环戊基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

(1)(E)-2-环戊基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-1,3-二甲氧基-5-苯乙烯基苯的合成，原料：4-环戊基-3,5-二甲氧基苄基膦酸二乙酯(1.0g，2.81mmol)和3-氯苯甲醛(522.4mg，4.21mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(460mg)。产率：47.8％。

(2)(E)-2-环戊基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚的合成

参照实施例3(E)-2-环戊基-5-苯乙烯基-1,3-苯二酚的合成，原料：(E)-2-环戊基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-二甲氧基苯(460mg，1.34mmol)反应并纯化得到产物：(E)-2-环戊基-5-(3-氯苯乙烯基)-1,3-苯二酚(170mg)。产率：40.2％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.19(s,2H),7.74-7.73(t,1H),7.59-7.57(d,J＝16.0Hz,1H),7.44-7.40(t,J＝16.0Hz,1H),7.35-7.32(t,J＝16.0Hz,1H),7.19-7.15(d,J＝16.0Hz,1H),6.94-6.90(d,J＝16.0Hz,1H),6.54(s,J＝16.0Hz,2H),3.54-3.47(m,1H),2.05-1.99(m,2H),1.86-1.78(m,2H),1.69-1.59(m,4H).ESI-MS m/z 313.1[M-H]^-.

测试例1

对本发明化合物进行活性测试，并选用已上市芳香烃受体激动剂药物苯烯莫德及常用芳香烃受体激动剂化合物FICZ作为对比实验化合物。

1、受试化合物细胞毒性测试

1)受试化合物在PBMC中的细胞毒测试

具体受试化合物如表1所示：

(1)配药

配制含培养基最高浓度药液：从初浓度为1mM的1#至8#，对照1#，对照2#，对照3#系列化合物各取1μL加入到499μL培养基中配制成浓度为2μM的含药培养基。

(2)细胞准备

①细胞信息：PBMC 5Million ID#:LP181017CAT#:PB003F-5M

②细胞复苏：将PBMC细胞从液氮罐中取出，迅速放入37℃的温水中融化，将细胞放入含培养基的离心管中，1200转离心11分钟，取出离心管倒掉培养基，用滴管吸取5mL的培养基使细胞重悬；

③细胞计数：打开细胞计数软件，选择细胞类型：PBMC，活细胞浓度：3.47×10^⁵个/mL；

(3)细胞给药

铺细胞给药：将细胞悬液稀释至7mL，96孔板铺细胞。每孔加100μL的细胞悬液，各孔再加入2μM的1#至8#，对照1#，对照2#，对照3#系列药液100μL，每组三个复孔。最终每孔活细胞数目约为2.5×10^⁴个，药物浓度为1μM。

(4)细胞毒测试

药物处理24h后，在每孔细胞中加入10μL CCK8，反应3小时后，在酶标仪中读数，吸收波长为450nm。读数结果如图1所示。

以对照组吸光度为100％，计算各化合物处理后的细胞活力。

2)受试化合物在HepG2中的细胞毒测试

(1)配药

(2)细胞准备

来源：HepG2细胞来源自中科院细胞库。

细胞复苏：将HepG2细胞从液氮罐中取出，迅速放入37℃的温水中融化，将细胞放入含培养基的离心管中，1200转离心11分钟，取出离心管倒掉培养基，用滴管吸取5mL的培养基使细胞重悬。

(3)细胞给药

将细胞悬液稀释至7mL，96孔板铺细胞。每孔加100μL的细胞悬液，各孔再加入2μM的1#至8#，对照1#，对照2#，对照3#系列药液100μL，每组三个复孔。最终每孔活细胞数目约为2.0×10^⁴个，药物浓度为1μM。

(4)细胞毒测试

药物处理24h后，在每孔细胞中加入10μL CCK8，反应3小时后，在酶标仪中读数，吸收波长为450nm。读数结果如图2所示。

由图1和图2可以看出，在测试浓度下，所有化合物对PBMC的细胞活力及HepG2的细胞活力均无明显影响。

2、化合物的AhR激动实验

根据化合物在报告基因实验中的结果来评价化合物的AhR激动作用。

(1)细胞转染:将HepG2种植到6cm细胞培养皿，贴壁过夜，

待细胞融合度为80％时，更换新鲜培养基并加入转染工作液，转染过夜。工作液配方为：1mL Opti-MEM+7.5μg pCMV-AHR+7.5μg pTK-3X DRE-Luc+30μL lipo6000。

(2)细胞铺板：将转染后的细胞消化，制备成浓度为3x10^⁵个细胞/mL的细胞悬液，铺96孔板，每孔100μL，贴壁过夜。

(3)配药

配制含培养基最高浓度药液：从初浓度为1mM的1#至16#，对照1#，对照2#，对照3#系列化合物各取1μL加入到499μL培养基中配制成浓度为2μM的含药培养基；再取2μM的含药培养基40μL，稀释成浓度为0.2μM的含药培养基400μL。

(4)细胞给药

将配好的含药培养基及空白培养基加入到上述96孔板中，每孔100μL。药物处理16小时后，进行荧光素酶报告基因检测。

(5)实验统计结果，如表1所示

表1受试化合物AhR活力试验结果

备注：上述各组AhR受体激动倍数为各组荧光强度与空白荧光强度的比值。

根据表1数据可以看出，本发明1-16#化合物均具有AhR活性，其中2#至16#受试化合物均具有良好的AhR激动作用。

3、化合物对PBMC细胞因子分泌的调节作用

(1)细胞信息：骨髓来源的单个核细胞；

(2)细胞铺板及给药：将PBMC细胞从液氮罐中取出复苏后，向96孔板中加入80L培养基，每孔20万细胞。将含有2μM或0.2μM的2#，6#，对照1#，药液的培养基吸取80μL分别加至96孔板，最终药物浓度为1μM和0.1μM，每孔在此浓度下静置预处理1h。预处理结束后移除孔中药液，再向对应孔中加入80μL含有15μg/mL PHA(植物凝集素，Phytohemaggluyinin)的1μM或0.1μM溶液。刺激24h后检测培养基中细胞因子含量。

空白对照组：普通的培养基，细胞中未添加任何药物；

PHA组：向对应孔中加入未添加本发明化合物的80μL含有15μg/mL PHA的培养基溶液。

表2实验结果

试验结果显示：化合物2#和6#在0.1μM和1μM两种浓度下均能够抑制细胞因子TNFa、IL4，并且化合物2#和6#对TNFa、IL4的抑制作用显著大于对照1#苯烯莫德，在1μM剂量下均超过2倍以上。

4、化合物对DSS所致结肠炎的作用

(1)实验动物：40只C57BL/6小鼠，雄性，8周龄，22-24g

(2)实验材料：葡聚糖硫酸钠(DSS)(美国MP.Biomedicals公司，货号：S7102)；受试化合物对照1#、化合物6#；二甲基亚砜(DMSO)；吐温80；娃哈哈纯净水

(3)实验方案：将40只小鼠随机分为4组，每组10只，分别为空白组，模型组，药物对照1#、化合物6#组。正常空白组自由饮用蒸馏水，其余3组连续8天自由饮用2.5％的DSS水溶液，每天检查溶液，并更换新鲜的DSS溶液。造模第一天给予药物治疗，正常空白组给予对应的生理盐水溶液，肠炎模型组给予溶剂体系溶液，受试药对照1#、化合物6#组分别以对应药物10mg/kg剂量灌胃给药。每天记录小鼠体重，并观察其腹泻便血情况，记录评分。第9天处死小鼠，取血，结肠。并记录肠长，盲肠内容物隐血等情况。

受试药配制方法：称取1.00mg药物粉末，加入20μL的DMSO，充分溶解后加入20μL的吐温80混匀，加入0.96mL娃哈哈纯净水，混匀即配成1mg/mL的药物溶液，按0.1mL/10g(体重)给药。

溶剂：20μL DMSO+20μL吐温80+0.96mL娃哈哈纯净水混匀(用于模型组)。

(4)试验结果：如图3所示，结肠长度统计结果显示化合物6#和对照1#苯烯莫德组都能够改善，并且在实际效果上化合物6#组优于对照1#苯烯莫德组。

如图4，疾病活动指数(基于体重变化和便血情况的综合评分)数据显示，化合物6#组和对照1#苯烯莫德组都有很好的治疗效果，其中化合物6#组作用更为显著。

5、对特应性皮炎的作用

(1)特应性皮炎模型的构建

将56只清洁级BALB/C小鼠，6-8周龄适应性饲养5天后，随机分成7组，每组8只：

①空白对照组

②造模加溶剂组

③造模加空白基质组

④造模加阳性药糠酸莫米松组

⑤造模加质量分数1％苯烯莫德组

⑥造模加质量分数1.2％化合物2#(采用空白基质配制)

⑦造模加质量分数1.2％化合物6#(采用空白基质配制)

如下步骤所示，松香石蜡脱毛后，每只小鼠背部涂抹0.5％(W/V，溶剂为丙酮橄榄油混合物(丙酮：橄榄油＝3：1))的2，4-二硝基氟苯(DNFB)50μL，并在第4，6，8天上午给予0.25％(W/V)DNFB 50μL，空白对照组涂抹等量的溶剂对照。动物实验遵循中国药科大学实验动物饲养管理与使用指南，符合动物伦理学规范。

天数

(2)给药方式

如上步骤所示，于上午涂抹溶剂对照或DNFB进行造模；第5天起每天下午涂抹一次待测药物膏剂每次50mg，确保药物能够均匀涂抹在皮肤表面，具体给药方法如上所示；

具体操作，如上述分组所示，②组第5天起每天下午涂抹一次溶剂(丙酮：橄榄油＝3：1)50mg；③组第5天起每天下午涂抹一次空白基质50mg；④⑤⑥⑦组根据分组第5天起分别涂抹阳性药糠酸莫米松、1％苯烯莫德、1.2％化合物2#或1.2％化合物6#50mg。

特应性皮炎严重程度采用AD Score标准评分

从①红斑/出血②干燥③渗出/结痂④水肿4项指标进行评价皮炎外观严重程度。各项指标以0～3分进行记分，将4个指标的得分相加得到总分。AD Score评分标准如下：0，无症状；1，症状轻微；2，中度症状；3，严重症状。于造模第0、4、6、8、10天，对每只小鼠背部皮肤进行拍照记录评分。

表3各组小鼠背部AD评分

注：**：P＜0.01，vs空白对照组；^a：P＜0.05，vs溶剂组(+DNFB)；^aa：P＜0.01vs.溶剂组(+DNFB)；^b：P＜0.05，vs空白基质(+DNFB)；^bb：P＜0.01，vs空白基质(+DNFB)；使用双因素方差及Dunnett’s双重比较检验进行分析。

表面观察图如图5所示。

6、药物透过率实验

试验步骤

待测药物：质量分数1.2％2#化合物乳膏；质量分数1.2％6#化合物乳膏；质量分数1.0％苯烯莫德乳膏；

(1)半透膜的准备：将提前准备好的半透膜从冰箱中取出；

(2)接收液的配制：量取100mL聚乙二醇400溶液，使用生理盐水定容至250mL，混合均匀，4℃保存，每次加入接收池前，先预热至32℃；

(3)体外扩散试验：使用药物透皮扩散仪，将处理好的半透膜固定于供给池与接收池中间，恒温32℃水浴循环，先平衡30min，更换接收液排尽下层空气。在供给池中分别均匀加入乳膏约0.5g涂抹均匀，磁力搅拌转速600r/min，在0.5、1、2、4、6、24h分别从接收池取出1mL样品液，同时补加等量等温新鲜的接收液；

实际取样时间点为0.5、1、2、4、6、24h，取样1mL样品也直接装入液相小瓶。同时补加等量等温新鲜的接收液。液相检测计算药物透过率。

乳膏-扩散试验-兔皮

试验步骤

(1)离体兔皮的制备

(2)接收液的配制：量取100mL聚乙二醇400溶液，使用生理食盐水定容至250mL，混合均匀，4℃保存，每次加入接收池前，先预热至32℃。

(3)体外透皮试验：使用药物透皮试验扩散试验仪，将处理好的兔皮固定于供给池与接收池中间，角质层朝向供给池，恒温32℃水浴循环，先平衡30min，更换接收液，排尽皮肤下的空气，滤纸吸干皮肤表面的液体，在供给池中分别均匀加入乳膏0.5g，涂抹均匀，磁力搅拌转速600r/min，在0.5、1、2、3、4、5、7、9、12、24h分别从接收池取出1mL样品液装入液相小瓶，同时补加等量等温新鲜的接收液。液相检测计算药物透过率。

24h药物透过率的检测结果如图6所示。

如图6所示，两个试验体系中，三个乳膏的24小时药物透过率的趋势一致，均为已上市对照药苯烯莫德>2#>6#。结果表明本发明的化合物2#和6#制备的乳膏透皮吸收少、血中暴露量低，系统不良反应较已上市对照药苯烯莫德轻。

7、对小鼠银屑病的测试

一、评价化合物6#对IMQ诱导的小鼠银屑病的药效。

化合物结构：

二、组别设置

(1)凡士林+空白基质组，10只；

(2)IMQ+空白基质组，10只；

(3)IMQ+化合物6#组(用空白基质配制质量分数1.2％药物)，10只。

IMQ：咪喹莫特

三、药物配制

IMQ：5％咪喹莫特(咪喹莫特用于造模小鼠表面产生银屑病)

用空白基质配置1.2％化合物6#药物

四、动物

种属及品系：SPF级.KM小鼠.雄性

体重：35-40g

来源：北京斯贝福生物技术有限公司

饲养条件：空调房间，温度18-26℃，相对湿度20％-60％。

五、试验步骤

备皮：小鼠自由饮水用食，进入动物室适应5天后，用推子推去小鼠背部2cmx2.5cm面积毛发，用脱毛膏涂抹30s-1min后，使用棉球清理脱毛膏。

随机分组：脱毛24h后将75只小鼠按体重随机分为4组：凡士林+空白基质组10只，IMQ+空白基质组，10只；IMQ+化合物6#组(用空白基质配制1.2％药物)(10只)。

造模给药：上午，均涂抹62.5mg的5％咪喹莫特或凡士林。下午，涂抹62.5mg的空白基质或1.2％化合物6#于背部。

实验记录：在上午造模前，每天观察褶皱、红斑及鳞屑情况，记录评分并拍照，计算小鼠PASI评分。

表4评分标准

表5PASI评分(根据褶皱、鳞屑、红斑的综合评分)

用T-test方法计算IMQ+化合物6#VS IMQ+空白基质的统计学差异性；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

测试结果如上表5和图7所示，本发明IMQ+化合物6#VS IMQ+空白基质第七天显著性差异P值为0.0002，具有显著性差异，即本发明化合物6#与造模对照组IMQ+空白基质比具有显著更优的治疗效果。

Claims

1.一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体：

其中X选自卤素，n为1-5；

R选自取代或未被取代的3-7元环烷基或环烯基、取代或未被取代的3-7元杂环基；

所述取代为被C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素中的至少一个取代。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，其特征在于，其中X是F和/或Cl。

3.根据权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐、互变异构体或立体异构体，其特征在于，所述取代或未被取代C₃-C₇杂环基为含N杂环基；所述取代为被C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素中的至少一个取代。

4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，其特征在于，选自以下化合物：

5.式(II)化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体：

6.权利要求1-4任一项所述式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，及权利要求5所述式(II)的化合物，或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体中至少一种用于制备药物的用途，所述药物用于治疗癌症、自身免疫失调和其他具有免疫学因素的病症；

或者，所述药物用于预防和/或治疗由芳基烃受体(AhR)介导的疾病或病况；

或者，所述药物用于调控免疫、炎症相关细胞因子，所述细胞因子选自IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23、TNFα、TGF-β、IFN-γ、IL-1β；以及用于预防和/或治疗上述细胞因子异常所引起的疾病。

7.根据权利要求6所述的用途，其中所述自身免疫失调病症选自银屑病、湿疹、特异性皮炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病、溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、慢性肾病、强直性脊柱炎、干燥综合征、多发性肌炎、血管炎、风湿性多肌痛、免疫性血小板减少症、干眼症、1型糖尿病、银屑病和关节炎中一种或几种。

8.根据权利要求6所述的用途，其中所述具有免疫学因素的病症选自哮喘、变态反应、感染、骨质疏松、动脉粥样硬化、2型糖尿病、移植物抗宿主病和移植排异中的一种或几种。

9.一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药学上可接受载体或赋形剂，权利要求1-4任一项所述化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，及权利要求5所述式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体中至少一种。

10.一种制备权利要求1-4任一项所述化合物的方法，其特征在于，包括：

其中X选自卤素，n为1-5的整数；

R选自取代或未被取代的3-7元环烷基或环烯基、取代或未被取代的3-7元杂环基；所述取代为被C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素中的至少一个取代。