CN116917311A

CN116917311A - 长效胰高血糖素样多肽-1(glp-1)受体激动剂和其使用方法

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Publication number: CN116917311A
Application number: CN202180089098.0A
Authority: CN
Inventors: W·布莱克威尔; V·P·斯里瓦斯塔瓦; M·保利克
Original assignee: I2o Treatment Co
Current assignee: I2o Treatment Co
Priority date: 2020-12-17
Filing date: 2021-12-16
Publication date: 2023-10-20
Also published as: US20250034225A1; IL303686A; JP2024502740A; US12084485B2; MX2023007224A; WO2022133148A1; CA3202389A1; KR20230156689A; TW202237628A; EP4263587A1; US20230063420A1; AU2021400738A1; AR124395A1

Abstract

本发明涉及作为人类GLP‑1的长效类似物的经分离的多肽。所公开的GLP‑1受体激动剂多肽相对于内源性GLP‑1和已知合成GLP‑1受体激动剂多肽具有有益的物理化学特性，例如较长(即，“长效”)消除半衰期(t_1/2)以及改进的溶解性和热稳定性。本发明还涉及在多种治疗适应症中使用本发明所公开的GLP‑1受体激动剂多肽的方法以及其制造方法。所公开的GLP‑1受体激动剂多肽尤其适用于治疗例如2型糖尿病的代谢性疾病或病症、治疗肥胖症和提供体重减轻的方法中，并且适用于治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法中。

Description

长效胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)受体激动剂和其使用方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年12月17日提交的美国序列号63/126,736的权益，其公开内容通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明涉及作为胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)受体激动剂的化合物和其制备方法。本发明还提供了包含本发明化合物的药学上可接受的组合物和使用所述组合物治疗各种病症的方法。

背景技术

内源性GLP-1响应于营养物摄取而从肠道释放。在食物摄入和消化之后，碳水化合物和脂肪出现在肠道内腔中，其刺激所谓的肠促胰岛素作用，例如GLP-1的肠促胰岛素从肠道L-细胞释放。GLP-1一旦释放，就靶向胰腺，其中它以“葡萄糖依赖性方式”增强胰岛素分泌。换句话说，此GLP-1介导的对胰岛素的作用在葡萄糖水平较高时持续，但随着葡萄糖水平下降而安全地耗散。因此，GLP-1活性自我调节以降低低血糖(葡萄糖水平降到危险的低水平的病况)的风险。由于GLP-1具有小于五分钟的短消除半衰期(t_1/2)，因此这种内源性肽不适合地缩短用作治疗剂的寿命。

GLP-1的合成类似物已经设计以具有较长半衰期并且类似地以如内源性GLP-1的葡萄糖依赖性方式增强胰岛素分泌，以用于治疗2型糖尿病和用于提供体重减轻。

某些GLP-1受体激动剂，包括(艾塞那肽(exenatide))，通过Cambridge,U.K.的AstraZeneca出售；(度拉糖肽(dulaglutide)，通过Indianapolis,IN,U.S.A.的Eli Lilly and Co.出售；以及(利拉鲁肽(liraglutide))、(可注射的索马鲁肽(semaglutide))和(经口施用的索马鲁肽)，通过Denmark的Novo Nordisk A/S出售，各自经众多监管机构(包括美国食品药物管理局(United States Food and Drug Administration；U.S.FDA)和欧洲药物管理局(European Medicines Agency；EMA)批准用于治疗患有2型糖尿病的患者。这些市售GLP-1受体激动剂经开发并配制用于向患者注射和/或口服施用。然而，患者对2型糖尿病的注射和经口施用疗法的依从性是极不良的，其阻止许多患者实现GLP-1受体激动剂的全部和持续治疗潜力。许多患者跳过或停止周期性自施用指定可注射和经口施用的GLP-1受体激动剂并且因此无法充分治疗和控制其自身2型糖尿病疾患。

因此，仍需要改进的GLP-1受体激动剂多肽，其强效抵抗GLP-1受体，具有优异的物理化学特性，并且经调适以经由比可注射和经口施用的疗法更可靠的施用模式递送至患者。

发明内容

现已发现，本发明化合物和其药学上可接受的组合物可有效作为GLP-1受体激动剂。此类化合物具有如下通式：

一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列：

HX₂X₃GTX₆X₇X₈X₉X₁₀SX₁₂X₁₃X₁₄EX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLK X₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:200)；

其中每个变量如本文所定义和描述。

本发明的化合物已经设计以获得长消除半衰期(t_1/2)并且因此在本文中描述为“长效”GLP-1受体激动剂。

本发明的化合物和其药学上可接受的组合物适用于治疗与GLP-1受体相关的多种疾病、病症或疾患。此类疾病、病症或疾患包括代谢性疾病或病症，例如2型糖尿病、肥胖症和需要获得体重减轻。在某些实施方案中，本发明还涉及治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法。

附图说明

图1描绘用示例性长效GLP-1类似物多肽处理的Long Evans(LE)的饮食诱发肥胖(DIO)大鼠的慢性体重减轻(第27天)。

图2A说明化合物A120相对于索马鲁肽在DIO大鼠中的比较性体内体重减轻效力(在28天内基线相对于媒介物％，n＝6/剂量)。已由U.S.FDA批准(索马鲁肽，Denmark的Novo Nordisk A/S)用于治疗2型糖尿病。

图2B说明化合物A120相对于索马鲁肽在DIO大鼠中的比较性体内2型糖尿病效力(即降低HbA1c)(在28天内相对于媒介物的Δ-HbA1c，n＝9/剂量)。针对2型糖尿病的ZDF大鼠模型比较抗糖尿病效力。

图3描绘用于药物递送的代表性渗透微型泵的横截面图。

图4描绘偶联的GLP-1受体激动剂通过人类血清白蛋白(HSA)结合的效力变化。

图5描绘在静脉内和皮下施用之后大鼠和猴中化合物A120的血浆浓度变化。

图6描绘用化合物A120处理27天的雄性Long Evans(LE)的饮食诱发肥胖(DIO)大鼠的体重减轻的剂量和浓度反应。向18周龄(食用高脂饮食14周)的雄性LE DIO大鼠以1至300mcg/kg/天(n＝6只动物/剂量)范围内的六种剂量的化合物A120给药(SC；每隔一天)。加阴影的圆圈和空心圆圈表示来自两个单独研究的索马鲁肽的重复剂量(3、30、300mcg/kg/天)。

图7描绘雄性LE DIO大鼠在27天时段内的索马鲁肽和A120诱发的体重减轻。

图8描绘雄性LE DIO大鼠中索马鲁肽和A120诱发的身体组成变化，突出显示身体组成的变化主要归因于脂肪量损失的事实(在第26天使用定量磁共振测定身体组成)。

图9描绘施用不同剂量的化合物A120或索马鲁肽的小鼠的平均每日食物摄入抑制和累积食物摄入。

图10描绘用化合物A120或索马鲁肽给药(SC注射；每隔一天)的雄性Zucker糖尿病性脂肪(ZDF)大鼠的体重降低。

图11描绘雄性ZDF大鼠中索马鲁肽和A120诱发的身体组成变化，突出显示身体组成的变化主要归因于脂肪量损失的事实(在第25天测定身体组成)。

具体实施方式

本发明的某些实施方案的一般描述

本发明化合物和其药物组合物适用作GLP-1受体的激动剂，尤其适用作人类GLP-1受体的激动剂。本发明还涉及生产和使用此类化合物(即GLP-1受体激动剂多肽)的方法。本发明化合物是长效GLP-1受体激动剂。这些GLP-1受体激动剂多肽尤其适用于治疗代谢性疾病或病症，例如2型糖尿病、肥胖症的方法中，以及适用于提供体重减轻的方法中。在某些实施方案中，本发明还涉及治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法。

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列：

HX₂X₃GTX₆X₇X₈X₉X₁₀SX₁₂X₁₃X₁₄EX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLK X₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:200)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为A、2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₃为E或N-甲基Glu；

X₆为F或Y；

X₇为S或T；

X₈为二氨基庚二酸(Dap)、E、K、N、N-甲基Ser、Q、S、s或Y；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L、N-甲基Leu或V；

X₁₂为E、K、Q或S；

X₁₃为Aib、E、K、Q、S、W或Y；

X₁₄为E、R、I、K、L、M、Q或Y；

X₁₆为2,4-二氨基丁酸(Dab)、Dap、E、K、k或鸟氨酸(Orn)；

X₁₇为E、K或Q；

X₁₈为A、K、S或Y；

X₁₉为A、K或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为Aib、E、H、K、L、Q或Y；

X₂₄为A、Aib、E、K、Q、S或Y；

X₂₈为D、E、K、N、Q、S或Y；并且

X₃₂为Dap、H、K、R或S；

其中当X₁₆为Dab、Dap、K、k或Orn时，其任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基；

其中当X₁₆为E时，X₁₄、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀或X₂₁中的至少一者被选择为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基；并且

其中所述经分离的多肽任选地还包含两个具有共价接合以形成桥接部分的侧链的氨基酸残基。

在一些实施方案中，桥接部分为内酰胺桥接部分。例如，在一些实施方案中，经分离的多肽任选地还包含两个氨基酸残基，其中一个为赖氨酸并且另一个为谷氨酸，并且赖氨酸的含氨基侧链和谷氨酸的含羧基侧链在水损失情况下共价接合，以形成内酰胺桥接部分。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分经由在以下位置处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的共价键形成：分别在位置X₁₇和X₂₁处；分别在位置X₂₁和X₁₇处；分别在位置X₂₁和X₂₈处；分别在位置X₂₈和X₂₁处；分别在位置X₂₀和X₂₄处；分别在位置X₂₄和X₂₀处；或分别在位置X₁₂和X₁₆处。

在一个实施方案中，经分离的多肽不为艾塞那肽HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂(SEQ ID NO:300)的类似物，K₁₂或K₂₇任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₁₄为M，并且X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。

在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在一些实施方案中，如果X₁₆为E，则X₂₁为K或E。在一些实施方案中，如果X₁₆为E，则X₂₁为K。在一些实施方案中，如果X₁₆为E，则X₂₁为E。

在一些实施方案中，肽还包含经由分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

定义

应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且不旨在为限制性的。除非上下文另外明确指示，否则如本说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一(a/an)”和“所述(the)”包括复数个指示物。因此，例如，提及“溶剂”包括两种或更多种此类溶剂的组合，提及“肽”包括一种或多种肽或肽的混合物，提及“药物”包括一种或多种药物，提及“渗透递送装置”包括一个或多个渗透递送装置等。除非明确陈述或从上下文显而易见，否则如本文所用的术语“或”应理解为包涵性的并且涵盖“或”与“和”。

除非明确陈述或从上下文显而易见，否则如本文所用，术语“约”应理解为在本领域中的正常公差范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。约可理解为在陈述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。除非上下文另外明确说明，否则本文中所提供的所有数值都由术语“约”修饰。

除非明确陈述或从上下文显而易见，否则如本文所用，术语“基本上”理解为在狭窄的变化范围内或以其他方式在本领域中的正常公差范围内。基本上可理解为在陈述值的5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％或0.001％内。

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。尽管与本文所描述的那些方法和材料类似或等效的其他方法和材料可用于本发明的实践中，但本文描述优选材料和方法。

在描述和要求本发明时，将根据下文所阐述的定义使用以下术语。

术语“药物”、“治疗剂”和“有利剂”可互换使用以指代递送至受试者以产生所需有益作用的任何治疗上活性物质。在本发明的一个实施方案中，药物为多肽。在本发明的另一个实施方案中，药物为小分子，例如激素如雄激素或雌激素。本发明的装置和方法非常适合于递送蛋白质、小分子和其组合。

术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用并且通常是指包含两种或更多种氨基酸(例如最通常L-氨基酸，并且还包括例如D-氨基酸、经修饰的氨基酸、氨基酸类似物和氨基酸模拟物)的链的分子。

在一些实施方案中，天然存在的L-氨基酸由表1的常规三字母或大写单字母氨基酸名称表示。在其他实施方案中，天然存在的L-氨基酸和D-氨基酸均由表1的常规三字母或大写单字母氨基酸名称表示。在再其他实施方案中，D-氨基酸由对应于表2的单字母名称的小写单字母氨基酸名称表示，即，a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d和t。

表1：天然存在的氨基酸

表2：小写字母名称是指氨基酸的D立体异构体

肽可为天然存在的、以合成方式产生的或重组表达的。肽还可包含修饰氨基酸链的额外基团，例如经由翻译后修饰添加的官能团。翻译后修饰的实例包括(但不限于)乙酰化、烷基化(包括甲基化)、生物素化、谷氨酰化、甘氨酰化、糖基化、异戊烯化、脂化、磷酸泛酰巯基乙胺化(phosphopantetheinylation)、磷酸化、硒化和C末端酰胺化。术语肽还包括包含氨基末端和/或羧基末端的修饰的肽。末端氨基的修饰包括(但不限于)：des-氨基、N-低级烷基、N-二低级烷基和N-酰基修饰。末端羧基的修饰包括(但不限于)：酰胺、低级烷基酰胺、二烷基酰胺和低级烷基酯修饰(例如其中低级烷基为C₁-C₄烷基)。术语肽还包括修饰，例如(但不限于)属于氨基与羧基末端之间的氨基酸的上文所描述的那些。在一个实施方案中，肽可通过添加小分子药物修饰。

在肽链一端处的末端氨基酸通常具有游离氨基(即，氨基末端)。在链的另一端处的末端氨基酸通常具有游离羧基(即，羧基末端)。通常，构成肽的氨基酸按次序编号以在氨基末端开始并且在肽的羧基末端方向上增加。

如本文所用的短语“氨基酸残基”是指通过酰胺键或酰胺键模拟物并入肽中的氨基酸。

如本文所用的术语“促胰岛素”通常是指化合物(例如肽)刺激或影响胰岛素(例如促胰岛素激素)的产生和/或活性的能力。此类化合物通常刺激或以其他方式影响受试者的胰岛素的分泌或生物合成。因此，“促胰岛素肽”是能够刺激或以其他方式影响胰岛素的分泌或生物合成的含有氨基酸的分子。

如本文所用的术语“促胰岛素肽”包括(但不限于)胰高血糖素样肽1(GLP-1)以及其衍生物和类似物；GLP-1受体激动剂，例如艾塞那肽、具有SEQ ID NO:300的氨基酸序列的艾塞那肽以及其衍生物和类似物。

如本文所用，关于所公开的多肽的术语“酰化”意指所公开的多肽各自任选地经由间隔基被一个或多个亲脂性取代基取代，其中“亲脂性取代基”和“间隔基”定义于本文中。某些亲脂性取代基各自任选地经由间隔基可结合白蛋白并且赋予白蛋白对所得酰化多肽的亲和力。程度是可变的并且取决于众多因素，其中亲脂性取代基各自任选地经由间隔基结合白蛋白并且赋予白蛋白对所得酰化多肽的亲和力。众多因素包括亲脂性取代基的特点、任选的间隔基、多肽和与多肽的共价附接位点。

如本文所用，术语“线性”或“线性多肽”是指“未酰化”多肽，换句话说，无各自任选地经由间隔基具有亲脂性取代基的所公开的GLP-1受体激动剂多肽，其中“亲脂性取代基”和“间隔基”定义于本文中。

如本文所用，术语“偶联的”或“偶联多肽”是指“酰化”多肽，换句话说，各自任选地经由间隔基具有一种或多种亲脂性取代基的所公开的GLP-1受体激动剂多肽，其中“亲脂性取代基”和“间隔基”定义于本文中。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指所公开多肽的衍生物，其中亲本多肽通过将现有酸或碱部分转化为其盐形式而经修饰。适合的盐的列表可见于Remington'sPharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页和Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)，其中的每一者通过引用整体并入本文。

如本文所用的术语“媒介物”是指用于携带化合物，例如药物或含有药物的粒子的介质。本发明的媒介物通常包含例如聚合物和溶剂的组分。本发明的悬浮液媒介物通常包含用于制备还包含药物粒子制剂的悬浮液制剂的溶剂和聚合物。

如本文所用的短语“相分离”是指在悬浮液媒介物中形成多个相(例如液相和凝胶相)，例如当悬浮液媒介物接触水性环境时。在本发明的一些实施方案中，配制悬浮液媒介物以在与具有小于大约10％水的水性环境接触后表现出相分离。

如本文所用的短语“单相”是指整个物理上和化学上均匀的固体、半固体或液体均质系统。

如本文所用的术语“分散”是指使化合物(例如药物粒子制剂)溶解、分散、悬浮或以其他方式分配于悬浮液媒介物中。

如本文所用的短语“化学上稳定”是指通过化学途径，例如脱酰胺(通常通过水解)、聚集或氧化在限定的时间段内产生的可接受的百分比的降解产物的制剂形成。

如本文所用的短语“物理上稳定”是指可接受的百分比的聚集物(例如二聚体和其他较高分子量产物)的制剂形成。此外，物理上稳定制剂不会改变其物理状态，例如从液体变成固体或从非晶形变成晶体形式。

如本文所用的术语“粘度”通常是指根据剪切应力与剪切速率的比率确定的值(参见例如Considine,D.M.和Considine,G.D.,Encyclopedia of Chemistry,第4版,VanNostrand,Reinhold,N.Y.,1984)，基本上如下：

F/A＝μ*V/L (等式1)

其中F/A＝剪切应力(每单位面积的力)，

μ＝比例常数(粘度)，并且

V/L＝每层厚度的速度(剪切速率)。

根据此关系式，剪切应力与剪切速率的比率定义粘度。剪切应力和剪切速率的测量通常使用在所选条件(例如约37℃的温度)下进行的平行板流变测定法来测定。用于测定粘度的其他方法包括使用粘度计，例如Cannon-Fenske粘度计、乌氏粘度计(Ubbelohdeviscometer)(对于Cannon-Fenske不透明溶液)或Ostwald粘度计测量运动粘度。一般而言，本发明的悬浮液媒介物具有足以防止悬浮于其中的粒子制剂在储存和用于递送方法，例如用于可植入药物递送装置中期间沉降的粘度。

如本文所用的术语“非水性”是指例如通常小于或等于约10wt％，例如小于或等于约7wt％、小于或等于约5wt％和/或小于约4wt％的悬浮液制剂的总体水分含量。此外，本发明的粒子制剂包含小于约10wt％，例如小于约5wt％的残余水分。

如本文所用的术语“受试者”是指脊索动物亚门的任何成员，包括(但不限于)人类和其他灵长类动物，包括非人类灵长类动物，例如恒河猴和其他猴物种和黑猩猩和其他猿物种；农耕动物，例如牛、绵羊、猪、山羊和马；驯养哺乳动物，例如狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物，例如小鼠、大鼠和天竺鼠；禽类，包括驯养、野生和供猎禽类，例如鸡、火鸡和其他鹑鸡禽类、鸭、鹅等。所述术语不指示具体年龄或性别。因此，旨在涵盖成年人和新生儿个体两者。

如本文所用，术语“治疗(treatment/treat/treating)”是指逆转、减轻如本文所描述的疾病或病症或其一种或多种症状，延迟其发作，或抑制其进展。在一些实施方案中，可在一种或多种症状已出现之后施用治疗。在其他实施方案中，可在不存在症状的情况下施用治疗。例如，可在症状发作之前向易感个体施用治疗(例如，根据症状病史和/或根据基因或其他易感性因素)。也可在症状消退之后继续治疗，例如以预防或推迟其复发。

如本文所用的术语“渗透递送装置”通常是指用于向受试者递送药物(例如所公开的GLP-1受体激动剂多肽)的装置，其中所述装置包含例如具有内腔的储集器(例如由钛合金制得)，所述内腔含有包含药物(例如所公开的GLP-1受体激动剂多肽)的悬浮液制剂和渗透剂制剂。安置于内腔中的活塞组件将悬浮液制剂与渗透剂制剂分离开。半透膜安置于邻近于渗透剂制剂的储集器的第一远端，并且扩散调节器(其限定悬浮液制剂离开装置的递送孔口)安置于邻近于悬浮液制剂的储集器的第二远端。通常，渗透递送装置植入于受试者体内，例如真皮下或皮下(例如在上臂内部、外部或后部中以及在腹部区域中)。示例性渗透递送装置为(ALZA Corporation,Mountain View,Calif.)递送装置。与“渗透递送装置”同义的术语的实例包括(但不限于)“渗透药物递送装置”、“渗透药物递送系统”、“渗透装置”、“渗透递送装置”、“渗透递送系统”、“渗透泵”、“可植入药物递送装置”、“药物递送系统”、“药物递送装置”、“可植入渗透泵”、“可植入药物递送系统”和“可植入递送系统”。“渗透递送装置”的其他术语是本领域中已知的。

如本文所用的术语“连续递送”通常是指药物从渗透递送装置基本上连续释放并且进入植入位点附近的组织，例如真皮下和皮下组织。例如，基于渗透原则，渗透递送装置基本上以预定速率释放药物。细胞外液体经由半透膜进入渗透递送装置，直接进入渗透发动机中，所述渗透发动机膨胀以按缓慢且一致的行进速率驱动活塞。活塞移动促使药物制剂经由扩散调节器的孔口释放。因此，药物从渗透递送装置的释放处于缓慢、受控、一致的速率。

如本文所用的术语“基本上稳态递送”通常是指在限定的时间段内以目标浓度或几乎目标浓度递送药物，其中从渗透递送装置递送的药物的量基本上为零级递送。活性剂(例如所公开的GLP-1受体激动剂多肽)的基本上零级递送意指药物递送速率恒定并且与递送系统中可获得的药物无关；例如对于零级递送，如果药物递送速率针对时间绘图并且线条拟合数据，则所述线条具有约零的斜率，如通过标准方法(例如线性回归)所测定。

如本文所用的短语“药物半衰期”是指药物从血浆消除其一半浓度所花费的时间。当经由注射或静脉内施用药物时，药物的半衰期通常通过监测药物如何降解来测量。通常使用例如放射免疫测定(RIA)、色谱方法、电化学发光(ECL)测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)或免疫酶促夹心测定(IEMA)来检测药物。

术语“μg”和“mcg”和“ug”应理解为意指“微克”。类似地，术语“μl”和“uL”应理解为意指“微升”，并且术语“μM”和“uM”应理解为意指“微摩尔”。

术语“血清”意在是指可检测到物质的任何血液产物。因此，术语血清包括至少全血、血清和血浆。例如，“受试者血清中的[物质]的量”将涵盖“受试者血浆中的[所述物质]的量”。

基线定义为初次放置渗透递送装置(含有药物或安慰剂)当天或前一天的末次评估。

内源性GLP-1、GLP-1受体和某些GPL-1类似物

如本文所用的短语“肠促胰岛素模拟物”包括(但不限于)GLP-1肽、GLP-l(7-36)、GLP-1受体激动剂、GLP-1的肽衍生物、GLP-1的肽类似物、艾塞那肽、具有肠促胰岛素类似物(exendin)-4(艾塞那肽的天然存在的形式)的氨基酸序列的艾塞那肽、艾塞那肽-LAR、利西那肽(lixisenatide)、利拉鲁肽(liraglutide)、索马鲁肽、度拉糖肽、阿比鲁肽(albiglutide)和他司鲁肽(taspoglutide)。肠促胰岛素模拟物在本文中也称为“促胰岛素肽”。靶向GLP-1受体的肠促胰岛素模拟物在文献中也已知为“GLP-1受体激动剂”或“GLP-1激动剂”，其中两种术语在本文中可互换地使用。

术语“GLP-1”是指多肽、胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺、在营养物消耗后从肠道L细胞释放的30个残基肽激素。GLP-1具有氨基酸序列(HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH₂)，SEQ ID NO:301。GLP-1是结合至GLP-1受体(GLP-1R)(β细胞上的G偶联蛋白受体)的细胞外区并且经由腺苷环化酶活性和cAMP产生来刺激从肠道吸收的营养物的胰岛素反应的调节肽[Baggio 2007,“Biology of incretins:GLP-1and GIP”,Gastroenterology,第132(6)卷:2131-57；Holst 2008,“The incretin system and its role in type 2diabetesmellitus”,Mol Cell Endocrinology,第297(1-2)卷:127-36]。GLP-1R激动作用是多重的。GLP-1通过增强内源性葡萄糖依赖性胰岛素分泌、产生β细胞葡萄糖胜任型并且对GLP-1敏感、抑制胰高血糖素释放、恢复第一和第二阶段胰岛素分泌、减缓胃排空、减少食物摄入和增加饱腹感来维持葡萄糖稳态[Holst 2008Mol.Cell Endocrinology；Kjems 2003“Theinfluence of GLP-1on glucose-stimulated insulin secretion:effects on beta-cell sensitivity in type 2and nondiabetic subjects”,Diabetes,第52(2)卷:380-86；Holst 2013“Incretin hormones and the satiation signal”,Int J Obes(Lond),第37(9)卷:1161-69；Seufert 2014,“The extra-pancreatic effects of GLP-1receptoragonists:a focus on the cardiovascular,gastrointestinal and central nervoussystems”,Diabetes Obes Metab,第16(8)卷:673-88]。考虑到GLP-1的作用模式，低血糖的风险最小。

胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺(GLP-1)是在营养物消耗后从肠道L细胞释放的30个残基肽激素。其强化从胰腺β细胞的葡萄糖诱导的胰岛素分泌、增加胰岛素表达、抑制β细胞凋亡、促进β细胞新生、减少胰高血糖素分泌、推迟胃排空、促进饱腹感和增加外周葡萄糖处置。这些多种作用在GLP-1受体(GLP-1R)的长效激动剂的发现中已产生大量关注，以便治疗2型糖尿病。如本文所用，术语“艾塞那肽”包括(但不限于)：艾塞那肽、具有氨基酸序列(HGEGTFTSDLSKQ MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂)即SEQ ID NO:300的艾塞那肽、原生肠促胰岛素类似物-4、艾塞那肽肽、艾塞那肽肽类似物和艾塞那肽肽衍生物。

某些所公开的GLP-1受体激动剂多肽，包括下表4的那些多肽，表现出以下中的一者或多者：相比于内源性GLP-1和已知的GLP-1受体激动剂的那些，优异的溶解性、稳定性、生物可用性、生物活性和特异性以及更长的半衰期。某些所公开的GLP-1受体激动剂多肽经开发以适应与当前出售的GLP-1受体激动剂所需相比更不频繁的施用。开发某些所公开的GLP-1受体激动剂多肽以用于经由每周或每月注射施用。开发某些所公开的GLP-1受体激动剂多肽以用于经由植入包含GLP-1受体激动剂多肽的递送装置施用，其中所述递送装置包含至多3个月、6个月、9个月、一年、18个月或两年的GLP-1受体激动剂多肽的剂量。

示例性实施方案的描述

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列：

HX₂X₃GTX₆X₇X₈X₉X₁₀SX₁₂X₁₃X₁₄EX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLK X₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:210)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为A、2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₃为E或N-甲基Glu；

X₆为F或Y；

X₇为S或T；

X₈为二氨基庚二酸(Dap)、E、K、N、N-甲基Ser、Q、S、s或Y；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L、N-甲基Leu或V；

X₁₂为E、K、Q或S；

X₁₃为Aib、E、K、Q、S、W或Y；

X₁₄为E、R、I、K、L、M、Q或Y；

X₁₆为2,4-二氨基丁酸(Dab)、Dap、E、K、k或鸟氨酸(Orn)；

X₁₇为E、K或Q；

X₁₈为A、K、S或Y；

X₁₉为A、K或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为Aib、E、H、K、L、Q或Y；

X₂₄为A、Aib、E、K、Q、S或Y；

X₂₈为D、E、K、N、Q、S或Y；并且

X₃₂为Dap、H、K、R或S；

条件是所述经分离的多肽不为艾塞那肽。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₁₄为M，并且X₁₆为K。

在一些实施方案中，X₁₆为K。

在一些实施方案中，X₂为A。在一些实施方案中，X₂为Aib。在一些实施方案中，X₂为G。

如本文所用，Aib或者是指2-氨基异丁酸、α-氨基异丁酸、α-甲基丙氨酸或2-甲基丙氨酸。

在一些实施方案中，X₃为E。在一些实施方案中，X₃为N-甲基Glu。

在一些实施方案中，X₆为F。在一些实施方案中，X₆为Y。

在一些实施方案中，X₇为S。在一些实施方案中，X₇为T。

在一些实施方案中，X₈为Dap。在一些实施方案中，X₈为E。在一些实施方案中，X₈为K。在一些实施方案中，X₈为N。在一些实施方案中，X₈为N-甲基Ser。在一些实施方案中，X₈为Q。在一些实施方案中，X₈为S。在一些实施方案中，X₈为s。在一些实施方案中，X₈为Y。

如本文所用，Dap是指二氨基庚二酸。

如本文所用，s是指D-丝氨酸。

在一些实施方案中，X₉为D。在一些实施方案中，X₉为E。

在一些实施方案中，X₁₀为I。在一些实施方案中，X₁₀为L。在一些实施方案中，X₁₀为N-甲基Leu。在一些实施方案中，X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₂为E。在一些实施方案中，X₁₂为K。在一些实施方案中，X₁₂为Q。在一些实施方案中，X₁₂为S。

在一些实施方案中，X₁₃为Aib。在一些实施方案中，X₁₃为E。在一些实施方案中，X₁₃为K。在一些实施方案中，X₁₃为Q。在一些实施方案中，X₁₃为S。在一些实施方案中，X₁₃为W。在一些实施方案中，X₁₃为Y。

在一些实施方案中，X₁₄为E。在一些实施方案中，X₁₄为R。在一些实施方案中，X₁₄为I。在一些实施方案中，X₁₄为K。在一些实施方案中，X₁₄为L。在一些实施方案中，X₁₄为M。在一些实施方案中，X₁₄为Q。在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₁₆为Dab。在一些实施方案中，X₁₆为Dap。在一些实施方案中，X₁₆为E。在一些实施方案中，X₁₆为K。在一些实施方案中，X₁₆为k。在一些实施方案中，X₁₆为Orn。

如本文所用，Dab替代地是指2,4-二氨基丁酸、2,4-二氨基丁酸或α,γ-二氨基丁酸。

如本文所用，k是指D-赖氨酸。

如本文所用，Orn是指鸟氨酸。

在一些实施方案中，X₁₇为E。在一些实施方案中，X₁₇为K。在一些实施方案中，X₁₇为Q。

在一些实施方案中，X₁₈为A。在一些实施方案中，X₁₈为K。在一些实施方案中，X₁₈为S。在一些实施方案中，X₁₈为Y。

在一些实施方案中，X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₉为K。在一些实施方案中，X₁₉为V。

在一些实施方案中，X₂₀为E。在一些实施方案中，X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂₀为R。

在一些实施方案中，X₂₁为Aib。在一些实施方案中，X₂₁为E。在一些实施方案中，X₂₁为H。在一些实施方案中，X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂₁为L。在一些实施方案中，X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂₁为Y。

在一些实施方案，X₂₄为A。在一些实施方案，X₂₄为Aib。在一些实施方案，X₂₄为E。在一些实施方案，X₂₄为K。在一些实施方案，X₂₄为Q。在一些实施方案，X₂₄为S。在一些实施方案，X₂₄为Y。

在一些实施方案，X₂₈为D。在一些实施方案，X₂₈为E。在一些实施方案，X₂₈为K。在一些实施方案，X₂₈为N。在一些实施方案，X₂₈为Q。在一些实施方案，X₂₈为S。在一些实施方案，X₂₈为Y。

在一些实施方案，X₃₂为Dap。在一些实施方案，X₃₂为H。在一些实施方案中，X₃₂为K。在一些实施方案，X₃₂为R。在一些实施方案，X₃₂为S。

在一些实施方案中，羧基末端氨基酸即S₃₉为-S₃₉-(NH₂)。在一些实施方案中，羧基末端氨基酸S₃₉为-S₃₉-(OH)。

在一些实施方案中，由SEQ ID NO:210的共有序列表示的某些氨基酸包括以下：

在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₀为V。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₆为K。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₆为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₁₆为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₆为K并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₆为K并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₆为K并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₆为K并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₆为K并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₆为K并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₆为K并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₆为K并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₉为V并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₉为V并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₉为V并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₉为V并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₉为V并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₉为V并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₉为A并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₉为A并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₉为A并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₉为A并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₉为A并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₉为A并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂₀为R并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂₀为R并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂₀为R并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₀为R并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂₀为K并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂₀为K并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂₀为K并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₀为K并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂₁为K并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₁为K并且X₂₄为E。在一些实施方案中，X₂₁为Q并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₁为Q并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₆为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₁₆为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₁₆为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₆为K，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₆为K，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₆为K，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₆为K，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₆为K，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₆为K，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₆为K，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₆为K，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₉为V，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₁₉为A，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₂₀为R，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₂₀为K，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₂₁为K，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₄为Y，X₂₁为K，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₆为K，X₁₉为A，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₆为K，X₁₉为A，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₆为K，X₁₉为A，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₆为K，X₁₉为A，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₆为K，X₁₉为A，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₆为K，X₁₉为A，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₉为V，X₂₀为R，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₉为V，X₂₀为R，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₉为V，X₂₀为R，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₉为V，X₂₀为R，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₉为A，X₂₀为R，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₉为A，X₂₀为R，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₉为A，X₂₀为R，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₉为A，X₂₀为R，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂₀为R，X₂₁为K，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₀为R，X₂₁为K，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂₀为K，X₂₁为K，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₀为K，X₂₁为K，并且X₂₄为E。

X₂为A、2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₃为E或N-甲基Glu；

X₆为F或Y；

X₇为S或T；

X₈为二氨基庚二酸(Dap)、E、K、N、N-甲基Ser、Q、S、s或Y；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L、N-甲基Leu或V；

X₁₂为E、K、Q或S；

X₁₃为Aib、E、K、Q、S、W或Y；

X₁₄为E、R、I、K、L、M、Q或Y；

X₁₆为2,4-二氨基丁酸(Dab)、Dap、E、K、k或鸟氨酸(Orn)；

X₁₇为E、K或Q；

X₁₈为A、K、S或Y；

X₁₉为A、K或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为Aib、E、H、K、L、Q或Y；

X₂₄为A、Aib、E、K、Q、S或Y；

X₂₈为D、E、K、N、Q、S或Y；并且

X₃₂为Dap、H、K、R或S；

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。

在一些实施方案中，X₆为F。在一些实施方案中，X₆为Y。

在一些实施方案中，X₇为S。在一些实施方案中，X₇为T。

在一些实施方案中，X₉为D。在一些实施方案中，X₉为E。

在一些实施方案中，X₂₄为A。在一些实施方案中，X₂₄为Aib。在一些实施方案中，X₂₄为E。在一些实施方案中，X₂₄为K。在一些实施方案中，X₂₄为Q。在一些实施方案中，X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₄为Y。

在一些实施方案中，X₂₈为D。在一些实施方案中，X₂₈为E。在一些实施方案中，X₂₈为K。在一些实施方案中，X₂₈为N。在一些实施方案中，X₂₈为Q。在一些实施方案中，X₂₈为S。在一些实施方案中，X₂₈为Y。

在一些实施方案中，X₃₂为Dap。在一些实施方案中，X₃₂为H。在一些实施方案中，X₃₂为K。在一些实施方案中，X₃₂为R。在一些实施方案中，X₃₂为S。

在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的Dab、Dap、K或Orn。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的Dab。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的Dap。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的k。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的Orn。

在一些实施方案中，X₁₆为E，并且X₁₄、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀或X₂₁中的至少一者被选择为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。在一些实施方案中，X₁₆为E，并且X₁₄为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。在一些实施方案中，X₁₆为E，并且X₁₇为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。在一些实施方案中，X₁₆为E，并且X₁₈为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。在一些实施方案中，X₁₆为E，并且X₁₉为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。在一些实施方案中，X₁₆为E，并且X₂₀为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。在一些实施方案中，X₁₆为E，并且X₂₁为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。

在一些实施方案中，经分离的多肽还包含两个具有共价接合以形成桥接部分的侧链的氨基酸残基。在一些实施方案中，经分离的多肽任选地还包含两个氨基酸残基，其中一个为赖氨酸(K)并且另一个为谷氨酸(E)，并且其中赖氨酸的含氨基侧链和谷氨酸的含羧基侧链在水损失情况下共价接合，以形成内酰胺桥接部分。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分经由在以下位置处的赖氨酸(K)与谷氨酸(E)残基的侧链之间的共价键形成：分别在位置X₁₇和X₂₁处；分别在位置X₂₁和X₁₇处；分别在位置X₂₁和X₂₈处；分别在位置X₂₈和X₂₁处；分别在位置X₂₀和X₂₄处；分别在位置X₂₄和X₂₀处；或分别在位置X₁₂和X₁₆处。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分形成于分别在位置X₁₇和X₂₁处的赖氨酸(K)与谷氨酸(E)残基的侧链之间。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分形成于分别在位置X₂₁和X₁₇处的赖氨酸(K)与谷氨酸(E)残基的侧链之间。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分形成于分别在位置X₂₁和X₂₈处的赖氨酸(K)与谷氨酸(E)残基的侧链之间。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分形成于分别在位置X₂₈和X₂₁处的赖氨酸(K)与谷氨酸(E)残基的侧链之间。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分形成于分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸(K)与谷氨酸(E)残基的侧链之间。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分形成于分别在位置X₂₄和X₂₀处的赖氨酸(K)与谷氨酸(E)残基的侧链之间。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分为分别在位置X₁₂和X₁₆处的赖氨酸(K)与谷氨酸(E)残基的侧链之间所形成的共价键。

在一些实施方案中，当K在位置X₈、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁、X₂₄、X₂₈或X₃₂处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在一些实施方案中，当K在位置X₁₄、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀或X₂₁处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在一些实施方案中，仅X₁₆处的残基可任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列或其药学上可接受的盐，其中：

HX₂X₃GTX₆X₇X₈X₉X₁₀SX₁₂X₁₃YEX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLK X₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:201)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为A、2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₃为E或N-甲基Glu；

X₆为F或Y；

X₇为S或T；

X₈为二氨基庚二酸(Dap)、E、K、N、N-甲基Ser、Q、S、s或Y；X₉为D或E；

X₁₀为I、L、N-甲基Leu或V；

X₁₂为E、K、Q或S；

X₁₃为Aib、E、K、Q、S、W或Y；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₇为E、K或Q；

X₁₈为A、K、S或Y；

X₁₉为A、K或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为Aib、E、H、K、L、Q或Y；

X₂₄为A、Aib、E、K、Q、S或Y；

X₂₈为D、E、K、N、Q、S或Y；并且

X₃₂为Dap、H、K、R或S；

其中所述肽任选地还包含经由在以下位置处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥：分别在位置X₁₇和X₂₁处；分别在位置X₂₁和X₁₇处；分别在位置X₂₁和X₂₈处；分别在位置X₂₈和X₂₁处；分别在位置X₂₀和X₂₄处；或分别在位置X₂₄和X₂₀处。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₆为F。在一些实施方案中，X₆为Y。

在一些实施方案中，X₇为S。在一些实施方案中，X₇为T。

在一些实施方案中，X₉为D。在一些实施方案中，X₉为E。

在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₁₇和X₂₁处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₁和X₁₇处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₁和X₂₈处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₈和X₂₁处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₄和X₂₀处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

在一些实施方案中，当K在位置X₈、X₁₂、X₁₃、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁、X₂₄、X₂₈或X₃₂处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在一些实施方案中，当K在位置X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀或X₂₁处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在一些实施方案中，仅X₁₆处的残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。

在一些实施方案中，由SEQ ID NO:200或SEQ ID NO:201的共有序列表示的某些氨基酸包括以下：

在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₀为V。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂₀为K并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂₀为K并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂₀为K并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₀为K并且X₂₄为E。在一些实施方案中，X₂₀为K，X₂₄为E，并且所述肽包含经由X₂₀和X₂₄的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

在一些实施方案中，X₂₁为K并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₁为K并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂₁为Q并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₁为Q并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₄为Y；X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₄为Y；X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₄为Y；X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₄为Y；X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y；X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y；X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₄为Y；X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₄为Y；X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；X₁₉为A；并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；X₁₉为A；并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；X₁₉为A；并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；X₁₉为A；并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；X₁₉为A；并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；X₁₉为A；并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂₀为K，X₂₁为K，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂₀为K，X₂₁为K，并且X₂₄为E。在一些实施方案中，X₂₀为K，X₂₁为K，X₂₄为E，并且所述肽包含经由X₂₀和X₂₄的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈X₉X₁₀SX₁₂QX₁₄EX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:202)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E或K；

X₁₄为M或Y；

X₁₆为Dap、E或K；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为E、K、N或Q；并且

X₃₂为H或S；

其中当X₁₆为Dap或K时，其任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基；

其中当X₁₆为E时，X₁₇、X₂₀或X₂₁中的至少一者被选择为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基；并且

其中所述肽任选地还包含经由在以下位置处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥：分别在位置X₁₇和X₂₁处；分别在位置X₂₁和X₁₇处；分别在位置X₂₁和X₂₈处；分别在位置X₂₈和X₂₁处；分别在位置X₂₀和X₂₄处；分别在位置X₂₄和X₂₀处；或分别在位置X₁₂和X₁₆处。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₂为Aib。在一些实施方案中，X₂为G。

在一些实施方案中，X₈为N。在一些实施方案中，X₈为S。

在一些实施方案中，X₉为D。在一些实施方案中，X₉为E。

在一些实施方案中，X₁₀为I。在一些实施方案中，X₁₀为L。在一些实施方案中，X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₂为E。在一些实施方案中，X₁₂为K。

在一些实施方案中，X₁₄为M。在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的Dap。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。在一些实施方案中，X₁₆为E，并且X₁₇、X₂₀或X₂₁中的至少一者被选择为赖氨酸，其中所述赖氨酸残基任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。

在一些实施方案中，X₁₇为E。在一些实施方案中，X₁₇为K。

在一些实施方案中，X₁₈为A。在一些实施方案中，X₁₈为Y。

在一些实施方案中，X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₉为V。

在一些实施方案中，X₂₁为E。在一些实施方案中，X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂₁为L。在一些实施方案中，X₂₁为Q。

在一些实施方案中，X₂₄为E。在一些实施方案中，X₂₄为K。在一些实施方案中，X₂₄为S。

在一些实施方案中，X₂₈为E。在一些实施方案中，X₂₈为K。在一些实施方案中，X₂₈为N。在一些实施方案中，X₂₈为Q。

在一些实施方案中，X₃₂为H。在一些实施方案中，X₃₂为S。

在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₁和X₁₇处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₁₇和X₂₁处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₁和X₂₈处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₈和X₂₁处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₄和X₂₀处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₁₂和X₁₆处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₁₆和X₁₂处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

在一些实施方案中，当K在位置X₁₂、X₁₇、X₂₀、X₂₁、X₂₄或X₂₈处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在一些实施方案中，当K在位置X₁₇、X₂₀或X₂₁处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈X₉X₁₀SX₁₂QYEX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQID NO:203)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E或K；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为E、K、N或Q；并且

X₃₂为H或S；

每个K独立地表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸；

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，肽包含经由分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

在一些实施方案中，X₂为Aib。在一些实施方案中，X₂为G。

在一些实施方案中，X₈为N。在一些实施方案中，X₈为S。

在一些实施方案中，X₉为D。在一些实施方案中，X₉为E。

在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₁和X₁₇处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₁₇和X₂₁处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₁和X₂₈处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₈和X₂₁处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₄和X₂₀处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

在一些实施方案中，由SEQ ID NO:202或SEQ ID NO:203的共有序列表示的某些氨基酸包括以下：

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SX₁₂QX₁₄EX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQID NO:204)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E、K或Q；

X₁₄为M或Y；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的(二氨基庚二酸)Dap，或任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为N或Q；并且

X₃₂为H或S；

其中所述肽任选地包含经由在以下位置处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥：分别在位置X₁₇和X₂₁处；分别在位置X₂₁和X₁₇处；分别在位置X₂₀和X₂₄处；或分别在位置X₂₄和X₂₀处。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₂为Aib。在一些实施方案中，X₂为G。

在一些实施方案中，X₈为N。在一些实施方案中，X₈为S。

在一些实施方案中，X₁₂为E。在一些实施方案中，X₁₂为K。在一些实施方案中，X₁₂为Q。

在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的Dap。在一些实施方案中，X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。

在一些实施方案中，X₂₈为N。在一些实施方案中，X₂₈为Q。

在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₁和X₁₇处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₁₇和X₂₁处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₄和X₂₀处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

在一些实施方案中，当K在位置X₁₂、X₁₇、X₂₀、X₂₁或X₂₄处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SX₁₂QYEX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GG PX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQID NO:205)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E、K或Q；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为N或Q；并且

X₃₂为H或S；

其中所述肽任选地还包含经由在以下位置处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥：分别在位置X₁₇和X₂₁处；分别在位置X₂₁和X₁₇处；分别在位置X₂₀和X₂₄处；或分别在位置X₂₄和X₂₀处。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₂为Aib。在一些实施方案中，X₂为G。

在一些实施方案中，X₈为N。在一些实施方案中，X₈为S。

在一些实施方案中，由SEQ ID NO:204或SEQ ID NO:205的共有序列表示的某些氨基酸包括以下：

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SKQX₁₄EX₁₆EAX₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPS SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ IDNO:206)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₄为M或Y；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；并且

X₂₈为N或Q；

其中所述肽任选地还包含经由在以下位置处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥：分别在位置X₂₁和X₁₇处；分别在位置X₂₀和X₂₄处；或分别在位置X₂₄和X₂₀处。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₂为Aib。在一些实施方案中，X₂为G。

在一些实施方案中，X₈为N。在一些实施方案中，X₈为S。

在一些实施方案中，当K在位置X₂₀、X₂₁或X₂₄处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在一些实施方案中，当K在位置X₂₀或X₂₁处经选择时，其表示任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:207的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SKQYEX₁₆EAX₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPSS GAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ IDNO:207)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；并且

X₂₈为N或Q；

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₂为Aib。在一些实施方案中，X₂为G。

在一些实施方案中，X₈为N。在一些实施方案中，X₈为S。

在一些实施方案中，由SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的共有序列表示的某些氨基酸包括以下：

在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₀为V。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₄为Y并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₄为Y。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₀为V，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₂为Aib，X₁₄为Y，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₄为Y，并且X₂₄为E。

在某些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列：

HAibEGTFTSDX₁₀SKQYEX₁₆EAX₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKNGGPSSG APPPS-(OH/NH₂)(SEQ IDNO:208)或其药学上可接受的盐，其中：

X₁₀为L或V；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为K或Q；

X₂₄为E、K或S；并且

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₀为L。在一些实施方案中，X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₂₁为K。在一些实施方案中，X₂₁为Q。

在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₁和X₁₇处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。在一些实施方案中，经分离的肽还包含经由分别在位置X₂₄和X₂₀处的赖氨酸和谷氨酸的侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

在一些实施方案中，由SEQ ID NO:208的共有序列表示的某些氨基酸包括以下：

在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₉为V。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₁₉为A。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₉为V，并且X₂₀为R。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₉为V，并且X₂₀为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₉为V，并且X₂₁为K。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₉为V，并且X₂₁为Q。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₉为V，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₉为V，并且X₂₄为E。

在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₉为V，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₁₉为A，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₂₀为R，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₂₀为K，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₂₁为K，并且X₂₄为S。在一些实施方案中，X₁₀为V，X₂₁为Q，并且X₂₄为S。

亲脂性取代基与肽中的任一者任选地经由间隔基的偶联

在一些实施方案中，所公开的多肽中的任一者各自任选地经由间隔基任选地被一个或多个亲脂性取代基取代，其中“亲脂性取代基”和“间隔基”定义于本文中。在一些实施方案中，所公开的多肽中的任一者，包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:162和SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列，各自任选地经由间隔基包含一个或多个亲脂性取代基，或者可各自任选地经由间隔基通过一个或多个亲脂性取代基的共价附接经修饰或进一步修饰。在一些实施方案中，亲脂性取代基可借助于亲脂性取代基的羧基或任选地间隔基的氨基附接至多肽的氨基(例如赖氨酸残基的ε-氨基)，其中间隔基的羧基与赖氨酸残基的ε-氨基形成酰胺键。

亲脂性取代基

各自任选地经由“间隔基”，一个或多个“亲脂性取代基”偶联至本发明的所公开的多肽中的任一者旨在通过促进结合至血清白蛋白和延迟偶联多肽的肾清除率来延长多肽的作用。如本文所用，“亲脂性取代基”包含：包含4至40个碳原子、8至25个碳原子、12至22个碳原子或6至20个碳原子的取代基。亲脂性取代基可借助于亲脂性取代基的羧基或任选地间隔基的氨基附接至多肽的氨基(例如赖氨酸残基的ε-氨基)，所述间隔基的羧基继而与其附接的氨基酸(例如赖氨酸)残基的氨基形成酰胺键。在一些实施方案中，多肽包含各自具有或不具有任选的间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基，其在下文更详细地定义。

在一些实施方案中，亲脂性取代基包含直链或支链烷基。在一些实施方案中，亲脂性取代基是直链或支链脂肪酸的酰基。在一些实施方案中，亲脂性取代基是进一步被一个或多个甲酸和/或异羟肟酸基团取代的直链或支链脂肪酸的酰基。

在一些实施方案中，多肽包含各自不具有任选的间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基为-CO(CH₂)₁₆CO₂H。在一些实施方案中，亲脂性取代基为-CO(CH₂)₁₈CO₂H。在一些实施方案中，亲脂性取代基为-CO(CH₂)₂₀CO₂H。

在一些实施方案中，多肽包含各自不具有任选的间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基为式I的单价基团：

-CO-(CH₂)_m-Z

式I

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；并且

m为4至24，

所述亲脂性取代基在所公开的多肽的氨基(例如赖氨酸的ε-氨基)与亲脂性取代基的CO-基团之间形成酰胺键。

在一些实施方案中，Z为-CO₂H。在一些实施方案中，m为14至20。在一些实施方案中，亲脂性取代基经由间隔基共价结合至经分离的多肽。在一些实施方案中，亲脂性取代基-CO-(CH₂)_m-Z经由间隔基连接至经分离的多肽的氨基，其中间隔基在经分离的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。

在一些实施方案中，m选自由以下组成的组：4-20、8-20、12-20、14-20、16-20、14、16、18和20。

在一些实施方案中，Z为-CO₂H，并且亲脂性取代基具有式-CO-(CH₂)_m-CO₂H。在一些实施方案中，-CO-(CH₂)_m-Z选自由以下组成的组：-CO-(CH₂)₄-CO₂H、-CO-(CH₂)₅-CO₂H、-CO-(CH₂)₆-CO₂H、-CO-(CH₂)₇-CO₂H、-CO-(CH₂)₈-CO₂H、-CO-(CH₂)₉-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₀-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₁-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₂-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₃-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₄-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₅-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₆-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₇-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₈-CO₂H、-CO-(CH₂)₁₉-CO₂H、-CO-(CH₂)₂₀-CO₂H。

在一些实施方案中，亲脂性取代基为-CO-(CH₂)₁₄-CO₂H。在一些实施方案中，亲脂性取代基为-CO-(CH₂)₁₆-CO₂H。在一些实施方案中，亲脂性取代基为-CO-(CH₂)₁₈-CO₂H。在一些实施方案中，亲脂性取代基为-CO-(CH₂)₂₀-CO₂H。

在一些实施方案中，Z为-CH₃，并且亲脂性取代基具有式-CO-(CH₂)_m-CH₃。在一些实施方案中，-CO-(CH₂)_m-Z选自由以下组成的组：-CO-(CH₂)₄-CH₃、-CO-(CH₂)₅-CH₃、-CO-(CH₂)₆-CH₃、-CO-(CH₂)₇-CH₃、-CO-(CH₂)₈-CH₃、-CO-(CH₂)₉-CH₃、-CO-(CH₂)₁₀-CH₃、-CO-(CH₂)₁₁-CH₃、-CO-(CH₂)₁₂-CH₃、-CO-(CH₂)₁₃-CH₃、-CO-(CH₂)₁₄-CH₃、-CO-(CH₂)₁₅-CH₃、-CO-(CH₂)₁₆-CH₃、-CO-(CH₂)₁₇-CH₃、-CO-(CH₂)₁₈-CH₃、-CO-(CH₂)₁₉-CH₃和-CO-(CH₂)₂₀-CH₃。

亲脂性取代基和间隔基

在一些实施方案中，亲脂性取代基借助于“间隔基”附接至亲本肽。在一些实施方案中，本文提供了包含选自由包含亲脂性取代基的SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:143的共有序列中的任一者所表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的所公开的多肽中的任一者，其中亲脂性取代基经由间隔基连接至赖氨酸的ε-氨基，所述间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。

在一些实施方案中，间隔基包含一种或多种氨基酸，例如单一氨基酸，例如Glu、Asp、Gly或Lys；二肽，例如2(Glu)、Glu-Gly；或多肽，例如3(Glu)、4(Glu)、2(Glu)-Gly等。在一些实施方案中，当间隔基包含一种或多种氨基酸，例如Glu、Asp、Gly或Lys时，间隔基的一个羧基可与所公开的多肽的氨基形成酰胺键，并且间隔基的氨基可与亲脂性取代基的羧基形成酰胺键。

在一些实施方案中，当间隔基包含Glu或Asp时，其进一步包括甲酸封端侧链，含有Glu或Asp的间隔基的侧链的末端羧基可与所公开的多肽的氨基形成酰胺键，并且含有Glu或Asp的间隔基的氨基可与亲脂性取代基的羧基形成酰胺键，即，γGlu或βAsp。

在一些实施方案中，间隔基为-γGlu-γGlu-dpeg-。在一些实施方案中，间隔基为-γGlu-γGlu-dpeg-γGlu-γGlu-。在一些实施方案中，间隔基为-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH]₂-γGlu-。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些非限制性实施方案中，亲脂性取代基与间隔基形成选自由表3中所列的那些基团组成的组的单价基团：

表3：代表性亲脂性取代基和间隔基部分

在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基形成式II的单价基团：

-(Y)_n-CO-(CH₂)_m-Z

式II

其中

Y选自由γGlu、Asp、Lys和Gly组成的组；

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；并且

n为1至10。

在一些实施方案中，Z为-CO₂H。在一些实施方案中，m为14至20。在一些实施方案中，Y为γGlu。在一些实施方案中，n为1至5。

在一些实施方案中，Y选自由γGlu和Gly组成的组。在一些实施方案中，Y为γGlu。在一些实施方案中，Y为Gly。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式III的单价基团：

-(V)_r-(Y)_n-CO-(CH₂)_m-Z

式III

其中，

V为-[COCH₂(OCH₂CH₂)_tNH]-；

Y选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；

n为1至10；

r为1至6；并且

t为1至6。

在一些实施方案中，Z为-CO₂H。在一些实施方案中，Z为-CH₃。

在一些实施方案中，Y为γGlu。在一些实施方案中，Y为Asp。在一些实施方案中，Y为Gly。

在一些实施方案中，m选自由以下组成的组：4-20、8-20、12-20、14-20、16-20、14、16、18和20。在一些实施方案中，m为14至20。

在一些实施方案中，n选自由以下组成的组：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。在一些实施方案中，n为1至5。在一些实施方案中，n为1。在一些实施方案中，n为2。在一些实施方案中，n为3。在一些实施方案中，n为4。在一些实施方案中，n为5。

在一些实施方案中，r为1至3。在一些实施方案中，r为1。在一些实施方案中，r为2。在一些实施方案中，r为3。在一些实施方案中，r为4。在一些实施方案中，r为5。

在一些实施方案中，t为1至3。在一些实施方案中，t选自由以下组成的组：1、2、3、4、5和6。

在一些实施方案中，Y为γGlu；Z为-CO₂H；m为16；n为1；r为2；并且t为2。

在实施方案中，-(V)_r-(Y)_n-为-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH]₂-γGlu-。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式IV的单价基团：

-(Y1)_n1-(dpeg)_r-(Y2)_n2-CO-(CH₂)_m-Z

式IV

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

dpeg为-[CO(CH₂)O(CH₂)₂O(CH₂)NH]-；

r为1至8；

n1为0至10；并且

n2为0至10。

在一些实施方案中，Y1为γGlu。在一些实施方案中，Y1为Asp。在一些实施方案中，Y1为Gly。

在一些实施方案中，Y2为γGlu。在一些实施方案中，Y2为Asp。在一些实施方案中，Y2为Gly。

在一些实施方案中，n1选自由以下组成的组：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。在一些实施方案中，n1为0至3。在一些实施方案中，n1为0。在一些实施方案中，n1为1。在一些实施方案中，n1为2。在一些实施方案中，n1为3。在一些实施方案中，n1为4。在一些实施方案中，n1为5。

在一些实施方案中，n2选自由以下组成的组：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。在一些实施方案中，n2为0至3。在一些实施方案中，n2为0。在一些实施方案中，n2为1。在一些实施方案中，n2为2。在一些实施方案中，n2为3。在一些实施方案中，n2为4。在一些实施方案中，n2为5。

在一些实施方案中，r为1至3。在一些实施方案中，r为1。在一些实施方案中，r为2。在一些实施方案中，r为3。在一些实施方案中，r为4。在一些实施方案中，r为5。在一些实施方案中，r为6。在一些实施方案中，r为7。在一些实施方案中，r为8。

在一些实施方案中，r为1，n1为2，并且n2为0。

在一些实施方案中，r为1，n1为2，并且n2为2。

在一些实施方案中，Y1为γGlu并且Y2为γGlu。

在一些实施方案中，Y1为γGlu并且n2为0。

在一些实施方案中，Y1为γGlu，r为1，n1为2，并且n2为0。

在一些实施方案中，-(Y1)_n1-(dpeg)_r-(Y2)_n2-选自由以下组成的组：-γGlu-γGlu-dpeg-、-γGlu-γGlu-dpeg-γGlu-γGlu-、-γGlu-γGlu-dpeg-γGlu-、-γGlu-γGlu-dpeg-dpeg-、-γGlu-γGlu-dpeg-dpeg-γGlu-、-dpeg-dpeg-γGlu-、-γGlu-γGlu-γGlu-dpeg-和-γGlu-dpeg-。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式V的单价基团：

-(γGlu)_n-CO-(CH₂)_m-Z

式V

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；并且

n为1至10。

在一些实施方案中，Z为-CH₃。在一些实施方案中，Z为-CO₂H。

在一些实施方案中，m为14至20。

在一些实施方案中，n选自由以下组成的组：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。在一些实施方案中，n为1。在一些实施方案中，n为2。在一些实施方案中，n为3。在一些实施方案中，n为4。在一些实施方案中，n为5。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式VI的单价基团：

-(γGlu)_n-(Gly)-CO-(CH₂)_m-Z

式VI

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；并且

n为1至10。

在一些实施方案中，(γGlu)_n选自由以下组成的组：γGlu；2(γGlu)；3(γGlu)；4(γGlu)；和5(γGlu)。在一些实施方案中，-(γGlu)_n-(Gly)-选自由以下组成的组：2(γGlu),Gly；和3(γGlu),Gly。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式VII的单价基团：

-(Gly)-(γGlu)_n-(CO-(CH₂)_m-Z

式VII

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；并且

n为1至10。

在一些实施方案中，某些前述式中所表示的某些变量包括以下：

在一些实施方案中，n为1并且Z为-CO₂H。在一些实施方案中，n为1并且Z为-CH₃。在一些实施方案中，n为2并且Z为-CO₂H。在一些实施方案中，n为2并且Z为-CH₃。在一些实施方案中，n为3并且Z为-CO₂H。在一些实施方案中，n为3并且Z为-CH₃。在一些实施方案中，n为4并且Z为-CO₂H。在一些实施方案中，n为4并且Z为-CH₃。在一些实施方案中，n为5并且Z为-CO₂H。在一些实施方案中，n为5并且Z为-CH₃。

在一些实施方案中，n为1，Z为-CO₂H，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为1，Z为-CO₂H，并且m为14。在一些实施方案中，n为1，Z为-CO₂H，并且m为16。在一些实施方案中，n为1，Z为-CO₂H，并且m为18。

在一些实施方案中，n为1，Z为-CH₃，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为1，Z为-CH₃并且m为14。在一些实施方案中，n为1，Z为-CH₃，并且m为16。在一些实施方案中，n为1，Z为-CH₃，并且m为18。

在一些实施方案中，n为2，Z为-CO₂H，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为2，Z为-CO₂H，并且m为14。在一些实施方案中，n为2，Z为-CO₂H，并且m为16。在一些实施方案中，n为2，Z为-CO₂H，并且m为18。

在一些实施方案中，n为2，Z为-CH₃，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为2，Z为-CH₃并且m为14。在一些实施方案中，n为2，Z为-CH₃，并且m为16。在一些实施方案中，n为2，Z为-CH₃，并且m为18。

在一些实施方案中，n为3，Z为-CO₂H，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为3，Z为-CO₂H，并且m为14。在一些实施方案中，n为3，Z为-CO₂H，并且m为16。在一些实施方案中，n为3，Z为-CO₂H，并且m为18。

在一些实施方案中，n为3，Z为-CH₃，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为3，Z为-CH₃并且m为14。在一些实施方案中，n为3，Z为-CH₃，并且m为16。在一些实施方案中，n为3，Z为-CH₃，并且m为18。

在一些实施方案中，n为4，Z为-CO₂H，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为4，Z为-CO₂H，并且m为14。在一些实施方案中，n为4，Z为-CO₂H，并且m为16。在一些实施方案中，n为4，Z为-CO₂H，并且m为18。

在一些实施方案中，n为4，Z为-CH₃，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为4，Z为-CH₃并且m为14。在一些实施方案中，n为4，Z为-CH₃，并且m为16。在一些实施方案中，n为4，Z为-CH₃，并且m为18。

在一些实施方案中，n为5，Z为-CO₂H，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为5，Z为-CO₂H，并且m为14。在一些实施方案中，n为5，Z为-CO₂H，并且m为16。在一些实施方案中，n为5，Z为-CO₂H，并且m为18。

在一些实施方案中，n为5，Z为-CH₃，并且m为14-20。在一些实施方案中，n为5，Z为-CH₃并且m为14。在一些实施方案中，n为5，Z为-CH₃，并且m为16。在一些实施方案中，n为5，Z为-CH₃，并且m为18。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式VIII的单价基团：

-(Y1)_n1-(V)_r-(Y2)_n2-CO-(CH₂)_m-Z

式VIII

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

V为-[COCH₂(OCH₂CH₂)_tNH]-；

r为1至6；

n1为0至10；

n2为0至10；并且

t为1至6。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式IX的单价基团：

-(Y)_n-(V)_r-CO-(CH₂)_m-Z

式IX

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；

Y选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

V为-[COCH₂(OCH₂CH₂)_tNH]-；

r为1至6；并且

n为1至10；并且

t为1至6。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式X的单价基团：

-(dpeg)_r-(Y2)_n2-CO-(CH₂)_m-Z

式X

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；

dpeg为-[CO(CH₂)O(CH₂)₂O(CH₂)NH]-；

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

r为1至8；并且

n2为0至10。

在一些实施方案中，-(dpeg)_r-(Y2)_n2-选自由以下组成的组：dpeg,γGlu；和dpeg,dpeg,γGlu。

在一个实施方案中，-(dpeg)_r-(Y2)_n2-为-dpeg-dpeg-γGlu-。

在一些实施方案中，多肽包含各自具有间隔基的三个、两个或优选一个亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基为式XI的单价基团：

-(Y1)_n1-(dpeg)_r-CO-(CH₂)_m-Z

式XI

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

dpeg为-[CO(CH₂)O(CH₂)₂O(CH₂)NH]-；

r为1至8；并且

n1为0至10。

在一些实施方案中，Z为-CO₂H。

在一些实施方案中，r为1并且n1为2。

在一些实施方案中，Y1为γGlu，r为1，并且n1为2。

在一些实施方案中，-(Y1)_n1-(dpeg)_r-选自由以下组成的组：-γGlu-γGlu-dpeg-、-γGlu-γGlu-dpeg-dpeg-、-γGlu-γGlu-γGlu-dpeg-和-γGlu-dpeg-。

其他示例性间隔基

在一些实施方案中，间隔基包含式XII的二价基团：

-N(R₁)(CHR₂)_pCO—[N(R₃)((CH₂)₂O(CH₂)₂O)_q(CH₂)CO—]_r

式XII

其中

每个R₁和R₃为氢或C₁-C₄烷基；

每个R₂为H或CO₂H；

p为1、2、3、4、5或6；

q为1、2或3；

r为0或1。

所述间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。

在一些实施方案中，间隔基包含式XIII的二价基团：

[-N(R₃)((CH₂)₂O(CH₂)₂O)_q(CH₂)CO—]_r

式XIII

其中

每个R₃为氢或C₁-C₄烷基；

q为1、2或3；

r为0或1。

在一些实施方案中，某些式中所表示的某些变量包括以下：

在一些实施方案中，每个R₁为氢。在一些实施方案中，每个R₃为氢。在一些实施方案中，每个R₁和每个R₃为氢。

在一些实施方案中，至少一个R₂为CO₂H。在一些实施方案中，一个R₂为CO₂H。

在一些实施方案中，p为1。在一些实施方案中，p为2。在一些实施方案中，p为3。在一些实施方案中，p为4。在一些实施方案中，p为5。在一些实施方案中，p为6。

在一些实施方案中，q为1。在一些实施方案中，q为2。在一些实施方案中，q为3。

在一些实施方案中，r为0。在一些实施方案中，r为1。

在一些实施方案中，间隔基为γ-谷氨酰基，即，-NH(CHCO₂H)(CH₂)₂CO--。在一些实施方案中，间隔基为γ-氨基丁酰基，即，-NH(CH₂)₃CO--。在一些实施方案中，间隔基为β-天冬酰胺酰基，即，-NH(CHCO₂H)(CH₂)CO--。在一些实施方案中，间隔基为-NH(CH₂)₂CO--。在一些实施方案中，间隔基为甘氨酰基。在一些实施方案中，间隔基为β-丙氨酰基。

在一些实施方案中，间隔基为-NHCH(CO₂H)(CH₂)₂CO--[N(R₃)((CH₂)₂O(CH₂)₂O)_q(CH₂)CO—]_r。在一些实施方案中，间隔基为-NH(CH₂)₃CO--[N(R₃)((CH₂)₂O(CH₂)₂O)_q(CH₂)CO—]_r。在一些实施方案中，间隔基为-NHCH(CO₂H)(CH₂)₂CO-NH((CH₂)₂O(CH₂)₂O)₂(CH₂)CO-。在一些实施方案中，间隔基为-NH(CH₂)₃CO-NH((CH₂)₂O(CH₂)2O)₂(CH₂)CO-。在一些实施方案中，间隔基为-NHCH(CO₂H)CH₂CO--[N(R₃)((CH₂)₂O(CH₂)₂O)_q(CH₂)CO—]_r。在一些实施方案中，间隔基为-NH(CH₂)₂CO--[N(R₃)((CH₂)₂O(CH₂)₂O)_q(CH₂)CO—]_r。

在一些实施方案中，间隔基包含式XIV的二价基团：

-(Y)_n-

式XIV

其中

Y选自由γGlu、Asp、Lys和Gly组成的组；

n为1至10。

在一些实施方案中，间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。在一些实施方案中，间隔基的一端与所公开的多肽的氨基形成共价键并且间隔基的另一端与氢原子或保护基形成共价键。

在一些实施方案中，间隔基包含式XV的二价基团：

-(γGlu)_n-

式XV

其中

n为1至10。

在一些实施方案中，间隔基包含式XVI的二价基团：

-(γGlu)_n-(Gly)-

式XVI

其中

n为1至10。

在一些实施方案中，间隔基包含式XVII的二价基团：

-(Gly)-(γGlu)_n-

式XVII

其中

n为1至10。

在一些实施方案中，间隔基包含式XVIII的二价基团：

-(V)_r-(Y)_n-

式XVIII

其中

Y选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

V为-[COCH₂(OCH₂CH₂)_tNH]-；

r为1至6；

n为1至10；并且

t为1至6。

在一实施方案中，-(V)_r-(Y)_n-为-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH]₂-γGlu-。

在一些实施方案中，间隔基包含式XIX的二价基团：

-(Y1)_n1-(dpeg)_r-(Y2)_n2-

式XIX

其中

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

dpeg为-[CO(CH₂)O(CH₂)₂O(CH₂)NH]-；

r为1至8；

n1为0至10；并且

n2为0至10。

在一些实施方案中，r为1，n1为2，并且n2为0。

在一些实施方案中，r为1，n1为2，并且n2为2。

在一些实施方案中，Y1为γGlu并且Y2为γGlu。

在一些实施方案中，Y1为γGlu并且n2为0。

在一些实施方案中，Y1为γGlu，r为1，n1为2，并且n2为0。

因此，在一些实施方案中，本文提供的经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：由选自由SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162组成的组的共有序列表示的氨基酸序列，其中经分离的肽还包含亲脂性取代基，并且任选地包含间隔基。

在一些实施方案中，本文提供的经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：由选自由SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162组成的组的共有序列表示的氨基酸序列，其中经分离的肽还包含式I的亲脂性取代基。

在一些实施方案中，本文提供的经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：由选自由SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162组成的组的共有序列表示的氨基酸序列，其中经分离的肽还包含式I的亲脂性取代基和选自由式XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII和XIX描述的间隔基组成的组的间隔基。

在一些实施方案中，本文提供的经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：由选自由SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162组成的组的共有序列表示的氨基酸序列，其中经分离的肽还包含亲脂性取代基和间隔基，其选自由式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X和XI描述的那些组成的组。

在一些实施方案中，本文提供的经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：由选自由SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162组成的组的共有序列表示的氨基酸序列，其中经分离的肽还包含亲脂性取代基和间隔基，其选自由式I描述的那些组成的组。

在一些实施方案中，本文提供的经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：由选自由SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162组成的组的共有序列表示的氨基酸序列，其中经分离的肽还包含亲脂性取代基和间隔基，其选自由式II描述的那些组成的组。

在一些实施方案中，本文提供的经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：由选自由SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162组成的组的共有序列表示的氨基酸序列，其中经分离的肽还包含亲脂性取代基和间隔基，其选自由式III描述的那些组成的组。

在一些实施方案中，本文提供的经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：由选自由SEQ ID NO:1000至SEQ ID NO:1162组成的组的共有序列表示的氨基酸序列，其中经分离的肽还包含亲脂性取代基和间隔基，其选自由式IV描述的那些组成的组。

如本文所用，(γGlu)₂和2(γGlu)两者均意指-(γGlu)-(γGlu)-或-CO(CH₂)₂CH(CO₂H)NH-CO(CH₂)₂CH(CO₂H)NH-；(γGlu)₃和3(γGlu)两者均意指-(γGlu)-(γGlu)-(γGlu)-或-CO(CH₂)₂CH(CO₂H)NH-CO(CH₂)₂CH(CO₂H)NH-CO(CH₂)₂CH(CO₂H)NH-；等；在给定式中出现超过一次变量的情况下，在每次出现时独立地确定所述变量。例如，对于基团-(Y)₃-，在Y可为γGlu、Asp、Lys或Gly的情况下，每个Y独立地选择为四种氨基酸中的一者。因此，通过非限制性实例，-(Y)₃-可为-(γGlu)-(γGlu)-(γGlu)-、-(γGlu)-(Asp)-(γGlu)-、-(Gly)-(Asp)-(γGlu)-或-(Gly)-(γGlu)-(γGlu)-。

桥接部分

在一些实施方案中，所公开的多肽中的任一者任选地被一个或多个桥接部分取代。如本文所用，术语“桥接部分”意指共价键或接合两个单独氨基酸残基的两个侧链的任何二价接头或部分。在一些实施方案中，所公开的多肽中的任一者任选地被一个或多个内酰胺桥接部分取代。如本文所用，术语“内酰胺桥接部分”意指接合两个单独氨基酸残基的含氨基和含羧基侧链的内酰胺桥或内酰胺键。

示例性化合物：GLP-1受体激动剂多肽

在一些实施方案中，本公开的经分离的多肽包含选自由表4中所列的以下肽组成的组的氨基酸序列：

表4：示例性化合物：GLP-1受体激动剂多肽共价结合至亲脂性取代基，任选地经由间隔基

表5：示例性化合物的化学结构：GLP-1受体激动剂多肽包含亲脂性取代基，经由间隔基，其中一种化合物还包含桥接部分。

注：

·每个K*独立地表示任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的L-赖氨酸；

·K⁺与E⁺的每个配对表示衍生自K⁺的氨基侧链和E⁺的羧基侧链的共价酰胺键(具有水分子损失)。例如，区段-AK⁺AARE⁺W-表示：

·如本文所用，dpeg表示-COCH₂O(CH₂)₂O(CH₂)₂NH-；并且dpeg-dpeg表示-COCH₂O(CH₂)₂O(CH₂)₂NH-COCH₂O(CH₂)₂O(CH₂)₂NH-；并且

·羧基末端氨基酸即S₃₉显示为-S₃₉-(NH₂)，描绘-NH-CH(CH₂OH)-CONH₂。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:1至162组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:6、45、46、54、55、62、68、70、71、74、75、77、78、85、86、87、88、89、92、94、103、107、108、111、112、114、115、120、132、134、139、147和149。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:45、46、54、55、62、68、70、74、75、77、78、85、86、87、88、89、92、94、103、107、108、111、112、114、115、120、132、134、139、147和149。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:6、45、46、54、55、77、78、108、111、112、114、115、120、132、134和139，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:45、46、54、55、77、78、108、111、112、114、115、120、132、134和139。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:55、115、120和132，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明提供以上表4中所阐述的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含选自由SEQ ID NO:1至162组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐为乙酸盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐为三氟乙酸(TFA)盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐为盐酸(HCl)盐。

在一个实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的经分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的经分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的经分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的经分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的经分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的经分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的经分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的经分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的经分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列的经分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列的经分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列的经分离的多肽的HCl盐。

表6：示例性化合物：GLP-1受体激动剂多肽，其任选地包含亲脂性取代基，任选地经由间隔基；并且任选地还包含桥接部分。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:1000至1162组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:1006、1045、1046、1054、1055、1062、1068、1070、1071、1074、1075、1077、1078、1085、1086、1087、1088、1089、1092、1094、1103、1107、1108、1111、1112、1114、1115、1120、1132、1134、1139、1147和1149。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:1006、1045、1046、1054、1055、1077、1078、1108、1111、1112、1114、1115、1120、1132、1134和1139，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:1055、1115、1120和1132，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:1055的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:1115的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:1120的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:1132的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明提供以上表6中所阐述的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供了一种经分离的多肽，其包含选自由SEQ ID NO:1000至1162组成的组的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐为乙酸盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐为三氟乙酸(TFA)盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐为盐酸(HCl)盐。

在一个实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1055的氨基酸序列的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1055的氨基酸序列的经分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1055的氨基酸序列的经分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1055的氨基酸序列的经分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1115的氨基酸序列的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1115的氨基酸序列的经分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1115的氨基酸序列的经分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1115的氨基酸序列的经分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1120的氨基酸序列的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1120的氨基酸序列的经分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1120的氨基酸序列的经分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1120的氨基酸序列的经分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1132的氨基酸序列的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1132的氨基酸序列的经分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1132的氨基酸序列的经分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物为包含SEQ ID NO:1132的氨基酸序列的经分离的多肽的HCl盐。

表7：示例性化合物：GLP-1受体激动剂多肽任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基

注：

·K+与E+的每个配对表示衍生自K+的氨基侧链和E+的羧基侧链的共价酰胺键(具有水分子损失)。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:2117、2118、2119、2120、2121、2135、2136、2137、2138、2140和2141，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2117的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2118的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2119的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2120的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2121的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2135的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2136的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ IDNO:2137的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQID NO:2138的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2140的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，经分离的多肽包含SEQ ID NO:2141的氨基酸序列或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，药学上可接受的盐为乙酸盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐为三氟乙酸(TFA)盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐为盐酸(HCl)盐。

多肽中间体和提供本发明化合物的一般方法

本发明的化合物一般可通过本领域技术人员已知的用于类似化合物的合成和/或半合成方法和通过本文实施例中详细描述的方法制备或分离。

在下文方案中，当描绘特定保护基(“PG”)、离去基(“LG”)或转化条件时，本领域普通技术人员应了解，其他保护基、离去基和转化条件也是适合的并且被考虑的。此类基团和转化详细描述于March'sAdvanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,M.B.Smith和J.March,第5版,John Wiley&Sons,2001,Comprehensive OrganicTransformations,R.C.Larock,第2版,John Wiley&Sons,1999，和Protecting Groups inOrganic Synthesis,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,John Wiley&Sons,1999中，所述文献中的每一者的全部内容特此通过引用并入本文。

如本文所用，短语“离去基”(LG)包括(但不限于)卤素(例如氟离子、氯离子、溴离子、碘离子)、磺酸根(例如甲磺酸根、甲苯磺酸根、苯磺酸根、溴苯磺酸根、硝基苯磺酸根、三氟甲磺酸根)、重氮基等。

如本文所用，短语“氧保护基”包括例如羰基保护基、羟基保护基等。羟基保护基是本领域中众所周知的，并且包括Protecting Groups in Organic Synthesis,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,John Wiley&Sons,1999中详细描述的那些羟基保护基，所述文献的全部内容通过引用并入本文。适合的羟基保护基的实例包括(但不限于)：酯(例如乙酰基、苯甲基)、烯丙基醚、醚、甲硅烷基醚、烷基醚、芳烷基醚、苯甲基醚和烷氧基烷基醚。此类酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、碳酸酯和磺酸酯。具体实例包括甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4,4-(亚乙基二硫基)戊酸酯、特戊酸酯(三甲基乙酰基)、巴豆酸酯、4-甲氧基-巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯甲酸苯甲酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯、碳酸酯，例如甲基、9-芴基甲基、乙基、2,2,2-三氯乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(苯磺酰基)乙基、乙烯基、烯丙基和对硝苄基。此类甲硅烷基醚的实例包括三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基和其他三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包括甲基、苯甲基、对甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、三苯甲基、叔丁基、烯丙基和烯丙氧基羰基醚或衍生物。烷氧基烷基醚包括缩醛，例如甲氧基甲基、甲硫基甲基、(2-甲氧基乙氧基)甲基、苯甲氧基甲基、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基和四氢吡喃基醚。芳烷基醚的实例包括苯甲基、对甲氧基苯甲基(MPM)、3,4-二甲氧基苯甲基、邻硝苄基、对硝苄基、对卤基苯甲基、2,6-二氯苯甲基、对氰苄基以及2-吡啶甲基和4-吡啶甲基。

氨基保护基是本领域中众所周知的，并且包括Protecting Groups in OrganicSynthesis,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,John Wiley&Sons,1999中详细描述的那些氨基保护基，所述文献的全部内容通过引用并入本文。适合的氨基保护基包括(但不限于)芳烷基胺、氨基甲酸酯、环状酰亚胺、烯丙基胺、酰胺等。此类基团的实例包括叔丁氧基羰基(Boc)、乙氧基羰基、甲氧基羰基、三氯乙氧基羰基、烯丙氧基羰基(Alloc)、苯甲氧羰基(Cbz)、烯丙基、邻苯二甲酰亚胺、苯甲基(Bn)、二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)乙基(Dmb)、1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)-3-甲基丁基(ivDde)、芴基甲基羰基(Fmoc)、甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、苯乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等。

在某些实施方案中，本发明还涉及所公开的GLP-1受体激动剂的合成肽中间体。在一些实施方案中，本公开的多肽中间体是包含SEQ ID NO:400的氨基酸序列的经分离的多肽：

HX₂X₃GTX₆X₇X₈X₉X₁₀SX₁₂X₁₃X₁₄EX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLK X₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:400)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为A、2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₃为E或N-甲基Glu；

X₆为F或Y；

X₇为S或T；

X₈为二氨基庚二酸(Dap)、E、K、N、N-甲基Ser、Q、S、s或Y；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L、N-甲基Leu或V；

X₁₂为E、K、Q或S；

X₁₃为Aib、E、K、Q、S、W或Y；

X₁₄为E、R、I、K、L、M、Q或Y；

X₁₆为2,4-二氨基丁酸(Dab)、Dap、E、K、k或鸟氨酸(Orn)；

X₁₇为E、K或Q；

X₁₈为A、K、S或Y；

X₁₉为A、K或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为Aib、E、H、K、L、Q或Y；

X₂₄为A、Aib、E、K、Q、S或Y；

X₂₈为D、E、K、N、Q、S或Y；并且

X₃₂为Dap、H、K、R或S；

其中每个Dab、Dap、K或Orn独立地表示任选地共价结合至保护基或任选地结合至保护基的间隔基的Dab、Dap、K或Orn。

在一些实施方案中，间隔基不结合至保护基。

在一个实施方案中，合成肽中间体不为艾塞那肽HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂(SEQ ID NO:300)的前体，K₁₂或K₂₇共价结合至保护基或任选地结合至保护基的间隔基。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₁₄为Y。

在一些实施方案中，X₁₄为M，并且X₁₆为K。

在一些实施方案中，X₁₆为K。

在一些实施方案中，X₆为F。在一些实施方案中，X₆为Y。

在一些实施方案中，X₇为S。在一些实施方案中，X₇为T。

在一些实施方案中，X₉为D。在一些实施方案中，X₉为E。

在一些实施方案中，本公开的多肽中间体为包含SEQ ID NO:405的氨基酸序列的经分离的多肽：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SX₁₂QYEKX₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGP X₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQID NO:405)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E、K或Q；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为N或Q；并且

X₃₂为H或S；

其中每个K表示任选地共价结合至保护基或任选地结合至保护基的间隔基的赖氨酸。

在一些实施方案中，间隔基不结合至保护基。

在一些实施方案中，X₂为Aib。

在一些实施方案中，位于SEQ ID NO:405的第十六位置处的赖氨酸残基共价结合至保护基或任选地结合至保护基的间隔基。

在一些实施方案中，如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

在一些实施方案中，X₂为Aib。在一些实施方案中，X₂为G。

在一些实施方案中，X₈为N。在一些实施方案中，X₈为S。

示例性多肽中间体

在一些实施方案中，本公开的经分离的多肽包含选自由表8和表9中所列的以下肽组成的组的氨基酸序列：

表8：化合物A120和其示例性多肽中间体。

注：

·Alloc＝烯丙氧基羰基保护基

·Allyl＝烯丙基(CH₂＝CH-CH₂-)保护基

·ivDde＝1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)-3-甲基丁基保护基

在一些实施方案中，本发明提供化合物A120(SEQ ID NO:120)的肽中间体。在一些实施方案中，本发明提供上表8中所阐述的肽中间体。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:3120的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:4120的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:5120的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:6120的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:7120的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:8120的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:9120的氨基酸序列的肽。

在一些实施方案中，本发明提供了一种用于制备本发明的化合物，例如化合物A120(SEQ ID NO:120)的方法，所述方法包括如下文方案1中所示例，用以下活化酰基(LG)CO(CH₂)_zzCO₂H酰化例如化合物D3120(SEQ ID NO:3120)的多肽中间体的步骤，其中ZZ为14至22并且LG为离去基：

方案1：

表9：化合物A115和其示例性多肽中间体。

在一些实施方案中，本发明提供化合物A115(SEQ ID NO:115)的肽中间体。在一些实施方案中，本发明提供上表9中所阐述的肽中间体。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:3115的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:4115的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:5115的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:6115的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽中间体为具有SEQ ID NO:7115的氨基酸序列的肽。

在一些实施方案中，本发明提供了一种制备本发明的化合物，例如化合物A115(SEQ ID NO:115)的方法，所述方法包括如下文方案2中所示例，用以下活化酰基(LG)CO(CH₂)_zzCO₂H酰化例如化合物D3115(SEQ ID NO:3115)的多肽中间体的步骤，其中ZZ为14至22并且LG为离去基：

方案2：

使用方法

根据另一个实施方案，本发明涉及一种治疗需要治疗的受试者的代谢性疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者提供有效量的本公开的GLP-1受体激动剂多肽或其药物组合物。代谢性疾病或病症包括1型糖尿病、2型糖尿病和肥胖症。另外，本发明涉及一种实现受试者(包括糖尿病受试者)的体重减轻的方法，所述方法包括向受试者提供有效量的本公开的GLP-1受体激动剂多肽。在某些实施方案中，本发明还涉及治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人类受试者的肥胖症、向人类受试者提供体重减轻或抑制人类受试者的食欲的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人类受试者的糖尿病的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。在一些实施方案中，糖尿病为1型糖尿病。在一些实施方案中，糖尿病为1型糖尿病。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人类受试者的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人类受试者的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。

本公开的GLP-1受体激动剂多肽尤其适用于治疗糖尿病，所述方法包括向糖尿病受试者提供有效量的GLP-1受体激动剂多肽。在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有1型或2型糖尿病的受试者以控制或降低受试者中的血糖浓度，其中可基于所测量的糖化血红蛋白(血红蛋白A1c，HbA1c)的血液浓度来监测或估算血糖水平。

(i)在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者；

(ii)在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者；

(iii)在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽用于治疗肥胖症；和

(iv)在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽用于向受试者如糖尿病受试者提供体重减轻，

(v)在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽用于治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，

(vi)在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽用于治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，

其中如用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的GLP-1受体激动剂多肽包含本公开的任何经分离的多肽，包括选自由以下组成的组的多肽：SEQ ID NO:6、45、46、54、55、77、78、108、111、112、114、115、120、132、134和139，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，如用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的GLP-1受体激动剂多肽包含本公开的任何经分离的多肽，包括选自由SEQ ID NO:55、115、120和132组成的组的多肽，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，如用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的GLP-1受体激动剂多肽包含SEQ ID NO:55的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，如用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的GLP-1受体激动剂多肽包含SEQ ID NO:115的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，如用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的GLP-1受体激动剂多肽包含SEQ ID NO:120的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，如用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的GLP-1受体激动剂多肽包含SEQ ID NO:132的经分离的多肽或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:55或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:115或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:120或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者，其中经分离的多肽具有SEQID NO:132或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:55或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:115或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:120或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者，其中经分离的多肽具有SEQID NO:132或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有肥胖症的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:55或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有肥胖症的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:115或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有肥胖症的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:120或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有肥胖症的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:132或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于向受试者提供体重减轻，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:55或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于向受试者提供体重减轻，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:115或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于向受试者提供体重减轻，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:120或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于向受试者提供体重减轻，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:132或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有NAFLD的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:55或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有NAFLD的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:115或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有NAFLD的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:120或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有NAFLD的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:132或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有NASH的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:55或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有NASH的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:115或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有NASH的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:120或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽用于治疗患有NASH的受试者，其中经分离的多肽具有SEQ ID NO:132或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人类受试者的神经疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。在一些实施方案中，神经疾病或病症选自由帕金森病(Parkinson's disease，PD)和阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)组成的组。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人类受试者的帕金森病的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。临床试验中用艾塞那肽治疗12个月的中度晚期PD患者展现运动和认知症状的改善，效应在终止治疗后持续长达12个月(Aviles-Olmos,I.等人,J Clin Invest,2013.123(6):2730-6；Athauda,D.和Foltynie,T.,Drug Discov Today.2016.21(5):802-18；Simuni,T.和Brundin,P.,J ParkinsonsDis,2014.4(3):345-7)。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人类受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。各种AD临床前研究已显示施用GLP-1受体激动剂提供神经保护作用，其改善认知功能并且积极地影响AD中大部分神经病理学特征(Grieco,M.等人,Front Neurosci.2019；13:1112；Holscher,C.,ActaPhysiologica Sinica,2014,66(5):497-510)。

如本文所用，术语“患者”或“受试者”是指啮齿动物或动物，优选哺乳动物，并且最优选人类。

组合

在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽与第二药剂组合共同配制。在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽与第二药剂组合共同配制，其中第二药剂为肠促胰岛素模拟物。在一些实施方案中，本公开的GLP-1受体激动剂多肽与第二药剂组合共同配制，其中第二药剂为促胰岛素化合物。

本发明的一些实施方案包含与第二治疗剂组合使用本发明的所公开的GLP-1受体激动剂多肽，所述第二治疗剂例如第二多肽，例如作为非限制性实例，促胰岛素肽、肽激素，例如胰高血糖素和肠促胰岛素模拟物以及其肽类似物和肽衍生物；胰高血糖素如多肽-2(GLP-2)、PYY(也称为肽YY、肽酪氨酸酪氨酸)以及其肽类似物和肽衍生物，例如PYY(3-36)；胃泌酸调节素以及其肽类似物和肽衍生物)；和抑胃肽(GIP)以及其肽类似物和肽衍生物。在一些实施方案中，包含与第二药剂组合的GLP-1受体激动剂多肽的药物组合物用于治疗2型糖尿病。

在一些实施方案中，提供了包含如本文所公开的经分离的多肽中的任一者的药物组合物。在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含如本文所公开的经分离的多肽中的任一者并且还包含第二多肽。在一些实施方案中，第二多肽为胰高血糖素受体激动剂。在一些实施方案中，第二多肽为胰高血糖素类似物。在一些实施方案中，第二多肽为胰淀素类似物。在一些实施方案中，第二多肽为PYY类似物。

GLP-1，包括三种形式的肽GLP-1(1-37)、GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺以及GLP-1的肽类似物，已显示刺激胰岛素分泌(即，为促胰岛素的)，其诱发细胞吸收葡萄糖并导致血清葡萄糖浓度降低(参见例如Mojsov,S.,Int.J.Peptide Protein Research,40:333-343(1992))。

表明促胰岛素作用的众多GLP-1受体激动剂(例如GLP-1肽衍生物和肽类似物)是本领域中已知的(参见例如美国专利第5,118,666号；第5,120,712号；第5,512,549号；第5,545,618号；第5,574,008号；第5,574,008号；第5,614,492号；第5,958,909号；第6,191,102号；第6,268,343号；第6,329,336号；第6,451,974号；第6,458,924号；第6,514,500号；第6,593,295号；第6,703,359号；第6,706,689号；第6,720,407号；第6,821,949号；第6,849,708号；第6,849,714号；第6,887,470号；第6,887,849号；第6,903,186号；第7,022,674号；第7,041,646号；第7,084,243号；第7,101,843号；第7,138,486号；第7,141,547号；第7,144,863号；和第7,199,217号)以及临床试验中已知的(例如他司鲁肽和阿比鲁肽)。在本发明的实施中GLP-1受体激动剂的一个实例为(Novo Nordisk A/S,Bagsvaerd D K)(利拉鲁肽；美国专利第6,268,343号、第6,458,924号和第7,235,627号)。每日一次可注射(利拉鲁肽)在美国、欧洲和日本是可商购的。GLP-1受体激动剂的另一实例为或(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd D K)(索马鲁肽，分别为可注射和经口施用的制剂)。在本文中为便于参考，具有促胰岛素活性的GLP-1受体激动剂的家族(GLP-1肽、GLP-1肽衍生物和GLP-1肽类似物)统称为“GLP-1”。

肽YY(PYY)为36个氨基酸残基肽酰胺。PYY抑制肠道蠕动和血液流动(Laburthe,M.,Trends Endocrinol Metab.1(3):168-74(1990)，调节肠道分泌(Cox,H.M.等人,Br JPharmacol 101(2):247-52(1990)；Playford,R.J.等人,Lancet 335(8705):1555-7(1990))，并且刺激净吸收(MacFayden,R.J.等人,Neuropeptides 7(3):219-27(1986))。已鉴定出两个主要体内变体PYY(1-36)和PYY(3-36)(例如Eberlein,G.A.等人,Peptides 10(4),797-803(1989))。PYY以及其肽类似物和肽衍生物的序列是本领域中已知的(例如美国专利第5,574,010号和第5,552,520号)。

胃泌酸调节素是结肠中发现的天然存在的37个氨基酸肽激素，其已发现抑制食欲并促进体重减轻(Wynne K等人,Int J Obes(Lond)30(12):1729-36(2006))。胃泌酸调节素以及其肽类似物和肽衍生物的序列是本领域中已知的(例如Bataille D等人,Peptides 2(增刊2):41-44(1981)；以及美国专利公开第2005/0070469号和第2006/0094652号)。

抑胃肽(GIP)是促胰岛素肽激素(Efendic,S.等人,Horm Metab Res.36:742-6(2004))并且回应于刺激胰腺分泌胰岛素的吸收的脂肪和碳水化合物由十二指肠和空肠的粘膜分泌。GIP作为生物活性42个氨基酸肽循环。GIP也称为葡萄糖依赖性促胰岛素蛋白。GIP是42个氨基酸肠胃性调节肽，其在葡萄糖存在下刺激胰岛素从胰腺β细胞分泌(Tseng,C.等人,PNAS 90:1992-1996(1993))。GIP以及其肽类似物和肽衍生物的序列是本领域中已知的(例如Meier J.J.,Diabetes Metab Res Rev.21(2):91-117(2005)和Efendic S.,Horm Metab Res.36(11-12):742-6(2004))。

胰高血糖素是由胰腺的α细胞产生的肽激素，其提高血流中的葡萄糖浓度。其作用与降低葡萄糖浓度的胰岛素相反。当血流中的葡萄糖浓度过低时，胰腺释放胰高血糖素。胰高血糖素使肝脏将储存的肝糖转化成葡萄糖，其释放至血流中。高血糖水平刺激胰岛素释放。胰岛素允许胰岛素依赖性组织吸收并使用葡萄糖。因此，胰高血糖素和胰岛素是使血糖水平保持在稳定水平下的反馈系统的一部分。

人类胰淀素或胰岛淀粉样多肽(IAPP)是37残基多肽激素。胰淀素以约100:1(胰岛素:胰淀素)的比率与胰岛素一起从胰腺β-细胞共分泌。原胰岛淀粉样多肽(即，原-IAPP)在胰腺β-细胞中产生为67个氨基酸、7404道尔顿前肽，其经受翻译后修饰，包括蛋白酶裂解以产生37残基胰淀素。β-细胞功能缺失发生于1型糖尿病早期并且可发生于2型糖尿病晚期，导致胰岛素和胰淀素的分泌不足。

胰淀素充当内分泌胰腺(合成并分泌激素的胰腺内的那些细胞)的部分。胰淀素有助于血糖控制；其从胰岛分泌至血液循环中并通过肾脏中的肽酶清除。胰淀素的代谢功能充分表征为血浆中的营养物如葡萄糖的出现的抑制剂。其因此充当胰岛素的协同搭配物，一种作为调节血糖水平并协调人体的葡萄糖分布和吸收的肽。胰岛素在体内的作用尤其是预防血糖水平升高过高，尤其在用餐后。

据认为胰淀素通过减缓胃排空和促进饱腹感(即，饱胀的感觉)在血糖调节方面起作用，由此预防餐后(即，在用餐后)血糖水平飙升。总体作用是在进食后减缓血液中的葡萄糖的出现速率。胰淀素还降低胰腺分泌胰高血糖素。胰高血糖素在体内的作用尤其是预防血糖水平下降过低。这是显著的，因为例如某些1型糖尿病易于在用餐后立即分泌过量的提高血糖的胰高血糖素。

出于众多原因，在血清中具有约13分钟的半衰期的人类胰淀素用作治疗剂是不适合的。相反地，开发出普兰林肽(pramlintide)(由Amylin Pharmaceuticals,Inc.,San Diego,CA,USA开发并且由AstraZeneca plc,Cambridge,UK出售)作为人类胰淀素的合成类似物用于1型或2型糖尿病患者的治疗，所述患者使用进餐时间胰岛素，但尽管是最佳胰岛素疗法，仍无法实现所需血糖控制。普兰林肽与人类胰淀素在其37个氨基酸中有3个不同。这些修饰为普兰林肽提供在人类中约48分钟的更长半衰期并降低其聚集的倾向(人类胰淀素中发现的特征)。已公开人类胰淀素的其他类似物，例如美国专利申请第16/598,915号(对应于PCT国际申请第PCT/US2019/055696号)中所公开的那些类似物，两者均在2019年10月10日提交。

可植入递送

在一些实施方案中，提供了如本文所描述的包含如本文所公开的长效GLP-1受体激动剂多肽中的任一者的渗透递送装置或包含长效GLP-1受体激动剂多肽中的任一者的药物组合物。

在一些实施方案中，渗透递送装置包含不渗透性储集器，其包括内表面和外表面以及第一开口端和第二开口端；半透膜，其与所述储集器的第一开口端呈密封关系；渗透发动机，其在所述储集器内并且邻近于所述半透膜；活塞，其邻近于所述渗透发动机，其中所述活塞与所述储集器的内表面形成可移动密封件，所述活塞将所述储集器分隔成第一腔室和第二腔室，所述第一腔室包含所述渗透发动机；悬浮液制剂，其中所述第二腔室包含所述悬浮液制剂并且所述悬浮液制剂是可流动的并且包含所述经分离的多肽；以及扩散调节器，其插入于所述储集器的第二开口端中，所述扩散调节器邻近于所述悬浮液制剂。

可植入渗透递送装置通常包括具有至少一个通过其递送悬浮液制剂的孔口的储集器。悬浮液制剂可储存于储集器内。在一个优选实施方案中，可植入药物递送装置是渗透递送装置，其中以渗透方式驱动药物递送。一些渗透递送装置和其组件部分已描述例如递送装置或类似装置(参见例如美国专利第5,609,885号；第5,728,396号；第5,985,305号；第5,997,527号；第6,113,938号；第6,132,420号；第6,156,331号；第6,217,906号；第6,261,584号；第6,270,787号；第6,287,295号；第6,375,978号；第6,395,292号；第6,508,808号；第6,544,252号；第6,635,268号；第6,682,522号；第6,923,800号；第6,939,556号；第6,976,981号；第6,997,922号；第7,014,636号；第7,207,982号；和第7,112,335号；第7,163,688号；美国专利公开第2005/0175701号、第2007/0281024号、第2008/0091176号和第2009/0202608号)。

渗透递送装置通常由含有渗透发动机、活塞和药物制剂的圆柱形储集器组成。储集器通过控制速率的半透膜在一端封盖并且通过从药物储集器释放包含药物的悬浮液制剂穿过的扩散调节器在另一端封盖。活塞从渗透发动机分离药物制剂并且利用密封件以防止渗透发动机腔室中的水进入药物储集器。扩散调节器经设计与药物制剂结合以防止体液通过孔口进入药物储集器。

基于渗透原理，渗透装置以预定速率释放药物。细胞外液体通过半透膜进入渗透递送装置，直接进入经膨胀从而以缓慢且平稳的递送速率驱动活塞的盐发动机。活塞移动促使药物制剂以预定剪切速率通过孔口释放或离开端口。在本发明的一个实施方案中，渗透装置的储集器装载有悬浮液制剂，其中装置能够在一段延长时段(例如约1、约3、约6、约9、约10和约12个月)内以预定治疗学上有效的递送速率向受试者递送悬浮液制剂。

药物从渗透递送装置的释放速率通常为受试者提供预定目标剂量的药物，例如在一天的时程内递送治疗学上有效的日剂量；即，药物从装置的释放速率向所述受试者提供治疗浓度的药物的基本上稳态递送。

通常，对于渗透递送装置，包含有益剂制剂的有益剂腔室的体积在约100μl至约1000μl之间、更优选在约120μl与约500μl之间、更优选在约150μl与约200μl之间。

通常，例如，渗透递送装置经真皮下或皮下植入受试者内以提供皮下药物递送。一个或多个装置可经真皮下或皮下植入至任一个或两个手臂(例如在上臂的内部、外部或背面中)或腹部中。腹部区域中的优选位置在延伸至肋部下方和腰线上方区域中的腹部皮肤下。为了提供用于在腹部内植入一种或多种渗透递送装置的多个位置，腹壁可分成如下4个象限：右侧肋部下方延伸至少2-3公分，例如右侧肋部下方至少约5-8公分并且中线右侧至少2-3公分，例如中线右侧至少约5-8公分的右上方象限；腰线上方延伸至少2-3公分，例如腰线上方至少约5-8公分并且中线右侧至少2-3公分，例如中线右侧至少约5-8公分的右下方象限；左侧肋部下方延伸至少2-3公分，例如左侧肋部下方至少约5-8公分并且中线左侧至少2-3公分，例如中线左侧至少约5-8公分的左上方象限；和腰线上方延伸至少2-3公分，例如腰线上方至少约5-8公分并且中线左侧至少2-3公分，例如中线左侧至少约5-8公分的左下方象限。这为一种或多种场合下一个或多个装置的植入提供多个可用位置。渗透递送装置的植入和去除通常由医学专业人士使用局部麻醉(例如利多卡因(lidocaine))进行。

通过从受试者去除渗透递送装置来终止治疗是直接了当的，并且提供立即停止向所述受试者递送药物的重要优势。

优选地，渗透递送装置具有失效安全机制以防止在如递送药物制剂的出口(扩散调节器)堵塞或阻塞的理论情形中药物的无意过量或推注递送。为了防止药物的无意过量或推注递送，渗透递送装置经设计和构建以使得部分或完全从储集器移走或排出扩散调节器所需要的压力超过部分或完全移走或排出半透膜所需要的压力，至储集器减压所必需的程度。在此类情形中，将在装置内建立压力直至其将在另一端向外推送半透膜，由此释放渗透压。渗透递送装置然后将变为静态并且不再递送药物制剂，条件是活塞与储集器呈密封关系。

可选择剂量和递送速率以通常在植入装置后在受试者内药物的小于约6个半衰期内实现药物的所需血液浓度。选择药物的血液浓度以得到药物的最佳治疗效果，同时避免过量浓度的药物可能诱发的非所需副作用，同时在相同时间避免可能诱发与药物的波峰或波谷血浆浓度相关的副作用的波峰和波谷。

悬浮液制剂也可用于输注泵，例如(DURECT Corporation,Cupertino,Calif.)渗透泵中，所述渗透泵为用于实验室动物(例如小鼠和大鼠)的连续给药的小型输注泵。

施用模式

在一些实施方案中，所述方法包括经由注射向需要治疗的受试者提供本公开的GLP-1受体激动剂多肽或其药物组合物。在一些实施方案中，所述方法包括向需要治疗的受试者提供经配制用于口服施用的本公开的GLP-1受体激动剂多肽或其药物组合物。

在一些实施方案中，所述方法包括经由植入向需要治疗的受试者提供本公开的GLP-1受体激动剂多肽或其药物组合物。在一些实施方案中，所述方法包括从渗透递送装置向需要治疗的受试者提供GLP-1受体激动剂多肽的连续递送。递送装置，例如渗透递送装置包含足够的本公开的GLP-1受体激动剂多肽以用于连续施用长达3个月、6个月、9个月、12个月、18个月或24个月。因而，经由渗透递送装置连续施用本公开的GLP-1受体激动剂多肽消除市售GLP-1受体激动剂多肽的每日一次或每日多次给药。

来自渗透递送装置的GLP-1受体激动剂多肽的基本上稳态递送在施用时间段内是连续的。在一些实施方案中，受试者或患者是人类受试者或人类患者。

在本发明的一些实施方案中，施用时段为例如至少约3个月、至少约3个月至约一年、至少约4个月至约一年、至少约5个月至约一年、至少约6个月至约一年、至少约8个月至约一年、至少约9个月至约一年、至少约10个月至约一年、至少约一年至约两年、至少约两年至约三年。

在其他实施方案中，本发明的治疗方法在受试者中植入渗透递送装置之后提供受试者空腹血浆葡萄糖浓度显著降低(相对于在植入渗透递送装置之前的受试者空腹血浆葡萄糖浓度)，其在受试者中植入渗透递送装置之后约7天、6天、5天、4天、3天、2天、1天或更短时间内实现。空腹血浆葡萄糖的显著降低通常为统计学显著的，如通过应用适当的统计检验所表明或医学专业人员针对受试者视为显著的。相对于植入前基线的空腹血浆葡萄糖的显著降低通常在施用时段内保持。

在一些实施方案中，本发明涉及一种治疗需要治疗的受试者的疾病或疾患的方法。所述方法包括从渗透递送装置提供药物的连续递送，其中在受试者中实现药物以治疗浓度的基本上稳态递送。药物从渗透递送装置的基本上稳态递送在至少约3个月的施用时段内是连续的。药物在典型的受试者中具有已知或测定的半衰期。人类是本发明的实践的优选受试者。本发明包括能够有效治疗疾病或疾患的药物，以及包含用于治疗需要治疗的受试者的疾病或疾患的本发明方法中的药物的渗透递送装置。本发明的优势包括峰值相关药物毒性减轻和与谷值相关的次优药物疗法减毒。

在一些实施方案中，药物以治疗浓度的基本上稳态递送在受试者中植入渗透递送装置后约1个月、7天、5天、3天或1天的时段内实现。

本发明还提供了一种用于促进有需要的受试者的体重减轻的方法、一种用于治疗有需要的受试者的超重或肥胖症的方法和/或一种用于抑制有需要的受试者的食欲的方法。所述方法包括提供经分离的GLP-1受体激动剂多肽的递送。在一些实施方案中，经分离的GLP-1受体激动剂多肽从可植入渗透递送装置连续地递送。在一些实施方案中，实现从渗透递送装置基本上稳态递送GLP-1受体激动剂多肽并且在施用时段内是基本上连续的。在一些实施方案中，受试者为人类。

本发明包括一种包含GLP-1受体激动剂多肽的渗透递送装置，其用于需要治疗的受试者的本发明方法中。受试者可患有2型糖尿病。有需要的受试者可具有大于10.0％的基线HbA1c％，即，高基线(HBL)受试者。受试者可能先前未接受用于治疗2型糖尿病的药物。

在其他实施方案中，本发明的治疗方法在受试者中植入渗透递送装置之后提供受试者空腹血浆葡萄糖浓度的显著降低(相对于在植入渗透递送装置之前的受试者空腹血浆葡萄糖浓度)，其在受试者中植入渗透递送装置之后约7天或更短时间内、在受试者中植入渗透递送装置之后约6天或更短时间内、在受试者中植入渗透递送装置之后约5天或更短时间内、在受试者中植入渗透递送装置之后约4天或更短时间内、在受试者中植入渗透递送装置之后约3天或更短时间内、在受试者中植入渗透递送装置之后约2天或更短时间内或在受试者中植入渗透递送装置之后约1天或更短时间内实现。在本发明的优选实施方案中，相对于在植入之前的受试者空腹血浆葡萄糖浓度，在植入渗透递送装置之后受试者空腹血浆葡萄糖浓度显著降低，其在受试者中植入渗透递送装置之后约2天或更短时间内，优选约1天或更短时间内，或更优选在受试者中植入渗透递送装置之后约1天内实现。空腹血浆葡萄糖的显著降低通常为统计学显著的，如通过应用适当的统计检验所表明或医学专业人员针对受试者视为显著的。相对于植入前基线的空腹血浆葡萄糖的显著降低通常在施用时段内保持。

在与治疗受试者的疾病或疾患的方法相关的本发明的所有方面的实施方案中，示例性渗透递送装置包括以下：不渗透性储集器，其包含内表面和外表面以及第一开口端和第二开口端；半透膜，其与所述储集器的所述第一开口端呈密封关系；渗透发动机，其在所述储集器内并且邻近于所述半透膜；活塞，其邻近于所述渗透发动机，其中所述活塞与所述储集器的所述内表面形成可移动密封件，所述活塞将所述储集器分隔成第一腔室和第二腔室，所述第一腔室包含所述渗透发动机；药物制剂或包含所述药物的悬浮液制剂，其中所述第二腔室包含所述药物制剂或悬浮液制剂并且所述药物制剂或悬浮液制剂是可流动的；以及扩散调节器，其插入于所述储集器的所述第二开口端中，所述扩散调节器邻近于所述悬浮液制剂。在优选实施方案中，储集器包含钛或钛合金。

在涉及治疗受试者的疾病或疾患的方法的本发明的所有方面的实施方案中，药物制剂可包含药物和媒介物制剂。或者，悬浮液制剂用于所述方法中，并且可例如包含：包含药物的粒子制剂和媒介物制剂。用于形成本发明的悬浮液制剂的媒介物制剂可例如包含溶剂和聚合物。

渗透递送装置的储集器可例如包含钛或钛合金。

在本发明的所有方面的实施方案中，植入渗透递送装置可用于提供皮下递送。

在本发明的所有方面的实施方案中，连续递送可例如为零级受控连续递送。

药物组合物

根据另一个实施方案，本发明提供了一种包含本发明的化合物(即，经分离的多肽)或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的药物组合物。

在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含配制为或其药学上可接受的盐如三氟乙酸盐、乙酸盐或盐酸盐的所公开的多肽中的任一者。在一些实施方案中，提供了一种包含配制为三氟乙酸盐的所公开的多肽中的任一者的药物组合物。在一些实施方案中，提供了一种包含配制为乙酸盐的所公开的多肽中的任一者的药物组合物。在一些实施方案中，提供了一种包含配制为盐酸盐的所公开的多肽中的任一者的药物组合物。

术语“药学上可接受的载体、佐剂或媒介物”是指不破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载体、佐剂或媒介物。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”旨在包括与药物施用相容的任何和所有溶剂、聚合物、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等张和吸收延迟剂等。适合的载体描述于本领域中的标准参考文本Remington's Pharmaceutical Sciences的最新版中，其通过引用并入本文。此类载体或稀释剂的优选实例包括但不限于水、盐水、林格氏溶液(ringer's solution)、右旋糖溶液和5％人类血清白蛋白。还可使用脂质体和非水性媒介物，例如不挥发性油。此类介质和药剂在药学活性物质中的用途是本领域中众所周知的。除非任何常规介质或药剂与活性化合物不相容，否则预期其在组合物中使用。还可在组合物中并入补充活性化合物。

可用于本发明组合物中的代表性药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括(但不限于)：离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人类血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如鱼精蛋白硫酸盐、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含配制为或其药学上可接受的盐如三氟乙酸盐、乙酸盐或盐酸盐的所公开的多肽中的任一者的药学上可接受的衍生物。“药学上可接受的衍生物”意指本发明化合物的任何无毒盐、酯、酯的盐或其他衍生物，其在向接受者施用后即能够直接或间接提供本发明化合物或其活性代谢物或残余物。

药物组合物包含药物并且可配制为如下文更详细地描述的“粒子制剂”。药物组合物和/或粒子制剂可包括稳定组分(在本文中也称为“赋形剂”)。稳定化组分的实例包括(但不限于)：碳水化合物、抗氧化剂、氨基酸、缓冲剂、无机化合物和表面活性剂。

本发明的组合物中的化合物的量使得能有效地可测量地激活生物样品或患者中的一种或多种GLP-1受体(例如人类、大鼠、猴等)。在某些实施方案中，本发明组合物中的化合物的量为在人类血清白蛋白不存在或存在下使得能有效地可测量地激动生物样品或患者中的人类GLP-1受体。在某些实施方案中，本发明的组合物经配制以用于向需要此类组合物的患者施用。在一些实施方案中，本发明的组合物经配制以可向患者注射施用。在一些实施方案中，本发明的组合物经配制用于经由可植入递送装置如渗透递送装置向患者施用。

本公开的经分离的多肽(在本文中也称为“活性化合物”)和其衍生物、片段、类似物和同源物可并入适用于施用的药物组合物中。此类组合物通常包含经分离的多肽或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

将本发明的药物组合物配制成与其预期施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外(例如静脉内、真皮内、真皮下、皮下)、经口(例如吸入)、透皮(即局部)、经粘膜、经直肠或其组合。在一些实施方案中，本公开的药物组合物或经分离的多肽经配制用于通过局部施用来施用。在一些实施方案中，本公开的药物组合物或经分离的多肽经配制用于通过吸入施用来施用。在一些实施方案中，药物组合物经配制用于通过适用于真皮下或皮下植入并且皮下递送药物组合物的装置或其他适合的递送机构来施用。在一些实施方案中，药物组合物经配制用于通过适用于真皮下或皮下植入并且皮下递送药物组合物的植入装置来施用。在一些实施方案中，药物组合物经配制用于通过渗透递送装置，例如适用于真皮下或皮下置放或其他植入并且皮下递送药物组合物的可植入渗透递送装置来施用。用于肠胃外施用、皮内施用、真皮下施用、皮下施用或其组合的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、生理盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂，例如氯化钠或右旋糖。pH可用酸或碱如盐酸或氢氧化钠加以调节。肠胃外制剂可封装于由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

适于可注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶性情况下)或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内施用，适合的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，所述组合物必须为无菌的并且流动性应达到存在易注射性的程度。其在制造和储存条件下必须稳定，并且必须保护其免遭例如细菌和真菌的微生物的污染作用。载体可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)和其适合混合物的溶剂或分散介质。例如，可通过使用包衣(例如卵磷脂)、通过维持就分散液而言所需粒径和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。微生物作用的预防可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂实现，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。在许多情况下，在组合物中将优选包括等张剂，例如糖、多元醇(例如甘露糖醇、山梨糖醇)、氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中包括例如单硬脂酸铝和明胶的吸收延迟剂来实现。

无菌可注射溶液可通过如下方法制备：将所需量的活性化合物与上文所列举的成分中的一者或组合一起并入适当溶剂中，根据需要接着进行过滤灭菌。通常，通过将活性化合物并入无菌媒介物中来制备分散液，所述无菌媒介物含有基础分散介质和来自上文所列举的成分的其他所需成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌散剂的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，从其先前经无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何其他所需成分的散剂。

口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可包覆于明胶胶囊中或压缩成片剂。出于口服治疗性施用的目的，活性化合物可并有赋形剂并且以片剂、锭剂或胶囊形式使用。还可使用适用作漱口水的流体载体制备口服组合物，其中流体载体中的化合物经口施用并漱口并且吐出或吞咽。可包括药学上相容的粘合剂和/或佐剂物质作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可含有以下成分或具有类似性质的化合物中的任一者：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如褐藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；滑动剂，例如胶态二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或调味剂，例如胡椒薄荷、水杨酸甲酯或橙调味剂。

对于通过吸入的施用，化合物可以气雾剂喷雾的形式从含有合适推进剂(例如，气体如二氧化碳)的加压容器或分配器或喷雾器递送。

全身性施用也可通过经粘膜或透皮方式。对于经粘膜或透皮施用，在制剂中使用适于渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂通常是本领域中已知的，并且对于经粘膜施用，包括例如洗涤剂、胆汁盐和梭链孢酸衍生物。经粘膜施用可经由使用经鼻喷雾或栓剂实现。对于透皮施用，如本领域中通常已知将活性化合物配制成软膏、油膏、凝胶或乳膏。

在一个实施方案中，用将保护化合物免于自身体快速消除的载体来制备活性化合物，所述载体例如受控释放制剂，包括植入物和微胶囊化递送系统。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的方法是本领域技术人员显而易见的。材料在商业上也可获自AlzaCorporation和Nova Pharmaceuticals,Inc.。脂质体悬浮液也可用作药学上可接受的载体。这些物质可根据本领域技术人员已知的方法制备，例如美国专利第4,522,811号中所描述。

为了易于施用和剂量均一性，按单位剂型来配制口服或肠胃外组合物是尤其有利的。如本文中所用的单位剂型是指适合作为用于待治疗的受试者的单位剂量的物理离散单元；每个单元含有与所需药物载体相缔合的经计算以产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。本发明的单位剂型的规格由以下因素规定并且直接取决于以下因素：活性化合物的独特特征和待实现的特定治疗效果，以及混配用于治疗个体的此类活性化合物的本领域中固有的局限性。

药物组合物可与施用说明书一起包括于容器、包装或分配器中。

药物粒子制剂

用于本发明的实践中的化合物，即经分离的多肽或其药学上可接受的盐通常添加至粒子制剂中，其用于制造均匀地悬浮、溶解或分散于悬浮液媒介物中以形成悬浮液制剂的含有多肽的粒子。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽被配制于粒子制剂中并转化(例如喷雾干燥)成粒子。在一些实施方案中，将包含GLP-1受体激动剂多肽的粒子悬浮于媒介物制剂中，产生媒介物的悬浮液制剂和包含GLP-1受体激动剂多肽的悬浮粒子。

优选地，粒子制剂使用例如喷雾干燥、冻干、干化、冷冻干燥、研磨、粒化、超声波液滴形成、结晶、沉淀或用于从组分的混合物形成粒子的技术中可获得的其他技术的处理而可成形为粒子。在本发明的一个实施方案中，将粒子喷雾干燥。粒子优选在形状和大小方面是基本上均匀的。

在一些实施方案中，本发明提供了用于医药用途的药物粒子制剂。粒子制剂通常包含药物并且包括一种或多种稳定化组分(在本文中也称为“赋形剂”)。稳定化组分的实例包括(但不限于)：碳水化合物、抗氧化剂、氨基酸、缓冲剂、无机化合物和表面活性剂。粒子制剂中稳定剂的量可以实验方式基于稳定剂的活性和制剂的所需特征，鉴于本说明书的教导内容进行测定。

在实施方案中的任一者中，粒子制剂可包含约50wt％至约90wt％药物、约50wt％至约85wt％药物、约55wt％至约90wt％药物、约60wt％至约90wt％药物、约65wt％至约85wt％药物、约65wt％至约90wt％药物、约70wt％至约90wt％药物、约70wt％至约85wt％药物、约70wt％至约80wt％药物、或约70wt％至约75wt％药物。

通常，粒子制剂中的碳水化合物的量通过聚集关系(aggregation concern)来测定。一般而言，碳水化合物量不应过高以避免归因于未与药物结合的过量碳水化合物在水存在下促进晶体生长。

通常，粒子制剂中的抗氧化剂的量是通过氧化关系来测定，而制剂中的氨基酸的量是通过喷雾干燥期间粒子的氧化关系和/或成形性来测定。

通常，粒子制剂中的缓冲液的量是通过喷雾干燥期间粒子的预处理关系、稳定性关系和成形性来测定。当所有稳定剂均溶解时，在处理，例如溶液制备和喷雾干燥期间可能需要缓冲液来使药物稳定。

可包括于粒子制剂中的碳水化合物的实例包括(但不限于)：单糖(例如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖和山梨糖)、双糖(例如乳糖、蔗糖、海藻糖和纤维二糖)、多糖(例如棉子糖、松三糖、麦芽糊精、葡聚糖和淀粉)和醛醇(非环状多元醇；例如甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇山梨糖醇、吡喃糖基山梨糖醇和肌醇)。适合的碳水化合物包括双糖和/或非还原性糖，例如蔗糖、海藻糖和棉子糖。

可包括于粒子制剂中的抗氧化剂的实例包括(但不限于)：甲硫氨酸、抗坏血酸、硫代硫酸钠、催化酶、铂、乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸、半胱氨酸、硫代甘油、硫代乙醇酸、硫代山梨糖醇、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯和没食子酸丙酯。此外，容易氧化的氨基酸可用作抗氧化剂，例如半胱氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。

可包括于粒子制剂中的氨基酸的实例包括(但不限于)：精氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、组氨酸、丙氨酸、亮氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、L-苏氨酸、2-苯胺、缬氨酸、正缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、酪氨酸、赖氨酸和正亮氨酸。适合的氨基酸包括容易氧化的那些氨基酸，例如半胱氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。

可包括于粒子制剂中的缓冲液的实例包括(但不限于)：柠檬酸盐、组氨酸、丁二酸盐、磷酸盐、顺丁烯二酸盐、tris、乙酸盐、碳水化合物和gly-gly。适合的缓冲液包括柠檬酸盐、组氨酸、丁二酸盐和tris。

可包括于粒子制剂中的无机化合物的实例包括(但不限于)：NaCl、Na₂SO₄、NaHCO₃、KCl、KH₂PO₄、CaCl₂和MgCl₂。

另外，粒子制剂可包括其他稳定剂/赋形剂，例如表面活性剂和盐。表面活性剂的实例包括(但不限于)聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、(BASF Corporation,Mount Olive,N.J.)F68和十二烷基硫酸钠(SDS)。盐的实例包括(但不限于)：氯化钠、氯化钙和氯化镁。

粒子通常经尺寸化使得其可经由可植入渗透递送装置递送。粒子的均匀形状和尺寸通常有助于提供从此类递送装置的一致且均匀的释放速率；然而，还可使用具有非正常粒度分布概况的粒子制备物。例如，在具有递送孔口的典型的可植入渗透递送装置中，粒子的大小比递送孔口直径小约30％，更优选小约20％，更优选小约10％。在用于渗透递送系统的粒子制剂的一个实施方案中，其中植入物的递送孔口直径为约0.5mm，粒径可为例如小于约150微米至约50微米。在用于渗透递送系统的粒子制剂的一个实施方案中，其中植入物的递送孔口直径为约0.1mm，粒度可为例如小于约30微米至约10微米。在一个实施方案中，孔口为约0.25mm(250微米)并且粒度为约2微米至约5微米。

本领域普通技术人员将了解，粒子群体遵循粒度分布的原理。描述粒度分布的广泛使用的本领域中公认的方法包括例如平均直径和D值，例如D50值，其常用于表示给定样品的粒度范围的平均直径。

粒子制剂的粒子具有约2微米至约150微米之间的直径，例如直径小于150微米，直径小于100微米，直径小于50微米，直径小于30微米，直径小于10微米，直径小于5微米，和直径为约2微米。优选地，粒子具有约2微米与约50微米之间的直径。

包含经分离的GLP-1受体激动剂多肽的粒子制剂的粒子具有约0.3微米至约150微米之间的平均直径。包含经分离的GLP-1受体激动剂多肽的粒子制剂的粒子具有约2微米至约150微米之间的平均直径，例如平均直径小于150微米，平均直径小于100微米，平均直径小于50微米，平均直径小于30微米，平均直径小于10微米，平均直径小于5微米，和平均直径为约2微米。在一些实施方案中，粒子具有约0.3微米与50微米之间，例如约2微米与约50微米之间的平均直径。在一些实施方案中，粒子具有0.3微米与50微米之间，例如约2微米与约50微米之间的平均直径，其中每个粒子的直径小于约50微米。

通常，当并入悬浮液媒介物中时，在递送温度下，粒子制剂的粒子在小于约3个月内不会沉降，优选在小于约6个月内不会沉降，更优选在小于约12个月内不会沉降，更优选在小于约24个月内不会沉降，并且最优选在递送温度下在小于约36个月内不会沉降。悬浮液媒介物通常具有约5,000至约30,000泊之间、优选约8,000至约25,000泊之间、更优选约10,000至约20,000泊之间的粘度。在一个实施方案中，悬浮液媒介物具有约15,000泊±约3,000泊的粘度。一般而言，相比于较大粒子，较小粒子往往会在粘稠悬浮液媒介物中具有更低的沉降速率。因此，通常需要微米至纳米大小的粒子。在粘稠悬浮液制剂中，基于模拟建模研究，本发明的约2微米至约7微米的粒子将在室温下至少20年不会沉降。在用于可植入渗透递送装置中的本发明的粒子制剂的一个实施方案中，包含大小小于约50微米、更优选小于约10微米、更优选在约2微米至约7微米范围内的粒子。

总之，所公开的多肽或其药学上可接受的盐经配制成呈固态粒子状的干燥粉末，其保留药物的最大化学和生物稳定性。粒子在高温下提供长期储存稳定性，并且因此允许持续延长的时段向受试者递送稳定和生物学上有效的药物。使粒子悬浮于悬浮液媒介物中以用于向患者施用。

媒介物中的粒子悬浮液

在一个方面，悬浮液媒介物提供药物粒子制剂分散于其中的稳定环境。药物粒子制剂在悬浮液媒介物中是化学上和物理上稳定的(如上文所描述)。悬浮液媒介物通常包含形成使包含药物的粒子均匀地悬浮的足够粘度的溶液的一种或多种聚合物和一种或多种溶剂。悬浮液媒介物可包含其他组分，包括(但不限于)：表面活性剂、抗氧化剂和/或可溶于媒介物中的其他化合物。

悬浮液媒介物的粘度通常足以防止药物粒子制剂在储存和用于例如可植入渗透递送装置中的递送方法中期间沉降。悬浮液媒介物是可生物降解的，因为悬浮液媒介物在一定时段内响应于生物环境崩解或分解，同时药物粒子溶解于生物环境中并且吸收粒子中的活性药物成分(即，药物)。

在实施方案中，悬浮液媒介物为“单相”悬浮液媒介物，其为物理上和化学上始终均匀的固体、半固体或液体均质系统。

聚合物溶解于其中的溶剂可影响悬浮液制剂的特征，例如储存期间药物粒子制剂的状态。可与聚合物组合选择溶剂以使得所得悬浮液媒介物在与水性环境接触后表现出相分离。在本发明的一些实施方案中，可与聚合物组合选择溶剂以使得所得悬浮液媒介物在与具有小于大致约10％水的水性环境接触后表现出相分离。

溶剂可为不可与水混溶的可接受的溶剂。还可选择溶剂以使得聚合物在高浓度下，例如在大于约30％的聚合物浓度下可溶于溶剂中。适用于本发明的实施中的溶剂的实例包括(但不限于)：月桂醇、苯甲酸苯甲酯、苯甲醇、乳酸月桂酯、癸醇(也称为癸基醇)、乳酸乙酯己酯和长链(C8至C24)脂族醇、酯或其混合物。悬浮液媒介物中使用的溶剂可为“干燥的”，因为其具有低水分含量。用于配制悬浮液媒介物的优选溶剂包括乳酸月桂酯、月桂醇、苯甲酸苯甲酯和其混合物。

用于配制本发明的悬浮液媒介物的聚合物的实例包括(但不限于)：聚酯(例如聚乳酸和聚乳酸聚乙醇酸)、包含吡咯烷酮的聚合物(例如具有2,000至约1,000,000范围内的分子量的聚乙烯吡咯烷酮)、不饱和醇的酯或醚(例如乙酸乙烯酯)、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物或其混合物。聚乙烯吡咯烷酮可通过其K值(例如K-17)表征，其为粘度指数。在一个实施方案中，聚合物为具有2,000至1,000,000的分子量的聚乙烯吡咯烷酮。在一个优选实施方案中，聚合物为聚乙烯吡咯烷酮K-17(通常具有7,900-10,800的大致平均分子量范围)。悬浮液媒介物中所使用的聚合物可包括一种或多种不同的聚合物或者可包括不同级别的单一聚合物。悬浮液媒介物中所使用的聚合物也可为干燥的或具有低水分含量。

一般而言，基于所需性能特征，用于本发明中的悬浮液媒介物可在组成上不同。在一个实施方案中，悬浮液媒介物可包含约40wt％至约80wt％的一种或多种聚合物和约20wt％至约60wt％的一种或多种溶剂。悬浮液媒介物的优选实施方案包括由按以下比率组合的一种或多种聚合物和一种或多种溶剂形成的媒介物：约25wt％溶剂和约75wt％聚合物；约50wt％溶剂和约50wt％聚合物；约75wt％溶剂和约25wt％聚合物。因此，在一些实施方案中，悬浮液媒介物可包含所选组分并且在其他实施方案中基本上由所选组分组成。

悬浮液媒介物可表现出牛顿(Newtonian)特性。悬浮液媒介物通常经配制以提供使粒子制剂的均匀分散液维持预定时段的粘度。这帮助促进调整悬浮液制剂以提供含于药物粒子制剂中的药物的受控递送。悬浮液媒介物的粘度可根据所需应用、粒子制剂的大小和类型以及悬浮液媒介物中的粒子制剂的装载量而变化。可通过改变所使用的溶剂或聚合物的类型或相对量来改变悬浮液媒介物的粘度。

悬浮液媒介物可具有约100泊至约1,000,000泊，优选约1,000泊至约100,000泊范围内的粘度。在优选实施方案中，悬浮液媒介物在33℃下通常具有约5,000至约30,000泊之间、优选约8,000至约25,000泊之间、更优选约10,000至约20,000泊之间的粘度。在一个实施方案中，悬浮液媒介物在33℃下具有约15,000泊±约3,000泊的粘度。可在33℃下在10-4/sec的剪切速率下使用平行板流变仪测量粘度。

当与水性环境接触时，悬浮液媒介物可表现出相分离；然而，通常悬浮液媒介物表现出随温度变化基本上无相分离。例如，在约0℃至约70℃范围内的温度下并且在温度循环如4℃至37℃至4℃循环后，悬浮液媒介物通常表现出无相分离。

悬浮液媒介物可通过在干燥条件下，例如在干燥箱中组合聚合物与溶剂来制备。聚合物和溶剂可在高温如约40℃至约70℃下组合，并且使其液化并形成单相。可在真空下掺合成分以去除干燥成分所产生的气泡。可使用设定为大约40rpm的速度的常规混合器，例如双螺旋叶片或类似混合器来组合成分。然而，也可使用更高速度来混合成分。在获得所述成分的液体溶液后，可将悬浮液媒介物冷却至室温。差示扫描量热法(DSC)可用于验证悬浮液媒介物为单相。另外，可处理媒介物(例如溶剂和/或聚合物)的组分以基本上降低或基本上去除过氧化物(例如通过用甲硫氨酸处理；参见例如美国专利申请公开第2007-0027105号)。

将药物粒子制剂添加至悬浮液媒介物中以形成悬浮液制剂。在一些实施方案中，悬浮液制剂可包含药物粒子制剂和悬浮液媒介物，并且在其他实施方案中基本上由药物粒子制剂和悬浮液媒介物组成。

可通过使粒子制剂分散于悬浮液媒介物中来制备悬浮液制剂。可加热悬浮液媒介物并且在干燥条件下将粒子制剂添加至悬浮液媒介物中。可在真空下在高温如约40℃至约70℃下混合成分。可以足够的速度如约40rpm至约120rpm混合成分，并且持续足够量的时间如约15分钟，以获得粒子制剂于悬浮液媒介物中的均匀分散液。混合器可为双螺旋叶片或其他适合的混合器。可从混合器去除所得混合物，密封于干燥容器中以防止水污染悬浮液制剂，并且在进一步使用，例如装载至可植入药物递送装置、单位剂量容器或多剂量容器中之前使其冷却至室温。

悬浮液制剂通常具有小于约10wt％、优选小于约5wt％并且更优选小于约4wt％的总体水分含量。

在优选实施方案中，本发明的悬浮液制剂是基本上均质并且可流动的以提供从渗透递送装置向受试者递送药物粒子制剂。

总之，悬浮液媒介物的组分提供生物相容性。悬浮液媒介物的组分提供适合的化学物理特性以形成药物粒子制剂的稳定悬浮液。这些特性包括(但不限于)以下：悬浮液的粘度；媒介物的纯度；媒介物的残余水分；媒介物的密度；与干燥粉末的相容性；与可植入装置的相容性；聚合物的分子量；媒介物的稳定性；以及媒介物的疏水性和亲水性。可例如通过媒介物组合物的变化和悬浮液媒介物中使用的组分比率的操作来操作和控制这些特性。

本文所描述的悬浮液制剂可用于可植入渗透递送装置中以在延长时段内，例如在数周、数月或长达约一年或更长时间内提供化合物的零级、连续、受控和持续的递送。此类可植入渗透递送装置通常能够在所需时段内以所需流动速率递送包含药物的悬浮液制剂。悬浮液制剂可通过常规技术装载至可植入渗透递送装置中。

实施例

提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供如何实践本发明的完整公开内容和描述，并且并不旨在限制本发明人视作其发明的范围。已努力确保关于所用数量(例如量、浓度和百分比变化)的精确度，但应考虑存在一些实验误差和偏差。除非另外指示，否则温度是摄氏度，并且压力为大气压或接近大气压。

实施例1：长效GLP-1受体激动剂多肽的产生

在Prelude肽合成器(Protein Technologies Inc.,Tucson,AZ))上通过固相方法使用Fmoc策略与N-[(二甲基氨基)-1H-1,2,3-三唑并-[4,5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物(HATU)或2-(6-氯-1-H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基铵六氟磷酸盐(HCTU)活化(相对于氨基酸5倍摩尔过量)，在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中合成如表4中所提供的本发明的长效GLP-1受体激动剂多肽，并且N'N-二异丙基乙胺(DIEA)用作碱。20％哌啶/DMF溶液用于Fmoc脱保护。所使用的树脂为Rink Amide MBHA LL(Novabiochem)，在(20-400)μmol标度上装载量为(0.30-0.40)mmol/g。

在完成线性多肽的固相合成后，用二氯甲烷(DCM)洗涤树脂，并且在真空下干燥30分钟。对于含有烯丙氧基羰基(Alloc)保护基的类似物，经由Pd(PPh₃)₃于(三氯甲烷/乙酸/N-甲基-吗啉，37:2:1)中的溶液实现去除。对于含有叔丁氧基羰基(BOC)-Lys-芴基甲基氧羰基(Fmoc)-OH的类似物，使用20％哌啶/DMF去除Fmoc保护基。用DMF(6×30秒)洗涤所得Fmoc脱保护树脂。接着，以逐步方式在预活化条件下用手动添加各结构单元进行间隔基区的延伸。在不具有预活化步骤的固相肽合成(SPPS)条件下进行亲脂性取代基(也称为“酰基链”)的添加。通过用(95％ TFA、2％水、2％硫代苯甲醚和1％三异丙基硅烷)处理树脂2-3小时来进行肽从固体支撑物的最终脱保护和裂解。使用冷二乙醚使裂解肽沉淀。倾析二乙醚层，并且固体再次用冷二乙醚湿磨并通过离心形成团粒。

对于含有内酰胺桥的类似物，适当的经烯丙基保护的氨基酸结构单元安装在如上所描述的正常固相条件下。此外，将Fmoc-Lys-ε-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)-3-甲基丁基(ivDde)-OH安装为控点以稍后并入酰基间隔基和侧链。在完成线性肽后，如上文所描述去除烯丙基保护基。使用苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP，.5M)活化和DIEA作为碱经由固相方案得到内酰胺桥形成。Fmoc和ivDde基团脱保护是经由肼于DMF中的4％溶液得到。用DMF(6×30秒)洗涤所得脱保护树脂。间隔基区的延伸和亲脂性取代基的添加如前述段落中所描述进行。通过用(95％ TFA、2％水、2％硫代苯甲醚和1％三异丙基硅烷)处理树脂2-3小时来进行肽从固体支撑物的最终脱保护和裂解。使用冷二乙醚使裂解肽沉淀。倾析二乙醚，并且固体再次用冷二乙醚湿磨并通过离心形成团粒。

接着使粗产物溶解于乙腈(ACN)/H₂O，0.1％ TFA的溶液中。将10％乙酸溶液添加至每个粗肽产物溶液中并使其搅拌，直至经由LC/MS的分析指示去除任何CO₂加合物。将溶液冷冻并冻干。经由实施例2中所描述的方法得到纯化。

实施例2：长效GLP-1受体激动剂多肽，即不具有任何亲脂性取代基和任选的间隔基的线性多肽的纯化和表征

将实施例1的产物冻干并通过电喷雾电离-液相色谱/质谱(ESI-LC/MS)和分析型高压液相色谱(HPLC)来分析，并且证实其为纯的(>98％)。质量结果与计算值一致。

经由C18 HPLC和LC/MS分析(Acquity SQD Waters Corp,Milford,MA)和通过使用方法A、方法B、方法C或方法D中的一者在215nm和280nm处的双重吸光度信号提供的UV检测进行肽类似物的表征。

方法A，LC/MS条件：使用Phenomenex HPLC Aeris^TM肽XB C1835柱，1.7pm，2.1×100mm或Acquity BEH300或BEH130 CT8柱，1.77pm，2.1×100mm，使用5％-65％乙腈/水与0.05％ TFA，在30分钟内，以流动速率0.5mL/min，λ-215nm，280nm进行。

方法B，C18 HPLC条件：在Acquity BEH130，C18柱，1.7μm，100×2.10mm柱上在25℃下，5％-65％乙腈/水与0.05％ TFA，在30分钟内，流动速率0.5mL/min，λ-215nm，280nm进行HPLC分析。

方法C，HPLC条件：在Acquity BEH130，C18柱，1.7μm，100×2.10mm柱上在25℃下，5％-65％乙腈/水与0.05％ TFA，在20分钟内，流动速率0.5mL/min，λ-215nm，280nm进行HPLC分析。

方法D，HPLC条件：在Acquity BEH130，C18柱，1.7μm，100×2.10mm柱上在25℃下，5％-65％乙腈/水与0.05％ TFA，在10分钟内，流动速率0.5mL/min，λ-215nm，280nm进行HPLC分析。使用PLNO(具有针溢出的部分环)注射模式注射5.0μL样品。

表10提供本公开的示例性长效GLP-1受体激动剂多肽。

不具有亲脂性取代基和任选的间隔基的多肽类似物有时在本文中称为“线性多肽”。具有至少一个共价结合的亲脂性取代基和任选的间隔基的多肽类似物有时在本文中称为“偶联多肽”。

表10：示例性化合物：GLP-1受体激动剂多肽

实施例3：长效GLP-1受体激动剂多肽的稳定性

测试本文所描述的若干长效GLP-1受体激动剂多肽作为三氟乙酸盐在DMSO(即，有机硫溶剂)中或在1mg/ml水溶液中(即，在DI水中)的稳定性。在37℃下温育这些类似物多肽，并且以不同时间间隔抽出样品并通过LC/MS和HPLC分析以测定亲本肽的纯度和质量以及任何降解产物的程度。这些分析的纯度结果示于表11中并且考虑指示稳定性。

表11：长效GLP-1受体激动剂多肽的稳定性

(c)＝混浊，(p)＝粒子

“-”＝未测定

实施例4：长效GLP-1受体激动剂多肽的溶解度

测试本文所述的某些长效GLP-1受体激动剂多肽在盐水或DI水中在室温下的溶解度。目视检查样品的样品清晰度，以及浑浊度或浊度的任何外观。这些分析的结果示于表12中。

表12：长效GLP-1受体激动剂多肽的溶解度

实施例5：长效GLP-1受体激动剂多肽的功能测定：人类和大鼠受体(GLP-1R)

人类和大鼠GLP-1受体(GLP-1R)的活化引起细胞环单磷酸腺苷(cAMP)增加。在非特异性cAMP/cGMP磷酸二酯酶抑制剂3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)存在下，可使用常见检测方法体外测量积聚cAMP。因此，有可能使用cAMP积聚的拟合剂量反应曲线估算肽激活这些受体中的每一者的体外效力(pEC50)。

细胞处理和cAMP积聚测定

使稳定表达人类GLP-1R的CHO-K1细胞(Genebank登录号NM_002062)生长于补充有10％ FBS和250μg/ml G418的90％ F12-K培养基中。对于大鼠GLP-1R表达，将编码大鼠GLP-1R的全长开放阅读框的cDNA片段(Genebank登录号NM 012728)亚克隆至表达载体pcDNA3.1+中以使得瞬时受体能够表达于CHO-K1细胞中。

在第1天，将CHO-K1细胞以每T75烧瓶1.5百万个细胞接种于补充有10％ FBS的90％ F12-K培养基中。在第3天，使用脂染胺2000转染试剂用40mcg大鼠GLP1R表达质粒来转染细胞。在第5天，人类或大鼠GLP-1R表达细胞以1000个细胞/孔在5mcL测定缓冲液中施配于白色384孔OptiPlates中，所述测定缓冲液由1X HBSS、5mM HEPES、0.5mM IBMX和0.1％酪蛋白组成。

肽在测定缓冲液中连续稀释4倍至在1×10^-9M至9.5×10^-16M范围内的最终浓度。还制备了由50mcM毛喉素(cAMP系统最大值)或仅测定缓冲液(cAMP系统最小值)组成的两种测定对照。将五微升的每个肽浓度或测定对照添加至一式三份孔中并在室温下温育三十分钟。在此温育步骤期间，根据制造商方案(PerkinElmer LANCE Ultra cAMP试剂盒)制备经4x铕标记的cAMP示踪剂溶液和4x -抗cAMP溶液(由经Ulight^TM染料标记的抗cAMP单克隆抗体组成)。在此温育后，将5mcL经铕标记的cAMP和5mcL Ulight抗cAMP抗体添加至每个孔中。将板封盖以防止蒸发并在室温下在暗处温育60分钟。在Envision荧光板读取器(PerkinElmer)上读板。

数据分析

在Excel中使用下式将测试值首先相对于系统最大平均值和系统最小平均值归一化：(测试值-系统最小平均值)/(系统最大平均值-系统最小平均值)*100。归一化测试值表示由毛喉素诱导的系统最大cAMP反应的基线校正百分比。针对每个肽分析来自至多3次重复测试的数据。效力值是使用GraphPad Prism软件(v7.04)通过拟合数据至4参数逻辑斯蒂(logistic)曲线模型评估：Y＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((LogEC50-X)))。希尔斜率(Hillslope)限定至1.0。使用下式将EC50值转化成pEC50值：pEC50＝-Log(EC50)。平均pEC50值和95％置信区间报告于表13中。

表13：hGLP-1R和rGLP-1R的平均pEC50值

“-”＝未测定

实施例6：长效GLP-1受体激动剂多肽的静脉内输注∶评估多肽的静脉内药物动力学的研究

使肽溶解于磷酸盐缓冲盐水中的0.05％ Tween-20中并经由股静脉导管按0.033mg/kg的最终剂量以1小时静脉内输注形式施用至未禁食雄性史泊格多利大鼠(Sprague-Dawley rats)(n＝3/组)。以1.67mL/kg/h的速率施用制剂。经由颈静脉导管在输注开始后0.25、0.5、0.75、1、1.17、1.33、1.5、2、4、8、24、48、72和96小时采集血液样品(大约250μL)至含有K₂EDTA作为抗凝血剂和25μL蛋白酶抑制剂混合液的微量采血管中以用于药物动力学分析。通过离心制备血浆并储存于-80℃下直至分析。此分析结果示于表14中。

实施例7：长效GLP-1受体激动剂多肽的皮下推注：评估多肽的生物可用性的研究

使肽溶解于磷酸盐缓冲盐水中的0.05％ Tween-20中并经由单次推注以0.100mg/kg的剂量施用至未禁食雄性史泊格多利大鼠(n＝3/组)的肩胛骨之间的皮下空间中。经由颈静脉导管在给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24、48、72和96小时采集血液样品(大约250μL)至含有K₂EDTA作为抗凝血剂和25μL蛋白酶抑制剂混合液的微量采血管中以用于药物动力学分析。通过离心制备血浆并储存于-80℃下直至分析。此分析结果也示于表14中。

表14：药物动力学分析

化合物编号	CL mg/min/Kg	T_1/2(IV)hr	％F(SC推注)
				A120	0.054	15.8	92.9
A55	0.054	14.7	62.6
				A115	0.058	16.7	63.4
A132	0.048	9.7	41.7
				A77	0.086	12.9	55.7
A108	0.061	13.7	58.6
				A134	0.108	7.91	45.3
A45	0.054	13.3	24.0
				A139	0.092	20.9	58.1
A114	0.061	16.0	44.2
				A112	0.041	10.8	39.5
A46	0.057	17.0	23.0
				A54	0.057	15.6	58.4
A78	0.077	11.0	52.1
				A111	0.075	13.6	59.9
A6	0.148	9.81	45.0
				A68	0.100	17.1	75.2
A107	0.165	13.5	-
				A89	0.102	13.5	-
A94	0.060	20.3	-
				A70	0.092	18.4	-
A103	0.131	16.8	-
				A71	0.098	18.5	-
A147	0.056	18.3	-
				A74	0.152	8.04	-

“-”＝未测定

实施例8：用于药物动力学研究的血浆样品制备的方法

蛋白质沉淀

将每个血浆样品的60μL等分试样放置于Impact Protein Precipitation 96孔过滤板(Phenomenex，Torrance,CA)中。向每个孔中添加6μL 0.5％ Tween-20。然后将板在1200rpm下涡旋混合10分钟，之后将含有适当内标物的180μL 0.1％ TFA/2:1乙醇:乙腈添加至每个孔中。将板在1400rpm下涡旋混合5分钟，然后在500x g下离心10分钟。在氮气流下在45℃下蒸发滤液。在含有0.1％甲酸的80μL 20％乙腈(水溶液)中重构残余物。

实施例9：血浆中长效GLP-1受体激动剂多肽的LC/MS定量

所有校准标准物在含有K₂EDTA和蛋白酶抑制剂混合液的对照大鼠血浆中制备。

通过TurboIonSpray^TMUPLC-MS/MS，使用由CTC HTS PAL自动注射器(Leap,Carrboro,NC)、具有柱式烘箱的Agilent Infinity 1290系统(Palo Alto,CA)、Valco切换阀门(Houston,TX)和AB Sciex API 5600TripleTOF^TM或Sciex API 4000QTrap质谱仪(Framingham,MA)组成的系统分析样品和标准物。将样品注射于2.1×50mm反相C18分析型柱，通常Waters CORTECS UPLC C18+，1.6μm(Waters Corporation,Milford,MA)或类似柱上。用梯度方法，使用含有0.1％甲酸的水(A)和含有0.1％甲酸的乙腈(B)作为流动相实现色谱分离。初始条件由90％ A和10％ B组成。有机组分在2-3分钟的时段内提高至95％ B，这取决于肽而定。典型的流动速率为600μL/min。柱温在50℃下保持恒定。通过监测由多重带电母体离子产生的一种或多种产物离子对肽进行定量。

实施例10：大鼠中长效GLP-1受体激动剂多肽对食物摄入抑制的体内功效

使用BioDAQ食物监测系统(Research Diets,New Brunswick,NJ)连续地测量急性食物摄入持续96小时时段以测定这些长效GLP-1受体激动剂多肽所表现出的食物摄入抑制的量。获得约8周龄的Long Evans大鼠。将大鼠单独圈养并且在给药之前适应45％高脂饮食持续至少2周。在1周适应后，将所有大鼠单独圈养于BioDAQ笼具中(Research Diets,NewBrunswick,NJ)并以12小时明/暗循环(从5:00AM至5:00PM亮灯)维持在恒温(约22℃)和30-70％相对湿度下。使大鼠随意获取水和颗粒饲料(Research Diets D12451i，45kcal％脂肪，Research Diets,New Brunswick,NJ)。所有程序依照动物福利法(Animal WelfareAct)USDA规定进行并且经Mispro机构动物护理和使用委员会(Mispro InstitutionalAnimal Care and Use Committee)批准。根据体重(n＝8只大鼠/组)，将动物随机分至处理组中。将动物用长效GLP-1受体激动剂多肽(30mcg/kg)或媒介物对照(盐水)给药(SC推注)并且在熄灯之前的4:30与5:00之间给药，在向动物给药时对料斗进行闸控。打开料斗闸门并且给药完成后立即开始连续数据收集。最初使用BioDAQ Viewer软件(2.3.07版本)分析数据并且在需要时，设定bout过滤器以降低与非馈入行为相关的数据噪声。所有数据表示为相比于媒介物对照的抑制％并概述为平均值。用Microsoft Excel(Redmond,WA)通过2样品t-检验分析数据的统计学显著性。P值<0.05被视为指示处理组之间的显著差异。长效GLP-1受体激动剂多肽相比于媒介物对照的急性食物摄入抑制％结果示于表15中。

表15：在LA GLP-1类似物多肽的推注SC给药后大鼠中的急性食物摄入抑制％。

加粗＝P<0.05，相对于媒介物

实施例11：在长效GLP-1受体激动剂多肽的推注SC给药后LE大鼠中对体重变化的体内功效。

在实施例11中对用于测量食物摄入的相同LE大鼠测量体重以研究在推注SC给药(30mcg/kg)后长效GLP-1受体激动剂多肽对体重减轻的功效和持久性。在Excel和/或Prism(GraphPad Software,Inc.,La Jolla,CA)中使用单向ANOVA比较每个组与适当对照组来分析数据。P值<0.05被视为指示处理组之间的显著差异。来自食物摄入研究的相对于基线和媒介物对照的平均体重减轻(％)(ΔΔ％)示于表16中。

表16：来自食物摄入的相对于基线和媒介物对照的平均体重减轻(％)(ΔΔ％)

“-”未测量；加粗＝P<0.05，相对于媒介物

实施例12：LE DIO大鼠中长效GLP-1受体激动剂多肽的体重减轻功效

在肥胖Long Evans(LE)饮食诱发的肥胖(DIO)大鼠的啮齿动物模型中进行体重减轻功效研究以研究在推注皮下(SC)给药后长效GLP-1受体激动剂多肽的功效和持久性。使用雄性LE DIO大鼠(Envigo Laboratories,Inc.,Indianapolis,IN)并且在断奶开始，大鼠摄食高脂饲料(Teklad TD 95217,40％kcal脂肪,Harlan Laboratories,Madison,WI)。在研究开始时大鼠为15-17周龄。每个笼子圈养1只大鼠并且使其随意获取高脂饮食(HarlanTD.95217，4.3kcal/g)和水，在21℃和50％相对湿度下维持从5:00AM至5:00PM的12小时明/暗循环，并且在使用之前使其适应至少10天。通过SC推注向18周龄的雄性LE DIO大鼠(14周高脂饮食)给与长效GLP-1受体激动剂多肽(30mcg/kg；n＝6只动物/处理组)。所有其他程序与针对先前实施例所描述相同。相对于基线和媒介物对照的平均体重减轻(％)(ΔΔ％)结果示于表17中。

表17：相对于基线和媒介物对照的平均体重减轻(％)(ΔΔ％)

“-”未测量；加粗＝P<0.05，相对于媒介物

实施例13：LE DIO大鼠中长效GLP-1受体激动剂多肽对食物摄入的功效

在实施例13中对用于测量体重的相同LE DIO大鼠测量食物摄入以研究在SC推注给药(30mcg/kg)后长效GLP-1受体激动剂多肽对食物摄入抑制的功效和持久性。每日测量食物料斗重量。所有其他程序与针对先前实施例所描述相同。相对于媒介物对照的平均食物摄入减少(％)(ΔΔ％)的结果示于表18中。

表18：相对于媒介物对照的平均食物摄入减少(％)(ΔΔ％)的结果

加粗＝P<0.05，相对于媒介物

实施例14：LE DIO大鼠中长效GLP-1受体激动剂多肽的慢性体重减轻功效

进行慢性研究来测定LE DIO大鼠中27天处理后长效GLP-1受体激动剂多肽的连续施用对体重的作用和持久性。与针对实施例13所述相同，治疗18周龄的雄性LE DIO大鼠(14周高脂饮食)。在药物处理开始之前(第-9天)和第27天，对大鼠进行称重并且按制造商方案使用定量磁共振(QMR)(Echo Medical Systems，Houston,TX)进行脂肪量和非脂肪量身体组成测量。在整个研究中测量体重。将大鼠随机分至处理组(n＝8只/组)中，其中平均体重和脂肪量相似。LE DIO大鼠每隔一天(eod)用长效GLP-1受体激动剂多肽或媒介物(盐水)通过SC注射给药。所有其他程序都与针对先前实施例所描述相同。相对于基线和媒介物对照的平均体重减轻(％)(ΔΔ％)结果示于图1和表19中。

实施例15：ZDF大鼠中长效GLP-1受体激动剂多肽的慢性抗糖尿病功效

进行慢性研究以测定Zucker糖尿病脂肪(ZDF)大鼠中处理27天后连续施用长效GLP-1受体激动剂多肽对HbA1c(一级抗糖尿病参数)的抗糖尿病效果。获得六(6)周龄雄性ZDF大鼠(Charles River,Raleigh,NC)并且在八(8)周龄时用于研究。在接收后，以每个笼子一只动物圈养大鼠，使其自由获取Purina 5008饲料(Lab Diet,St.Louis,MO)和水，在21℃和50％相对湿度下维持从5:00AM至5:00PM的12小时明/暗循环，并且在研究开始前使其适应九(9)天。经由尾静脉获取血液样品作为前血(第-3天)以测量葡萄糖水平和HbA1c。将ZDF大鼠随机分至处理组(n＝9-10只/组)中，其中平均HbA1c和葡萄糖相似。长效GLP-1受体激动剂多肽每隔一天(eod)通过SC注射给药。在第14天和第27天(研究结束)再次获取血液样品以测量葡萄糖水平和HbA1c。通过心脏穿刺在异氟烷麻醉下采集最终全血样品(第27天)。通过使用Carolina Chemistries CLC720i临床化学分析器(Mindray Inc.,Mahwah,NY)，利用如制造商所描述的方案和方法参数进行HbA1c分析。表示为相对于基线和媒介物对照的平均％(ΔΔ％)的HbA1c结果示于表19中。

表19：用长效GLP-1受体激动剂多肽治疗的大鼠的体重减轻和HbA1c变化的概述

“-”＝未测定；加粗＝P<0.05，相对于媒介物；*ED₅₀时的％

实施例16：ZDF大鼠中GLP-1受体激动剂多肽的比较性体重减轻和抗糖尿病效力

在一个实施方案中，GLP-1受体激动剂多肽可经由可植入药物递送装置向患者施用。Medici Drug DeliverySystem^TM(Intarcia Therapeutics,Boston,MA)包含渗透药物递送微型泵(图3中所示)，其用于皮下放置在患者中，以提供在长时段(例如3、6、12、18或24个月等)以连续速率皮下递送药物。图3的渗透药物递送微型泵为44mm长和4mm直径。其包括具有受限体积的药物储集器。因此，高体内效力对于适合经由此微型泵递送的药物是必需的。

测试本发明的代表性长效GLP-1受体激动剂(A120)在DIO大鼠中的体重减轻和2型糖尿病的体内效力并且针对索马鲁肽(Novo Nordisk A/S Denmark)比较效力。图2A显示两种化合物在DIO大鼠中的比较性体内体重减轻效力(在28天内基线相对于媒介物％，n＝6/剂量)。图2B显示两种化合物在DIO大鼠中的比较性体内2型糖尿病效力(即降低HbA1c)(在28天内相对于媒介物的Δ-HbA1c，n＝9/剂量)。针对2型糖尿病的ZDF大鼠模型比较抗糖尿病效力。

发现化合物A120对于体重减轻的效力比索马鲁肽大约2.3倍，并且对于HbA1c降低的效力比索马鲁肽大约2.6倍。当针对同源药物动力学参数加以调节时，化合物A120的人类效力预计为索马鲁肽的约3.1倍。

实施例17：GLP-1受体激动剂的体外代谢稳定性药物动力学研究(T1/2)

大鼠和人类肾脏刷状缘膜

肾脏刷状缘膜(kBBM)制剂中的体外温育用于表征肽在全身循环中抵抗蛋白酶和肽酶降解的能力。选择kBBM是因为它们含有高浓度的不同组的蛋白酶和肽酶，其中许多蛋白酶和肽酶存在于整个身体中。通常，具有低体内CL的肽在此测定中是稳定的，而具有高体内CL的肽在此测定中是不稳定的。

经由离心制备大鼠和人类肾脏组织的刷状缘膜并且将其储存在-70℃。将大鼠或人类kBBM的解冻储备液在含有1％酪蛋白的25mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中稀释至适当浓度并等分至96孔板中。将kBBM溶液在37℃下预温热10分钟。通过添加也溶解于含有1％酪蛋白的25mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中的测试肽(1mcM最终浓度)来起始反应。每个温育中的kBBM的最终浓度为50mcg蛋白质/mL。在37℃下将反应物维持于振荡水浴中。在起始后0、0.25、0.5、1.0、2.0和4.0小时，去除30mcL的反应混合物并且放置于含有120mcL冰冷甲醇(含有2.5％甲酸)的96孔板中。将淬灭样品以2178×g离心10分钟，然后将一部分上清液转移至干净的96孔板中并用水1:1稀释。通过UPLC-MS/MS分析样品。化合物A120(SEQ ID NO:120)的此分析结果示于表20中。

人类皮下组织匀浆

皮下(SC)组织匀浆中的体外温育用于表征肽在SC施用后抵抗蛋白酶和肽酶全身前降解的能力。体内非临床研究已显示SC空间中的肽酶活性可在SC施用后限制肽的生物可用性。具有高SC生物可用性的肽在此测定中是稳定的，而具有低SC生物可用性的肽在此测定中是不稳定的。

人类SC组织在冷的25mM HEPES缓冲液(pH 7.4，以样品重量计10倍体积)中均质化，然后通过双层纱布过滤。将滤液等分，在甲醇/干冰浴上快速冷冻并储存于-80℃。使用BCA蛋白质测定确定每个合并批次的蛋白质浓度。将人类SC组织匀浆的解冻储备液在25mMHEPES缓冲液(pH 7.4)中稀释至1.0mg蛋白质/mL并等分至96孔板中。将稀释的SC匀浆在37℃下预温热10分钟。通过添加也溶解于25mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中的测试肽(10mcM最终浓度)来起始反应。在37℃下将反应物维持于振荡水浴中。在起始后0、0.25、0.5、1.0、2.0和4.0小时，去除50mcL的反应混合物并放置于含有150mcL冰冷的甲醇(含有2.5％甲酸)的96孔板中。将淬灭样品以2178×g离心10分钟，然后将一部分上清液转移至干净的96孔板中并用水1:10稀释。通过UPLC-MS/MS分析样品。化合物A120(SEQ ID NO:120)的此分析结果示于表20中。

血浆中的未结合部分(f_u)

测量血浆蛋白质结合的常规方法(例如平衡透析、超滤和超速离心)对肽来说并不可靠，因为其倾向于吸附至塑料管、透析膜和分子量截止过滤器的表面。因此，使用表面等离子体共振(SPR)评价酰化肽与血清白蛋白结合的程度。此技术提供与血浆蛋白质结合的药物部分的合理估算的效用已在文献中得到证实。化合物A120(SEQ ID NO:120)的此分析结果示于表20中。基于此数据，化合物A120在人类中的估计半衰期为约6天。

表20：GLP-1受体激动剂化合物A120的代谢稳定性药物动力学和未结合部分

实施例18：大鼠和猴模型中化合物A120的体内药物动力学参数

在静脉内输注、皮下推注或皮下输注化合物之后测定化合物A120在大鼠和猴模型中的药物动力学概况。这些分析的结果呈现于表21中。

表21：大鼠和猴模型中化合物A120的药物动力学和ADME概况

“-”＝未测定；数据以平均值示出；T_max提供的中值

实施例19：长效GLP-1受体激动剂的白蛋白结合

偶联GLP-1受体激动剂的效力变化可见于表22中。在各种浓度的人类血清白蛋白(HSA)存在下针对GLP-1(7-36)、索马鲁肽、艾塞那肽和化合物A120中的每一者对GLP-1受体使用cAMP聚集测定获得数据。此分析的结果也呈现于图4中。

表22：各种GLP-1受体激动剂在人类血清白蛋白存在下的pEC₅₀值

	0％HSA	0.1％HSA	4％HSA
				GLP-1(7-36)	12.1	-	-
索马鲁肽	11.6	10.3	9.24
				艾塞那肽	12.2	12.2	12.1
化合物A120	12.1*	10.8	9.60

“-”＝未测定；*与索马鲁肽相比时显著不同(p<0.01)

实施例20：长效GLP-1受体激动剂跨越物种的效力

针对GLP-1受体(GLP-1R)、胰高血糖素受体(GCGR)和胃抑制剂多肽受体(GIPR)的人类(h)、食蟹猴(c)和大鼠(r)直系同源物测定GLP-1(7-36)、索马鲁肽、艾塞那肽和化合物A120的效力。经由cAMP聚集测定获得值。这些分析的结果呈现于表23中。

表23经由cAMP聚集测定确定的各种GLP-1受体激动剂针对人类、食蟹猴和大鼠GLP-1受体、胰高血糖素受体和胃抑制剂多肽受体的活性(作为pEC₅₀值)

“-”＝未测定

数据指示，化合物A120跨三种相关物种针对GLP-1R始终有效，并且所述化合物相对于GCGR和GIPR对GLP-1R具有高度选择性。

实施例21：化合物A120针对索马鲁肽的比较数据

表24：化合物A120和索马鲁肽针对所需度量的所选数据的比较

*溶解度＝水/盐水；**稳定性＝在37℃(1mg/mL)下30天；NA＝高度混浊/无法经由HPLC评估稳定性

表25：化合物A120和索马鲁肽针对所需度量的体内效力和功效数据的比较

*在第27天DIO大鼠的体重减少ΔΔ％；**在第27天ZDF大鼠中HbA1c的ΔΔ％变化

其他实施方案

虽然本发明已结合其具体实施方式描述，但前述描述旨在说明而非限制由所附权利要求范围限定的本发明的范围。其他方面、优点和修改属于所附权利要求的范围内。

Claims

1.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列：

X₂为A、2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₃为E或N-甲基Glu；

X₆为F或Y；

X₇为S或T；

X₈为二氨基庚二酸(Dap)、E、K、N、N-甲基Ser、Q、S、s或Y；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L、N-甲基Leu或V；

X₁₂为E、K、Q或S；

X₁₃为Aib、E、K、Q、S、W或Y；

X₁₄为E、R、I、K、L、M、Q或Y；

X₁₆为2,4-二氨基丁酸(Dab)、Dap、E、K、k或鸟氨酸(Orn)；

X₁₇为E、K或Q；

X₁₈为A、K、S或Y；

X₁₉为A、K或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为Aib、E、H、K、L、Q或Y；

X₂₄为A、Aib、E、K、Q、S或Y；

X₂₈为D、E、K、N、Q、S或Y；并且

X₃₂为Dap、H、K、R或S；

其中当X₁₆为Dab、Dap、K或Orn时，其任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基；

2.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列：

HX₂X₃GTX₆X₇X₈X₉X₁₀SX₁₂X₁₃YEX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLK X₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQID NO:201)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为A、2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₃为E或N-甲基Glu；

X₆为F或Y；

X₇为S或T；

X₈为二氨基庚二酸(Dap)、E、K、N、N-甲基Ser、Q、S、s或Y；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L、N-甲基Leu或V；

X₁₂为E、K、Q或S；

X₁₃为Aib、E、K、Q、S、W或Y；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₇为E、K或Q；

X₁₈为A、K、S或Y；

X₁₉为A、K或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为Aib、E、H、K、L、Q或Y；

X₂₄为A、Aib、E、K、Q、S或Y；

X₂₈为D、E、K、N、Q、S或Y；并且

X₃₂为Dap、H、K、R或S；

3.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈X₉X₁₀SX₁₂QX₁₄EX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ IDNO:202)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E或K；

X₁₄为M或Y；

X₁₆为Dap、E或K；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为E、K、N或Q；并且

X₃₂为H或S；

4.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈X₉X₁₀SX₁₂QYEX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ IDNO:203)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₉为D或E；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E或K；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为E、K、N或Q；并且

X₃₂为H或S；

5.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SX₁₂QX₁₄EX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ IDNO:204)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E、K或Q；

X₁₄为M或Y；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为N或Q；并且

X₃₂为H或S；

6.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SX₁₂QYEX₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GG PX₃₂SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ IDNO:205)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₂为E、K或Q；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₇为E或K；

X₁₈为A或Y；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；

X₂₈为N或Q；并且

X₃₂为H或S；

7.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SKQX₁₄EX₁₆EAX₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPS SGAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:206)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₄为M或Y；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；并且

X₂₈为N或Q；

8.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:207的氨基酸序列：

HX₂EGTFTX₈DX₁₀SKQYEX₁₆EAX₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKX₂₈GGPSS GAPPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:207)或其药学上可接受的盐，其中：

X₂为2-氨基异丁酸(Aib)或G；

X₈为N或S；

X₁₀为I、L或V；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为E、K、L或Q；

X₂₄为E、K或S；并且

X₂₈为N或Q；

9.一种经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列：

HAibEGTFTSDX₁₀SKQYEX₁₆EAX₁₉X₂₀X₂₁FIX₂₄WLKNGGPSSG APPPS-(OH/NH₂)(SEQ ID NO:208)或其药学上可接受的盐，其中：

X₁₀为L或V；

X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K；

X₁₉为A或V；

X₂₀为E、K或R；

X₂₁为K或Q；

X₂₄为E、K或S；并且

10.如权利要求1、3或5中任一项所述的经分离的多肽，其中如果X₁₄为M，则X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的K。

11.如权利要求1或3中任一项所述的经分离的多肽，其中如果X₁₆为E，则X₂₁为K或E。

12.如权利要求1、3、5或7中任一项所述的经分离的多肽，其中X₁₄为Y。

13.如权利要求1、3或5中任一项所述的经分离的多肽，其中X₁₆为任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的赖氨酸。

14.如权利要求5-9中任一项所述的经分离的多肽，其中如果X₂₄为S，则X₁₀为V。

15.如权利要求1-9中任一项所述的经分离的多肽，其中所述肽还包含经由分别在位置X₂₀和X₂₄处的赖氨酸和谷氨酸的所述侧链之间的酰胺键形成的内酰胺桥。

16.如权利要求1-15中任一项所述的经分离的多肽，其中X₂为Aib。

17.如权利要求1-16中任一项所述的经分离的多肽，其中所述亲脂性取代基在所述经分离的多肽的氨基与所述亲脂性取代基的CO-基团之间形成酰胺键。

18.如权利要求17所述的经分离的多肽，其中所述亲脂性取代基具有式I：

-CO-(CH₂)_m-Z

式I

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；并且

m为4至24。

19.如权利要求18所述的经分离的多肽，其中Z为-CO₂H。

20.如权利要求18所述的经分离的多肽，其中m为14至20。

21.如权利要求1-16中任一项所述的经分离的多肽，其中所述亲脂性取代基经由间隔基共价结合至所述经分离的多肽。

22.如权利要求21所述的经分离的多肽，其中所述亲脂性取代基-CO-(CH₂)_m-Z经由所述间隔基连接至经分离的多肽的氨基，其中所述间隔基在所述经分离的多肽的所述氨基与所述亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。

23.如权利要求21或权利要求22所述的经分离的多肽，其中所述亲脂性取代基和间隔基具有式II：

-(Y)_n-CO-(CH₂)_m-Z

式II

其中，

Y选自由γGlu、Asp、Lys和Gly组成的组；

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；并且

n为1至10。

24.如权利要求23所述的经分离的多肽，其中Z为-CO₂H。

25.如权利要求23所述的经分离的多肽，其中m为14至20。

26.如权利要求23所述的经分离的多肽，其中Y为γGlu。

27.如权利要求23所述的经分离的多肽，其中n为1至5。

28.如权利要求21或权利要求22所述的经分离的多肽，其中所述亲脂性取代基和间隔基具有式III：

-(V)_r-(Y)_n-CO-(CH₂)_m-Z

式III

其中，

V为-[COCH₂(OCH₂CH₂)_tNH]-

Y选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；

n为1至10；

r为1至6；并且

t为1至6。

29.如权利要求28所述的经分离的多肽，其中Z为-CO₂H。

30.如权利要求28所述的经分离的多肽，其中m为14至20。

31.如权利要求28所述的经分离的多肽，其中Y为γGlu。

32.如权利要求28所述的经分离的多肽，其中n为1至5。

33.如权利要求28所述的经分离的多肽，其中r为1至3。

34.如权利要求28所述的经分离的多肽，其中t为1至3。

35.如权利要求28所述的经分离的多肽，其中：

Y为γGlu；

Z为-CO₂H；

m为16；

n为1；

r为2；并且

t为2。

36.如权利要求21或权利要求22所述的经分离的多肽，其中所述亲脂性取代基和间隔基具有式IV：

-(Y1)_n1-(dpeg)_r-(Y2)_n2-CO-(CH₂)_m-Z

式IV

其中

Z为-CH₃或-CO₂H；

m为4至24；

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

dpeg为-[CO(CH₂)O(CH₂)₂O(CH₂)NH]-；

r为1至8；

n1为0至10；并且

n2为0至10。

37.如权利要求36所述的经分离的多肽，其中Z为-CO₂H。

38.如权利要求36所述的经分离的多肽，其中m为14至20。

39.如权利要求36所述的经分离的多肽，其中Y1为γGlu。

40.如权利要求36所述的经分离的多肽，其中n1为0至3。

41.如权利要求36所述的经分离的多肽，其中Y2为γGlu。

42.如权利要求36所述的经分离的多肽，其中n2为0至3。

43.如权利要求36所述的经分离的多肽，其中r为1至3。

44.如权利要求1-43中任一项所述的经分离的多肽，其中羧基末端氨基酸S₃₉为-S₃₉-(NH₂)。

45.如权利要求1所述的经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:1至162中的任一者的氨基酸序列。

46.如权利要求1或权利要求5所述的经分离的多肽，所述经分离的多肽包含以下中的任一者的氨基酸序列：SEQ ID NO:6、45、46、54、55、62、68、70、71、74、75、77、78、85、86、87、88、89、92、94、103、107、108、111、112、114、115、120、132、134、139、147和149。

47.如权利要求1、2、5或6中任一项所述的经分离的多肽，所述经分离的多肽包含以下中的任一者的氨基酸序列：SEQ ID NO:45、46、54、55、62、68、70、74、75、77、78、85、86、87、88、89、92、94、103、107、108、111、112、114、115、120、132、134、139、147和149。

48.如权利要求1、3、5或7中任一项所述的经分离的多肽，所述经分离的多肽包含以下中的任一者的氨基酸序列：SEQ ID NO:6、45、46、54、55、77、78、108、111、112、114、115、120、132、134和139。

49.如权利要求1-8中任一项所述的经分离的多肽，所述经分离的多肽包含以下中的任一者的氨基酸序列：SEQ ID NO:45、46、54、55、77、78、108、111、112、114、115、120、132、134和139。

50.如权利要求1-9中任一项所述的经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:55、115、120和132中的任一者的氨基酸序列。

51.如权利要求1-9中任一项所述的经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列。

52.如权利要求1-9中任一项所述的经分离的多肽，所述经分离的多肽包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列。

53.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至52中任一项所述的经分离的多肽或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的佐剂、载体或媒介物。

54.一种渗透递送装置，所述渗透递送装置包含权利要求1至52中任一项所述的经分离的多肽或权利要求53所述的药物组合物。

55.如权利要求54所述的渗透递送装置，所述渗透递送装置包括

不渗透性储集器，其包含内表面和外表面以及第一开口端和第二开口端；

半透膜，其与所述储集器的所述第一开口端呈密封关系；

渗透发动机，其在所述储集器内并且邻近于所述半透膜；

活塞，其邻近于所述渗透发动机，其中所述活塞与所述储集器的所述内表面形成可移动密封件，所述活塞将所述储集器分隔成第一腔室和第二腔室，所述第一腔室包含所述渗透发动机；

悬浮液制剂，其中所述第二腔室包含所述悬浮液制剂并且所述悬浮液制剂是可流动的并且包含所述经分离的多肽；和

扩散调节器，其插入于所述储集器的所述第二开口端中，所述扩散调节器邻近于所述悬浮液制剂。

56.一种治疗人类受试者的肥胖症、向所述人类受试者提供体重减轻或抑制所述人类受试者的食欲的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含权利要求1至52中任一项所述的经分离的多肽的药物组合物、权利要求53所述的药物组合物或权利要求54或55所述的渗透递送装置。

57.一种治疗人类受试者的糖尿病的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含权利要求1至52中任一项所述的经分离的多肽的药物组合物、权利要求53所述的药物组合物或权利要求54或55所述的渗透递送装置。

58.如权利要求57所述的方法，其中所述糖尿病为1型糖尿病。

59.如权利要求57所述的方法，其中所述糖尿病为2型糖尿病。

60.一种治疗人类受试者的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含权利要求1至52中任一项所述的经分离的多肽的药物组合物、权利要求53所述的药物组合物或权利要求54或55所述的渗透递送装置。

61.一种治疗人类受试者的神经疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含权利要求1至52中任一项所述的经分离的多肽的药物组合物、权利要求53所述的药物组合物或权利要求54或55所述的渗透递送装置。

62.如权利要求61所述的方法，其中所述神经疾病或病症选自由帕金森病和阿尔茨海默病组成的组。

63.如权利要求56-62中任一项所述的方法，其中所述经分离的多肽或药物组合物被配制用于通过选自由肠胃外、口服、透皮、经粘膜和经直肠组成的组的途径施用。