CN116889572A

CN116889572A - 环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗多发性硬化症的药物中的用途

Info

Publication number: CN116889572A
Application number: CN202310667427.6A
Authority: CN
Inventors: 李雯婷; 沈剑刚; 李玉珍
Original assignee: Eighth Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Current assignee: Eighth Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Priority date: 2023-06-06
Filing date: 2023-06-06
Publication date: 2023-10-17

Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗多发性硬化症的药物中的用途，本发明还提供了环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物中的用途，及包含其的药物。本发明研究发现环烯醚萜类化合物山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷可抑制脊髓炎症浸润，抗脱髓鞘，具有潜在药效活性。

Description

环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗多发性硬化症的药物中的用途

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗多发性硬化症的药物中的用途。

背景技术

多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)是中枢神经系统最常见的自身免疫疾病，其病因和发病机制尚未完全明确，且复发率、病残率高，因此，寻求有效的治疗策略迫在眉睫。免疫干预是目前MS治疗最常用的手段，FDA批准的MS改善治疗药物(DMT)包括细胞因子免疫调节剂、单克隆抗体和免疫抑制剂。由于MS的病理过程十分复杂，各类免疫细胞参与其中，免疫调节策略则是针对特定的靶标分子，而这些靶标分子通常存在于各种类型的免疫细胞上，治疗过程中靶标分子被非特异性的阻断或耗尽，必然导致其细胞功能的紊乱，继发严重的副作用。

大量临床经验表明，与西医常规治疗相比，中药能显著改善MS患者的临床症状，减少复发率，减轻副作用。从传统中药中提取并筛选干预药物成为治疗MS重要的研究策略。从中医角度看，MS的病位在脑和脊髓，病机根本在于肾虚，即肾精亏损则髓不得生，髓海不足，脑失所养。根据中医经典理论“益肾生髓”，MS的治疗以补肾为本，补肾中药为MS的治疗提供新的思路。山茱萸(Cornus officinalis，CO)作为传统的补肾中药，是治疗MS中药方剂中最常用的草药之一。山茱萸的活性物质基础及作用机制的阐明将为MS的临床治疗及其药物开发提供新的策略，同时为山茱萸中药现代化提供明确的活性成分及药理信息。

已有相关技术公开了裂环环烯醚萜衍生物在制备预防和治疗神经退行性疾病药物中的应用。该类产品对过氧化氢(H₂O₂)损伤的SH-SY5Y细胞模型具有保护作用，能够显著改善衰老个体的学习记忆障碍，明显提高脑组织中总抗氧化能力。但是，第一，MS是一种复杂的自身免疫性疾病，涉及多个方面的病理生理学机制，主要包括免疫系统攻击中枢神经系统中的髓鞘和神经纤维，导致神经元功能障碍。即在疾病早期，外周白细胞被激活，穿过受损的血脑屏障进入中枢神经系统，浸润的脑炎细胞产生抗髓鞘抗体、多种自由基和促炎性细胞因子/趋化因子，造成破坏髓鞘的炎症环境。在进展阶段，这些免疫炎症反应不断攻击没有髓鞘覆盖的轴突，导致轴突退化、神经元死亡和神经传递受损。H₂O₂作为一种自由基，可以导致氧化应激反应，损伤神经细胞，但其仅是MS复杂病理过程中的环节之一和众多有害因子之一，H₂O₂在MS病理过程的贡献度及其与疾病相关性的证据目前仍是空白，迄今为止也并无针对H₂O₂为靶点治疗MS的药物。第二，衰老与MS两者的病理过程和机制截然不同。衰老是一个复杂的生物学现象，涉及多个层面的变化，包括分子、细胞、组织和器官水平的改变。衰老可分为两类：生理性衰老和病理性衰老。其病理变化主要包括：代谢的减缓、慢性炎症、激素水平的变化、氧化应激的增加、细胞死亡或凋亡、蛋白质合成和修复能力的降低、基因表达水平的变化、DNA损伤的累积、组织损伤和退化等。因此虽然某些药物可以改善衰老个体的学习记忆障碍，但这并不意味着它们也能治疗MS。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗多发性硬化症、预防和/或治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物中的用途，本发明还提供了包括环烯醚萜类化合物的药物。本发明研究发现环烯醚萜类化合物山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷可抑制脊髓炎症浸润，抗脱髓鞘，具有潜在药效活性。

本发明的第一方面，提供环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗多发性硬化症的药物中的用途，所述环烯醚萜类化合物选自山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷中的至少一种。

其中，山茱萸苷(Cornin)的化学结构式为莫诺苷(Morroniside)的化学结构式为/>马钱苷(Loganin)的化学结构式为

在本发明的一些实施方式中，所述预防和/或治疗多发性硬化症的药物为减轻多发性硬化症进展，和/或降低多发性硬化症症状严重性，和/或延迟多发性硬化症发作的药物。

在本发明的一些实施方式中，所述预防和/或治疗多发性硬化症的药物为抑制脊髓炎症浸润的药物。

在本发明的一些实施方式中，所述预防和/或治疗多发性硬化症的药物为抗脱髓鞘的药物。

在本发明的一些实施方式中，所述环烯醚萜类化合物为山茱萸苷。

本发明的第二方面，提供环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物中的用途，所述环烯醚萜类化合物选自山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷中的至少一种。

在本发明的一些实施方式中，所述预防和/或治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物为减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎进展，和/或降低实验性自身免疫性脑脊髓炎症状严重性，和/或延迟实验性自身免疫性脑脊髓炎发作的药物。

在本发明的一些实施方式中，所述预防和/或治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物为抑制脊髓炎症浸润的药物。

在本发明的一些实施方式中，所述预防和/或治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物为抗脱髓鞘的药物。

本发明的第三方面，提供一种预防和/或治疗多发性硬化症、实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物，所述药物包括有效剂量的环烯醚萜类化合物，所述环烯醚萜类化合物选自山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷中的至少一种。

在本发明的一些实施方式中，所述药物还包括药学上可接受的载体。

“药学上可以接受的载体”是指药学上可以接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填料、稀释剂、赋形剂、溶剂或胶囊材料。每种载体在与制剂其它成分相容方面及不会伤害病人方面必须是“可以接受的”。可作为药学上可以接受的载体的一些材料实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)西黄蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无致热原的水；(17)等渗盐水；(18)林格溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；及(21)药物制剂中使用的其它无毒相容物质。

在本发明的一些实施方式中，所述药物的剂型为口服制剂、鼻腔黏膜给药制剂、口腔黏膜给药制剂或注射制剂。

环烯醚萜类化合物可作为单一药物(单一疗法)使用或与一种或多种其他治疗剂联合使用(联合疗法)。

在本发明的一些实施方式中，所述药物的施用对象为哺乳动物，如犬科、啮齿类、人等。不同动物有效剂量换算可根据本领域实验动物与人的等效剂量换算关系(通常可参见FDA、SFDA等药品管理机构的指导意见，也可参见“黄继汉等，药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算，中国临床药理学与治疗学，2004；9(9)：1069-1072”)，即可从实验动物的剂量推导出人的单位体重剂量。而在本发明中，当所述药物的施用对象为小鼠时，所述环烯醚萜类化合物的用量为10～50mg/kg/day。

有益效果：

本发明中环烯醚萜类化合物可以有效缓解实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)小鼠的疾病进展，显著降低EAE小鼠的每日和累积临床评分，有效减轻EAE症状严重性和延迟疾病发作；同时，能够显著降低EAE小鼠的中枢神经系统(CNS)炎性浸润程度、脱髓鞘严重程度和病理评分；在制备预防和/或治疗MS的药物中具有广阔的应用前景。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，其中：

图1为本发明山茱萸环烯醚萜苷类化合物缓解EAE病程图：对于体内EAE模型的药效学验证实验，即模型对照组或山茱萸苷(Cornin)、莫诺苷(Morroniside)和马钱苷(Loganin)给药组从EAE免疫后第2dpi(预防给药方案，30mg/kg/day，n＝9；A)或第11dpi(治疗给药方案，30mg/kg/day，n＝7；C)开始口服灌胃给药至30dpi，每天测定行为学评分；预防方案(B)或治疗方案(D)为30dpi之前的累计临床评分，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

图2为本发明山茱萸环烯醚萜苷类化合物改善EAE小鼠脊髓炎症浸润图：对于组织病理学研究，治疗给药方案给药至30dpi后，处理各组小鼠，取各组EAE小鼠的L4-L6脊髓，用H&E染色(A)测定炎性细胞浸润的病理情况；(B)炎症的病理学评分为平均值±SEM(n＝4)，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

图3为本发明山茱萸环烯醚萜苷类化合物改善EAE小鼠脊髓的脱髓鞘程度图：对于组织病理学研究，治疗给药方案给药至30dpi后，处理各组小鼠，取模各组EAE小鼠的L4-L6脊髓，用LFB染色(A)测定脱髓鞘的病理情况；(B)脱髓鞘的病理学评分为平均值±SEM(n＝4)，^**P＜0.01。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。

若无特殊说明，本发明实施例中所使用的仪器与试剂均为购买得到，其中山茱萸苷、莫诺苷和马钱苷均购自成都曼思特生物科技有限公司，纯度HPLC≥98％，由山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉中提取纯化得到。

MS是一种中枢神经系统炎性脱髓鞘性自身免疫性疾病，其主要的病理特征是大量炎性免疫细胞浸润、胶质细胞活化、CNS局灶性脱髓鞘、轴突及神经元损伤。EAE是一种广泛应用的MS动物模型，EAE模型可用于模拟CNS中自身免疫介导的炎症反应、脱髓鞘和轴突损伤的机制，EAE是目前研究MS机制及其治疗药物开发最有力的工具。因此，本发明采用EAE小鼠模型，评价山茱萸中环烯醚萜苷类化合物治疗MS的潜在药效活性。同时采用H&E染色评价EAE小鼠中枢神经系统炎性浸润情况；LFB染色评价中枢脱髓鞘严重程度。

实施例1体内小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型(EAE)药效学评价

为了诱导免疫性EAE，将体重超过20g的雌性C57BL/6N小鼠皮下注射含有200μgMOG35-55的乳剂，加入5mg/mL完全弗氏佐剂。在免疫后第0天和第2天(dayspostimmunization，dpi)静脉内注射百日咳毒素(200ng)。每天测定免疫EAE小鼠的体重和临床评分。

评价EAE临床症状的详细评分标准如下：0，无临床症状；0.5，部分跛尾；1，瘫痪尾；1.5，后肢瘫痪或协调运动丧失；2，协调运动丧失、后肢瘫痪；2.5，一只后肢瘫痪；3，双后肢瘫痪；4，后肢瘫痪、前肢无力；5，前肢瘫痪。

对于药物施用，各给药组：30mg/kg/day山茱萸苷(Cornin)、30mg/kg/day莫诺苷(Morroniside)和30mg/kg/day马钱苷(Loganin)，分别从EAE免疫后第2dpi(用于预防方案)或第11dpi(用于治疗方案)开始口服灌胃给药至30dpi，等体积的生理盐水作为模型对照组，每天对每组EAE免疫小鼠进行行为学评分。

实验结果如图1所示，对于预防方案(从2dpi开始给药)，与模型对照组相比，山茱萸苷、莫诺苷和马钱苷显著降低EAE小鼠的每日和累积临床评分；同时，有效减轻EAE进展，降低EAE症状严重性和延迟疾病发作(见图1中A，B)。对于治疗方案(从11dpi开始给药)，结果显示山茱萸苷、莫诺苷和马钱苷减轻疾病严重性，降低平均最大和累积临床评分(见图1中C，D)。以上结果表明，山茱萸苷、莫诺苷和马钱苷可以作为预防剂或治疗策略减轻EAE的疾病严重性和进展，预示着以上化合物可能成为预防或治疗多发性硬化症的有效策略。

实验例2脊髓炎症浸润研究

用PBS灌注小鼠，且然后用4％多聚甲醛(PFA)固定。将分离的L4-L6脊髓在4％PFA中在4℃下固定过夜，在梯度乙醇中脱水，用二甲苯透化，包埋在石蜡中并切成5μm切片。将载玻片用H&E染色以分别评估炎症，并对炎症程度进行评分。

炎症评分如下：0，无；1，少数炎症细胞；2，血管周围浸润的组织；和3，血管套严重性增加，并延伸到邻近组织中。

进一步研究CNS内，山茱萸苷、莫诺苷和马钱苷的抗炎特性。按治疗方案接受以上治疗的EAE小鼠在30dpi后，通过H&E染色检测腰椎脊髓切片。组织病理学研究结果见图2，结果表明，EAE对照组小鼠的腰脊髓白质中具有明显的炎性病灶特征；而山茱萸苷、莫诺苷和马钱苷显著降低EAE小鼠CNS炎性浸润程度和病理评分(见图2中A，B)。

实验例3脊髓脱髓鞘研究

用PBS灌注小鼠，且然后用4％多聚甲醛(PFA)固定。将分离的L4-L6脊髓在4％PFA中在4℃下固定过夜，在梯度乙醇中脱水，用二甲苯透化，包埋在石蜡中并切成5μm切片。将载玻片用Luxol fast blue(LFB)染色以分别评估脱髓鞘，并对脱髓鞘程度进行评分。

脱髓鞘得分如下：0，无；1，稀有病灶；2，少数几个脱髓鞘区域；3，大的(汇合的)脱髓鞘区域。

进一步研究CNS内山茱萸苷、莫诺苷和马钱苷的抗脱髓鞘特性。按治疗方案接受以上治疗的EAE小鼠在30dpi后，通过LFB染色检测腰椎脊髓切片。组织病理学研究结果如图3所示，结果表明，EAE对照组小鼠的腰脊髓白质中具有明显的脱髓鞘的脊髓损伤特征；而山茱萸苷、莫诺苷和马钱苷显著降低EAE小鼠CNS脱髓鞘严重程度和病理评分(见图3中A，B)。

以上内容结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

Claims

1.环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗多发性硬化症的药物中的用途，其特征在于，所述环烯醚萜类化合物选自山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述预防和/或治疗多发性硬化症的药物为减轻多发性硬化症进展，和/或降低多发性硬化症症状严重性，和/或延迟多发性硬化症发作的药物。

3.环烯醚萜类化合物在制备预防和/或治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物中的用途，其特征在于，所述环烯醚萜类化合物选自山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷中的至少一种。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物为抑制脊髓炎症浸润的药物。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物为抗脱髓鞘的药物。

6.根据权利要求1～3中任一项所述的用途，其特征在于，所述环烯醚萜类化合物为山茱萸苷。

7.一种预防和/或治疗多发性硬化症、实验性自身免疫性脑脊髓炎的药物，其特征在于，所述药物包括有效剂量的环烯醚萜类化合物，所述环烯醚萜类化合物选自山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述环烯醚萜类化合物为山茱萸苷。

9.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。

10.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为口服制剂、鼻腔黏膜给药制剂、口腔黏膜给药制剂或注射制剂。