CN116635718A

CN116635718A - 用于在免疫组织化学（ihc）方案中使用以诊断癌症的抗人cd10抗体

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Publication number: CN116635718A
Application number: CN202180077220.2A
Authority: CN
Inventors: M·D·索伦森; T·哈格多恩-奥尔森
Original assignee: Agilent Technologies Inc
Current assignee: Agilent Technologies Inc
Priority date: 2020-12-02
Filing date: 2021-12-01
Publication date: 2023-08-22
Also published as: EP4255932A4; WO2022119932A1; US20240426827A1; EP4255932A1; CA3203749A1; AU2021391539A1

Abstract

在替代实施方案中，提供了能够特异性地结合人CD10多肽或脑啡肽酶多肽的非天然的、合成的抗体。在替代实施方案中，还提供了包含如本文所提供的抗体的制品和试剂盒、以及用于制备和使用如本文所提供的抗体的方法，其中所述抗体能够用于通过免疫组织化学(IHC)进行体外诊断。在替代实施方案中，在IHC方案中使用如本文所提供的抗体以诊断癌症，例如前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌如肾细胞癌或化生性乳腺癌。

Description

用于在免疫组织化学(IHC)方案中使用以诊断癌症的抗人 CD10抗体

相关申请的交叉引用

本专利合作条约(PCT)国际专利申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2020年12月2日提交的美国临时专利申请序列号(USSN)63/120,404的优先权权益。将上述申请通过引用以其整体并出于所有目的明确地并入本文。

技术领域

本发明总体上涉及免疫组织化学(IHC)和癌症诊断。在替代实施方案中，提供了能够特异性地结合人CD10或脑啡肽酶多肽的非天然的或合成的抗体。在替代实施方案中，还提供了包含如本文所提供的抗体的制品和试剂盒、以及用于制备和使用如本文所提供的抗体的方法，其中所述抗体能够用于通过免疫组织化学(IHC)进行体外诊断。在替代实施方案中，在IHC方案中使用如本文所提供的抗体以诊断癌症，例如前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌如肾细胞癌或化生性乳腺癌。

背景技术

脑啡肽酶(也称为分化簇10(CD10)、膜金属内肽酶(MME)、中性内肽酶(NEP)和普通急性成淋巴细胞性白血病抗原(CALLA))是一种在人体内由MME基因编码的酶。脑啡肽酶是一种锌依赖性金属蛋白酶，其在疏水残基的氨基侧切割肽，并且使若干种肽激素(包括胰高血糖素、脑啡肽、P物质、神经降压素、催产素和缓激肽)失活。它还降解淀粉样β肽，淀粉样β肽在神经组织中的异常折叠和聚集已被表明是阿尔茨海默病的病因。作为膜结合蛋白合成，脑啡肽酶胞外结构域在其从高尔基体运输到细胞表面之后被释放到细胞外结构域中。

CD10因为其由早期B淋巴细胞、祖B淋巴细胞和前B淋巴细胞以及淋巴结生发中心细胞所表达而可用于血液学诊断。CD10呈阳性的造血系统和淋巴组织疾病包括ALL、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病(90％)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(可变)、滤泡性淋巴瘤(70％)、毛细胞白血病(10％)和骨髓瘤(部分)。CD10在急性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤和边缘区淋巴瘤中往往会呈阴性。在源自前B淋巴细胞的非T ALL细胞以及生发中心相关的非霍奇金淋巴瘤(如伯基特淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤)上发现了CD10，但是在起源于更成熟的B细胞的白血病细胞或淋巴瘤上没有发现。

发明内容

在替代实施方案中，提供了能够特异性地结合人CD10或脑啡肽酶多肽的非天然的或合成的抗体。在替代实施方案中，所述抗体可以用于免疫组织化学(IHC)测定中。

在替代实施方案中，提供了能够特异性地结合人CD10多肽(也称为脑啡肽酶、膜金属内肽酶(MME)、中性内肽酶(NEP)和普通急性成淋巴细胞性白血病抗原(CALLA))或CD10肽)的分离的或纯化的抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)，其中所述分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP包含：

(a)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：

(i)包含SEQ ID NO:1的CDR1、CDR2和CDR3这三个互补决定区(CDR)或CDR1氨基酸(aa)残基GYTFTDYF(SEQ ID NO:1的残基26-33)、CDR2 aa残基INPNNGDT(SEQ ID NO:1的残基51-58)和CDR3 aa残基AKGGFNPGDY(SEQ ID NO:1的残基97-106)的氨基酸序列，或

(ii)与SEQ ID NO:1的CDR1、CDR2和CDR3这三个互补决定区(CDR)或CDR1氨基酸(aa)残基GYTFTDYF(SEQ ID NO:1的残基26-33)、CDR2 aa残基INPNNGDT(SEQ ID NO:1的残基51-58)和CDR3 aa残基AKGGFNPGDY(SEQ ID NO:1的残基97-106)中的每一者具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性的氨基酸序列，或

(iii)与SEQ ID NO:1具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:1具有完全序列同一性的氨基酸序列；

(b)免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：

(i)包含SEQ ID NO:2的CDR1、CDR2和CDR3这三个互补决定区(CDR)或CDR1氨基酸(aa)残基QSLVHRNGNTY(SEQ ID NO:2的残基27-37)、CDR2 aa残基KVS(SEQ ID NO:2的残基55-57)和CDR3 aa残基SQSTHVPLT(SEQ ID NO:2的残基94-102)的氨基酸序列，或

(ii)与SEQ ID NO:2的CDR1、CDR2和CDR3这三个互补决定区(CDR)或CDR1氨基酸(aa)残基QSLVHRNGNTY(SEQ ID NO:2的残基27-37)、CDR2 aa残基KVS(SEQ ID NO:2的残基55-57)和CDR3 aa残基SQSTHVPLT(SEQ ID NO:2的残基94-102)中的每一者具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性的氨基酸序列；或

(iii)与SEQ ID NO:2具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:2具有完全(100％)序列同一性的氨基酸序列；或

(c)(a)的所述免疫球蛋白重链可变区和(b)的所述免疫球蛋白轻链可变区。

在替代实施方案中，如本文所提供的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP被制成为以下形式或呈以下形式：

抗原结合片段(Fab、或具有Ab重链和轻链中的每一者的仅一个恒定结构域和一个可变结构域的Ab片段)，

F(ab')₂(或经胃蛋白酶消化从而产生以下两个片段的Ab：F(ab')₂片段和pFc'(胃蛋白酶切割Fc)片段)，

Fab'(F(ab')₂片段的单链)，

单链可变片段(scFv)(或用任选地长度为约10个至约25个氨基酸的接头肽连接在一起的Ab重链和轻链的可变区的融合蛋白)，

(scFv)₂、或di-scFv或bi-scFv、或具有两个可变重链区和两个可变轻链区从而产生串联scFv的单肽链，

微型抗体(或用烷基、任选地甲基或乙基连接在一起的Ab重链和轻链的可变区的融合蛋白)

双抗体(或具有对于两个可变区折叠在一起而言太短(任选地为约五个氨基酸)从而迫使scFv二聚化的接头肽的scFv)、三抗体或四抗体(或具有对于两个可变区折叠在一起而言太短(任选地为约一个或两个氨基酸)从而迫使scFv三聚化或四聚化的接头肽的scFv)，

单结构域抗体(dAB)(或Ab重链或Ab轻链的单个可变区)，

多个互补决定区(CDR)片段，或

由两个或更多个抗体片段形成的多特异性抗体。

在如本文所提供的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP的替代实施方案中，所述免疫球蛋白重链可变区包含：

氨基酸序列：

EVQLQQSGPDLVKPGASVKMSCKASGYTFTDYFMKWVKQSHGKSLEWIGDINPNNGDTFYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAKGGFNPGDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:1)，或

具有一个或多个(例如：两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个或更多个)氨基酸取代、添加(插入)或缺失的SEQ ID NO:1，并且所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP(包括其合成或重组形式)保留其与人CD10蛋白或多肽特异性地结合的能力，并且任选地，所述一个或多个(例如：两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个或更多个)氨基酸取代包括一个或多个保守性氨基酸取代。

在如本文所提供的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP的替代实施方案中：

所述免疫球蛋白轻链可变区包含以下氨基酸序列：

DAVLTQAPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWFLQRPGQSPKLLIDKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:2)，或

具有一个或多个(例如：两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个或更多个)氨基酸取代、添加(插入)或缺失的SEQ ID NO:2，并且所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP(包括其合成或重组形式)保留其与人CD10蛋白或多肽特异性地结合的能力，并且任选地，所述一个或多个(例如：两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个或更多个)氨基酸取代包括一个或多个保守性氨基酸取代。

在如本文所提供的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP的替代实施方案中：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或十五个保守性氨基酸取代，并且所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP(包括其合成或重组形式)保留其与人CD10蛋白或多肽特异性地结合的能力。

-所述免疫球蛋白轻链可变区进一步包含轻链恒定区的至少一部分，其中任选地，所述免疫球蛋白轻链可变区进一步包含轻链恒定区的至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或更多；

-所述免疫球蛋白重链可变区进一步包含免疫球蛋白重链恒定区的至少一部分，其中任选地，所述免疫球蛋白重链可变区进一步包含免疫球蛋白重链恒定区的至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或更多；

-所述免疫球蛋白轻链可变区进一步包含免疫球蛋白轻链恒定区的至少一部分，并且所述免疫球蛋白重链可变区进一步包含免疫球蛋白重链恒定区的至少一部分；

-所述免疫球蛋白重链恒定区包含来自IgG、IgM、IgA、IgD或IgE同种型的氨基酸序列；

-所述轻链恒定区包含来自卡帕(κ)或拉姆达(λ)同种型的氨基酸序列；

-所述重链恒定区的至少一部分(或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或更多)、所述轻链恒定区的至少一部分(或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或更多)、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区的至少一部分是或包含人、兔、小鼠或大鼠来源的氨基酸序列，或者包含源自人、兔、小鼠或大鼠的恒定区氨基酸序列；

-所述重链恒定区的至少一部分(或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或更多)、所述轻链恒定区的至少一部分(或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或更多)、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区的至少一部分是或包含合成氨基酸序列；

-所述Ab、其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP、或所述重链恒定区、或所述轻链恒定区、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区(包括其合成或重组形式)进一步包含或包含或结合至异源蛋白质、肽、或化合物或组合物，

并且任选地，所述化合物或组合物包含可检测蛋白、可检测剂或结合部分；并且任选地，所述异源蛋白质或肽包括载体蛋白；并且任选地，所述异源蛋白质、肽、或所述化合物或组合物与所述抗体(Ab)或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP(或其合成或重组形式)共价缀合；并且任选地，所述可检测剂或结合部分包括生物素、荧光或化学发光标记、荧光团、苝、芴基、香豆素、7-甲氧基香豆素(Mca)、4-(二甲基氨基偶氮基)苯-4-甲酸(dabcyl)、Tamra、硼-二吡咯亚甲基(BODIPY)或其衍生物、染料、放射性同位素、量子点或光致发光水性纳米晶体、半抗原、或抗体结合表位或结构域；并且任选地，所述染料是或包括罗丹明、[2-(4-硝基-2,1,3-苯并噁二唑-7-基)氨基乙基]三甲基铵(NBD)、尼罗红或尼罗蓝，或者是包含磺基吲哚菁的荧光染料；并且任选地，所述荧光团是或包括丹酰、荧光素、羧基荧光素(FAM)或6-FAM部分；并且任选地，所述染料是或包括菁染料、Cy3或Cy5；并且任选地，所述半抗原是或包括生物素、茶碱、地高辛、碳硼烷、荧光素或溴脱氧尿苷部分；和/或

-所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP是重组Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，或者包含通过重组技术制备的肽或多肽。

在替代实施方案中，提供了嵌合或重组核酸，所述嵌合或重组核酸包含：编码如本文所提供的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP的核酸序列。

在如本文所提供的嵌合或重组核酸的替代实施方案中：

-所述嵌合或重组核酸进一步包含转录调控元件并且与所述转录调控元件可操作地连接；和/或

-所述转录调控元件包括启动子，并且任选地，所述启动子是诱导型启动子或组成型启动子。

在替代实施方案中，提供了包含如本文所提供的嵌合或重组核酸的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒。

在替代实施方案中，提供了细胞(例如，重组工程化细胞)，所述细胞包含如本文所提供的嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白，如本文所提供的嵌合或重组核酸，或如本文所提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒；并且任选地，所述细胞是细菌细胞、真菌细胞、哺乳动物细胞、酵母细胞、昆虫细胞或植物细胞，或者任选地，所述哺乳动物细胞是人细胞。在替代实施方案中，所述细胞是能够合成(制备)如本文所提供的单克隆嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白和/或如本文所提供的嵌合或重组核酸的杂交瘤细胞。在替代实施方案中，所述细胞是能够分泌如本文所提供的单克隆嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白的杂交瘤细胞。

在替代实施方案中，提供了用于检测人CD10蛋白在细胞、组织、器官或前述任一者的一部分之中或之上的存在的方法，所述方法包括：(a)使所述细胞、组织或器官、或前述任一者的一部分与如本文所提供的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP接触；以及(b)检测所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与所述细胞、组织或器官、或前述任一者的一部分之中或之上的CD10多肽或包含由如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的抗原或表位的多肽或肽的特异性结合，由此检测所述人CD10蛋白在所述细胞、组织、器官或前述任一者的一部分之中或之上的存在。

在如本文所提供的用于检测人CD10蛋白在细胞、组织、器官或前述任一者的一部分之中或之上的存在的方法的替代实施方案中：

-所述接触包括使用免疫组织化学(IHC)测定；

-所述方法进一步包括使特异性地结合CD10多肽或包含由如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的抗原或表位的多肽或肽的所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与可检测剂接触，以指示所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与所述人CD10蛋白的特异性结合或者发出所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与所述人CD10蛋白的特异性结合的信号；

-所述可检测剂与所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP特异性地结合；

-所述细胞、组织、器官或前述任一者的一部分是或包括：早期B细胞、祖B细胞、前B淋巴细胞、成熟B淋巴细胞、滤泡中心细胞、或淋巴结生发中心中的细胞、骨髓干细胞、骨髓生成细胞、滤泡旁T淋巴细胞、滤泡旁T淋巴细胞亚群、肝胆小管细胞、肾小球细胞、近端小管细胞、乳腺肌上皮细胞、浸润性肿瘤细胞周围或与之相关的基质细胞、肾细胞、上皮细胞、白血病细胞或癌细胞；

-所述上皮细胞是肺上皮细胞、肠上皮细胞、肾上皮细胞、乳腺上皮细胞或胎盘上皮细胞；

-所述白血病细胞是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)细胞；和/或

-所述癌细胞是源自各种上皮细胞的肿瘤细胞，其中任选地，所述癌细胞是基底细胞癌(BCC)细胞。

在替代实施方案中，提供了用于检测或诊断癌症的方法，其中所述方法包括使用如本文所提供的方法检测人CD10蛋白或肽在细胞样品、组织样品或器官样品之中或之上的表达或存在，其中检测到所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与所述细胞、组织或器官、或前述任一者的一部分之中或之上的CD10多肽或包含由如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的抗原或表位的多肽或肽的特异性结合检测了或诊断了所述癌症，或者有助于所述癌症的检测或诊断。

在如本文所提供的用于检测或诊断癌症的方法的替代实施方案中：

-所述癌症是：前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌如肾细胞癌或化生性乳腺癌；

-所述癌细胞是源自各种上皮细胞的肿瘤细胞，其中任选地，所述癌细胞是基底细胞癌(BCC)细胞；

-所述细胞样品、组织样品或器官样品来自有需要的个体；和/或

-所述检测包括进行免疫组织化学(IHC)测定。

在替代实施方案中，提供了用于治疗、缓解或预防癌症的方法，所述方法包括首先使用如本文所提供的方法检测或诊断所述癌症，随后治疗有需要的个体以治疗、缓解或预防所述癌症。

在如本文所提供的用于治疗、缓解或预防癌症的方法的替代实施方案中：所述癌症是：前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌如肾细胞癌或化生性乳腺癌；并且任选地，所述癌细胞是源自各种上皮细胞的肿瘤细胞，其中任选地，所述癌细胞是基底细胞癌(BCC)细胞。

在替代实施方案中，提供了如本文所提供的抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)(或其合成或重组形式)用于检测或诊断癌症或者治疗、缓解或预防癌症的用途。

在如本文所提供的用途的替代实施方案中：

-所述癌症是：前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌如肾细胞癌或化生性乳腺癌，并且任选地，所述癌细胞是源自各种上皮细胞的肿瘤细胞，其中任选地，所述癌细胞是基底细胞癌(BCC)细胞；和/或

-所述检测包括进行免疫组织化学(IHC)测定。

在替代实施方案中，提供了如本文所提供的抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)(或其合成或重组形式)，用于在检测或诊断癌症或者治疗、缓解或预防癌症中使用；并且任选地，所述癌症是：前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌如肾细胞癌或化生性乳腺癌，并且任选地，所述癌细胞是源自各种上皮细胞的肿瘤细胞，其中任选地，所述癌细胞是基底细胞癌(BCC)细胞；并且任选地，所述检测或诊断包括进行免疫组织化学(IHC)测定。

一种试剂盒，所述试剂盒包含：如本文所提供的能够特异性地结合人CD10的分离的或纯化的抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)(或其合成或重组形式)；如本文所提供的嵌合或重组核酸；或如本文所提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒；或如本文所提供的细胞；并且任选地，所述试剂盒包含或进一步包含免疫组织化学(IHC)测定所需的组分，和/或包含用于实践如本文所提供的方法的说明书。

在下面的附图和描述中阐述了本发明的一个或多个示例性实施方案的细节。根据描述和附图以及根据权利要求，本发明的其他特征、目标和优点将变得清楚。

出于所有目的将本文引用的所有出版物、专利、专利申请都通过引用以其整体明确地特此并入。

附图说明

本专利或申请文件含有至少一张以彩色绘制的附图。在请求并支付必要的费用后，官方将会提供带有一张或多张彩色附图的本专利或专利申请公开案的副本。

本文所阐述的附图是说明本文所提供的示例性实施方案，并不意在限制如权利要求所涵盖的本发明的范围。

图1至图15：展示了小鼠单克隆抗体56C6(ABCAM，加利福尼亚州伯灵格姆)相比于示例性抗体Mab3124的免疫组织化学(IHC)成像能力：

图1展示了扁桃体组织样品的IHC 100X图像；

图2展示了肾组织样品的IHC 100X图像；

图3展示了肝组织样品的IHC 100X图像；

图4展示了胰腺组织样品的IHC 100X图像；

图5展示了伯基特淋巴瘤组织切片的IHC 100X图像；

图6展示了伯基特淋巴瘤组织切片的IHC 100X图像；

图7展示了弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织样品的IHC 100X图像；

图8展示了DLBCL组织样品的IHC 100X图像；

图9展示了滤泡性淋巴瘤样品的IHC 100X图像；

图10展示了浆细胞瘤样品的IHC 100X图像；

图11展示了肾透明细胞癌样品的IHC 100X图像；

图12展示了肾透明细胞癌样品的IHC 100X图像；

图13展示了卵巢子宫内膜样癌样品的IHC 100X图像；

图14展示了混合细胞型霍奇金病组织样品的IHC 100X图像；并且

图15展示了结肠腺癌组织样品的IHC 100X图像，

如在下面的实施例1中进一步详细讨论的。

图16至图20展示了示出了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案用CD10 Mab3124对CD10组织载玻片进行IHC染色的图像：

图16展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案用CD10 Mab 3124染色的扁桃体组织的图像；

图17展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案用CD10 Mab 3124染色的肾组织的图像；

图18展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案用CD10 Mab 3124染色的肾透明细胞癌的图像；

图19展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案用CD10 Mab 3124染色的伯基特淋巴瘤的图像；并且

图20展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案用CD10 Mab 3124染色的扁桃体组织的图像，

如在下面的实施例2中进一步详细讨论的。

各图中相同的附图符号指示相同的要素。

具体实施方式

在替代实施方案中，提供了能够特异性地结合人CD10或脑啡肽酶多肽的非天然的或合成的抗体。在替代实施方案中，还提供了包含如本文所提供的抗体的制品和试剂盒、以及用于制备和使用如本文所提供的抗体的方法。在替代实施方案中，使用所述抗体通过免疫组织化学(IHC)进行体外诊断，其可以用于诊断和治疗癌症以及其他疾病和病症。

如本文所提供的抗CD10抗体是使用新的抗原设计方法开发出来的。先前的尝试无法开发出在IHC中具有功能性的CD10特异性抗体。新设计的抗原在小鼠和兔两者中都产生了非常良好的免疫应答。使用传统的杂交瘤技术从小鼠中开发出三个克隆，并且进一步测试了这三个克隆用于IHC体外诊断装置(IVD)的稳健性、特异性和可用性。发现来自融合体F461/7D5/H8/B7/G8的一个杂交瘤克隆是这三个克隆中最佳的克隆，并且在本文中对其进行了描述。

重组抗体和ABP的表达

在替代实施方案中，提供了能够特异性地结合人CD10多肽(也称为脑啡肽酶)的分离的或纯化的抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)，它们可以是如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，包括包含免疫球蛋白重链可变区SEQ ID NO:1和免疫球蛋白轻链可变区SEQ ID NO:2的示例性重组抗人CD10(脑啡肽酶)Ab。

在替代实施方案中，如本文所提供的重组抗体(例如，基因工程化Ab)可以包含信号肽或其他异源肽或标签；并且可以使用任何表达媒介物或表达系统(例如，载体(如病毒载体)、噬菌体、质粒或粘粒)表达为重组多肽或Ab。

在替代实施方案中，恒定重链与轻链一起表达(例如，重链可以与κ-1轻链一起表达)。

在替代实施方案中，编码相应重链和轻链的核酸、或所述重链和所述轻链在单独的表达媒介物中编码或在相同的表达媒介物或表达系统中编码。

在一些实施方案中，如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括如本文所提供的(可以是顺式或反式的)重链和轻链)由一个或多个pTT5^TM载体(National Research Council Canada，NRC-CNRC，加拿大)或等同物表达。

在替代实施方案中，含有编码如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白的核酸的表达媒介物(如载体、质粒、病毒或噬菌体)在体外表达系统中表达，或者在培养的组织或细胞中表达，例如，它们在人胚肾(HEK)细胞(如HEK293-6E细胞)中表达。

在替代实施方案中，表达如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括重链和/或轻链)的一种或多种表达媒介物(例如，一种或多种载体)是游离型的，或者染色体整合例如在能够合成(任选地，诱导性合成)如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白或如本文所提供的重链和/或轻链的稳定细胞系中。

在替代实施方案中，提供了编码如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白的核酸。可以通过例如克隆和表达cDNA文库、经由PCR扩增信息或基因组DNA等来制备、分离和/或操纵如本文所提供的核酸。可以从各种来源分离、基因工程化、扩增、和/或重组表达/产生用于实践如本文所提供的实施方案的核酸(无论是RNA、cDNA、基因组DNA、载体、病毒或其杂合体)。可以单独地分离或克隆由这些核酸产生的重组多肽，并且测试所述重组多肽的期望的活性。可以使用任何重组表达系统，包括细菌、真菌、哺乳动物、酵母、昆虫或植物细胞表达系统、或杂合或合成表达系统。

可替代地，可以通过众所周知的化学合成技术在体外合成这些核酸，如例如Martin等人,ACS Synth.Biol.(2017)6,7,1370-1379；Adams(1983)J.Am.Chem.Soc.105:661；Belousov(1997)Nucleic Acids Res.25:3440-3444；Frenkel(1995)FreeRadic.Biol.Med.19:373-380；Blommers(1994)Biochemistry 33:7886-7896；Narang(1979)Meth.Enzymol.68:90；Brown(1979)Meth.Enzymol.68:109；Beaucage(1981)Tetra.Lett.22:1859；美国专利号4,458,066中所述。

用于操纵核酸的技术(例如像亚克隆、标记探针(例如，使用Klenow聚合酶进行随机引物标记、切口平移、扩增)、测序、杂交等)在科学和专利文献中有很好的描述，参见例如Sambrook编辑,MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL(第2版),第1-3卷,Cold SpringHarbor Laboratory,(1989)；CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,Ausubel编辑.John Wiley&Sons,Inc.,New York(1997)；LABORATORY TECHNIQUES IN BIOCHEMISTRYAND MOLECULAR BIOLOGY:HYBRIDIZATION WITH NUCLEIC ACID PROBES,第I部分.Theoryand Nucleic Acid Preparation,Tijssen编辑.Elsevier,N.Y.(1993)。

获得和操纵用于实践如本文所提供的实施方案的核酸的另一种有用的手段包括筛选和再克隆从例如基因组克隆或cDNA克隆中分离或扩增的插入物。核酸的来源包括重组核酸序列、基因组或cDNA文库，其包含在例如以下中和/或在以下中表达：哺乳动物人工染色体(MAC)，参见例如美国专利号5,721,118、6,025,155；人类人工染色体，参见例如Rosenfeld(1997)Nat.Genet.15:333-335；酵母人工染色体(YAC)；细菌人工染色体(BAC)；P1人工染色体，参见例如Woon(1998)Genomics 50:306-316；P1来源载体(PAC)，参见例如Kern(1997)Biotechniques 23:120-124；粘粒、重组病毒、噬菌体或质粒。

在替代实施方案中，如本文所提供的核酸与转录调控元件(包括启动子)可操作地连接，所述转录调控元件可以是组成型或诱导型转录调控元件。

在替代方面，提供了包含例如编码如本文所提供的重组抗体的如本文所提供的核苷酸序列的“表达盒”。表达盒可以至少包括与抗体编码序列可操作地连接的转录调控元件(例如，启动子)，并且任选地，还可以包括转录终止信号。也可以使用在实现表达中所必需或有所帮助的另外的因子(例如，增强子)。

在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方案的表达盒包括质粒、表达载体、重组病毒、任何形式的重组“裸DNA”载体等。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方案的表达媒介物或“载体”可以包含可以感染、转染、瞬时或永久转导细胞的核酸。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方案的载体可以是裸核酸、或与蛋白质或脂质复合的核酸。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方案的载体可以包含病毒或细菌核酸和/或蛋白质、和/或膜(例如，细胞膜、病毒脂质包膜等)。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方案的载体可以包括但不限于复制子(例如，RNA复制子、噬菌体)，DNA的片段可以附接到所述复制子并且被复制。因此，载体包括但不限于RNA、自主自我复制的环状或线性DNA或RNA(例如，质粒、病毒等，参见例如美国专利号5,217,879)，并且可以包括表达质粒和非表达质粒两者。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方案的载体可以在有丝分裂期间作为自主结构被细胞稳定地复制，或者可以掺入宿主的基因组内。

在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方案的“启动子”包括能够驱动编码序列在细胞(例如，细菌细胞、酵母细胞、真菌细胞、植物细胞、昆虫细胞(例如，杆状病毒)或哺乳动物细胞)中的转录的所有序列。因此，构建体中所使用的启动子包括参与调控或调节基因的转录时机和/或速率的顺式作用转录控制元件和调控序列。例如，用于实践如本文所提供的实施方案的启动子可以是顺式作用转录控制元件，包括参与转录调控的增强子、启动子、转录终止子、复制起点、染色体整合序列、5'和3'非翻译区或内含子序列。这些顺式作用序列可以与蛋白质或其他生物分子相互作用以执行(打开/关闭、调控、调节等)转录。

用于实践如本文所提供的实施方案的“组成型”启动子可以是在大多数环境条件和发育或细胞分化状态下持续地驱动表达的启动子。用于实践如本文所提供的实施方案的“诱导型”或“调控型”启动子可以在环境条件或发育条件的影响下引导表达如本文所提供的核酸。可能会影响通过用于实践如本文所提供的实施方案的诱导型启动子进行的转录的环境条件的例子包括存在施用于细胞的诱导因子。

在替代实施方案中，多肽(包括如本文所提供的或如用于实践如本文所提供的方法或其他实施方案的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白)可以包括任何“模拟物”和/或“肽模拟物”形式。在替代实施方案中，用于实践如本文所提供的实施方案的肽和多肽可以包括具有与天然多肽基本上相同的结构和/或功能特性的合成化合物(例如，如本文所提供的重组抗体)。用于实践如本文所提供的实施方案的模拟物可以完全由合成的、非天然的氨基酸类似物构成，或者是部分地为天然肽氨基酸并且部分地为非天然氨基酸类似物的嵌合分子。模拟物还可以掺入任何量的天然氨基酸取代(例如，保守性氨基酸取代)，只要此类取代也不会实质性地改变模拟物的结构和/或活性即可。常规实验将确定模拟物是否有效用于实践如本文所提供的实施方案，例如，模拟物组合物在特异性地结合人CD10蛋白方面是否有效。可以使用本文详述的方法和本领域技术人员已知的其他方法来选择或指导选择有效用于实践如本文所提供的组合物和/或方法的模拟物。

用于实践如本文所提供的实施方案的多肽模拟物组合物可以包含非天然结构组分的任何组合。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方案的模拟物组合物可以包含以下三种结构基团中的一种或全部结构基团：a)除天然酰胺键(“肽键”)连接以外的残基连接基团；b)代替天然存在的氨基酸残基的非天然残基；或c)诱导二级结构模拟(即，诱导或稳定二级结构，例如β转角、γ转角、β折叠、α螺旋构象等)的残基。例如，当多肽的全部或一些残基通过除天然肽键以外的化学手段连接时，所述多肽可以被表征为模拟物。

在替代实施方案中，示例性免疫球蛋白重链可变区和/或轻链区分别包含基于如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的序列的氨基酸序列，但是所述氨基酸序列具有一个或多个氨基酸残基缺失或取代，其中任选地，氨基酸取代中的全部或一些氨基酸取代是保守性氨基酸取代，并且其中具有一个或若干个缺失或取代的氨基酸序列(或变体多肽)至少基本上保留与人CD10(脑啡肽酶)特异性地结合的能力，尽管变体的特异性结合的结合亲和力可能高于或低于如本文所提供的抗体或其抗原结合片段、或单体或二聚体ABP的结合亲和力。在替代实施方案中，变体多肽具有介于一个与约50个之间的氨基酸残基缺失或取代，其中任选地，氨基酸取代中的全部或一些氨基酸取代是保守性氨基酸取代。在替代实施方案中，变体多肽具有介于约1个至5个、5个至10个、10个至15个或15个至20个之间的氨基酸残基缺失或取代。

在替代实施方案中，示例性免疫球蛋白重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个或介于约1个与50个之间的氨基酸取代或缺失，其中任选地，取代中的全部或一些取代是保守性氨基酸取代，并且所述氨基酸序列基本上保留与人CD10(脑啡肽酶)特异性地结合的能力。

在替代实施方案中，示例性免疫球蛋白轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个或介于约1个与50个之间的氨基酸取代或缺失，其中任选地，取代中的全部或一些取代是保守性氨基酸取代，并且所述氨基酸序列基本上保留与人CD10(脑啡肽酶)特异性地结合的能力。

保守性氨基酸取代是用具有相似特性的另一种氨基酸取代多肽中的给定氨基酸的氨基酸取代。在替代实施方案中，保守性取代是以下替代：脂肪族氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)被另一种脂肪族氨基酸替代；丝氨酸被苏氨酸替代，或苏氨酸被丝氨酸替代；酸性残基(如天冬氨酸和谷氨酸)被另一种酸性残基替代；携带酰胺基团的残基(如天冬酰胺和谷氨酰胺)被另一种携带酰胺基团的残基替代；碱性残基(如赖氨酸和精氨酸)与另一种碱性残基交换；以及芳香族残基(如苯丙氨酸、酪氨酸)被另一种芳香族残基替代。在替代实施方案中，其他变体是本发明的多肽的氨基酸残基中的一个或多个氨基酸残基包括取代基的变体。可以取代蛋白质中的原始氨基酸并且在对多肽的活性几乎没有影响的情况下可以被认为是保守性取代的氨基酸的非限制性例子包括：Ala被ser或thr取代；arg被gln、his或lys取代；asn被glu、gln、lys、his、asp取代；asp被asn、glu或gln取代；cys被ser或ala取代；gln被asn、glu、lys、his、asp或arg取代；glu被asn、gln、lys或asp取代；gly被pro取代；his被asn、lys、gln、arg、tyr取代；ile被leu、met、val、phe取代；leu被ile、met、val、phe取代；lys被asn、glu、gln、his、arg取代；met被ile、leu、val、phe取代；phe被trp、tyr、met、ile或leu取代；ser被thr、ala取代；thr被ser或ala取代；trp被phe、tyr取代；tyr被his、phe或trp取代；以及val被met、ile、leu取代。

通过序列同一性鉴定核酸或氨基酸序列

在替代实施方案中，提供了具有免疫球蛋白重链可变区的分离的或纯化的抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)，所述免疫球蛋白重链可变区包含与SEQ ID NO:1的CDR1、CDR2和CDR3这三个互补决定区(CDR)中的每一者具有至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性(或介于约60％与99％之间的序列同一性)的氨基酸序列；或与SEQ ID NO:1具有至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性(或介于约60％与99％之间的序列同一性)的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1具有完全序列同一性的氨基酸序列。

在替代实施方案中，提供了具有免疫球蛋白轻链可变区的分离的或纯化的抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)，所述免疫球蛋白轻链可变区包含与SEQ ID NO:2的CDR1、CDR2和CDR3这三个互补决定区(CDR)中的每一者具有至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性(或介于约60％与99％之间的序列同一性)的氨基酸序列；或与SEQ ID NO:2具有至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性(或介于约60％与99％之间的序列同一性)的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2具有完全(100％)序列同一性的氨基酸序列。

在替代实施方案中，关于参考核酸或多肽序列的“核酸或氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在用以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守性取代视为序列同一性的一部分而比对序列和引入空位(如果需要)之后，候选序列中与参考多肽或核酸序列中的核酸或氨基酸残基相同的核酸或氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的而进行的比对可以按本领域技术内的各种方式来实现，例如使用公众可获得的计算机软件，如GAP^TM(遗传学计算机课题组(Genetics Computer Group)，威斯康星大学，威斯康星州麦迪逊)(参见例如，Devereux等人,Nucl.Acid.Res.,12:387(1984))、BLASTP^TM、BLASTN^TM、BLAST^TM、BLAST-2^TM、WU-BLAST2/BLAST v2.0(参见例如，Altschul等人(1996)Methods Enzymol.266,460-480)、FASTA^TM(参见例如，Altschul等人,J.Mol.Biol.(1990)215:403-410)、ALIGN^TM(Genentech)、MEGALIGN^TM(DNASTAR)软件、或用于执行史密斯-沃特曼算法(Smith-Waterman algorithm)或尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)的软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。

在替代实施方案中，比对方法包括使用采用以下的BLAST^TM分析：(i)为每个残基分配加权同源性值的评分矩阵(例如像BLOSSUM 62^TM或PAM 120^TM)；和(ii)识别并消除高度重复的序列以免于计算的一个或多个过滤程序(如SEG^TM或XNU^TM)。在替代实施方案中，比对方法包括使用采用BLAST 2.2.2版本算法的BLAST^TM分析，其中过滤设置被设置为blastall-pblastp-d"nr pataa"-F F，并且所有其他选项都被设置为默认值。

在替代实施方案中，用于比对核酸或两个氨基酸序列的比对方案可能导致仅这两个序列的较短区域匹配，并且即使这两个全长序列之间没有显著关系，此较小比对区域也可能具有非常高的序列同一性。因此，替代实施方案，示例性比对方法包括使用GAP程序，其可以进行横跨靶多肽的至少50个连续氨基酸的比对。例如，使用计算机算法GAP^TM，对要确定序列同一性百分比的两个多肽进行比对，以实现它们的相应氨基酸的最佳匹配(“匹配跨度”，如由所述算法所确定)。在某些实施方案中，将空位开放罚分(其被计算为平均对角线的3倍；“平均对角线”是所使用的比较矩阵的对角线的平均值；“对角线”是特定比较矩阵分配给每个完美氨基酸匹配的得分或数值)和空位扩展罚分(其通常是空位开放罚分的1/10倍)以及比较矩阵(如PAM 250^TM或BLOSUM 62^TM)与算法结合使用。在替代实施方案中，标准比较矩阵(参见例如，Dayhoff等人,Atlas of Protein Sequence and Structure,5(3)(1978)，针对PAM 250比较矩阵；Henikoff等人,Proc.Natl.Acad.Sci USA,89:10915-10919(1992)，针对BLOSUM 62^TM比较矩阵)也为算法所用。在替代实施方案中，用于多肽序列比较的参数包括以下：算法：Needleman等人,J.Mol.Biol.,48:443-453(1970)；比较矩阵：来自Henikoff等人,同上(1992)的BLOSUM 62^TM；空位罚分：12；空位长度罚分：4；相似性阈值：0。在替代实施方案中，以以上参数使用GAP^TM程序。在某些实施方案中，上述参数是使用GAP^TM算法进行多肽比较的默认参数(并且没有针对末端空位的罚分)。

抗体蛋白的纯化和分离

在替代实施方案中，如本文所提供的抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括其合成或重组形式)是基本上纯化的或分离的，并且任选地，基本上纯化的或分离的形式是用于免疫组织化学(IHC)方法中和/或用作如本文所提供的试剂、试剂盒和/或制品的形式。

在替代实施方案中，如本文所提供的抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括其合成或重组形式)是使用以下而被基本上纯化或分离的：物理化学分级，例如基于典型样品中抗体的大小、电荷或其他共享化学特性，对免疫球蛋白使用示差沉淀、尺寸排阻或固相结合；类别特异性亲和力，例如通过对免疫球蛋白具有特异性亲和力的固定化生物配体(例如，蛋白质、凝集素等)对特定抗体类别(例如，IgG或IgM)进行固相结合，并且这可以在不考虑抗原特异性的情况下纯化目标类别的所有抗体；或抗原特异性亲和力，例如仅对样品中通过其特异性抗原结合结构域与特定抗原分子结合的那些抗体进行亲和纯化，其中这在不考虑抗体类别或同种型的情况下纯化结合抗原的所有抗体。

在替代实施方案中，如本文所提供的抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括例如合成或重组形式)是使用标准分离方法(如色谱法，例如离子交换(IEX)色谱法、疏水相互作用色谱法(HIC)、逆流色谱法、免疫亲和和/或尺寸排阻色谱法)而被基本上纯化或分离的。

在替代实施方案中，如本文所提供的抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括例如合成或重组形式)是使用持续表达和纯化工艺(例如，如Vogg等人Methods Mol Biol.2018；第1850卷:147-178所述)或使用搅拌槽式或摇动式生物反应器系统、随后进行纯化而在生物反应器(例如，灌注式生物反应器)中产生的。

免疫组织化学

在替代实施方案中，与如本文所提供的抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括例如合成或重组形式)、如本文所提供的制品、试剂盒或方法一起使用的免疫组织化学方法和/或试剂可以包括以下或包含以下或包含以下的使用：用于实践IHC的任何IHC方案、IHC医疗设备、装置和/或图像或数据分析系统或者本领域已知的IHC试剂，例如，如以下美国专利号(USPN)中所述：10,634,590(描述了用于在IHC中使用的载玻片支架组装夹具)；10,565,479(描述了用于识别染色组织数字图像中的模糊区域的方法)；10,564,076(描述了用于分析型(或IHC)样品制备的系统)；10,551,395(描述了自动化组织学染色系统)；10,551,378(描述了组织染色方法)；10,504,224(描述了用于IHC的数字组织图像分析系统)；10,501,777(描述了对IHC中蛋白质表达的同步多重检测和量化)；10,488,340(描述了用于提取生物材料中目标荧光团的图像的方法)；10,453,195(描述了使用数字病理学成像检测目的组织区域的方法)；10,438,381(描述了用于生成组织切片的数字图像的装置、系统和方法)；10,430,943(描述了用于自动化细胞核面积/数量估计以进行IHC图像分析的方法和程序)；10,416,176(描述了用于在自动化组织学染色系统中处理样本的方法)；10,393,633(描述了用于处理IHC样品和抑制其降解的方法)；10,217,011(描述了对IHC载玻片的处理)；10,209,165(描述了用于评估含有细胞的样本的染色质量的自动化或半自动化方法)；10,126,216(描述了用于固定组织样品以进行IHC的方法)；9,423,322；8,515,683(描述了用于自动化检测免疫组织化学(IHC)模式的方法和系统)；USPN 10,816,443(描述了用于在显微镜载玻片上染色生物样本的自动化批量染色机)；或如以下美国专利申请公开号中所述：US 2019/0178867A1(描述了在不使用对特定组织对象具有特异性的显色染色剂的情况下如在明场显微镜下成像的组织样品薄切片内检测那些组织对象)；US2019/0156510 A1(描述了用于分析IHC组织样品的图像分析方法)；US 2019/0293637 A1(用于对靶蛋白分子进行定量免疫组织化学(IHC)的方法和系统)；US 2019/0080450 A1(描述了对IHC染色生物样品的染色质量的自动化确定)；或US 2020/0316589 A1(描述了用于处理和测试固定生物材料的多孔固体支撑容器)。

在替代实施方案中，在IHC方案或如本文所提供的试剂盒中使用的如本文所提供的抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括例如合成或重组形式)是基本上纯化的或分离的，或者呈未纯化或部分纯化的培养上清液的形式。

在替代实施方案中，如本文所提供的方法可以使用或包括用于使用本领域已知的任何产品或方法(例如，IHC方案或试剂)检测或可视化抗体-抗原相互作用的试剂。

在替代实施方案中，如本文所提供的方法包括使用显色免疫组织化学(CIH)，其中第一抗体(例如，如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白)或第二抗体(例如，其中第二抗体与第一抗体或如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白结合)与可以催化生色反应的酶(如过氧化物酶，例如免疫过氧化物酶，例如辣根过氧化物酶(HRP))缀合。在替代实施方案中，在如本文所提供的方法中使用的显色部分是或包括香豆素；罗丹明；2,3,6,7-四氢-11-氧代-1H,5H,11H-[1]苯并吡喃并[6,7,8-ij]喹啉-1-0-甲酸；7-(二乙氨基)香豆素-3-甲酸；香豆素衍生物；罗丹明衍生物；四甲基罗丹明；二芳基罗丹明衍生物；QSY 7；QSY 9；QSY 21；重氮生色团；DABSYL；柠檬黄；三芳基甲烷化合物；固红；固蓝；品红；Cascade Blue乙酰；Dapoxyl磺酸/羧酸琥珀酰亚胺酯；DY-405；Alexa Fluor 405琥珀酰亚胺酯；Cascade Yellow琥珀酰亚胺酯；吡啶基噁唑琥珀酰亚胺酯(PyMPO)；Pacific Blue琥珀酰亚胺酯；DY-415；7-羟基香豆素-3-甲酸琥珀酰亚胺酯；DYQ-425；6-FAM亚磷酰胺；萤光黄；碘乙酰胺；Alexa Fluor 430琥珀酰亚胺酯；Dabcyl琥珀酰亚胺酯；NBD氯化物/氟化物；QSY 35琥珀酰亚胺酯；DY-485XL；Cy2琥珀酰亚胺酯；DY-490；Oregon Green 488羧酸琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 488琥珀酰亚胺酯；BODIPY 493/503C3琥珀酰亚胺酯；DY-480XL；BODIPY FL C3琥珀酰亚胺酯；BODIPYFL C5琥珀酰亚胺酯；BODIPY FL-X琥珀酰亚胺酯；DYQ-505；Oregon Green 514羧酸琥珀酰亚胺酯；DY-510XL；DY-481XL；6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯(JOE)；DY-520XL；DY-521XL；BODIPY R6G C3琥珀酰亚胺酯；赤藓红异硫氰酸酯；5-羧基-2',4',5',7'-四溴砜荧光素琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 532琥珀酰亚胺酯；6-羧基-2',4,4',5'7,7'-六氯荧光素琥珀酰亚胺酯(HEX)；BODIPY 530/550 C3琥珀酰亚胺酯；DY-530；BODIPY TMR-X琥珀酰亚胺酯；DY-555；DYQ-1；DY-556；Cy3琥珀酰亚胺酯；DY-547；DY-549；DY-550；Alexa Fluor 555琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 546琥珀酰亚胺酯；DY-548；BODIPY558/568C3琥珀酰亚胺酯；罗丹明红-X琥珀酰亚胺酯；QSY 7琥珀酰亚胺酯；BODIPY 564/570C3琥珀酰亚胺酯；BODIPY 576/589C3琥珀酰亚胺酯；羧基-X-罗丹明(ROX)；琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 568琥珀酰亚胺酯；DY-590；BODIPY 581/591C3琥珀酰亚胺酯；DY-591；BODIPYTR-X琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 594琥珀酰亚胺酯；DY-594；羧基萘并荧光素琥珀酰亚胺酯；DY-605；DY-610；Alexa Fluor 610琥珀酰亚胺酯；DY-615；BODIPY 630/650-X琥珀酰亚胺酯；羊毛罂红；Alexa Fluor 633琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 635琥珀酰亚胺酯；DY-634；DY-630；DY-631；DY-632；DY-633；DYQ-2；DY-636；BODIPY 650/665-X琥珀酰亚胺酯；DY-635；Cy5琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 647琥珀酰亚胺酯；DY-647；DY-648；DY-650；DY-654；DY-652；DY-649；DY-651；DYQ-660；DYQ-661；Alexa Fluor 660琥珀酰亚胺酯；Cy5.5琥珀酰亚胺酯；DY-677；DY-675；DY-676；DY-678；Alexa Fluor 680琥珀酰亚胺酯；DY-679；DY-680；DY-682；DY-681；DYQ-3；DYQ-700；Alexa Fluor 700琥珀酰亚胺酯；DY-703；DY-701；DY-704；DY-700；DY-730；DY-731；DY-732；DY-734；DY-750；Cy7琥珀酰亚胺酯；DY-749；DYQ-4；Cy7.5琥珀酰亚胺酯；7-二乙氨基香豆素-3-甲酸；琥珀酰亚胺酯；Dabsyl磺酰氯；荧光素异硫氰酸酯(FITC)羧基琥珀酰亚胺酯(DY-495)；罗丹明绿羧酸琥珀酰亚胺酯(DY-505)；曙红异硫氰酸酯(EITC)；6-羧基-2',4,7,7'-四氯荧光素羧酸琥珀酰亚胺酯(TET)；羧基罗丹明6G琥珀酰亚胺酯；羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯(TMR，TAMRA)(DY-554)；QSY 9琥珀酰亚胺酯；磺基罗丹明B磺酰氯(DY-560)；德克萨斯红(磺基罗丹明101)；没食子蓝；固绿FCF；孔雀石绿；或QSY 21琥珀酰亚胺酯。

在替代实施方案中，如本文所提供的方法包括使用免疫荧光，其中将第一抗体或第二抗体加标签到荧光团(如荧光素或荧光素异硫氰酸酯(FITC))、三芳基甲烷染料(如罗丹明或罗丹明衍生物(例如，四甲基罗丹明(TRITC)、罗丹明6G、罗丹明123、罗丹明B、羧基四甲基罗丹明(TAMRA)、四甲基罗丹明(TMR)、磺基罗丹明101))、氨基甲基香豆素乙酸酯(AMCA)、ALEXA^TM或DYLIGHT^TMfluor、或如美国专利申请号US 2019/0018018 A1中所述的荧光团或染料。也可以使用3,3'-二氨基联苯胺(DAB)。

在替代实施方案中，如本文所提供的方法包括使用直接法或一步染色法，其中第一抗体(例如，如本文所提供的抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括例如合成或重组形式))被标记并且直接与例如组织切片中的抗原反应。虽然此技术仅利用一种抗体，并且因此简单快速，但由于很少有信号放大，灵敏度可能较低。

在替代实施方案中，如本文所提供的方法包括使用间接法，其中未标记的第一抗体(第一层)与例如组织或器官中的靶抗原(例如，CD10)结合，并且经标记的第二抗体(第二层)然后与第一抗体反应。第二抗体可以针对第一抗体来源的动物物种的同种型(例如，IgG)。因为如果第二抗体与检测剂(如荧光或酶报告物)缀合，则会由于若干个第二抗体与每个第一抗体结合而产生信号放大，所以此方法可能比直接检测策略更灵敏。

在替代实施方案中，如果第二抗体与可以募集抗生物素蛋白、链霉亲和素或NEUTRAVIDIN^TM蛋白结合的酶的复合物的若干个检测分子(例如，生物素分子)缀合，则可以实现进一步放大。

在替代实施方案中，对组织切片或组织活检物(例如，多聚甲醛(PFA)固定的组织或器官，或福尔马林固定的石蜡包埋的组织)进行IHC。在替代实施方案中，将组织切片，或切薄片，或整体使用。在切片之前，可以将组织样品包埋在介质(例如，石蜡或冻存介质)中。可以将组织切片在各种仪器(最常见地，使用超薄切片机、低温恒温器或振动切片机)上切片或切薄片。可以将样本以范围为约3μm至5μm切片或切薄片。可以将切片或薄片安装在载玻片上，使用浓度渐增(例如，50％、75％、90％、95％、100％)的酒精洗涤进行脱水，并且使用二甲苯等去污剂变透明，之后在显微镜下成像。

取决于固定和组织保存的方法，样品可能需要另外的步骤来使CD10表位可用于抗体结合，所述另外的步骤包括去石蜡化和抗原修复。对于福尔马林固定的石蜡包埋的组织，抗原修复通常是必要的，并且可以包括用热或蛋白酶预处理切片。

在替代实施方案中，使用ENVISION DUOFLEX DOUBLESTAIN SYSTEM^TM(EnVisionDuoFLEX双重染色系统)(Agilent，加利福尼亚州圣何塞)进行IHC，所述系统允许对单个载玻片上的两种或更多种标记物进行染色。在替代实施方案中，使用EnVision FLEX HRPMagenta(高pH)(Dako Omnis)系统进行IHC，并且可以通过EnVision FLEX HRP MagentaChromogen可视化结合。在替代实施方案中，使用EnVision FLEX Mini Kit(高pH)(其是旨在与Dako AUTOSTAINER^TM仪器一起在IHC中使用的高灵敏度可视化系统)进行IHC；此双链路系统检测第一小鼠和兔抗体，并且通过3,3'-二氨基联苯胺(DAB)色原(DAB在例如被过氧化物酶氧化时形成不溶于水的棕色沉淀物)可视化反应。

制品和试剂盒

提供了包含如本文所提供的抗人CD10 Ab(包括例如合成或重组形式)并且用于使用如本文所提供的抗人CD10 Ab(包括例如合成或重组形式)实践如本文所提供的方法的制品和试剂盒；并且任选地，所述制品和/或试剂盒可以进一步包含进行免疫组织化学(IHC)所需的一些或全部试剂，并且任选地，可以包含用于实践如本文所提供的方法的说明书。

在替代实施方案中，制品已附接至或附连(任选地，共价结合)在或至如本文所提供的抗体或二聚体抗原结合蛋白(包括例如合成或重组形式)上，并且任选地，如本文所提供的制品是或包括阵列、芯片、生物芯片、载玻片、托盘、培养皿(例如，微量滴定培养皿)、噬菌体或噬菌粒。

在替代实施方案中，用于实践如本文所提供的组合物、制品(例如，试剂盒)或方法实施方案的免疫组织化学方法和/或试剂可以包括以下或包含以下或包含以下的使用：用于实践IHC的任何IHC方案、IHC医疗设备、装置和/或图像或数据分析系统或者本领域已知的IHC试剂，例如如以下美国专利号中所述：10,565,479(描述了用于识别染色组织数字图像中的模糊区域的方法)；10,564,076(描述了用于分析型(或IHC)样品制备的系统)；10,551,395(描述了自动化组织学染色系统)；10,551,378(描述了组织染色方法)；10,504,224(描述了用于IHC的数字组织图像分析系统)；10,501,777(描述了对IHC中蛋白质表达的同步多重检测和量化)；10,488,340(描述了用于提取生物材料中目标荧光团的图像的方法)；10,453,195(描述了使用数字病理学成像检测目的组织区域的方法)；10,438,381(描述了用于生成组织切片的数字图像的装置、系统和方法)；10,416,176(描述了用于在自动化组织学染色系统中处理样本的方法)；10,393,633(描述了用于处理IHC样品和抑制其降解的方法)；10,217,011(描述了对IHC载玻片的处理)；10,209,165(描述了用于评估含有细胞的样本的染色质量的自动化或半自动化方法)；10,126,216(描述了用于固定组织样品以进行IHC的方法)；9,423,322。

在替代实施方案中，制品和试剂盒可以进一步包含人CD10多肽，其可以具有以下氨基酸序列(参见例如，Strausberg等人Proc Natl Acad Sci USA(2002)第99卷(26):16899-16903)：

1mgksesqmdi tdintpkpkk kqrwtpleis lsvlvlllti iavtmialya tyddgickss

61dciksaarli qnmdattepc tdffkyacgg wlkrnvipet ssrygnfdil rdelevvlkd

121vlqepktedi vavqkakaly rscinesaid srggepllkl lpdiygwpva tenweqkyga

181swtaekaiaq lnskygkkvl inlfvgtddk nsvnhvihid qprlglpsrd yyectgiyke

241actayvdfmi svarlirqee rlpidenqla lemnkvmele keianatakp edrndpmlly

301nkmtlaqiqn nfsleingkp fswlnftnei mstvnisitn eedvvvyape yltklkpilt

361kysardlqnl mswrfimdlv sslsrtykes rnafrkalyg ttsetatwrr canyvngnme

421navgrlyvea afageskhvv edliaqirev fiqtlddltw mdaetkkrae ekalaikeri

481gypddivsnd nklnneylel nykedeyfen iiqnlkfsqs kqlkklrekv dkdewisgaa

541vvnafyssgr nqivfpagil qppffsaqqs nslnyggigm vigheithgf ddngrnfnkd

601gdlvdwwtqq sasnfkeqsq cmvyqygnfs wdlaggqhln gintlgenia dngglgqayr

661ayqnyikkng eekllpgldl nhkqlfflnf aqvwcgtyrp eyavnsiktd vhspgnfrii

721gtlqnsaefs eafhcrknsy mnpekkcrvw(SEQ ID NO:3)

任何以上方面和实施方案都可以与如本文在发明内容、附图说明和/或具体实施方式部分中所公开的任何其他方面或实施方案组合。

如在本说明书和权利要求中所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另外明确规定。

除非明确说明或根据上下文显而易见，否则如本文所用，术语“或”应被理解为是包含性的，并且涵盖“或”和“和”两者。

除非明确说明或根据上下文显而易见，否则如本文所用，术语“约”应被理解为在本领域的正常公差范围内，例如在平均值的2个标准差内。约(术语“约”的使用)可以被理解为在所述值的20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。除非根据上下文另外清楚，否则本文提供的所有数值都被术语“约”修饰。

除非明确说明或根据上下文显而易见，否则如本文所用，术语“基本上所有”、“基本上大部分”、“基本上全部”或“大多数”涵盖组合物的参考量的至少约90％、95％、97％、98％、99％或99.5％或更多。

将本文所引用的每个专利、专利申请、出版物和文件的全部内容都通过引用特此并入。对以上专利、专利申请、出版物和文件的引用并非承认前述中任一者是相关现有技术，其也不构成对这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。通过引用并入这些文件单独不应当被解释视为主张或承认任何文件的内容的任何部分被认为是满足任何国家或地区对专利申请的法定披露要求的必要材料。然而，保留在适当情况下依靠任何此类文件提供审查机关或法院认为对所要求保护的主题至关重要的材料的权利。

在不背离本发明的基本方面的情况下，可以对前述内容进行修改。尽管已参考一个或多个具体实施方案非常详细地描述了本发明，但本领域普通技术人员将认识到，可以对本申请中明确公开的实施方案进行改变，然而这些修改和改进在本发明的范围和精神内。可以在不存在本文没有明确公开的任何一种或多种要素的情况下适当地实践本文说明性描述的本发明。因此，例如，在本文的每种情况下，术语“包含/包括”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任一个可以用其他两个术语中的任一个替代。因此，已采用的术语和表达是作为描述性而非限制性的术语而使用，所示出和描述的特征或其部分的等同物并不排除在外，并且应认识到，在本发明的范围内可以进行各种修改。在以下权利要求中阐述了本发明的实施方案。

将参考本文所述的实施例进一步描述本发明；然而，应理解，本发明并不限于此类实施例。

实施例

除非在实施例中另外说明，否则所有重组DNA技术都是根据标准方案(例如，如Sambrook等人(2012)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第4版,Cold SpringHarbor Laboratory Press,NY以及Ausubel等人(1994)Current Protocols in MolecularBiology,第1卷和第2卷,Current Protocols,USA中所述)进行的。标准分子生物学技术的其他参考文献包括Sambrook和Russell(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第三版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY；Brown(1998)Molecular BiologyLabFax,第二版,第I卷和第II卷,Academic Press(UK)。聚合酶链式反应的标准材料和方法可见于Dieffenbach和Dveksler(1995)PCR Primer:A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory Press以及McPherson等人(2000)PCR-Basics:From Background toBench,第一版,Springer Verlag,Germany。

实施例1：示例性抗人CD10抗体的开发

此实施例描述了如本文所提供的抗体的开发以及它们在IHC测定中的卓越功效。

设计了来自人CD10(脑啡肽酶)细胞外结构域的抗原肽。将该肽与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)缀合，并且用于10只小鼠的免疫。在3次免疫后，从每只小鼠抽取血液以获得血浆样品。将血浆在ELISA中测试，随后在IHC中测试，以确定个体小鼠的免疫应答。

将5只小鼠在第1组(给予特异性IHC染色)中进行评价，将3只小鼠在第2组(给予特异性IHC染色，但也给予非特异性染色)中进行评价，并且将1只小鼠在第4组(不给予特异性染色)中进行评价。最后一只小鼠在测试前死亡。

选择小鼠进行杂交瘤的产生，并且处死小鼠以收获脾。根据传统方法使用骨髓瘤融合细胞系P3X63Ag8(TIB-9^TM)进行杂交瘤融合。

来自对2只小鼠的混合物进行的融合#481的17个克隆在ELISA中呈阳性。将其中的6个克隆在第1组中进行评价，将3个克隆在第2组中进行评价，并且将其余8个克隆在第4组(不给予特异性染色)中进行评价。将第1组的6个克隆中的2个最佳表现者7D5和10A4亚克隆。将最佳表现克隆F461,7D5,H8亚克隆，并且在更多组织上进行测试。

对F461,7D5,H8,B7以及其他2个有前景的克隆(来自不同的母克隆)进行进一步的亚克隆。最终克隆为F461,7D5,H8,B7,G8。(同种型IgG1)。

以原始细胞原种(Original Cell Stocks，OCS)的形式创建了细胞库。对细胞库的测试是通过以下方式来进行的：取一小瓶OCS并将其放置于用于进行库测试的培养物中，进行支原体测试，并且产生呈OCS上清液(OCSS)形式的抗体。使用此OCSS进行进一步的测试，并且将所产生的示例性抗体命名为Mab3124。

示例性抗体Mab3124具有包含SEQ ID NO:1的重链和包含SEQ ID NO:2的轻链。

在多种组织上进行对此抗体的特异性和最佳表现的测试，并且将示例性Mab3124抗体与用于IHC的CD10金标准(小鼠单克隆抗体56C6(ABCAM，加利福尼亚州伯灵格姆))进行比较，如图1至图15所展示，其使用了以下方案：

·靶标修复溶液(Target Retrieval Solution，TRS)(Agilent，Dako，加利福尼亚州圣克拉拉)(高pH)(3合1)中的热诱导表位修复(HIER)，30min.

·第一Ab孵育：20min.

·检测系统：EnVision FLEX^TM(Agilent，Dako，加利福尼亚州圣克拉拉)，20min.，于聚合物中。

·染色机：OMNIS^TM自动化染色解决方案(Agilent，Dako，加利福尼亚州圣克拉拉)，

图1至图15的IHC图像(其比较了小鼠单克隆抗体56C6(ABCAM，加利福尼亚州伯灵格姆)相比于示例性抗体Mab3124的IHC成像能力)清楚地显示出当在IHC中使用时示例性抗体Mab3124的CD10结合能力更强：

图1展示了扁桃体组织样品的IHC 100X图像；

图2展示了肾组织样品的IHC 100X图像；

图3展示了肝组织样品的IHC 100X图像；

图4展示了胰腺组织样品的IHC 100X图像；

图5展示了伯基特淋巴瘤组织切片的IHC 100X图像；

图6展示了伯基特淋巴瘤组织切片的IHC 100X图像；

图8展示了DLBCL组织样品的IHC 100X图像；

图9展示了滤泡性淋巴瘤样品的IHC 100X图像；

图10展示了浆细胞瘤样品的IHC 100X图像；

图11展示了肾透明细胞癌样品的IHC 100X图像；

图12展示了肾透明细胞癌样品的IHC 100X图像；

图13展示了卵巢子宫内膜样癌样品的IHC 100X图像；

图14展示了混合细胞型霍奇金病组织样品的IHC 100X图像；

图15展示了结肠腺癌组织样品的IHC 100X图像。

抗体F461,7D5,H8,B7,G8(也称为Mab 3124)获得了最佳可能得分。新开发的克隆显示出的灵敏度高于金标准(抗体56C6)的灵敏度，并且在简单的FLEX试剂(Agilent，Dako，加利福尼亚州圣克拉拉)方案(不采用接头)中无需扩增即可使用。

正常CD10组织特异性：

在肝中，胆小管显示出中等至强的染色反应。在扁桃体中，生发中心B细胞显示出弱至中等的染色反应。该抗体标记骨髓中的干细胞、骨髓中的未成熟B细胞子集和嗜中性粒细胞。该抗体还标记肾小球细胞和近端小管细胞、结肠固有层中的生发中心、小肠中肠细胞的刷状缘、胆囊刷状缘上皮、肺的间质基质细胞、施万神经细胞、横纹肌中的束间基质细胞、成纤维细胞、胎盘的合胞体滋养层和细胞滋养层、前列腺腺上皮、子宫内膜中的基质细胞和乳腺肌上皮细胞。

染色模式应当是膜质的，但也应当是细胞质的。

阴性组织/结构包括扁桃体中的套区B细胞和T细胞。肾中的远端小管细胞。

B细胞淋巴瘤：

通常，淋巴瘤中的CD10阳性表达并非证实特定淋巴瘤实际上是B细胞淋巴瘤。CD10是阳性表达可以指示B细胞淋巴瘤的一组抗体(B细胞标记物)的一部分。一些B细胞淋巴瘤可能已丢失了其CD10受体，并且这些B细胞淋巴瘤将不会表达CD10。因此，以下所述的任何B细胞淋巴瘤也都可以作为阴性临床组织包括在内。

滤泡性淋巴瘤

大多数滤泡性淋巴瘤(FL IIIB级可能不会)表达CD10，膜质/细胞质染色反应为中等至强。FL可以由边界不清的赘生性滤泡组成，套区变小或不存在。可能存在缺乏滤泡的弥漫性区域，并且赘生性细胞可能会扩散到滤泡间区。可以观察到两种不同的染色模式和强度，表示滤泡区中的大中心母细胞和滤泡间区中的扩展B细胞区。CD10在滤泡中的表达通常比在滤泡间赘生性细胞中的表达强，并且在滤泡间组分中可能不存在。FL中可能存在一些正常细胞，即滤泡树突细胞、滤泡T细胞和不同种类的组织细胞。

伯基特淋巴瘤

伯基特淋巴瘤由中等大小的肿瘤细胞组成，呈弥漫性单调生长模式，并且CD10表达是通常强的同质的膜质/细胞质染色反应。通常存在“星空”模式，表示已摄入凋亡肿瘤细胞的许多良性巨噬细胞。

弥漫性大B细胞淋巴瘤

弥漫性大B细胞淋巴瘤DLBCL(非特指型)是大B淋巴样细胞(细胞核大小等于或大于正常巨噬细胞的细胞核，或超过正常淋巴细胞的大小的两倍)的赘生物。

形态学上的DLBCL可以分类为中心母细胞变型、免疫母细胞变型和间变性变型。中心母细胞变型具有中等大小到大的淋巴样细胞，细胞核呈泡状、为椭圆形/圆形，泡状细胞核含有细的染色质以及两个至四个核膜结合的核仁。免疫母细胞变型由免疫母细胞组成，单个核仁居中定位，嗜碱性胞浆数量可观。间变性变型的特征在于大到非常大的圆形、椭圆形或多边形细胞，细胞核形态奇异。CD10在这些肿瘤的30％-50％中表达。CD10可能有助于将DLBCL(NOS)细分为生发中心样和非生发中心样。

肾细胞癌：

最常见的RCC形态学类型是透明细胞类型，其由具有不同细胞膜和居中放置的小细胞核的大细胞组成。胞浆透明且空泡化。透明细胞癌通常呈CD10阳性，而集合管癌(另一种类型的RCC)呈阴性。CD10在肾细胞癌中的诊断用途还包括鉴定从其他器官到肾的罕见转移以及鉴定肾到其他器官的转移(15)。

阴性临床组织：

外周T细胞淋巴瘤；边缘区淋巴瘤(此类型的淋巴瘤可能呈CD10阴性或CD10阳性)；套细胞淋巴瘤；伯基特淋巴瘤(此类型的淋巴瘤可能呈CD10阴性或CD10阳性)；DLBCL(此类型的淋巴瘤可能呈CD10阴性或CD10阳性)；滤泡性淋巴瘤(此类型的淋巴瘤可能呈CD10阴性或CD10阳性)；非透明细胞肾细胞淋巴瘤；肾细胞癌，从其他器官转移。

另一系列抗体IHC测试鉴定了针对抗体的优选方案，随后对免疫组织化学表现进行评价：

结果

讨论：

参考mAb克隆56C6

将mAb克隆56C6(即用型(RTU)(Dako，Agilent，加利福尼亚州圣克拉拉)，并且是来自Novocastra,Leica Biosystems(伊利诺伊州布法罗格罗夫)的浓缩物)用作所测试的两种示例性CD10抗体的参考。使用以上所列的方案在OMNIS^TM(Dako，Agilent，加利福尼亚州圣克拉拉)和BENCHMARK ULTRA^TM(Ventana，Roche Diagnostics)上进行方案。

总体而言，来自Novocastra的浓缩Ab给出的染色强度比来自Dako的RTU Ab给出的染色强度弱。对于这两种参考，几乎在扁桃体的所有生发中心B细胞中都观察到弱至中等的膜质染色反应，在肝的胆小管中观察到中等染色反应，并且在肾的近端小管上皮细胞中观察到强的膜质和细胞质染色反应。来自Dako的RTU Ab获得了最佳信噪比。

在瘤形成中，染色概况如上所列。使用大于或等于(≥)10％的临界值，5/5伯基特淋巴瘤和2/3肾透明细胞呈阳性。所测试的所有18个霍奇金淋巴瘤都呈阴性。

示例性mAb克隆Mab3124：

使用提到的测试参数，周转时间(TAT)最短且信噪比最佳的最佳方案为：第一Ab滴度为1:100，在靶标修复溶液(TRS)(Agilent，Dako，加利福尼亚州圣克拉拉)(高pH)中进行HIER，并且ENVISION FLEX^TM(EnVision Flex)(Agilent，加利福尼亚州圣克拉拉)作为检测系统。

降低滴度(例如，1:200)所提供的灵敏度略微降低，尤其是在扁桃体的生发中心B细胞中，因此不推荐用于最终评价。当使用1:50的滴度时，在一些组织中观察到微弱背景。

使用所选择的设置，获得了示例性mAb克隆Mab3124的以下结果：总体上，当使用针对示例性mAb克隆Mab3124所选择的方案时，在阳性细胞比例和染色强度两个方面，染色模式与来自Dako的参考mAb 56C6(RTU)的染色模式类似。在扁桃体的所有生发中心B细胞中，观察到弱至中等的明显膜质染色反应。在肾的近端小管上皮细胞中获得了强的细胞质和膜质染色反应。

参考Ab在瘤形成中的染色概况类似(参见表)。

mAb克隆Mab3125：

在此测试中，使用提到的测试参数，TAT最短且信噪比最佳的最佳方案为：第一Ab滴度为1:50，在靶标修复溶液(TRS)(Agilent，Dako，加利福尼亚州圣克拉拉)(高pH)中进行HIER，并且ENVISION FLEX^TM(EnVision Flex)(Agilent，加利福尼亚州圣克拉拉)作为检测系统。

在正常组织中，mAb克隆Mab3125的染色结果与来自Dako的参考RTU Ab和示例性mAb克隆Mab3124两者的染色结果几乎相同。

结论：

在此测试中，采用所列出的方案和设置以及所选择的材料进行，如上所讨论，示例性mAb克隆Mab3124获得了最佳总体结果。结果与基于在OMNIS^TM(Dako，Agilent，加利福尼亚州圣克拉拉)上染色的mAb 56C6(RTU)的参考是可比的。

CD10 mAb Mab3125给出的结果与参考和mAb Mab3124两者给出的结果几乎相同，然而，示例性Mab3124所提供的染色强度略微较强。

参考Ab和示例性mAb克隆Mab3124两者对瘤形成的染色模式类似。

实施例2：使用示例性mAb克隆Mab3124进行IHC方案

在AUTOSTAINER LINK^TM上测试新的示例性CD10 Mab 3124的IHC表现；并且将使用AUTOSTAINER LINK^TM(Dako，Agilent，加利福尼亚州圣克拉拉)的示例性CD10 Mab3124的IHC表现与使用OMNIS^TM(Dako，Agilent，加利福尼亚州圣克拉拉)的示例性CD10Mab 3124的IHC表现进行比较。测试的前提是，使用AUTOSTAINER LINK^TM即用型的CD10 Mab 3124应当与使用OMNIS^TM即用型的CD10 Mab 3124相同。

针对CD10(Mab 3124)的Autostainer Link兼容性测试表明，采用OMNIS^TM为CD10开发的IHC方案也与AUTOSTAINER LINK^TM兼容。在针对CD10 Mab 3124的AUTOSTAINER LINK^TM兼容性测试中测试的IHC方案为：靶标修复溶液(TRS)(Agilent，Dako，加利福尼亚州圣克拉拉)(高pH)；ENVISION FLEX^TM，孵育20分钟；并且Mab3124浓度为4μg/ml(稀释于S0809^TM(即用型抗体稀释剂)(Daco，Agilent，加利福尼亚州圣克拉拉)中)，孵育20分钟。

CD10克隆Mab 3124在IHC方案中在AUTOSTAINER LINK^TM上的表现与在OMNIS^TM上为CD10 Mab 3124开发的方案非常类似。

CD10 Mab 3124在AUTOSTAINER LINK^TM上的最佳方案示于下表中；注意，此方案与使用OMNIS^TM为CD10 Mab 3124开发的方案非常类似。

下表总结了CD10 Mab 3124在AUTOSTAINER LINK^TM上的染色方案。“Ab 1x”对应于在S0809^TM中稀释至浓度为4μg/ml的CD10 Mab 3124。

将CD10 Mab 3124在AUTOSTAINER LINK^TM上的最佳方案应用于各种多组织阵列(TMA 1淋巴瘤、TMA 2淋巴瘤和CD10 NordiQC运行39)。对CD10 Mab 3124在AUTOSTAINERLINK^TM上进行评估。图16至图20展示了示出了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案(1X，大约4μg/ml)用CD10 Mab 3124对CD10组织载玻片进行IHC染色的图像：

图16展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案(1X，大约4μg/ml)用CD10Mab3124染色的扁桃体组织的图像；注意，生发中心B细胞显示出中等至强的膜质染色，并且注意，此扁桃体样本中仅存在单个生发中心。

图17展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案(1X，大约4μg/ml)用CD10Mab3124染色的肾组织的图像；注意，肾中的近端小管和肾小球的上皮细胞显示出强烈的膜质和细胞质染色。

图18展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案(1X，大约4μg/ml)用CD10Mab3124染色的肾透明细胞癌的图像；注意，肾透明细胞癌的赘生性细胞显示出中等/强的明显膜质染色；

图19展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案(1X，大约4μg/ml)用CD10Mab3124染色的伯基特淋巴瘤的图像；注意，伯基特淋巴瘤的赘生性细胞显示出中等/强的明显膜质染色；

图20展示了在AUTOSTAINER LINK^TM上使用最佳方案(1X，大约4μg/ml)用CD10Mab3124染色的扁桃体组织的图像；注意，滤泡性淋巴瘤的赘生性细胞显示出中等/强的明显膜质染色。

CD10 Mab 3124在AUTOSTAINER LINK^TM上相比于CD10 Mab 3124在OMNIS^TM上

CD10 Mab 3124在AUTOSTAINER LINK^TM上(1X)(大约4μg/ml)的表现与CD10 Mab3124在OMNIS^TM上(1X)(大约4μg/ml)的表现的比较示于下表中。

CD10 Mab 3124(1X)在阳性组织上的平均染色强度对于CD10 Mab 3124在AUTOSTAINER LINK^TM上(1X)而言为2.474，并且对于CD10 Mab 3124在OMNIS^TM上而言为2.388。

此外，在AUTOSTAINER LINK^TM上应用双倍浓度1/2X(大约8μg/ml)的CD10 Mab 3124没有改变阴性临床组织的状态。

当在针对CD10在AUTOSTAINER LINK^TM上的染色方案中用NCR替代CD10 Mab 3124时，没有观察到背景染色。

CD10 Mab 3124在AUTOSTAINER LINK^TM上(1X)和CD10 Mab 3124在OMNIS^TM上(1X)在各种组织类型上的染色强度示于下表中：

已描述了本发明的许多实施方案。然而，可以理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种修改。因此，其他实施方案在以下权利要求的范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 安捷伦科技有限公司

<120> 用于在免疫组织化学（IHC）方案中使用以诊断癌症的抗人CD10抗体

<130> 6363.138926PCT

<140> to be assigned

<141> 2021-12-01

<150> 63/120,404

<151> 2020-12-02

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 117

<212> PRT

<213> artificial sequence

<220>

<223> synthetic peptide

<400> 1

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Phe Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Gly Phe Asn Pro Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 112

<212> PRT

<213> artificial sequence

<220>

<223> synthetic polypeptide

<400> 2

Asp Ala Val Leu Thr Gln Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Asp Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 3

<211> 750

<212> PRT

<213> homo sapiens

<400> 3

Met Gly Lys Ser Glu Ser Gln Met Asp Ile Thr Asp Ile Asn Thr Pro

1 5 10 15

Lys Pro Lys Lys Lys Gln Arg Trp Thr Pro Leu Glu Ile Ser Leu Ser

20 25 30

Val Leu Val Leu Leu Leu Thr Ile Ile Ala Val Thr Met Ile Ala Leu

35 40 45

Tyr Ala Thr Tyr Asp Asp Gly Ile Cys Lys Ser Ser Asp Cys Ile Lys

50 55 60

Ser Ala Ala Arg Leu Ile Gln Asn Met Asp Ala Thr Thr Glu Pro Cys

65 70 75 80

Thr Asp Phe Phe Lys Tyr Ala Cys Gly Gly Trp Leu Lys Arg Asn Val

85 90 95

Ile Pro Glu Thr Ser Ser Arg Tyr Gly Asn Phe Asp Ile Leu Arg Asp

100 105 110

Glu Leu Glu Val Val Leu Lys Asp Val Leu Gln Glu Pro Lys Thr Glu

115 120 125

Asp Ile Val Ala Val Gln Lys Ala Lys Ala Leu Tyr Arg Ser Cys Ile

130 135 140

Asn Glu Ser Ala Ile Asp Ser Arg Gly Gly Glu Pro Leu Leu Lys Leu

145 150 155 160

Leu Pro Asp Ile Tyr Gly Trp Pro Val Ala Thr Glu Asn Trp Glu Gln

165 170 175

Lys Tyr Gly Ala Ser Trp Thr Ala Glu Lys Ala Ile Ala Gln Leu Asn

180 185 190

Ser Lys Tyr Gly Lys Lys Val Leu Ile Asn Leu Phe Val Gly Thr Asp

195 200 205

Asp Lys Asn Ser Val Asn His Val Ile His Ile Asp Gln Pro Arg Leu

210 215 220

Gly Leu Pro Ser Arg Asp Tyr Tyr Glu Cys Thr Gly Ile Tyr Lys Glu

225 230 235 240

Ala Cys Thr Ala Tyr Val Asp Phe Met Ile Ser Val Ala Arg Leu Ile

245 250 255

Arg Gln Glu Glu Arg Leu Pro Ile Asp Glu Asn Gln Leu Ala Leu Glu

260 265 270

Met Asn Lys Val Met Glu Leu Glu Lys Glu Ile Ala Asn Ala Thr Ala

275 280 285

Lys Pro Glu Asp Arg Asn Asp Pro Met Leu Leu Tyr Asn Lys Met Thr

290 295 300

Leu Ala Gln Ile Gln Asn Asn Phe Ser Leu Glu Ile Asn Gly Lys Pro

305 310 315 320

Phe Ser Trp Leu Asn Phe Thr Asn Glu Ile Met Ser Thr Val Asn Ile

325 330 335

Ser Ile Thr Asn Glu Glu Asp Val Val Val Tyr Ala Pro Glu Tyr Leu

340 345 350

Thr Lys Leu Lys Pro Ile Leu Thr Lys Tyr Ser Ala Arg Asp Leu Gln

355 360 365

Asn Leu Met Ser Trp Arg Phe Ile Met Asp Leu Val Ser Ser Leu Ser

370 375 380

Arg Thr Tyr Lys Glu Ser Arg Asn Ala Phe Arg Lys Ala Leu Tyr Gly

385 390 395 400

Thr Thr Ser Glu Thr Ala Thr Trp Arg Arg Cys Ala Asn Tyr Val Asn

405 410 415

Gly Asn Met Glu Asn Ala Val Gly Arg Leu Tyr Val Glu Ala Ala Phe

420 425 430

Ala Gly Glu Ser Lys His Val Val Glu Asp Leu Ile Ala Gln Ile Arg

435 440 445

Glu Val Phe Ile Gln Thr Leu Asp Asp Leu Thr Trp Met Asp Ala Glu

450 455 460

Thr Lys Lys Arg Ala Glu Glu Lys Ala Leu Ala Ile Lys Glu Arg Ile

465 470 475 480

Gly Tyr Pro Asp Asp Ile Val Ser Asn Asp Asn Lys Leu Asn Asn Glu

485 490 495

Tyr Leu Glu Leu Asn Tyr Lys Glu Asp Glu Tyr Phe Glu Asn Ile Ile

500 505 510

Gln Asn Leu Lys Phe Ser Gln Ser Lys Gln Leu Lys Lys Leu Arg Glu

515 520 525

Lys Val Asp Lys Asp Glu Trp Ile Ser Gly Ala Ala Val Val Asn Ala

530 535 540

Phe Tyr Ser Ser Gly Arg Asn Gln Ile Val Phe Pro Ala Gly Ile Leu

545 550 555 560

Gln Pro Pro Phe Phe Ser Ala Gln Gln Ser Asn Ser Leu Asn Tyr Gly

565 570 575

Gly Ile Gly Met Val Ile Gly His Glu Ile Thr His Gly Phe Asp Asp

580 585 590

Asn Gly Arg Asn Phe Asn Lys Asp Gly Asp Leu Val Asp Trp Trp Thr

595 600 605

Gln Gln Ser Ala Ser Asn Phe Lys Glu Gln Ser Gln Cys Met Val Tyr

610 615 620

Gln Tyr Gly Asn Phe Ser Trp Asp Leu Ala Gly Gly Gln His Leu Asn

625 630 635 640

Gly Ile Asn Thr Leu Gly Glu Asn Ile Ala Asp Asn Gly Gly Leu Gly

645 650 655

Gln Ala Tyr Arg Ala Tyr Gln Asn Tyr Ile Lys Lys Asn Gly Glu Glu

660 665 670

Lys Leu Leu Pro Gly Leu Asp Leu Asn His Lys Gln Leu Phe Phe Leu

675 680 685

Asn Phe Ala Gln Val Trp Cys Gly Thr Tyr Arg Pro Glu Tyr Ala Val

690 695 700

Asn Ser Ile Lys Thr Asp Val His Ser Pro Gly Asn Phe Arg Ile Ile

705 710 715 720

Gly Thr Leu Gln Asn Ser Ala Glu Phe Ser Glu Ala Phe His Cys Arg

725 730 735

Lys Asn Ser Tyr Met Asn Pro Glu Lys Lys Cys Arg Val Trp

740 745 750

Claims

1.一种能够特异性地结合人CD10多肽(也称为脑啡肽酶、膜金属内肽酶(MME)、中性内肽酶(NEP)和普通急性成淋巴细胞性白血病抗原(CALLA))或CD10肽)的分离的或纯化的抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)，其中所述分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP包含：

(iii)与SEQ ID NO:2具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:2具有完全(100％)序列同一性的氨基酸序列；或(c)(a)的所述免疫球蛋白重链可变区和(b)的所述免疫球蛋白轻链可变区。

2.根据权利要求1所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，所述分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP被制成为以下形式或呈以下形式：

Fab'(F(ab')₂片段的单链)，

单结构域抗体(dAB)(或Ab重链或Ab轻链的单个可变区)，

多个互补决定区(CDR)片段，或

由两个或更多个抗体片段形成的多特异性抗体。

3.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含：

氨基酸序列：

EVQLQQSGPDLVKPGASVKMSCKASGYTFTDYFMKWVKQSHGKSLEWIGDINPNNG DTFYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAKGGFNPGDYWGQGTT LTVSS(SEQ ID NO:1)，或

具有一个或多个氨基酸取代、添加(插入)或缺失的SEQ ID NO:1，并且所述重组Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP保留其与人CD10蛋白或多肽特异性地结合的能力。

4.根据权利要求3所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，其中：所述一个或多个氨基酸取代包括一个或多个保守性氨基酸取代。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的或根据前述权利要求中任一项所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，

其中所述免疫球蛋白轻链可变区包含以下氨基酸序列：

DAVLTQAPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWFLQRPGQSPKLLIDKVSNR FSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:2)，或

具有一个或多个氨基酸取代、添加(插入)或缺失的SEQ ID NO:2，并且所述重组Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP保留其与人CD10蛋白或多肽特异性地结合的能力。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的或根据前述权利要求中任一项所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，其中：

(a)所述一个或多个氨基酸取代包括一个或多个保守性氨基酸取代；

(b)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或十五个保守性氨基酸取代，并且所述重组Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP保留其与人CD10蛋白或多肽特异性地结合的能力；

(c)所述免疫球蛋白轻链可变区进一步包含轻链恒定区的至少一部分；

(d)所述免疫球蛋白重链可变区进一步包含免疫球蛋白重链恒定区的至少一部分；

(e)所述免疫球蛋白轻链可变区进一步包含免疫球蛋白轻链恒定区的至少一部分；并且所述免疫球蛋白重链可变区进一步包含免疫球蛋白重链恒定区的至少一部分；

(f)所述重链恒定区包含来自IgG、IgM、IgA、IgD或IgE同种型的氨基酸序列；

(g)所述轻链恒定区包含来自卡帕(κ)或拉姆达(λ)同种型的氨基酸序列；

(h)所述重链恒定区的至少一部分、所述轻链恒定区的至少一部分、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区的至少一部分是或包含人、兔、小鼠或大鼠来源的氨基酸序列，或者包含源自人、兔、小鼠或大鼠的恒定区氨基酸序列；

(i)所述重链恒定区的至少一部分、所述轻链恒定区的至少一部分、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区的至少一部分是或包含合成氨基酸序列，或

(j)(a)至(i)的任何组合。

7.根据权利要求1至7中任一项所述的或根据前述权利要求中任一项所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，其中所述重组Ab、其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP、或所述重链恒定区、或所述轻链恒定区、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区进一步包含或结合至异源蛋白质、肽、或化合物或组合物。

8.根据权利要求7所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，其中所述异源蛋白质或肽、或所述化合物或组合物包含可检测蛋白、可检测剂或结合部分。

9.根据权利要求8所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，其中所述异源蛋白质或肽包括载体蛋白。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，其中所述异源蛋白质、肽、或所述化合物或组合物与所述重组抗体(Ab)或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP共价缀合。

11.根据权利要求1至10中任一项或前述权利要求中任一项所述的分离的或纯化的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，其中：

(a)所述可检测剂或结合部分包括生物素、荧光或化学发光标记、荧光团、苝、芴基、香豆素、7-甲氧基香豆素(Mca)、4-(二甲基氨基偶氮基)苯-4-甲酸(dabcyl)、Tamra、硼-二吡咯亚甲基(BODIPY)或其衍生物、染料、放射性同位素、量子点或光致发光水性纳米晶体、半抗原、或抗体结合表位或结构域；

(b)所述染料是或包括罗丹明、[2-(4-硝基-2,1,3-苯并噁二唑-7-基)氨基乙基]三甲基铵(NBD)、尼罗红或尼罗蓝，或者是包含磺基吲哚菁的荧光染料；

(c)所述荧光团是或包括丹酰、荧光素、羧基荧光素(FAM)或6-FAM部分；

(d)所述染料是或包括菁染料、Cy3或Cy5；

(e)所述半抗原是或包括生物素、茶碱、地高辛、碳硼烷、荧光素或溴脱氧尿苷部分；

(f)所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP是重组Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP，或者包含通过重组技术制备的肽或多肽；或

(g)(a)至(f)的任何组合。

12.一种嵌合或重组核酸，所述嵌合或重组核酸包含：编码根据权利要求1至11中任一项所述的或根据前述权利要求中任一项所述的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP的核酸序列，

其中任选地，所述嵌合或重组核酸进一步包含转录调控元件并且与所述转录调控元件可操作地连接，

并且任选地，所述转录调控元件包括启动子，并且任选地，所述启动子是诱导型启动子或组成型启动子。

13.一种表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒，所述表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒包含根据权利要求12所述的嵌合或重组核酸。

14.一种细胞，所述细胞包含根据权利要求1至11中任一项所述的嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白，根据权利要求12中任一项所述的嵌合或重组核酸，或根据权利要求13所述的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒，

其中所述细胞是细菌细胞、真菌细胞、哺乳动物细胞、酵母细胞、昆虫细胞或植物细胞，并且任选地，所述哺乳动物细胞是人细胞。

15.一种用于检测人CD10蛋白在细胞、组织、器官或前述任一者的一部分之中或之上的存在的方法，所述方法包括：

(a)使所述细胞、组织或器官、或前述任一者的一部分与根据权利要求1至11中任一项或前述权利要求中任一项所述的Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP接触，以及

(b)检测所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与所述细胞、组织或器官、或前述任一者的一部分之中或之上的CD10多肽或包含由如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的抗原或表位的多肽或肽的特异性结合，

由此检测所述人CD10蛋白在所述细胞、组织、器官或前述任一者的一部分之中或之上的存在，

其中任选地，所述接触包括使用免疫组织化学(IHC)测定，

并且任选地，所述方法进一步包括使特异性地结合CD10多肽或包含由如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的抗原或表位的多肽或肽的所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与可检测剂接触，以指示所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与所述人CD10蛋白的特异性结合或者发出所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与所述人CD10蛋白的特异性结合的信号，

并且任选地，所述可检测剂与所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP特异性地结合，

并且任选地，所述细胞、组织、器官或前述任一者的一部分是或包括：早期B细胞、祖B细胞、前B淋巴细胞、成熟B淋巴细胞、滤泡中心细胞、或淋巴结生发中心中的细胞、骨髓干细胞、骨髓生成细胞、T淋巴细胞、滤泡旁T淋巴细胞、滤泡旁T淋巴细胞亚群、肝胆小管细胞、肾小球细胞、近端小管细胞、乳腺肌上皮细胞、浸润性肿瘤细胞周围或与之相关的基质细胞、肾细胞、上皮细胞、白血病细胞或癌细胞，

并且任选地，所述上皮细胞是肺上皮细胞、肠上皮细胞、肾上皮细胞、乳腺上皮细胞或胎盘上皮细胞，或者所述白血病细胞是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)细胞，或者所述癌细胞是源自上皮细胞的肿瘤细胞，或者源自上皮细胞的所述肿瘤细胞是基底细胞癌(BCC)细胞。

16.一种用于检测或诊断癌症的方法，

其中所述方法包括使用根据权利要求15或前述权利要求中任一项所述的方法检测人CD10蛋白或肽在细胞样品、组织样品或器官样品之中或之上的表达或存在，其中检测到所述Ab或其Ag结合片段、或单体或二聚体ABP与所述细胞、组织或器官、或前述任一者的一部分之中或之上的CD10多肽或包含由如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的抗原或表位的多肽或肽的特异性结合检测了或诊断了所述癌症，或者有助于所述癌症的检测或诊断，

其中任选地，所述癌症是：前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌，

并且任选地，所述癌是肾细胞癌或化生性乳腺癌，或者所述细胞样品、组织样品或器官样品来有需要的个体，或者所述检测包括进行免疫组织化学(IHC)测定。

17.一种用于治疗、缓解或预防癌症的方法，所述方法包括首先使用根据权利要求16所述的方法检测或诊断所述癌症，随后治疗有需要的个体以治疗、缓解或预防所述癌症，其中任选地，所述癌症是：前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌，

并且任选地，所述癌是肾细胞癌或化生性乳腺癌，或者所述癌是源自上皮细胞的肿瘤细胞，或者源自上皮细胞的所述肿瘤细胞是基底细胞癌。

18.根据权利要求1至11中任一项或前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)用于检测或诊断癌症或者治疗、缓解或预防癌症的用途，

并且任选地，所述癌是肾细胞癌或化生性乳腺癌，

并且任选地，所述癌是源自上皮细胞的肿瘤细胞，

并且任选地，源自上皮细胞的所述肿瘤细胞是基底细胞癌，

并且任选地，所述检测包括进行免疫组织化学(IHC)测定。

19.根据权利要求1至11中任一项或前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原(Ag)结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(ABP)，用于在检测或诊断癌症或者治疗、缓解或预防癌症中使用，

其中任选地，所述癌症是：前B表型白血病细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急变期慢性髓细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、前体B成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、前体T成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤、非造血淋巴肉瘤、或癌，并且任选地，所述癌是肾细胞癌或化生性乳腺癌，或者所述癌是源自上皮细胞的肿瘤细胞，或者源自上皮细胞的所述肿瘤细胞是基底细胞癌，

并且任选地，所述检测或诊断包括进行免疫组织化学(IHC)测定。

20.一种试剂盒，所述试剂盒包含：根据权利要求1至11中任一项或前述权利要求中任一项所述的嵌合或重组抗体；根据权利要求12所述的嵌合或重组核酸；或根据权利要求13所述的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒；或根据权利要求14所述的细胞，

其中任选地，所述试剂盒包含免疫组织化学(IHC)测定所需的组分，和/或包含用于实践根据前述权利要求中任一项所述的方法的说明书。