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CN116585303B - 脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用 - Google Patents

脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用 Download PDF

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CN116585303B CN202310659792.2A CN202310659792A CN116585303B CN 116585303 B CN116585303 B CN 116585303B CN 202310659792 A CN202310659792 A CN 202310659792A CN 116585303 B CN116585303 B CN 116585303B
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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用。本发明提供了脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用，所述脱水莫诺苷元的化学结构式如式1所示。经验证，脱水莫诺苷元能够减轻肝脏炎症、减轻肝脏损伤以及改善肝纤维化和/或抗肝纤维化，从而达到预防和/或治疗肝脏疾病的效果。

Description

脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的 应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用。
背景技术
纤维化是一个病理生理过程，是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生。任何肝脏损伤在肝脏修复愈合的过程中都有肝纤维化的过程，如果损伤因素长期不能去除，纤维化的过程长期持续就会发展成肝硬化。肝纤维化的病因有很多，在临床上多见有病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性疾病等。
抗肝纤维化的治疗主要包括：针对原发病去除致病因素，如抗乙型肝炎、丙型肝炎病毒治疗，抗血吸虫治疗，戒酒等。针对肝纤维化本身的治疗，如通过抑制炎症或脂质过氧化，或者抑制肝星状细胞的增生活化，以及促进胶原降解等。常用的抗纤维化的药物包括：安络化纤丸、牛胎肝提取物、扶正化瘀胶囊、鳖甲软肝片、鳖甲煎丸等。
目前，还没有关于将脱水莫诺苷元用于预防和/或治疗肝脏疾病的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用，本发明提供了脱水莫诺苷元的新的应用方向。
本发明提供了脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用；所述肝脏疾病包括肝纤维化和/或肝损伤；所述脱水莫诺苷元的化学结构式如式1所示；
优选的，以小鼠给药计，所述的工作浓度为5～50mg/kg。
优选的，所述药物的剂型包括口服剂型。
优选的，所述肝脏疾病由BDL诱导引起。
优选的，所述肝脏疾病由肝胆淤积造成。
本发明还提供了脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗炎症中的应用；所述脱水莫诺苷元的化学结构式如式1所示。
优选的，所述治疗炎症包括抑制NLRP3激活、抑制Caspase-1裂解或减少mature-IL1β的累积。
优选的，所述炎症由BDL诱导或者LPS联合ATP诱导引起。
本发明提供了脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用，所述脱水莫诺苷元的化学结构式如式1所示。经验证，脱水莫诺苷元能够减轻肝脏炎症、减轻肝脏损伤以及改善肝纤维化和/或抗肝纤维化，从而达到预防和/或治疗肝脏疾病的效果。
附图说明
图1为实施例1中2.1节莫诺苷与脱水莫诺苷元体外抗炎活性评价结果；其中，A表示Western blot检测THP-1细胞上清中NLRP3、IL-1β的表达；B表示Western blot检测THP-1细胞中NLRP3、IL-1β的表达；与空白组相比，###P<0.001；与LPS+ATP模型组相比，*P<0.05，**P<0.01，**P<0.001；与LPS+ATP+莫诺苷组相比，aP<0.05，aaP<0.01，aaaP<0.0001；
图2为实施例1中2.2节莫诺苷与脱水莫诺苷元体外抗炎活性评价结果；Westernblot检测HSCs细胞中α-SMA及CollagenⅠ的表达；与空白组相比，###P<0.001；与LPS+ATP模型组相比，*P<0.05，**P<0.01，**P<0.001；与LPS+ATP+莫诺苷组相比，aP<0.05，aaP<0.01；
图3表示脱水莫诺苷元抑制BDL诱导的小鼠肝损伤，其中A～D分别表示血清ALT、AST、TBIL、ALP水平；E为肝脏H&E、Masson染色结果；
图4表示脱水莫诺苷元抑制BDL诱导的小鼠纤维化指标升高；其中，A表示Westernblot检测α-SMA、CollagenⅠ、FN、Vimentin的表达；B表示免疫荧光检测脱水莫诺苷元对α-SMA、CollagenⅠ、FN的影响(200倍下采图)；与Normal组相比，###P<0.001；与手术组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图5表示脱水莫诺苷元抑制BDL诱导的小鼠炎症相关指标升高；其中A表示Westernblot检测NLRP3、F4/80、IL-1β、Caspase-1的表达；B表示免疫荧光检测脱水莫诺苷元对NLRP3、F4/80的影响(200倍下采图)；与Normal组相比，###P<0.001；与手术组相比，*P<0.05，***P<0.001。
具体实施方式
本发明提供了脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物中的应用；所述肝脏疾病包括肝肝损伤和/或纤维化；所述脱水莫诺苷元的化学结构式如式1所示；
在本发明中，所述脱水莫诺苷元购买于成都得思特生物技术有限公司，规格为30mg，CAS.480-18-2。
在本发明中，以小鼠给药计，所述的工作浓度优选为5～50mg/kg，更优选为50mg/kg。
在本发明中，所述药物的剂型优选的包括口服剂型。
在本发明中，所述肝脏疾病优选的由BDL诱导引起。
在本发明中，所述肝脏疾病优选的由肝胆淤积造成；所述肝胆淤积优选的由胆管堵塞引起。
本发明还提供了脱水莫诺苷元在制备预防和/或治疗炎症中的应用；所述脱水莫诺苷元的化学结构式如式1所示。
在本发明中，所述治疗炎症包括抑制NLRP3激活、抑制Caspase-1裂解或减少mature-IL1β的累积。脱水莫诺苷元能够逆转NLRP3的激活，Caspase-1的裂解，导致mature-IL1β的大量累积。
在本发明中，所述炎症优选的包括体外炎症。
在本发明中，所述炎症优选的由BDL诱导或者LPS联合ATP诱导引起。
在本发明中，脱水莫诺苷元能够改善体外炎症，且效果优于莫诺苷。此外，脱水莫诺苷元还能够改善LPS联合ATP诱导的M1型巨噬细胞分化，具有抗炎的作用，对比相同剂量下莫诺苷、脱水莫诺苷元给药后NLRP3、mature IL-1β蛋白表达水平明显降低。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1
一、实验方法
1.1细胞培养与给药
THP-1细胞及LX2细胞分别培养在RPMI-1640及DMEM完全培养基中，于37℃，5％CO2饱和湿度条件的孵育箱中培养。为了探究药物的抗炎作用，取THP-1细胞接种于6孔板中，给予PMA(1mM)诱导其贴壁，给予LPS(1μg/ml)刺激4h联合ATP(3mM)刺激诱导THP-1细胞炎症反应，同时给予不同浓度莫诺苷或脱水莫诺苷元处理4h，收集细胞，评价炎症相关指标的表达情况；另取对数期的LX2细胞接种于6孔板中，待细胞贴壁后，给予TGFβ联合不同浓度莫诺苷或脱水莫诺苷元处理24h，收集细胞用于评价药物的抗纤维化效果。
1.2动物实验
SPF级雄性C57BL/6小鼠(6～8周龄，20±2g)，共54只，购买于杭州启真实验动物科技有限公司，许可证号：SCXK(京)2019-0010，本动物实验按照浙江中医药大学动物实验中心饲养和使用指南，经浙江中医药大学动物伦理委员会批准(批准号：202009A012)进行实验。适应性饲养一周后随机分为六组，每组9只，设置分组为：正常组、假手术组，手术组、手术组+脱水莫诺苷元低剂量组(5mg/kg)、手术组+中剂量组(25mg/kg)、手术组+高剂量组(50m/kg)。模型组及给药组进行胆管结扎手术建立胆汁淤积模型，假手术组进行相同创伤处理，但不进行胆管结扎手术。次日，给药组分别给予不同剂量的脱水莫诺苷元药物灌胃，对照组、手术组、假手术组小鼠给予相同体积的0.25％羧甲基纤维素钠溶液灌胃，1次/天，实验周期为7天，实验结束后对小鼠麻醉后，颈动脉取血处死，收集血清及肝脏用于后续实验。
1.3血清生理生化指标检测
根据上述处理方法得到的各组血清，采用全自动生化分析仪对谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)及碱性磷酸酶(ALP)的水平进行检测。
1.4Western blot法检测
取收集的肝脏及细胞样本，加入含PMSF的RIPA液，经过匀浆-涡旋-离心等步骤得组织/细胞总蛋白样本，采用BCA对蛋白浓度进行测定。取定量的蛋白样本，经SDS-PAGE电泳进行分离，
1)清洗玻璃板：取要用的玻璃板，75％的酒精擦净玻璃板，玻璃板对齐后放入夹中卡紧，垂直卡在架子上准备灌胶。
2)制胶与上样：将擦拭好的玻璃板，两两底部对齐，固定在胶架上，按照所需分离胶的大小，按照表1与表2中比例制备分离胶与浓缩胶。将配制好的分离胶灌入到玻璃夹层中，约5mL，再加入饱和正丁醇液封；待分离胶完全凝固后，弃去饱和正丁醇，水洗后，加入配制好的浓缩胶，插入梳子；待分离胶凝固后，拔掉梳子，用蒸馏水洗涤梳子孔后上样。
3)电泳：向跑胶槽中加入Running Buffer，调整电压80V，待样品完全浓缩，调整电压至100V，待样品跑到胶的底部，停止电泳，转膜。
4)转膜：将PVDF膜事先用甲醇浸泡5min，再将海绵、滤纸放入转印用的转印液中，按照三明治的形式将胶，PVDF膜放入海绵和滤纸中，加紧放入到转印槽中，将电压调至70V，根据所需蛋白量来控制转印时间(恒压或者恒流)。
5)抗体杂交与显色：
a.将含有蛋白的PVDF膜用5％的脱脂奶粉封闭1h，然后室温下用PBST平缓摇动下漂洗4次，时间分别为15min，10min，5min，5min。
b.分别与对应的抗体孵育，将PVDF膜密封于液体中，4℃冰箱孵育过夜。
c.PVDF膜取出后室温下用PBST平缓摇动下漂洗4次，时间分别为15min，10min，5min，5min。加入对应的二抗室温摇床孵育1h。
d.PVDF膜取出后室温下用PBST平缓摇动下漂洗6次，时间分别为15min，10min，5min，5min，5min，5min。
6)显像：加入显色液，避光压胶片3～5min，显影定影完毕。
表1分离胶的配制
表2浓缩胶的配制
1.5组织病理学检测
根据上述处理方法得到的各组于10％福尔马林中保存肝脏样本，固定一周后，取出肝脏样本，使用清水洗去表面福尔马林，用镊子和刀片取出组织并切取厚度为2～4mm的肝脏样本，避免刀片撕扯组织，将该样本放于包埋盒中，流水冲洗过夜，水流避开组织且流速适中。对该样本进行脱水处理，将包埋盒依次放入体积浓度为60％乙醇水溶液-75％乙醇水溶液-85％乙醇水溶液-95％乙醇水溶液-95％乙醇水溶液-100％乙醇-100％乙醇-100％乙醇-二甲苯-二甲苯-石蜡。预先将石蜡，石蜡硬脂酸混合试剂(石蜡∶硬脂酸的质量比＝1∶1)放入60℃烘箱融化，并放入石蜡包埋机中对样本进行包埋处理。待包有组织的蜡块冷却完全凝固，启开包埋盒，将蜡块放于石蜡切片机上，设置厚度为40μm进行粗切至组织最大面积后，改为厚度为4μm，进行细切，使用毛刷和镊子展平组织切片，用粘附性载玻片靠近切片，使切片完整平展吸附于玻片上，作好标记。将切片放入60℃烘箱2h以上至烘干水分，依次进行脱蜡、水化，用PBS清洗切片2次，5min/次，对于H&E染色，于切片上肝脏组织滴加苏木素溶液，使其完全覆盖组织，染色10min流水冲洗8min，切片上肝脏组织滴加伊红溶液2min，使其完全覆盖组织；对于Masson染色，对于切片实验Weigert铁苏木素染核10min，酸性乙醇分化，Masson蓝化液返蓝，丽春红品红染色10min，2％冰醋酸水工作液浸洗，1％磷钼酸水溶液分化5min，苯胺蓝染色5min，对于染色后的玻片，流水冲洗5min，依次放入以下试剂进行脱水处理：体积浓度为75％乙醇水溶液-95％乙醇水溶液-100％乙醇，各10s，放入二甲苯中透明，10min，滴加适量中性树胶于载玻片上，使用盖玻片45°倾斜封片，置于光学显微镜下进行观察、拍摄。
1.6.组织免疫荧光染色
取收集的肝脏样本，剪取豌豆粒大小，平整放于组织支承器，用适量OCT包埋剂完全包裹组织样本，放于冷冻切片机冷冻台，待包埋剂与组织冻结成白色冰体后，放于切片机持承器并扣紧，制成厚度为4μm的冷冻玻片，室温回温10min，于甲醇丙酮溶液(甲醇∶丙酮的体积比＝1∶1)中固定30min后取出，室温挥干残留液体，PBS洗3次，4min/次，用免疫组化笔圈出肝脏组织，滴加5％的山羊血清，使其完全覆盖组织，封闭1h，将玻片垂直扣在滤纸上，吸走多余液体，保持肝脏组织湿润下，分别加入相应的初级抗体，使其完全覆盖组织，4℃湿盒孵育过夜。回收一抗，PBS洗3次，4min/次，加入与初级抗体匹配的次级抗体室温避光孵育1h，PBS洗4次，4min/次，滴加适量含DAPI抗荧光淬灭液于载玻片上，封片并用滤纸吸去多余液体，使用荧光显微镜进行拍摄。
1.7统计学分析
所有实验数据均以均数±标准差表示。各组间比较采用GraphPad Prism(GraphPad Software，San Diego，CA，usa)进行评估。采用单因素方差分析和Tukey多元比较检验进行统计学分析。p值不大于0.05为组间差异有统计学意义。
二、实验结果
2.1莫诺苷与脱水莫诺苷元体外抗炎及抗纤维化活性评价
巨噬细胞中NLRP3小体的活化，会导致caspase1发生裂解成Cleaved-caspase1，进而切割IL1β及IL18使之转换成Mature-IL1β/IL18并释放到胞外，进而加速炎症反应，基于此本部分对炎症相关的NLRP3、IL-1β蛋白表达水平进行检测。通过Western blot对上述相关蛋白在细胞及细胞给药后的上清中表达水平进行检测并统计分析。结果参见图1、表3和表4，结果表明，对比正常组，细胞内及上清中模型组NLRP3、mature IL-1β蛋白表达水平均显著升高，说明LPS联合ATP能诱导THP1分化的巨噬细胞向M1促炎型巨噬细胞分化，而分别给药莫诺苷和脱水莫诺苷元后，NLRP3、mature IL-1β蛋白表达降低，说明莫诺苷、脱水莫诺苷元均能改善LPS联合ATP诱导的M1型巨噬细胞分化，具有抗炎的作用，对比相同剂量下莫诺苷、脱水莫诺苷元给药后NLRP3、mature IL-1β蛋白表达水平，发现给药脱水莫诺苷元后改善炎症效果优于莫诺苷。
表3Western blot检测THP-1细胞上清中NLRP3、IL-1β的表达
表4Western blot检测THP-1细胞中NLRP3、IL-1β的表达
Anti-NLRP3 Mean/GAPDH SD N
N 1 0.01 3
LPS+ATP 1.38 0.03 3
LPS+ATP+莫诺苷-(25μM) 1.33 0.03 3
LPS+ATP+莫诺苷-(100μM) 1.2 0.02 3
LPS+ATP+脱水莫诺苷元-(25μM) 1.16 0.02 3
LPS+ATP+脱水莫诺苷元-(100μM) 0.9 0.03 3
Anti-IL1β Mean/GAPDH SD N
N 1 0.06 3
LPS+ATP 1.68 0.11 3
LPS+ATP+莫诺苷-(25μM) 1.6 0.04 3
LPS+ATP+莫诺苷-(100μM) 1.54 0.05 3
LPS+ATP+脱水莫诺苷元-(25μM) 1.33 0.02 3
LPS+ATP+脱水莫诺苷元-(100μM) 1.06 0.16 3
2.2莫诺苷与脱水莫诺苷元体外抗肝纤维化活性评价
肝纤维化是长期或者反复的炎症反应的结果，主要特征为肝星状细胞的活化，表现为α-SMA及CollagenI的表达升高，为了探究莫诺苷及脱水莫诺苷元的抗纤维化作用，本实验采用TGF-β诱导LX-2细胞活化，并按照上述给药方式给予莫诺苷、脱水莫诺苷元治疗，分析两种药物对肝星状细胞的活化有无抑制作用，并对比两者药效。结果参见图2和表5，通过Western blot实验，发现莫诺苷及脱水莫诺苷元均能抑制LX2细胞的活化，对比相同剂量下莫诺苷、脱水莫诺苷元给药后α-SMA及CollagenI的蛋白表达水平，发现给药脱水莫诺苷元后改善体外抗纤维化效果优于莫诺苷。
表5莫诺苷与脱水莫诺苷元体外抗纤维化活性评价结果
Anti-α-SMA Mean/GAPDH SD N
N 1 0.03 3
LPS+ATP 1.44 0.05 3
LPS+ATP+莫诺苷-(25μM) 1.43 0.02 3
LPS+ATP+莫诺苷-(100μM) 1.2 0.07 3
LPS+ATP+脱水莫诺苷元-(25μM) 0.9 0.11 3
LPS+ATP+脱水莫诺苷元-(100μM) 1 0.07 3
Anti-CollagenI Mean/GAPDH SD N
N 1 0.03 3
LPS+ATP 2.63 0.03 3
LPS+ATP+莫诺苷-(25μM) 1.88 0.02 3
LPS+ATP+莫诺苷-(100μM) 1.8 0.01 3
LPS+ATP+脱水莫诺苷元-(25μM) 1.71 0.07 3
LPS+ATP+脱水莫诺苷元-(100μM) 1.23 0.01 3
2.3脱水莫诺苷元改善BDL诱导的肝脏损伤及纤维化
如图3和表6～9所示，在胆管结扎诱导小鼠肝损伤的模型中，小鼠血清中ALT、AST、TBIL及ALP与正常组相比显著升高，与模型组相比，脱水莫诺苷元的给药能降低上述血生化指标、TBIL及ALP的升高，且呈剂量依赖性；组织病理学结果表明正常组小鼠肝脏肝小叶形态规则，肝细胞核呈圆形且排列整齐，BDL组小鼠正常小叶结构紊乱，纤维间隔增加，肝坏死加重，炎症细胞浸润增多。脱水莫诺苷元的给药能够显著改善BDL诱导的肝脏组织学的改变。Masson结果表明，与正常组相比，BDL组小鼠肝脏门静脉区可见胶原沉积，而脱水莫诺苷元的给药明显改善了这些由BDL引起的胶原沉积(图3中的C)，且呈剂量依赖性，表明脱水莫诺苷元能改善BDL诱导的小鼠肝脏损伤及纤维化表征。
表6血清ALT水平
ALT N1 N2 N3 N4 N5
N 21.2 23.3 20.5 28.5 27.5
Sham 23.1 31.9 24.2 26.4 26.4
BDL 590.5 777.2 511.5 726.7 680.9
BDL+SA-5mg/kg 664.1 770 652.3 655.9 467.5
BDL+SA-25mg/kg 495.8 511.7 523.9 449.7 546.7
BDL+SA-50mg/kg 500.5 373.9 497.3 367.4 543.4
表7血清AST水平
AST N1 N2 N3 N4 N5
N 100.3 107.3 127 126.5 129.8
Sham 127.6 127.6 111.1 104.5 126.5
BDL 697.2 664.2 713.5 789.8 658.6
BDL+SA-5mg/kg 592.1 600.5 666.9 566.5 645.4
BDL+SA-25mg/kg 561.8 665.6 525.2 478.5 646.9
BDL+SA-50mg/kg 593.7 571.2 490.8 564.1 558.8
表8血清TBIL水平
TBIL N1 N2 N3 N4 N5
N 0.71 1.18 1.31 1.15 0.93
Sham 0.77 1 0.68 0.74 0.91
BDL 473.3 451.4 540.46 402.33 453.38
BDL+SA-5mg/kg 438.92 364.36 386.38 439.46 489.57
BDL+SA-25mg/kg 466.56 375.21 391.94 355.7 373.8
BDL+SA-50mg/kg 309.87 265.91 270.38 207.25 277.81
表9血清ALP水平
通过H&E染色、Masson染色，发现正常组小鼠肝脏组织形态完整，细胞核饱满且均匀分布，而手术组小鼠的肝脏组织裂纹较多，间隙较大，细胞核固缩，具有明显的炎症浸润和胶原沉积特征，给予脱水莫诺苷元给药组则对上述组织形态具有改善作用。
2.4脱水莫诺苷元减弱与肝星状细胞激活相关的促纤维化细胞因子表达
α-SMA、CollagenI作为肝纤维化中肝星状细胞活化与胶原沉积相关的指标，FN作为纤维化黏连蛋白，能够通过参与细胞黏附、细胞运动、伤口愈合等过程，Vimentin，主要存在于间充质细胞中，通过相似参与形成I型胶原，基于此，本实验通过检测α-SMA、CollagenI、FN和Vimentin的表达来检测药物的抗纤维化效果。结果参见图4和表10～13，与正常组相比，BDL组小鼠肝脏中α-SMA、CollagenI、FN及Vimentin的蛋白表达明显升高，与BDL组小鼠相比，脱水莫诺苷元的给药能够显著降低上述指标表达的升高，且呈剂量依赖性。与蛋白印迹的结果一致，α-SMA及CollagenI的免疫荧光结果表明，与正常组相比，BDL组小鼠肝脏中绿色荧光表达明显增多，而脱水莫诺苷元的给药能够在一定程度上逆转这一现象的发生，且呈剂量依赖性，由此说明，脱水莫诺苷元具有一定的抗肝纤维化作用。
表10Western blot检测α-SMA的表达
Anti-α-SMA Mean/GAPDH SD N
N 0.46 0.04 4
Sham 0.39 0.04 4
BDL 5.90 0.26 4
BDL+SA-5mg/kg 1.22 0.06 4
BDL+SA-25mg/kg 0.63 0.05 4
BDL+SA-50mg/kg 0.22 0.02 4
表11Western blot检测CollagenⅠ的表达
Anti-CollagenI Mean/GAPDH SD N
N 1.94 0.71 4
Sham 2.60 0.14 4
BDL 10.15 0.85 4
BDL+SA-5mg/kg 7.50 0.48 4
BDL+SA-25mg/kg 5.55 0.15 4
BDL+SA-50mg/kg 3.29 0.32 4
表12Western blot检测FN的表达
Anti-FN Mean/GAPDH SD N
N 0.23 0.03 4
Sham 0.26 0.04 4
BDL 1.86 0.22 4
BDL+SA-5mg/kg 1.34 0.17 4
BDL+SA-25mg/kg 1.20 0.16 4
BDL+SA-50mg/kg 0.84 0.11 4
表13Western blot检测Vimentin的表达
Anti-Vimentin Mean/GAPDH SD N
N 0.78 0.50 4
Sham 0.66 0.40 4
BDL 32.44 0.11 4
BDL+SA-5mg/kg 30.57 0.48 4
BDL+SA-25mg/kg 26.84 2.70 4
BDL+SA-50mg/kg 25.23 2.12 4
2.5脱水莫诺苷元抑制BDL诱导的小鼠肝脏炎症反应
NLRP3作为炎症相关蛋白，在炎症条件下，能与ASC和pro Caspase-1形成炎症小体，pro Caspase-1形成的cleaved Caspase-1能对细胞内促炎因子IL-1β的前体pro IL-1β进行切割，得到能释放至胞外的mature IL-1β。当肝脏炎症发生时，巨噬细胞会募集到损伤部位，F4/80作为巨噬细胞的表面标志物，在炎症发生时大量表达。因此，本部分对NLRP3、F4/80、IL-1β、Caspase-1的蛋白表达进行了检测，结果参见图5和表14～17，结果表明，与正常组相比，BDL组小鼠肝脏中F4/80表达明显增加，随之而来的有NLRP3的激活，Caspase-1的裂解，导致mature-IL1β的大量累积；而脱水莫诺苷元的给药能在一定程度上逆转这一现象的发生，且呈剂量依赖性。与蛋白印记结果一致，免疫荧光结果表明，与正常组相比，BDL组小鼠肝脏中NLRP3(绿色)及F4/80(红色)荧光表达明显增强，与BDL组相比，脱水莫诺苷元的给药能下调由BDL诱导的荧光强度的增加，上述结果表明脱水莫诺苷元能改善BDL诱导的小鼠炎症反应。
表14Western blot检测NLRP3的表达
Anti-NLRP3 Mean/GAPDH SD N
N 0.36 0.02 4
Sham 0.33 0.02 4
BDL 1.11 0.06 4
BDL+SA-5mg/kg 0.93 0.06 4
BDL+SA-25mg/kg 0.79 0.04 4
BDL+SA-50mg/kg 0.73 0.02 4
表15Western blot检测F4/80的表达
Anti-F4/80 Mean/GAPDH SD N
N 1.08 0.11 4
Sham 1.45 0.15 4
BDL 2.45 0.21 4
BDL+SA-5mg/kg 1.72 0.16 4
BDL+SA-25mg/kg 1.66 0.16 4
BDL+SA-50mg/kg 1.41 0.13 4
表16Western blot检测IL-1β的表达
表17Western blot检测Caspase-1的表达
Anti-Caspase1 Mean/GAPDH SD N
N 3.89 0.94 4
Sham 3.55 0.84 4
BDL 13.22 0.95 4
BDL+SA-5mg/kg 11.36 1.21 4
BDL+SA-25mg/kg 7.11 0.83 4
BDL+SA-50mg/kg 4.17 0.92 4
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (2)

1.脱水莫诺苷元在制备治疗肝纤维化的药物中的应用；所述脱水莫诺苷元的化学结构式如式1所示；
式1。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为口服剂型。
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