CN116478111B - 一种组蛋白甲基转移酶抑制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于组蛋白甲基转移酶技术领域。本发明提供了一种组蛋白甲基转移酶抑制剂及其制备方法，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂的结构式为本发明提供了一种具有新骨架的组蛋白甲基转移酶抑制剂，其对组蛋白甲基转移酶的半抑制浓度(IC50)可达127nM。
Description
技术领域
本发明涉及组蛋白甲基转移酶技术领域，尤其涉及一种组蛋白甲基转移酶抑制剂及其制备方法。
背景技术
SMYD2属于SMYD(SET and MYND domain-containing proteins)家族的一员，是一类广泛存在于真核细胞中的组蛋白甲基转移酶。SMYD2不仅是H3K4、H3K36等组蛋白的甲基转移酶，还可修饰EZH2、p53、ERα等非组蛋白；并且，SMYD2还与心血管、神经、消化、运动等各个系统的形成、发育以及免疫系统密切相关。
研究证实，SMYD2会在多种肿瘤组织中过度表达，而在胃癌、胃肠道间质瘤、结肠癌、乳腺癌等癌症上表达具有敏感性和特异性，部分具有肿瘤异源性分布趋势。且SMYD2的表达水平与临床患者的预后不良相关。因此，SMYD2抑制剂有望成为有效的抗肿瘤药物。
SMYD2抑制剂AZ505、LLY-507、BAY-598、EPZ033294和EPZ032597为底物、SAM非竞争性抑制剂；PFI-5为SAM竞争性抑制剂。BAY-598虽然具有一定抗肿瘤细胞增殖活性，但在动物体内单用无效。LLY-507对240种癌细胞株(无论SMYD2是否高表达)都表现出抗增殖活性，推断LLY-507的活性源于脱靶效应而非对SMYD2的抑制作用。因此该领域需要具有新骨架的SMYD2抑制剂来满足临床需要。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足提供一种组蛋白甲基转移酶抑制剂及其制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种组蛋白甲基转移酶抑制剂，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂的结构式为其中，X1为氢原子、甲基或异丙基，X2的结构式为 X2中的-COOH的对位为-NH。
本发明还提供了所述的组蛋白甲基转移酶抑制剂的制备方法，当X1为氢原子时，包含如下步骤：
1)将苯胺类化合物、胺类化合物、物质A和有机溶剂1混合后，混合物和哌嗪类化合物进行反应，得到中间体1；
2)将中间体1、溶剂和氢氧化钠进行反应后，对得到的粗产物进行纯化，得到中间体2；
3)将中间体2和HCl/二恶烷进行反应，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂；
所述哌嗪类化合物的结构式为
作为优选，步骤1)所述苯胺类化合物的结构式为
胺类化合物为三乙胺或三乙醇胺，物质A为三碳酰氯或N,N-碳酰二咪唑，有机溶剂1为二氯甲烷或N,N-二甲基甲酰胺。
作为优选，步骤1)所述苯胺类化合物、胺类化合物、物质A和哌嗪类化合物的摩尔比为0.1～3.8：0.5～11.5：0.1～4.8：0.2～4，苯胺类化合物和有机溶剂1的摩尔体积比为0.1～3.8mmol：2.5～10.5mL；所述混合的温度为0～30℃，混合的时间为1～2h，混合在氮气气氛中进行；所述反应的温度为20～30℃，反应的时间为10～16h。
作为优选，步骤2)所述溶剂为甲醇溶液、乙醇和四氢呋喃中的一种或几种；所述乙醇的体积分数为65～75％，甲醇溶液的体积分数为50～75％；所述中间体1、氢氧化钠和溶剂的摩尔体积比为0.4～1.5mmol：0.5～4mmol：6～12mL。
作为优选，步骤2)所述反应的温度为20～80℃，反应的时间为2～16h；纯化的方法为萃取和/或反相色谱法。
作为优选，步骤3)中间体2和HCl/二恶烷反应的过程中，加入有机溶剂2，有机溶剂2为1,4-二恶烷、丙烯酸乙酯和甲醇中的一种或多种；所述中间体2、有机溶剂2和HCl/二恶烷的摩尔体积比为0.3～0.65mmol：5～10mL：2～10mL；所述反应的温度为20～30℃，反应的时间为1～16h。
本发明还提供了所述的组蛋白甲基转移酶抑制剂的制备方法，当X1为甲基或异丙基时，包含如下步骤：
(1)将有机化合物、三乙胺、乙酸、甲醇和有机溶剂混合，混合物和氰基硼氢化钠进行反应，反应产物进行后处理，得到中间体；
(2)将中间体、乙醇和氢氧化钠进行反应，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂；
所述有机化合物的结构式为
作为优选，步骤(1)所述有机溶剂为丙酮或甲醛溶液，甲醛溶液的质量分数为35～40％；所述有机化合物、三乙胺、乙酸和氰基硼氢化钠的摩尔比为0.8～1.2：1.8～2.2：2.8～3.2：1.8～2.2；所述甲醇和有机溶剂的体积比为8～12：0.4～0.6；所述有机化合物和甲醇的摩尔体积比为0.8～1.2mmol：8～12mL；所述混合的温度为20～30℃，混合的时间为0.5～1.5h，混合在氮气气氛中进行。
作为优选，步骤(1)所述反应的温度为20～30℃，反应的时间为10～12h；步骤(2)所述乙醇的体积分数为65～70％；所述中间体、氢氧化钠和乙醇的摩尔体积比为0.5～0.6mmol：1.5～2mmol：5～7mL；所述反应的温度为60～80℃，反应的时间为12～14h。
本发明的有益效果如下：
本发明提供了一种具有新骨架的组蛋白甲基转移酶抑制剂，其对组蛋白甲基转移酶的半抑制浓度(IC50)可达127nM。
具体实施方式
本发明提供了一种组蛋白甲基转移酶抑制剂，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂的结构式为其中，X1为氢原子、甲基或异丙基，X2的结构式为
X2中的-COOH的对位为-NH。
本发明还提供了所述的组蛋白甲基转移酶抑制剂的制备方法，当X1为氢原子时，包含如下步骤：
1)将苯胺类化合物、胺类化合物、物质A和有机溶剂1混合后，混合物和哌嗪类化合物进行反应，得到中间体1；
2)将中间体1、溶剂和氢氧化钠进行反应后，对得到的粗产物进行纯化，得到中间体2；
3)将中间体2和HCl/二恶烷进行反应，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂；所述哌嗪类化合物的结构式为
本发明中，所述哌嗪类化合物的制备方法，优选为包含如下步骤：
A)将中间体1-1、乙腈、亚硝酸异戊酯和溴化亚铜进行反应，得到中间体1-2；
B)将中间体1-2、异丙醇、中间体1-3和三乙胺进行反应，得到中间体1-4；
C)将中间体1-4、甲醇、氯化铵溶液和铁粉进行反应，得到哌嗪类化合物。
本发明中，步骤A)所述中间体1-1的结构式优选为
本发明中，步骤A)所述中间体1-1、亚硝酸异戊酯、溴化亚铜和乙腈的摩尔体积比优选为11～12mmol：110～120mmol：110～120mmol：140～160mL，进一步优选为11.2～11.8mmol：112～118mmol：112～118mmol：145～155mL，更优选为11.4～11.6mmol：114～116mmol：114～116mmol：148～152mL。
本发明中，步骤A)所述反应的温度优选为70～90℃，进一步优选为75～85℃，更优选为80℃；反应的时间优选为12～18h，进一步优选为14～16h，更优选为15h；反应优选为在氮气气氛中进行；反应结束后，优选为将溶液进行浓缩后，洗涤粗产物，洗涤的试剂优选为丙烯酸乙酯。
本发明中，步骤B)所述中间体1-2的结构式优选为所述中间体1-3的结构式优选为/>
本发明中，步骤B)所述中间体1-2、中间体1-3、三乙胺和异丙醇的摩尔体积比优选为8～10mmol：8～10mmol：16～20mmol：25～35mL，进一步优选为8.5～9.5mmol：8.5～9.5mmol：17～19mmol：28～32mL，更优选为9mmol：9mmol：18mmol：30mL。
本发明中，步骤B)所述反应的温度优选为70～90℃，进一步优选为75～85℃，更优选为80℃；反应的时间优选为12～18h，进一步优选为14～16h，更优选为15h；反应优选为在氮气气氛中进行；反应结束后，优选为将溶液进行浓缩后，纯化粗产物，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤C)所述中间体1-4的结构式优选为所述氯化铵溶液的浓度优选为25～30mmol/L。
本发明中，步骤C)所述中间体1-4、氯化铵溶液、铁粉和甲醇的摩尔体积比优选为2.5～3mmol：13～14mmol：13～14mmol：11～13mL，进一步优选为2.6～2.8mmol：13.2～13.8mmol：13.2～13.8mmol：11.5～12.5mL，更优选为2.7mmol：13.4～13.6mmol：13.4～13.6mmol：12mL。
本发明中，步骤C)所述反应的温度优选为70～90℃，进一步优选为75～85℃，更优选为80℃；反应的时间优选为1～3h，进一步优选为1.5～2.5h，更优选为2h；反应优选为在氮气气氛中进行；反应结束后，优选为将溶液进行过滤并浓缩后，纯化粗产物，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤1)所述苯胺类化合物的结构式优选为
胺类化合物优选为三乙胺或三乙醇胺，物质A优选为三碳酰氯或N,N-碳酰二咪唑，有机溶剂1优选为二氯甲烷或N,N-二甲基甲酰胺。
本发明步骤1)中，苯胺类化合物的制备方法，优选为包含如下步骤：
(A)将中间体2-1、二甲基亚砜、多聚甲醛和苯酚钠进行反应，得到中间体2-2；
(B)将中间体2-2、异吲哚啉-1,3-二酮、三苯基膦、四氢呋喃和偶氮二甲酸二乙酯混合后进行反应，得到中间体2-3；
(C)将中间体2-3、乙醇和氢氧化肼混合后进行反应，得到中间体2-4；
(D)将中间体2-4、甲醇和二碳酸二叔丁酯混合后进行反应，得到中间体2-5；
(E)将中间体2-5、甲醇和钯碳混合后进行反应，得到苯胺类化合物
本发明中，步骤(A)中所述中间体2-1的结构式优选为中间体2-2的结构式为/>
本发明中，步骤(A)所述中间体2-1、多聚甲醛、苯酚钠和二甲基亚砜的摩尔体积比优选为23～24mmol：23.5～24.5mmol：26～26.5mmol：75～85mL，进一步优选为23.5mmol：24mmol：26.4mmol：80mL；所述反应的温度优选为70～90℃，进一步优选为72～85℃，更优选为74～80℃，反应的时间优选为2～4h，进一步优选为2.5～3.5h，更优选为3h，反应优选在避光条件下进行。
本发明中，步骤(A)反应结束后，优选为将反应混合物和水混合，然后进行萃取，之后对有机相顺次进行干燥、过滤、浓缩后进行纯化；所述水与所述二甲基亚砜的体积比优选为95～105：75～85，进一步优选为100：80；萃取的试剂优选为乙酸乙酯，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；；干燥的试剂优选为硫酸镁，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤(B)所述将中间体2-2、异吲哚啉-1,3-二酮、三苯基膦、四氢呋喃和偶氮二甲酸二乙酯混合的温度优选为-1～1℃，进一步优选为0℃，混合优选为在氮气气氛中进行；所述中间体2-2、异吲哚啉-1,3-二酮、三苯基膦、偶氮二甲酸二乙酯和四氢呋喃的摩尔体积比优选为10～11mmol：
13～14mmol：15～16mmol：15～16mmol：35～45mL，进一步优选为10.2～10.8mmol：13.2～13.8mmol：15.2～15.8mmol：15.2～15.8mmol：38～42mL，更优选为10.5mmol：13.5mmol：15.5mmol：15.5mmol：40mL；所述反应的温度优选为20～30℃，进一步优选为24～26℃，更优选为25℃，反应的时间优选为14～18h，进一步优选为15～17h，更优选为16h。
本发明中，步骤(B)反应结束后，优选为将反应混合物和水混合，然后进行萃取，之后对有机相顺次进行洗涤、干燥、过滤，将滤液浓缩后进行纯化；所述水与所述四氢呋喃的体积比优选为95～105：35～45，进一步优选为98～102：38～42，更优选为100：40；萃取的试剂优选为二氯甲烷，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；每次萃取时，二氯甲烷的用量优选为45～55mL，进一步优选为50mL；洗涤的试剂优选为饱和食盐水，洗涤的次数优选为4～6次，进一步优选为5次；每次洗涤时，饱和食盐水的用量优选为90～110mL，进一步优选为100mL；干燥的试剂优选为无水硫酸钠，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤(C)所述中间体2-3的结构式优选为中间体2-4的结构式为/>乙醇的体积分数优选为90～95％，进一步优选为95％。
本发明中，步骤(C)所述将中间体2-3、乙醇和氢氧化肼混合的温度优选为-1～1℃，进一步优选为0℃，混合优选为在氮气气氛中进行；所述中间体2-3、氢氧化肼和乙醇的摩尔体积比优选为8～9mmol：26～26.5mmol：25～35mL，进一步优选为8.2～8.8mmol：26.2～26.4mmol：28～32mL，更优选为8.6mmol：26.3mmol：30mL；所述反应的温度优选为65～75℃，进一步优选为68～72℃，更优选为70℃，反应的时间优选为1.5～2.5h，进一步优选为1.8～2.2h，更优选为2h。
本发明中，步骤(C)反应结束后，优选为将反应混合物冷却后，与水混合，然后进行萃取，之后对有机相顺次进行洗涤、干燥、过滤，将滤液浓缩后进行纯化；所述水与乙醇的体积比优选为95～105：25～35，进一步优选为98～102：28～32，更优选为100：30；冷却的温度优选为20～25℃，进一步优选为22～23℃，萃取的试剂优选为二氯甲烷，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；每次萃取时，二氯甲烷的用量优选为45～55mL，进一步优选为50mL；洗涤的试剂优选为饱和食盐水，洗涤的次数优选为4～6次，进一步优选为5次；每次洗涤时，饱和食盐水的用量优选为90～110mL，进一步优选为100mL；干燥的试剂优选为无水硫酸钠，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤(D)所述中间体2-4、甲醇和二碳酸二叔丁酯混合的顺序优选为先将中间体2-4和甲醇混合，再加入二碳酸二叔丁酯混合，中间体2-4和甲醇混合的条件优选为冰浴、氮气气氛。
本发明中，步骤(D)所述中间体2-4、二碳酸二叔丁酯和甲醇的摩尔体积比优选为5～6mmol：6～6.5mmol：16～20mL，进一步优选为5.2～5.8mmol：6.2～6.4mmol：17～19mL，更优选为5.4～5.6mmol：6.3mmol：18mL；所述反应的温度优选为20～30℃，进一步优选为24～26℃，更优选为25℃，反应的时间优选为4～6h，进一步优选为4.5～5.5h，更优选为5h。
本发明中，步骤(D)反应结束后，优选为将反应混合物与水混合，然后进行萃取，之后对有机相顺次进行洗涤、干燥、过滤，将滤液浓缩后进行纯化；所述水与甲醇的体积比优选为95～105：16～20，进一步优选为98～102：17～19，更优选为100：18；萃取的试剂优选为二氯甲烷，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；每次萃取时，二氯甲烷的用量优选为45～55mL，进一步优选为50mL；洗涤的试剂优选为饱和食盐水，洗涤的次数优选为4～6次，进一步优选为5次；每次洗涤时，饱和食盐水的用量优选为90～110mL，进一步优选为100mL；，干燥的试剂优选为无水硫酸钠，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤(E)所述中间体2-5的结构式为所述中间体2-5和甲醇的摩尔体积比优选为4.5～5mmol：25～35mL，进一步优选为4.6～4.8mmol：28～32mL，更优选为4.7mmol：30mL，中间体2-5和钯碳的摩尔质量比优选为4.5～5mmol：0.13～0.16g，进一步优选为4.8mmol：0.15g。
本发明中，步骤(E)所述中间体2-5、甲醇和钯碳混合优选为在氢气气氛中进行，反应的温度优选为20～30℃，进一步优选为24～26℃，更优选为25℃，反应的时间优选为4～6h，进一步优选为5h；反应结束后，优选为对反应混合物顺次进行过滤和浓缩。
本发明步骤1)中，苯胺类化合物的制备方法，优选为包含如下步骤：
A.将中间体6-1、N-溴代琥珀酰亚胺、过氧化二苯甲酰和四氯化碳混合后进行反应，得到中间体6-2；
B.将中间体6-2、甲醇钠和甲醇混合后进行反应，得到中间体6-3；
C.将中间体6-3、甲醇和钯碳混合后进行反应，得到
发明中，步骤A所述中间体6-1的结构式优选为中间体6-2的结构式优选为/>所述中间体6-1、N-溴代琥珀酰亚胺、过氧化二苯甲酰和四氯化碳混合的顺序优选为先将中间体6-1、N-溴代琥珀酰亚胺和四氯化碳混合，然后再加入过氧化二苯甲酰混合；中间体6-1、N-溴代琥珀酰亚胺和四氯化碳混合的温度优选为20～30℃，进一步优选为25℃，混合优选为在氮气气氛中进行。
本发明中，步骤A所述中间体6-1、N-溴代琥珀酰亚胺、过氧化二苯甲酰和四氯化碳的摩尔体积比优选为26～27mmol：26.5～27mmol：2.5～3mmol：70～90mL，进一步优选为26.5mmol：26.8mmol：2.8mmol：80mL；所述反应的温度优选为20～30℃，进一步优选为25℃，反应的时间优选为14～18h，进一步优选为16h。
本发明中，步骤B所述中间体6-2、甲醇钠和甲醇混合的顺序优选为先将中间体6-2和甲醇混合，然后再加入甲醇钠混合；中间体6-2和甲醇混合的温度优选为20～30℃，进一步优选为25℃，混合优选为在氮气气氛中进行。
本发明中，步骤B所述中间体6-2、甲醇钠和甲醇的摩尔体积比优选为10.5～11mmol：21～22mmol：28～32mL，进一步优选为10.8mmol：21.5mmol：30mL；所述反应的温度优选为20～30℃，进一步优选为25℃，反应的时间优选为14～18h，进一步优选为15～17h，更优选为16h。
本发明中，步骤A和步骤B所述反应结束后，独立的优选为将反应混合物冷却后，与水混合，然后进行萃取，之后对有机相顺次进行洗涤、干燥、过滤，将滤液浓缩后进行纯化；所述水与四氯化碳的体积比独立的优选为95～105：70～90，进一步优选为98～102：75～85，更优选为100：80；冷却的温度优选为20～25℃，进一步优选为25℃；萃取的试剂优选为二氯甲烷，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；每次萃取时，二氯甲烷的用量优选为45～55mL，进一步优选为50mL；洗涤的试剂优选为饱和食盐水，洗涤的次数优选为4～6次，进一步优选为5次；每次洗涤时，饱和食盐水的用量优选为90～110mL，进一步优选为100mL；干燥的试剂优选为无水硫酸钠，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤C所述中间体6-3的结构式优选为所述中间体6-3和甲醇的摩尔体积比优选为6.5～7mmol：14～16mL，进一步优选为6.8mmol：15mL，中间体6-3和钯碳的摩尔质量比优选为6.5～7mmol：0.14～0.16g，进一步优选为6.8mmol：0.15g，钯碳和甲醇的质量体积比优选为0.14～0.16g：14～16mL，进一步优选为0.15g：15mL。
本发明中，步骤C所述中间体6-3、甲醇和钯碳混合的顺序优选为先将中间体6-3和甲醇混合，然后再加入钯碳混合；中间体6-3和甲醇混合的温度优选为20～30℃，进一步优选为22～28℃，更优选为24～26℃，混合优选为在氢气气氛中进行。
本发明中，步骤C所述反应的温度优选为20～25℃，进一步优选为22～24℃，更优选为23℃，反应的时间优选为14～18h，进一步优选为16h；反应结束后，优选为将反应混合物顺次进行过滤、浓缩和纯化，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤1)所述苯胺类化合物、胺类化合物、物质A和哌嗪类化合物的摩尔比优选为0.1～3.8：0.5～11.5：0.1～4.8：0.2～4，进一步优选为1.1～2.8：3.5～8.5：1.1～3.8：1.2～3，更优选为1.5～2.5：5.5～6.5：2～3.5：2～2.5；苯胺类化合物和有机溶剂1的摩尔体积比优选为0.1～3.8mmol：2.5～10.5mL，进一步优选为1.5～2.6mmol：5.5～7.5mL，更优选为1.8～2.2mmol：6～7mL；所述混合的温度优选为0～30℃，进一步优选为10～25℃，更优选为15～20℃；混合的时间优选为1～2h，进一步优选为1.2～1.8h，更优选为1.4～1.6h；混合优选为在氮气气氛中进行；所述反应的温度优选为20～30℃，进一步优选为22～28℃，更优选为24～26℃；反应的时间优选为10～16h，进一步优选为为12～15h，更优选为13～14h。
本发明中，步骤1)反应结束后，优选为调节溶液pH值，然后对其进行提取并浓缩，之后纯化粗产物；调节溶液pH值所用的试剂优选为碳酸氢钠溶液，碳酸氢钠溶液的浓度优选为1.5～2.5mmol，进一步优选为2mmol；溶液pH值优选为调至7.5～8，提取的试剂优选为丙烯酸乙酯，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤1)反应结束后，优选为将反应混合物和水混合，然后进行萃取，之后对有机相顺次进行洗涤、干燥、过滤，将滤液浓缩后进行纯化；所述水与步骤1)所述有机溶剂1的体积比优选为90～100：2.5～10.5，进一步优选为92～98：4.5～8.5，更优选为94～96：6～7；萃取的试剂优选为二氯甲烷，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；每次萃取时，二氯甲烷的用量优选为45～55mL，进一步优选为50mL；洗涤的试剂优选为饱和食盐水，洗涤的次数优选为4～6次，进一步优选为5次；每次洗涤时，饱和食盐水的用量优选为90～110mL，进一步优选为100mL；干燥的试剂优选为无水硫酸钠，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法。
本发明中，步骤2)所述溶剂优选为甲醇溶液、乙醇和四氢呋喃中的一种或几种；所述乙醇的体积分数优选为65～75％，进一步优选为68～72％，更优选为70％，甲醇溶液的体积分数优选为50～75％，进一步优选为55～70％，更优选为60～65％；所述中间体1、氢氧化钠和溶剂的摩尔体积比优选为0.4～1.5mmol：0.5～4mmol：6～12mL，进一步优选为0.8～1.2mmol：1.5～3mmol：8～10mL，更优选为1mmol：2～2.5mmol：8.5～9mL。
本发明中，步骤2)所述反应的温度优选为20～80℃，进一步优选为30～70℃，更优选为40～60℃；反应的时间优选为2～16h，进一步优选为5～13h，更优选为8～10h；纯化的方法优选为萃取和/或反相色谱法。
本发明中，步骤2)反应结束后，优选为将反应混合物顺次进行冷却、中和、萃取，然后对有机相顺次进行洗涤、干燥、过滤，将滤液浓缩后进行纯化；所述冷却的温度优选为-1～1℃，进一步优选为0℃，中和的试剂优选为盐酸，盐酸的浓度优选为0.5～1.5mmol/L，进一步优选为1mmol/L；中和后混合物的pH值优选为6～7，进一步优选为7；萃取的试剂优选为二氯甲烷，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；每次萃取时，二氯甲烷的用量优选为45～55mL，进一步优选为50mL；洗涤的试剂优选为饱和食盐水，洗涤的次数优选为4～6次，进一步优选为5次；每次洗涤时，饱和食盐水的用量优选为90～110mL，进一步优选为100mL；干燥的试剂优选为无水硫酸钠，纯化的方法优选为反相色谱法。
本发明中，步骤2)反应结束后，优选为将反应混合物顺次进行冷却、中和、纯化；冷却的温度优选为-1～1℃，进一步优选为0℃，中和的试剂优选为盐酸，盐酸的浓度优选为0.5～1.5mmol/L，进一步优选为1mmol/L；中和后混合物的pH值优选为6～7，进一步优选为7；纯化的方法优选为反相色谱法。
本发明中，步骤2)反应结束后，优选为将反应混合物顺次进行冷却、中和、过滤，然后对固体进行洗涤；冷却的温度优选为-1～1℃，进一步优选为0℃，中和的试剂优选为盐酸，盐酸的浓度优选为0.5～1.5mmol/L，进一步优选为1mmol/L；中和后混合物的pH值优选为6～7，进一步优选为7；洗涤优选为顺次经过甲醇和丙烯酸乙酯进行洗涤。
本发明中，步骤2)反应结束后，优选为减压蒸馏去除溶剂，然后调节溶液pH值，之后顺次进行萃取、干燥和浓缩；调节溶液pH值的试剂优选为盐酸，盐酸的浓度优选为0.5～1.5mmol/L，进一步优选为1mmol/L；溶液的pH值优选为调至6～7，进一步优选为7，萃取的试剂优选为乙酸乙酯，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；每次萃取时，乙酸乙酯的用量优选为45～55mL，进一步优选为50mL；干燥的试剂优选为无水硫酸钠。
本发明中，步骤3)中间体2和HCl/二恶烷反应的过程中，优选为加入有机溶剂2，有机溶剂2优选为1,4-二恶烷、丙烯酸乙酯和甲醇中的一种或多种；所述中间体2、有机溶剂2和HCl/二恶烷的摩尔体积比优选为0.3～0.65mmol：5～10mL：2～10mL，进一步优选为0.4～0.55mmol：6～9mL：4～8mL，更优选为0.5mmol：7～8mL：5～6mL；所述反应的温度优选为20～30℃，进一步优选为22～28℃，更优选为24～26℃；反应的时间优选为1～16h，进一步优选为5～12h，更优选为7～10h。
本发明中，步骤3)所述反应结束后，优选为对反应产物顺次进行去溶剂、重结晶和过滤，重结晶过程中所用的溶剂为甲醇。
本发明中，步骤3)所述反应结束后，优选为将反应产物顺次进行浓缩、调pH、过滤和洗涤，调pH所用的试剂优选为碳酸氢钠溶液，碳酸氢钠溶液的浓度优选为1.5～2.5mmol/L，进一步优选为2mmol；pH值优选为调至6～7，进一步优选为7，洗涤优选为顺次经过乙腈和水洗涤，乙腈和水的用量独立的优选为HCl/二恶烷用量的2～4倍，进一步优选为3倍。
本发明中，步骤3)所述反应结束后，优选为对反应产物进行浓缩。
本发明还提供了所述的组蛋白甲基转移酶抑制剂的制备方法，当X1为甲基或异丙基时，包含如下步骤：
(1)将有机化合物、三乙胺、乙酸、甲醇和有机溶剂混合，混合物和氰基硼氢化钠进行反应，反应产物进行后处理，得到中间体；
(2)将中间体、乙醇和氢氧化钠进行反应，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂；
所述有机化合物的结构式为
本发明中，步骤(1)所述有机溶剂优选为丙酮或甲醛溶液，甲醛溶液的质量分数优选为35～40％，进一步优选为37～39％，更优选为38％；所述有机化合物、三乙胺、乙酸和氰基硼氢化钠的摩尔比优选为0.8～1.2：1.8～2.2：2.8～3.2：1.8～2.2，进一步优选为0.9～1.1：1.9～2.1：2.9～3.1：1.9～2.1，更优选为1：2：3：2；所述甲醇和有机溶剂的体积比优选为8～12：0.4～0.6，进一步优选为9～11：0.45～0.55，更优选为10：0.5；所述有机化合物和甲醇的摩尔体积比优选为0.8～1.2mmol：8～12mL，进一步优选为0.9～1.1mmol：9～11mL，更优选为1mmol：10mL；所述混合的温度优选为20～30℃，进一步优选为22～28℃，更优选为24～26℃；混合的时间优选为0.5～1.5h，进一步优选为0.8～1.2h，更优选为1h；混合优选为在氮气气氛中进行。
本发明中，步骤(1)所述反应的温度优选为20～30℃，进一步优选为22～28℃，更优选为24～26℃；反应的时间优选为10～12h，进一步优选为10.5～11.5h，更优选为11h；步骤(2)所述乙醇的体积分数优选为65～70％，进一步优选为66～68％，更优选为67％；所述中间体、氢氧化钠和乙醇的摩尔体积比优选为0.5～0.6mmol：1.5～2mmol：5～7mL，进一步优选为0.52～0.58mmol：1.6～1.8mmol：5.5～6.5mL，更优选为0.54～0.56mmol：1.7mmol：6mL；所述反应的温度优选为60～80℃，进一步优选为65～75℃，更优选为70℃；反应的时间优选为12～14h，进一步优选为12.5～13.5h，更优选为13h。
本发明中，步骤(1)所述反应结束后，优选为将反应混合物冷却后，与水混合，然后进行萃取，之后对有机相顺次进行洗涤、干燥、过滤，将滤液浓缩后进行纯化；所述水与甲醇的体积比优选为95～105：8～12，进一步优选为98～102：9～11，更优选为100：10；冷却的温度优选为20～25℃，进一步优选为22～24℃；萃取的试剂优选为二氯甲烷，萃取的次数优选为2～4次，进一步优选为3次；每次萃取时，二氯甲烷的用量优选为45～55mL，进一步优选为50mL；洗涤的试剂优选为饱和食盐水，洗涤的次数优选为4～6次，进一步优选为5次；每次洗涤时，饱和食盐水的用量优选为90～110mL，进一步优选为100mL；干燥的试剂优选为无水硫酸钠，纯化的方法优选为硅胶柱色谱法，
本发明中，步骤(2)所述反应结束后，优选为将反应混合物顺次进行冷却、中和、过滤，然后对固体进行洗涤；冷却的温度优选为-1～1℃，进一步优选为0℃，中和的试剂优选为盐酸，盐酸的浓度优选为0.5～1.5mmol/L，进一步优选为1mmol/L；中和后混合物的pH值优选为6～7，进一步优选为7；洗涤优选为顺次经过甲醇和丙烯酸乙酯进行洗涤。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1～9中的哌嗪类化合物的制备方法如下：
将11.3mmol中间体1-1、150mL乙腈、113mmol亚硝酸异戊酯和113mmol溴化亚铜在80℃的氮气气氛下反应14h，然后将溶液进行浓缩后，采用丙烯酸乙酯洗涤粗产物，得到中间体1-2；将9mmol中间体1-2、9mmol中间体1-3、18mmol三乙胺和30mL异丙醇在80℃的氮气气氛下反应16h，然后将溶液进行浓缩后，通过硅胶色谱法纯化粗产物，得到中间体1-4；将2.7mmol、13.7mmol浓度为25mmol/L的氯化铵溶液、13.7mmol铁粉和12mL甲醇在80℃的氮气气氛下反应2h，然后将溶液过滤并浓缩后，通过硅胶色谱法纯化粗产物，得到哌嗪类化合物。
实施例1
将0.2mmol0.6mmol三乙胺、0.1mmol三碳酰氯和3mL二氯甲烷在0℃、氮气气氛下混合2h，然后加入0.27mmol哌嗪类化合物在25℃下反应12h后，用碳酸氢钠溶液将溶液的pH值调节至7.5，然后用丙烯酸乙酯进行提取并浓缩，通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，得到中间体1/>
将0.56mmol中间体1、1.25mmol氢氧化钠和6mL体积分数为65％的乙醇在60℃下反应14h，然后将反应混合物冷却至0℃，用浓度为1mmol/L的盐酸将混合物的pH值调节至7，采用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过反相色谱法纯化，得到中间体2
将0.384mmol中间体2和5mLHCl/二恶烷在25℃下反应15h后，对反应产物进行去溶剂处理，然后将其从甲醇中重结晶，过滤得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
实施例2
将23.9mmol中间体2-1、24mmol多聚甲醛、26.39mmol苯酚钠和80mL二甲基亚砜在80℃、避光条件下反应3h后，将反应混合物和100mL去离子水混合，然后用乙酸乙酯萃取混合物3次，对有机相用硫酸镁进行干燥，之后将其经过过滤、浓缩、通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体2-2；将10.45mmol中间体2-2、13.59mmol异吲哚啉-1,3-二酮、15.68mmol三苯基膦、15.68mmol偶氮二甲酸二乙酯和40mL四氢呋喃在25℃下反应16h后，将反应混合物和100mL去离子水混合，然后用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体2-3；
将8.69mmol中间体2-3、26.07mmol氢氧化肼和30mL体积分数为95％的乙醇在0℃、氮气气氛中混合后，将混合物在70℃下反应2h，冷却至25℃后，将反应混合物和100mL去离子水混合，采用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体2-4；在氮气气氛、冰浴条件下，将5.52mmol中间体2-4和18mL甲醇混合后，加入6.08mmol二碳酸二叔丁酯在25℃下反应5h，然后将反应混合物和100mL去离子水混合，采用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体2-5；
在25℃、氢气气氛中，将4.59mmol中间体2-5、30mL甲醇和0.15g钯碳反应5h，然后对反应混合物进行过滤和浓缩，得到
将1.47mmol4.41mmol三乙醇胺、1.62mmol N,N-碳酰二咪唑和10mL二氯甲烷在25℃、氮气气氛下混合1h，然后加入1.62mmol哌嗪类化合物在30℃下反应16h后，将反应混合物和100mL去离子水混合，用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体1
将0.61mmol中间体1、1.22mmol氢氧化钠和6mL体积分数为67％的乙醇在70℃下反应12h，然后将反应混合物冷却至0℃，用浓度为1mmol/L的盐酸将混合物的pH值调节至7，采用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过反相色谱法纯化，得到中间体2
将0.42mmol中间体2、5mLHCl/二恶烷和5mL1,4-二恶烷在30℃下反应16h后，将反应产物进行浓缩，然后用浓度为2mmol/L的碳酸氢钠溶液将溶液的pH值调节至7，过滤混合物，并用20mL乙腈和20mL去离子水洗涤固体，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
实施例3
将1.12mmol3.35mmol三乙醇胺、1.17mmol N,N-碳酰二咪唑和10mL二氯甲烷在25℃、氮气气氛下混合1h，然后加入1.23mmol哌嗪类化合物在28℃下反应16h后，将反应混合物和100mL去离子水混合，用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体1
将0.66mmol中间体1、0.66mmol氢氧化钠和6mL体积分数为67％的乙醇在80℃下反应10h，然后将反应混合物冷却至0℃，用浓度为1mmol/L的盐酸将混合物的pH值调节至7，通过反相色谱法纯化粗产物，得到中间体2
将0.38mmol中间体2、5mLHCl/二恶烷和5mL丙烯酸乙酯在30℃下反应16h后，将反应产物进行浓缩，然后用浓度为2mmol/L的碳酸氢钠溶液将溶液的pH值调节至6，过滤混合物，并用20mL乙腈和20mL去离子水洗涤固体，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
实施例4
将1.34mmol4mmol三乙胺、1.5mmolN,N-碳酰二咪唑和10mL二氯甲烷在24℃、氮气气氛下混合1h，然后加入1.48mmol哌嗪类化合物在25℃下反应16h后，将反应混合物和100mL去离子水混合，用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体1
将0.49mmol中间体1、0.98mmol氢氧化钠和6mL体积分数为70％的乙醇在70℃下反应8h，然后将反应混合物冷却至0℃，用浓度为1mmol/L的盐酸将混合物的pH值调节至7，采用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)后，通过反相色谱法纯化粗产物，得到中间体2
将0.3mmol中间体2、5mLHCl/二恶烷和5mL丙烯酸乙酯在28℃下反应16h后，将反应产物进行浓缩，然后用浓度为2mmol/L的碳酸氢钠溶液将溶液的pH值调节至7，过滤混合物，并用20mL乙腈和20mL去离子水洗涤洗涤固体，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
实施例5
将3mmol8.9mmol三乙胺、3.25mmol N,N-碳酰二咪唑和10mL二氯甲烷在25℃、氮气气氛下混合1.2h，然后加入3.25mmol哌嗪类化合物在30℃下反应10h后，将反应混合物和100mL去离子水混合，用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体1
将0.67mmol中间体1、2.7mmol氢氧化钠、8mL体积分数为50％的甲醇溶液和4mL四氢呋喃在65℃下反应16h，然后将反应混合物冷却至0℃，用浓度为1mmol/L的盐酸将混合物的pH值调节至6，过滤混合物，用甲醇和丙烯酸乙酯洗涤固体，得到中间体2
将0.61mmol中间体2、10mLHCl/二恶烷和10mL1,4-二恶烷在26℃下反应1h后，将反应产物进行浓缩，然后用浓度为2mmol/L的碳酸氢钠溶液将溶液的pH值调节至6，过滤混合物，并用20mL乙腈和20mL去离子水洗涤固体，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
实施例6
在25℃、氮气气氛中，将26.62mmol中间体6-1、26.9mmol N-溴代琥珀酰亚胺和80mL四氯化碳混合后，加入2.67mmol过氧化二苯甲酰，在25℃下反应16h后，将反应混合物冷却至20℃，加入100mL去离子水混合，然后用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体6-2；在25℃、氮气气氛中，将10.95mmol中间体6-2和30mL甲醇混合后，加入21.89mmol甲醇钠，在25℃下反应16h，然后将反应混合物冷却至20℃，加入100mL去离子水混合，然后用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体6-3；
在25℃、氢气气氛中，将6.66mmol中间体6-3和15mL甲醇混合后，加入0.15g钯碳，然后将其在25℃下反应16h，然后过滤混合物，将滤液进行浓缩后，通过柱色谱纯化，得到
将3.69mmol11.07mmol三乙胺、4.8mmol N,N-碳酰二咪唑和10mL二氯甲烷在25℃、氮气气氛下混合1h，然后加入3.69mmol哌嗪类化合物在30℃下反应10h后，将反应混合物和100mL去离子水混合，用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体1
将1.27mmol中间体1、3.81mmol氢氧化钠和6mL体积分数为75％的甲醇溶液在20℃下反应2h，然后减压蒸馏去除甲醇，用浓度为1mmol/L的盐酸将溶液的pH值调节至7后，用乙酸乙酯萃取3次(每次萃取时，乙酸乙酯的用量为50mL)，用无水硫酸钠干燥并浓缩，得到中间体2
将0.33mmol中间体2、2mLHCl/二恶烷和5mL甲醇在25℃下反应1h后，将反应产物进行浓缩，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
实施例7
在25℃、氮气气氛中，将1mmol2mmol三乙胺、3mmol乙酸、10mL甲醇和0.5mL丙酮下混合1.5h后，加入2mmol氰基硼氢化钠在30℃下反应12h，然后将反应混合物冷却至20℃，加入100mL去离子水混合，用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体
将0.58mmol中间体、6mL体积分数为65％的乙醇和1.76mmol氢氧化钠在70℃下反应13h，然后将反应混合物冷却至0℃，用浓度为1mmol/L的盐酸将混合物的pH值调节至7后，过滤混合物，用甲醇和丙烯酸乙酯洗涤固体，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
实施例8
将3.69mmol11.07mmol三乙胺、4.8mmol N,N-碳酰二咪唑和10mLN,N-二甲基甲酰胺在25℃、氮气气氛下混合1h，然后加入3.69mmol哌嗪类化合物在25℃下反应10h后，将反应混合物和100mL去离子水混合，用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体1
将1.27mmol中间体1、3.81mmol氢氧化钠和8mL体积分数为75％的甲醇溶液在25℃下反应2h，然后减压蒸馏去除甲醇，用浓度为1mmol/L的盐酸将溶液的pH值调节至6后，用乙酸乙酯萃取3次(每次萃取时，乙酸乙酯的用量为50mL)，用无水硫酸钠干燥并浓缩，得到中间体2
将0.33mmol中间体2、2mLHCl/二恶烷和5mL甲醇在25℃下反应1h后，将反应产物进行浓缩，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
实施例9
在25℃、氮气气氛中，将1mmol2mmol三乙胺、3mmol乙酸、10mL甲醇和0.5mL质量分数为37％的甲醛溶液混合1h后，加入2mmol氰基硼氢化钠在30℃下反应10h，然后将反应混合物冷却至25℃，加入100mL去离子水混合，用二氯甲烷萃取3次(每次萃取时，二氯甲烷的用量为50mL)，将有机相用饱和食盐水洗涤5次(每次洗涤时，饱和食盐水的用量为100mL)，用无水硫酸钠干燥后过滤，将滤液浓缩后通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体/>
将0.58mmol中间体、6mL体积分数为65％的乙醇和1.76mmol氢氧化钠在70℃下反应14h，然后将反应混合物冷却至0℃，用浓度为1mmol/L的盐酸将混合物的pH值调节至7后，过滤混合物，用甲醇和丙烯酸乙酯洗涤固体，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂
使用Echo机器，在384孔板上用缓冲液(缓冲液由50mM的Tris-HCl(pH9.0)，0.01％Tween-20和1mM的DTT组成)将实施例1～9的组蛋白甲基转移酶抑制剂稀释3倍后，加入5μL/孔浓度为100nM的组蛋白甲基转移酶，每块测试板都设置Sinefugin作为阳性对照，二甲基亚砜作为阴性对照。在转速为1000rpm下，将测试板离心15s后，在23℃下孵育15min，然后加入5μL/孔的底物溶液(0.2μM Biotin-H3(1-21)peptide和0.2μM SAM)启动反应；在转速为1000rpm下，将测试板离心15s，并在测试板上密封薄膜后，在23℃下孵育60min，向测试板的所有孔中加入检测溶液(8.3μg/mL Anti-methyl-Histone H3 Lysine 4(H3K4me1-2)AlphaLISA Acceptor Beads(PERKIN ELMER,Cat#AL116M)和8.3μg/mL Strep-TactinAlpha Donor beads(PERKIN ELMER,Cat#AS106R))；在转速为1000rpm下，将其离心15s，并在测定板上密封薄膜后，在23℃下孵育60min；在EnVision上读取试验平板，使用XLFIT5软件分析实施例1～9的组蛋白甲基转移酶抑制剂对组蛋白甲基转移酶的抑制活性，结果如表1所示。
表1不同组蛋白甲基转移酶抑制剂对组蛋白甲基转移酶的抑制活性
| 组蛋白甲基转移酶抑制剂编号 | IC50(nM) |
| Sinefugin | 495 |
| 实施例1 | 905 |
| 实施例2 | 127 |
| 实施例3 | 365 |
| 实施例4 | 1288 |
| 实施例5 | 1508 |
| 实施例6 | 945 |
| 实施例7 | >10000 |
| 实施例8 | 490 |
| 实施例9 | >10000 |
由表1可知，本发明的组蛋白甲基转移酶抑制剂对组蛋白甲基转移酶的半抑制浓度(IC50)可达127nM。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种组蛋白甲基转移酶抑制剂，其特征在于，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂的结构式为其中，X1为氢原子，X2的结构式为 X2中的-COOH的对位为-NH。
2.权利要求1所述的组蛋白甲基转移酶抑制剂的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
1)将苯胺类化合物、胺类化合物、物质A和有机溶剂1混合后，混合物和哌嗪类化合物进行反应，得到中间体1；
2)将中间体1、溶剂和氢氧化钠进行反应后，对得到的粗产物进行纯化，得到中间体2；
3)将中间体2和HCl/二恶烷进行反应，得到组蛋白甲基转移酶抑制剂；
所述哌嗪类化合物的结构式为
步骤1)所述苯胺类化合物的结构式为 胺类化合物为三乙胺或三乙醇胺，物质A为三碳酰氯或N,N-碳酰二咪唑，有机溶剂1为二氯甲烷或N,N-二甲基甲酰胺；
步骤2)所述溶剂为甲醇溶液、乙醇和四氢呋喃中的一种或几种；所述乙醇的体积分数为65～75％，甲醇溶液的体积分数为50～75％。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述苯胺类化合物、胺类化合物、物质A和哌嗪类化合物的摩尔比为0.1～3.8：0.5～11.5：0.1～4.8：0.2～4，苯胺类化合物和有机溶剂1的摩尔体积比为0.1～3.8mmol：2.5～10.5mL；所述混合的温度为0～30℃，混合的时间为1～2h，混合在氮气气氛中进行；所述反应的温度为20～30℃，反应的时间为10～16h。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述中间体1、氢氧化钠和溶剂的摩尔体积比为0.4～1.5mmol：0.5～4mmol：6～12mL。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述反应的温度为20～80℃，反应的时间为2～16h；纯化的方法为萃取和/或反相色谱法。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中间体2和HCl/二恶烷反应的过程中，加入有机溶剂2，有机溶剂2为1,4-二恶烷、丙烯酸乙酯和甲醇中的一种或多种；所述中间体2、有机溶剂2和HCl/二恶烷的摩尔体积比为0.3～0.65mmol：5～10mL：2～10mL；所述反应的温度为20～30℃，反应的时间为1～16h。
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