CN116271224B - 一种软组织再生填充剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种软组织再生填充剂及其制备方法。本发明提供的软组织再生填充剂由双网络结构的丝素蛋白/聚乙二醇‑聚己内酯凝胶组成，结构致密且稳定，体内降解周期长。本发明提供的可注射软组织填充剂在作为美容填充材料使用中不但具有即刻填充效果突出，可塑性好的优势，同时，还可以诱导和刺激组织的纤维细胞和胶原蛋白再生，延长了填充剂的效果维持时间，是一种具有创新性的组织再生医疗美容填充材料。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种软组织再生填充剂及其制备方法。
背景技术
随着医疗美容行业的快速发展，注射填充类材料越来越受到广泛关注。作为最常使用的注射填充类材料交联透明质酸钠凝胶虽然具有较好的即刻填充和塑形效果，但是由于透明质酸钠在组织环境中降解速度较快，同时，透明质酸钠本身又不具备刺激组织自身细胞生长和胶原蛋白产生的组织再生功能，导致患者通常每6个月左右就需要进行重复注射，大大增加了患者的治疗费用和不良感受。近年来，再生医美填充材料逐渐兴起，随着胶原蛋白填充剂、聚左旋乳酸面部填充剂、聚己内酯填充剂和乙二醇-左旋乳酸共聚物填充剂的相继获批，医美填充材料也从传统的物理填充材料向组织再生填充材料方向发展。
丝素蛋白至1993年被美国食品和药物管理局(FDA)批准为生物材料以来，由于其出色的机械性能，良好的生物相容性，生物降解性以及结构调整的多功能性而被广泛应用于生物医药和组织工程领域。丝素蛋白可以被加工成溶液、丝膜、微球/微粒、水凝胶、支架和电纺膜等具有不同结构的材料，应用于创伤修复、药物载体、组织填充和人造器官等领域。近年来，已上市的丝素蛋白产品包括艾尔健公司开发的SERI外科支架，用于腹壁重建和整形外科。美国Sofregen公司开发了一种SilkVoice天然蚕丝蛋白注射剂，用于治疗声带介质化和声带功能不全。苏州苏豪生物材料公司开发了一种丝素蛋白的创面敷料，用于烫伤及烧伤创面的愈合修复。除了已上市的产品，亦有部分公司的产品开展了临床试验，包括用于韧带重建的丝素蛋白绷带，用于股骨沟疝的丝素蛋白组织网片，口腔手术用丝素蛋白缝合线，半月板软骨修复的丝素蛋白多孔组织再生支架等。目前，将丝素蛋白制备成用于面部整形填充产品尚属空白。根据相关研究，作为一种具有优良生物相容性的材料，丝素蛋白可以促进皮肤成纤维细胞的生长、分化和增值，同时，丝素蛋白在体内降解后所释放的多种氨基酸又可加速细胞新陈代谢，促进胶原蛋白合成，增强皮肤张力和弹性及色素分解。因此，如果将丝素蛋白制备成一种可注射的软组织填充材料用于面部整形，将具有极大的应用潜力。丝素蛋白在作为可注射软组织填充材料应用于面部整形使用时，需要将其制备成可通过注射器注射的水凝胶或微球，进而将其注入到皮肤组织，实现美容填充的功效。
目前，制备丝素蛋白水凝胶的方法主要包括化学交联法和物理交联法。化学交联法制备的丝素蛋白水凝胶所要用到的交联剂戊二醛、京尼平、辣根过氧化酶等大多具有较高的毒性，因此水凝胶植入组织后，由于交联剂残留造成的毒性问题难以解决。与化学交联相比较，物理交联的丝素蛋白水凝胶具有更好的生物安全性，更适合作为组织填充材料应用在医疗美容领域。目前，已报道的丝素蛋白物理凝胶的制备方法包括，水溶性有机溶剂诱导、表面活性剂诱导、pH值诱导、超声/震荡诱导和电场诱导等。但是，上述方法制备的丝素蛋白物理凝胶的共同的特点是，凝胶内部分子分布都较为松散，交联结构稳定性差，导致其在植入机体组织后，极易被组织微环境及各种蛋白酶快速分解，从而达不到长周期的组织填充效果。
作为另外一种软组织再生填充材料，聚己内酯(PCL)和聚乙二醇-聚己内酯共聚物具有较长的体内降解周期，填充效果一般可以维持3年以上。同时，此类聚合物还可通过自身在组织内的异物反应及其降解过程中释放的6-羟基己酸来激发皮肤免疫系统中巨噬细胞的M2型极化，M2型极化的巨噬细胞会高表达TGF-β(转化生长因子)等相关细胞因子而进一步诱导成纤维细胞加速分泌胶原蛋白，最终达到对注射部位的组织填充效果,实现肌肤轮廓的重塑。特别地，作为一种具有两亲性的共聚物，聚乙二醇-聚己内酯可以有效诱导丝素蛋白分子间形成β-重叠的物理交联结构，并同时与丝素蛋白形成双网络凝胶。此种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶在作为软组织填充剂使用时，除了具有丝素蛋白本身的生物活性以外，同时还兼具有聚乙二醇-聚己内酯共聚物的降解周期长，可以刺激组织内的成纤维细胞生长及胶原蛋白的分泌的功效，改善了传统交联透明质酸钠凝胶填充剂维持时间短，无法刺激组织再生的缺陷。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供
本发明的技术方案如下：一种软组织再生填充剂，包括丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒和辅料。
优选地，所述丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒组成成分包括再生丝素蛋白与聚乙二醇-聚己内酯共聚物，其中再生丝素蛋白与聚乙二醇-聚己内酯共聚物的质量比为28～40:50。
优选地，所述辅料为甘露醇。
优选地，所述丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒与辅料的比例为20：1。
优选地，所述再生丝素蛋白的制备方法为：取脱胶蚕丝，溶解于LiBr溶液中；将脱胶蚕丝的LiBr溶液加入到透析袋中，用超纯水透析，除掉溶液中的LiBr；将透析后的丝素蛋白溶液冷冻干燥得到再生丝素蛋白。
优选地，所述LiBr溶液的浓度为9.3M。
优选地，所述聚乙二醇-聚己内酯共聚物的制备方法为：
1)取ε-己内酯和聚乙二醇加入到圆底烧瓶中，加热至110℃并搅拌至两种原料完全熔融，混合均匀；加热搅拌过程中，使用真空泵对烧瓶抽真空，除掉样品中的水分。
2)将反应烧瓶中冲入氩气，并在搅拌条件下，加入催化剂，并将反应温度升高至130℃引发ε-己内酯开环聚合，得到聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体用二氯甲烷溶解，然后用乙醚沉降，重复5次后，真空干燥得到提纯的聚乙二醇-聚己内酯共聚物。
优选地，所述ε-己内酯和聚乙二醇的质量比例为(2.5～1):(1～2.5)。
优选地，所述催化剂为辛酸亚锡。
优选地，所述丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶的制备方法为：
i)取再生丝素蛋白，溶解于超纯水中；
ii)取聚乙二醇-聚己内酯共聚物，溶解于二甲基亚砜中；
iii)将步骤ii)溶液搅拌加入到步骤i)溶液中，并继续在搅拌，使两种溶液混合均匀；
iv)将混合溶液在室温孵化，得到固化后的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶；
v)将双网络凝胶加入到超纯水中，搅拌洗涤，得到提纯的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶。
优选地，所述软组织再生填充剂的制备方法为：
S1将丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶加入到研磨机中，对凝胶进行粉碎制备丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒。
S2称取丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒，加入甘露醇，并搅拌混合溶解完全；
S3将溶解有甘露醇的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒灌装入预灌封注射器中，并进行湿热灭菌，得到丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂。
本发明提供的软组织再生填充剂在制备组织再生医疗美容填充材料中的应用。
本发明的有益效果：本发明中制备的具有双网络结构的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯凝胶的结构致密且稳定，体内降解周期长。特别地，通过将上述丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶制备成的可注射软组织填充剂在作为美容填充材料使用中不但具有即刻填充效果突出，可塑性好的优势，同时，还可以诱导和刺激组织的纤维细胞和胶原蛋白再生，延长了填充剂的效果维持时间，是一种具有创新性的组织再生医疗美容填充材料。
附图说明
图1展示了根据本发明一个实施例的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂的制备方法的示意性流程图；
图2展示了根据本发明实施例1的制备方法获得的可溶性丝素蛋白的图片；
图3展示了根据本发明实施例1的制备方法获得的可溶性丝素蛋白的红外光谱数据；
图4展示了根据本发明实施例1的制备方法获得的可溶性丝素蛋白的氨基酸含量数据；
图5展示了根据本发明实施例2的制备方法获得的聚乙二醇-聚己内酯共聚物的红外光谱数据；
图6展示了根据本发明实施例2的制备方法获得的聚乙二醇-聚己内酯共聚物的凝胶渗透色谱(GPC)分子量数据；
图7展示了根据本发明实施例3的制备方法获得的聚乙二醇-聚己内酯共聚物的凝胶渗透色谱(GPC)分子量数据；
图8展示了根据本发明实施例4的制备方法获得的聚乙二醇-聚己内酯共聚物的凝胶渗透色谱(GPC)分子量数据；
图9展示了根据本发明实施例5的制备方法获得的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶的红外光谱数据；
图10展示了根据本发明实施例9的制备方法获得的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂的图片；
图11展示了根据本发明实施例9的制备方法获得的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂的细胞毒数据；
图12展示了根据本发明实施例9的制备方法获得的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂注射到大鼠皮下不同时间周期的解刨图；
图13展示了根据本发明实施例9的制备方法获得的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂注射到大鼠皮下不同时间周期组织切片的H&E染色图；
图14展示了根据本发明实施例9的制备方法获得的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂注射到大鼠皮下不同时间周期组织切片的Masson染色图。
具体实施方式
下面的实施例可以使本专业的本领域技术人员更全面地理解本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
实施例1
再生丝素蛋白材料的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
1)取50g脱胶蚕丝，溶解于450mL LiBr溶液中(9.3M)；
2)将脱胶蚕丝的LiBr溶液加入到透析袋中，用超纯水透析5次，除掉溶液中的LiBr；
3)将透析后的丝素蛋白溶液放入冷冻干燥箱，冷冻干燥得到再生丝素蛋白材料。
图2展示了本实施例制备获得的再生丝素蛋白材料的图片。图3展示了本实施例制备获得的丝素蛋白的红外光谱数据。由图3可知，丝素蛋白在1700cm-1～1600cm-1，1590cm-1～1460cm-1，以及1280cm-1～1190cm-1处存在特征峰，分别对应丝素蛋白的酰胺I带、酰胺II带以及酰胺III带。图4展示了本实施例制备获得的丝素蛋白的氨基酸含量检测数据。由图4可知，双交联丝素蛋白微球含有再生丝素蛋白的18种特征氨基酸，且氨基酸总含量大于99％。
实施例2
一种聚乙二醇-聚己内酯共聚物材料，该材料的制备方法包括如下步骤：
1)称取286gε-己内酯和114g聚乙二醇(4KDa)(聚合质量比比例为2.5:1)加入到圆底烧瓶中，加热至110℃并搅拌至两种原料完全熔融，混合均匀。加热搅拌过程中，使用真空泵对烧瓶抽真空，除掉样品中的水分。
2)将反应烧瓶中冲入氩气，并在搅拌条件下，加入0.4g辛酸亚锡催化剂，并将反应温度升高至130℃引发ε-己内酯开环聚合18小时，得到聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体用2L二氯甲烷溶解，然后用10L的乙醚沉降，重复5次后，真空干燥得到提纯的聚乙二醇-聚己内酯共聚物。
图5展示了本实施例合成的聚乙二醇-聚己内酯共聚物的红外光谱图。由图5可知，2945cm-1和1725cm-1为共聚物中聚己内酯的特征吸收峰，1107cm-1和961cm-1为共聚物中聚乙二醇的特征吸收峰。
图6展示了本实施例合成的聚乙二醇-聚己内酯的凝胶渗透色谱(GPC)图。由图6可知，聚乙二醇-聚己内酯重均分子量(Mw)为21912Da。
实施例3
一种聚乙二醇-聚己内酯共聚物材料，该材料的制备方法包括如下步骤：
1)称取200gε-己内酯和200g聚乙二醇(4KDa)(聚合质量比比例为1:1)加入到圆底烧瓶中，加热至110℃并搅拌至两种原料完全熔融，混合均匀。加热搅拌过程中，使用真空泵对烧瓶抽真空，除掉样品中的水分。
2)将反应烧瓶中冲入氩气，并在搅拌条件下，加入0.4g辛酸亚锡催化剂，并将反应温度升高至130℃引发ε-己内酯开环聚合18小时，得到聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体用2L二氯甲烷溶解，然后用10L的乙醚沉降，重复5次后，真空干燥得到提纯的聚乙二醇-聚己内酯共聚物。
图7展示了本实施例合成的聚乙二醇-聚己内酯的凝胶渗透色谱(GPC)图。由图7可知，聚乙二醇-聚己内酯重均分子量(Mw)为10947Da。
实施例4
一种聚乙二醇-聚己内酯共聚物材料，该材料的制备方法包括如下步骤：
1)称取114gε-己内酯和286g聚乙二醇(4KDa)(聚合质量比比例为0.4:1)加入到圆底烧瓶中，加热至110℃并搅拌至两种原料完全熔融，混合均匀。加热搅拌过程中，使用真空泵对烧瓶抽真空，除掉样品中的水分。
2)将反应烧瓶中冲入氩气，并在搅拌条件下，加入0.4g辛酸亚锡催化剂，并将反应温度升高至130℃引发ε-己内酯开环聚合18小时，得到聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体用2L二氯甲烷溶解，然后用10L的乙醚沉降，重复5次后，真空干燥得到提纯的聚乙二醇-聚己内酯共聚物。
图8展示了本实施例合成的聚乙二醇-聚己内酯的凝胶渗透色谱(GPC)图。由图8可知，聚乙二醇-聚己内酯重均分子量(Mw)为8578Da。
实施例5
一种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶，该双网络凝胶的制备方法包括如下步骤：
1)取28g实施例1中制备的丝素蛋白，溶解于400mL超纯水中；
2)取50g实施例2中制备的聚乙二醇-聚己内酯共聚物，溶解于200mL二甲基亚砜(DMSO)溶液中；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物溶液加入到搅拌中的丝素蛋白溶液中，并继续在600rpm搅拌30min，将两种溶液混合均匀；
4)将混合溶液在室温孵化24h，得到固化后的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶；
5)将双网络凝胶加入到3L超纯水中，搅拌洗涤6次，得到提纯的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶。
图9展示了本实施例中合成的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶的红外光谱图。由图9可知，双网络凝胶的红外特征吸收峰包括丝素蛋白在1700cm-1～1600cm-1，1590cm-1～1460cm-1，以及1280cm-1～1190cm-1的特征吸收峰和聚乙二醇-聚己内酯在2945cm-1，1725cm-1，1107cm-1，961cm-1的特征吸收峰，说明双网络凝胶被成功合成。
实施例6
一种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶，该双网络凝胶的制备方法包括如下步骤：
1)取28g实施例1中制备的丝素蛋白，溶解于400mL超纯水中；
2)取50g实施例3中制备的聚乙二醇-聚己内酯共聚物，溶解于200mL二甲基亚砜(DMSO)溶液中；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物溶液加入到搅拌中的丝素蛋白溶液中，并继续在600rpm搅拌30min，将两种溶液混合均匀；
4)将混合溶液在室温孵化24h，得到固化后的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶；
5)将双网络凝胶加入到3L超纯水中，搅拌洗涤6次，得到提纯的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶。
实施例7
一种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶，该双网络凝胶的制备方法包括如下步骤：
1)取28g实施例1中制备的丝素蛋白，溶解于400mL超纯水中；
2)取50g实施例4中制备的聚乙二醇-聚己内酯共聚物，溶解于200mL二甲基亚砜(DMSO)溶液中；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物溶液加入到搅拌中的丝素蛋白溶液中，并继续在600rpm搅拌30min，将两种溶液混合均匀；
4)将混合溶液在室温孵化24h，得到固化后的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶；
5)将双网络凝胶加入到3L超纯水中，搅拌洗涤6次，得到提纯的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶。
实施例8
一种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶，该双网络凝胶的制备方法包括如下步骤：
1)取40g实施例1中制备的丝素蛋白，溶解于400mL超纯水中；
2)取50g实施例2中制备的聚乙二醇-聚己内酯共聚物，溶解于200mL二甲基亚砜(DMSO)溶液中；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物溶液加入到搅拌中的丝素蛋白溶液中，并继续在600rpm搅拌30min，将两种溶液混合均匀；
4)将混合溶液在室温孵化24h，得到固化后的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶；
5)将双网络凝胶加入到3L超纯水中，搅拌洗涤6次，得到提纯的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶。
实施例9
一种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂，该软组织再生填充剂的制备方法包括如下步骤：
1)将实施例5中制备的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶加入到研磨机中，在研磨速度为10000rpm的条件下，对凝胶进行粉碎，并重复粉碎3次，制备丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒。
2)称取丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒300g，加入15g甘露醇，并搅拌混合溶解完全；
3)将溶解有甘露醇的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒灌装入预灌封注射器中，并在121摄氏度湿热灭菌15min，得到丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂。
图10展示了本实施例中合成的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂的实物图片。
图11展示了本实施例中合成的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂的细胞毒性数据。由图11可知，可注射软组织填充剂的浸提液与成纤维细胞共同培养后，细胞的存活率达到100％以上。
图12展示了本实施例中合成的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂注射到大鼠皮下，在第1个月、第6个月和第12个月的解刨图片。由图12可知，填充剂植入组织12个月后没有完成降解，注射部位仍有一定体积的填充剂存在，证明了可注射软组织填充剂不但具有长周期组织填充效果。
图13展示了本实施例中合成的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂注射到大鼠皮下，在第1个月、第6个月和第12个月组织切片的苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining，H&E)染色图片。由图13可知，大鼠的皮下注射组织及其周边细胞状态良好，注射12个月后，组织部位无明显细胞萎缩现象。
图14展示了本实施例中合成的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂注射到大鼠皮下，在第1个月、第6个月和第12个月组织切片的胶原纤维马森(Masson)染色图片。由图14可知，随着时间的延长，大鼠的皮下注射组织及其周边胶原增生效果显著，组织切片染色呈现深蓝色(由于附图为灰度图，因此无法看出深蓝色，但是实际效果图中，深蓝色是遍布在除图中圆形细胞外的其他区域中)，说明丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂具有加速组织自体胶原蛋白分泌，刺激组织再生的有益效果。
实施例10
一种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂，该软组织再生填充剂制备方法包括如下步骤：
1)将实施例6中制备的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶加入到研磨机中，在研磨速度为10000rpm的条件下，对凝胶进行粉碎，并重复粉碎3次，制备丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒。
2)称取丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒300g，加入15g甘露醇，并搅拌混合溶解完全；
3)将溶解有甘露醇的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒灌装入预灌封注射器中，并在121摄氏度湿热灭菌15min，得到丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂。
实施例11
一种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂，该软组织再生填充剂的制备方法包括如下步骤：
1)将实施例7中制备的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶加入到研磨机中，在研磨速度为10000rpm的条件下，对凝胶进行粉碎，并重复粉碎3次，制备丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒。
2)称取丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒300g，加入15g甘露醇，并搅拌混合溶解完全；
3)将溶解有甘露醇的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒灌装入预灌封注射器中，并在121摄氏度湿热灭菌15min，得到丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂。
实施例12
一种丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂，该软组织再生填充剂的制备方法包括如下步骤：
1)将实施例8中制备的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶加入到研磨机中，在研磨速度为15000rpm的条件下，对凝胶进行粉碎，并重复粉碎3次，制备丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒。
2)称取丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒300g，加入15g甘露醇，并搅拌混合溶解完全；
3)将溶解有甘露醇的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒灌装入预灌封注射器中，并在121摄氏度湿热灭菌15min，得到丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂。
Claims (5)
1.一种软组织再生填充剂，其特征在于，包括丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒和辅料；所述丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒组成成分包括再生丝素蛋白与聚乙二醇-聚己内酯共聚物，其中再生丝素蛋白与聚乙二醇-聚己内酯共聚物的质量比为28：50；所述辅料为甘露醇；所述丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒与辅料的比例为20：1；
所述的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶的制备方法为：
i)取再生丝素蛋白，溶解于超纯水中；
ii)取聚乙二醇-聚己内酯共聚物，溶解于二甲基亚砜中；
iii)将步骤ii)溶液搅拌加入到步骤i)溶液中，并继续搅拌，使两种溶液混合均匀；
iv)将混合溶液在室温孵化，得到固化后的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶；
v)将双网络凝胶加入到超纯水中，搅拌洗涤，得到提纯的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶。
2.根据权利要求1所述的软组织再生填充剂，其特征在于，所述的再生丝素蛋白的制备方法为：取脱胶蚕丝，溶解于LiBr溶液中；将脱胶蚕丝的LiBr溶液加入到透析袋中，用超纯水透析，除掉溶液中的LiBr；将透析后的丝素蛋白溶液冷冻干燥得到再生丝素蛋白；所述LiBr溶液的浓度为9.3M。
3.根据权利要求1所述的软组织再生填充剂，其特征在于，所述的聚乙二醇-聚己内酯共聚物的制备方法为：
1)取ε-己内酯和聚乙二醇加入到圆底烧瓶中，加热至110℃并搅拌至两种原料完全熔融，混合均匀；加热搅拌过程中，使用真空泵对烧瓶抽真空，除掉样品中的水分；
2)在烧瓶中充入氩气，并在搅拌条件下，加入催化剂，并将反应温度升高至130℃引发ε-己内酯开环聚合，得到聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体；
3)将聚乙二醇-聚己内酯共聚物前驱体用二氯甲烷溶解，然后用乙醚沉降，重复5次后，真空干燥得到提纯的聚乙二醇-聚己内酯共聚物；
所述ε-己内酯和聚乙二醇的质量比例为(2.5～1):(1～2.5)；所述催化剂为辛酸亚锡。
4.权利要求1所述的软组织再生填充剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，
S1将丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶加入到研磨机中，对凝胶进行粉碎制备丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒；
S2称取丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒，加入甘露醇，并搅拌混合溶解完全；
S3将溶解有甘露醇的丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶微粒灌装入预灌封注射器中，并进行湿热灭菌，得到丝素蛋白/聚乙二醇-聚己内酯双网络凝胶软组织再生填充剂。
5.权利要求1所述的软组织再生填充剂在制备组织再生医疗美容填充材料中的应用。
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