CN116234823A

CN116234823A - 用于在免疫组织化学（ihc）方案中诊断癌症的抗体

Info

Publication number: CN116234823A
Application number: CN202180051266.7A
Authority: CN
Inventors: 莫顿·德拉比·瑟伦森; 拉斯·姆斯加德
Original assignee: Agilent Technologies Inc
Current assignee: Agilent Technologies Inc
Priority date: 2020-08-26
Filing date: 2021-08-25
Publication date: 2023-06-06
Also published as: WO2022046885A1; EP4204451A1; EP4204451A4; US20230331865A1; CA3192627A1; AU2021335206A1

Abstract

在替代实施方式中，提供了嵌合或重组兔抗人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)抗体，包括包含所述抗体的制品和试剂盒，并且提供了制造和使用所述抗体、制品和试剂盒的方法，其中所述抗体可用于通过免疫组织化学(IHC)进行体外诊断。在替代实施方式中，本文提供的抗体用于在IHC方案中诊断癌症，例如鳞状细胞癌(SCC)或肺癌例如非小细胞肺癌(NCSLC)或肺部SCC。

Description

用于在免疫组织化学(IHC)方案中诊断癌症的抗体

相关申请

本专利合作条约(Patent Convention Treaty,PCT)国际专利申请根据35U.S.C.§119(e)要求2020年8月26日的美国临时专利申请序列号(USSN)63/070,817的优先权权益。上述申请出于所有目的而全文以引用方式明确并入本文。

技术领域

本发明总体上涉及免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和癌症诊断。在替代实施方式中，提供了重组兔抗人p40(p63同种型DeltaΔNp63，或ΔNp63)抗体，包括包含所述抗体的制品和试剂盒，并且提供了制造和使用所述抗体、制品和试剂盒的方法，其中所述抗体可用于通过免疫组织化学(IHC)进行体外诊断。在替代实施方式中，本文提供的抗体在IHC方案中使用以诊断癌症，例如鳞状细胞癌(SCC)或肺癌例如非小细胞肺癌(NCSLC)或肺部SCC。

背景技术

肺癌是全球第三大常见癌症。随着肺癌分子测试的重大进展和靶向疗法的引入，腺癌与鳞状细胞癌之间的区别以及病理亚型分型已经变得很重要。

蛋白质p63是p53基因家族的成员。p63基因包含15个外显子，并与p53具有高度的结构和序列同源性。已鉴定出几种p63同种型，与典型p63相比，许多所述同种型具有相同的p63的替代性N末端，其中前108个氨基酸(MNFETSRCAT(SEQ ID NO:4)......QDSDLSDPMW(SEQ ID NO:5))被取代为MLYLENNAQTQFSE(SEQ ID NO:6)。p63的这些较短剪接变体，被称为德尔塔Np63(ΔNp63)，存在于不同的版本中，都具有相同的替代性N末端。这些同种型的复杂性是在COOH末端产生的，其中外显子的剪接导致5个不同的C末端(α、β、γ、δ和ε)。这些ΔNp63同种型也统称为p40。

p63的典型同种型包含与p53同源的具有反式激活能力的‘TA’结构域，其调节生长抑制基因的表达。相比之下，ΔNp63同种型或p40蛋白的替代性N末端包含没有转录活性的‘ΔN’结构域，所述结构域被认为拮抗TAp63和p53的活性(参见参考文献1)。

最近的研究表明，蛋白质p40或ΔNp63同种型的表达对鳞状细胞和基底细胞具有高度特异性，并且对于诊断肺鳞状细胞癌来说优于p63(参见参考文献1)。在一些情况下，P63可与肺腺癌中的细胞结构发生反应，这可继而导致误诊。

p40抗体或ΔNp63同种型已被证明有助于区分肺鳞状细胞癌与肺腺癌。最近，p40已被描述为适用于检测前列腺癌中基底细胞的丢失并取得了良好的成功，并且对于这些癌症来说比p63更具特异性。还得出的结论是，p40或ΔNp63同种型，是正常前列腺基底细胞中的主要p63同种型，而在前列腺癌中观察到的p63表达主要是由于不同p63同种型的异常表达(参见参考文献2)。

发明内容

在替代实施方式中，提供了重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，所述Ab或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白能够特异性结合人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)的蛋白质或多肽，或抗原或包含氨基酸序列MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQ ID NO:1)的表位。

在替代实施方式中，所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白被制造为如下形式或以如下形式制造：

抗原结合片段(Fab，或具有Ab重链和轻链中的每一者的仅一个恒定结构域和一个可变结构域的Ab片段)，

F(ab')₂(或由胃蛋白酶消化从而产生以下两个片段的Ab：F(ab')₂片段和pFc'(胃蛋白酶切割Fc)片段)，

Fab'(F(ab')₂片段的单链)，

单链可变片段(scFv)(或与接头肽，任选地长度为约10个至约25个氨基酸的接头肽连接在一起的Ab重链和轻链的可变区的融合蛋白)，

(scFv)₂，或di-scFv或bi-scFv，或单肽链，所述单肽链具有两个可变重区和两个可变轻区从而产生串联scFv，

微抗体(或与烷基，任选地甲基或乙基连接在一起的Ab重链和轻链的可变区的融合蛋白)

双抗体(或scFv，所述scFv具有对于两个可变区折叠在一起来说太短的接头肽(任选地约5个氨基酸)，从而使所述scFv二聚化)、三链抗体或四链抗体(或scFv，所述scFv具有对于两个可变区折叠在一起来说太短的接头肽(任选地约1个或2个氨基酸)，从而使所述scFv三聚化或四聚化)，

单结构域抗体(dAB)(或Ab重链或Ab轻链的单可变区)，多个互补决定区(CDR)片段，或者

由两个或更多个抗体片段形成的多特异性抗体。

在替代实施方式中，所述抗体或二聚体抗原结合蛋白包含与轻链可变区配对或结合的重链可变区，使得所述抗体或所述二聚体抗原结合蛋白能够特异性结合人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)蛋白或多肽、抗原或包含氨基酸序列MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQ ID NO:1)的表位。

在所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白的替代实施方式中：所述Ab或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白包含：

(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)能够特异性结合人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)蛋白或多肽、抗原或包含氨基酸序列MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQID NO:1)的表位，所述重链可变区(VH)包含：

(1)包含SEQ ID NO:1的三个CDR1、CDR2和CDR3互补决定区(CDR)、或CDR1氨基酸(aa)残基GFSLSSYG(SEQ ID NO:2的残基25至32)、CDR2 aa残基ISHITTT(SEQ ID NO:2的残基50至56)和CDR3 aa残基CRGQYGSGIIYAL(SEQ ID NO:2的残基94至106)的氨基酸序列，或者

(2)与SEQ ID NO:2的三个CDR1、CDR2和CDR3互补决定区(CDR)、或CDR1氨基酸(aa)残基GFSLSSYG(SEQ ID NO:2的残基25至32)、CDR2 aa残基ISHITTT(SEQ ID NO:2的残基50至56)和CDR3 aa残基CRGQYGSGIIYAL(SEQ ID NO:2的残基94至106)中的每一者具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性或具有介于约70％至100％序列同一性之间的的氨基酸序列，或者

(3)与SEQ ID NO:2具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性或具有介于约70％至100％序列同一性之间的的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2具有完全序列同一性的氨基酸序列；

(b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)能够特异性结合人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)蛋白或多肽、抗原或包含氨基酸序列MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQID NO:1)的表位，所述轻链可变区(VL)包含：

(1)包含SEQ ID NO:3的三个CDR1、CDR2和CDR3互补决定区(CDR)、或CDR1氨基酸(aa)残基QSVYNNKN(SEQ ID NO:3的残基27至34)、CDR2 aa残基YAS(SEQ ID NO:3的残基52至54)和CDR3 aa残基HGEFSCDSGDCSA(SEQ ID NO:3的残基91至103)的氨基酸序列，或者

(2)与SEQ ID NO:3的三个CDR1、CDR2和CDR3互补决定区(CDR)、或CDR1氨基酸(aa)残基QSVYNNKN(SEQ ID NO:3的残基27至34)、CDR2 aa残基YAS(SEQ ID NO:3的残基52至54)和CDR3 aa残基HGEFSCDSGDCSA(SEQ ID NO:3的残基91至103)中的每一者具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性或具有介于约70％至100％序列同一性之间的的氨基酸序列，或者

(3)与SEQ ID NO:3具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％序列同一性或具有介于约70％至100％序列同一性之间的的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:3具有完全(100％)序列同一性的氨基酸序列；或者

(c)异二聚体，所述异二聚体能够特异性结合人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)蛋白或多肽、抗原或包含氨基酸序列MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQ ID NO:1)的表位，所述异二聚体包含(a)的所述重链可变区(VH)和(b)的所述轻链可变区(VL)。

在所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白的替代实施方式中：所述重链可变区包含氨基酸序列：QSVEESGGRLVKPDESLTLTCTVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGL EWIGYISHITTTYYASWAKGRFTISKTSPTTVDLKMTSLTTEDTATYFCCRGQYGSGIIYALWGPGTLVTISS(SEQ ID NO:2)，或者

具有一个或多个氨基酸取代或缺失的SEQ ID NO:2，并且所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白保留其特异性结合包含SEQ ID NO:1的肽或表位、或SEQ ID NO:1的多肽片段、p40(或p63同种型DeltaNp63)多肽或肽、或p40多肽或肽的片段的能力。

在替代实施方式中，所述轻链可变区包含氨基酸序列：AQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPG QPPKLLIYYASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCHGEFSCDSGDCSAFGGGTEVVVK(SEQ ID NO:3)，或者

具有一个或多个氨基酸取代或缺失的SEQ ID NO:3，并且所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白保留其特异性结合包含SEQ ID NO:1的肽或表位、或SEQ ID NO:1的多肽片段、p40(或p63同种型DeltaNp63)多肽或肽、或p40多肽或肽的片段的能力。

在替代实施方式中，所述重链可变区包含氨基酸序列：QSVEESGGRLVKPDESLTLTCTVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGL EWIGYISHITTTYYASWAKGRFTISKTSPTTVDLKMTSLTTEDTATYFCCRGQYGSGIIYALWGPGTLVTISS(SEQ ID NO:2)，或者

具有一个或多个氨基酸取代或缺失的SEQ ID NO:2，并且所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白保留其特异性结合包含SEQ ID NO:1的肽或表位、或SEQ ID NO:1的多肽片段、p40(或p63同种型DeltaNp63)多肽或肽、或p40多肽或肽的片段的能力，并且

所述轻链可变区包含氨基酸序列：AQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPG QPPKLLIYYASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYY CHGEFSCDSGDCSAFGGGTEVVVK(SEQ ID NO:3)，或者

在替代实施方式中，所述轻链可变区进一步包含轻链恒定区的至少一部分。

在替代实施方式中，轻链恒定区包含氨基酸序列：

在替代实施方式中，所述重链可变区进一步包含重链恒定区的至少一部分。

在替代实施方式中，所述重链恒定区包含氨基酸序列：

在替代实施方式中，所述轻链可变区进一步包含轻链恒定区的至少一部分；并且所述重链可变区进一步包含所述重链恒定区的至少一部分。

在替代实施方式中，所述轻链包含如SEQ ID NO:3所示的可变区和如SEQ ID NO:7所示的恒定区，或者

在替代实施方式中，所述重链包含如SEQ ID NO:2所示的可变区和如SEQ ID NO:8所示的恒定区，或者

在替代实施方式中，提供了一种抗体或异二聚体蛋白，所述抗体或异二聚体蛋白具有如SEQ ID NO:9所示的轻链和如SEQ ID NO:10所示的重链。

在替代实施方式中，所述重链恒定区包含来自IgG、IgM、IgA、IgD或IgE同种型的氨基酸序列；或者所述轻链恒定区包含来自kappa(κ)或lambda(λ)同种型的氨基酸序列。

在替代实施方式中，所述重链恒定区的所述至少一部分、所述轻链恒定区的所述至少一部分、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区的至少一部分是或包含人、兔、小鼠或大鼠来源的氨基酸序列，或包含源自人、兔、小鼠或大鼠的恒定区氨基酸序列。

在替代实施方式中，所述重链恒定区的所述至少一部分、所述轻链恒定区的所述至少一部分、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区的所述至少一部分是或包含合成氨基酸序列。

在替代实施方式中，所述重组抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白、或所述重链恒定区、或所述轻链恒定区、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区进一步包含可检测试剂或结合部分或与其结合。

在替代实施方式中，可检测试剂或结合部分共价缀合至所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白。

在替代实施方式中，所述可检测剂或结合部分包含生物素、荧光或化学发光标记、荧光团、磺基吲哚菁、尼罗红、罗丹明、苝、芴基、香豆素、7-甲氧基香豆素(Mca)、4-二甲胺偶氮苯-4-羧酸(dabcyl)、[2-(4-硝基-2,1,3-苯并噁二唑-7-基)氨基乙基]三甲基铵(NBD)、尼罗蓝、Tamra、硼二吡咯(BODIPY)或其衍生物、染料、放射性同位素、量子点或光致发光水性纳米晶体、半抗原、或抗体结合表位或结构域。

在替代实施方式中，所述荧光团是或包含丹酰基、荧光素、羧基荧光素(FAM)或6-FAM部分。在替代实施方式中，染料是或包含花菁染料、Cy3或Cy5。在替代实施方式中，所述半抗原是或包含生物素、茶碱、洋地黄毒苷、碳硼烷、荧光素或溴脱氧尿苷部分。

在替代实施方式中，提供了嵌合或重组核酸，所述嵌合或重组核酸包含：编码如本文所提供的嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白的核酸序列；或者，包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的核酸序列，其中任选地所述嵌合或重组核酸进一步包含转录调控元件并且可操作地连接至转录调控元件，并且任选地所述转录调控元件包含启动子，并且任选地，所述启动子是诱导型启动子或组成型启动子。

在替代实施方式中，提供了包含如本文所提供的嵌合或重组核酸的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒。

在替代实施方式中，提供了细胞，所述细胞包含如本文所提供的嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白，如本文所提供的嵌合或重组核酸，或如本文所提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒，其中任选地，所述细胞是细菌、真菌、哺乳动物、酵母、昆虫或植物细胞。

在替代实施方式中，提供了用于检测细胞、组织、器官或前述中任一者的一部分中人p40蛋白的存在的方法，所述方法包括：

(a)使所述细胞、组织或器官或前述中任一者的一部分与如本文所提供的嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白接触，以及

(b)检测所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白与所述细胞、组织或器官或前述中任一者的一部分中的p40多肽或包含MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQ ID NO:1)的多肽的结合，

从而检测所述细胞、组织、器官或前述中任一者的一部分中所述人p40蛋白的存在，所述检测包括接触所述细胞、组织、器官或前述中任一者的一部分。

在如本文所提供的方法的替代实施方式中：

-所述接触包括使用免疫组织化学(IHC)测定；

-所述方法进一步包括使所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白与可检测试剂接触，以指示所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白与所述人p40蛋白结合或发出所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白与所述人p40蛋白结合的信号；或者

-所述可检测剂特异性结合所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白。

在替代实施方式中，提供了用于检测或诊断癌症的方法，其中任选地，所述癌症是：肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌(肺部的腺癌)、非小细胞肺癌、腺癌或鳞状细胞癌，其中所述方法包括使用如本文所提供的嵌合或重组抗体检测人p40蛋白在细胞、组织或器官样品中，任选地在来自有需要的个体的细胞、组织或器官样品中的表达或存在，以检测所述人p40蛋白在细胞、组织或器官样品中的表达或存在，并且检测所述人p40蛋白在细胞、组织或器官样品中的表达或存在，检测或诊断癌症。在替代实施方式中，其中所述检测包括进行免疫组织化学(IHC)测定。

在替代实施方式中，提供了用于治疗、改善或预防癌症的方法，所述方法包括首先使用如本文所提供的方法检测或诊断所述癌症，之后治疗所述有需要的个体以治疗、改善或预防所述癌症。在替代实施方式中，所述癌症是肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌(肺部的腺癌)、非小细胞肺癌、腺癌或鳞状细胞癌。

在替代实施方式中，提供了如本文所提供的嵌合或重组抗体用于检测或诊断癌症，或治疗、改善或预防癌症的用途，其中任选地，所述用途包括使用免疫组织化学(IHC)测定。在所述用途的替代实施方式中，所述癌症是肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌(肺部的腺癌)、非小细胞肺癌、腺癌或鳞状细胞癌。

在替代实施方式中，提供了如本文所提供的嵌合或重组抗体，其用途是检测或诊断癌症，或治疗、改善或预防癌症，其中任选地，所述用途包括使用免疫组织化学(IHC)测定。在替代实施方式中，所述癌症是肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌(肺部的腺癌)、非小细胞肺癌、腺癌或鳞状细胞癌。

在替代实施方式中，提供了试剂盒，所述试剂盒包含如本文所提供的嵌合或重组抗体，或如本文提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒。在替代实施方式中，所述试剂盒包含(或进一步包含)免疫组织化学(IHC)测定所需的组分，或任选地包含用于实践如本文所提供的方法的使用说明。

在附图和以下描述中阐述了本发明的一个或多个示例性实施方式的细节。根据说明书和附图以及根据权利要求书，本发明的其他特征、目的和优点将是显而易见的。

本文引用的所有出版物、专利、专利申请出于所有目的而全文以引用方式明确地并入本文。

附图说明

专利或申请文件包含至少一个彩色附图。本专利或专利申请公开的带彩色附图的副本将在进行请求并支付必要的费用后由专利局提供。

在此阐述的附图是对本文所提供的示例性实施方式的说明，并不意味着限制由权利要求所涵盖的本发明的范围。

图1、图2、图3和图4图解地示出了ELISA检测来自用p40肽SEQ ID NO:1免疫的兔的血浆中的抗p40抗体的结果，其中在图表中光密度OD是血浆稀释度的函数，如在以下实施例1中详细讨论的。

图5示出了凝胶图像，显示了对源自B细胞培养物的cDNA进行PCR反应以扩增重链和轻链可变结构域的结果；示出了4个选定克隆的经PCR扩增的VH和VL结构域，如在以下实施例1中详细讨论的。

图6示出了表1，显示了来自对源自针对靶P40生物素肽MS1891.2的B细胞选择和培养的再克隆兔B细胞克隆的基于ELISA的反应性分析的数据，如在以下实施例1中详细讨论的。

图7示出了表2，显示了来自对源自针对不相关的生物素化肽的B细胞选择和培养的再克隆兔B细胞克隆的基于ELISA的反应性分析的数据，如在以下实施例1中详细讨论的。

图8示出了扁桃体的鳞状上皮细胞的克隆15F11抗体染色的图像，如在以下实施例1中详细讨论的。

图9示出了扁桃体的鳞状上皮细胞的克隆15F11抗体染色的图像，如在以下实施例1中详细讨论的。

图10示出了胎盘的细胞滋养层的克隆15F11抗体染色的图像，如在以下实施例1中详细讨论的。

图11示出了胎盘的细胞滋养层的克隆15F11抗体染色的图像，如在以下实施例1中详细讨论的。

图12示出了肺鳞状细胞癌的克隆15F11抗体染色的图像，如在以下实施例1中详细讨论的。

图13示出了肺腺癌的克隆15F11抗体染色的图像，如在以下实施例1中详细讨论的。

图14示出了食管的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图15示出了在各种条件下胎盘的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图16示出了扁桃体的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像，如在以下实施例1中详细讨论的。

图17示出了扁桃体的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像，如在以下实施例1中详细讨论的。

图18示出了在各种条件下正常前列腺的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图19示出了肾的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图20示出了阑尾的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图21示出了在各种条件下肺鳞状细胞癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的第一图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图22示出了在各种条件下肺鳞状细胞癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的第二图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图23示出了在各种条件下抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的肺腺癌的第一图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图24示出了在各种条件下肺腺癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的第二图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图25示出了在各种条件下肺大细胞癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如图所示。

图26示出了在各种条件下乳房导管癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图27示出了在各种条件下胰腺癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图28示出了在各种条件下弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如在以下实施例1中详细讨论的。

图29示出了用抗p40克隆15F11测试的阳性正常扁桃体(p40高表达(HighExpressing,HE)和p40低表达(Low Expression,LE))和阴性对照组织，如在以下实施例1中详细讨论的。

图30示出了用两倍稀释度的抗体测试的肺鳞状细胞癌(临床阳性)和阴性肺腺癌(临床阴性)组织，如在以下实施例1中详细讨论的。

图31示出了表3，显示了来自用于在一组癌细胞和组织上测试示例性重组兔单克隆抗人p40抗体的IHC的数据，如在以下实施例1中详细讨论的。

图32示出了表4，显示了来自用抗p40克隆15F11以及阴性对照试剂染色的数据，如在以下实施例1中详细讨论的。

各图中相同的参考符号表示相同的元素。

具体实施方式

在替代实施方式中，提供了重组兔抗人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)抗体(Ab)，包括包含所述抗体的制品和试剂盒，并且提供了制造和使用所述抗体、制品和试剂盒的方法，其中所述抗体可用于通过免疫组织化学(IHC)进行体外诊断。在替代实施方式中，本文提供的抗体用于在IHC方案中诊断癌症，例如鳞状细胞癌(SCC)或肺癌例如非小细胞肺癌(NCSLC)或肺部SCC。

如本文所提供的兔抗人p40抗体是使用以下肽抗原通过B细胞选择开发的：P40(1-16),MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQ ID NO:1)。通过免疫组织化学(IHC)评估使用这种肽免疫的兔子的血清样品。从兔分离免疫后B细胞，并使用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选来自数千个克隆的上清液。通过IHC评估ELISA阳性克隆的上清液。选择四个克隆进行测序，在此之后合成编码所述抗体的核酸并将所述核酸插入基于pTT5骨架的表达载体中。这些表达载体用于人胚肾293(HEK)细胞中以产生重组抗体。被指定为“15F11”的克隆被选择为表现最佳的克隆：

抗体克隆15F11的序列：

15F11重链可变区：

CDR区以粗体突出显示并根据以下IMGT(ImMunoGeneTics,Laboratoire d′ImmunoGénétique Moléculaire(LIGM))编号定义：CDR1 aa 25至32、CDR2 aa 50至56、和CDR3 aa 94至106。

15F11轻链可变区：

CDR区以粗体突出显示并根据以下IMGT编号定义：CDR1 aa27至34、CDR2 aa 52至54、和CDR3 aa 91至103。

在替代实施方式中，包含重链可变区SEQ ID NO:2和轻链可变区SEQ ID NO:3的示例性重组抗人p40抗体或二聚体抗原结合蛋白各自分别结合或融合(或只有一者结合或融合)至免疫球蛋白重链和轻链恒定区，所述免疫球蛋白重链和轻链恒定区可以是例如人、兔、小鼠或大鼠源的，或者可以是部分或全部合成的。重链和/或轻链可以是任何同种型的，例如，所述重链可包含来自IgG、IgM、IgA、IgD或IgE同种型的氨基酸序列；或者所述轻链可包含来自kappa(κ)或lambda(λ)同种型的氨基酸序列。

在替代实施方式中，包含重链可变区SEQ ID NO:2和轻链可变区SEQ ID NO:3的示例性重组抗人p40抗体或二聚体抗原结合蛋白是(或被配置或装配为)抗体(Ab)片段，所述Ab片段包括例如如本文以Fab、Fab'、F(ab')₂、scFv、(scFv)₂、dAb、和互补决定区(CDR)片段、线性抗体、单链抗体分子、微抗体、双抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体形式提供的Ab或二聚体抗原结合蛋白。

在替代实施方式中，包含重链可变区SEQ ID NO:2和轻链可变区SEQ ID NO:3的示例性重组抗人p40抗体或二聚体抗原结合蛋白是(或被配置或装配为)Fv片段，即作为包含完整抗原识别和结合位点的抗体片段，所述抗体片段包括紧密缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体，所述二聚体可以是天然共价的，例如作为scFv。正是在这种配置中，每个可变结构域的三个CDR相互作用以在V_H-V_L二聚体的表面上限定抗原结合位点。六个CDR或其子集可以赋予抗体抗原结合特异性。在一个实施方式中，单个可变结构域或仅包含三个特异于抗原的CDR的Fv的一半，具有识别和结合抗原的能力，但是亲和力通常低于整个结合位点。

在替代实施方式中，包含重链可变区SEQ ID NO:2和轻链可变区SEQ ID NO:3的示例性重组抗人p40抗体或二聚体抗原结合蛋白是(或被配置或装配为)F(ab')₂或Fab片段，所述片段包含轻链的可变结构域和恒定结构域以及重链的可变结构域和第一恒定结构域(CH1)。F(ab')₂抗体片段包含一对Fab片段，该一对Fab片段例如通过铰链半胱氨酸或等同物在它们之间在它们羧基末端附近连接，例如共价连接。在替代实施方式中，可以使用本领域已知的抗体片段的任何化学偶联。

在替代实施方式中，包含重链可变区SEQ ID NO:2和轻链可变区SEQ ID NO:3的示例性重组抗人p40抗体或二聚体抗原结合蛋白是(或被配置或装配为)单链Fv或scFv抗体片段，所述单链Fv或scFv抗体片段可包含抗体的V_H和V_L结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。在替代实施方式中，如本文所提供的Fv多肽进一步包含在V_H结构域与V_L结构域之间的多肽接头，使得scFv能够形成抗原结合所需的结构。

在替代实施方式中，包含重链可变区SEQ ID NO:2和轻链可变区SEQ ID NO:3的示例性重组抗人p40抗体或二聚体抗原结合蛋白是(或被配置或装配为)双抗体，即作为具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含在同一多肽链(V_H和V_L)中相连的重链可变结构域(V_H)和轻链可变结构域(V_L)。通过使用太短以至于不允许在同一条链上的两个结构域之间配对的接头，使这些结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。

在替代实施方式中，包含重链可变区SEQ ID NO:2和轻链可变区SEQ ID NO:3的示例性重组抗人p40抗体或二聚体抗原结合蛋白是(或被配置或装配为)线性抗体，例如作为Zapata等人(1995Protein Eng,8(10):1057-1062)中所述的抗体。在替代实施方式中，如本文所提供的线性抗体包含一对串联的Fd区段(V_H-C_H1-V_H-C_H1)，该一对串联的Fd区段与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区。在替代实施方式中，如本文所提供的线性抗体是双特异性或单特异性的。

重组抗体的表达

在替代实施方式中，如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，包括包含重链可变区SEQ ID NO:2和轻链可变区SEQ ID NO:3的示例性重组抗人p40抗体，是使用任何表达载体或表达系统(例如，如病毒载体的载体、噬菌体、质粒或粘粒)表达为重组多肽或Ab，所述Ab或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白中的任一者可具有或可不具有信号肽或其他异源肽或标签。在替代实施方式中，恒定重链与轻链一起表达，例如，重链可以与kappa-1轻链一起表达。

在替代实施方式中，编码各自的重链和轻链或重链和轻链的核酸在单独的表达载体中编码，或在相同的表达载体或表达系统中编码。

在一些实施方式中，如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，包括如本文所提供的可为(顺式或反式的)重链和轻链，是从pTT5^TM载体(一个或多个)(National Research Council Canada,NRC-CNRC,Canada)或等同物表达的。

在替代实施方式中，包含编码如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白的核酸的表达载体(例如载体、质粒病毒或噬菌体)在体外表达系统中表达或者在培养的组织或细胞中表达，例如，所述表达载体在人胚肾(HEK)细胞如HEK293-6E细胞中表达。

在替代实施方式中，表达如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白(包括重链和/或轻链)表达载体(一个或多个)，例如一个或多个载体，例如在能够合成，任选地诱导合成如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白、或如本文所提供的重链和/或轻链的稳定细胞系中是附加型或染色体整合的。

在替代实施方式中，提供了编码如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段，或单体或二聚体抗原结合蛋白的核酸。如本文所提供的核酸可以通过例如cDNA文库的克隆和表达、信使或基因组DNA的PCR扩增等来制备、分离和/或操纵。用于实践如本文所提供的实施方式的核酸，无论是RNA、cDNA、基因组DNA、载体、病毒还是它们的杂合体，都可以从多种来源分离、经遗传工程化、扩增和/或重组地表达/产生。从这些核酸产生的重组多肽可以单独地分离或克隆，并测试所需的活性。可以使用任何重组表达系统，包括细菌、真菌、哺乳动物、酵母、昆虫或植物细胞表达系统，或杂合或合成表达系统。

或者，这些核酸可以通过众所周知的化学合成技术在体外合成，如在例如Martin等人，ACS Synth.Biol.(2017)6,7,1370-1379；Adams(1983)J.Am.Chem.Soc.105:661；Belousov(1997)Nucleic Acids Res.25:3440-3444；Frenkel(1995)FreeRadic.Biol.Med.19:373-380；Blommers(1994)Biochemistry 33:7886-7896；Narang(1979)Meth.Enzymol.68:90；Brown(1979)Meth.Enzymol.68:109；Beaucage(1981)Tetra.Lett.22:1859；美国专利号4,458,066中所述。

用于核酸操纵的技术，例如如亚克隆、标记探针(例如，使用Klenow聚合酶的随机引物标记、切口平移、扩增)、测序、杂交等很好地描述于科学和专利文献中，参见例如Sambrook编著，MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL(第2版)，第1-3卷，Cold SpringHarbor Laboratory,(1989)；CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,Ausubel编著，John Wiley&Sons,Inc.,New York(1997)；LABORATORY TECHNIQUES IN BIOCHEMISTRY ANDMOLECULAR BIOLOGY:HYBRIDIZATION WITH NUCLEIC ACID PROBES，第I部分.Theory andNucleic Acid Preparation,Tijssen编著.Elsevier,N.Y.(1993)。

获得和操纵用于实践如本文所提供的实施方式的核酸的另一有用手段包括筛选和重新克隆从例如基因组克隆或cDNA克隆分离或扩增的插入序列(inserts)。核酸来源包括包含在和/或表达于例如哺乳动物人工染色体(MAC)中的重组核酸序列、基因组或cDNA文库，参见例如美国专利号5,721,118；6,025,155；人人工染色体，参见例如Rosenfeld(1997)Nat.Genet.15:333-335；酵母人工染色体(YAC)；细菌人工染色体(BAC)；P1人工染色体，参见例如Woon(1998)Genomics 50:306-316；P1来源的载体(PAC)，参见例如Kern(1997)Biotechniques 23:120-124；粘粒、重组病毒、噬菌体或质粒。

在替代实施方式中，如本文所提供的核酸可操作地连接至转录调控元件，所述转录调控元件包括启动子，其可以是组成型或诱导型转录调控元件。

在替代方面，提供了包含如本文所提供的核苷酸序列的“表达盒”，所述核苷酸序列例如编码如本文所提供的重组抗体。所述表达盒可以包括与抗体编码序列可操作地连接的至少一个转录调控元件，例如启动子，并且任选地还可以包括转录终止信号。也可以使用影响表达所必需的或有助于影响表达的附加因子，例如增强子。

在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方式的表达盒包括质粒、表达载体、重组病毒、任何形式的重组“裸DNA”载体等。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方式的表达载体或“载体”可包含可感染、转染、瞬时转导或永久转导细胞的核酸。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方式的载体可以是裸核酸，或与蛋白质或脂质复合的核酸。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方式的载体可包含病毒或细菌核酸和/或蛋白质，和/或膜(例如，细胞膜、病毒脂质包膜等)。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方式的载体可包括但不限于复制子(例如，RNA复制子、噬菌体)，DNA片段可附接至所述复制子并被复制。因此，载体包括但不限于RNA、自主自我复制的环状或线性DNA或RNA(例如，质粒、病毒等，参见例如美国专利号5,217,879)，并且可以包括表达质粒和非表达质粒两者。在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方式的载体可以在有丝分裂期间作为自主结构被细胞稳定地复制，或者可以整合在宿主基因组内。

在替代方面，用于实践如本文所提供的实施方式的“启动子”包括能够驱动编码序列在细胞，例如细菌、酵母、真菌、植物、昆虫(例如，杆状病毒)或哺乳动物细胞中转录的所有序列。因此，构建体中所使用的启动子包括顺式作用的转录控制元件和调控序列，所述顺式作用的转录控制元件和调控序列参与调控或调节基因转录的时序和/或速率。例如，用于实践如本文所提供的实施方式的启动子可以是顺式作用的转录控制元件，包括增强子、启动子、转录终止子、复制起点、染色体整合序列、5'和3'非翻译区、或内含子序列，所述转录控制元件参与转录调控。这些顺式作用的序列可以与蛋白质或其他生物分子相互作用以进行(开/关、调控、调节等)转录。

用于实践如本文所提供的实施方式的“组成型”启动子可以是在大多数环境条件和发育或细胞分化状态下持续驱动表达的启动子。用于实践如本文所提供的实施方式的“诱导型”或“可调控的”启动子可以在环境条件或发育条件的影响下指导如本文所提供的核酸的表达。可影响由用于实践如本文所提供的实施方式的诱导型启动子进行转录的环境条件的示例包括施用于细胞的诱导因子的存在。

在替代实施方式中，多肽，包括如本文所提供的或用于实践如本文所提供的方法或其他实施方式的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，可包含任何“模拟物”和/或“肽模拟物”形式。在替代实施方式中，用于实践如本文所提供的实施方式的肽和多肽可包含具有与天然多肽基本上相同的结构和/或功能特征的合成化学化合物，所述合成化学化合物为例如如本文所提供的重组抗体。用于实践如本文所提供的实施方式的模拟物可以完全由合成的非天然氨基酸类似物构成，或者是部分天然肽氨基酸和部分非天然氨基酸类似物的嵌合分子。所述模拟物也可以掺入任意量的天然氨基酸取代，例如保守氨基酸取代，只要这种取代也基本上不改变模拟物的结构和/或活性即可。常规实验将确定模拟物是否有效实践如本文所提供的实施方式，例如，模拟物组合物是否有效地特异性结合人p40蛋白。本文所详述的方法论和本领域技术人员已知的其他方法论可用于选择或指导人们选择有效的模拟物来实践如本文所提供的组合物和/或方法。

用于实践如本文所提供的实施方式的多肽模拟组合物可以包含非天然结构组分的任何组合。在可供选择的方面中，用于实践如本文所提供的实施方式的模拟组合物可以包含以下三种结构基团中的一种或全部：a)除天然酰胺键(“肽键”)连接之外的残基连接基团；b)替代天然存在的氨基酸残基的非天然残基；或c)诱导二级结构模拟，即诱导或稳定化二级结构的残基，例如β转角、γ转角、β折叠、α螺旋构象等。例如，当多肽的所有或部分残基通过除非天然肽键以外的化学手段接合时，所述多肽可被表征为模拟物。

在替代实施方式中，示例性重链可变区和/或轻链可变区包含分别基于如SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:3所示序列，但具有一个或多个氨基酸残基缺失或取代的氨基酸序列，其中任选地，所述氨基酸取代中的所有或一些氨基酸取代是保守氨基酸取代，并且其中所述具有一个或多个缺失或取代的氨基酸序列(或变异多肽)至少基本上保留了特异性结合包含SEQ ID NO:1的肽或表位、或SEQ ID NO:1的多肽片段、p40(或p63同种型DeltaNp63)多肽或肽、或p40多肽或肽的片段的能力，尽管所述变体的特异性结合可具有高于或低于SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:3的多肽的结合亲和力。在替代实施方式中，所述变异多肽具有介于1个与约50个之间的氨基酸残基缺失或取代，其中任选地所述氨基酸取代中的所有或一些氨基酸取代是保守氨基酸取代。在替代实施方式中，所述变异多肽具有介于约1个至5个、5个至10个、10个至15个、或15个至20个之间的氨基酸残基缺失或取代。

在替代实施方式中，示例性重链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个或介于约1个与50个之间的氨基酸取代或缺失，其中任选地所述取代中的所有或一些取代是保守氨基酸取代，并且保留基本上特异性结合包含SEQ ID NO:1的肽或表位，或SEQ ID NO:1的多肽片段、p40(或p63同种型DeltaNp63)多肽或肽、或p40多肽或肽的片段的能力。

在替代实施方式中，示例性轻链可变区包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个或介于约1个与50个之间的氨基酸取代或缺失，其中任选地所述取代中的所有或一些取代是保守氨基酸取代，并且保留基本上特异性结合包含SEQ ID NO:1的肽或表位，或SEQ ID NO:1的多肽片段、p40(或p63同种型DeltaNp63)多肽或肽、或p40多肽或肽的片段的能力。

保守氨基酸取代是用具有相似特性的另一氨基酸取代多肽中的给定氨基酸的取代。在替代实施方式中，保守取代是以下取代：用另一种脂肪族氨基酸取代脂肪族氨基酸，例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；用苏氨酸替代丝氨酸，或反之亦然；用另一种酸性残基替代酸性残基，例如天冬氨酸和谷氨酸；用另一种带有酰胺基团的残基替代带有酰胺基团的残基，例如天冬酰胺和谷氨酰胺；用另一种碱性残基交换碱性残基，例如赖氨酸和精氨酸；以及用另一种芳香族残基替代芳香族残基，例如苯丙氨酸、酪氨酸。在替代实施方式中，其他变体是其中本发明的多肽的一个或多个氨基酸残基包括取代基的变体。可以取代蛋白质中的原始氨基酸并且如果对多肽的活性几乎没有影响或没有影响则可以被视为保守取代的氨基酸的非限制性示例包括：Ala被ser或thr取代；arg被gln、his或lys取代；asn被glu、gln、lys、his、asp取代；asp被asn、glu或gln取代；cys被ser或ala取代；gln被asn、glu、lys、his、asp或arg取代；glu被asn、gln、lys或asp取代；gly被pro取代；his被asn、lys、gln、arg、tyr取代；ile被leu、met、val、phe取代；leu被ile、met、val、phe取代；lys被asn、glu、gln、his、arg取代；met被ile、leu、val、phe取代；phe被trp、tyr、met、ile或leu取代；ser被thr、ala取代；thr被ser或ala取代；trp被phe、tyr取代；tyr被his、phe或trp取代；并且val被met、ile、leu取代。

重组蛋白的纯化和分离

在替代实施方式中，所述嵌合或重组抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白基本上是纯化或分离的，并且任选地，所述基本上纯化或分离的形式是用于免疫组织化学(IHC)方法和/或用作如本文所提供的试剂、试剂盒和/或制品的形式。

在替代实施方式中，所述嵌合或重组抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白是使用以下方式基本上纯化或分离的：物理化学分级，例如使用示差沉淀、基于抗体在典型样品中的大小、电荷或其他共享化学特征的免疫球蛋白的尺寸排阻或固相结合；类别特异性亲和力，例如，对免疫球蛋白具有特异性亲和力的固定化生物配体(例如，蛋白质、凝集素等)对特定抗体类别(例如，IgG或IgM)的固相结合，并且这可以纯化靶标类别的所有抗体，而不考虑抗原特异性；或抗原特异性亲和力，例如，仅亲和纯化样品中那些通过其特异性抗原结合结构域与特定抗原分子结合的抗体，其中这纯化了所有与所述抗原结合的抗体，而不考虑抗体类别或同种型。

在替代实施方式中，嵌合或重组抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，是使用标准分离方法而基本上纯化或分离的，所述标准分离方法是例如色谱法，例如离子交换(Ion Exchange,IEX)色谱法、疏水相互作用色谱法(Hydrophobic InteractionChromatography,HIC)、逆流色谱法、免疫亲和和/或尺寸排阻色谱法。

在替代实施方式中，嵌合或重组抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白是在生物反应器(例如灌注生物反应器)中使用连续表达和纯化工艺产生的，例如，如由Vogg等人，Methods Mol Biol.2018；第1850卷:147-178所述；或是使用搅拌罐或振荡生物反应器系统之后进行纯化而产生的。

免疫组织化学

在替代实施方式中，与如本文所提供的组合物(例如，如本文所提供的能够特异性结合人p40(p63同种型ΔNp63，或ΔNp63)蛋白质或多肽、或包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的抗原或表位的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白)、制品、试剂盒或方法一起使用的免疫组织化学方法学和/或试剂可包括或包含使用任何IHC方案、IHC医疗设备、装置和/或图像或数据分析系统来实践本领域中已知的IHC或IHC试剂，例如如在美国专利号(USPN)10,634,590(描述了用于IHC的载玻片架组件夹具)；10,565,479(描述了用于在染色组织的数字图像中鉴定模糊区域的方法)；10,564,076(描述了用于分析(或IHC)样品制备的系统)；10,551,395(描述了一种自动化组织学染色系统)；10,551,378(描述了一种组织染色方法)；10,504,224(描述了用于IHC的数字组织图像分析系统)；10,501,777(描述了IHC中蛋白质表达的同时、多重检测和定量)；10,488,340(描述了用于提取生物材料中的靶荧光团的图像的方法)；10,453,195(描述了使用数字病理成像检测感兴趣的组织区域的方法)；10,438,381(描述了用于生成组织切片的数字图像的装置、系统和方法)；10,430,943(描述了用于IHC图像分析的自动细胞核面积/数量估计的方法和程序)；10,416,176(描述了用于在自动化组织染色系统中处理试样的方法)；10,393,633(描述了用于处理和抑制IHC样品的降解的方法)；10,217,011(描述了IHC载玻片的处置)；10,209,165(描述了用于评定包含细胞的试样的染色品质的自动化或半自动方法)；10,126,216(描述了用于固定组织样品以供进行IHC的方法)；9,423,322；8,515,683(描述了用于自动检测免疫组织化学(IHC)模式的方法和系统)，或美国专利申请公开号US 2019/0178867 A1(描述了在不使用特定于组织样品薄切片内的特定组织对象的发色染色剂的情况下如在明场显微镜中成像的对所述组织对象的检测)；US 2019/0156510A1(描述了一种用于分析IHC组织样品的图像分析方法)；或者US 2019/0080450 A1(描述了经IHC染色的生物样品的染色品质的自动测定)；或者US 2020/0316589 A1(描述了一种用于处理和测试固定生物材料的多孔固体支持容器)中所述。

在替代实施方式中，如本文所提供的IHC方案或试剂盒中的重组抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白是基本上纯化或分离的，或者是未纯化或部分纯化的培养上清液的形式。

在替代实施方式中，如本文所提供的方法可以使用或包含用于使用例如本领域中已知的任何产品或方法、以及IHC方案或试剂来检测或可视化抗体-抗原相互作用的试剂。

在替代实施方式中，如本文所提供的方法包括使用显色免疫组织化学(chromogenic immunohistochemistry,CIH)，其中一抗(例如，如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白)或二抗(例如，其中所述二抗结合如本文所提供的一抗、或重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白)与可以催化产生颜色的反应的酶缀合，所述酶为例如过氧化物酶(例如，免疫过氧化物酶)，例如辣根过氧化物酶(HRP)。在替代实施方式中，在如本文所提供的方法中使用的发色部分是或包含香豆素；罗丹明；2,3,6,7-四氢-11-氧代-1H,5H,11H-[1]苯并吡喃[6,7,8-ij]喹啉-1-0-羧酸；7-(二乙氨基)香豆素-3-羧酸；香豆素衍生物；罗丹明衍生物；四甲基罗丹明；二芳基罗丹明衍生物；QSY 7；QSY 9；QSY 21；重氮发色团；DABSYL；柠檬黄；三芳基甲烷化合物；坚牢红；坚牢蓝；碱性品红；级联蓝乙酰基；Dapoxyl磺酸/羧酸琥珀酰亚胺酯；DY-405；Alexa Fluor 405琥珀酰亚胺酯；级联黄琥珀酰亚胺酯；吡啶基噁唑琥珀酰亚胺酯(PyMPO)；太平洋蓝琥珀酰亚胺酯；DY-415；7-羟基香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯；DYQ-425；6-FAM亚磷酰胺；荧光黄；碘乙酰胺；Alexa Fluor 430琥珀酰亚胺酯；Dabcyl琥珀酰亚胺酯；NBD氯化物/氟化物；QSY 35琥珀酰亚胺酯；DY-485XL；Cy2琥珀酰亚胺酯；DY-490；俄勒冈绿488羧酸琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 488琥珀酰亚胺酯；BODIPY 493/503C3琥珀酰亚胺酯；DY-480XL；BODIPY FL C3琥珀酰亚胺酯；BODIPY FL C5琥珀酰亚胺酯；BODIPY FL-X琥珀酰亚胺酯；DYQ-505；俄勒冈绿514羧酸琥珀酰亚胺酯；DY-510XL；DY-481XL；6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯(JOE)；DY-520XL；DY-521XL；BODIPY R6G C3琥珀酰亚胺酯；异硫氰酸赤藓红；5-羧基-2',4',5',7'-四溴砜荧光素琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor532琥珀酰亚胺酯；6-羧基-2',4,4',5'7,7'-六氯荧光素琥珀酰亚胺酯(HEX)；BODIPY 530/550C3琥珀酰亚胺酯；DY-530；BODIPY TMR-X琥珀酰亚胺酯；DY-555；DYQ-1；DY-556；Cy3琥珀酰亚胺酯；DY-547；DY-549；DY-550；Alexa Fluor555琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 546琥珀酰亚胺酯；DY-548；BODIPY 558/568C3琥珀酰亚胺酯；罗丹明红-X琥珀酰亚胺酯；QSY 7琥珀酰亚胺酯；BODIPY 564/570C3琥珀酰亚胺酯；BODIPY 576/589C3琥珀酰亚胺酯；羧基-X-罗丹明(ROX)；琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 568琥珀酰亚胺酯；DY-590；BODIPY 581/591C3琥珀酰亚胺酯；DY-591；BODIPY TR-X琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 594琥珀酰亚胺酯；DY-594；羧基萘并荧光素琥珀酰亚胺酯；DY-605；DY-610；Alexa Fluor 610琥珀酰亚胺酯；DY-615；BODIPY 630/650-X琥珀酰亚胺酯；羊毛罂红；Alexa Fluor 633琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor635琥珀酰亚胺酯；DY-634；DY-630；DY-631；DY-632；DY-633；DYQ-2；DY-636；BODIPY 650/665-X琥珀酰亚胺酯；DY-635；Cy5琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor 647琥珀酰亚胺酯；DY-647；DY-648；DY-650；DY-654；DY-652；DY-649；DY-651；DYQ-660；DYQ-661；Alexa Fluor 660琥珀酰亚胺酯；Cy5.5琥珀酰亚胺酯；DY-677；DY-675；DY-676；DY-678；Alexa Fluor 680琥珀酰亚胺酯；DY-679；DY-680；DY-682；DY-681；DYQ-3；DYQ-700；Alexa Fluor 700琥珀酰亚胺酯；DY-703；DY-701；DY-704；DY-700；DY-730；DY-731；DY-732；DY-734；DY-750；Cy7琥珀酰亚胺酯；DY-749；DYQ-4；Cy7.5琥珀酰亚胺酯；7-二乙氨基香豆素-3-羧酸；琥珀酰亚胺酯；Dabsyl磺酰氯；异硫氰酸荧光素(FITC)羧基琥珀酰亚胺酯(DY-495)；罗丹明绿羧酸琥珀酰亚胺酯(DY-505)；异硫氰酸伊红(EITC)；6-羧基-2',4,7,7'-四氯荧光素琥珀酰亚胺酯(TET)；羧基罗丹明6G琥珀酰亚胺酯；羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯(TMR、TAMRA)(DY-554)；QSY 9琥珀酰亚胺酯；磺酰罗丹明B磺酰氯(DY-560)；德克萨斯红(磺酰罗丹明101)；没食子兰；坚牢绿FCF；孔雀石绿；或者QSY 21琥珀酰亚胺酯。

在替代实施方式中，如本文所提供的方法包括使用免疫荧光，其中将一抗或二抗加标至荧光团(例如荧光素或异硫氰酸荧光素(FITC))、三芳基甲烷染料，例如罗丹明或罗丹明衍生物(例如，四甲基罗丹明(TRITC)、罗丹明6G、罗丹明123、罗丹明B、羧基四甲基罗丹明(TAMRA)、四甲基罗丹明(TMR)、磺酰罗丹明101))、氨基甲基香豆素乙酸酯(AMCA)、Alexa^TM或Dylight^TM荧光染料，或如在美国专利申请号US 2019/0018018 A1中描述的荧光团或染料。也可以使用3,3'-二氨基联苯胺(DAB)。

在替代实施方式中，如本文所提供的方法包括使用直接方法或一步染色方法，其中例如在组织切片中，一抗(例如，如本文所提供的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白)被标记并直接与抗原反应。虽然这种技术仅利用一种抗体并且因此简单且快速，但是由于信号放大很小，所以灵敏度可能较低。

在替代实施方式中，如本文所提供的方法包括使用间接方法，其中未标记的一抗(第一层)结合例如组织或器官中的靶抗原(例如，p40)，然后标记的二抗(第二层)与一抗反应。二抗可以针对同种型的，例如，一抗所来源于的动物物种的IgG。这种方法可能比直接检测策略更灵敏，这是因为由于如果若干二抗缀合至检测试剂例如荧光或酶报道分子，则所述二抗与各个一抗结合所导致的信号放大。

在替代实施方式中，如果二抗缀合至几种检测分子，例如生物素分子，所述生物素分子可以募集亲和素-、链霉亲和素-或NeutrAvidin^TM蛋白-结合酶的复合物，则实现了进一步扩增。

在替代实施方式中，对组织切片或组织活组织检查切片(例如，多聚甲醛(PFA)固定的组织或器官，或福尔马林固定的石蜡包埋组织)执行IHC。在替代实施方式中，组织被切片或整体使用。在切片之前，可以将组织样品包埋在介质中，例如石蜡或冷冻介质。组织切片可以在各种仪器上切片，最常用的是显微镜用切片机、恒冷切片机或振动切片机。试样可以在约3μm至5μm的范围内切片。切片可以被安装在载玻片上，使用浓度不断增加的醇洗液(例如，50％、75％、90％、95％、100％)脱水，并使用去污剂如二甲苯清洗，然后在显微镜下成像。

取决于固定和组织保存的方法，样品可能需要附加步骤来使p40表位可用于抗体结合，包括脱蜡和抗原修复。对于福尔马林固定的石蜡包埋组织，抗原修复往往是必要的，并且可以包括用热或蛋白酶预处理切片。

在替代实施方式中，使用EnVision DuoFLEX Doublestain System^TM(EnVisionDuoFLEX双重染色系统)(Agilent,San Jose,CA)执行IHC，这允许在单个载玻片上对两种或更多种标记物进行染色。在替代实施方式中，使用EnVision FLEX HRP Magenta高pH(DakoOmnis)系统执行IHC，并且结合可以通过EnVision FLEX HRP Magenta色原可视化。在替代实施方式中，使用EnVision FLEX微型试剂盒，高pH执行IHC，所述EnVision FLEX微型试剂盒，高pH是一种高灵敏度的可视化系统，旨在与Dako Autostainer^TM仪器一起在IHC中使用；这种双链路系统检测小鼠和兔一抗，并且通过3,3′-二氨基联苯胺(DAB)色原(DAB当例如被过氧化物酶氧化时，形成不溶于水的棕色沉淀)使反应可视化。

制品和试剂盒

提供了制品和试剂盒，所述制品和试剂盒包含如所提供的嵌合或重组抗人p40Ab，并且用于使用如本文所提供的嵌合或重组抗人p40 Ab实践如本文所提供的方法；并且任选地，所述制品和/或试剂盒可以进一步包含执行免疫组织化学(IHC)所需的一些或所有试剂，并且任选地可以包含用于实践如本文所提供的方法的使用说明。

在替代实施方式中，制品已经附接或附着(任选地共价结合)在如本文所提供的嵌合或重组抗体(Ab)或二聚体抗原结合蛋白上，并且任选地，如本文所提供的制品是或包含阵列、芯片、生物芯片、载玻片、托盘、皿(例如，微量滴定皿)、噬菌体或噬菌粒。

在替代实施方式中，用于实践如本文所提供的组合物、制品(例如，试剂盒)或方法的免疫组织化学方法论和/或试剂可包括或包含使用任何IHC方案、IHC医疗设备、装置和/或图像或数据分析系统来实践本领域中已知的IHC或IHC试剂，例如，如在美国专利号10,565,479(描述了用于在染色组织的数字图像中鉴定模糊区域的方法)；10,564,076(描述了用于分析(或IHC)样品制备的系统)；10,551,395(描述了一种自动化组织学染色系统)；10,551,378(描述了一种组织染色方法)；10,504,224(描述了用于IHC的数字组织图像分析系统)；10,501,777(描述了IHC中蛋白质表达的同时、多重检测和定量)；10,488,340(描述了用于提取生物材料中的靶荧光团的图像的方法)；10,453,195(描述了使用数字病理成像检测感兴趣的组织区域的方法)；10,438,381(描述了用于生成组织切片的数字图像的装置、系统和方法)；10,416,176(描述了用于在自动化组织染色系统中处理试样的方法)；10,393,633(描述了用于处理和抑制IHC样品的降解的方法)；10,217,011(描述了IHC载玻片的处置)；10,209,165(描述了用于评定包含细胞的试样的染色品质的自动化或半自动方法)；10,126,216(描述了用于固定组织样品以供进行IHC的方法)；9,423,322中所述。

任何上述方面和实施方式可以与本文在发明内容、附图和/或具体实施方式部分中公开的任何其他方面或实施方式组合。

如本说明书以及所附权利要求书中所用，除非上下文另外明确指出，否则单数形式的“一”、“一个(种)”和“该”包括复数指代物。

除非特别说明或从上下文显而易见，否则如本文所用，术语“或”被理解为包含性的并且涵盖“或”和“和”两者。

除非特别说明或从上下文显而易见，否则如本文所用，术语“约”被理解为在本领域的正常容差范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。约可以理解为在叙述值的20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、或0.01％之内。除非从上下文另外清楚地说明，否则本文提供的所有数值均由术语“约”修饰。

除非具体说明或从上下文中显而易见，如本文所用，术语“基本上全部”、“基本上大部分”、“基本上所有”或“大部分”涵盖组合物的参考量的至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或99.5％或更多。

在此引用的每项专利、专利申请、出版物和文件的全部内容据此以引用方式并入本文。对上述专利、专利申请、出版物和文件的引用并不承认上述任何一项是相关的现有技术，也不构成对这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。单独引用这些文件不应被解释为断言或承认任何文件的任何部分内容被认为是满足任何国家或地区专利申请法定公开要求的必要材料。尽管如此，保留在适当情况下依赖任何此类文件来提供审查机构或法院认为对所要求保护的标的至关重要的材料的权利。

在不脱离本发明的基本方面的情况下，可以对上述内容进行修改。尽管已经参考一个或多个具体实施方式对本发明进行了相当详细的描述，但本领域普通技术人员将认识到，可以对本申请中具体公开的实施方式进行改变，而这些修改和改进仍在本发明的范围和精神内。本文说明性描述的本发明可以在不存在此处未具体公开的任何要素的情况下适当地实践。因此，例如，在本文的每个实例中，术语“包括”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任一者都可以被其他两个术语中的任一者替换。因此，已经使用的术语和表达被用作描述而非限制的术语，不排除所示和描述的特征或其部分的等同物，并且应认识到在本发明的范围内各种修改是可能的。在以下权利要求中阐述了本发明的实施方式。

将参考本文所述的实施例进一步描述本发明；然而，应该理解的是本发明不限于此类实施例。

实施例

除非在实施例中另有说明，否则所有的重组DNA技术都是根据标准方案进行的，例如如在Sambrook等人，(2012)Molecular Cloning:A Laboratory Manual，第4版，ColdSpring Harbor Laboratory Press,NY中和在Ausubel等人，(1994)Current Protocols inMolecular Biology,Current Protocols,USA中的第1卷和第2卷中所述。标准分子生物学技术的其他参考文献包括Sambrook和Russell(2001)Molecular Cloning:A LaboratoryManual，第三版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY；Brown(1998)MolecularBiology LabFax,第二版,Academic Press(UK)的第I卷和第II卷。用于聚合酶链式反应的标准材料和方法可以在Dieffenbach和Dveksler(1995)PCR Primer:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory Press中和McPherson等人，(2000)PCR-Basics:From Background to Bench，第一版，Springer Verlag,Germany中找到。

实施例1：示例性抗p40抗体克隆15F11的开发

该实施例描述了命名为“15F11”的示例性抗p40抗体克隆的开发。

合成肽MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQ ID NO:1)并将其用于免疫3只兔。

47天后，从所述兔子上取血样，并通过ELISA滴定法测定针对肽免疫原的效价。

ELISA方案

-包被：在4℃用100ng/孔的中性抗生物素蛋白MS544.9的PBS溶液接种过夜(o/n)，并用PBST洗涤板3次；

-封闭：在室温(RT)下用370μl的1％ BSA的PBST溶液封闭每个孔达4.5小时(h)；

-包被：于37℃用1％ BSA(牛血清白蛋白)的PBST溶液中的100ng/孔的生物素-抗原(MS1891.2)包被1小时，用PBST洗涤板3次；

-样品：在室温下以每孔100μl的1％ BSA的PBST溶液添加如板格式中所提及的血浆稀释系列达1.5小时(参见结果)，用PBST洗涤板3次；

-检测抗体：在室温下添加100μl的山羊抗兔IgG-HRP(MS169.4)达1.25小时：在1％BSA的PBST溶液中1/5000，用PBST洗涤板3次。用PBS洗涤板3次；

-染色：添加每孔50μl的TMB；

-停止反应：添加每孔50μl的2M H₂SO₄达7分钟，测量A450。

结果(光密度OD作为血浆稀释度的函数)图解地示出在图1中。

决定继续免疫以获得更高的效价。在免疫开始后第61天进行重新测试，并重复ELISA，并且结果如图2、图3和图4所示。所有兔子都具有针对抗p40生物素肽的更高血浆效价。

下一步：选择和培养靶反应性B细胞并筛选B细胞上清液以鉴定含有靶反应性B细胞的孔。

使用一只兔的脾细胞执行B细胞选择和培养，之后在P40生物素肽上以ELISA筛选B细胞培养上清液。

结果：执行B细胞选择，结果使用B细胞培养上清液，通过靶标ELISA成功选择了靶反应性B细胞。在这两种选择方法中，将选定B细胞的子集以每孔单个细胞培养，并且一个子集作为后备以每孔多个细胞培养。分别基于以抗原ELISA(5倍背景)单细胞/孔和多细胞/孔测量的OD450大于(>)0.2选择克隆。

在石蜡IHC(IHC-P)中进一步对ELISA阳性的B细胞培养物上清液进行功能测试，以鉴定产生能够结合FFPE(福尔马林固定石蜡包埋)组织中的p40抗原的抗体的克隆。

对来自B细胞在IHC中表现出期望的结果的孔的编码特异性结合p40的抗体的可变区的核酸进行克隆和测序。此外，在真核细胞中进行了全长重组兔IgG的小规模表达，并通过标准IHC方案进行测试。

克隆和测序

如图5所示，对来源于B细胞培养物的cDNA进行PCR反应，以扩增重链和轻链可变结构域，产生正确大小的PCR产物；图5示出了4个选定克隆的经PCR扩增的VH和VL结构域。

将所有4个克隆的编码VH和VL结构域的经凝胶纯化的核酸分别克隆到载体中，随后进行菌落PCR以进行序列分析。将序列进行翻译和比对。

表达和验证

将从相应的VH和VL克隆获得的序列用于合成相应的VH和VL片段的密码子优化的基因构建体。将这些构建体亚克隆到分别含有兔恒定重链和轻链的表达载体(pTT5骨架)中。将每个克隆获得的重组序列在哺乳动物(HEK293-6E)表达系统中表达，从而产生重组单克隆兔抗人p40抗体。

一式两份地执行靶ELISA以验证所表达的抗体对抗原(表1，图6)和生物素化的对照肽(表2，图7)的免疫反应性。将来自兔A150733(加47天；1:20,000稀释的)和PBST加1％BSA的对照血浆分别作为阳性和阴性对照包括。反应性筛选显示所有4种再克隆的抗体都显示出针对客户靶标的强反应性(表1，图6)，与此同时观察到对所包括的不相关的生物素化肽没有/有限的反应性(表2，图7)。

表1(如图6所示)：对来源于针对客户靶P40生物素肽(MS1891.2)的B细胞选择和培养的再克隆兔B细胞克隆进行基于ELISA的反应性分析。

表2(如图7所示)：对来源于针对不相关的生物素化肽的B细胞选择和培养的再克隆兔B细胞克隆进行基于ELISA的反应性分析。

结论：

·克隆15F11已成功克隆、测序、表达并在ELISA中验证了对客户靶标(MS1891.2)的特异性反应性。

·除了VH的构架4中有1个氨基酸差异外，2个克隆的可变结构域序列完全相同。

·使用约1.8ml的含有对应兔IgG1抗体的上清液进行进一步筛选。

克隆15F11的染色性能：

图8示出了扁桃体的克隆15F11抗体染色的鳞状上皮细胞的图像。

图9示出了扁桃体的克隆15F11抗体染色的鳞状上皮细胞的图像。

图10示出了胎盘的克隆15F11抗体染色的细胞滋养层的图像。

图11示出了胎盘的克隆15F11抗体染色的细胞滋养层的图像。

图12示出了克隆15F11抗体染色的肺鳞状细胞癌的图像。

图13示出了克隆15F11抗体染色的肺腺癌的图像。

癌细胞的IHC

使用IHC在一组癌细胞和组织上测试重组兔单克隆抗人p40抗体、IgG同种型，如表3的表格中所示，其中：-：阴性，(+)：≥1-9％阳性细胞，+：≥10％阳性细胞。

癌细胞的IHC结果

mAb克隆BC28：

使用Biocare Medical的mAb克隆BC28作为所测试的两种p40抗体的参考。在Ventana BenchMark Ultra上执行该方案。在食道和扁桃体的鳞状上皮细胞以及前列腺的基底细胞中观察到了弱到强的核染色反应。在胎盘的分散的滋养细胞中观察到了弱到中度的染色反应。在内皮细胞、肌细胞和淋巴细胞未见染色反应。通常，提供了高信噪比。

上面列出了肿瘤形成染色图。使用大于或等于(≥)10％的截止值，21/23的肺鳞状细胞癌呈阳性。所有23个测试的肺腺癌均为阴性。

rmAb克隆15F11：

在这个测试中，通过使用效价为1:250的一抗、Target Retrieval Solution^TM(TRS)(Agilent,Dako)高pH中的热诱导表位回收(HIER)并使用EnVision FLEX+^TM作为检测系统，找到了具有最短TAT和最高信噪比的最佳方案。如果在TRS低pH条件下使用HIER，则1:50的效价给出最佳结果。

实际上，rmAb克隆15F11的两个选定方案的结果是相同的。两者均在食道和扁桃体的鳞状上皮细胞以及前列腺的基底细胞中表现出中度到强的核染色反应。在胎盘的分散的滋养细胞中观察到了弱到中度的核染色反应。两种方案的效价增加都会导致信噪比变差。

肿瘤形成染色模式与参考Ab相似。

癌细胞的IHC结论

在所执行的这种测试中，在TRS高pH条件下通过具有HIER的重组(rmAb)克隆15F11获得了最佳总体结果。结果与基于在BenchMark Ultra^TM,Ventana上染色的mAb BC28(用作对照)的参考相当。

IHC组织染色

图14示出了食管的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像(100X图像)。

图15示出了在各种条件下胎盘的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像(100X图像)，如图所示。

图16示出了扁桃体的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像(24小时固定，100X图像)。

图17示出了扁桃体的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像(144小时固定，100X图像)。

图18示出了在各种条件下正常前列腺的抗p40克隆15F11和BC28抗体染色的图像(100X图像)，如图所示。

图19示出了肾的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)。

图20示出了阑尾的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)。

图21示出了在各种条件下肺鳞状细胞癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的第一图像(100X图像)，如图所示。

图22示出了在各种条件下肺鳞状细胞癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的第二图像(100X图像)，如图所示。

图23示出了在各种条件下肺腺癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的第一图像(100X图像)，如图所示。

图24示出了在各种条件下肺腺癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的第二图像(100X图像)，如图所示。

图26示出了在各种条件下乳房导管癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如图所示。

图27示出了在各种条件下胰腺癌的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如图所示。

图28示出了在各种条件下弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的抗p40克隆15F11、BC28抗体染色的图像(100X图像)，如图所示。

图29示出了用抗p40克隆15F11测试的阳性正常扁桃体(p40高表达(HighExpressing,HE)和p40低表达(Low Expression,LE))和阴性对照组织。IHC强度得分(蓝色线)和背景染色(红色线)对比抗体稀释度。评估正常扁桃体组织#95496和#95570的HE结构(扁桃体的鳞状上皮细胞)和阴性对照结构(扁桃体的非上皮细胞)。

图30示出了用两倍稀释度的抗体测试的肺鳞状细胞癌(临床阳性)和阴性肺腺癌(临床阴性)组织。特异性染色(蓝色线)和背景染色(红色线)对比抗体稀释度。2X代表1X浓度的一半等。

图31示出了表3，显示了来自用于在一组癌细胞和组织上测试示例性重组兔单克隆抗人p40抗体的IHC的数据。

图32示出了表4，显示了来自用抗p40克隆15F11以及阴性对照试剂染色的数据。

参考文献

1.Bishop,J.A.,et al.,p40(DeltaNp63)is superior to p63 for thediagnosis of pulmonary squamous cell carcinoma.Mod Pathol,2012.25(3):p.405-15.

2.Sailer,V.,et al.,Comparison of p40(DeltaNp63)and p63expression inprostate tissues--which one is the superior diagnostic marker for basalcells？Histopathology,2013.63(1):p.50-6.

已描述了本发明的多个实施方式。然而，可以理解的是，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种修改。因此，其他实施方式在以下权利要求书的范围内。

<110> 安捷伦科技有限公司（AGILENT TECHNOLOGIES）

<120> 用于在免疫组织化学（IHC）方案中诊断癌症的抗体

<130> 6363.138511PCT/20190142

<140> 待分配

<141> 2021-08-25

<150> 63/070,817

<151> 2020-08-26

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 1

Met Leu Tyr Leu Glu Asn Asn Ala Gln Thr Gln Phe Ser Glu Pro Gln

1 5 10 15

Cys

<210> 2

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 2

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Lys Pro Asp Glu Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly

20 25 30

Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Tyr Ile Ser His Ile Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Pro Thr Thr Val Asp Leu Lys Met

65 70 75 80

Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Cys Arg Gly

85 90 95

Gln Tyr Gly Ser Gly Ile Ile Tyr Ala Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Ile Ser Ser

115

<210> 3

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 3

Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn

20 25 30

Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val

65 70 75 80

Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gly Glu Phe Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Gly Asp Cys Ser Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val

100 105 110

Lys

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 4

Met Asn Phe Glu Thr Ser Arg Cys Ala Thr

1 5 10

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 5

Gln Asp Ser Asp Leu Ser Asp Pro Met Trp

1 5 10

<210> 6

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 6

Met Leu Tyr Leu Glu Asn Asn Ala Gln Thr Gln Phe Ser Glu

1 5 10

<210> 7

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 7

Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp

1 5 10 15

Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr

20 25 30

Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr

35 40 45

Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr

50 55 60

Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser

65 70 75 80

His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val

85 90 95

Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys

100

<210> 8

<211> 323

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 8

Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly

1 5 10 15

Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr

20 25 30

Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn

35 40 45

Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys

65 70 75 80

Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala

85 90 95

Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly

100 105 110

Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

115 120 125

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

130 135 140

Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val

145 150 155 160

Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile

165 170 175

Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly

180 185 190

Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

195 200 205

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val

210 215 220

Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser

225 230 235 240

Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu

245 250 255

Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

275 280 285

Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met

290 295 300

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser

305 310 315 320

Pro Gly Lys

<210> 9

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 9

Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn

20 25 30

Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val

65 70 75 80

Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gly Glu Phe Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Gly Asp Cys Ser Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val

100 105 110

Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala

115 120 125

Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys

130 135 140

Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln

145 150 155 160

Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys

165 170 175

Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn

180 185 190

Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val

195 200 205

Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys

210 215

<210> 10

<211> 440

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 10

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Lys Pro Asp Glu Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly

20 25 30

Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Tyr Ile Ser His Ile Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Pro Thr Thr Val Asp Leu Lys Met

65 70 75 80

Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Cys Arg Gly

85 90 95

Gln Tyr Gly Ser Gly Ile Ile Tyr Ala Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Ile Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser

180 185 190

Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val

195 200 205

Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys Pro Pro

210 215 220

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro

225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

245 250 255

Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile

260 265 270

Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln

275 280 285

Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln

290 295 300

Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala

305 310 315 320

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro

325 330 335

Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser

340 345 350

Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser

355 360 365

Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr

370 375 380

Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr

385 390 395 400

Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe

405 410 415

Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

420 425 430

Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys

435 440

Claims

1.一种重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白能够特异性结合人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)蛋白或多肽、或抗原或包含氨基酸序列MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQ ID NO:1)的表位。

2.根据权利要求1所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白被制造为如下形式或以如下形式制造：

Fab'(F(ab')₂片段的单链)，

单结构域抗体(dAB)(或Ab重链或Ab轻链的单可变区)，

多个互补决定区(CDR)片段，或者

由两个或更多个抗体片段形成的多特异性抗体。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，

其中所述抗体或二聚体抗原结合蛋白包含与轻链可变区配对或结合的重链可变区，使得所述抗体或所述二聚体抗原结合蛋白能够特异性结合人p40(p63同种型DeltaNp63，或ΔNp63)蛋白或多肽、抗原或包含氨基酸序列MLYLENNAQTQFSEPQC-NH2(SEQ IDNO:1)的表位。

4.根据权利要求1至3中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，

其中所述Ab或其抗原结合片段或单体或二聚体抗原结合蛋白包含：

(1)包含SEQ ID NO:1的三个CDR1、CDR2和CDR3互补决定区(CDR)、或CDR1氨基酸(aa)残基GFSLSSYG(SEQ IDNO:2的残基25至32)、CDR2 aa残基ISHITTT(SEQ ID NO:2的残基50至56)和CDR3 aa残基CRGQYGSGIIYAL(SEQ ID NO:2的残基94至106)的氨基酸序列，或者

(1)包含SEQ ID NO:3的三个CDR1、CDR2和CDR3互补决定区(CDR)、或CDR1氨基酸(aa)残基QSVYNNKN(SEQ IDNO:3的残基27至34)、CDR2 aa残基YAS(SEQ ID NO:3的残基52至54)和CDR3 aa残基HGEFSCDSGDCSA(SEQ ID NO:3的残基91至103)的氨基酸序列，或者

5.根据权利要求1至4中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述重链可变区包含氨基酸序列：QSVEESGGRLVKPDESLTLTCTVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGL EWIGYISHITTTYYASWAKGRFTISKTSPTTVDLKMTSLTTEDTAT YFCCRGQYGSGIIYALWGPGTLVTISS(SEQ ID NO:2)，或者

6.根据权利要求1至4中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，

其中所述轻链可变区包含氨基酸序列：AQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPG QPPKLLIYYASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYY CHGEFSCDSGDCSAFGGGTEVVVK(SEQ ID NO:3)，或者

7.根据权利要求1至6中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，

其中所述重链可变区包含氨基酸序列：QSVEESGGRLVKPDESLTLTCTVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGL EWIGYISHITTTYYASWAKGRFTISKTSPTTVDLKMTSLTTEDTATYFCCRGQYGSGIIYALWGPGTLVTISS(SEQ ID NO:2)，或者具有一个或多个氨基酸取代或缺失的SEQ ID NO:2，并且所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白保留其特异性结合包含SEQ ID NO:1的肽或表位、或SEQ ID NO:1的多肽片段、p40(或p63同种型DeltaNp63)多肽或肽、或p40多肽或肽的片段的能力，并且

所述轻链可变区包含氨基酸序列：AQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPGQPPKLLIYYASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYY CHGEFSCDSGDCSAFGGGTEVVVK(SEQID NO:3)，或者

8.根据权利要求1至7中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中：所述轻链可变区进一步包含轻链恒定区的至少一部分。

9.根据权利要求8所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述轻链恒定区包含氨基酸序列：GDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDG TTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVT QGTTSVVQSFNRGDC(SEQ IDNO:7)。

10.根据权利要求1至7中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中：所述重链可变区进一步包含重链恒定区的至少一部分。

11.根据权利要求10所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述重链恒定区包含氨基酸序列：GQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPTCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPAVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK(SEQ ID NO:8)。

12.根据权利要求1至12中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中：所述轻链可变区进一步包含轻链恒定区的至少一部分；并且所述重链可变区进一步包含重链恒定区的至少一部分。

13.根据权利要求12所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白包含轻链和重链，所述轻链包含氨基酸序列(SEQ ID NO:9)AQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPGQPPKLLIYYASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCHGEFSCDSGDCSAFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC，和所述重链包含氨基酸序列(SEQ ID NO:10)QSVEESGGRLVKPDESLTLTCTVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYISHITTTYYASWAKGRFTISKTSPTTVDLKMTSLTTEDTATYFCCRGQYGSGIIYALWGPGTLVTISSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPTCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPAVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK。

14.根据权利要求1至13中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述重链恒定区包含来自IgG、IgM、IgA、IgD或IgE同种型的氨基酸序列；或者所述轻链恒定区包含来自kappa(κ)或lambda(λ)同种型的氨基酸序列。

15.根据权利要求1至14中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述重链恒定区的所述至少一部分、所述轻链恒定区的所述至少一部分、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区的至少一部分是或包含人、兔、小鼠或大鼠来源的氨基酸序列，或包含源自人、兔、小鼠或大鼠的恒定区氨基酸序列。

16.根据权利要求1至15中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述重链恒定区的所述至少一部分、所述轻链恒定区的所述至少一部分、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区的所述至少一部分是或包含合成氨基酸序列。

17.根据权利要求1至16中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述重组抗体、其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白、或所述重链恒定区、或所述轻链恒定区、或所述重链恒定区和所述轻链恒定区进一步包含可检测试剂或结合部分或与其结合。

18.根据权利要求17所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中可检测试剂或结合部分共价缀合至所述重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白。

19.根据权利要求17或权利要求18所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述可检测剂或结合部分包含生物素、荧光或化学发光标记、荧光团、磺基吲哚菁、尼罗红、罗丹明、苝、芴基、香豆素、7-甲氧基香豆素(Mca)、4-二甲胺偶氮苯-4-羧酸、[2-(4-硝基-2,1,3-苯并噁二唑-7-基)氨基乙基]三甲基铵(NBD)、尼罗蓝、Tamra、硼二吡咯(BODIPY)或其衍生物、染料、放射性同位素、量子点或光致发光水性纳米晶体、半抗原、或抗体结合表位或结构域。

20.根据权利要求19所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述荧光团是或包含丹酰基、荧光素、羧基荧光素(FAM)或6-FAM部分。

21.根据权利要求19所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述染料是或包含花菁染料、Cy3或Cy5。

22.根据权利要求19所述的重组抗体(Ab)或其抗原结合片段、或单体或二聚体抗原结合蛋白，其中所述半抗原是或包含生物素、茶碱、洋地黄毒苷、碳硼烷、荧光素或溴脱氧尿苷部分。

23.一种嵌合或重组核酸，其包含：编码如权利要求1至22中任一项所述或如前述权利要求中任一项所述的嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白的核酸序列；或者包含SEQ IDNO:2或SEQ IDNO:3的核酸序列，

其中任选地，所述嵌合或重组核酸进一步包含转录调控元件并且可操作地连接至所述转录调控元件，

并且任选地，所述转录调控元件包含启动子，

并且任选地，所述启动子是诱导型启动子或组成型启动子。

24.一种表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒，其包含根据权利要求19所述的嵌合或重组核酸。

25.一种细胞，其包含根据权利要求1至22中任一项所述的嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白，根据权利要求23所述的嵌合或重组核酸，或根据权利要求24所述的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒，

其中任选地，所述细胞是细菌、真菌、哺乳动物、酵母、昆虫或植物细胞。

26.一种用于检测细胞、组织、器官或前述中任一者的一部分中人p40蛋白的存在的方法，所述方法包括：

(a)使所述细胞、组织或器官或前述中任一者的一部分与根据权利要求1至22中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白接触，以及

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述接触包括使用免疫组织化学(IHC)测定。

28.根据权利要求26或权利要求27所述的方法，所述方法进一步包括使所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白与可检测试剂接触，以指示所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白与所述人p40蛋白结合或发出所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白与所述人p40蛋白结合的信号。

29.根据权利要求28所述的方法，

其中所述可检测剂特异性结合所述嵌合或重组抗体或二聚体抗原结合蛋白。

30.一种用于检测或诊断癌症的方法，其中任选地，所述癌症是：肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌(肺部的腺癌)、非小细胞肺癌、腺癌或鳞状细胞癌，

其中所述方法包括使用根据权利要求1至22中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的嵌合或重组抗体检测人p40蛋白在细胞、组织或器官样品中，任选地在来自有需要的个体的细胞、组织或器官样品中的表达或存在，以检测所述人p40蛋白在所述细胞、组织或器官样品中的表达或存在，

并且检测所述人p40蛋白在所述细胞、组织或器官样品中的表达或存在，检测或诊断所述癌症。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述检测包括进行免疫组织化学(IHC)测定。

32.一种用于治疗、改善或预防癌症的方法，所述方法包括首先使用根据权利要求30所述的方法检测或诊断所述癌症，之后治疗所述有需要的个体以治疗、改善或预防所述癌症。

33.根据权利要求32所述的方法，

其中所述癌症是肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌(肺部的腺癌)、非小细胞肺癌、腺癌或鳞状细胞癌，

34.根据权利要求1至22中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的嵌合或重组抗体用于检测或诊断癌症，或治疗、改善或预防癌症的用途，其中任选地，所述用途包括使用免疫组织化学(IHC)测定。

35.根据权利要求34所述的用途，

其中所述癌症是肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌(肺部的腺癌)、非小细胞肺癌、腺癌或鳞状细胞癌。

36.根据权利要求1至22中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的嵌合或重组抗体，其用途是检测或诊断癌症，或治疗、改善或预防癌症，其中任选地，所述用途包括使用免疫组织化学(IHC)测定。

37.根据权利要求36所述的嵌合或重组抗体，

38.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1至22中任一项所述或根据前述权利要求中任一项所述的嵌合或重组抗体，或根据权利要求24所述的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒，或根据权利要求25所述的细胞。

39.根据权利要求38所述的试剂盒，

其中所述试剂盒包含免疫组织化学(IHC)测定所需的组分，或任选地包含用于实行根据前述权利要求中任一项所述的方法的使用说明。