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CN116143700A - 酞嗪酮类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

酞嗪酮类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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CN116143700A
CN116143700A CN202211571163.6A CN202211571163A CN116143700A CN 116143700 A CN116143700 A CN 116143700A CN 202211571163 A CN202211571163 A CN 202211571163A CN 116143700 A CN116143700 A CN 116143700A
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Shenyang Pharmaceutical University
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Abstract

酞嗪酮类化合物及其制备方法和应用，属于医药技术领域，本发明目的是提供一种通式I所示的活性更好的PARP抑制剂及PARP/HDACs双靶点抑制剂。研究发现，绝大多数化合物对PARP具有显著的抑制活性，部分化合物对PARP和HDACs均具有较强的抑制活性，经药理活性筛选，表明本发明提供的化合物具有良好的抗肿瘤活性，对多种人源肿瘤细胞具有显著抑制作用，能够用于制备治疗由于PARP和/或HDAC异常表达所引起疾病的药物中，特别是用于制备治疗和/或预防癌症、神经变性型疾病及炎症等药物中。

Description

酞嗪酮类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及酞嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物的应用。
背景技术
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase，PARP)是一种核酶，具有催化ADP-核糖向靶蛋白转移的能力，参与包括基因调节，染色质重塑，DNA修复和细胞凋亡等许多细胞过程。自1963年，PARP首次被报道至今50多年，其重要作用得到了广大学者的广泛关注，特别是近年来对PARP与肿瘤发生之间的关系的研究以及利用PARP的抑制来提高肿瘤的治疗效果方面取得了巨大的进展。目前已知PARP家族至少包含18个分子亚型，其中，PARP-1发现最早，在PARP家族中含量最丰富，在PARP家族中发挥着约90％的功能，因此研究的最为广泛透彻。
PARP-1主要通过碱基切除修复(base-excision repair,BER)通路对单链损伤DNA进行修复。BRAC1/2基因通过同源重组(homologous recombination,HR)通路发挥DNA损伤修复功能，当BRCA基因发生突变，同源重组修复通路存在缺陷。此时，抑制PARP-1的功能时碱基切除修复受阻，导致DNA双链断裂(Double-strand breaks,DSBs)的形成，在同源重组缺陷细胞中，只能转向非同源末端连接修复途径而引起染色体不稳定、细胞周期停滞和细胞凋亡，即合成致死(Synthetic lethality,SL)。基于合成致死理论，PARP-1抑制剂可与同源重组修复缺陷的肿瘤细胞发生协同致死作用，但不会杀伤正常细胞。PARP-1抑制剂不仅可单独用于治疗同源重组缺陷肿瘤，而且可以通过抑制PARP-1介导的DNA损伤修复，使肿瘤细胞对细胞毒药物(放化疗药物，铂类、烷化剂和拓扑异构酶抑制剂等)更加敏感。
组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)是真核细胞中普遍存在的一类蛋白酶。目前，针对癌症的HDACs抑制剂研究主要是围绕Zn2+依赖型的蛋白酶进行的。研究表明，HDACs的过表达与癌症密切相关，它破坏了组蛋白乙酰化水平的平衡，导致基因表达失衡，从而影响细胞增殖和细胞周期调控，然后导致细胞癌变。HDACs抑制剂是近年来肿瘤治疗领域中的热门靶点，其能够抑制肿瘤细胞分化从而抑制多种肿瘤细胞生长，具有耐受性较高和细胞毒性较低的特性。
已有大量研究表明，同时抑制HDACs和PARP可以增强对肿瘤细胞的杀伤作用，在PARPi和HDACi共同处理的各种肿瘤细胞中，在体内和体外均观察到对肿瘤细胞的协同抑制作用，表明两种抑制剂的组合应用可用于提高抗肿瘤效果。因此，设计合成新型的PARP/HDACs双重抑制剂用于治疗肿瘤是一种潜在的策略。
发明内容
本发明的首要目的是提供通式Ⅰ所示的酞嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐，
Figure SMS_1
其中：
X2、X3、X4各自独立地为CR3；
R3选自氢、氟；
A环选自
Figure SMS_2
n为1或2；
R2选自(C1-C8)烷基，所述的(C1-C8)烷基可任选被1-3个R4取代；
R4选自三氟甲基、二氟甲基、氨基、羟基、苯基、吡啶基、(C1-C4)烷氧基、苯基(C2-C4)烯基、
Figure SMS_3
所述的苯基、苯基(C2-C4)烯基、吡啶基可任选被
Figure SMS_4
或1-3个R7取代；
R5、R6各自独立地选自氢、羟基、(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基；所述的(C1-C4)烷基可任选被1-3个R11取代；
或R5和R6与和它们所连接的氮原子一起形成5-6元含氮杂环，所述的含氮杂环含有1-3个选自N、O和S的杂原子，所述的含氮杂环可任选包括1-2个碳碳双键或叁键，所述的含氮杂环可任选被1-3个相同或不同的R10取代，环上碳原子可被氧代；
R11选自羟基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基氨基；
R7选自氢、卤素、三氟甲基、(C1-C4)烷基、氨基、羟基、氰基；
R10选自氢、(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、羟基、氨基、(C1-C4)酰基。
本发明优选通式Ⅰ所示的酞嗪酮类化合物或其在药学上可接受的盐，其中，
R2选自：
Figure SMS_5
本发明最终优选通式Ⅰ所示的酞嗪酮类化合物或其在药学上可接受的盐为以下化合物中任一个：
Figure SMS_6
Figure SMS_7
Figure SMS_8
Figure SMS_9
本发明中通式Ⅰ的酞嗪酮类化合物可以与酸生成药学上可接受的盐。所述的药学上可接受的盐包括与无机酸、有机酸、碱金属离子形成的盐，所述的无机酸选自：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸；所述的有机酸选自：富马酸、琥珀酸、马来酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、柠檬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸；所述的碱金属离子选自钾离子、钠离子、锂离子。
本发明中“卤素”是指氟、氯、溴或碘；“烷基”是指直链或支链的烷基；“环烷基”是指取代或未取代的环烷基；“芳基”是指无取代基或连有取代基的苯基或萘基；“杂芳基”是指含有一个或多个选自N、O、S杂原子的单环或多环的环状体系，环状体系是芳香性的，如咪唑基、吡啶基、吡唑基、(1,2,3)-和(1,2,4)-三唑基、呋喃基、噻吩基；
Figure SMS_10
代表取代基连接处。
本发明可以含有上式Ⅰ的酞嗪酮类化合物或其在药学上可接受的盐作为活性成分，与药学上可接受的载体或赋形剂混合制备成药物组合物。所述载体或赋形剂包括本领域公知的稀释剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂包括淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、磷酸氢钙；湿润剂包括水、乙醇、异丙醇等；粘合剂包括淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇；崩解剂包括干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、十二烷基磺酸钠；润滑剂和助流剂包括滑石粉、二氧化硅、聚乙二醇。
本发明的药物组合物能够制备成药学上可接受的剂型，所述剂型包括注射剂、片剂、胶囊剂。
本发明的酞嗪酮类化合物或其在药学上可接受的盐与其他活性成分组合使用，从而达到更优的治疗效果。
本发明还提供了通式Ⅰ的酞嗪酮类化合物或其在药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗与PARP酶和HDAC酶有关的癌症、神经变性型疾病及炎症的药物中的应用。所述的癌症为乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、宫颈癌、睾丸癌、黑色素瘤、鼻咽癌、口腔癌、恶性胶质母细胞瘤、膀胱癌、前列腺癌、食管癌、脑肿瘤、生殖系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、淋巴系统肿瘤、消化系统肿瘤和皮肤肿瘤中的任一种。
本发明还提供如下所示的合成路线(路线1-2)，所有的原料都是通过这些合成路线中描述的方式、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终化合物都是通过这些合成路线中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。所述R2、X2、X3、X4为通式I所示化合物对应位置的相应基团，n＝1或2。
路线1：
Figure SMS_11
以取代或为取代的邻甲酰基苯甲酸为起始原料与亚磷酸二甲酯反应制得磷叶立德中间体1；中间体1经Wittig-Horner反应得中间体2；中间体2经氰基水解和环合反应制得中间体3；中间体3经缩合和脱Boc保护反应制得中间体4；中间体4经二硫化碳加成制得中间体5；中间体5与卤代胺(酰胺或酯)经亲核取代反应制得式Ⅱ的目标化合物。
路线2：
Figure SMS_12
以中间体3为原料，经缩合和脱Boc保护反应制得中间体6；中间体6经二硫化碳加成制得中间体7；中间体7与卤代胺(酰胺或酯)经亲核取代反应制得式III的目标化合物。
本发明的有益效果：
本发明提供的所述化合物具有较强的单独抑制PARP作用及共同抑制PARP/HDAC作用，能够用于制备治疗由于PARP和/或HDAC异常表达所引起疾病的药物中，特别是用于制备治疗和/或预防癌症、神经变性型疾病及炎症等药物中。
本发明目的是开发得到活性更好的PARP抑制剂及PARP/HDACs双靶点抑制剂。通过实验可知，绝大多数化合物对PARP具有显著的抑制活性，部分化合物对PARP和HDACs均具有较强的抑制活性，经药理活性筛选，表明本发明提供的化合物具有良好的抗肿瘤活性，对多种人源肿瘤细胞具有显著抑制作用，具有进一步开发的药用价值。
具体实施方式
实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。化合物的核磁共振氢谱采用BrukerAVANCE III 600或Bruker ARX-600核磁共振仪测定，四甲基硅烷作内标；质谱采用Agilent1100四级杆液质联用仪测定；所用试剂均为分析纯或化学纯。
实施例1：2-(二甲氨基)乙基-4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物1)的制备
步骤A：(3-氧代-1,3-二氢-异苯并呋喃-1-基)膦酸二甲基酯(中间体1)的制备
Figure SMS_13
在0℃下，将亚磷酸二甲酯(16.5mL,0.18mol)滴加到甲醇钠(77.2g,0.19mol)的甲醇(150mL)溶液中，滴毕，将邻甲酰基苯甲酸(22.5g,0.15mol)在20min内分批加入反应混合物中，并将温度保持在5℃以下。将反应液缓慢升温至20℃反应2h。反应完毕，在30min内将甲磺酸(13.6mL,0.21mol)滴加到反应液中，滴毕，蒸去溶剂，得到的白色残余物溶于水(90mL)，用二氯甲烷萃取三次(3×70mL)，合并有机层，有机层用水反洗两次(2×20mL)，硫酸镁干燥。抽滤除去硫酸镁，蒸干滤液，冷冻得到结晶性白色固体25.8g，收率71.2％，无需纯化直接用于下一步，MS(ESI)m/z(％):243.04[M+H]+。
步骤B：2-氟-5-(3-氧代-1,(3H)-二氢-异苯并呋喃亚基甲基)苯甲腈(中间体2a)的制备
Figure SMS_14
将24.2g(0.1mol)中间体1和2-氟-5-甲酰基苯腈(0.1mol)溶于200mL四氢呋喃中，缓慢滴入(10mL,0.1mol)三乙胺超过25min，保持温度低于15℃。滴加完毕，将反应液缓慢升温至20℃，反应1h。反应完毕，蒸出大部分溶剂，将反应液倒入150mL水中继续搅拌30min，抽滤收集固体，分别用水洗两次(2×20mL)，正己烷洗两次(2×20mL)，乙醚洗两次(2×20mL)，干燥得白色固体(E:Z 4:3)，收率91.2％，该异构体无需分离直接用于下一步，MS(ESI)m/z(％):264.35[M-H]-。
按照步骤B的操作方法，分别制得中间体2b-2d
3-氟-5-(3-氧代-1,(3H)-二氢-异苯并呋喃亚基甲基)苯甲腈(2b)：白色固体，收率89.2％，MS(ESI)m/z(％):264.09[M-H]-。
4-氟-3-(3-氧代-1,(3H)-二氢-异苯并呋喃亚基甲基)苯甲腈(2c)：白色固体，收率90.5％，MS(ESI)m/z(％):264.28[M-H]-。
3-(3-氧代-1,(3H)-二氢-异苯并呋喃亚基甲基)苯甲腈(2d)：白色固体，收率93.1％，MS(ESI)m/z(％):246.12[M-H]-。
步骤C：2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(中间体3a)的制备
Figure SMS_15
在搅拌状态下，向中间体2a(0.09mol)的130mL水的悬浮液中加入NaOH水溶液(13N,32mL)，升温至90℃，反应1h。将反应液冷却至70℃，缓慢加入80％水合肼(65mL,1.3mol)，反应液在70℃反应18h。反应完毕，冷却至室温，用8N盐酸溶液酸化至pH 4。室温下继续搅拌10min，将反应液抽滤，依次用水(2×40mL)和乙醚(2×30mL)洗涤滤饼，干燥得浅粉色粉末，收率71％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.28(bs,1H),12.61(s,1H),8.28(dd,J＝7.9,1.0Hz,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(td,J＝7.9,1.3Hz,1H),7.86–7.81(m,2H),7.61–7.57(m,1H),7.25(dd,J＝10.7,8.5Hz,1H),4.37(s,2H).MS(ESI)m/z(％):297.24[M-H]-。
按照步骤C的操作方法，分别制得中间体3b-3d
3-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(3b)：白色固体，收率69.2％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.30(bs,1H),12.62(s,1H),8.29–8.26(m,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.94–7.90(m,1H),7.87–7.83(m,1H),7.75–7.73(m,1H),7.54–7.48(m,2H),4.42(s,2H).MS(ESI)m/z(％):299.13[M+H]+。
4-氟-3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(3c)：白色固体，收率70.1％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.02(s,1H),12.54(s,1H),8.29(d,J＝7.6Hz,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.97(t,J＝7.3Hz,1H),7.93–7.86(m,3H),7.34(t,J＝9.0Hz,1H),4.42(s,2H).MS(ESI)m/z(％):297.24[M-H]-。
3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(3d)：白色固体，收率75.5％。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.97(bs,1H),12.62(s,1H),8.29–8.26(m,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.91–7.87(m,2H),7.85–7.81(m,1H),7.79(d,J＝7.8Hz,1H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.44(t,J＝7.7Hz,1H),4.39(s,2H).MS(ESI)m/z(％):279.30[M-H]-。
步骤D：4-(4-氟-3-(哌嗪-1-羰基)苄基)-2H-酞嗪-1-酮(中间体4a)的制备
Figure SMS_16
将中间体3a(2.1g,7.0mmol)，N-Boc哌嗪(1.6g,8.4mmol)，HBTU(3.2g,8.4mmol)，三乙胺(1.4g,14.0mmol)中加入到DMF(20mL)中，室温反应2h。反应完毕，将反应液倒入水中，继续搅拌超过1h，抽滤悬浮液，依次用冷DMF-H2O(1:1,2×5mL)，冷水(2×5mL)，冷异丙醇(2×5mL)和冷乙醚(2×5mL)洗涤滤饼，干燥得白色固体3.1g；室温下将HCl(6N,15mL)加入到上述制备的中间体(3.1g,6.5mmol)的乙醇(7mL)溶液中，室温搅拌3h，蒸除乙醇，水溶液用氨水调至pH10，用二氯甲烷萃取三次(3×10mL)，合并有机层，用10mL水反洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色结晶性固体2.1g，总收率85％，1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.59(s,1H),8.28–8.24(m,1H),7.99–7.94(m,1H),7.92–7.86(m,1H),7.86–7.80(m,1H),7.43–7.38(m,1H),7.34–7.30(m,1H),7.24–7.19(m,1H),4.32(s,2H),3.57–2.54(m,8H).MS(ESI)m/z(％):367.17[M+H]+。
按照步骤D的操作方法，分别制得中间体4b-4e及中间体6
4-(3-氟-5-(哌嗪-1-羰基)苄基)-2H-酞嗪-1-酮(4b)：白色固体，收率76.2％，MS(ESI)m/z(％):367.74[M+H]+。
4-(2-氟-5-(哌嗪-1-羰基)苄基)-2H-酞嗪-1-酮(4c)：白色固体，收率72.5％，MS(ESI)m/z(％):367.23[M+H]+。
4-(3-(哌嗪-1-羰基)苄基)-2H-酞嗪-1-酮(4d)：白色固体，收率82.5％，1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.31–8.21(m,1H),7.99–7.92(m,1H),7.91–7.79(m,2H),7.43–7.34(m,2H),7.32–7.26(m,1H),7.24–7.16(m,1H),4.35(s,2H),3.57–3.04(m,5H),2.78–2.54(m,4H).MS(ESI)m/z(％):349.02[M+H]+。
4-(3-(1,4-二氮杂环庚烷-1-羰基)-4-氟苄基)-2H-酞嗪-1-酮(4e)：浅黄色固体，收率65.4％，1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.99–7.94(m,1H),7.92–7.86(m,1H),7.85–7.81(m,1H),7.47–7.37(m,2H),7.27–7.18(m,1H),4.33(s,2H),3.84–3.55(m,2H),3.31–2.77(m,6H),1.93–1.62(m,2H).MS(ESI)m/z(％):381.03[M+H]+。
2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(中间体6)：以中间体3a和4-氨基-N-Boc-哌啶为原料，制得中间体6，浅黄色固体，收率66.8％，1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.49(bs,1H),8.28–8.24(m,1H),8.00–7.97(m,1H),7.92–7.88(m,1H),7.85–7.81(m,1H),7.52–7.48(m,1H),7.47–7.42(m,1H),7.22–7.18(m,1H),4.33(s,2H),4.04–3.96(m,1H),3.26–1.67(m,8H).MS(ESI)m/z(％):381.35[M+H]+。
步骤E：4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸钠(中间体5a)的制备
Figure SMS_17
将中间体4a(0.37g,1mmol)，NaOH(0.04g,1mmol)，二硫化碳(0.1g,1mmol)溶于甲醇(5mL)中，室温反应4h，反应完毕，抽滤得浅黄色固体0.4g，收率88.0％，MS(ESI)m/z(％):486.89[M+Na]+。
按照步骤E的操作方法，分别制得中间体5b-5e及中间体7
4-(3-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸钠(5b)：浅黄色固体，收率84.5％，MS(ESI)m/z(％):486.83[M+Na]+。
4-(4-氟-3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸钠(5c)：浅黄色固体，收率85.3％，MS(ESI)m/z(％):486.83[M+Na]+。
4-(3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸钠(5d)：浅黄色固体，收率83.8％，MS(ESI)m/z(％):468.87[M+Na]+。
4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)1,4-二氮杂环庚烷-1-碳二硫酸钠(5e)：浅黄色固体，收率75.8％，MS(ESI)m/z(％):500.88[M+Na]+。
4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸钠(中间体7)：以中间体6为原料制得中间体7，浅黄色固体，收率82.8％，MS(ESI)m/z(％):500.88[M+Na]+。
步骤F：2-(二甲氨基)乙基-4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物1)的制备
Figure SMS_18
将中间体5a(0.24g,0.5mmol)，2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(0.08g,0.5mmol)和三乙胺(0.06g,0.6mmol)溶于甲醇(5mL)中，50℃反应4h，反应完毕，冷却至室温，抽滤得白色固体0.23g，收率90％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.90(t,J＝7.3Hz,1H),7.84(t,J＝7.4Hz,1H),7.48–7.43(m,1H),7.39(d,J＝4.9Hz,1H),7.25(t,J＝8.9Hz,1H),4.34(s,2H),4.32–3.80(m,4H),3.76–3.69(m,2H),3.41–3.37(m,2H),3.35–3.33(m,2H),2.55–2.52(m,2H),2.18(s,6H).MS(ESI)m/z(％):514.39[M+H]+。
按照化合物1的制备方法，以中间体5和7为原料，与各种小分子卤代胺(酰胺，酯)通过取代反应经步骤F的制备方法得到化合物2-46的化合物。
实施例2：2-(二乙基氨基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物2)的制备
以中间体5a及2-二乙氨基氯乙烷盐酸盐为原料，按步骤F制得白色固体，收率为86.4％。1H NMR(600MHz,CDCl3-d6)δ10.88(s,1H),8.43–8.39(m,1H),7.73–7.68(m,2H),7.67–7.63(m,1H),7.32–7.25(m,2H),6.98(t,J＝8.8Hz,1H),4.23(s,2H),4.23–3.74(m,6H),3.43–3.38(m,2H),3.38–3.30(m,2H),2.77–2.70(m,2H),2.64–2.53(m,4H),1.01(t,J＝6.8Hz,6H).MS(ESI)m/z:542.42[M+H]+。
实施例3：2-(吡咯烷-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物3)的制备
以中间体5a及N-(2-氯乙基)吡咯烷盐酸盐为原料，按步骤F制得白色固体，收率为83.5％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.3Hz,1H),7.96(d,J＝7.6Hz,1H),7.92–7.87(m,1H),7.86–7.80(m,1H),7.50–7.43(m,1H),7.42–7.35(m,1H),7.25(t,J＝8.6Hz,1H),4.34(s,2H),4.34–3.80(m,4H),3.78–3.68(m,2H),3.49–3.42(m,2H),2.90–2.75(m,2H),2.69–2.60(m,2H),2.50(s,4H),1.73(s,4H).MS(ESI)m/z:540.25[M+H]+。
实施例4：2-(哌啶-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物4)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.28–8.25(m,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.91–7.87(m,1H),7.83(t,J＝7.5Hz,1H),7.46(ddd,J＝7.7,5.0,2.1Hz,1H),7.38(dd,J＝6.4,2.1Hz,1H),7.25(t,J＝9.0Hz,1H),4.34(s,2H),4.34–3.78(m,4H),3.76–3.69(m,2H),3.45–3.35(m,2H),3.35–3.33(m,2H),2.56–2.51(m,2H),2.38(s,4H),1.48(s,4H),1.37(s,2H).MS(ESI)m/z:554.46[M+H]+。
实施例5：2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物5)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.91–7.88(m,1H),7.85–7.82(m,1H),7.46(ddd,J＝7.7,4.9,2.1Hz,1H),7.38(dd,J＝6.4,2.1Hz,1H),7.25(t,J＝9.0Hz,1H),4.34(s,2H),4.34–3.79(m,4H),3.77–3.68(m,2H),3.40(t,J＝7.1Hz,2H),3.35–3.33(m,2H),2.56(t,J＝7.1Hz,2H),2.49–2.23(m,8H),2.17(s,3H).MS(ESI)m/z:569.31[M+H]+。
实施例6：2-吗啉乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物6)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.4Hz,1H),7.96(d,J＝7.3Hz,1H),7.90(t,J＝6.6Hz,1H),7.84(t,J＝6.7Hz,1H),7.48–7.43(m,1H),7.41–7.35(m,1H),7.25(t,J＝8.5Hz,1H),4.34(s,2H),4.34–3.80(m,4H),3.77–3.70(m,2H),3.56(s,4H),3.45–3.39(m,2H),3.35–3.33(m,2H),2.60–2.55(m,2H),2.41(s,4H).MS(ESI)m/z:556.18[M+H]+。
实施例7：2-(二甲氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物7)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.90(t,J＝7.3Hz,1H),7.83(t,J＝7.3Hz,1H),7.49–7.44(m,1H),7.43–7.38(m,1H),7.25(t,J＝8.9Hz,1H),4.34(s,2H),4.30(s,2H),4.34–3.84(m,4H),3.79–3.69(m,2H),3.38–3.34(m,2H),3.08(s,3H),2.84(s,3H).MS(ESI)m/z:550.10[M+Na]+。
实施例8：2-(二乙氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物8)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝8.1Hz,1H),7.93–7.88(m,1H),7.86–7.81(m,1H),7.49–7.44(m,1H),7.43–7.38(m,1H),7.25(t,J＝9.0Hz,1H),4.34(s,2H),4.32(s,2H),4.34–3.85(m,4H),3.81–3.67(m,2H),3.42(q,J＝7.0Hz,2H),3.38–3.34(m,2H),3.28(q,J＝7.0Hz,2H),1.20(t,J＝7.1Hz,3H),1.01(t,J＝7.0Hz,3H).MS(ESI)m/z:578.14[M+Na]+。
实施例9：2-(环丙基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物9)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.33–8.17(m,2H),8.00–7.94(m,1H),7.93–7.88(m,1H),7.86–7.80(m,1H),7.50–7.44(m,1H),7.43–7.37(m,1H),7.29–7.21(m,1H),4.34(s,2H),4.34–4.01(m,3H),3.96(s,2H),3.94–3.82(m,1H),3.80–3.68(m,2H),3.40–3.34(m,2H),2.64–2.58(m,1H),0.65–0.56(m,2H),0.46–0.33(m,2H).MS(ESI)m/z:562.14[M+Na]+。
实施例10：2-(环丁基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物10)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.42(d,J＝7.6Hz,1H),8.28–8.24(m,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.92–7.88(m,1H),7.85–7.81(m,1H),7.46(ddd,J＝7.8,4.9,2.1Hz,1H),7.40(dd,J＝6.4,2.0Hz,1H),7.25(t,J＝9.0Hz,1H),4.34(s,2H),4.34–4.03(m,3H),3.98(s,2H),3.95–3.80(m,1H),3.78–3.70(m,2H),3.38–3.33(m,2H),2.16–2.11(m,2H),1.92–1.85(m,2H),1.66–1.57(m,2H).MS(ESI)m/z:576.22[M+Na]+。
实施例11：2-(环戊基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物11)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.31–8.22(m,1H),8.18–8.09(m,1H),8.01–7.94(m,1H),7.93–7.87(m,1H),7.86–7.77(m,1H),7.51–7.43(m,1H),7.43–7.33(m,1H),7.31–7.18(m,1H),4.34(s,2H),4.34–3.82(m,7H),3.80–3.68(m,2H),3.40–3.35(m,2H),1.82–1.34(m,8H).MS(ESI)m/z:590.17[M+Na]+。
实施例12：2-(环己基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物12)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.30–8.23(m,1H),8.07–8.01(m,1H),7.99–7.78(m,3H),7.49–7.37(m,2H),7.31–7.20(m,1H),4.34(s,2H),4.34–4.06(m,3H),3.99(s,2H),3.92–3.85(m,1H),3.78–3.70(m,2H),3.54–3.48(m,1H),3.35(m,2H),1.74–1.51(m,5H),1.24–1.07(m,5H).MS(ESI)m/z:604.19[M+Na]+。
实施例13：2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物13)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.90(t,J＝7.4Hz,1H),7.84(t,J＝7.5Hz,1H),7.48–7.43(m,1H),7.42–7.38(m,1H),7.25(t,J＝9.0Hz,1H),4.34(s,2H),4.33–4.24(m,1H),4.22(s,2H),4.19–3.99(m,2H),3.99–3.82(m,1H),3.79–3.68(m,2H),3.56(t,J＝6.8Hz,2H),3.38–3.35(m,2H),3.29(t,J＝6.9Hz,2H),1.91(p,J＝6.8Hz,2H),1.78(p,J＝6.8Hz,2H).MS(ESI)m/z:576.22[M+Na]+。
实施例14：2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物14)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(d,J＝7.8Hz,1H),7.92–7.88(m,1H),7.83(t,J＝7.2Hz,1H),7.48–7.43(m,1H),7.42–7.37(m,1H),7.25(t,J＝8.7Hz,1H),4.34(s,2H),4.32(s,2H),4.23–4.00(m,3H),3.96–3.87(m,1H),3.79–3.70(m,2H),3.52–3.46(m,2H),3.45–3.40(m,2H),3.39–3.35(m,2H),1.63–1.52(m,4H),1.46–1.39(m,2H).MS(ESI)m/z:590.11[M+Na]+。
实施例15：2-吗啉代-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物15)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.90(t,J＝7.4Hz,1H),7.84(t,J＝7.5Hz,1H),7.48–7.44(m,1H),7.42–7.38(m,1H),7.25(t,J＝8.9Hz,1H),4.34(s,2H),4.33(s,2H),4.30–3.97(m,3H),3.96–3.81(m,1H),3.78–3.71(m,2H),3.65–3.60(m,2H),3.58–3.53(m,4H),3.46–3.42(m,2H),3.38–3.35(m,2H).MS(ESI)m/z:592.16[M+Na]+。
实施例16：2-硫代吗啉代-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物16)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(d,J＝7.8Hz,1H),7.90(t,J＝6.7Hz,1H),7.84(t,J＝7.2Hz,1H),7.48–7.44(m,1H),7.42–7.38(m,1H),7.25(t,J＝8.9Hz,1H),4.34(s,5H),4.19–4.03(m,2H),3.98–3.87(m,1H),3.83–3.79(m,2H),3.77–3.70(m,4H),2.74–2.70(m,2H),2.56–2.53(m,2H).MS(ESI)m/z:608.16[M+Na]+。
实施例17：2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物17)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝7.8Hz,1H),7.90(t,J＝7.2Hz,1H),7.83(t,J＝7.2Hz,1H),7.48–7.44(m,1H),7.40(d,J＝4.9Hz,1H),7.25(t,J＝8.9Hz,1H),4.34(s,2H),4.32(s,2H),4.31–3.84(m,4H),3.78–3.70(m,2H),3.56–3.51(m,2H),3.47–3.42(m,2H),3.38–3.34(m,2H),2.38–2.33(m,2H),2.27–2.23(m,2H),2.18(s,3H).MS(ESI)m/z:605.28[M+Na]+。
实施例18：2-(哌啶-1-基)乙基4-(3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物18)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(t,J＝7.4Hz,1H),7.84(d,J＝7.5Hz,1H),7.46–7.37(m,3H),7.29(d,J＝7.3Hz,1H),4.36(s,2H),4.36–3.81(m,4H),3.78–3.58(m,2H),3.48–3.36(m,4H),2.59–2.52(m,2H),2.49–2.30(m,4H),1.53–1.44(m,4H),1.41–1.34(m,2H).MS(ESI)m/z:536.21[M+H]+。
实施例19：2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基4-(3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物19)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.26(d,J＝7.9Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(t,J＝7.6Hz,1H),7.83(t,J＝7.5Hz,1H),7.43(d,J＝7.8Hz,1H),7.41–7.37(m,2H),7.31–7.27(m,1H),4.36(s,2H),4.36–3.77(m,4H),3.75–3.55(m,2H),3.45–3.35(m,4H),2.59–2.53(m,2H),2.49–2.21(m,8H),2.16(s,3H).MS(ESI)m/z:551.26[M+H]+。
实施例20：2-(环戊基氨基)-2-氧代乙基4-(3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物20)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.33–8.21(m,1H),8.19–8.09(m,1H),8.02–7.77(m,3H),7.50–7.34(m,3H),7.34–7.25(m,1H),4.36(s,2H),4.33–3.82(m,7H),3.81–3.59(m,2H),3.55–3.37(m,2H),1.83–1.57(m,4H),1.53–1.34(m,4H).MS(ESI)m/z:572.12[M+Na]+。
实施例21：2-(环己基氨基)-2-氧代乙基4-(3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物21)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.32–8.22(m,1H),8.09–8.01(m,1H),8.00–7.93(m,1H),7.92–7.86(m,1H),7.86–7.79(m,1H),7.47–7.36(m,3H),7.34–7.26(m,1H),4.36(s,2H),4.36–3.84(m,7H),3.79–3.62(m,2H),3.56–3.40(m,3H),1.76–1.63(m,4H),1.57–1.50(m,1H),1.29–1.25(m,1H),1.22–1.08(m,4H).MS(ESI)m/z:587.17[M+Na]+。
实施例22：2-(哌啶-1-基)乙基4-(3-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物22)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.27(d,J＝7.8Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(t,J＝7.4Hz,1H),7.84(t,J＝7.5Hz,1H),7.31(d,J＝9.6Hz,1H),7.22(s,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,1H),4.39(s,2H),4.36–3.78(m,4H),3.76–3.60(m,2H),3.48–3.34(m,4H),2.61–2.51(m,2H),2.49–2.28(m,4H),1.56–1.43(m,4H),1.43–1.32(m,2H).MS(ESI)m/z:554.20[M+H]+。
实施例23：2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基4-(3-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物23)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),8.29(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.93–7.89(m,1H),7.87–7.83(m,1H),7.34–7.31(m,1H),7.25(s,1H),7.20–7.17(m,1H),4.40(s,2H),4.37–4.15(m,2H),4.09–3.84(m,2H),3.78–3.65(m,2H),3.45–3.42(m,2H),3.42–3.38(m,2H),2.59(t,J＝7.1Hz,2H),2.57–2.37(m,8H),2.26(s,3H).MS(ESI)m/z:569.24[M+H]+。
实施例24：2-(环戊基氨基)-2-氧代乙基4-(3-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物24)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.27(d,J＝7.8Hz,1H),8.14(d,J＝6.9Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(t,J＝7.4Hz,1H),7.84(t,J＝7.4Hz,1H),7.31(d,J＝9.5Hz,1H),7.23(s,1H),7.17(d,J＝8.3Hz,1H),4.39(s,2H),4.34–4.05(m,3H),4.02–3.87(m,4H),3.76–3.63(m,2H),3.48–3.37(m,2H),1.82–1.73(m,2H),1.67–1.58(m,2H),1.53–1.44(m,2H),1.42–1.34(m,2H).MS(ESI)m/z:590.05[M+Na]+。
实施例25：2-(环己基氨基)-2-氧代乙基4-(3-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物25)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.33–8.21(m,1H),8.09–7.81(m,4H),7.37–7.13(m,3H),4.39(s,2H),4.33–3.87(m,6H),3.78–3.61(m,2H),3.55–3.38(m,3H),1.75–1.61(m,4H),1.58–1.50(m,1H),1.30–1.25(m,1H),1.22–1.05(m,4H).MS(ESI)m/z:604.19[M+Na]+。
实施例26：2-(哌啶-1-基)乙基4-(4-氟-3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物26)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),8.28(d,J＝7.8Hz,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.95(t,J＝7.5Hz,1H),7.87(t,J＝7.5Hz,1H),7.45–7.37(m,2H),7.31(t,J＝9.0Hz,1H),4.39(s,2H),4.34–3.76(m,4H),3.74–3.56(m,2H),3.49–3.34(m,4H),2.62–2.51(m,2H),2.49–2.28(m,4H),1.55–1.43(m,4H),1.42–1.33(m,2H).MS(ESI)m/z:554.65[M+H]+。
实施例27：2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基4-(4-氟-3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物27)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),8.34–8.23(m,1H),8.04–7.92(m,2H),7.91–7.83(m,1H),7.46–7.36(m,2H),7.35–7.26(m,1H),4.39(s,2H),4.32–3.80(m,4H),3.74–3.58(m,2H),3.45–3.36(m,4H),2.59–2.55(m,2H),2.48–2.24(m,8H),2.17(s,3H).MS(ESI)m/z:570.27[M+H]+。
实施例28：2-(环戊基氨基)-2-氧代乙基4-(4-氟-3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物28)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),8.35–8.22(m,1H),8.19–8.09(m,1H),8.04–7.92(m,2H),7.91–7.83(m,1H),7.49–7.37(m,2H),7.36–7.26(m,1H),4.39(s,2H),4.32–3.86(m,7H),3.76–3.57(m,2H),3.56–3.39(m,2H),1.83–1.71(m,2H),1.67–1.57(m,2H),1.53–1.45(m,2H),1.42–1.33(m,2H).MS(ESI)m/z:589.98[M+Na]+。
实施例29：2-(环己基氨基)-2-氧代乙基4-(4-氟-3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物29)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),8.36–8.21(m,1H),8.09–7.92(m,3H),7.92–7.81(m,1H),7.51–7.24(m,3H),4.39(s,2H),4.31–3.88(m,6H),3.76–3.60(m,2H),3.55–3.39(m,3H),1.77–1.62(m,4H),1.57–1.49(m,1H),1.31–1.26(m,1H),1.22–1.07(m,4H).MS(ESI)m/z:604.13[M+Na]+。
实施例30：2-(哌啶-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-碳二硫酸酯(化合物30)的制备
MS(ESI)m/z:568.92[M+H]+。
实施例31：2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-碳二硫酸酯(化合物31)的制备
MS(ESI)m/z:583.13[M+H]+。
实施例32：2-(环戊基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-碳二硫酸酯(化合物32)的制备
MS(ESI)m/z:604.51[M+Na]+。
实施例33：2-(环己基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-碳二硫酸酯(化合物33)的制备
MS(ESI)m/z:618.27[M+Na]+。
实施例34：2-(二甲基氨基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物34)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.35–8.21(m,2H),8.01–7.94(m,1H),7.92–7.79(m,2H),7.57–7.40(m,2H),7.25–7.15(m,1H),5.20–5.07(m,1H),4.48–4.38(m,1H),4.33(s,2H),4.21–4.10(m,1H),3.60–3.44(m,2H),3.37–3.26(m,2H),2.51–2.46(m,2H),2.17(s,6H),2.00–1.86(m,2H),1.57–1.43(m,2H).MS(ESI)m/z:528.02[M+Na]+。
实施例35：2-(二乙基氨基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物35)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.39–8.19(m,2H),8.03–7.79(m,3H),7.60–7.38(m,2H),7.28–7.13(m,1H),5.24–5.02(m,1H),4.50–4.38(m,1H),4.33(s,2H),4.23–4.07(m,1H),3.59–3.45(m,2H),3.36–3.28(m,2H),2.78–2.51(m,6H),2.01–1.88(m,2H),1.57–1.43(m,2H),1.00(s,6H).MS(ESI)m/z:556.38[M+H]+。
实施例36：2-(吡咯烷-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物36)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.35–8.22(m,2H),8.01–7.94(m,1H),7.93–7.80(m,2H),7.57–7.49(m,1H),7.48–7.41(m,1H),7.24–7.16(m,1H),5.22–5.02(m,1H),4.47–4.37(m,1H),4.33(s,2H),4.20–4.11(m,1H),3.58–3.49(m,2H),3.48–3.41(m,2H),3.01–2.56(m,6H),1.99–1.90(m,2H),1.82–1.69(m,4H),1.55–1.46(m,2H).MS(ESI)m/z:554.46[M+H]+。
实施例37：2-(哌啶-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物37)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.38–8.19(m,2H),8.03–7.79(m,3H),7.61–7.38(m,2H),7.28–7.13(m,1H),5.23–5.01(m,1H),4.52–4.38(m,1H),4.33(s,2H),4.22–4.08(m,1H),3.58–3.39(m,4H),2.65–2.50(m,6H),2.00–1.88(m,2H),1.60–1.36(m,8H).MS(ESI)m/z:568.35[M+H]+。
实施例38：2-吗啉乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物38)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.59(s,1H),8.30(d,J＝7.7Hz,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.91–7.88(m,1H),7.85–7.81(m,1H),7.53(dd,J＝6.6,2.0Hz,1H),7.44(ddd,J＝7.3,4.5,2.1Hz,1H),7.22–7.18(m,1H),5.17–5.10(m,1H),4.45–4.39(m,1H),4.33(s,2H),4.18–4.13(m,1H),3.58–3.54(m,4H),3.54–3.45(m,2H),3.39(t,J＝7.0Hz,2H),2.56(t,J＝7.2Hz,2H),2.45–2.37(m,4H),1.98–1.90(m,2H),1.53–1.47(m,2H).MS(ESI)m/z:570.20[M+H]+。
实施例39：2-(二乙氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物39)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.34(d,J＝7.7Hz,1H),8.29–8.23(m,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.92–7.87(m,1H),7.83(t,J＝7.5Hz,1H),7.56–7.50(m,1H),7.44(ddd,J＝7.6,4.7,2.3Hz,1H),7.23–7.17(m,1H),5.15–5.02(m,1H),4.52–4.38(m,1H),4.33(s,2H),4.29(s,2H),4.21–4.11(m,1H),3.64–3.46(m,2H),3.42(q,J＝7.1Hz,2H),3.27(q,J＝7.0Hz,2H),2.02–1.89(m,2H),1.57–1.47(m,2H),1.20(t,J＝7.1Hz,3H),1.01(t,J＝7.1Hz,3H).MS(ESI)m/z:592.22[M+Na]+。
实施例40：2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物40)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.59(s,1H),8.33(d,J＝7.4Hz,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(t,J＝7.5Hz,1H),7.83(t,J＝7.5Hz,1H),7.55–7.51(m,1H),7.47–7.41(m,1H),7.20(t,J＝9.2Hz,1H),5.14–5.01(m,1H),4.50–4.40(m,1H),4.33(s,2H),4.19(s,2H),4.18–4.13(m,1H),3.61–3.47(m,4H),3.29(t,J＝6.8Hz,2H),1.99–1.87(m,4H),1.78(p,J＝6.8Hz,2H),1.56–1.48(m,2H).MS(ESI)m/z:590.11[M+Na]+。
实施例41：2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物41)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.33(d,J＝7.5Hz,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(t,J＝7.4Hz,1H),7.83(t,J＝7.5Hz,1H),7.55–7.51(m,1H),7.46–7.42(m,1H),7.20(t,J＝9.2Hz,1H),5.12–5.05(m,1H),4.49–4.41(m,1H),4.33(s,2H),4.29(s,2H),4.20–4.13(m,1H),3.58(s,2H),3.50–3.47(m,2H),3.45–3.39(m,2H),2.00–1.90(m,2H),1.62–1.48(m,6H),1.45–1.40(m,2H).MS(ESI)m/z:604.19[M+Na]+。
实施例42：2-吗啉代-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物42)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.59(s,1H),8.34(d,J＝7.6Hz,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(t,J＝7.3Hz,1H),7.83(t,J＝7.5Hz,1H),7.55–7.51(m,1H),7.46–7.42(m,1H),7.20(t,J＝9.3Hz,1H),5.12–5.05(m,1H),4.48–4.41(m,1H),4.33(s,2H),4.30(s,2H),4.19–4.14(m,1H),3.64–3.60(m,2H),3.60–3.51(m,6H),3.46–3.43(m,2H),1.98–1.89(m,2H),1.56–1.48(m,2H).MS(ESI)m/z:606.11[M+Na]+。
实施例43：2-(环丙基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物43)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.59(s,1H),8.33(d,J＝7.6Hz,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),8.23–8.20(m,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.91–7.88(m,1H),7.83(t,J＝7.2Hz,1H),7.53(dd,J＝6.6,1.9Hz,1H),7.44(ddd,J＝7.3,4.6,2.2Hz,1H),7.22–7.18(m,1H),5.11–5.05(m,1H),4.44–4.38(m,1H),4.33(s,2H),4.18–4.13(m,1H),3.94(s,2H),3.58–3.48(m,2H),2.63–2.59(m,1H),1.98–1.91(m,2H),1.52(q,J＝9.9Hz,2H),0.63–0.58(m,2H),0.43–0.37(m,2H).MS(ESI)m/z:576.16[M+Na]+。
实施例44：2-(环丁基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物44)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.40(d,J＝7.2Hz,1H),8.33(d,J＝7.4Hz,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(d,J＝7.9Hz,1H),7.89(t,J＝7.4Hz,1H),7.83(t,J＝7.4Hz,1H),7.59–7.48(m,1H),7.47–7.40(m,1H),7.20(t,J＝9.2Hz,1H),5.18–4.99(m,1H),4.46–4.37(m,1H),4.33(s,2H),4.22–4.09(m,2H),3.96(s,2H),3.64–3.43(m,2H),2.20–2.07(m,2H),2.00–1.83(m,4H),1.66–1.47(m,4H).MS(ESI)m/z:590.11[M+Na]+。
实施例45：2-(环戊基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物45)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.33(d,J＝7.5Hz,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),8.11(d,J＝7.0Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(t,J＝7.5Hz,1H),7.83(t,J＝7.5Hz,1H),7.57–7.49(m,1H),7.47–7.40(m,1H),7.20(t,J＝9.2Hz,1H),5.14–5.03(m,1H),4.47–4.37(m,1H),4.33(s,2H),4.19–4.11(m,1H),4.03–3.97(m,1H),3.96(s,2H),3.61–3.46(m,2H),2.01–1.88(m,2H),1.83–1.70(m,2H),1.68–1.58(m,2H),1.57–1.43(m,4H),1.43–1.32(m,2H).MS(ESI)m/z:604.13[M+Na]+。
实施例46：2-(环己基氨基)-2-氧代乙基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物46)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.33(d,J＝7.5Hz,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),8.02(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(t,J＝7.5Hz,1H),7.83(t,J＝7.5Hz,1H),7.55–7.51(m,1H),7.46–7.42(m,1H),7.20(t,J＝9.2Hz,1H),5.15–5.02(m,1H),4.48–4.37(m,1H),4.33(s,2H),4.19–4.12(m,1H),3.97(s,2H),3.60–3.47(m,3H),2.00–1.89(m,2H),1.74–1.63(m,4H),1.56–1.49(m,3H),1.27–1.21(m,2H),1.19–1.10(m,3H).MS(ESI)m/z:618.15[M+Na]+。
实施例47：4-(羟基氨基)-4-氧代丁基-4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物47)的制备
将中间体5a(0.24g,0.5mmol)，4-溴丁酸乙酯(0.12g,0.6mmol)和三乙胺(0.06g,0.6mmol)溶于甲醇(5mL)中，50℃反应4h，反应完毕，冷却至室温，真空浓缩，柱层析得到4-((4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-硫代羰基)丁酸乙酯，白色固体0.25g，收率90％。
将中间体4-((4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-硫代羰基)丁酸乙酯(0.25g,0.45mmol)，DBU(0.04g,0.23mmol)和羟胺水溶液(0.27g,8.2mmol)溶于甲醇(5mL)中，40℃反应3h，反应完毕，冷却至室温，加水(5mL)稀释，用2N HCl调至pH6，用DCM:iPrOH(3:1)萃取(3×5mL)。合并有机层，无水硫酸钠干燥并真空浓缩，柱层析得到浅红色固体0.15g，收率62％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),10.42(s,1H),8.72(s,1H),8.27(d,J＝6.7Hz,1H),7.98–7.93(m,1H),7.93–7.87(m,1H),7.86–7.81(m,1H),7.49–7.43(m,1H),7.42–7.37(m,1H),7.25(t,J＝7.5Hz,1H),4.34(s,3H),4.18–4.01(m,2H),3.93–3.81(m,1H),3.77–3.69(m,2H),3.40–3.34(m,2H),3.29–3.21(m,2H),2.13–2.02(m,2H),1.90–1.82(m,2H)；13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ196.29,168.71,164.66,159.87,157.76,156.13,145.27,135.27,133.96,132.41,132.36,132.04,129.55,129.52,128.38,126.56,125.94,123.84,123.72,116.55,116.41,45.82,41.40,36.94,36.18,31.77,24.92.MS(ESI)m/z(％):566.17[M+Na]+。
按照实施例47的制备方法，由中间体5和7与各种小分子卤代酯制备得到实施例48-63的化合物。
实施例48：5-(羟基氨基)-5-氧代戊基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物48)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),10.36(s,1H),8.69(s,1H),8.32–8.23(m,1H),8.02–7.77(m,3H),7.52–7.35(m,2H),7.30–7.20(m,1H),4.34(s,2H),4.34––3.81(m,4H),3.79–3.63(m,2H),3.40–3.34(m,2H),3.30–3.20(m,2H),2.07–1.89(m,2H),1.72–1.47(m,4H).MS(ESI)m/z:580.19[M+Na]+。
实施例49：6-(羟基氨基)-6-氧代己基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物49)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),10.35(s,1H),8.68(s,1H),8.27(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.90(t,J＝7.4Hz,1H),7.84(t,J＝7.4Hz,1H),7.48–7.43(m,1H),7.41–7.37(m,1H),7.25(t,J＝8.9Hz,1H),4.34(s,2H),4.34–3.80(m,4H),3.78–3.68(m,2H),3.35–3.32(m,2H),3.24(t,J＝7.3Hz,2H),1.95(t,J＝7.2Hz,2H),1.62(p,J＝7.3Hz,2H),1.55–1.47(m,2H),1.39–1.30(m,2H).MS(ESI)m/z:594.08[M+Na]+。
实施例50：7-(羟基氨基)-7-氧代庚基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物50)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),10.33(s,1H),8.66(s,1H),8.35–8.20(m,1H),8.00–7.79(m,3H),7.51–7.33(m,2H),7.31–7.19(m,1H),4.34(s,2H),4.34–3.80(m,4H),3.80–3.64(m,2H),3.39–3.33(m,2H),3.27–3.18(m,2H),2.03–1.83(m,2H),1.68–1.21(m,8H).MS(ESI)m/z:608.29[M+Na]+。
实施例51：4-(羟基氨基甲酰基)苄基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物51)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),11.20(s,1H),9.04(s,1H),8.31–8.20(m,1H),7.99–7.79(m,3H),7.74–7.64(m,2H),7.52–7.41(m,3H),7.41–7.36(m,1H),7.29–7.21(m,1H),4.61(s,2H),4.34(s,2H),4.34–3.80(m,4H),3.78–3.66(m,2H),3.38–3.34(m,2H).MS(ESI)m/z:614.05[M+Na]+。
实施例52：(E)-4-(3-羟基氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基苄基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物52)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),10.79(s,1H),9.06(s,1H),8.32–8.22(m,1H),7.98–7.80(m,3H),7.55–7.36(m,7H),7.29–7.21(m,1H),6.53–6.38(m,1H),4.58(s,2H),4.34(s,2H),4.34–3.82(m,4H),3.79–3.67(m,2H),3.45–3.35(m,2H).MS(ESI)m/z:640.23[M+Na]+。
实施例53：6-(羟基氨基)-6-氧代己基4-(3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物53)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),10.35(s,1H),8.67(s,1H),8.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.96(d,J＝7.5Hz,1H),7.91–7.86(m,1H),7.86–7.80(m,1H),7.45–7.37(m,3H),7.33–7.26(m,1H),4.36(s,2H),4.36–3.84(m,4H),3.76–3.62(m,2H),3.51–3.37(m,2H),3.24(t,J＝7.0Hz,2H),1.95(t,J＝7.0Hz,2H),1.68–1.57(m,2H),1.55–1.46(m,2H),1.38–1.29(m,2H).MS(ESI)m/z:576.03[M+Na]+。
实施例54：7-(羟基氨基)-7-氧代庚基4-(3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物54)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),10.33(s,1H),8.65(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.89(t,J＝7.3Hz,1H),7.83(t,J＝7.4Hz,1H),7.45–7.35(m,3H),7.29(d,J＝7.3Hz,1H),4.36(s,2H),4.36–3.80(m,4H),3.78–3.58(m,2H),3.47–3.35(m,2H),3.23(t,J＝7.1Hz,2H),1.93(t,J＝7.1Hz,2H),1.67–1.57(m,2H),1.51–1.45(m,2H),1.38–1.32(m,2H),1.28–1.25(m,2H).MS(ESI)m/z:589.98[M+Na]+。
实施例55：6-(羟基氨基)-6-氧代己基4-(3-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物55)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),10.35(s,1H),8.68(s,1H),8.35–8.20(m,1H),8.03–7.82(m,3H),7.36–7.13(m,3H),4.39(s,2H),4.39–3.83(m,4H),3.76–3.62(m,2H),3.48–3.37(m,2H),3.29–3.19(m,2H),2.03–1.89(m,2H),1.68–1.58(m,2H),1.56–1.47(m,2H),1.38–1.30(m,2H).MS(ESI)m/z:594.02[M+Na]+。
实施例56：7-(羟基氨基)-7-氧代庚基4-(3-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物56)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),10.34(s,1H),8.66(s,1H),8.27(d,J＝7.6Hz,1H),7.98(d,J＝7.7Hz,1H),7.91(t,J＝7.1Hz,1H),7.85(t,J＝7.2Hz,1H),7.31(d,J＝9.1Hz,1H),7.23(s,1H),7.17(d,J＝8.3Hz,1H),4.39(s,2H),4.35–4.13(m,2H),4.07–3.83(m,2H),3.76–3.62(m,2H),3.46–3.36(m,2H),3.24(t,J＝7.1Hz,2H),1.94(t,J＝7.1Hz,2H),1.66–1.58(m,2H),1.51–1.45(m,2H),1.39–1.32(m,2H),1.28–1.25(m,2H).MS(ESI)m/z:608.23[M+Na]+。
实施例57：6-(羟基氨基)-6-氧代己基4-(4-氟-3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物57)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),10.34(s,1H),8.67(s,1H),8.37–8.20(m,1H),8.07–7.79(m,3H),7.50–7.24(m,3H),4.39(s,2H),4.31–3.84(m,4H),3.75–3.57(m,2H),3.53–3.37(m,2H),3.28–3.20(m,2H),2.05–1.84(m,2H),1.69–1.57(m,2H),1.56–1.46(m,2H),1.40–1.28(m,2H).MS(ESI)m/z:594.27[M+Na]+。
实施例58：7-(羟基氨基)-7-氧代庚基4-(4-氟-3-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-碳二硫酸酯(化合物58)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),10.34(s,1H),8.66(s,1H),8.28(d,J＝7.3Hz,1H),8.04–7.93(m,2H),7.91–7.83(m,1H),7.46–7.36(m,2H),7.31(t,J＝8.1Hz,1H),4.39(s,2H),4.34–3.81(m,4H),3.76–3.57(m,2H),3.52–3.36(m,2H),3.28–3.19(m,2H),2.00–1.88(m,2H),1.67–1.57(m,2H),1.52–1.44(m,2H),1.39–1.32(m,2H),1.29–1.24(m,2H).MS(ESI)m/z:608.16[M+Na]+。
实施例59：6-(羟基氨基)-6-氧代己基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-碳二硫酸酯(化合物59)的制备
MS(ESI)m/z:607.97[M+Na]+。
实施例60：7-(羟基氨基)-7-氧代庚基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-碳二硫酸酯(化合物60)的制备
MS(ESI)m/z:622.05[M+Na]+。
实施例61：6-(羟基氨基)-6-氧代己基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物61)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),10.34(s,1H),8.67(s,1H),8.35–8.22(m,2H),7.98(d,J＝7.7Hz,1H),7.89(t,J＝7.2Hz,1H),7.83(t,J＝7.2Hz,1H),7.58–7.49(m,1H),7.49–7.40(m,1H),7.20(t,J＝9.1Hz,1H),5.22–5.06(m,1H),4.49–4.37(m,1H),4.33(s,2H),4.20–4.11(m,1H),3.59–3.44(m,2H),3.26–3.17(m,2H),2.03–1.85(m,4H),1.65–1.58(m,2H),1.55–1.46(m,4H),1.37–1.30(m,2H).MS(ESI)m/z:608.03[M+Na]+。
实施例62：7-(羟基氨基)-7-氧代庚基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物62)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),10.34(s,1H),8.66(s,1H),8.31(d,J＝7.4Hz,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(d,J＝7.8Hz,1H),7.89(t,J＝7.3Hz,1H),7.83(t,J＝7.3Hz,1H),7.56–7.51(m,1H),7.47–7.41(m,1H),7.20(t,J＝9.2Hz,1H),5.21–5.07(m,1H),4.48–4.38(m,1H),4.33(s,2H),4.21–4.09(m,1H),3.56–3.44(m,2H),3.25–3.16(m,2H),1.98–1.88(m,4H),1.65–1.57(m,2H),1.52–1.44(m,4H),1.38–1.32(m,2H),1.28–1.24(m,2H).MS(ESI)m/z:622.05[M+Na]+。
实施例63：4-(羟基氨基甲酰基)苄基4-(2-氟-5-((4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)哌啶-1-碳二硫酸酯(化合物63)的制备
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),11.20(s,1H),9.03(s,1H),8.34–8.24(m,2H),8.00–7.94(m,1H),7.92–7.87(m,1H),7.85–7.79(m,1H),7.69(d,J＝7.5Hz,2H),7.55–7.51(m,1H),7.49–7.38(m,3H),7.23–7.17(m,1H),5.17–5.06(m,1H),4.59(s,2H),4.44–4.36(m,1H),4.33(s,2H),4.20–4.13(m,1H),3.60–3.48(m,2H),1.99–1.90(m,2H),1.56–1.46(m,2H).MS(ESI)m/z:628.07[M+Na]+。
本发明化合物的生物活性研究
化合物抑制PARP-1活性试验
用于测量PARP-1激酶活性的试验基于酶联免疫吸附试验(ELISA)。具体操作是：
准备组蛋白包被的384孔板，向每个孔中添加25μL组蛋白溶液，并在4℃下孵育过夜。准备PBST缓冲液，封闭缓冲液和测定缓冲液，使用PBST缓冲液将组蛋白包被的384孔板洗涤3次。室温下用50μL封闭缓冲液封闭1h。使用PBST缓冲液洗涤板3次。在源板中准备1000x化合物。将1μL化合物从源板转移到96孔中间板中，以1000rpm摇动并离心1min。将5μLDMSO/化合物转移至每个孔中。将PARP-1和DNA混合物在25℃孵育10min。加入10μL PARP-1&DNA，在室温下与化合物孵育10min并将10μL DNA加入测定板的最小对照中。向每个孔中添加10μL2.5x NAD+，并在25℃孵育60min。使用PBST缓冲液洗涤板3次。加入20μL抗多聚/单ADP核糖兔单克隆抗体。在室温下孵育1.5h，并使用PBST缓冲液将板洗涤3次。加入20μL稀释液(1：2000在封闭缓冲液中)抗兔IgG，HRP抗体。在室温下孵育1h，然后使用PBST缓冲液将板洗涤3次。加入25μL Femto-ECL底物A和Femto-ECL底物B(1：1)的混合物。立即在Envision上读取化学发光。计算实施例化合物对PARP-1激酶的IC50数据见表1。
表1
Figure SMS_19
Figure SMS_20
化合物抑制HDAC-1活性试验
用于测量HDAC-1激酶活性的试验基于酶联免疫吸附试验(ELISA)。具体操作是：
准备1x测定缓冲液(改良的Tris缓冲液)。通过Echo550在100％DMSO中将化合物转移至测定板。在1x分析缓冲液中准备酶溶液。在1x分析缓冲液中添加胰蛋白酶和Ac肽底物以制成底物溶液。将15μL酶溶液转移至测定板。对于低对照，需要转移15μL1x分析缓冲液。向每个孔中添加10μL底物溶液以开始反应。在Paradigm上以355nm激发和460nm发射动力学读取板。实施例化合物对HDAC-1激酶的抑制数据见表2。
表2
Figure SMS_21
Figure SMS_22
体外抗肿瘤细胞活性
对按照本发明的上式Ⅰ的酞嗪酮类化合物进行了体外抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-436、人乳腺癌细胞MCF-7和人乳腺癌细胞MDA-MB-231活性筛选。
细胞复苏并传代2-3次稳定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其从培养瓶底部消化下来。将细胞消化液倒入离心管中后，之后加入培养液以终止消化。将离心管在800r/min下离心10min，弃去上清液后加入5mL培养液，吹打混匀细胞，吸取10μL细胞混悬液加入细胞计数板中计数，调整细胞浓度为104个/孔。96孔板中除A1孔为空白孔不加细胞外，其余皆加入100μL细胞混悬液。将96孔板放入培养箱中培养24h。
用50μL二甲基亚砜溶解受试样品，然后加入适量培养液，使样品溶解成2mg/mL药液，然后在24孔板中将样品稀释为20、4、0.8、0.16、0.032μg/mL。
每个浓度加入3孔，其中周围两行两列细胞长势受环境影响较大，只和为空白细胞孔使用。将96孔板放入培养箱中培养96h。
将96孔板中带药培养液弃去，用磷酸缓冲溶液(PBS)将细胞冲洗两遍，在每孔中加入MTT(0.5mg/mL)100μL放入培养箱中4h后，弃去MTT溶液，加入二甲基亚砜100μL。在磁力振荡器上振荡使存活细胞与MTT反应产物甲充分溶解，放入酶标仪中测定结果。通过Bliss法可求出药物IC50值。
化合物的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-436、人乳腺癌细胞MCF-7和人乳腺癌细胞MDA-MB-231活性结果见表3。
表3
Figure SMS_23
Figure SMS_24
Figure SMS_25
从上述试验结果可以清楚地看出，本发明所要保护的通式Ⅰ所示的化合物对PARP和/或HDAC具有高水平的抑制活性，以及良好的体外抗肿瘤细胞增殖活性。
尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围之内。

Claims (9)

1.一种酞嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述酞嗪酮类化合物结构式为：
Figure FDA0003988102370000011
其中：
X2、X3、X4各自独立地为CR3；
R3选自氢、氟；
A环选自
Figure FDA0003988102370000012
n为1或2；
R2选自(C1-C8)烷基，所述的(C1-C8)烷基可任选被1-3个R4取代；
R4选自三氟甲基、二氟甲基、氨基、羟基、苯基、吡啶基、(C1-C4)烷氧基、苯基(C2-C4)烯基、
Figure FDA0003988102370000013
所述的苯基、苯基(C2-C4)烯基、吡啶基可任选被
Figure FDA0003988102370000014
或1-3个R7取代；
R5、R6各自独立地选自氢、羟基、(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基；所述的(C1-C4)烷基可任选被1-3个R11取代；
或R5和R6与和它们所连接的氮原子一起形成5-6元含氮杂环，所述的含氮杂环含有1-3个选自N、O和S的杂原子，所述的含氮杂环可任选包括1-2个碳碳双键或叁键，所述的含氮杂环可任选被1-3个相同或不同的R10取代，环上碳原子可被氧代；
R11选自羟基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基氨基；
R7选自氢、卤素、三氟甲基、(C1-C4)烷基、氨基、羟基、氰基；
R10选自氢、(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、羟基、氨基、(C1-C4)酰基。
2.根据权利要求1所述的酞嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述通式I中，R2选自：
Figure FDA0003988102370000015
Figure FDA0003988102370000021
3.根据权利要求2所述的酞嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，通式Ⅰ所示的酞嗪酮类化合物为以下化合物中任一种：
Figure FDA0003988102370000022
Figure FDA0003988102370000031
Figure FDA0003988102370000041
Figure FDA0003988102370000051
4.根据权利要求1所述的酞嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的药学上可接受的盐是指所述的酞嗪酮类化合物与无机酸、有机酸、碱金属离子形成的盐，所述的无机酸选自：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸；所述的有机酸选自：富马酸、琥珀酸、马来酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、柠檬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸；所述的碱金属离子选自钾离子、钠离子、锂离子。
5.一种药物组合物，其特征在于，以权利要求1所述的酞嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分，与药学上可接受的载体或赋形剂混合制备成的组合物；所述载体或赋形剂为稀释剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、润滑剂和助流剂中一种或多种；所述稀释剂为淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇和磷酸氢钙中一种或多种；所述湿润剂为水、乙醇、异丙醇中一种或多种；所述粘合剂为淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇中一种或多种；所述崩解剂为干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、十二烷基磺酸钠中一种或多种；所述润滑剂和助流剂为滑石粉、二氧化硅、聚乙二醇中一种或多种；所述的药物组合物能够制备成药学上可接受的剂型，所述剂型选自注射剂、片剂、胶囊剂。
6.权利要求1-4任一项所述的酞嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗与PARP酶和HDAC酶有关的癌症、神经变性型疾病或炎症的药物中的应用。
7.权利要求5所述的药物组合物在制备预防和/或治疗与PARP酶和HDAC酶有关的癌症、神经变性型疾病或炎症的药物中的应用。
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述的癌症为乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、宫颈癌、睾丸癌、黑色素瘤、鼻咽癌、口腔癌、恶性胶质母细胞瘤、膀胱癌、前列腺癌、食管癌、脑肿瘤、生殖系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、淋巴系统肿瘤、消化系统肿瘤和皮肤肿瘤中的任一种。
9.一种权利要求1所述酞嗪酮类化合物或其在药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括以下合成路线：
所述R2、X2、X3、X4为通式I所示化合物对应位置的相应基团，n＝1或2；
路线1：
Figure FDA0003988102370000061
以取代或为取代的邻甲酰基苯甲酸为起始原料与亚磷酸二甲酯反应制得磷叶立德中间体1；中间体1经Wittig-Horner反应得中间体2；中间体2经氰基水解和环合反应制得中间体3；中间体3经缩合和脱Boc保护反应制得中间体4；中间体4经二硫化碳加成制得中间体5；中间体5与卤代胺、卤代酰胺或卤代酯经亲核取代反应制得式Ⅱ的目标化合物；
路线2：
Figure FDA0003988102370000071
以中间体3为原料，经缩合和脱Boc保护反应制得中间体6；中间体6经二硫化碳加成制得中间体7；中间体7与卤代胺、卤代酰胺或卤代酯经亲核取代反应制得式Ⅲ的目标化合物。
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