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CN116134143A - 多种抗病基因及其基因组堆叠件 - Google Patents

多种抗病基因及其基因组堆叠件 Download PDF

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CN116134143A
CN116134143A CN202180057080.2A CN202180057080A CN116134143A CN 116134143 A CN116134143 A CN 116134143A CN 202180057080 A CN202180057080 A CN 202180057080A CN 116134143 A CN116134143 A CN 116134143A
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L·D·佩鲁吉尼
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Abstract

领域为分子生物学，并且更特别地，用于使用位点特异性编辑在基因组基因座中对多种天然基因、如抗病基因进行染色体工程化以产生植物的方法。本文还描述了在植物中产生包含多个种内多核苷酸序列的异源基因组基因座的方法。

Description

多种抗病基因及其基因组堆叠件
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年3月1日提交的美国临时申请号63/154,960和2020年8月18日提交的美国临时申请号63/067,090的权益，将其中的每一个通过引用以其全文并入本文。
技术领域
领域为分子生物学，并且更特别地，用于使用位点特异性编辑在基因组基因座中对多种天然基因、如抗病基因进行染色体工程化以产生植物的方法。
以电子方式递交的序列表的引用
序列表的官方副本经由EFS-Web作为ASCII格式的序列表以电子方式提交，文件名为“7823WO ST25.txt”，创建于2021年8月10日，且具有249千字节大小，并与本说明书同时提交。包含在此ASCII格式的文件中的序列表是本说明书的一部分并且通过引用以其全文并入本文。
背景技术
植物在其染色体中含有多个基因及其等位基因变体。但是那些基因和等位基因通常不会以促进更快育种的方式与其他性状(如昆虫抗性和除草剂耐受性)结合。例如，对多种疾病的抗性是作物改良的重要组成部分，特别是在疾病压力和模式在不断变化的气候下迅速演变时。对特定疾病的抗性典型地通过将基因组区从抗性来源渗入至优良品系来实现。此方法耗时且经常导致产量累赘以及其他有害影响。此外，赋予针对多种疾病的抗性的渗入基因座变得不切实际(在时间和资源的背景下)(因为涉及的基因座数量)并且在遗传连锁基因座的情况下变得很困难。本公开提供了多种方法和组合物来克服使用多个基因座进行育种中的一些困难，并且提供了用于染色体工程化基因堆叠件如例如抗病基因的平台。
发明内容
可以通过本文所述的组合物和方法来克服用于将基因组区从来源渗入至优良品系的常规育种的限制。
本文提供的实施例描述了用于定义作物基因组区的方法，该作物基因组被特异性工程化以赋予对多种疾病、病原体种族及其组合的抗病性。另外，本文公开了用于通过基因编辑插入多种抗病基因并在定义的区内组合这些基因的方法。此外，本文公开了用于结合产品环境中的其他性状部署工程化区域的方法。
本文提供了用于在作物植物细胞中产生非天然的异源基因组基因座的方法，该异源基因组基因座包含多个种内多核苷酸序列。这些方法包括将两个或更多个种内多核苷酸序列引入植物细胞中的预定基因组基因座中，其中引入步骤不会导致对植物来说是天然的转基因或外源多核苷酸的整合；种内多核苷酸赋予植物一个或多个农艺学特征；在种内多核苷酸整合至异源基因组基因座之前，这些种内多核苷酸中的至少一个或多个来自不同的染色体，或者与异源基因组基因座相比，这些种内多核苷酸不位于与其天然配置相同的染色体中；并且该引入步骤包括不是传统育种的至少一种位点定向基因组修饰。在一个实施例中，该基因组基因座与包含一种或多种转基因性状的基因组基因座相邻，这些转基因性状包含来自不同植物物种的多个多核苷酸。在另一实施例中，转基因性状包含赋予对一种或多种昆虫的抗性的一种或多种性状。在又一实施例中，转基因性状包含除草剂耐受性状。
在一个实施例中，基因组基因座由约1至约5cM或作物植物物种的等效物理染色体图谱距离的染色体区定义。在另一实施例中，染色体区为约10Kb至约50Mb。在一些方面，该植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
还提供了在优良作物植物基因组中产生疾病超级基因座(disease super locus)以提高该优良作物植物中的性状渗入效率的方法，该方法包括通过以下来在该作物植物染色体的预定基因组基因座处引入多种抗病性状：工程化插入两个或更多个抗病基因、通过靶向染色体工程化来基因组易位一个或多个抗病基因、通过靶向基因组修饰在该基因组基因座处工程化复制一个或多个抗病基因、通过引入一个或多个插入来修饰该基因组基因座、缺失或取代该基因组中的核苷酸、或上述的组合。在一个实施例中，疾病超级基因座与转基因性状连锁不平衡。在另一实施例中，转基因性状选自由昆虫抗性、除草剂耐受性和农艺学性状组成的组。在又一实施例中，转基因性状为先前存在的商业性状。在另一实施例中，通过减少至少50％回交或减少三代回交来提高性状渗入效率。在另一实施例中，通过减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％回交来提高性状渗入效率。在又一实施例中，通过减少至少一代、二代、三代或四代回交来提高性状渗入效率。
还提供了用于获得具有经修饰的基因组基因座的植物细胞的方法，该经修饰的基因组基因座包含至少两个异源多核苷酸序列或至少两种性状，该至少两个异源多核苷酸序列赋予对至少一种植物疾病的增强的抗病性，该至少两种性状通过两种不同的作用模式导致对至少一种疾病的抗性，其中所述至少两个多核苷酸序列与相应的基因组基因座异源并且来自相同的植物物种。该方法包括在植物细胞的基因组基因座的至少一个靶位点处引入位点特异性修饰；将赋予增强的抗病性的至少两个多核苷酸序列引入靶位点；以及获得具有基因组基因座的植物细胞，该基因组基因座包含赋予增强的抗病性的至少两个多核苷酸序列。在一个实施例中，至少一个靶位点包含选自表2的靶位点。在另一实施例中，两个异源多核苷酸中的至少一个进一步包含位点特异性修饰。在又一实施例中，位点特异性修饰为遗传修饰或表观遗传修饰。在一个实施例中，多核苷酸序列编码多肽序列，其中该多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少90％同一性：RppK(SEQ ID NO：11)、Ht1(SEQID NO：8)、NLB18(SEQ ID NO：3或5)、NLR01(SEQ ID No：29)、NLR02(SEQ ID No：26)、RCG1(SEQ ID No：31)、和RCG1b(SEQ ID No：33)。在另一实施例中，多核苷酸序列编码多肽序列，其中该多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％同一性：RppK(SEQ ID NO：11)、Ht1(SEQ ID NO：8)、NLB18(SEQ ID NO：3或5)、NLR01(SEQ ID No：29)、NLR02(SEQ ID No：26)、RCG1(SEQ ID No：31)、和RCG1b(SEQ ID No：33)。在又一实施例中，多核苷酸序列编码多肽序列，其中该多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少90％同一性：PRR03(SEQ ID No：36)、PRR01(SEQ ID No：38)、NLR01(SEQ ID No：41)、和NLR04(SEQ ID No：44)。在另一实施例中，多核苷酸序列编码多肽序列，其中该多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性：PRR03(SEQ ID No：36)、PRR01(SEQ ID No：38)、NLR01(SEQ ID No：41)、和NLR04(SEQ ID No：44)。
还提供了用于获得具有经修饰的基因组基因座的植物细胞的方法，该经修饰的基因组基因座包含至少两个多核苷酸序列或至少两种性状，该至少两个多核苷酸序列赋予对至少一种植物疾病的增强的抗病性，该至少两种性状通过两种不同的作用模式导致对至少一种疾病的抗性，其中该至少两个多核苷酸序列与相应的基因组基因座异源。在一个实施例中，该方法包括在植物细胞的基因组基因座的一个或多个靶位点处引入双链断链或位点特异性修饰；引入赋予增强的抗病性的至少两个多核苷酸序列；以及获得具有基因组基因座的植物细胞，该基因组基因座包含赋予增强的抗病性的至少两个多核苷酸序列。在一个实施例中，至少一个靶位点包含选自表2的靶位点。在另一实施例中，多核苷酸序列编码多肽序列，其中该多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少90％同一性：RppK(SEQ ID NO：11)、Ht1(SEQ ID NO：8)、NLB18(SEQ ID NO：3或5)、NLR01(SEQ ID No：29)、NLR02(SEQ ID No：26)、RCG1(SEQ ID No：31)、和RCG1b(SEQ ID No：33)。在另一实施例中，多核苷酸序列编码多肽序列，其中该多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％同一性：RppK(SEQ ID NO：11)、Ht1(SEQ ID NO：8)、NLB18(SEQ ID NO：3或5)、NLR01(SEQ ID No：29)、NLR02(SEQ IDNo：26)、RCG1(SEQ ID No：31)、和RCG1b(SEQ ID No：33)。在又一实施例中，多核苷酸序列编码多肽序列，其中该多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少90％同一性：PRR03(SEQ ID No：36)、PRR01(SEQ ID No：38)、NLR01(SEQ ID No：41)、和NLR04(SEQ IDNo：44)。在另一实施例中，多核苷酸序列编码多肽序列，其中该多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性：PRR03(SEQ ID No：36)、PRR01(SEQ ID No：38)、NLR01(SEQ ID No：41)、和NLR04(SEQ IDNo：44)。
还提供了包含经修饰的基因组基因座的植物，该基因座包含至少第一经修饰的靶位点和第二经修饰的靶位点，其中该第一经修饰的靶位点包含赋予对第一植物疾病的增强的抗病性的第一多核苷酸序列，并且其中该第二经修饰的靶位点包含赋予对该第一植物疾病或第二植物疾病的增强的抗病性的第二多核苷酸序列，其中该第一多核苷酸序列和该第二多核苷酸序列与该经修饰的基因组基因座异源并且存在于小于约1cM的基因组窗口内。
还提供了用于获得具有经修饰的基因组基因座的植物细胞的方法，该经修饰的基因组基因座包含至少两个多核苷酸序列或至少两种性状，该至少两个多核苷酸序列赋予对至少一种植物疾病的增强的抗病性，该至少两种性状通过两种不同的作用模式导致对至少一种疾病的抗性，其中该至少两个多核苷酸序列与相应的基因组基因座异源，其中该基因组基因座位于1号染色体的远端区。在一个实施例中，基因组基因座位于端粒区。
还提供了在植物的单个基因座处育种转基因和天然疾病性状的方法，该方法包括在植物的单个基因座处插入赋予对第一植物疾病的增强的抗病性的第一异源多核苷酸序列和赋予对该第一植物疾病或第二植物疾病的增强的抗病性的第二异源多核苷酸序列；在该单个基因座处插入至少一个编码杀昆虫多肽、农艺学性状多肽或除草剂抗性多肽的异源多核苷酸序列；将具有该单个基因座的植物与不同的植物杂交；以及获得包含该单个基因座的子代植物；并且其中与在多于一个的基因座处具有性状的植物相比，该单个基因座允许较少的回交。
还提供了将多个抗病基因座渗入或正向育种至优良种质的方法，其中将来自不同供体植物的两个或更多个异源多核苷酸插入优良品系并开发纯合抗性品系的时间段更短。在一个实施例中，这些方法包括改善具有多种抗病性的农艺学性状，并减少育种的产量累赘。
还提供了堆叠来自多种来源的遗传连锁抗性基因的方法。在一方面，提供了经修饰的作物植物，其包含堆叠在单个基因组基因座中的至少两个、至少三个或至少四个性状基因，其中单个基因座中的性状堆叠件允许提高育种效率，并且其中该性状堆叠件包含通过基因组修饰引入的至少两种或更多种非转基因天然性状，这些天然性状包含来自相同作物植物的多核苷酸。在一个实施例中，性状基因是天然性状。在另一实施例中，性状基因选自由除草剂耐受性、昆虫抗性、产量性状或抗病性组成的组。
另外的实施例提高了堆叠性状的育种效率，其中这些堆叠性状位于单个基因座并且这些堆叠性状包含导致对两种不同疾病的抗性的至少两种性状或通过两种不同作用方式导致对至少一种疾病的抗性的至少两种性状。在一些实施例中，堆叠性状进一步包含在单个基因座处的昆虫控制性状和/或除草剂抗性性状。
还提供了经修饰的植物，其包含选自由NLB18、Ht1和RppK组成的组的至少三种抗病基因，其中该至少三种抗病基因位于同一基因组基因座。在一个实施例中，该植物为玉蜀黍植物。在一个实施例中，该植物进一步包含PRR03。在另一实施例中，经修饰的植物进一步包含选自以下的至少一种基因：NLR01、NLR02、RCG1、RCG1b、PRR03、PRR01、NLR01和NLR04。
附图和序列表说明
图1示出了育种堆叠方法的实例。通过在超级基因座的靶位点1、3和6处分别插入3个、2个和2个目的基因独立地创建变体1、2和3。变体1和变体2通过使用标准育种方法杂交组合。选择含有靶位点1处的插入和靶位点3处的插入两者的重组体。通过使用标准育种方法杂交来将新材料与变体3进一步组合。选择含有靶位点1和3处的插入和靶位点6处的插入的重组体。新材料由超级基因座的若干靶位点处的一个或几个目的基因的多个插入组成。
图2是创建多疾病抗性堆叠件的可能情形的图示。A.在分子堆叠方法中，含有一个或多个目的基因的一个构建体用作修复模板以在超级基因座的靶位点处插入那些基因。B.在育种堆叠方法中，将目的基因独立地插在几个靶位点处，然后通过育种杂交组装以获得超级基因座处所需的一组基因。C.在连续转化方法中，含有一个或多个目的基因的一个构建体用作修复模板，以在单个靶位点处插入那些基因。然后将包含此第一插入的材料用作下一插入的转化背景，其中将另一组一个或多个目的基因插在超级基因座的相同或另一靶位点处。可以重复此迭代方法以获得超级基因座处目的基因的期望组合。此处呈现的三种情形可以组合使用，以在超级基因座处组装所需的一组目的基因。
序列表说明
Figure BDA0004113413250000081
Figure BDA0004113413250000091
具体实施方式
应当理解的是，本文所使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，而不旨在是限制性的。当在本说明书和所附权利要求书中使用时，单数和单数形式的术语例如“一个/一种(a/an)”以及“所述/该(the)”包括复数指代物，除非上下文中另外明确指明。因此，例如术语“植物(plant)、所述植物(the plant)、或一种植物(a plant)”也包括多种植物；也取决于上下文，使用的术语“植物”也可包括该植物遗传相似或相同的子代；使用的术语“核酸”实际上任选地包括该核酸分子的多个拷贝；同样地，术语“探针”任选地(并且典型地)涵盖许多相似或相同的探针分子。除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义，除非另有明确说明。
本文提供了组合物和方法以修饰玉蜀黍基因组，以产生具有增强的抗病性的玉蜀黍植物，这些疾病包括但不限于北方叶枯病、炭疽茎腐病、灰叶斑病、南方锈病、黑肿病(tarspot)、玉米细菌性枯萎病、高斯细菌性枯萎病和疫病(Goss’s Bacterial Wilt andBlight)、绒毛草叶枯病、细菌性叶枯病、细菌性茎腐病、细菌性叶条斑病、细菌性条纹和叶斑病(Bacterial Stripe and Leaf Spot)、蚕豆赤斑病、籽粒冠斑病(Kernel CrownSpot)、玉米矮化病、玉蜀黍丛矮病、种子腐烂病、幼苗枯萎病和猝倒病、腐霉根腐病(和饲养根坏死病(Feeder Root Necrosis))、丝核菌冠和支柱根腐病、镰刀菌根腐病、红根腐病、南方玉米叶枯病、北方玉米叶枯病、北方玉米叶斑病、喙叶斑病、节壶菌褐斑病(PhysodermaBrown Spot)、眼斑病(eyespot)、炭疽叶枯病、灰叶斑病、高粱霜霉病、爪哇霜霉病、菲律宾霜霉病、甘蔗霜霉病、拉贾斯坦霜霉病(Rajasthan Downy Mildew)、甜根子草霜霉病、裂叶霜霉病、拟禾本科霜霉病(Graminicola Downy Mildew)、疯顶病(Crazy Top)、褐条霜霉病、麦角症、瘤黑粉病、丝黑穗病、稻曲病、普通锈病、南方锈病、热带锈病、赤霉菌属茎腐病、色二孢(狭壳柱孢属(Stenocarpella))茎腐病、炭疽茎腐病、木炭腐病、镰刀菌属茎腐病、腐霉茎腐病、晚枯病、曲霉属穗腐病、色二孢穗腐病、镰刀菌属粒或穗腐病、赤霉菌属穗或红腐病、黑孢霉属穗腐或穗轴腐病、青霉菌穗腐病和蓝眼病、真菌毒素和真菌毒素中毒(Mycotoxicoses)、玉蜀黍矮花叶病、玉蜀黍褪绿矮缩病、玉蜀黍条斑病、玉蜀黍粗矮缩病、南方根结线虫、腐线虫、刺线虫、针线虫、短粗根线虫、Awl线虫、玉米胞囊线虫、匕首线虫、兰斯线虫、环线虫、旋线虫、矮化线虫、由寄生种子植物如独脚金引起的疾病。
术语“等位基因”是指在特定基因座处出现的两种或更多种不同核苷酸序列中的一种。等位基因可以包括单核苷酸多态性(SNP)以及较大的插入和缺失(“Indel”)。
术语“种内”是指相同物种内的生物体。术语“种内多核苷酸序列”是指来自相同物种的多核苷酸序列，如例如玉蜀黍作物的玉蜀黍DNA、大豆作物的大豆DNA。
“回交”是指杂交体子代借以反复与亲本中之一杂交的方法。在回交方案中，“供体”亲本是指待渗入的具有所需的一种或多种基因、基因座或特定表型的亲本植物。“受体”亲本(使用一次或多次)或“轮回”亲本(使用两次或更多次)是指基因或基因座被渗入到其中的亲本植物。例如，参见Ragot，M.等人(1995)Marker-assisted backcrossing：apractical example[标记辅助回交：实践实例]，在Techniques et Utilisations desMarqueurs Moleculaires Les Colloques[分子标记技术和应用专题讨论会]第72卷，第45-56页中，以及Openshaw等人，(1994)Marker-assisted Selection in BackcrossBreeding[回交育种中的标记辅助选择]，Analysis of Molecular Marker Data[分子标记数据分析]，第41-43页。最初的杂交产生F1代；术语“BC1”则是指第二次使用轮回亲本，“BC2”是指第三次使用轮回亲本，以此类推。
厘摩(“cM”)是重组频率的度量单位。一个cM等于有1％的机会，一个遗传基因座处的标记会由于单代中的交换而与第二基因座处的标记分离。
如本文所用，术语“染色体区间”是指存在于植物单一染色体上的基因组DNA的连续线性跨度。位于单条染色体区间上的遗传元件或基因是物理连锁的。染色体区间的大小没有特别的限制。在一些方面，位于单条染色体区间内的遗传元件是遗传连锁的，典型地具有例如小于或等于20cM，或者可替代地，小于或等于10cM的遗传重组距离。也就是说，单条染色体区间内的两个遗传元件以小于或等于20％或10％的频率进行重组。
在本申请中，短语“紧密连锁”是指两个连锁的基因座之间的重组以等于或小于约10％(即，在遗传图谱上分隔不超过10cM)的频率发生。换言之，该紧密连锁的基因座有至少90％的机会发生共分离。当标记基因座显示与所需的性状(例如，对灰叶斑病的抗性)发生共分离(连锁)的显著概率时，该标记基因座对于本公开内容的主题是特别有用的。紧密连锁的基因座(例如标记基因座和第二基因座)可以显示10％或更低、优选约9％或更低、还更优选约8％或更低、又更优选约7％或更低、还更优选约6％或更低、又更优选约5％或更低、还更优选约4％或更低、又更优选约3％或更低、以及还更优选约2％或更低的基因座间重组频率。在非常优选的实施例中，相关基因座显示约1％或更低，例如约0.75％或更低、更优选约0.5％或更低、或又更优选约0.25％或更低的重组频率。定位于相同染色体并且具有使得两个基因座之间的重组以小于10％(例如，约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或更少)的频率发生的距离的该两个基因座也被认为是彼此“邻近的”。在一些情况下，两个不同的标记可以具有相同的遗传图谱坐标。在这种情况下，两个标记彼此非常邻近，以至于两者之间的重组以不可检测的这种低频发生。
当基因渗入时，不仅引入了基因而且引入了侧接区域(Gepts.(2002).Crop Sci[作物科学]；42：1780-1790)。这称为“连锁累赘”。在供体植物与受体植物极不相关的情况下，这些侧接区域携带可以编码农艺学上不需要的性状的另外的基因。即便与优良品系回交多个周期后，此“连锁累赘”也可能导致产量下降或其他负面农艺学特征。这有时也称为“产量累赘”。
术语“杂交的”或“杂交”是指有性杂交，并且涉及通过授粉将两种单倍体配子融合以产生二倍体子代(例如细胞、种子或植物)。该术语涵盖一株植物被另一株植物授粉和自交(或自体授粉，例如当花粉和胚珠来自同一植物时)两者。
如本文所用，术语“疾病超级基因座”或“DSL”通常是指包含靶向至少两种不同植物疾病的至少两种不同抗病基因或者包含通过两种不同的作用模式的靶向至少一种疾病的至少两种不同的抗病基因的基因组基因座。在一个实施例中，抗病基因彼此相距约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10cM以内。在另一实施例中，抗病基因彼此相距约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、20000、30000、40000、50000、60000、70000、80000、90000、100000或约1000000个碱基以内。可以将此DSL以促进增强育种(位于同一位置的转基因除草剂和/或昆虫或其他农艺学性状)的方式进行工程化。
“遗传图谱”是对给定物种内的一个或多个染色体(或连锁群)上的基因座之间的遗传连锁关系的描述，通常以图表或表格形式描述。对于每个遗传图谱，基因座之间的距离通过这些基因座的等位基因在群体中一起出现的频率(基因座的重组频率)来测量。可以使用DNA或蛋白标记或者可观察到的表型来检测等位基因。遗传图谱是用来作图的群体、所用标记的类型以及不同群体之间每个标记的多态性潜力的产物。对于不同的遗传图谱，基因座之间的遗传距离可以是不同的。但是，可以使用通用标记，将信息从一张图谱关联到另一张图谱上。本领域的普通技术人员可以使用通用标记位置来鉴定每个单独的遗传图谱上的标记和其他目的基因座的位置。尽管由于例如在不同群体中检测交替重复基因座的标记、在用于排序这些标记的统计学方法上的差异、新的突变或实验室错误，经常在标记顺序上有小的变化，但是基因座顺序在图谱之间不应该改变。
“遗传图谱定位”是遗传图谱上相对于相同连锁群上的周围遗传标记的定位，其中在给定物种内可以找到指定的标记。
“遗传作图”是通过使用遗传标记、针对这些标记的群体分离和重组频率的标准遗传原理来定义基因座的连锁关系的方法。
“遗传标记”是在群体中多态的核酸，并且该遗传标记的等位基因可以通过一种或多种分析方法(例如RFLP、AFLP、同工酶、SNP、SSR等)来检测和区分。该术语还指与用作探针的基因组序列(例如核酸)互补的核酸序列。可以通过本领域中公认的方法检测对应于群体成员之间的遗传多态性的标记。这些方法包括，例如基于PCR的序列特异性扩增方法、限制性片段长度多态性检测(RFLP)、同功酶标记检测、通过等位基因特异性杂交(ASH)进行的多核苷酸多态性检测、植物基因组的扩增可变序列检测、自主序列复制检测、简单重复序列检测(SSR)、单核苷酸多态性检测(SNP)、或扩增片段长度多态性检测(AFLP)。已知公认的方法也用于检测表达的序列标签(EST)和衍生自EST序列的SSR标记，以及随机扩增多态性DNA(RAPD)。
“遗传重组频率”是两个遗传基因座之间杂交(重组)的频率。重组频率可以通过遵循减数分裂后的标记和/或性状的分离来观察。
如本文所用，术语“单倍型”通常是指由遗传特征定义的染色体区，该遗传特征包括例如一种或多种多态分子标记。换言之，单倍型是一组趋向于一起遗传的DNA变异或多态性。单倍型可以是指等位基因的组合或在相同染色体或染色体区上发现的一组单核苷酸多态性(SNP)。“单倍型窗口”一般是指通过统计分析划定的并且通常连锁不平衡的染色体区。单倍型窗口的空间划定可以随着可用标记密度和/或可以区分多个单倍型的其他基因型信息密度而变化。
术语“异质性”用于指示群组内的个体在一个或多个特定基因座处的基因型不同。
“IBM遗传图谱”可以指以下图谱中的任一项：IBM、IBM2、IBM2邻接、IBM2 FPC0507、IBM22004邻接、IBM22005邻接、IBM22005邻接框、IBM22008邻接、IBM22008邻接框、或玉蜀黍GDB网站的最新版本。IBM遗传图谱基于B73 x Mo17群体，其中使来自初始杂交的子代在构建重组近交系用于作图之前随机交配多代。较新的版本反映了遗传和BAC定位的基因座的添加以及由于从其他遗传图谱或物理图谱、经过清理的数据或新算法的使用获得的信息的整合而提高的图谱精度。
术语“近交系”是指已经进行育种以获得遗传同质性的品系。
如本文所用，术语“优良种质”或“优良植物”分别是指通过育种和选择获得优异农艺学性能的任何种质或植物。
术语“插入缺失(indel)”是指插入或缺失，其中一个品系可以称为相对于第二品系具有插入的核苷酸或DNA碎片，或该第二品系可以称为相对于该第一品系具有缺失的核苷酸或DNA碎片。
术语“渗入”是指遗传基因座的期望等位基因从一种遗传背景传递到另一种遗传背景的现象。例如，可以经由相同物种的两个亲本之间的有性杂交将指定基因座处的所需等位基因的渗入传递给至少一个子代，其中这些亲本中的至少一个在其基因组内具有该所需的等位基因。可替代地，例如等位基因的传递可以通过两个供体基因组之间的重组而发生，例如在融合原生质体中，其中至少一个供体原生质体在其基因组中具有所需等位基因。所需等位基因可以，例如通过与表型相关联的标记，在QTL、转基因等处进行检测。在任何情况下，包含所需等位基因的后代可以反复与具有所需遗传背景的品系回交并选择所需等位基因，以产生固定在选择的遗传背景中的等位基因。
当“渗入”重复两次或更多次时，该方法通常被称为“回交”。
“品系”或“品种”是一组具有相同亲缘关系的个体，其通常在一定程度上是近交的，并且在大多数基因座处通常是纯合和同质的(同基因的或接近同基因的)。“亚系”是指遗传上不同于起源于相同祖先的其他类似近交系亚群的近交系亚群。
如本文所用，术语“连锁”用于描述一个标记基因座与另一个标记基因座或一些其他基因座的相关联程度。分子标记与影响表型的基因座之间的连锁关系以“概率”或“调整的概率”表示。连锁可以表示为所需的限制或范围。例如，在一些实施例中，当任何标记与任何其它标记在单次减数分裂图谱(基于已经进行一轮减数分裂的群体(如例如，F2)的遗传图谱；IBM2图谱由多次减数分裂组成)上分隔小于50、40、30、25、20或15个图距单位(或cM)时，这些标记是连锁的(遗传上或物理上)。在一些方面，限定加括号的连锁范围是有利的，例如，在10和20cM之间、在10和30cM之间、或在10和40cM之间。标记与第二基因座的连锁越紧密，标记对第二基因座的指示效果越好。因此，“紧密连锁的基因座”，例如标记基因座和第二基因座显示10％或更低、优选约9％或更低、还更优选约8％或更低、又更优选约7％或更低、还更优选约6％或更低、又更优选约5％或更低、还更优选约4％或更低、又更优选约3％或更低、以及还更优选约2％或更低的基因座间重组频率。在非常优选的实施例中，相关基因座显示约1％或更低，例如约0.75％或更低、更优选约0.5％或更低、或又更优选约0.25％或更低的重组频率。定位于相同染色体并且具有使得两个基因座之间的重组以小于10％(例如，约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或更少)的频率发生的距离的两个基因座也被认为是彼此“邻近”。因为一个cM是显示1％的重组频率的两个标记之间的距离，因此任何标记与紧密相邻(例如，以等于或小于10cM的距离)的任何其他标记紧密连锁(遗传上和物理上)。在相同染色体上的两个紧密连锁的标记可相互定位为9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.75、0.5或0.25cM或更近。
术语“连锁不平衡”是指遗传基因座或性状(或两者)的非随机分离。在任一情况下，连锁不平衡意味着相关的基因座沿着一段染色体在物理上足够接近，以便它们以高于随机(即非随机)的频率一起分离。显示连锁不平衡的标记被认为是连锁的。连锁的基因座有超过50％的机会(例如约51％至约100％的机会)发生共分离。换句话说，共分离的两个标记具有小于50％(并且根据定义，在相同连锁群上分隔小于50cM)的重组频率。如本文所用，连锁可以存在于两个标记之间，或可替代地，标记和影响表型的基因座之间。标记基因座可以与性状“相关联”(连锁)。标记基因座和影响表型性状的基因座的连锁程度例如通过该分子标记与该表型共分离的统计学概率(例如，F统计或LOD评分)进行测量。
连锁不平衡最常见地用量度r2评估，该量度r2使用以下文献中描述的公式计算：Hill，W.G.和Robertson，A，Theor.Appl.Genet.[理论与应用遗传学]38：226-231(1968)。当r2＝1时，两个标记基因座间存在完全的LD，意味着这些标记还未进行重组分离并且具有相同的等位基因频率。r2值取决于所使用的群体。r2值大于1/3显示了用于定位的足够强的LD(Ardlie等人，Nature Reviews Genetics[遗传学自然综述]3：299-309(2002))。因此，当成对标记基因座间的r2值大于或等于0.33、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、或1.0时，等位基因处于连锁不平衡。
如本文所用，“连锁平衡”描述其中两个标记独立地分离的情况，即，在子代中随机分配。显示连锁平衡的标记被认为是不连锁的(无论它们是否位于相同染色体上)。
“标记”是发现遗传或物理图谱上的位置或发现标记与性状基因座(影响性状的基因座)之间的连锁的方式。标记所检测的位置可通过检测多态性等位基因及其遗传定位而获知，或通过对已经进行物理标测的序列进行杂交、序列匹配或扩增而获知。标记可以是DNA标记(检测DNA多态性)、蛋白质(检测编码的多肽的变异)或简单遗传的表型(诸如“腊质”表型)。可从基因组核苷酸序列或从表达的核苷酸序列(例如，从剪接的RNA或cDNA)开发DNA标记。根据DNA标记技术，该标记由侧接于该基因座的互补性引物和/或与该基因座处的多态性等位基因杂交的互补性探针组成。DNA标记或遗传标记还可用于描述该染色体自身上的基因、DNA序列或核苷酸(而非用于检测该基因或DNA序列的组分)，并且其通常在该DNA标记与人遗传学中的特定性状相关联时使用(例如乳腺癌标记)。术语标记基因座是该标记所检测的基因座(基因、序列或核苷酸)。
检测群体成员之间的遗传多态性的标记在本领域中是公认的。标记可由其所检测的多态性的类型以及用于检测该多态性的标记技术所定义。标记类型包括但不限于例如限制性片段长度多态性检测(RFLP)、同功酶标记检测、随机扩增多态性DNA(RAPD)、扩增片段长度多态性检测(AFLP)、简单重复序列检测(SSR)、植物基因组的扩增可变序列检测、自主序列复制检测、或单核苷酸多态性检测(SNP)。SNP可以经由例如DNA测序、基于PCR的序列特异性扩增方法、通过等位基因特异性杂交(ASH)进行的多核苷酸多态性检测、动态等位基因特异性杂交(DASH)、分子信标、微阵列杂交、寡核苷酸连接酶分析、Flap内切核酸酶、5’内切核酸酶、引物延伸、单链构象多态性(SSCP)或温度梯度凝胶电泳(TGGE)进行检测。DNA测序(如焦磷酸测序技术)具有能够检测组成单倍型的一系列连锁SNP等位基因的优点。单倍型倾向于比SNP更具信息性(检测更高水平的多态性)。
“标记等位基因”，可替代地“标记基因座的等位基因”可以指群体中标记基因座处发现的多个多态性核苷酸序列中的一个。
“标记辅助选择”(MAS)是基于标记基因型选择个体植物的方法。
“标记辅助反向选择”是借以使用标记基因型鉴定将不被选择的植物的方法，使得这些植物从育种程序或种植中去除。
“标记单倍型”是指标记基因座处的等位基因或单倍型的组合。
“标记基因座”是物种基因组中的特定染色体定位，在该定位处可发现特异标记。标记基因座可用于追踪第二连锁基因座(例如影响表型性状表达的连锁基因座)的存在。例如，标记基因座能够用于监控在遗传上或物理上连锁的基因座处的等位基因的分离。
“标记探针”是可以用于通过核酸杂交鉴定标记基因座存在的核酸序列或分子，例如与标记基因座序列互补的核酸探针。包含所述标记基因座的30个或更多个连续核苷酸(该标记基因座序列的“全部或部分”)的标记探针可用于核酸杂交。可替代地，在一些方面，标记探针是指能够区别存在于标记基因座处的特定等位基因的任何类型(即基因型)的探针。
如上所定义的，当鉴定连锁基因座时，术语“分子标记”可以用于指遗传标记，或其用作参照点的编码产物(例如，蛋白质)。标记能够衍生自基因组核苷酸序列或衍生自表达的核苷酸序列(例如衍生自剪接的RNA、cDNA等)，或衍生自编码的多肽。该术语也指与标记序列互补或与其侧接的核酸序列，如用作探针或能够扩增该标记序列的引物对的核酸。“分子标记探针”是可以用于鉴定标记基因座存在与否的核酸序列或分子，例如与标记基因座序列互补的核酸探针。可替代地，在一些方面，标记探针是指能够区别存在于标记基因座处的特定等位基因的任何类型(即基因型)的探针。当核酸，例如根据沃森-克里克碱基配对原则，在溶液中特异性杂交时，这些核酸是“互补的”。当位于插入缺失区域，例如本文所述的非共线区域时，本文所述标记中的一些也称为杂交标记。这是因为，根据定义，该插入区域是关于无该插入的植物的多态性。因此，该标记仅需要指示该插入缺失区域是否存在。任何合适的标记检测技术都可以用于鉴定这样的杂交标记，例如在本文提供的实例中使用SNP技术。
“玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)”以前被称为大斑病长蠕孢(Helminthosporium turcicum)，是诱导北方叶枯病感染的真菌病原体。该真菌病原体在本文中也被称为突脐蠕孢属(Exserohilum)或Et。
短语“灰叶斑病”或“GLS”是指由真菌病原体玉米灰斑病菌(Cercospora zeae-maydis)引起的谷物疾病，该真菌性病原体玉米灰斑病菌特征性地产生平行于叶脉的长的、矩形、浅灰褐色叶病变。
“抗病性”(如例如，北方叶枯病抗性)是植物的一种特征，其中该植物避免、最小化或减少作为植物-病原体相互作用(例如玉蜀黍-玉米大斑病菌相互作用)的结果的疾病症状。即，防止病原体导致植物疾病和相关的疾病症状，或可替代地，使由病原体引起的疾病症状最小化或减轻。
“基因座”是染色体上基因或标记所在的位置。
“抗性”是一个相对的术语，其表明被感染的植物比另一种经过类似处理的更易感的植物具有更好的植物健康或玉蜀黍产量。也就是说，与易感玉蜀黍植物相比，这些条件导致耐受性玉蜀黍植物的玉蜀黍存活、生长和/或产量降低减少。技术人员将会理解，对北方叶枯病或引起这样的疾病的病原体有抗性的玉蜀黍植物可以代表一系列更多抗性或更少抗性的表型，并且可以根据感染的严重程度而变化。然而，通过简单观察，技术人员可以确定不同植物、植物品系或植物家族对北方叶枯病的相对抗性或易感性，并且此外还将识别“抗性”的表型等级。例如，可以使用表示对北方叶枯病的抗性水平的1至9个视觉等级。分数越高表明抗性越高。术语“耐受性”和“抗性”在本文中可互换使用。
抗性可以是“新赋予的”或“增强的”。“新赋予的”或“增强的”抗性是指针对特定病原体、广谱病原体或由一种或多种病原体引起的感染的抗性水平增加。例如，针对特定真菌病原体(如Et)的增加的抗性水平构成“增强的”或改进的真菌抗性。实施例可以增强或提高真菌植物病原体抗性。
在一些实施例中，可以通过在所需改变附近的基因组中在限定位置诱导双链断裂(DSB)来促进基因编辑。可以使用可用的任何DSB诱导剂诱导DSB，该诱导剂包括但不限于，TALEN、大范围核酸酶、锌指核酸酶、Cas9-gRNA系统(基于细菌性CRISPR-Cas系统)等。在一些实施例中，可以将DSB的引入与多核苷酸修饰模板的引入组合。
可以通过本领域已知的任何方法将多核苷酸修饰模板引入细胞中，这些方法如但不限于瞬时引入方法、转染、电穿孔、显微注射、颗粒介导的递送、局部应用、晶须介导的递送、经由细胞穿透肽的递送或介孔二氧化硅纳米颗粒(MSN)介导的直接递送。
可以将多核苷酸修饰模板作为单链多核苷酸分子、双链多核苷酸分子或作为环状DNA(载体DNA)的一部分引入细胞中。多核苷酸修饰模板还可以与指导RNA和/或Cas内切核酸酶进行系链。系链的DNA可以允许共定位靶标和模板DNA，可用于基因组编辑和靶向的基因组调控，并且还可以用于靶向有丝分裂后期细胞，在这些细胞中内源性同源重组HR机制的功能预计会大大降低(Mali等人2013Nature Methods[自然方法]第10卷：957-963)。多核苷酸修饰模板可以瞬时地存在于细胞中，或可以经由病毒复制子引入。
“经修饰的核苷酸”或“编辑的核苷酸”是指与其未经修饰的核苷酸序列相比时，包含至少一种改变的目的核苷酸序列，并且该改变是有意的人为干预。这样的“改变”包括，例如：(i)至少一个核苷酸的替换，(ii)至少一个核苷酸的缺失，(iii)至少一个核苷酸的插入，或(iv)(i)-(iii)的任何组合。“编辑的细胞”或“编辑的植物细胞”是指与在基因组序列中不包含至少一个改变的对照细胞或植物细胞相比，在基因组序列中包含这样的改变的细胞。
如本文所用，术语“多核苷酸修饰模板”或“修饰模板”是指当与待编辑的靶核苷酸序列相比时，包含至少一个核苷酸修饰的多核苷酸。核苷酸修饰可以是至少一个核苷酸取代、添加或缺失。任选地，多核苷酸修饰模板可以进一步包含位于至少一个核苷酸修饰侧翼的同源核苷酸序列，其中侧翼同源核苷酸序列为待编辑的希望的核苷酸序列提供了充足同源性。
用于编辑组合有DSB和修饰模板的基因组序列的方法通常包括：向宿主细胞提供识别染色体序列中的靶序列的DSB诱导剂或编码DSB诱导剂的核酸，并且其中该DSB诱导剂能够诱导该基因组序列中的DSB；并且提供与待编辑的核苷酸序列相比时包含至少一个核苷酸变化的至少一个多核苷酸修饰模板。内切核酸酶可以通过本领域已知的任何方法提供给细胞，这些方法例如但不限于瞬时引入方法、转染、显微注射、和/或局部应用、或间接经由重组构建体。内切核酸酶可以作为蛋白或作为指导多核苷酸复合物直接提供给细胞或经由重组构建体间接提供。使用本领域已知的任何方法，可以瞬时地将内切核酸酶引入细胞中，或可以将内切核酸酶并入宿主细胞的基因组中。在CRISPR-Cas系统的情况下，如WO2016073433中所述的，可以用细胞穿透肽(CPP)促进内切核酸酶和/或指导多核苷酸摄入进细胞。
如本文所用，“基因组区”是指细胞基因组中染色体的区段。在一个实施例中，基因组区包括存在于靶位点的任一例上的细胞基因组中的一段染色体，或可替代地，还包含靶位点的一部分。基因组区可以包含至少5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、5-35、5-40、5-45、5-50、5-55、5-60、5-65、5-70、5-75、5-80、5-85、5-90、5-95、5-100、5-200、5-300、5-400、5-500、5-600、5-700、5-800、5-900、5-1000、5-1100、5-1200、5-1300、5-1400、5-1500、5-1600、5-1700、5-1800、5-1900、5-2000、5-2100、5-2200、5-2300、5-2400、5-2500、5-2600、5-2700、5-2800、5-2900、5-3000、5-3100或更多个碱基，这样使得基因组区具有足够的同源性以与相应的同源区域进行同源重组。
“经修饰的植物”是指具有有目的地插入其基因组中的异源多核苷酸的任何植物，其中插入的多核苷酸与植物异源、与基因组中的位置异源、或者与来自相同遗传背景的未经修饰植物相比具有改变的序列。经修饰的植物可以通过转基因应用、基因组修饰(包括CRISPR或Talens)、传统育种或其任何组合创造。
术语“作用位点”通常是指生物体内特定的物理位置或生物化学位点，其中特定的配体或多肽起作用或直接相互作用。例如，效应子多肽可以与抗病多肽相互作用。
术语“作用模式”通常描述生物体暴露于多肽或调控RNA等物质中导致的功能或解剖变化。术语“作用模式”还可以指细胞或分子水平上的特定识别机制或作用机制。
在一些实施例中，经修饰的植物包含异源多核苷酸，将该异源多核苷酸的转录物可替代地剪接为编码两种多肽的两种信使RNA，其中该两种多肽具有不同的作用位点或作用模式。在一些实施例中，当表达所述转录物时，经修饰的植物对植物病原体具有增加的抗性持久性，将该转录物可替代地剪接为编码两种多肽的两种信使RNA，其中该两种多肽具有不同的作用位点或作用模式。在其他实施例中，当表达所述转录物时，经修饰的植物对多于一种植物病原体具有增加的抗性，将该转录物可替代地剪接为编码两种多肽的两种信使RNA，其中该两种多肽具有不同的作用位点或作用模式。
在另一实施例中，经修饰的植物包含至少两种异源多核苷酸，其中这些多核苷酸产生一种或多种非编码转录物或编码一种或多种多肽。在另一实施例中，所述一种或多种非编码转录物或一种或多种多肽靶向相同的植物病原体。在另一实施例中，所述一种或多种非编码转录物或一种或多种多肽通过不同的作用模式靶向相同的植物病原体。
在一个实施例中，经修饰的植物包含至少两种异源多核苷酸，其中这些多核苷酸产生一种或多种非编码转录物或编码一种或多种多肽。在另一实施例中，所述至少两种异源多核苷酸衍生自相同的物种。在又一实施例中，所述至少两种异源多核苷酸衍生自不同的物种。
TAL效应子核酸酶(TALEN)是一类序列特异性核酸酶，其可以用于在植物或其他生物体的基因组中特异性靶序列处造成双链断裂。(参见Miller等人(2011)NatureBiotechnology[自然生物技术]29：143-148)。
内切核酸酶是在多核苷酸链内切割磷酸二酯键的酶。内切核酸酶包括限制性内切核酸酶，其在特异性位点处切割DNA而不损坏碱基；并且包括大范围核酸酶，也称为归巢内切核酸酶(HE酶)，其相似于限制性内切核酸酶，在特异性识别位点处结合并且切割，然而对于大范围核酸酶，识别位点典型地更长，约18bp或更长(于2012年3月22日提交的专利申请PCT/US12/30061)。基于保守的序列基序将大范围核酸酶分类为四个家族，这些家族是LAGLIDADG、GIY-YIG、H-N-H、和His-Cys box家族。这些基序参与金属离子的配位和磷酸二酯键的水解。HE酶的显著之处在于它们的长识别位点，并且还在于耐受其DNA底物中的一些序列多态性。对于大范围核酸酶的命名约定相似于对其他限制性内切核酸酶的约定。大范围核酸酶还分别表征为针对由独立的ORF、内含子、和内含肽编码的酶的前缀F-、I-、或PI-。重组方法的一个步骤涉及在识别位点处或在该识别位点附近的多核苷酸切割。可以将切割活性用于产生双链断裂。对于位点特异性重组酶和它们的识别位点的综述，参见Sauer(1994)Curr Op Biotechnol[生物技术新见]5：521-7；以及Sadowski(1993)FASEB[美国实验生物学学会联合会杂志]7：760-7。在一些实例中，重组酶来自整合酶(Integrase)或解离酶(Resolvase)家族。
锌指核酸酶(ZFN)是由锌指DNA结合结构域和双链-断裂-诱导剂结构域组成的工程化双链断裂诱导剂。识别位点特异性由锌指结构域赋予，该锌指结构域典型地包含两个、三个、或四个锌指，例如具有C2H2结构，然而其他锌指结构是已知的并且已经被工程化。锌指结构域适于设计特异性结合所选择的多核苷酸识别序列的多肽。ZFN包括连接至非特异性内切核酸酶结构域(例如来自IIs型内切核酸酶例如FokI的核酸酶结构域)的工程化DNA结合锌指结构域。额外的功能性可以融合到锌指结合结构域中，这些额外的功能性包括转录激活因子结构域、转录阻遏物结构域、和甲基化酶。在一些实例中，核酸酶结构域的二聚化是切割活性所需的。每个锌指在靶DNA中识别三个连续的碱基对。例如，3指结构域识别9个连续核苷酸的序列，由于核酸酶的二聚化需要，因此两组锌指三联体用于结合18个核苷酸的识别序列。
例如美国专利申请US 2015-0082478 A1、WO 2015/026886 A1、WO 2016007347以及WO 201625131(其全部通过引用并入本文)中已经描述了使用DSB诱导剂(例如Cas9-gRNA复合物)进行的基因组编辑。
本文中术语“Cas基因”是指在细菌系统中通常与侧翼CRISPR基因座偶联、缔合或接近或在邻近处的基因。术语“Cas基因”，“CRISPR相关的(Cas)基因”在本文中可互换地使用。本文的术语“Cas内切核酸酶”是指由Cas基因编码的蛋白或蛋白复合物。当与适合的多核苷酸组分复合时，本文公开的Cas内切核酸酶能够识别、结合特异性DNA靶序列的全部或部分、并任选地使特异性DNA靶序列的全部或部分产生切口或切割特异性DNA靶序列的全部或部分。如本文所述的Cas内切核酸酶包含一个或多个核酸酶结构域。本公开的Cas内切核酸酶包括具有HNH或HNH-样核酸酶结构域和/或RuvC或RuvC-样核酸酶结构域的那些。本公开的Cas内切核酸酶可以包括Cas9蛋白、Cpf1蛋白、C2c1蛋白、C2c2蛋白、C2c3蛋白、Cas3、Cas 5、Cas7、Cas8、Cas10或这些的复合物。
如本文所用，术语“指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物”、“指导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统”、“指导多核苷酸/Cas复合物”、“指导多核苷酸/Cas系统”、“指导性Cas系统”在本文中可互换地使用，并且是指能够形成复合物的至少一种指导多核苷酸和至少一种Cas内切核酸酶，其中所述指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物可以将Cas内切核酸酶引导至DNA靶位点，使Cas内切核酸酶能够识别、结合DNA靶位点、并任选地使DNA靶位点产生切口或切割DNA靶位点(引入单链或双链断裂)。本文中指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物可以包含四种已知的CRISPR系统(Horvath和Barrangou，2010，Science[科学]327：167-170)(例如I型、II型或III型CRISPR系统)中任一种的一种或多种Cas蛋白和一种或多种合适的多核苷酸组分。Cas内切核酸酶在靶序列处解开DNA双链体并任选地切割至少一条DNA链，如通过由与Cas蛋白复合的多核苷酸(例如但不限于crRNA或指导RNA)识别靶序列所介导的。如果正确的前间隔序列邻近基序(PAM)位于或相邻于DNA靶序列的3′端，则通过Cas内切核酸酶对靶序列进行的这样的识别和切割典型地会发生。可替代地，本文中的Cas蛋白可能缺乏DNA切割或切口活性，但是当与合适的RNA组分复合时，仍然可以特异性结合DNA靶序列。(还参见美国专利申请US 2015-0082478 A1和US 2015-0059010 A1，两者均通过引用以其全文特此并入)。
指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物可以切割DNA靶序列的一条或两条链。可以切割DNA靶序列的两条链的指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物典型地包含具有处于功能状态的所有其内切核酸酶结构域的Cas蛋白(例如野生型内切核酸酶结构域或其变体在每个内切核酸酶结构域中保留一些或全部活性)。因此，在Cas蛋白的每个内切核酸酶结构域中保留一些或全部活性的野生型Cas蛋白或其变体是可以切割DNA靶序列的两条链的Cas内切核酸酶的合适实例。包含功能性RuvC和HNH核酸酶结构域的Cas9蛋白是可以切割DNA靶序列的两条链的Cas蛋白的实例。可以切割DNA靶序列的一条链的指导多核苷酸/Cas内切核酸酶酶复合物可以在本文中表征为具有切口酶活性(例如，部分切割能力)。Cas切口酶典型地包含一个功能性内切核酸酶结构域，该结构域允许Cas仅切割DNA靶序列的一条链(即，形成切口)。例如，Cas9切口酶可以包含(i)突变的、功能失调的RuvC结构域和(ii)功能性HNH结构域(例如野生型HNH结构域)。作为另一个实例，Cas9切口酶可以包含(i)功能性RuvC结构域(例如野生型RuvC结构域)和(ii)突变的功能失调的HNH结构域。适用于本文使用的Cas9切口酶的非限制性实例公开于美国专利申请公开号2014/0189896中，将其通过引用并入本文。
可以使用一对Cas9切口酶来增加DNA靶向的特异性。一般来说，这可以通过提供两个Cas9切口酶来进行，这两个Cas9切口酶通过与具有不同指导序列的RNA组分缔合，在希望靶向的区域的相反链上在DNA序列附近进行靶向和切口。每个DNA链的这样的附近切割产生双链断裂(即，具有单链突出端的DSB)，其然后被识别为非同源末端连接(NHEJ)(倾向于产生导致突变的不完美修复)或同源重组(HR)的底物。在这些实施例中的每个切口可以，例如，彼此分离至少约5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、或100(或在5与100之间的任何整数)个碱基。本文中的一种或两种Cas9切口酶蛋白可以用于Cas9切口酶对。例如，可以使用具有突变的RuvC结构域但具有功能性HNH结构域的Cas9切口酶(即，Cas9 HNH+/RuvC-)(例如，酿脓链球菌Cas9 HNH+/RuvC-)。通过使用本文中的合适的RNA组分(具有将每个切口酶靶向每个特异性DNA位点的指导RNA序列)，将每个Cas9切口酶(例如，Cas9 HNH+/RuvC-)引导到彼此邻近(分离多达100个碱基对)的特定的DNA位点。
Cas蛋白可以是包含一个或多个异源蛋白结构域(例如除Cas蛋白之外的1、2、3或更多个结构域)的融合蛋白的一部分。这样的融合蛋白可以包含任何另外的蛋白序列，以及任选地在任何两个结构域之间(例如在Cas和第一异源结构域之间)的接头序列。可以与本文中的Cas蛋白融合的蛋白结构域的实例包括但不限于表位标签(例如，组氨酸[His]、V5、FLAG、流感血球凝集素[HA]、myc、VSV-G、硫氧还蛋白[Trx])；报告子(例如谷胱甘肽-5-转移酶[GST]、辣根过氧化物酶[HRP]、氯霉素乙酰转移酶[CAT]、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶[GUS]、荧光素酶、绿色荧光蛋白[GFP]、HcRed、DsRed、青色荧光蛋白[CFP]、黄色荧光蛋白[YFP]、蓝色荧光蛋白[BFP])；以及具有一个或多个以下活性的结构域：甲基化酶活性、去甲基化酶活性、转录激活活性(例如，VP16或VP64)、转录抑制活性、转录释放因子活性、组蛋白修饰活性、RNA切割活性和核酸结合活性。Cas蛋白还可以与结合DNA分子或其他分子的蛋白融合，例如麦芽糖结合蛋白(MBP)、S-标签、Lex A DNA结合结构域(DBD)、GAL4A DNA结合结构域和单纯疱疹病毒(HSV)VP16。关于Cas蛋白的更多实例，参见2016年5月12日提交的PCT专利申请PCT/US16/32073和2016年5月12日提交的PCT/US16/32028(两个申请通过引用并入本文)。
在某些实施例中指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物可以结合DNA靶位点序列，但不切割在靶位点序列处的任何链。这样的复合物可以包含其中所有核酸酶结构域都是突变的、功能失调的Cas蛋白。例如，可以结合到DNA靶位点序列但在靶位点序列处不切割任何链的本文的Cas9蛋白可以包含突变的、功能失调的RuvC结构域和突变的、功能失调的HNH结构域。结合但不切割靶DNA序列的本文中的Cas蛋白可以用于调节基因表达，例如，在该情况下，Cas蛋白可以与转录因子(或其部分)融合(例如阻遏物或激活因子，例如本文公开的那些中的任一种)。在其他方面，可以将失活的Cas蛋白与具有内切核酸酶活性的另一种蛋白例如Fok I内切核酸酶融合。
本文中的“Cas9”(以前称为Cas5、Csn1、或Csx12)是指与cr核苷酸和tracr核苷酸或与单指导多核苷酸形成复合物的II型CRISPR系统的Cas内切核酸酶，其用于特异性识别和切割DNA靶序列的全部或部分。Cas9蛋白包含RuvC核酸酶结构域和HNH(H-N-H)核酸酶结构域，它们各自可以在靶序列处切割单个DNA链(两个结构域的协同作用导致DNA双链切割，而一个结构域的活性导致一个切口)。通常，RuvC结构域包含亚结构域I、II和III，其中结构域I位于Cas9的N末端附近，并且亚结构域II和III位于蛋白的中间，即位于HNH结构域的侧翼(Hsu等人，Cell[细胞]，157：1262-1278)。II型CRISPR系统包括利用与至少一种多核苷酸组分复合的Cas9内切核酸酶的DNA切割系统。例如，Cas9可以与CRISPR RNA(crRNA)和反式激活CRISPR RNA(tracrRNA)复合。在另一个实例中，Cas9可以与单指导RNA复合。
Cas内切核酸酶可以包括Cas9多肽的修饰形式。Cas9多肽的修饰形式可以包括降低Cas9蛋白的天然存在的核酸酶活性的氨基酸变化(例如，缺失、插入、或取代)。例如，在一些情况下，Cas9蛋白的修饰形式具有低于50％、低于40％、低于30％、低于20％、低于10％、低于5％、或低于1％的相应的野生型Cas9多肽(美国专利申请US 20140068797 A1)的核酸酶活性。在一些情况下，该Cas9多肽的修饰形式不具有实质性的核酸酶活性并且被称作催化“失活的Cas9”或“失活的cas9(dCas9)”。催化失活的Cas9变体包括在HNH和RuvC核酸酶结构域中包含突变的Cas9变体。这些催化失活的Cas9变体能够与sgRNA相互作用，并且在体内结合至靶位点但不能切割靶DNA的任一链。
催化失活的Cas9可以融合到异源序列(美国专利申请US 20140068797 A1)。适合的融合配偶体包括，但不限于提供活性的多肽，该活性通过直接作用于靶DNA上或与该靶DNA相关的多肽(例如，组蛋白或其他DNA-结合蛋白)上间接地增加转录。另外的适合的融合配偶体包括，但不限于提供甲基转移酶活性、去甲基化酶活性、乙酰基转移酶活性、脱乙酰基酶活性、激酶活性、磷酸酶活性、泛素连接酶活性、去泛素化酶活性、腺苷酸化活性、去腺苷酸化活性、苏素化活性、去苏素化活性、核糖基化活性、去核糖基化活性、豆蔻酰化活性，或去豆蔻酰化活性的多肽。进一步适合的融合配偶体包括，但不限于直接提供靶核酸的增加的转录的多肽(例如，募集转录激活因子、小分子/药物-应答性转录调节因子等的转录激活因子或其片段，蛋白质或其片段)。还可以将催化失活的Cas9融合到FokI核酸酶从而产生双链断裂(Guilinger等人Nature Biotechnology[自然生物技术]，第32卷，第6期，2014年6月)。
术语Cas内切核酸酶的“功能性片段”、“功能上等效的片段”和“功能等效片段”在本文中可互换地使用，并且意指本公开的Cas内切核酸酶序列的一部分或子序列，其中保留识别、结合靶位点并任选地使靶位点产生切口或切割靶位点(引入单链或双链断裂)的能力。
术语Cas内切核酸酶的“功能性变体”、“功能上等效的变体”和“功能等效变体”在本文中可互换地使用，并且意指本公开的Cas内切核酸酶的变体，其中保留识别、结合靶位点并任选地使靶位点产生切口或切割靶位点(引入单链或双链断裂)的能力。这些片段和变体可以经由例如定点诱变和合成构建等方法来获得。
可以在本文公开的方法中使用任何指导的内切核酸酶(例如，指导的CRISPR-Cas系统)。这样的内切核酸酶包括但不限于Cas9、Cas12f及其变体(参见美国专利号10,934,536的SEQ ID NO：37，其通过引用以其全文并入本文)和Cpf1内切核酸酶。迄今为止，已经描述了许多可以识别特定PAM序列(参见例如-Jinek等人(2012)Science[科学]337第816-821页，PCT专利申请PCT/US16/32073和PCT/US16/32028，以及Zetsche B等人2015.Cell[细胞]163，1013)并在特定位置切割靶DNA的内切核酸酶。应当理解的是，基于本文所述的使用指导的Cas系统的方法和实施例，现在人们可以定制这些方法这样使得它们可以利用任何指导的内切核酸酶系统。2021年5月28日提交的PCT/US2021/034704中说明了各种染色体工程化工具和方法，并将其在涉及某些靶向染色体工程化应用的范围的内容通过引用并入本文中。
如本文所用，术语“指导多核苷酸”涉及可以与Cas内切核酸酶形成复合物并且使得Cas内切核酸酶能够识别、结合并任选地切割DNA靶位点的多核苷酸序列。指导多核苷酸可以是单分子或双分子。指导多核苷酸序列可以是RNA序列、DNA序列或其组合(RNA-DNA组合序列)。任选地，指导多核苷酸可以包含至少一种核苷酸、磷酸二酯键或连接修饰，诸如但不限于锁核酸(LNA)、5-甲基dC、2,6-二氨基嘌呤、2′-氟A、2’-氟U、2′-O-甲基RNA、硫代磷酸酯键、与胆固醇分子的连接、与聚乙二醇分子的连接、与间隔子18(六乙二醇链)分子的连接、或导致环化的5′至3′共价连接。仅仅包含核糖核酸的指导多核苷酸也被称为“指导RNA”或“gRNA”(还参见美国专利申请US 2015-0082478 A1和US 2015-0059010 A1，两者均通过引用以其全文特此并入)。
指导多核苷酸可以是包含cr核苷酸序列和tracr核苷酸序列的双分子(也称为双链体指导多核苷酸)。cr核苷酸包括可以与靶DNA中的核苷酸序列杂交的第一核苷酸序列区域(称为可变靶向结构域或VT结构域)和作为Cas内切核酸酶识别(CER)结构域的一部分的第二核苷酸序列(也称为tracr配对序列)。tracr配对序列可以沿互补区域与tracr核苷酸杂交，并一起形成Cas内切核酸酶识别结构域或CER结构域。CER结构域能够与Cas内切核酸酶多肽相互作用。双链体指导多核苷酸的cr核苷酸和tracr核苷酸可以是RNA、DNA和/或RNA-DNA组合序列。在一些实施例中，双链体指导多核苷酸的cr核苷酸分子被称为“crDNA”(当由DNA核苷酸的连续延伸构成时)或“crRNA”(当由RNA核苷酸的连续延伸构成时)或“crDNA-RNA”(当由DNA和RNA核苷酸的组合构成时)。cr核苷酸可以包含天然存在于细菌和古细菌中的cRNA的片段。可以存在于本文公开的cr核苷酸中的细菌和古细菌中天然存在的cRNA片段的大小可以是但不限于2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个核苷酸。在一些实施例中，tracr核苷酸被称为“tracrRNA”(当由RNA核苷酸的连续延伸构成时)或“tracrDNA”(当由DNA核苷酸的连续延伸构成时)或“tracrDNA-RNA”(当由DNA和RNA核苷酸的组合构成时)。在一个实施例中，指导RNA/Cas9内切核酸酶复合物的RNA是包含双链体crRNA-tracrRNA的双链体化的RNA。
在5′-至-3′方向上，tracrRNA(反式激活CRISPR RNA)含有(i)与CRISPR II型crRNA的重复区退火的序列和(ii)含茎环的部分(Deltcheva等人，Nature[自然]471：602-607)。双链体指导多核苷酸可以与Cas内切核酸酶形成复合物，其中所述指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物(还称作指导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统)可以将该Cas内切核酸酶引导至基因组靶位点，使该Cas内切核酸酶能够识别、结合到靶位点中并任选地使靶位点产生切口或切割靶位点(向靶位点中引入单链或双链断裂)。(还参见2015年3月19日公开的美国专利申请US 2015-0082478 A1和US 2015-0059010 A1，两者均通过引用以其全文特此并入)。
单指导多核苷酸可以与Cas内切核酸酶形成复合物，其中所述指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物(还称为指导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统)可以将Cas内切核酸酶引导至基因组靶位点，使Cas内切核酸酶能够识别、结合靶位点、并任选地使靶位点产生切口或切割靶位点(引入单链或双链断裂)。(还参见美国专利申请US 2015-0082478 A1和US2015-0059010 A1，两者均通过引用以其全文特此并入)。
术语“可变靶向结构域”或“VT结构域”在本文中可互换使用，并且包括可以与双链DNA靶位点的一条链(核苷酸序列)杂交(互补)的核苷酸序列。第一核苷酸序列结构域(VT结构域)与靶序列之间的互补百分比可以为至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、63％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。可变靶向结构域可以是至少12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸长度。在一些实施例中，可变靶向结构域包含12至30个核苷酸的连续延伸。可变靶向结构域可以由DNA序列、RNA序列、经修饰的DNA序列、经修饰的RNA序列或其任何组合构成。
术语(指导多核苷酸的)“Cas内切核酸酶识别结构域”或“CER结构域”在本文中可互换地使用，并且包括与Cas内切核酸酶多肽相互作用的核苷酸序列。CER结构域包含tracr核苷酸配对序列，随后是tracr核苷酸序列。CER结构域可以由DNA序列、RNA序列、经修饰的DNA序列、经修饰的RNA序列(参见例如US 2015-0059010 A1，其通过引用以其全文并入本文)或其任何组合组成。
术语指导RNA，crRNA或tracrRNA的“功能片段”、“功能上等效的片段”和“功能等效片段”在本文中可互换地使用，并且分别是指本公开的指导RNA、crRNA或tracrRNA的一部分或子序列，其中分别保留用作指导RNA、crRNA或tracrRNA的能力。
术语指导RNA、crRNA或tracrRNA(分别地)的“功能性变体”、“功能上等效的变体”和“功能等效变体”在本文中可互换地使用，并且分别是指本公开的指导RNA、crRNA或tracrRNA的变体，其中分别保留用作指导RNA、crRNA或tracrRNA的能力。
术语“单指导RNA”和“sgRNA”在本文中可互换使用，并涉及两个RNA分子的合成融合，其中包含可变靶向结构域(与tracrRNA杂交的tracr配对序列连接)的crRNA(CRISPRRNA)与tracrRNA(反式激活CRISPR RNA)融合。单指导RNA可以包含可与II型Cas内切核酸酶形成复合物的II型CRISPR/Cas系统的crRNA或crRNA片段和tracrRNA或tracrRNA片段，其中所述指导RNA/Cas内切核酸酶复合物可以将Cas内切核酸酶引导至DNA靶位点，使得Cas内切核酸酶能够识别、结合DNA靶位点、并任选地使DNA靶位点产生切口或切割DNA靶位点(引入单链或双链断裂)。
术语“指导RNA/Cas内切核酸酶复合物”、“指导RNA/Cas内切核酸酶系统”、“指导RNA/Cas复合物”、“指导RNA/Cas系统”、“gRNA/Cas复合物”、“gRNA/Cas系统”、“RNA-指导的内切核酸酶”，“RGEN”在本文中可互换地使用并且意指至少一种RNA组分和至少一种能够形成复合物的Cas内切核酸酶，其中所述指导RNA/Cas内切核酸酶复合物可以将Cas内切核酸酶引导至DNA靶位点，使Cas内切核酸酶能够识别、结合DNA靶位点并任选地使DNA靶位点产生切口或切割DNA靶位点(引入单链或双链断裂)。本文中的指导RNA/Cas内切核酸酶复合物可以包含四种已知的CRISPR系统(Horvath和Barrangou，2010，Science[科学]327：167-170)(如I型、II型或III型CRISPR系统)中任一种的一种或多种Cas蛋白和一种或多种合适的RNA组分。指导RNA/Cas内切核酸酶复合物可以包括II型Cas9内切核酸酶和至少一种RNA组分(例如，crRNA和tracrRNA、或gRNA)。(还参见美国专利申请US 2015-0082478 A1和US2015-0059010 A1，两者均通过引用以其全文特此并入)。
使用本领域已知的任何方法(如，但不限于，粒子轰击、农杆菌转化或局部应用)，可以将作为单链多核苷酸或双链的多核苷酸的指导多核苷酸瞬时地引入细胞。指导多核苷酸还可以通过引入(通过，诸如但不限于粒子轰击或农杆菌转化等方法)包含编码指导多核苷酸的异源核酸片段的重组DNA分子来被间接引入细胞，该重组DNA分子可操作地连接到能够在所述细胞中转录指导RNA的特异性启动子。特异性启动子可以是但不限于RNA聚合酶III启动子，其允许具有精确定义的未经修饰的5′端和3′端的RNA转录(DiCarlo等人，Nucleic Acids Res.[核酸研究]41：4336-4343；Ma等人，Mol.Ther.Nucleic Acids[分子治疗-核酸]3：e161)，如在WO 2016025131中所述，其通过引用以其全文并入本文。
术语“靶位点”、“靶序列”、“靶位点序列”、“靶DNA”、“靶基因座”、“基因组靶位点”、“基因组靶序列”、“基因组靶基因座”和“前间隔序列”在本文中可互换地使用，并且意指多核苷酸序列，包括但不限于，在细胞的染色体、附加体，或基因组中的任何其他DNA分子(包括染色体DNA、叶绿体DNA、线粒体DNA、质粒DNA)中的核苷酸序列，在该序列处指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物可以进行识别、结合并任选地产生切口或进行切割。靶位点可以是细胞的基因组中的内源位点，或者可替代地，靶位点对于该细胞可以是异源的并且从而不是天然存在于细胞的基因组中，或者与在自然界发生的位置相比，可以在异源基因组位置中找到靶位点。如本文所用，术语“内源性靶序列”和“天然靶序列”在本文中可互换使用，是指对细胞基因组来说是内源的或天然的靶序列。细胞包括但不限于人、非人、动物、细菌、真菌、昆虫、酵母、非常规酵母和植物细胞以及通过本文所述方法生产的植物和种子。“人工靶位点”或“人工靶序列”在本文中可互换使用，并且是指已经引入细胞的基因组中的靶序列。这样的人工靶序列可以在序列上与细胞基因组中的内源性或天然靶序列相同，但位于细胞基因组中不同的位置(即，非内源性或非天然位置)。
“改变的靶位点”、“改变的靶序列”、“经修饰的靶位点”、“经修饰的靶序列”在本文中可互换使用，并且是指如本文公开的靶序列，当与非改变的靶序列相比时，该靶序列包含至少一个改变。这样的“改变”包括，例如：(i)至少一个核苷酸的替换，(ii)至少一个核苷酸的缺失，(iii)至少一个核苷酸的插入，或(iv)(i)-(iii)的任何组合。
靶DNA序列(靶位点)的长度可以变化，并且包括例如为至少12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多个核苷酸长度的靶位点。还有可能靶位点可以是回文的，即，一条链上的序列与在互补链上以相反方向的读取相同。切口/切割位点可以在靶序列内，或者切口/切割位点可以在靶序列之外。在另一种变异中，切割可以发生在彼此正好相对的核苷酸位置处，以产生平端切割，或者在其他情况下，切口可以交错以产生单链突出端，也称为“粘性端”，其可以是5′突出端抑或3′突出端。还可以使用基因组靶位点的活性变体。这样的活性变体可以包含与给定靶位点至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性，其中这些活性变体保留生物活性，因此能够被Cas内切核酸酶识别和切割。测量由内切核酸酶引起的靶位点的单链或双链断裂的测定是本领域已知的，并且通常测量药剂在含有识别位点的DNA底物上的总体活性和特异性。
本文中的“前间隔序列邻近基序”(PAM)指与由本文所述的指导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统识别的(靶向的)靶序列(前间隔序列)邻近的短核苷酸序列。如果靶DNA序列后面不是PAM序列，则Cas内切核酸酶可能无法成功识别该靶DNA序列。本文中的PAM的序列和长度可以取决于所使用的Cas蛋白或Cas蛋白复合物而不同。PAM序列可以是任何长度，但典型地是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核苷酸长度。
术语“靶向”、“基因靶向”和“DNA靶向”在本文中可互换地使用。本文中的DNA靶向可能是在特异性的DNA序列(例如细胞的染色体或质粒)中特异性引入敲除、编辑、或敲入。一般来说，在本文DNA靶向可以通过用于适宜的多核苷酸组分相关的内切核酸酶在细胞的特定DNA序列处切割一条或两条链来进行。这样的DNA切割，如果是双链断裂(DSB)，可以促进NHEJ或HDR方法，这可能导致靶位点处的修饰。
本文的靶向方法能以例如在该方法中靶向两个或更多个DNA靶位点的这样的方式进行。这样的方法可以任选地被表征为多重方法。在某些实施例中，可以同时靶向两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个靶位点。多重方法典型地通过本文的靶向方法进行，其中提供了多个不同的RNA组分，每一个被设计成将指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物引导到唯一的DNA靶位点。
术语“敲除”、“基因敲除”和“基因敲除”在本文中可互换使用。如本文所用，敲除表示已经通过用Cas蛋白进行靶向使得细胞的DNA序列部分或完全无效；例如，这样的DNA序列在敲除之前可能已编码氨基酸序列，或可能已具有调节功能(例如启动子)。可以通过插入缺失(通过NHEJ在靶DNA序列中插入或缺失核苷酸碱基)，或通过特异性去除在靶向位点处或其附近处降低或完全破坏序列功能的序列来产生敲除。在一个单独的实施例中，“敲除”可能是通过RNA干扰下调基因的结果。在一些方面，可以在公开的方法和组合物中使用一种或多种双链RNA(dsRNA)分子，以介导靶序列表达的降低，例如通过以序列特异性方式介导RNA干扰“RNAi”或基因沉默。在一些实施例中，通过RNA干扰或基因编辑敲除在DSL中具有抗性基因对应物的基因的天然易感拷贝等位基因。
指导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统可以与共同递送的多核苷酸修饰模板组合使用以允许编辑(修饰)目的基因组核苷酸序列。(还参见美国专利申请US 2015-0082478 A1和WO 2015/026886 A1，两者均通过引用以其全文并入)。
术语“敲入”、“基因敲入”、“基因插入”和“遗传敲入”在本文中可互换地使用。敲入代表通过用Cas蛋白靶向在细胞中的特定DNA序列处进行的DNA序列的替换或插入(通过HR，其中还使用合适的供体DNA多核苷酸)。敲入的实例包括但不限于异源氨基酸编码序列在基因的编码区中的特异性插入，或转录调节元件在遗传基因座中的特异性插入。
可以采用不同方法和组合物来获得细胞或生物体，该细胞或生物体具有插入针对Cas内切核酸酶的靶位点中的目的多核苷酸。这样的方法可以采用同源重组以提供目的多核苷酸在靶位点处的整合。在提供的一种方法中，在供体DNA构建体中将目的多核苷酸提供至生物细胞。如本文所用，“供体DNA”是包含待插入到Cas内切核酸酶的靶位点的目的多核苷酸的DNA构建体。供体DNA构建体可进一步包含位于目的多核苷酸侧翼的同源的第一区域和第二区域。供体DNA的同源的第一区域和第二区域分别与存在于细胞或生物基因组的靶位点中或位于该靶位点侧翼的第一和第二基因组区具有同源性。“同源”意指DNA序列是相似的。例如，在供体DNA上发现的“与基因组区同源的区域”是与细胞或生物体基因组中给定的“基因组序列”具有类似序列的DNA的区域。同源的区域可以具有足以促进在切割的靶位点处的同源重组的任何长度。例如，同源的区域的长度可以包括至少5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、5-35、5-40、5-45、5-50、5-55、5-60、5-65、5-70、5-75、5-80、5-85、5-90、5-95、5-100、5-200、5-300、5-400、5-500、5-600、5-700、5-800、5-900、5-1000、5-1100、5-1200、5-1300、5-1400、5-1500、5-1600、5-1700、5-1800、5-1900、5-2000、5-2100、5-2200、5-2300、5-2400、5-2500、5-2600、5-2700、5-2800、5-2900、5-3000、5-3100或更多个碱基，这样使得同源的区域具有足够的同源性以与相应的基因组区进行同源重组。“足够的同源性”表示两个多核苷酸序列具有足够的结构相似性以充当同源重组反应的底物。结构相似性包括每个多核苷酸片段的总长度以及多核苷酸的序列相似性。序列相似性可以通过在序列的整个长度上的百分比序列同一性和/或通过包含局部相似性的保守区域(例如具有100％序列同一性的连续核苷酸)以及在序列长度的一部分上的百分比序列同一性来描述。
相对于参考序列(主题序列)，“序列同一性百分比(％)”被确定为在比对序列并引入空位(如果需要)以实现最大百分比序列同一性后，并且不考虑作为序列同一性的一部分的任何氨基酸保守取代，候选序列(查询序列)中与参考序列中的相应氨基酸残基或核苷酸同一的氨基酸残基或核苷酸的百分比。用于确定序列同一性百分比目的而进行的比对能以本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用公共可用的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2。本领域的技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在进行比较的序列的全长度上实现最大比对所需的任何算法。为了确定两种氨基酸序列或两种核酸序列的同一性百分比，出于最佳比较目的，将序列进行比对。两个序列之间的同一性百分比是序列共有的相同位置的数目的函数(例如，查询序列的同一性百分比＝查询序列和主题序列之间的相同位置的数目/查询序列的位置总数(例如，重叠位置)×100)。
由靶标和供体多核苷酸共享的同源性或序列同一性的量可以变化，并且包括总长度和/或在约1-20bp、20-50bp、50-100bp、75-150bp、100-250bp、150-300bp、200-400bp、250-500bp、300-600bp、350-750bp、400-800bp、450-900bp、500-1000bp、600-1250bp、700-1500bp、800-1750bp、900-2000bp、1-2.5kb、1.5-3kb、2-4kb、2.5-5kb、3-6kb、3.5-7kb、4-8kb、5-10kb、或多达并包括靶位点的总长度的范围内具有单位整数值的区域。这些范围包括范围内的每个整数，例如1-20bp的范围包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20bp。同源性的量也可以通过在两个多核苷酸的完整比对长度上的百分比序列同一性来描述，其包括约至少50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的百分比序列同一性。足够的同源性包括多核苷酸长度、总体百分比序列同一性，和任选地连续核苷酸的保守区域或局部百分比序列同一性的任何组合，例如，足够的同源性可以被描述为与靶基因座的区域具有至少80％序列同一性的75-150bp的区域。足够的同源性也可以通过预测的两个多核苷酸在高严格条件下特异性杂交的能力来描述，参见例如Sambrook等人，(1989)MolecularCloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，(Cold Spring HarborLaboratory Press，NY[纽约州冷泉港实验室出版社])；Current Protocols in MolecularBiology[分子生物学实验指南]，Ausubel等人编辑(1994)Current Protocols[实验室指南]，(Greene Publishing Associates，Inc.[格林出版联合公司]和John Wiley&Sons，Inc.[约翰威利父子公司])；以及Tijssen(1993)Laboratory Techniques inBiochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Acid Probes[生物化学与分子生物学实验技术-与核酸探针杂交]，(Elsevier，New York[纽约爱思唯尔公司])。
在给定的基因组区和在供体DNA上发现的相应的同源的区域之间的结构相似性可以是允许同源重组发生的任何程度的序列同一性。例如，由供体DNA的“同源的区域”和生物体基因组的“基因组区”共享的同源性或序列同一性的量可以是至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性，这样使得序列进行同源重组
供体DNA上的同源的区域可以与靶位点侧翼的任何序列具有同源性。虽然在一些实施例中，同源的区域与紧邻靶位点侧翼的基因组序列共享显著的序列同源性，但是应当认识到同源的区域可以被设计为与可能更靠近靶位点的5′或3′的区域具有足够的同源性。在又其他实施例中，同源的区域还可以与靶位点的片段以及下游基因组区具有同源性。在一个实施例中，第一同源的区域进一步包含靶位点的第一片段，并且第二同源的区域包含靶位点的第二片段，其中第一片段和第二片段不同。
如本文所用，“同源重组”包括在同源的位点处的两个DNA分子之间的DNA片段的交换。同源重组的频率受多个因素影响。不同的生物体相对于同源重组的量和同源与非同源重组的相对比例而变化。一般来说，同源区的长度会影响同源重组的频率：同源区越长，频率越高。为观察同源重组而需要的同源区域的长度也是随物种而异的。在许多情况下，已经利用了至少5kb的同源性，但已经观察到具有仅25-50bp的同源性的同源重组。参见，例如，Singer等人，(1982)Cell[细胞]31：25-33；Shen和Huang，(1986)Genetics[遗传学]112：441-57；Watt等人，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]82：4768-72，Sugawara和Haber，(1992)Mol Cell Biol[分子细胞生物学]12：563-75，Rubnitz和Subramani，(1984)Mol Cell Biol[分子细胞生物学]4：2253-8；Ayares等人，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]83：5199-203；Liskay等人，(1987)Genetics[遗传学]115：161-7。
同源-定向修复(HDR)是在细胞中用来修复双链DNA和单链DNA断裂的机制。同源定向修复包括同源重组(HR)和单链退火(SSA)(Lieber.2010Annu.Rev.Biochem.[生物化学年鉴]79：181-211)。HDR的最常见形式称为同源重组(HR)，其在供体与受体DNA之间具有最长的序列同源性要求。HDR的其他形式包括单链退火(SSA)和断裂诱导的复制，并且这些需要相对于HR更短的序列同源性。缺口(单链断裂)处的同源-定向修复可以经由与在双链断裂处的HDR不同的机制发生(Davis和Maizels.(2014)PNAS[美国科学院院报](0027-8424)，111(10)，第E924-E932页)。
植物细胞的基因组的改变，例如通过同源重组(HR)，其是对于遗传工程而言的有力工具。已经证明了在植物中(Halfter等人，(1992)Mol Gen Genet[分子和普通遗传学]231：186-93)和昆虫中(Dray和Gloor，1997，Genetics[遗传学]147：689-99)的同源重组。同源重组也已在其他生物体中完成。例如，在寄生原生动物利什曼原虫中，至少需要150-200bp的同源性进行同源重组(Papadopoulou和Dumas，(1997)Nucleic Acids Res[核酸研究]25：4278-86)。在丝状真菌构巢曲霉中，已经用仅50bp侧翼同源性实现基因替换(Chaveroche等人，(2000)Nucleic Acids Res[核酸研究]28：e97)。在纤毛虫嗜热四膜虫中也已经证明了靶向基因替换(Gaertig等人，(1994)Nucleic Acids Res[核酸研究]22：5391-8)。在哺乳动物中，使用可以在培养基中生长、转化、选择、和引入小鼠胚胎中的多能胚胎干细胞系(ES)的同源重组在小鼠中是最成功的(Watson等人，(1992)Recombinant DNA[重组DNA]，第2版，(Scientific American Books distributed by WH Freeman&Co.[由WHFreeman&Co.公司发行的科学美国人图书])。
在一些实施例中，提供了用于使用CRISPR-Cas技术来倒位(inverting)染色体的大片段、缺失染色体片段和重新定位(relocating)片段或基因的方法和组合物(2020年5月29日提交的美国专利申请63/301822)。在一些方面，DSL染色体片段可以使用染色体重排来移动或改变。
在另一实施例中，染色体片段可以重排列至DSL中。在一些方面，染色体片段是至少约1kb、在1kb至10kb之间、至少约10kb、在10kb至20kb之间、至少约20kb、在20kb至30kb之间、至少约30kb、在30kb至40kb之间、至少约40kb、在40kb至50kb之间、至少约50kb、在50kb至60kb之间、至少约60kb、在60kb至70kb之间、至少约70kb、在70kb至80kb之间、至少约80kb、在80kb至90kb之间、至少约90kb、在90kb至100kb之间或大于100kb。在一些方面，该区段是至少约100kb、在100kb至150kb之间、至少约150kb、在150kb至200kb之间、至少约200kb、在200kb至250kb之间、至少约250kb、在250kb和300kb之间、至少约300kb、在300kb和350kb之间、至少约350kb、在350kb和400kb之间、至少约400kb、在400kb和450kb之间、至少约450kb、在450kb至500kb之间、至少约500kb、在500kb至550kb之间、至少约550kb、在550kb至600kb之间、至少约600kb、在600kb至650kb之间、至少约650kb、在650kb至700kb之间、至少约700kb、在700kb至750kb之间、至少约750kb、在750kb至800kb之间、至少约800kb、在800kb至850kb之间、至少约850kb、在850kb和900kb之间、至少约900kb、在900kb和950kb之间、至少约950kb、在950kb和1000kb之间、至少约1000kb、在1000kb和1050kb之间、至少约1050kb、在1050kb和1100kb之间、或大于1100kb。在一些方面，该片段是至少约1Mb、在1Mb至10Mb之间、至少约10Mb、在10Mb至20Mb之间、至少约20Mb、在20Mb至30Mb之间、至少约30Mb、在30Mb至40Mb之间、至少约40Mb、在40Mb至50Mb之间、至少约50Mb、在50Mb至60Mb之间、至少约60Mb、在60Mb至70Mb之间、至少约70Mb、在70Mb至80Mb之间、至少约80Mb、在80Mb至90Mb之间、至少约90Mb、在90Mb至100Mb之间或大于100Mb。
易错DNA修复机制可以在双链断裂位点处产生突变。非同源末端连接(NHEJ)途径是用来将断裂的末端结合在一起的最常见的修复机制(Bleuyard等人，(2006)DNA Repair[DNA修复]5：1-12)。染色体的结构完整性典型地通过修复来保持，但是缺失、插入、或其他重排是可能的。一个双链断裂的两个末端是NHEJ最普遍的底物(Kirik等人，(2000)EMBO J[欧洲分子生物学学会杂志]19：5562-6)，然而如果发生两种不同的双链断裂，则来自不同断裂的游离端可以被连接，并且导致染色体缺失(Siebert和Puchta，(2002)Plant Cell[植物细胞]14：1121-31)，或在不同的染色体之间的染色体易位(Pacher等人，(2007)Genetics[遗传学]175：21-9)。
可以通过本领域已知的任何手段引入供体DNA。可以通过本领域已知的任何转化方法(包括，例如农杆菌介导的转化或生物射弹粒子轰击)提供供体DNA。供体DNA可以瞬时地存在于细胞中，或可以经由病毒复制子引入。在Cas内切核酸酶和靶位点存在下，将供体DNA插入到转化植物的基因组中。
指导RNA/Cas内切核酸酶系统的另外的用途已进行了描述(参见美国专利申请US2015-0082478 A1、WO 2015/026886 A1、US 2015-0059010 A1、美国申请US 2017/0306349A1，和美国申请62/036,652，将其全部通过引用并入本文)，并且包括，但不限于修饰或取代目的核苷酸序列(如调节元件)、目的多核苷酸插入、基因敲除、基因敲入、剪接位点的修饰和/或引入交替剪接位点、编码目的蛋白的核苷酸序列的修饰、氨基酸和/或蛋白融合物、以及通过在目的基因中表达反向重复序列引起的基因沉默。
目的多核苷酸和/或性状可以在复杂性状基因座中堆叠在一起，如在US 2013/0263324-A1和PCT/US13/22891中所述，将这两个申请通过引用特此并入。
在一些实施例中，本文提供了包含具有至少一个核苷酸序列的基因组基因座的玉蜀黍植物细胞，该至少一个核苷酸序列赋予了对北方叶枯病和至少一种不同的植物疾病的增强的抗性。另外的植物疾病可以包括但不限于灰叶斑病、南方玉米锈病和炭疽茎腐病。公开的方法包括在玉蜀黍植物细胞的基因组基因座中的一个或多个靶位点处引入双链断裂；引入赋予对多于一种植物疾病的增强的抗性的一个或多个核苷酸序列，其中每个核苷酸序列的侧翼为相应靶位点的5’或3’的300-500bp的核苷酸序列；以及获得具有基因组基因座的玉蜀黍植物细胞，该基因组基因座包含赋予对多于一种植物疾病的增强的抗性的一个或多个核苷酸序列。双链断裂可以由核酸酶(如但不限于TALEN、大范围核酸酶、锌指核酸酶或CRISPR相关的核酸酶)诱导。该方法可以进一步包括从具有基因组基因座的玉蜀黍植物细胞生长玉蜀黍植物，该基因组包含赋予对北方叶枯病的增强的抗性的至少一个核苷酸序列，并且玉蜀黍植物可以表现出对北方叶枯病的增强的抗性。
与在目的基因组基因座处缺少赋予增强的抗性的核苷酸序列的等效植物相比时，玉蜀黍植物表现出增强的抗性。“等效”意指除目的基因组基因座外，这些植物在遗传上相似。
在一些方面，赋予增强的抗病性的一个或多个核苷酸序列包括以下中的任一序列：例如RppK(基因组DNA SEQ ID NO：9；cDNA SEQ ID NO：10；蛋白质SEQ ID NO：11)、Ht1(基因组DNA SEQ ID NO：6；cDNA SEQ ID NO：7；蛋白质SEQ ID NO：8)、NLB18(基因组DNASEQ ID NO：1；cDNA SEQ ID NO：2or 4；蛋白质SEQ ID NO：3或5)、NLR01(基因组DNA SEQ IDNo：27；cDNA SEQ ID NO：28；蛋白质SEQ ID No：29)、NLR02(基因组DNA SEQ ID No：24；cDNASEQ ID NO：25；蛋白质SEQ ID No：26)、RCG1(cDNA SEQ ID No：30；蛋白质SEQ ID No：31)、RCG1b(cDNA SEQ ID No：32；蛋白质SEQ ID No：33)、PRR03(基因组DNA SEQ ID No：34；cDNASEQ ID NO：35；蛋白质SEQ ID No：36)、PRR01(cDNA SEQ ID NO：37；蛋白质SEQ ID No：38)、NLR01(基因组DNA SEQ ID No：39；cDNA SEQ ID NO：40；蛋白质SEQ ID No：41)、或NLR04(基因组DNA SEQ ID No：42；cDNA SEQ ID NO：43；蛋白质SEQ ID No：44)。
如本文所用，“复合转基因性状基因座”是目的基因组区内的染色体片段，该染色体片段包含彼此遗传连锁的至少两个改变的靶序列并且还可以包含如下文所述的一个或多个目的多核苷酸。复合转基因性状基因座中的改变的靶序列中的每个均源自相应的靶序列，该相应的靶序列例如通过涉及由本发明的双链断裂诱导剂诱导的靶序列内的双链断裂的机制而改变。在本发明的某些实施例中，改变的靶序列包含转基因。
CTL1存在于1号玉蜀黍染色体上大约5cM的窗口中(美国专利号10,030,245、美国专利公开号2018/0258438A1、美国专利公开号2018/0230476A1)。为开发复杂性状基因座(CTL)而鉴定的第一玉蜀黍基因组窗口跨越1号染色体上ZM01：12987435(侧翼为公共SNP标记SYN12545)至Zm01：15512479(侧翼为公用SNP标记SYN20196)。表1示出了玉蜀黍1号染色体上的目的基因组窗口内的众多玉蜀黍SNP标记(Ganal，M.等人，A Large Maize(Zea maysL.)SNP Genotyping Array：Development and Germplasm Genotyping，and GeneticMapping to Compare with the B73Reference Genome.[大型玉蜀黍(玉米(Zea maysL.))SNP基因分型阵列：发育和种质基因分型，以及与B73参考基因组相比的遗传作图]PloSone[公共科学图书馆期刊]，2011年12月08日DOI：10.1371)和Cas内切核酸酶靶位点(31个位点)的物理和遗传图谱位置(如果可用)。
表1.玉蜀黍的1号染色体上包含复杂性状基因座(CTL1)的基因组窗口
Figure BDA0004113413250000451
Figure BDA0004113413250000461
Figure BDA0004113413250000471
在一个实施例中，基因组基因座包含疾病超级基因座1(DSL1)。在另一实施例中，疾病超级基因座1(DSL1)位于距离复杂性状基因座1(CTL1)大约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10cM的1号染色体的远端区内。在一个实施例中，疾病超级基因座(DSL)位于距离至少一个不同性状基因座大约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10cM处。在另一实施例中，DSL位于端粒区内。在优选的实施例中，DSL1位于CTL1远端约0.5cM至约5cM范围内。在又一实施例中，DSL1的侧翼是pze-101020971(SEQ ID NO：22)和pze-101022341(SEQ ID NO：23)。在一些实施例中，CTL1包含昆虫控制性状和除草剂耐受性状。
在一个方面，赋予对北方叶枯病的增强的抗性的基因组基因座包含DSL1。
如本文所述的指导多核苷酸/Cas9内切核酸酶系统提供了用来产生双链断裂并允许将性状在复杂性状基因座中堆叠的有效系统。因此，在一方面，Cas9内切核酸酶用作DSB诱导剂，并且一个或多个指导RNA用于将Cas9靶向至DSL1基因座中的位点处。
通过本文所述的方法产生的玉蜀黍植物可以提供持久和广谱抗病性，并且可以协助育种抗病玉蜀黍植物。例如，因为赋予增强的抗病性的核苷酸序列彼此(在一个基因座处)紧密连接，所以这减少了需要通过回交进行性状渗入的特定基因座的数量，并最小化来自非优良抗性供体的连锁累赘。在一个实施例中，DSL位于距QTL至少1cM、2cM、3cM、4cM、5cM、6cM、7cM、8cM、9cM、10cM、15cM或20cM以内以实现产量稳定性或抗病性。
在一些实施例中，可以将包含DSL的玉蜀黍植物用杀昆虫剂、杀真菌剂或生物制剂处理。在一个实施例中，与不包含DSL的玉蜀黍植物所需要的杀真菌剂或生物制剂水平相比，由本文所述方法产生的玉蜀黍植物可能需要水平更低或数量更少的杀真菌剂或生物制剂处理。在另外的实施例中，与不包含DSL的玉蜀黍植物所需要的杀真菌剂或生物制剂水平相比，更低水平或数量更少的真菌剂或生物制剂处理可增加杀真菌剂或生物制剂的耐久性。
在一个实施例中，杀真菌剂包含选自由以下组成的组的杀真菌剂组合物：嘧菌酯、噻菌灵、咯菌腈、甲霜灵、戊唑醇、丙硫菌唑、种菌唑、戊苯吡菌胺、和氟唑环菌胺。本文公开的组合物可以包含杀真菌剂，该杀真菌剂可以包括但不限于：呼吸抑制剂，例如嘧菌酯，其靶向线粒体电子传递的复合体III；微管蛋白抑制剂，例如噻菌灵，其结合β-微管蛋白；渗透胁迫相关的激酶抑制剂咯菌腈；卵菌(一组真菌样生物体)的RNA聚合酶抑制剂，例如甲霜灵；甾醇生物合成的抑制剂，其包括甾醇生物合成途径的C-14去甲基化酶的抑制剂(通常称为去甲基化酶抑制剂或DMI)，例如戊唑醇、丙硫菌唑、和种菌唑；呼吸抑制剂，其靶向复合体II线粒体电子传递，例如戊苯吡菌胺；呼吸抑制剂，其靶向复合体II线粒体电子传递，例如氟唑环菌胺。可以在frac.info/docs/default-source/publications/frac-code-list/frac-code-list-2016.pdf?sfvrsn＝2(可通过使用“www”前缀在万维网上访问；参见Hirooka和Ishii(2013)，Journal of General Plant Pathology[普通植物病理学杂志])找到具有不同或相似作用模式的其他类别的杀真菌剂。杀真菌剂可以包含如本文所述的不同类别的杀真菌剂的全部或任何的组合。在某些实施例中，本文公开的组合物包含嘧菌酯、噻菌灵、咯菌腈、和甲霜灵。在另一实施例中，本文公开的组合物包含戊唑醇。在另一实施例中，本文公开的组合物包含丙硫菌唑、甲霜灵、和戊苯吡菌胺。在另一实施例中，本文公开的组合物包含种菌唑和甲霜灵。在另一实施例中，本文公开的组合物包含氟唑环菌胺。如本文所用，组合物可以是液体、非均匀混合物、均匀混合物、粉末、溶液、分散体或其任何组合。在另一实施例中，生物防治剂可以与DSL组合使用。
减少对庇护所的需求的另一个策略是对具有针对靶标有害生物的不同作用模式的性状进行聚合。例如，由于抗性风险降低，具有金字塔化在一种转基因植物中的不同作用模式的Bt毒素能够减少避难所需求。对于抗病性和性状耐久性也可以如此。在一些方面，靶向相同疾病的两个基因可以增加每种性状的耐久性。例如，植物中表达的NLB1 8和Ht1(分别为SEQ ID NO：3和8)的组合增加了每种性状的耐久性，以提高对北方叶枯病的抗性。金字塔组合中不同的作用模式也延长了每种性状的耐久性，因为抗性发展到每种性状的速度较慢。
在一个实施例中，将第一疾病超级基因座与第二疾病超级基因座堆叠。在另一实施例中，使用育种堆叠法获得包含与第二疾病超级基因座堆叠的第一疾病超级基因座的玉蜀黍植物。在一些实施例中，第二疾病超级基因座具有至少一个与第一疾病超级基因座不同的抗病基因。
在一个实施例中，编码抗病基因的多核苷酸序列包含异源启动子。在另一实施例中，编码抗病基因的多核苷酸序列包含cDNA序列。在又一实施例中，编码抗病基因的多核苷酸序列包含内源性抗病基因座，并且进一步包含异源性表达调节元件(EME)。
在一个实施例中，DSL包含产生非编码转录物或非编码RNA的多核苷酸。在另一实施例中，非编码转录物的来源可以来自非编码基因，或者其可以来自类似转座子或逆转录转座子的重复序列。在另一实施例中，非编码转录物可以由带有发夹设计的RNAi构建体产生。在另一个实施例中，DSL可以包含不编码多肽但包含转座子或重复序列的一个或多个多核苷酸序列，或转录为各种大小的非编码转录物(如例如长的非编码RNA(lncRNA))的序列。在一个实施例中，可以将非编码转录物加工成小RNA，如微小RNA(miRNA)、短干扰(siRNA)、反式作用siRNA(tasiRNA)和相位siRNA(phasiRNA)。在一个实施例中，DSL中的非编码基因和序列可以与植物病原体或有害生物(如病毒、细菌、卵菌、真菌、昆虫和寄生植物)中的特定序列共享核苷酸序列同源性。非编码转录物或加工产物，如小RNA，可以调控或调节特定基因或序列在植物病原体或有害生物中的表达，从而降低病原体的致病性并提高宿主植物的抗性。
在另外的实施例中，包含疾病超级基因座(DSL)的植物可以与一种或多种另外的Bt杀昆虫毒素(包括但不限于，Cry3B毒素、mCry3B毒素、mCry3A毒素或Cry34/35毒素)堆叠。在另外的实施例中，包含疾病超级基因座(DSL)的植物可以与一种或多种另外的转基因堆叠，这些转基因含有这些Bt杀昆虫毒素和其他鞘翅目活性Bt杀昆虫性状，例如，事件MON863、事件MIR604、事件5307、事件DAS-59122、事件DP-4114、事件MON 87411和事件MON88017。在一些实施例中，包含DSL的植物可与以下堆叠：MON-87429-9(MON87429事件)；MON87403；MON95379；MON87427；MON87419；MON-00603-6(NK603)；MON-87460-4；LY038；DAS-06275-8；BT176；BT11；MIR162；GA21；MZDT09Y；SYN-05307-1；DP-23211、DP-915635、和DAS-40278-9。
如本文所用，关于序列的“异源性”是指该序列源于外来物种，或者，如果源于相同物种的话，则是通过精心的人为干预从其在组合物和/或基因组基因座中的天然形式进行实质性修饰得到的序列。例如，可操作地连接至异源多核苷酸的启动子来自与从其衍生该多核苷酸的物种不同的物种，或者，如果来自相同/类似的物种，那么一方或双方基本上由它们的原来形式和/或基因组基因座修饰得到，或者该启动子不是被可操作地连接的多核苷酸的天然启动子。在一些实施例中，异源序列包含编码来自不同位置处的相同物种的多肽的多核苷酸，即“天然基因”。在一些实施例中，异源序列包含天然基因和来自不同物种的序列。在一些实施例中，DSL包含至少两个异源天然基因，并且不含来自不同物种的多核苷酸。
IV.玉蜀黍植物细胞、植物和种子
“玉蜀黍(maize)”是指玉蜀黍(Zea mays L.ssp.mays)植物，并且也被称为“玉米”。在本文描述的对象前使用“ZM”是指该对象来自玉米(Zea mays)的事实。
还提供了具有经修饰的以下序列的玉蜀黍植物、玉蜀黍植物细胞、玉蜀黍植物部分和种子以及玉蜀黍谷物：RppK(基因组DNA SEQ ID NO：9；cDNA SEQ ID NO：10；蛋白质SEQID NO：11)、Htl(基因组DNA SEQ ID NO：6；cDNA SEQ ID NO：7；蛋白质SEQ ID NO：8)、NLB18(基因组DNA SEQ ID NO：1；cDNA SEQ ID NO：2或4；蛋白质SEQ ID NO：3或5)、NLR01(基因组DNA SEQ ID No：27；cDNA SEQ ID NO：28；蛋白质SEQ ID No：29)、NLR02(基因组DNA SEQ IDNo：24；cDNA SEQ ID NO：25；蛋白质SEQ ID No：26)、RCG1(cDNA SEQ ID No：30；蛋白质SEQID No：31)、RCG1b(cDNA SEQ ID No：32；蛋白质SEQ ID No：33)、PRR03(基因组DNA SEQ IDNo：34；cDNA SEQ ID NO：35；蛋白质SEQ ID No：36)、PRR01(cDNA SEQ ID NO：37；蛋白质SEQID No：38)、NLR01(基因组DNA SEQ ID No：39；cDNA SEQ ID NO：40；蛋白质SEQ ID No：41)、或NLR04(基因组DNA SEQ ID No：42；cDNA SEQ ID NO：43；蛋白质SEQ ID No：44)，例如，本文公开的序列。
如本文所用，术语植物包括植物细胞、植物原生质体、从中可再生出植物的植物细胞组织培养物、植物愈伤组织、植物块和在植物或植物部分(例如胚、花粉、胚珠、种子、叶、花、籽粒、穗、穗轴、壳、茎、根、根尖、花药等)中的完整植物细胞。谷物旨在意指由商业种植者出于栽培或繁殖物种之外的目的所生产的成熟种子。
实例
提供以下实例以说明但不限制所附权利要求书。应当理解，本文所述实例和实施例仅用于说明目的，并且本领域的技术人员将认识到在不脱离实施例精神或所附权利要求书的范围的情况下可以改变各种试剂或参数。
实例1
设计适合在玉蜀黍中基因工程化抗病性状的基因座
在定义和选择适用于疾病超级基因座开发的玉蜀黍基因组区时，考虑了几个因素：产品组装的便利性、分子特征以及监管和管理方面。
一个选择的基因座，疾病超级基因座1(DSL1)，位于1号染色体的远端区，距离复杂性状基因座1(CTL1)大约0.5cM。此距离是专门选择和工程化的，以促进具有插入性状的育种堆叠件，如昆虫控制性状和/或除草剂耐受性状插入CTL1着陆垫(图1)并加快产品组装的最终步骤。DSL1在一系列种质(包括一组代表性北美近交系和一系列热带品系)中没有表现主要结构变异的区中的跨越大约3.2cM或515Kbp。在更局部的水平上，泛基因组比对表明该区域的大部分在非硬茎近交系中结构保守。
用于无缝插入性状的靶位点的识别
使用生物信息学工具扫描DSL1区的靶位点，以搜索前间隔序列邻近基序(PAM)并检索上游20个碱基序列。然后应用以下过滤器来选择合适的靶位点及其相应的指导RNA。
如果与任何天然基因注释的距离小于2.5kb，则认为靶位点不合适。靶近交系中的基因注释基于结合了计算机预测和体内证据的生物信息途径。对于下游分析原因，位于大于200bp的重复区2kb内的靶位点也被认为是不合适的。
最终使用针对基因组组件运行的生物信息学工具在计算机上检查了靶向适宜位点的候选指导RNA的潜在的脱靶活性。对于每个候选指导RNA，基于生物信息学分析生成了潜在脱靶位点列表，如果潜在脱靶点与引导存在3个或更多个错配(包括PAM近端种子序列中的至少一个错配)，则将其排除(Young，Zastrow-Hayes等人2019，Sci Rep[科学报告]4月30日；9(1)：672)。
表2中提供了DSL1中的潜在可接受位点列表。图2示出了靶位点位置的示意图。
表2.DSL1中的可接受位点
Figure BDA0004113413250000531
表3标记侧翼DSL1
Figure BDA0004113413250000532
指导和模板的载体构建
为了改善它们的共表达和存在，将Cas内切核酸酶和指导RNA表达盒连接至单个DNA构建体中。合成了含有指导RNA编码序列的480-490bp序列、来自选择的玉蜀黍基因组靶位点的12-30bp可变靶向结构域和U6启动子的一部分。然后将序列克隆至已经具有cas盒和其余gRNA表达盒的骨架上。
设计同源定向修复(HDR)模板以使抗病基因插入所需靶位点。为了优化递送，合成模板序列并克隆至含有Cas内切核酸酶和指导RNA的载体骨架。在此设置中，通过在HDR模板的每一例插入与载体上编码的指导RNA对应的靶位点序列，实现从载体中释放模板(图3)。模板序列包括一个或多个目的抗病基因的全基因组区，侧翼是对应于与切割位点直接相邻的100-1000bp区域的同源臂。
通过农杆菌介导的转化将包含Cas内切核酸酶表达盒、指导RNA表达盒和HDR模板的质粒递送至玉蜀黍胚中。通过Cas内切核酸酶在指定位点处进行DNA切割后，将通过同源定向修复整合模板，从而在赋予对一种或多种疾病的抗性的基因组区的切割位点处进行无缝插入。
赋予针对北方叶枯病和南方锈病的抗性的玉蜀黍基因组片段的插入
一个基因组片段可以含有单个抗性来源或分子堆叠的多个来源，以在DSL1处产生基因组插入。在某些方面，与由分天然或异源启动子驱动的转基因盒相比，存在于此基因组片段内的编码序列由其天然调控序列(如天然启动子和/或增强子序列)驱动。然后可以单独使用或者之后通过育种组合使用DSL1内不同靶位点处的单个和堆叠插入。例如，可以将赋予针对北方叶枯病的抗性的NLB18(基因组DNA SEQ ID NO：1；cDNA SEQ ID NO：2或4；蛋白质SEQ ID NO：3或5)或HT1(基因组DNA SEQ ID NO：6；cDNA SEQ ID NO：7；蛋白质SEQ IDNO：8)的基因组片段(美国专利申请号16/341，531)和赋予针对南方锈病的抗性的来自近交系K22的RppK基因的基因组片段(WO 2019/236257(基因组DNA SEQ ID NO：9；cDNA SEQ IDNO：10；蛋白质SEQ ID NO：11))单独地或组合地插入DSL1处，如图4所示。
实例2
将多个抗病基因座渗入或正向育种至优良种质中
与独立地将不同基因渗入至基础近交系相比，多个基因在约5cM的区域内组合以赋予多种抗病性的疾病超级基因座(DSL)可以有几个优点。
为了组合赋予对4种不同疾病的增加的抗性的来自7个不同抗性供体品系的7个基因，为将这些QTL组合成单个近交系所需要开发的群体数量很大，并且最终需要将含有抗性基因的所有基因座移动到相同背景的不同杂交数量众多，并且需要很长时间。此外，在作为常规育种计划的一部分而开发的新杂交中选择并保持7个独立的基因座在一起在商业上是不切实际的，并且限制了在任何给定的产品周期中引入的性状数量。因此需要将独立的QTL区域回交到需要改善抗性的同一基础近交系中。一种典型的情形是回交，然后自交以获得具有含有回交亲本背景中存在的抗性基因的基因座的近等基因系(NIL)。
标记可用于针对回交系和随后的自交系中抗性基因座的存在进行基因分型。一种典型的情形是开发第三代回交和两个自交(BC3S2)代品系。如果一年可以培养三代，开发纯合BC3 S2品系需要约2年的时间。
一旦开发了7个单独基因座中每一个的近等基因系，就需要开始进行额外的杂交，以将7个QTL区组合，这将需要额外的世代(5-6代，大约等于2年)和大的群体大小，以便能开发具有7个纯合抗性基因座的近等基因系(NIL)。为了确保在随后的育种中同时选择这7个基因座，群体需要非常大的群体大小，以确保获得含有7个纯合的基因座的子代，以维持对多种病原体的期望抗性水平。
理论上，在衍生自具有所有7个抗性基因座的纯合品系与不含有这7个基因座的品系的F2群体中，16384个子代中只有1个固定了所有7个基因座。此单个子代将仅针对7个抗性基因座的存在而不是针对任何其他期望的性状而被选择。在育种计划中，选择下一代改良种质时需要考虑许多性状。因此，可能需要例如30-100个含有7个抗性基因座的F2子代，以便还允许选择将在两个亲本的F2子代中分离的其他重要性状。这将转化为需要来自一个杂交的约50万至约160万个子代，以确保人们可以选择7个基因座处具有改良农艺学性状和抗病性的品系。作为商业育种计划的一部分，不可能开发这样的群体大小。
除了开发含有来自不同供体来源的抗性基因座的品系所需的延长时间，以及确保7个基因座在子代中存在所需的巨大群体大小之外，另一个挑战是最小化来自供体来源的连锁累赘。即使使用标记辅助选择，回交亲本基因组恢复率也将不到100％。即使在回交亲本背景中仅保留2％的供体源基因组，这也将转化为几百个来自抗性供体亲本的基因，这些基因存在于针对每个单个抗性基因座开发的每个近等基因系中。
当将来自7个不同近等基因系的抗性基因座放在一起，并且假设这些NIL中的每一个仍然含有其各自供体源基因组的2％时，含有7个抗性基因座的最终近等基因系在其背景中可能具有高达14％的非优良基因组。由于抗性供体来源通常是非适应性品系，具有良好的抗性，但农艺学特征较差，因此衍生自非适应性供体的14％将很可能会对性状(如，例如成熟度和产量)产生不利影响。
相反，使用DSL方法，将七个基因转移到针对良好的农艺学选择的当前优良种质系(或一组精选的优良种质系)中定义的基因组区中。除了7个抗病基因的基因组片段序列外，此品系中没有额外的供体基因组。此外，此大约5cM的DSL区在许多商业相关的优良品系中是相同的或基本上相同的，因此将此区渗入至其他优良品系中将改善对多种病原体的抗性。
使用DSL方法，将来自不同的抗性玉蜀黍供体的七个天然抗性基因插入至此优良品系中并开发纯合抗性品系的时间更短。一旦开发了基因组背景与基础近交系完全相同(除了5cM的DSL区内的7个插入基因之外)的这样一个初始抗性品系，它就可以用作抗性优良桥接供体品系，以用于随后将DSL渗入其他优良种质。
这样的渗入方法可以在2年时间内完成并且由于抗性桥供体系处于优良背景中，即使此抗性桥供体的基因组的2％仍存在于新渗入的品系中，也应该不会对农艺学性状有负面影响，因为桥供体品系是经过多年育种开发的具有良好农艺学特征的优良品系。
利用DSL区进行育种计划的机会
可以选择用赋予对多种重要病原体的抗性的DSL区进行渗入或正向育种，还允许育种计划利用基因组的其余部分来选择除抗病性之外的有利性状。换言之，一旦DSL区域固定，育种者可以自由选择、取消选择和/或选择与先前定位的抗病基因座相关或不相关的其他性状，而不会因期望等位基因的分离而导致抗性等位基因丢失。在当前的育种方法中，人们总是需要选择多种疾病的抗性基线。一些与抗病性相关的区可能与农艺学性状的负等位基因有关。如果可以通过DSL的渗入或正向育种获得对多种病原体的高水平抗性，则育种计划可以集中于利用DSL以外的所有基因组区选择最佳农艺学性状，而不必为了抗病性和与基因组其他部分的负面影响的假定联系而妥协。利用所有玉蜀黍基因组选择所需农艺学性状，而不限于所需水平的对多种疾病的抗性的同时选择(因为DSL提供了这样的抗性)的机会可能会导致性状(如产量、耐旱性以及其他农艺学性状)育种的进展更快。
具有多种抗病性并降低育种产量累赘的改良农艺学性状
有了在整个基因组中选择积极的农艺学性状，而不受需要整个基因组内的多个不同的基因座来赋予对多种疾病的基本抗性水平的限制的机会，就有可能取得额外的进展，以开发具有更好的总体农艺学的更好的产量品系。
当田间的病原体群体多年来发生变化时(这可能是由于可以克服一个或多个抗性基因的种族转变，或者是由于增加了以前不是问题的新病原体的问题)，可能需要替换含有这样的DSL的优良品系的DSL中的一个或多个抗性基因。
由于在杂交数量、所需群体大小、开发含有多个纯合形式QTL组合的近交系作为疾病对照选择的时间线等方面存在挑战，因此传统的杂交和选择将来自非适应性供体品系的新QTL区域引入到优良种质中可能具有商业成本。由于同样的挑战，目前来说，在未来的品系种质开发中将多个QTL区保持在一起在常规育种计划中是不可行的。
相比之下，通过靶向基因编辑技术在优良近交系中去除、替换或添加新的抗性基因至DSL中更快，并且减少了目的基因周围的连锁累赘，或者由于来自抗性、非适应性供体品系的背景遗传学。人们将能够开发出与最初的含DSL的近交系的相同或接近相同，但现在新的抗病基因取代了非功能抗病基因、疾病超级基因座中新添加抗病基因、或新的交换DSL或再经修饰的DSL的品系。
插入相同等位基因的多个拷贝以优化性状表达并消除两亲存在与传统的杂交和选择程序相反，人们还可以在一个近交系的DSL(即，在同一染色体臂/区域)中将同一基因的多个所需等位基因组合在一起，这有时是为了赋予期望的抗性水平。如果在近交系的DSL处每个染色体上存在所需等位基因的两个拷贝，则此近交系与另一个近交系(不具有这样的等位基因)杂交产生的杂种将产生具有等位基因的两个拷贝的杂交子代。这在传统的杂交发展中是不可能的，在传统的杂交发展中，需要在谱系的两侧引入目的基因，以开发具有所需等位基因的两个拷贝的杂种。
来自多个来源的遗传连锁抗性基因的堆叠
还可以将源自不同供体来源的抗性基因的等位基因插入至DSL中，但这些等位基因位于那些不同供体品系中的玉蜀黍基因组上完全相同的区域。使用传统的杂交将来自不同供体来源的这样的基因组合成一个优良的回交亲本对于商业产品开发周期将具有挑战性或不切实际，因为从独立供体品系获得基因组上相同位置的基因之间的正确重组仅在非常低的频率下发生。需要大量的杂交和子代才能有机会鉴定出具有所需重组的子代品系。
具有阻碍同源重组的结构变异的来自多种来源的抗性基因的堆叠
例如，玉蜀黍含有抗病基因簇，如10号染色体(c10)的短臂。由于缺乏与其他育种品系的序列同源性，这些簇可以表现出显著的结构变异，阻碍育种杂交期间的同源重组。
例如，如果希望将c10上的供体品系A的抗病基因与位于c10上相同基因组区的供体品系B的抗病基因结合，并将这两个抗病基因移入优良近交系C中，则可能会出现几个挑战。由于基因含量的差异和基因间序列的差异，三个品系之间的这样的区可能在遗传上有很大的差异，因此可能很难获得在这样的区中有任何重组的子代(在商业相关的育种周期中)，因为高度不同的区的重组较少。这将阻碍开发具有所需重组的子代的机会，从而允许将两个不同供体品系的两个抗病基因转移到一个优良的近交系中。此外，即使可以成功地产生这样的独特重组，由于缺乏重组频率，供体系中仍有很大一部分区域仍将存在于优良近交系中，从而导致抗病基因周围的供体品系基因组连锁累赘至优良的近交系中。在近交系的这样的抗性基因簇中，可能存在某些疾病的抗性等位基因的基因和具有其他疾病的易感性等位基因的其他基因。通过重组仅组合来自几个近交系的不同基因的抗性等位基因并同时避免导致具有理想的抗性等位基因的基因与不希望的易感等位基因连锁的近交系之间的重组通常是非常困难的。疾病超级基因座将允许来自多个玉蜀黍品系的抗性等位基因的这样的堆叠，而不会受到通过重组引入不良易感等位基因的机会的阻碍，因为疾病超级基因座不依赖于重组和所需重组的产生，但只允许对赋予抗病性的等位基因进行精确和靶向性堆叠。
在另一个目的性状或区域附近的DSL基因座的插入
开发疾病超级基因座的另一个优势是，可以将此DSL紧邻已开发抗昆虫基因座(IRL)的遗传区。在一个实施例中，IRL可以是昆虫超级基因座(ISL)。这将允许同时渗入多种抗昆虫性状和抗病性状。性状渗入方法将具有成本效益，因为这些多个性状将作为一个基因座渗入，这将更快，因为不需要在重复亲本中渗入不同的基因座，然后进行几代的最终杂交和自交，以开发抗昆虫基因座(IRL)和疾病超级基因座的纯合系；最后，它将限制供体品系遗传学在转化的回交亲本的基因组背景中的存在，因为两个不同的超级基因座中仅有一个超级基因座将从供体亲本中渗入，这将导致连锁累赘较低和最终基因渗入系中来自供体亲本的背景基因组百分比较低。
如果未来需要将昆虫超级基因座与疾病超级基因座分离，则可以通过鉴定两个超级基因座(SL)之间的重组体来实现。当前品系是用距IRL约0.6cM遗传距离的DSL创造的，并且由于这些SL是在优良种质中开发的，因此含有两个SL的品系与我们的大部分近交系之间的0.6cM区的序列相似性完全相同。因此，重组频率预计是正常的，并且应该能够以165个子代中有1个的频率识别F2群体中的重组子代系。
因此，如果需要将IRL与DSL中的抗病性状包分开，则可以这样做。有机会将这样的组合性状包作为一个基因座渗入，能够根据需要分离不同的性状包，并且能够通过基因编辑将新的抗病基因替换或添加到DSL区域，这允许开发最适合特定环境的杂种。
开发一种独特的单一SL(含有允许控制多种疾病或不同昆虫或两者的组合的性状包)也将简化单一杂种中将这样的SL与其他性状(例如，除草剂耐受性)组合在一起的方法。例如，可以将DSL加ISL渗入谱系的雌性一例，并将其与谱系的雄性一例的除草剂耐受性状组合。通过限制通过SL的开发渗入的基因座的数量，如果需要的话，也可以更容易地将此SL的另一个性状组合在一个品系中。与在一个单个近交系中以纯合状态将7个或更多个独立基因座组合在一起相比，开发组合两个目的独立基因座的品系所需的子代和杂交的数量要少几个数量级。
实例3
定义适合在大豆中基因工程化抗病性状的基因座
在设计和选择适用于疾病超级基因座开发的大豆基因组区时，考虑了几个因素：产品组装的便利性、分子特征以及监管和管理问题。
一个疾病超级基因座(DSL)位于在一系列种质中没有表现出主要的结构变异的区域。
用于无缝插入性状的靶位，点的识别
使用生物信息学工具扫描DSL区的靶位点，以搜索前间隔序列邻近基序(PAM)并检索上游20个碱基序列。然后应用过滤器来选择合适的靶位点及其相应的指导RNA。
如果与任何天然基因注释的距离小于2.5kb，则认为靶位点不合适。靶近交系中的基因注释是基于结合了计算机预测和体内证据的生物信息途径。对于下游分析原因，位于大于200bp的重复区2kb内的靶位点也被认为是不合适的。
靶向合适位点的候选指导RNA最终通过在计算机中检查其潜在的脱靶活性。对于每个候选指导RNA，基于当前文献生成了潜在脱靶位点列表，如果潜在脱靶点与引导存在3个或更多个错配(包括PAM近端种子序列中的至少一个错配)，则将其排除。
指导和模板的载体构建
将合适的Cas基因通过标准分子生物学技术与大豆泛素启动子可操作地连接。
大豆启动子用于表达将Cas核酸酶引导至指定基因组位点的指导RNA。为了使Cas内切核酸酶和指导RNA形成蛋白质/RNA复合物以介导位点特异性DNA双链切割，Cas内切核酸酶和指导RNA必须同时存在。为了改善它们的共表达和存在，将Cas内切核酸酶和指导RNA表达盒连接至单个DNA构建体中。合成含有指导RNA编码序列的序列、来自选择的大豆基因组靶位点的可变靶向结构域和部分启动子。然后将序列克隆至已经具有cas盒和其余gRNA表达盒的骨架上。
设计同源定向修复(HDR)模板以使抗病基因插入所需靶位点。为了优化递送，合成模板序列并克隆至含有Cas内切核酸酶和指导RNA的载体骨架。在此设置中，通过在HDR模板的每一例插入与载体上编码的指导RNA相应的靶位点序列，实现从载体中释放模板。模板序列包括一个或多个目的抗病基因的全基因组区，侧翼是对应于与切割位点直接相邻的100-1000bp区域的同源臂。
通过农杆菌介导的转化将包含大豆密码子优化的Cas内切核酸酶表达盒、指导RNA表达盒和HDR模板的质粒递送至大豆胚中。通过Cas内切核酸酶在指定位点处进行DNA切割后，将通过同源定向修复整合模板，从而在赋予对一种或多种疾病的抗性的基因组区的切割位点处进行无缝插入。
实例4
赋予对疾病的抗性的大豆基因组片段的插入
一个模板可以含有单个抗性来源或分子堆叠的多个来源，以在DSL处产生基因组插入。然后可以单独使用或者之后通过育种组合使用DSL内不同靶位点处的单个和堆叠插入。
例如，大豆抗病性状可以包括如美国专利号7,872,171中所述的大豆胞囊线虫抗性、如美国专利号7,767,882中所述的对茄病镰刀菌(Fusarium solani)(一种大豆猝死综合征病原体，目前称为北美大豆猝死综合征病菌(Fusarium virgulform))的耐受性、如美国专利公开号US 20140178867 A1中所述的大豆中的疫霉(Phytophthora)的耐受性、如美国专利公开号US 20160130671 A1和美国专利号9,464,330中所述的大豆胞囊线虫抗性、如美国专利公开号US 20130047301 A1中所述的大豆根结线虫耐受性、如美国专利公开号US20160032409 A1中所述的蛙眼叶斑病抗性和褐茎腐病抗性、美国专利号9,894,857和美国专利公开号US 20180084745 A1中所述的大豆中的炭腐病抗旱复合抗性、如美国专利号9347105中所述的大豆对胞囊线虫的抗性、如美国专利号US 20180291471 A1和美国专利公开号US 20180334728 A1中所述的大豆的褐茎腐病抗性、如美国专利号9049822中所述的大豆胞囊线虫抗性、如美国专利公开号2014-0283197中所述的疫霉抗性、如美国专利号10995377中所讨论的大豆中的疫霉根腐病和茎腐病。
实例5
染色体工程化
重排(例如，倒位、易位)染色体区或片段，包括与作物植物(如玉米、大豆、棉花、卡诺拉油菜、小麦、水稻、高粱或向日葵)中的一种或多种疾病相关的DSL，以使得这些染色体区处于优选的染色体配置，与对照和其他育种增强相比，这样能够实现更快的性状渗入、减少连锁累赘、最佳的连锁不平衡。在实施例中，优选的染色体配置是DSL染色体片段易位到预先存在的含有一个或多个昆虫和/或除草剂耐受性状(任选地，转基因性状)的转基因基因座上。在另一实施例中，将第一DSL与第二DSL易位，其中第二DSL含有与第一DSL不同的至少一个基因。在另外的实施例中，将DSL易位至端粒区，在该区中，通过依赖单个杂交而不是两个杂交来使性状渗入至其他优良种质的效率更高。
实例6
在具有多个抗病基因的植物上优化杀真菌剂的使用
使用具有DSL的作物植物可以减少杀真菌剂的使用或延迟杀真菌剂的应用，因为这些植物对多种病原体表现出多种抗性模式。因此，优化这样的植物上的杀真菌剂使用有助于系统农业和农业运营。由于有害生物压力的增加，杀真菌剂的使用在过去几年变得普遍。在美国，三分之二的种植者在其玉米或大豆作物的生长季节期间至少应用一种杀真菌剂。其他地区需要额外的应用来充分保护产量，如巴西和阿根廷。这些做法增加了农民的成本和不便，同时也增加了杀有害生物剂的使用。此外，应用的时间与治疗结果高度相关，是本季节遇到的关键挑战之一。包含疾病超级基因座的多疾病抗性杂种可以减轻对杀真菌剂使用的需求，并允许在时间应用上具有灵活性。此外，当仍建议使用杀真菌剂处理时，这样的杂种预计需要较低的应用率，从而提高杀真菌剂的耐久性，减少对环境的影响，并提高可持续性。
实例7
非编码序列的插入
疾病超级基因座(DSL)可能包含来自不编码多肽的基因或序列的抗性来源。相反，这些基因或序列可以转录成非编码转录物或非编码RNA，这些非编码转录物或非编码RNA可以调节基因表达并作为针对植物病原体的抗性来源。
DSL可以含有不编码多肽的一个或多个多核苷酸序列、转座子、可转录成各种大小的非编码转录物(例如长非编码RNA(lncRNA))的重复序列。可以将一种非编码转录物加工成小RNA，如微小RNA(miRNA)、短干扰(siRNA)、反式作用siRNA(tasiRNA)和相位siRNA(phasiRNA)。DSL中的非编码基因和序列可以与植物病原体或有害生物(如病毒、细菌、卵菌、真菌、昆虫和寄生植物)中的特定序列共享核苷酸序列同源性。非编码转录物或加工产物(如小RNA)可以调节或干扰植物病原体或有害生物中特定基因或序列的表达，从而降低病原体致病性并提供改善的宿主植物抗性。
在一个方面，包含DSL的植物中的易感等位基因可以被直接敲除一例如，当这样的位置已经是DSL的一部分时，通过插入抗性等位基因并替换易感等位基因。在其他实施例中，可通过RNA干扰、同源重组、包括CRISPR和TALENS的基因组修饰或通过将DSL插入易感等位基因位点来敲除或敲低易感等位基因座。
实例8
DSL植物为种植者提供了作物管理实践的灵活性
保护性耕作做法(如免耕或条耕)由于其对环境的积极影响，在农业系统中通常是期望的。这些做法有助于限制土壤侵蚀并改善土壤质量。此外，它们还通过减少燃料和劳动力需求提供了另一个优势。然而，由于前一个生长季节的作物残留而导致的疾病压力增加通常令人望而却步，特别是在容易爆发疾病的环境中。在这些情况下，包含DSL的多疾病抗性杂种将能够在更大范围的环境中更广泛地采用这些实践。
包含DSL并且因此对多种疾病具有更强的抵抗力的杂种植物使得在某些耕作实践中具有更大的灵活性，而使用标准杂种可能是不可能的或被认为风险太大。影响植物地上部分(如叶和/或茎)的许多疾病的严重程度部分取决于土壤表面存在的接种量。前一个生长季节的残留物是这种接种物的可能来源之一，因为许多病原体可以在前一作物残留在田间的碎片和其他植物部分上存活。管理实践(如作物轮作和耕作)直接影响到一个生长季节后留在田间的残留物的类型和量，因此有可能在下一个生长季开始时减轻或加剧疾病压力。
例如，导致北方叶枯病的大斑病长蠕孢主要在玉米残渣上越冬。除了特定的天气条件外，疾病的爆发还与玉米对玉米和保护性耕作实践有关。在这些实践下，易感杂种特别容易发生病变。例如，包含DSL且对包括NLB在内的多种疾病以及NLB疾病的多个种族具有抗性的杂种预计不仅会留下病原体负荷减少的残留物，而且还会显示出对此接种物的抗性，尤其是在早期季节。
杂草管理主要是保护作物免受资源(如养分、水和光)竞争。因为杂草也可以作为植物疾病和植物疾病的昆虫媒介的储存库，因此杂草管理也可以影响植物健康并保护作物免受疾病。例如，禾本科杂草(如茅草)可以携带禾生炭疽病菌，导致玉米炭疽病的真菌病原体。预计使用包含DSL并对多种疾病(包括炭疽病)具有抗性的杂种可以缓解需要，特别是在担心疾病压力时控制杂草的严格时间。这可以使农场在管理和做出杂草处理决策时更加灵活。
实例9
作物植物中增加的抗病性耐久性-包括遗传性状和作物保护剂两者
研究中的田间监测数据的分析表明，植物内的抗病基因的聚合是提供对植物病原体的持久抗性的最有力方法。这样的聚合或堆叠策略允许抗性基因的有效期更长。
疾病超级基因座(DSL)允许这样的堆叠赋予病原体抗性的几个基因，并且还允许在田间病原体群落随时间变化的情况下调整DSL基因座(交换、添加基因/等位基因)。
疾病管理(如部署DSL)使病原体群体大小保持较小，这将有助于控制这样的较小群体中的突变或重组的总数，并限制有利于病原体克服宿主抗性的突变或组合的发生。换言之，通过限制有害生物的群体大小，DSL在作物生长环境中受到有害生物压力的田间条件下生长的作物植物中的存在降低了这样的有害生物群体中可能出现抗性避免突变的机会。
将抗病基因与其他病原体控制实践(杀有害生物剂、农业实践)组合是一种减缓强毒病原体基因型的演变的相关的管理策略，并且各种有害生物控制手段可以协同提高彼此的耐久性。
因此，部署DSL与合适的杀有害生物剂管理策略的组合不仅可以延长DSL中抗性基因的耐久性，而且还可以通过限制杀有害生物剂靶向的病原体基因的突变来延长来控制病原体的杀有害生物剂的耐久性。
实例10
与通过育种的传统性状聚合相比，DSL方法的提高的模块化
疾病超级基因座方法提供了一种更简单的方法来调节在特定环境或特定种质中提供足够抗病性所需的一组基因。例如，可能影响玉米作物的一系列疾病在很大程度上取决于地理位置：在美国，东南部发生玉米南部锈病的风险高于其他地区，而美国玉米带和大西洋各州发生灰叶斑病的风险更高。此外，某些地区的种族进化可能会导致新种族在特定地区流行，而其他地区则不受影响。还已知，由于近交亲本种质中存在的天然性状的潜在组合，特定杂交组合或多或少易受特定疾病或种族的影响。在这些情况下，可能需要调节通过DSL传递的抗病性状包，并使其适应特定的地理位置和种质易感性。超级基因座方法非常适合这种对灵活性的需求，而传统的育种方法只有通过大量的时间和专门的努力才能实现。例如，玉米杂种可能表现出农艺学特征，使其非常适合具有不同疾病压力程度的多个地区。使用DSL方法，可以很容易地将所需的一组抗病基因插入一个近交亲本中，以提供对最可能发生在一个地区的疾病的足够抗性，并将一组稍有不同的抗病基因插入同一近交亲本，以提供对最可能在另一个地区发生的疾病的充分抗性。因此，可以使用这种方法产生表现相似的农艺学特征但适应不同地理位置的抗病特性的杂种。可以使用超级基因座方法，通过在DSL靶位点插入两组不同的基因来实现此结果。这也可以通过创建由针对疾病1的抗病基因“组1”组成的第一DSL插入，然后与由针对疾病2的抗病基因“组2”组成的另一近交系杂交，同时还将“组1”与由针对疾病3的第三组基因“组3”组成的近交系杂交，产生两个各自具有不同抗性基因组(组1和2，或组1和3)的近交系来实现。同样的结果可以通过创建由组1组成的第一近交系，并重新改变此近交系以创建组2或3的插入来实现。这也可以通过创建由组1和2组成的第一近交系，并将组2与组3交换来实现。例如，如果以这些可能的方式中的一种创建的近交系中的一个基因或一组基因由于疾病压力的变化而过时，则可以直接缺失不需要的基因或基因组，或将其替换为更相关的基因或基因组。相比之下，由于所需的成本和时间，以及每一个新基因渗入都可能产生连锁累赘，因此使用传统育种方法实现同样的结果是不切实际的。这样的模块化也可以通过位于给定DSL中的多个抗病基因之间的内置的、独特的重组连接(“URL”)序列来实现。例如，这样的DSL可以包括包含“抗性基因A-URL1抗性基因B-URL2抗性基因C等”的签名。可以将这样的URL设计成通过特定的重组增强剂如CRISPR-Cas内切核酸酶或任何其他位点定向剂(包括例如基于FLP/FRT重组酶的系统)靶向。
实例11
DSL植物的种植密度
病原体通常对天气条件非常敏感。此外，一些病原体对植物冠层中的微环境特别敏感。导致灰叶斑病的灰斑病菌(Cercospora maydis)就是这种情况。叶面及其周围的湿度有利于此疾病的发展。例如，预计植物密度和行距对这种微环境有直接影响。较高的密度创造了湿度增加和通风减少的条件，两者都适合病原体的发展。例如，使用含有DSL并抗GLS的杂种可以缓解此问题，进而实现更高的种植密度(例如，每英亩40,000-80,000株或更多的玉蜀黍植物)，否则由于疾病爆发的风险更高，可能不会考虑这种种植密度。
实例12
DSL植物的成熟度和种植日期
人们认识到，晚熟的杂种和延迟种植在季节后期发生疾病的风险较高，并导致严重的产量损失。包含DSL并对多种疾病(包括在生长季节后期发展的那些疾病)具有抗性的杂种预计在谷物灌浆期间疾病压力较高时表现更好。种质中存在疾病超级基因座所带来的多疾病抗性可能为晚熟杂种类提供更大的种植日期灵活性和增强的产量保护。
实例13
组合易感性天然基因座敲低与DSL
除了在疾病超级基因座插入抗病等位基因外，本领域已知敲除或下调易感基因的表达可以增强病原体抗性的持久性和范围。因此，可能需要将DSL方法与已知疾病易感基因的敲除组合。例如，众所周知，在病原体感染期间，参与营养运输和可用性的基因有时会被激活，并以植物为代价用于维持病原体感染。在一个实施例中，可以设想能够组合两种抗性模式的几种方法。一种方法是创建由一个或几个易感基因敲除组成的近交系，该易感基因敲除通过基因编辑、经典诱变或自然变异育种获得，并通过育种杂交将此材料与由DSL组成的近交系组合。另一种方法是通过在由一个或几个易感基因(通过直接转化敲除)组成的近交系中的DSL处插入抗病基因来创造相同的近交系。第三种方法是通过在DSL处插入抗病基因和反式作用的非编码转录物两者来降低或敲除基因组中易感基因的表达来产生类似的结果。
实例14
针对作物所需的表型，使用天然增强子来改变DSL中抗病基因的表达
基因或QTL可以是隐性或半显性的，并且需要两个拷贝的基因或QTL以获得所需的性状。可以将基因或QTL的两个或更多个拷贝引入至DSL中。在杂交作物中，这要求基因或QTL渗入雄性和雌性亲本两者中。此渗入区域可以带来导致连锁累赘的额外的基因组区。如果因果基因是已知的，那么携带所需性状所需基因的质粒载体可以用作模板，以使用CRISPR或转基因方法向亲本添加额外的拷贝。当使用转基因方法时，可以使用不同的调节元件组合，如启动子、内含子和终止子，来适当表达所需表型的因果基因。然而，如果需要QTL的两个拷贝，则质粒模板是不可能的。QTL区的表达可以通过使用CRISPR-Cas的天然增强子或超级增强子来改变。改变QTL内因果基因或基因组表达的一种可能性是使用CRISPR将天然增强子移动到QTL或基因组的另一部分附近，这改变了QTL内基因的表达水平或表达模式，从而导致期望的表型。另一种方法是将QTL移动到新的染色体区域，在此区域中，天然增强子或超级增强子改变了QTL内因果基因的表达时间、空间或水平。如果多个QTL需要类似的表达变化，那么这些QTL可以共同位于一个超级基因座中，其中天然增强子影响多个基因和QTL。
实例15
含有影响植物高度的遗传修饰的株型矮小玉蜀黍植物
在一些实施例中，包含DSL的玉蜀黍植物是株型矮小的。参见US 20200199609 A1(通过引用以其全文并入本文)，能产生株型矮小的植物的方法和组合物以及涉及株型矮小植物的农业管理解决方案。DSL玉蜀黍植物包含靶向参与植物高度降低的多于一个不同基因组基因座的一个或多个遗传修饰。在实施例中，与对照植物相比，减小植物高度约5％至约30％。在实施例中，植物包括在V6-V8生长阶段减小的平均叶长宽比。在实施例中，植物高度减小基本上不会影响开花时间。在实施例中，与不包括修饰的对照植物相比，开花时间变化不超过约5-10CRM或正负10％GDU或125-250GDU。
在实施例中，如本文所示的DSL玉蜀黍植物包含Br2基因组基因座，该Br2基因组基因座包含编码Br2多肽的多核苷酸中的编辑，该Br2多肽包含与US 20200199609 A1的SEQID NO：43具有至少95％同一性的氨基酸序列，使得该编辑导致(a)编码Br2多肽的多核苷酸表达减少；(b)Br2多肽的活性降低；(c)编码Br2多肽的多核苷酸的一个或多个另外的剪接转录物的生成；(d)Br2多肽的一个或多个结构域的缺失；(e)编码Br2多肽的多核苷酸的一个或多个外显子中的移码突变；(f)编码Br2多肽的多核苷酸的很大一部分的缺失或编码Br2多肽的多核酸的缺失；(g)存在于编码Br2多肽的调节区内的增强子基序的抑制；(h)一个或多个核苷酸的修饰或与编码Br2多肽的多核苷酸的表达可操作连接的调节元件的缺失，其中调节元件存在于启动子、内含子、3’UTR、终止子或其组合内。
在实施例中，如本文所示的DSL玉蜀黍植物包含D8基因组基因座，该D8基因组基因座包含赤霉酸生物合成或信号传导途径，该途径由选自由以下组成的组的D8遗传基因座处的一个或多个引入的核苷酸变化来调节：(a)编码D8多肽(如US 20200199609 A1的SEQ IDNO：76所示的，通过引用以其全文并入本文)的多核苷酸的表达减少；(b)D8多肽的活性降低；(c)编码D8多肽的多核苷酸的一个或多个另外的剪接转录物的生成；(d)D8多肽的一个或多个结构域的缺失；(e)编码D8多肽的多核苷酸的一个或多个外显子中的移码突变；(f)编码D8多肽的多核苷酸的很大一部分的缺失或编码Br2多肽的多核酸的缺失；(g)存在于编码D8多肽的调节区内的增强子基序的抑制；(h)一个或多个核苷酸的修饰或与编码D8多肽的多核苷酸的表达可操作连接的调节元件的缺失，其中调节元件存在于启动子、内含子、3’UTR、终止子或其组合内。
在某些实施例中，以较高的种植密度种植本公开的玉蜀黍DSL植物。这包括提供玉米植物，其中与对照植物相比，调节与植物高度相关的多核苷酸的表达和/或活性导致显著的高度降低或高度改变(即，通过引入导致玉米植物高度降低的遗传修饰来降低植物高度)；并以每英亩约30，000至约75，000株植物的种植密度种植玉米植物。
在某些实施例中，种植密度为至少50，000株植物；55，000株植物；58，000株植物；60，000株植物；62，000株植物；64，000株植物。在某些方面，玉米植物包含编码D8多肽的基因组区中的突变或降低的编码D8多肽的多核苷酸的表达。在某些方面，玉米植物种植在多行中，行宽为约8英寸至约30英寸。
序列表
<110> 先锋良种国际有限公司（Pioneer Hi-Bred International, Inc.）
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<120> 多种抗病基因及其基因组堆叠件
<130> 7823-WO-PCT
<160> 44
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 13643
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 1
tctaacgccg acaccgtcga cgagtaagag gtcgtggccg gctgcccaca cgtctgtgtg 60
aacctcacca tcgacaccac cgtccgcctg cggcctacgg cctcgaactc caacatcaca 120
ttcctctaca actgcatgaa gaacattacc ctaccctctg tcatggaact gagtgggttc 180
ccacaacaac aagaagatag atgtaggtcg tacgtgctgt gggatggcgg gatcacgggt 240
gctcaggcgt acgggtatgg gtgcgaggac ttggtggtag cgtcggagct ggatgtacac 300
aaaaagggag aaggcgatcc acctccggaa cggatcgctc catcgggttg ccgcatgacg 360
ggatcgagct gaactacgac actcactcta agcagtggga cctagggatg aaaacggtcg 420
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cataatacaa caaagttgac aaaagatcac aaagaccaca agttcacaat tcatgatata 660
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tatcccggtg tcggccttgt ggcccttgtc tgcgagggca actcgacgct gatcctcccc 2100
ttcaagtccc acagatacgt agtgctcagc atcgactaca agacgcgtac cgtgctggtc 2160
tccgacgccg acatcgtcca cgagtacgac gcggccggct gcccgcgcgt ccgcgtgaac 2220
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tacaactgca agaagaacat caccctgccc tccgccgtgg aactgagcgg gtgccagcag 2340
cagcagcaac aagacggcag caggtcgtat tcgtacgtgc tgccggacgg cggggtcacg 2400
ggcgctgagg cgcaccagta cgggtgcgag gacttggtgg tggcgccggt gctggacgtc 2460
cacaggaggg cgatcttgag ggcgcctggc ggcccgactc tggagaacgg gtcgctccgt 2520
cggttgctgc agggcgggtt cgagctgaac tacgacactc actccgagca gtgcgaccga 2580
tgcgaggcct ccggcgggtg gtgtggctac cagcgcgacg agacgcccgc cggctggatg 2640
acgttcgcct gcttctgcga cggcgggccg acgaccacgg cccgatgcgg tgccggtatg 2700
tctttttttt ttcttcgaac aaggtgtggc atgtgttcta ccgtttcaac tagtaaatga 2760
ttacattgag ctaggcagct agccacacat tttcttgaat gattttcttt gatgaacctg 2820
ctgtttgctt ttatgacgtg aacaacgggg cctgcaagct gccacatacc tagggagact 2880
agttcgtgac cttctttaca cgtcttctct actcgccact gggagttgac gccgctcggt 2940
cgtcccactt tgtgacgttc aaccagagtc tagagatgta attctctgcg aatacaggac 3000
tagttggagc taacaacgca gcttgacgag ggtgaaccca gctccacctc gtctaccacg 3060
tcttctcctc gccatggctg ctcacctacc acgcctcccc gtcctcctcc tcgtcctcct 3120
cgctgctcat gtcgtctcca cctccgccca tgccgagcct cctcttccga gcccttacag 3180
cacctccgcc catggcgagc ctcctcttcc gagcacttac aacgtctcca tgtgctcgga 3240
atcgttctgg tgcggcggcg tcgaaatccg ctacccgttc tatcttgcca acgcaaccgc 3300
cgactacagc gggagctact actcctgcgg ctacaccgac ttgagcgttt cctgcaaact 3360
cgaggtcgag gggccgacga cgacatggac ccctaccatc cgtctcggcg gcgacaacta 3420
caccgtcaag aacatcttgt acgactatca taccatctca ctggcggaca gcgatgtgct 3480
cggaggcggc gagtgccccg tcgtccacca caacgtcagc ttcgacgaga cgtggctgca 3540
caaccccagc gccttcgaca acctcacctt cttcttcgga tgccactggg ggccacgcga 3600
tacactgcct gaatttgccg gcaacaacat cagctgcgcc gggttcagta ctccagctat 3660
cagcggtgga ggctccttcg tgttcaagcc tgaagatctt gacgaacatg cggagcagga 3720
gttggcttca cactgcgacg aggttttctc cgtgccagtg agaagcgagg ctctgcagca 3780
ggcgatcgtc agcaacctca gcctcgggga cgggtacggc gagctgctta ggcaggggat 3840
cgagttggaa tggaaacgga catcggagga tcagtgtggc cagtgcgagg aatcgggctc 3900
cggcggacgg tgcgcctaca gccagaagag agaattcctt ggctgcttgt gcagcggagg 3960
gaaggcgggc aacccgttct gcaaaccatc aagtaaagtc ctgaaccgag cctcccttat 4020
ttttttttca ttttttgcaa tccaccagag agcacgcatc ggttgcgtca gtatcttgca 4080
acctcgtagc tagccccgca gtgtcccctg tgtgcgagta ccgcgctgct ccagcttgcc 4140
tcctgctaac gcctaacggt gaatgcttca tgcttgacat gatctagcta gtctacactt 4200
tgcttggggt ttgcctggga gctggaaatt ctggctcctg tttgcatcac tcgacaagga 4260
cgctttcaga cttgcgactc tcgttctgct tttgcaccaa atccgtgttt ttttcatttc 4320
gtgatcgaga ttaatctagc ttagagatga caatgggtat ccgaaactcg aaacttgatg 4380
gatttttact ccattagggt ataggtttga atcaattttc atatttatgg atttgttaat 4440
aggcataaat atatatccaa caggtttata gatacgagtt tgtttctaca gtactcaaat 4500
ccgtgaacac atgaggtttt taaacccgac caaacctagt gcatattgtc attttatttt 4560
ataaacgaac aacaaaattg ttatctctat ttacttccta ttttttatcg attggtgaat 4620
gtataagtag ttggtgagaa tgtttcttgc ttgctattat agttttacta gcgttatata 4680
tgttgtgggt ggataactta gtgcaatgtc acttgattat acaacttatt atttgtattc 4740
attctctcta ctaataattt ttataccaaa tcatgaactc ggtgtttatt atataaattt 4800
tggaccataa tctcattaat catcacgata gttattgatt atgagaaaaa acaagcatat 4860
tggagataaa accctcggct aacccgttaa cccgatgggt acgggtttga acaaaatttc 4920
aaacctatta tgaatataag ttttttaaca agtatagata tatttcacgg atagagttta 4980
agatgacaaa atccaacgga tttgtatcca ttgccatctc tatccggcgg cccttacccg 5040
gcggccctta ccgtgctcca cgagcagagg tcgtatcgtc cctcttcccg tgtcgcctgc 5100
ttcgcgttgc cgaacggaga cgtttggtag cgttggccgg ctctagcagt cgggtcaact 5160
ctttttgttg ttgttttcga tgttgttgga tttttgttcc gtataagcca tgttttagta 5220
atttatttag tccagccgaa tccgaagacg tgtttgctgg gttggagact ttggagttgc 5280
tagtcatgat atgctttcta ctcggtttga tttcaaccca gttaggctat atttaatact 5340
ctagtattta tttcaatata aatggtttga aacggattaa ggtataaatt agtttaattt 5400
atatatttaa ttcctctcaa tccatatgta ttgggctgaa tactgaggta gtgtttggtt 5460
gaagagccat atagaacgga gccgttctgt tccagttttg ttgttgtttg gttataaagt 5520
aactagaacg gaatgacttc aattaaggaa tattcttctc agatccagaa ccattccgct 5580
ctaaaaaatc aaccggacgg agccgctccg tttccatcct gctcttacag tcacgctccg 5640
ttccgttcac tctgcaacca aacaaaaaac agagccgctc cgttccaaat taccaaacac 5700
agaacagagc ggcttcattc ctagaattag gaatggaacg actctgttct acttgactcc 5760
tcaaccaaac actacctaag tatccaaaca agcccttatt taagatgcat ttcctttaca 5820
gttacacatg accactattg tgtgggggca ggctgaacaa gcccttattt aagatgcatt 5880
tcctttagag ttacacgtgg ccactattgt gggggggggg gggggggggc aggccgatcc 5940
tactcgtcag tgctcattcg agagcaaaga taccgaagga gattagagag actaaaaact 6000
ttttactatt taaaattaga taataagacg atttaatccc gttccatatc tttgctctaa 6060
acaaaccctc aatgatcata tatctcggaa gatccggccg gctgttcttt atttatcaag 6120
tgatgactgc tgaccgctta tagaatatat attttaaagc aaaatttctt ctacagcagt 6180
aaaaggacta gacgaaacaa tgatgcattt ctctaacaaa agaaagtaga attatcaagc 6240
ggagagccaa gaccaaaagc cttacttcta tgggcgtcaa caaatgatac cgcgacggaa 6300
ccatcccagc aggtctatac tgtctgtcac gacccagcga gtaatcgtgt ggctacgcta 6360
ttagacttag gattggatga aatgctcggt ttattaatga gccagctcgt gagttaagag 6420
tgtttggttt gatgaatgaa gtaattcatc ttcttttcac tccccacttt tttatttggt 6480
ttgtgtaata gaatgagttg atccatcacc accacattca tcataagcta ataattagta 6540
tatacatgag tagtgagttg attccaccaa aattgatgaa atgaacttat gatgcatcat 6600
ctcatgaagc atagagtgac tccacaaacc aaacacacca taaatgatct attacataac 6660
gaaattatat gcatatcatt tatcagggcg acgacagggg gcatagggag gcaatatccc 6720
cctaatgctc cccaaattct atagggattg ttagtttctt ttagctaatt ctcatgtaaa 6780
caatataaaa aatgcttcta acagtccctc ctaattataa tttggtccac cctaatctta 6840
gatcctggct tcgtccgtgc catttacgta acaattggta aatatgttat acatgtgtgg 6900
tatctatggc ctatgaattg aactaatgat tgatgaattg tgcttatgtg ttaaattggt 6960
ctatgcgaat ataactatgg gttaaacgga tgaacatgtg tgttcattgt taattcatga 7020
gtgatgaatt atgtataatt tggtgttata ttgatgtgtt ttgtgaaact atgtgtataa 7080
ttattatttt ctataattaa atttgtttga aattaactag aaattgatta ttatatatat 7140
atatatatat atattgtttt tctgctctag tctgcaagct aaacgagcaa gctcaagctc 7200
gtaaacgatc cgaaccgagc tgactttgtg gctcattaac ttaacaagcc gagttgggcc 7260
aacttgttag cttaacgagt cagctcgaat acggacaagt tgagccgagt tggcatgata 7320
tccagcccta attaggcttg taccagtgca acatatccct ctcgcctttg tcacgtccag 7380
acatgtcaat gggccccgat tcccgcaagg aatttctcta ttaagggatg aggatgggaa 7440
agtttctccc cccacagaaa aattctctcc cgacggataa gcggggacaa cactccccat 7500
ccccattccc cgtggggacc tattagactt acatatggtg atgttttcat gtaaaagtta 7560
atgataaaaa taaacaatta ccttgttgtc ggcgtttcga ccccggaggg tccctggacc 7620
gacgagtaaa ttgtcgctgc gtgtcccagc ccagatgggt cgacgcgaga cggaacacaa 7680
gggggaaaca ataaggggaa tcgcggcctc gtgttgtcct gcgcccaggg cggatgcgct 7740
tgcagtaagg ggttacaagc gttcgcgagg gagagagaga gagagcctgt gcgccagccc 7800
gtcctcccgc gcggccacct tctcgtacga gggccctgga cctttctttt atagatgtaa 7860
ggagagggtc caggtgtaca acagggagcg tagcaatgtg ctaacgtgtc tagcagaggg 7920
aagccagaat cctatgtaca ggccgacgtg actgtcgaag aggttttggc gccctgttca 7980
tgtgatgtcg tggccgtcgg aggagcgctt gagccctgta ggagcacagc tgtcggagct 8040
gtcgggtcct tgctgacgtc tcattgcttc catagggagc tgagaaccgc cgtcgtcatg 8100
gagcacgcgg ggtgccatca ttacttgttt taccgggacg agccagatgg gacgctggtc 8160
ttgttcccag tagcctgagg tagctagagg tagggtaatg atgtgccctc ctgcgacgtg 8220
gtcggtccga gcccaaggtc gggcgaggcg gaggctcctc cgaggtcgag gctgagtccg 8280
agacctgggg tcgggcgagg cggagaccgt cgtccgaggt cgaggttgag tccgagccct 8340
ggggtcgggc gaggcagagt ccatcgtccg aggtcgaggt tgagtccgag ccctggggtc 8400
gggcgaggcg gagacagtcg tccgaggtca aggttgagtc cgagccctgg ggtcgggcga 8460
ggcggagttc gtcttccgag gtcgaggtgg agtctgagcc ctagggtcag gcgaggcgga 8520
gaccgtcgtc cgaggtcgag gttgagtccg agctctgggg tcgggcgagg tggagcttcc 8580
tatggcgcct gaggccggac ttggcggctg tcagcctcaa cctgacgggt ggcacagcag 8640
tcgaagcagc gcaggcggcg ctgtttttct atcaggtcag ccagtggagg ggcgaagtga 8700
ctgcggtcac ttcggctctg tcgactgaag agcgtgcgtc aggataaggt gtcaggcgat 8760
ccttgcattg aatgctcctg cgatccggtc ggctggcgag gcgatcttgg ctaaggttgc 8820
ttctccgcga agcctgcctg agctgggcct cgggcgagtc ggaggtgcgc ccgttgcttg 8880
aggaggccct cgggcgaggc gtgaacctgc ctgggcctgc tgtttctgcc cgaggctggg 8940
ctcgggtgag gcgagatcgt gtcccttgag cggacagagc tttgtcctgt gttgcgccca 9000
tcaggccttt gcagctttgt gctgatggtg tttaccagcc gagtttaaga gtcttggggg 9060
tacccctaat tatggtcccc gacacttgtc aagagatcac tttttgtaca aatatattca 9120
ttctgatgta cacatatttt tttcttacat ctaacaatgt gtataagtga gaatgtttta 9180
tattaataac aaatgaagta tgtcctaatt agacttctca cattgagcag caacaaaaca 9240
ttttatgaat tagtaaccat tttacttact aaaataatta ctattgtatc ttaatcattt 9300
tgtgcaaaat aaagaatgaa ccaaattttg ggtcaggtgt gggtcactcg caggttgaaa 9360
taaaaacccg cacccacact cgtgaaactt tgggtcagat gcgggttaca cccgcggatt 9420
aaaatctcta cccataccca cactcatcag atcgagtacc caaagatttt aagtttgcgg 9480
gttaaattgt catccctcga caccaacgtg ttggaggatt tggaagtttc gcgatgcgta 9540
cttaccaagt gtttggttct atgataaaag tttagcctgt gtcgcattag atgattgaat 9600
gtctattatg agtattaaat attgtctaat tattaatcaa attacacaag tgaaggctaa 9660
acaacgagac aaatttatta agcctaatta atctatgatt agcaaatgtt tacagtagca 9720
ccatctagta gcaccatctg agcgaatcat gaactaatta ggtttaatag gttcgtctta 9780
acgtttaatt cttatctatg taattagttt tataagtaaa ttatatttaa tacttctaat 9840
tagcctccaa acattcgata taacatagac taaaatttag tcagtggtgc tgctgctggc 9900
tcttttcctt catccgacgt aatgttttcc tcccaattta ttgtgttgtt ttgtttgtgc 9960
tttaaaactg acttgctctc tgcttgctgt atcaaagtcg tgatgtgtgc ttagcttatt 10020
cccttccttg ctagctgccc ttagcatcta tatagggata tttggttata gggactaaag 10080
tttagtttag tccgtgtcca attataaaac taattacata actgaatact aaaagacgag 10140
aaaattttat taaacttaat taatttatga ttagcaaatg tttattgtaa catcacataa 10200
gtaaattata gactaatttt gtttaatagg ttcatcttat catttagtct tcatctatgt 10260
aattagtttt gtaattagac tatatttact atttctaact agtatctaaa cattaaatgt 10320
gacatggatt aaaatttagt tagagcaact ccagtagttt tctaaaagac ttcctaaatc 10380
aataatttag gtagttaaca tgaaaactat tctccaacag ttctctaaat aaactttcta 10440
aatttaacaa cttgtcatct aacctcattt tctctctaca tttggcaacc atttaataac 10500
tccctaatca aaaatgttga ctgcattata tagtttttgt gacttatttt ttatgtggat 10560
aaatacaaaa taaaattaca acctatattt agagaactat tggagaaccc acttattttt 10620
atttcaaaag tcatttagca acttcttaaa tctgtaattt agaaagctaa aatttacata 10680
actattagag ttgctcttag tgacgttagg cttttagagt tgagttggtc gtagcttggt 10740
ttagttacgt gtttgttctc ttgcgtttat ttaggacctc tctataatgt tttatcacct 10800
tcttaataca aattaaaata cgcagctctc ttgcgtattg gaggcgtgtg ttcctatatt 10860
ttttaggctc aattatgaat gaaattattc tcagcgagca tataaccgtt ttcgaggtaa 10920
aatgaactaa aagcatatgg gcctgcctgt tcgcataagt acaccctccg tctaaaaaag 10980
aataaaaata tcatttcttg atgagtcaaa aaagttcaaa tttaagaaaa tatatgttac 11040
gacaccaata tttataatgt gtaataagta ctgctgatta attttaaaat aaaattttca 11100
taataaacct atttgaagat acaagtattg gtactatttc taataaatct aatcaaactg 11160
gtgttatatc ttttgtaaca aatttgtgct ttgtgtttct ggttgacgtg aatcagctta 11220
atcttgctga aatctaacat tgtcttttgt tcgttggcat acaggatcaa aaaggaaaga 11280
agcatctatt gttggtaaga gcctatagtc aatacccatg ttcatttcgt ctaaaagagc 11340
agaagaaaag catatgatga attattgcca tgtcatgttt aaaatacaga attctcaaaa 11400
acaaaaacaa aaaaaacttg gaatccacta accagtaacc actgatagca ttgtagaaaa 11460
tttcatcctc cctttgggca atacactgat gagtttacat gctgactagt ggtgcatttg 11520
ttctttgcca attgaatttt tagaatgctt tgcagctgaa ttcacttgtg attttttttt 11580
gtgatgcagg tgctgttgcc gttgcattcc tgtgtctagt cattctcaca tgcttcttgg 11640
cttgtagaca tggttcgctg cccttcaaat cggagaacaa accagggaca aggattgagt 11700
ccttcctaca gaagaacgag agtatacatc cgaaaagata cacctacacg gacgtgaaaa 11760
gaatgacaaa atccttcgct gtgaagctag gccaaggtgg gtttggtgct gtatacaaag 11820
gcagcctcca cgatggccga caggtagcag tcaagatgct caaggacacc caaggtgacg 11880
gcgaggaatt catgaacgag gtggctagca tcagcaggac ttctcatgtc aacgtcgtga 11940
cacttctagg gttttgcttg caagggtcga aaagagcact gatctacgag tacatgccca 12000
atggttcgct cgaaaggtat gccttcaccg gtgacatgaa cagtgagaat ttgctaacct 12060
gggaaaggct atttgacata gcaattggca cggccagagg gctcgaatac ctacaccggg 12120
gatgcaacac tcggatcgtg cattttgaca tcaagccaca caacatcctg ttagaccagg 12180
atttctgtcc taagatctct gactttggac tggccaagct atgtctgaac aaagagagcg 12240
ctatctccat tgttggcgca agagggacga tagggtatat cgccccggag gtctactcaa 12300
agcaatttgg aacaatcagc agcaagtctg atgtctatag ctatgggatg atggtccttg 12360
agatggttgg agcaagggaa aggaatacaa gcgcaagcgc agatagtgac catagcagcc 12420
aatatttccc tcagtggatt tatgaacatt tggacgacta ttgtgttggt gcttccgaga 12480
ttaatggtga gaccacagag ctcgtgagga agatgatagt tgtaggtctg tggtgcatac 12540
aagtgattcc gactgatcga ccaacaatga cgagagtcgt cgagatgttg gaagggagca 12600
cgagtaatct agagttgcca cccagagttc tcttgagctg acaaagcgta gatatttttc 12660
ctatcaaatg ttgcttccag gtcacacaaa tgcaaaatat ttgtggagac gagtgcctat 12720
ttacctcata cactgtatct gtatgacaaa agtcccacga ctcactggac gcggaaatgt 12780
cgcttgacta cgccaatttt ctaaaaagat tggcagcaat taatggaggc ttatagcggt 12840
aactttggtt cgcattaatc ctaggactag ggttgaatat cgatctaact cgacgcggct 12900
tggtcaagct caagctagct ccactcatct cattaaagaa tccagctaga aaatcaaccc 12960
aagtcgttta cgaaacgagt ttgagctgac tcgtttagat cgtaaatcac aacaaaaaca 13020
atatgcacat atatacaata atataatcaa tactagttaa ttctagacta gtttaacact 13080
agaaaagagt aatgatactc ataatttcac atacaatgtc aatccaacac caatttaaca 13140
cacttcatca cttattagtt catccaacca agtgtaggct ttgatttact aacaaatggt 13200
tgctcgttcg agctagcgag cttgcttgtt aacaaactga gttgagatgc tagcttaact 13260
tgtgacaaaa ttaaaacgag ccgagtcgag tcaagttgag ctcacgatga gtcgagcaag 13320
ctcacaatcc acgagtattt ttttagtcct atctaagact aaagtttaat cctaaaacta 13380
aattttaatc tctatttgtt tggttctata aactaaacag gttcagaaaa cataaaatac 13440
attatagaaa acctgaaata cccttctata cttaaggcat cactaagaga gagcaataaa 13500
taaagggtag agagaggaat aaatctgctt tattcccttt tagctaccct ttgagagagt 13560
aaacactaaa atgaaaggat ccttgaggat tttgatgttt tggatgacaa ctaacacaat 13620
taaaggtcta attaggatgt taa 13643
<210> 2
<211> 2001
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 2
atggctgctc acctaccacg cctccccgtc ctcctcctcg tcctcctcgc tgctcatgtc 60
gtctccacct ccgcccatgc cgagcctcct cttccgagcc cttacagcac ctccgcccat 120
ggcgagcctc ctcttccgag cacttacaac gtctccatgt gctcggaatc gttctggtgc 180
ggcggcgtcg aaatccgcta cccgttctat cttgccaacg caaccgccga ctacagcggg 240
agctactact cctgcggcta caccgacttg agcgtttcct gcaaactcga ggtcgagggg 300
ccgacgacga catggacccc taccatccgt ctcggcggcg acaactacac cgtcaagaac 360
atcttgtacg actatcatac catctcactg gcggacagcg atgtgctcgg aggcggcgag 420
tgccccgtcg tccaccacaa cgtcagcttc gacgagacgt ggctgcacaa ccccagcgcc 480
ttcgacaacc tcaccttctt cttcggatgc cactgggggc cacgcgatac actgcctgaa 540
tttgccggca acaacatcag ctgcgccggg ttcagtactc cagctatcag cggtggaggc 600
tccttcgtgt tcaagcctga agatcttgac gaacatgcgg agcaggagtt ggcttcacac 660
tgcgacgagg ttttctccgt gccagtgaga agcgaggctc tgcagcaggc gatcgtcagc 720
aacctcagcc tcggggacgg gtacggcgag ctgcttaggc aggggatcga gttggaatgg 780
aaacggacat cggaggatca gtgtggccag tgcgaggaat cgggctccgg cggacggtgc 840
gcctacagcc agaagagaga attccttggc tgcttgtgca gcggagggaa ggcgggcaac 900
ccgttctgca aaccatcaag atcaaaaagg aaagaagcat ctattgttgg tgctgttgcc 960
gttgcattcc tgtgtctagt cattctcaca tgcttcttgg cttgtagaca tggttcgctg 1020
cccttcaaat cggagaacaa accagggaca aggattgagt ccttcctaca gaagaacgag 1080
agtatacatc cgaaaagata cacctacacg gacgtgaaaa gaatgacaaa atccttcgct 1140
gtgaagctag gccaaggtgg gtttggtgct gtatacaaag gcagcctcca cgatggccga 1200
caggtagcag tcaagatgct caaggacacc caaggtgacg gcgaggaatt catgaacgag 1260
gtggctagca tcagcaggac ttctcatgtc aacgtcgtga cacttctagg gttttgcttg 1320
caagggtcga aaagagcact gatctacgag tacatgccca atggttcgct cgaaaggtat 1380
gccttcaccg gtgacatgaa cagtgagaat ttgctaacct gggaaaggct atttgacata 1440
gcaattggca cggccagagg gctcgaatac ctacaccggg gatgcaacac tcggatcgtg 1500
cattttgaca tcaagccaca caacatcctg ttagaccagg atttctgtcc taagatctct 1560
gactttggac tggccaagct atgtctgaac aaagagagcg ctatctccat tgttggcgca 1620
agagggacga tagggtatat cgccccggag gtctactcaa agcaatttgg aacaatcagc 1680
agcaagtctg atgtctatag ctatgggatg atggtccttg agatggttgg agcaagggaa 1740
aggaatacaa gcgcaagcgc agatagtgac catagcagcc aatatttccc tcagtggatt 1800
tatgaacatt tggacgacta ttgtgttggt gcttccgaga ttaatggtga gaccacagag 1860
ctcgtgagga agatgatagt tgtaggtctg tggtgcatac aagtgattcc gactgatcga 1920
ccaacaatga cgagagtcgt cgagatgttg gaagggagca cgagtaatct agagttgcca 1980
cccagagttc tcttgagctg a 2001
<210> 3
<211> 666
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 3
Met Ala Ala His Leu Pro Arg Leu Pro Val Leu Leu Leu Val Leu Leu
1 5 10 15
Ala Ala His Val Val Ser Thr Ser Ala His Ala Glu Pro Pro Leu Pro
20 25 30
Ser Pro Tyr Ser Thr Ser Ala His Gly Glu Pro Pro Leu Pro Ser Thr
35 40 45
Tyr Asn Val Ser Met Cys Ser Glu Ser Phe Trp Cys Gly Gly Val Glu
50 55 60
Ile Arg Tyr Pro Phe Tyr Leu Ala Asn Ala Thr Ala Asp Tyr Ser Gly
65 70 75 80
Ser Tyr Tyr Ser Cys Gly Tyr Thr Asp Leu Ser Val Ser Cys Lys Leu
85 90 95
Glu Val Glu Gly Pro Thr Thr Thr Trp Thr Pro Thr Ile Arg Leu Gly
100 105 110
Gly Asp Asn Tyr Thr Val Lys Asn Ile Leu Tyr Asp Tyr His Thr Ile
115 120 125
Ser Leu Ala Asp Ser Asp Val Leu Gly Gly Gly Glu Cys Pro Val Val
130 135 140
His His Asn Val Ser Phe Asp Glu Thr Trp Leu His Asn Pro Ser Ala
145 150 155 160
Phe Asp Asn Leu Thr Phe Phe Phe Gly Cys His Trp Gly Pro Arg Asp
165 170 175
Thr Leu Pro Glu Phe Ala Gly Asn Asn Ile Ser Cys Ala Gly Phe Ser
180 185 190
Thr Pro Ala Ile Ser Gly Gly Gly Ser Phe Val Phe Lys Pro Glu Asp
195 200 205
Leu Asp Glu His Ala Glu Gln Glu Leu Ala Ser His Cys Asp Glu Val
210 215 220
Phe Ser Val Pro Val Arg Ser Glu Ala Leu Gln Gln Ala Ile Val Ser
225 230 235 240
Asn Leu Ser Leu Gly Asp Gly Tyr Gly Glu Leu Leu Arg Gln Gly Ile
245 250 255
Glu Leu Glu Trp Lys Arg Thr Ser Glu Asp Gln Cys Gly Gln Cys Glu
260 265 270
Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Cys Ala Tyr Ser Gln Lys Arg Glu Phe
275 280 285
Leu Gly Cys Leu Cys Ser Gly Gly Lys Ala Gly Asn Pro Phe Cys Lys
290 295 300
Pro Ser Arg Ser Lys Arg Lys Glu Ala Ser Ile Val Gly Ala Val Ala
305 310 315 320
Val Ala Phe Leu Cys Leu Val Ile Leu Thr Cys Phe Leu Ala Cys Arg
325 330 335
His Gly Ser Leu Pro Phe Lys Ser Glu Asn Lys Pro Gly Thr Arg Ile
340 345 350
Glu Ser Phe Leu Gln Lys Asn Glu Ser Ile His Pro Lys Arg Tyr Thr
355 360 365
Tyr Thr Asp Val Lys Arg Met Thr Lys Ser Phe Ala Val Lys Leu Gly
370 375 380
Gln Gly Gly Phe Gly Ala Val Tyr Lys Gly Ser Leu His Asp Gly Arg
385 390 395 400
Gln Val Ala Val Lys Met Leu Lys Asp Thr Gln Gly Asp Gly Glu Glu
405 410 415
Phe Met Asn Glu Val Ala Ser Ile Ser Arg Thr Ser His Val Asn Val
420 425 430
Val Thr Leu Leu Gly Phe Cys Leu Gln Gly Ser Lys Arg Ala Leu Ile
435 440 445
Tyr Glu Tyr Met Pro Asn Gly Ser Leu Glu Arg Tyr Ala Phe Thr Gly
450 455 460
Asp Met Asn Ser Glu Asn Leu Leu Thr Trp Glu Arg Leu Phe Asp Ile
465 470 475 480
Ala Ile Gly Thr Ala Arg Gly Leu Glu Tyr Leu His Arg Gly Cys Asn
485 490 495
Thr Arg Ile Val His Phe Asp Ile Lys Pro His Asn Ile Leu Leu Asp
500 505 510
Gln Asp Phe Cys Pro Lys Ile Ser Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Cys
515 520 525
Leu Asn Lys Glu Ser Ala Ile Ser Ile Val Gly Ala Arg Gly Thr Ile
530 535 540
Gly Tyr Ile Ala Pro Glu Val Tyr Ser Lys Gln Phe Gly Thr Ile Ser
545 550 555 560
Ser Lys Ser Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Met Met Val Leu Glu Met Val
565 570 575
Gly Ala Arg Glu Arg Asn Thr Ser Ala Ser Ala Asp Ser Asp His Ser
580 585 590
Ser Gln Tyr Phe Pro Gln Trp Ile Tyr Glu His Leu Asp Asp Tyr Cys
595 600 605
Val Gly Ala Ser Glu Ile Asn Gly Glu Thr Thr Glu Leu Val Arg Lys
610 615 620
Met Ile Val Val Gly Leu Trp Cys Ile Gln Val Ile Pro Thr Asp Arg
625 630 635 640
Pro Thr Met Thr Arg Val Val Glu Met Leu Glu Gly Ser Thr Ser Asn
645 650 655
Leu Glu Leu Pro Pro Arg Val Leu Leu Ser
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<210> 4
<211> 1887
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 4
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tggctcaagt cctccgcgcc cgactgcgtc tatcccggtg tcggccttgt ggcccttgtc 180
tgcgagggca actcgacgct gatcctcccc ttcaagtccc acagatacgt agtgctcagc 240
atcgactaca agacgcgtac cgtgctggtc tccgacgccg acatcgtcca cgagtacgac 300
gcggccggct gcccgcgcgt ccgcgtgaac ctcaccatcg acaccgcctg gctgcggccc 360
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tccgccgtgg aactgagcgg gtgccagcag cagcagcaac aagacggcag caggtcgtat 480
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gacttggtgg tggcgccggt gctggacgtc cacaggaggg cgatcttgag ggcgcctggc 600
ggcccgactc tggagaacgg gtcgctccgt cggttgctgc agggcgggtt cgagctgaac 660
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tgcttgcaag ggtcgaaaag agcactgatc tacgagtaca tgcccaatgg ttcgctcgaa 1260
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atcgtgcatt ttgacatcaa gccacacaac atcctgttag accaggattt ctgtcctaag 1440
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<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
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Gly Gln Asp Val His Tyr Pro Phe Trp Leu Lys Ser Ser Ala Pro Asp
35 40 45
Cys Val Tyr Pro Gly Val Gly Leu Val Ala Leu Val Cys Glu Gly Asn
50 55 60
Ser Thr Leu Ile Leu Pro Phe Lys Ser His Arg Tyr Val Val Leu Ser
65 70 75 80
Ile Asp Tyr Lys Thr Arg Thr Val Leu Val Ser Asp Ala Asp Ile Val
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Leu Ser Gly Cys Gln Gln Gln Gln Gln Gln Asp Gly Ser Arg Ser Tyr
145 150 155 160
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165 170 175
Tyr Gly Cys Glu Asp Leu Val Val Ala Pro Val Leu Asp Val His Arg
180 185 190
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195 200 205
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260 265 270
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275 280 285
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Met Thr Lys Ser Phe Ala Val Lys Leu Gly Gln Gly Gly Phe Gly Ala
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Val Tyr Lys Gly Ser Leu His Asp Gly Arg Gln Val Ala Val Lys Met
355 360 365
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370 375 380
Ser Ile Ser Arg Thr Ser His Val Asn Val Val Thr Leu Leu Gly Phe
385 390 395 400
Cys Leu Gln Gly Ser Lys Arg Ala Leu Ile Tyr Glu Tyr Met Pro Asn
405 410 415
Gly Ser Leu Glu Arg Tyr Ala Phe Thr Gly Asp Met Asn Ser Glu Asn
420 425 430
Leu Leu Thr Trp Glu Arg Leu Phe Asp Ile Ala Ile Gly Thr Ala Arg
435 440 445
Gly Leu Glu Tyr Leu His Arg Gly Cys Asn Thr Arg Ile Val His Phe
450 455 460
Asp Ile Lys Pro His Asn Ile Leu Leu Asp Gln Asp Phe Cys Pro Lys
465 470 475 480
Ile Ser Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Cys Leu Asn Lys Glu Ser Ala
485 490 495
Ile Ser Ile Val Gly Ala Arg Gly Thr Ile Gly Tyr Ile Ala Pro Glu
500 505 510
Val Tyr Ser Lys Gln Phe Gly Thr Ile Ser Ser Lys Ser Asp Val Tyr
515 520 525
Ser Tyr Gly Met Met Val Leu Glu Met Val Gly Ala Arg Glu Arg Asn
530 535 540
Thr Ser Ala Ser Ala Asp Ser Asp His Ser Ser Gln Tyr Phe Pro Gln
545 550 555 560
Trp Ile Tyr Glu His Leu Asp Asp Tyr Cys Val Gly Ala Ser Glu Ile
565 570 575
Asn Gly Glu Thr Thr Glu Leu Val Arg Lys Met Ile Val Val Gly Leu
580 585 590
Trp Cys Ile Gln Val Ile Pro Thr Asp Arg Pro Thr Met Thr Arg Val
595 600 605
Val Glu Met Leu Glu Gly Ser Thr Ser Asn Leu Glu Leu Pro Pro Arg
610 615 620
Val Leu Leu Ser
625
<210> 6
<211> 5930
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 6
gatattgaat ccaattcaat tctataacct ccaaaatcga tatcctaaca tagcatgata 60
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tctcaaaact atgattttac ttatgatgac aataccgtag ttttgaatag ctctaaaaat 420
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ctagtcatgt tataaaaact ttaggttgaa gtagagtttt caatactaaa aaaatatcat 540
ggtatttaga atatcatgat tttaaaaata tagttcttac gaatgcaacc aaacacctta 600
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aaatttatac aagtatatat aattaagcaa ataaaaacta cgttattcat aaaaagctaa 780
taaaaagtaa aaagtaaaaa ctatataatt cataaaaaaa tcgttatctt tctcttccat 840
cttattatct atttttagtt gttttgtcaa atttaaggct attttatggg ttctttttat 900
ctttgtacat gtcgtgagcc aataacttat tgaattggtc aatcaattta ggttgagttt 960
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gacgtggtga gcccatattt ttaggtgtta tggatttata atcaccgttc aaatttgaat 1140
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attcagattt tttctcagcc actgaaacat accagccctt tactaccaaa aacaggaact 1740
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cgcttgagaa gcacgcggcc atggagaacc cagacgcgca ggcgaaggcg tgggcggcgg 2040
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accttgccaa cgaatcgtac cggcgtagga agaggtacag gattgaggag ggcggttcaa 2280
gcctctcgca cgcggagatc gatcctcggt tagaggcgct ctacgtggag gtggagaaac 2340
tcgtgggcat ccagggccca agccaggaga tcattggaca gctcgtcggc gagaacgcag 2400
cggagcgacg gagggttgtc gccgttgttg gatctggagg ttcaggcaag accacacttg 2460
ccaaacaggt gtacgagaaa atcaggtgcc aattctcttg tgcagccttt gtgtctgtgt 2520
cgcaaaagcc caacatgaat agcctcctgt gggagttgct atctcaaatc gggaaccatg 2580
gtggagattt aggaatgatg gcagtaggat attgcagtga caaacaactg atcgacagac 2640
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gccatactca tatagatatt ttcttttcat aaactctcgt agcattttta catgcattca 2880
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ggaggggatt aaaaacgaga taatcgagaa atgcgatggt ttgccactgg ctattgttac 3240
tctagctagc atgttagcta ctaaacagag aacaagggaa gaatgggaga gggcacttga 3300
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tctgagttac agggatctac ctcacaacat gagaaattgc ttgctgtatc tcagtacatt 3420
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tatcgctgaa acacaaggct ttactttgga gcaggttgcc gagggctact tctacgagtt 3540
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ccggctctct gtctgggaca gtccagaaca cgcactggca gtctctagag cgaccatgaa 3780
tctgtcccat ctccggtcag ttagaatatg caacgttgga gactggcccg tgcctgctgt 3840
tctagactta cctgtccttc gagtgttaga tctagaggga tgccgtgatc tgaggatcga 3900
cgaacctgac tgcattctaa gcttgtttca tctgagatac ctgggtttcc gcagcgcaag 3960
tggtgtcgtg ctaccggctc aaatcggaaa tttacaccat ctgcagacca tcgatttaag 4020
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tgttgggcaa cggctcatca tgccagacgg gtttggtagc atggaatccc ttgaggagtt 4140
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aaggaaatct ttgatgtcat ccctctgcaa actcggagga gacaaccttc ggcgtgtcac 4320
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tctcctccag aagttcatcc atatcagtca gcaacagcac ttctccaggt ttccagaatg 4440
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<210> 7
<211> 2829
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 7
atggaaggag ctggggaggg gagcgccttg acggggatga tgggtcctgc gctcgacaag 60
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gacagcatcg atctcttcac ccaccacgtc gaccacgaac cggccgacac cgccaccacc 300
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atcattggac agctcgtcgg cgagaacgca gcggagcgac ggagggttgt cgccgttgtt 600
ggatctggag gttcaggcaa gaccacactt gccaaacagg tgtacgagaa aatcaggtgc 660
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tattgcagtg acaaacaact gatcgacaga ctaagatcac atcttgaaaa gcagaggtat 840
ctcgttgtga tagatgatgt ttggacaaac tcagcgtggg agaccataca atgtgcgctc 900
cctaaaaatg cccatgcaag taaaataatt ctgacaacac gaatcaacag tgtaggccag 960
ttctcctgca ctccagatga gggttttatc tatcagatga agcctctttg cagaaacgat 1020
tctgaaaatc tgtttctgaa aaggacacta tgtgataaag ataagtttcc tgctcagctg 1080
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ctagctagca tgttagctac taaacagaga acaagggaag aatgggagag ggcacttgat 1200
tcaatccatt ctatgcacaa gaaagatagt ggcctggaag tgatggacaa gatactgtct 1260
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ccagaggacc acacgattta caaagatgcc ctagtatgga gatggatggc tgaagggttt 1380
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gtgaacagga gtttggttca gcccataacc ttgcgttcaa gatatgaaat gcgtggagaa 1500
ggaggttgcc gagtccatga cattgtactg aacttcctca tctctcgtgc agctgaagag 1560
aactttttaa ctacgctgta tggcgcccag ggggttccat cttcagaccg aaggattcgc 1620
cggctctctg tctgggacag tccagaacac gcactggcag tctctagagc gaccatgaat 1680
ctgtcccatc tccggtcagt tagaatatgc aacgttggag actggcccgt gcctgctgtt 1740
ctagacttac ctgtccttcg agtgttagat ctagagggat gccgtgatct gaggatcgac 1800
gaacctgact gcattctaag cttgtttcat ctgagatacc tgggtttccg cagcgcaagt 1860
ggtgtcgtgc taccggctca aatcggaaat ttacaccatc tgcagaccat cgatttaagc 1920
gggactggag tgacacagct gccagaaagc attgtccagc tcaagcgact gatgcatctt 1980
gttgggcaac ggctcatcat gccagacggg tttggtagca tggaatccct tgaggagtta 2040
ggtactatcg actgctgcaa gtgccccgtc agttttgggg aagacctagc acttctgagc 2100
aggctgaggg tgctccgagt ggctttcatc ggggtcgaaa caagtgacat ggaaaccaga 2160
aggaaatctt tgatgtcatc cctctgcaaa ctcggaggag acaaccttcg gcgtgtcact 2220
attatcgacc tcgctggcgg tggagattgc tttgtggagt cgtggcaccc tcctcctcgt 2280
ctcctccaga agttcatcca tatcagtcag caacagcact tctccaggtt tccagaatgg 2340
atcagttcct gcctatgtga tctcacccac ctggatataa aggccgaaaa gatggaaagg 2400
gagcatctaa gtgttcttga acacctgccc gccatccgtt gcctatacct tttcgtgaag 2460
cgagtctccg aagacgggct cgccatcagc cacggcgcgt tccgatgtct acggcgtctc 2520
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<211> 942
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 8
Met Glu Gly Ala Gly Glu Gly Ser Ala Leu Thr Gly Met Met Gly Pro
1 5 10 15
Ala Leu Asp Lys Leu Ala Ser Leu Val Asp Lys Tyr Thr Glu Leu Arg
20 25 30
Asn Val Arg Lys Lys Met Glu Gln Leu Arg Lys Glu Leu Ile Ala Ile
35 40 45
Asn Leu Ala Leu Glu Lys His Ala Ala Met Glu Asn Pro Asp Ala Gln
50 55 60
Ala Lys Ala Trp Ala Ala Glu Met Arg Glu Leu Ala Tyr Asp Met Glu
65 70 75 80
Asp Ser Ile Asp Leu Phe Thr His His Val Asp His Glu Pro Ala Asp
85 90 95
Thr Ala Thr Thr Gly Val Lys Arg Phe Phe Leu Arg Ile Ile Arg Lys
100 105 110
Leu Lys Lys Leu His Tyr Arg His Arg Phe Val Gln Glu Ile Lys Gln
115 120 125
Leu His Asp Leu Ala Asn Glu Ser Tyr Arg Arg Arg Lys Arg Tyr Arg
130 135 140
Ile Glu Glu Gly Gly Ser Ser Leu Ser His Ala Glu Ile Asp Pro Arg
145 150 155 160
Leu Glu Ala Leu Tyr Val Glu Val Glu Lys Leu Val Gly Ile Gln Gly
165 170 175
Pro Ser Gln Glu Ile Ile Gly Gln Leu Val Gly Glu Asn Ala Ala Glu
180 185 190
Arg Arg Arg Val Val Ala Val Val Gly Ser Gly Gly Ser Gly Lys Thr
195 200 205
Thr Leu Ala Lys Gln Val Tyr Glu Lys Ile Arg Cys Gln Phe Ser Cys
210 215 220
Ala Ala Phe Val Ser Val Ser Gln Lys Pro Asn Met Asn Ser Leu Leu
225 230 235 240
Trp Glu Leu Leu Ser Gln Ile Gly Asn His Gly Gly Asp Leu Gly Met
245 250 255
Met Ala Val Gly Tyr Cys Ser Asp Lys Gln Leu Ile Asp Arg Leu Arg
260 265 270
Ser His Leu Glu Lys Gln Arg Tyr Leu Val Val Ile Asp Asp Val Trp
275 280 285
Thr Asn Ser Ala Trp Glu Thr Ile Gln Cys Ala Leu Pro Lys Asn Ala
290 295 300
His Ala Ser Lys Ile Ile Leu Thr Thr Arg Ile Asn Ser Val Gly Gln
305 310 315 320
Phe Ser Cys Thr Pro Asp Glu Gly Phe Ile Tyr Gln Met Lys Pro Leu
325 330 335
Cys Arg Asn Asp Ser Glu Asn Leu Phe Leu Lys Arg Thr Leu Cys Asp
340 345 350
Lys Asp Lys Phe Pro Ala Gln Leu Glu Gly Ile Lys Asn Glu Ile Ile
355 360 365
Glu Lys Cys Asp Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Thr Leu Ala Ser Met
370 375 380
Leu Ala Thr Lys Gln Arg Thr Arg Glu Glu Trp Glu Arg Ala Leu Asp
385 390 395 400
Ser Ile His Ser Met His Lys Lys Asp Ser Gly Leu Glu Val Met Asp
405 410 415
Lys Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Asp Leu Pro His Asn Met Arg Asn
420 425 430
Cys Leu Leu Tyr Leu Ser Thr Phe Pro Glu Asp His Thr Ile Tyr Lys
435 440 445
Asp Ala Leu Val Trp Arg Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Ala Glu Thr
450 455 460
Gln Gly Phe Thr Leu Glu Gln Val Ala Glu Gly Tyr Phe Tyr Glu Phe
465 470 475 480
Val Asn Arg Ser Leu Val Gln Pro Ile Thr Leu Arg Ser Arg Tyr Glu
485 490 495
Met Arg Gly Glu Gly Gly Cys Arg Val His Asp Ile Val Leu Asn Phe
500 505 510
Leu Ile Ser Arg Ala Ala Glu Glu Asn Phe Leu Thr Thr Leu Tyr Gly
515 520 525
Ala Gln Gly Val Pro Ser Ser Asp Arg Arg Ile Arg Arg Leu Ser Val
530 535 540
Trp Asp Ser Pro Glu His Ala Leu Ala Val Ser Arg Ala Thr Met Asn
545 550 555 560
Leu Ser His Leu Arg Ser Val Arg Ile Cys Asn Val Gly Asp Trp Pro
565 570 575
Val Pro Ala Val Leu Asp Leu Pro Val Leu Arg Val Leu Asp Leu Glu
580 585 590
Gly Cys Arg Asp Leu Arg Ile Asp Glu Pro Asp Cys Ile Leu Ser Leu
595 600 605
Phe His Leu Arg Tyr Leu Gly Phe Arg Ser Ala Ser Gly Val Val Leu
610 615 620
Pro Ala Gln Ile Gly Asn Leu His His Leu Gln Thr Ile Asp Leu Ser
625 630 635 640
Gly Thr Gly Val Thr Gln Leu Pro Glu Ser Ile Val Gln Leu Lys Arg
645 650 655
Leu Met His Leu Val Gly Gln Arg Leu Ile Met Pro Asp Gly Phe Gly
660 665 670
Ser Met Glu Ser Leu Glu Glu Leu Gly Thr Ile Asp Cys Cys Lys Cys
675 680 685
Pro Val Ser Phe Gly Glu Asp Leu Ala Leu Leu Ser Arg Leu Arg Val
690 695 700
Leu Arg Val Ala Phe Ile Gly Val Glu Thr Ser Asp Met Glu Thr Arg
705 710 715 720
Arg Lys Ser Leu Met Ser Ser Leu Cys Lys Leu Gly Gly Asp Asn Leu
725 730 735
Arg Arg Val Thr Ile Ile Asp Leu Ala Gly Gly Gly Asp Cys Phe Val
740 745 750
Glu Ser Trp His Pro Pro Pro Arg Leu Leu Gln Lys Phe Ile His Ile
755 760 765
Ser Gln Gln Gln His Phe Ser Arg Phe Pro Glu Trp Ile Ser Ser Cys
770 775 780
Leu Cys Asp Leu Thr His Leu Asp Ile Lys Ala Glu Lys Met Glu Arg
785 790 795 800
Glu His Leu Ser Val Leu Glu His Leu Pro Ala Ile Arg Cys Leu Tyr
805 810 815
Leu Phe Val Lys Arg Val Ser Glu Asp Gly Leu Ala Ile Ser His Gly
820 825 830
Ala Phe Arg Cys Leu Arg Arg Leu Glu Phe Cys Asn Val Asp Gly Pro
835 840 845
Gly Leu Met Phe Ala Gly Gly Val Pro Met Leu Glu Trp Leu Arg Leu
850 855 860
Gly Phe Asp Ala Asp Arg Ala Gln Ser Thr Tyr Gly Gly Leu Glu Val
865 870 875 880
Gly Ile Gln Arg Leu Ser Ser Leu Lys His Val Val Leu Ile Val Trp
885 890 895
Met Val Ser Glu Gly Gly Asp Asp Pro Ala Glu Gln Ala Val Trp Ser
900 905 910
Ala Ile Asn Gly Gln Val Glu Met Leu Pro Asn Ser Pro Thr Val Asp
915 920 925
Ile Arg Phe Arg Arg Arg Ser Gln Leu Gln Ala Ser Ser Glu
930 935 940
<210> 9
<211> 11437
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 9
ccgagtacat tgccgcagga cattgttgcg cgcaattgct ttggatgagg caaaccctgc 60
gggactacgg ttacaaatta accaaagtcc ctttgctatg tgataatgag agtgcaatta 120
agatggccga caatcccgtc gagcatagcc gcactaagca catagccatt cggtatcatt 180
ttcttaggga tcaccaacaa aagggggata tcgagatttc ttacattaat actaaagatc 240
aattagccga tatctttacc aagcctcttg atgaacaaac ttttaccaaa cttaggcatg 300
agctcaatat tcttgattct agaaatttct tttgctaagc ttgcacacat agctcatttg 360
aatacctttg atcatatctc ttttatatgc tatgactaat gtgttttcaa gtctatttca 420
aaccaagtca taggtatatt gaaagggaat tggagtcttc ggcgaagaca aaggcttcca 480
ctccgtaact catacttcgc caccactccg agcaactctc tcttctttgg gggagaaatg 540
agcatcaagg aaaaggactt catccttggg ggagagaata aaagctcaaa cgcaaaagga 600
cttcgtcttt ggtataatct taactcactt atttatgacc aaaggggaag aacttacttc 660
tagggctcta atgattccgt ttttttggcg attcatgcca aaaaggggga gaaatgagcc 720
caaagcaaaa ggaccgcacc accaccacca aattcaaaaa cttagtgctt tccaaaagtc 780
tttatcattt ggtatcctat tgtgttcaaa agggggagaa agtagtattt caaaaatggt 840
atatcaaaac cctcttgaac actaagaggt gaatctcttt tagggggagt tttgtttagt 900
caaaggaaaa gcatttgaaa cagggggagg aaatttcaaa tcttaaaaaa tgcttttgca 960
aactcttatt tatttacctt tgactatctg caaaagatct atgaaaagga tttacaaaag 1020
gttttgcaaa aacaaaacaa gtggtgcaaa cgtggtccaa aatgttatat aagaaagaaa 1080
caattcatgc atattttgca agtatttata ttggcccaat ttcaagcaac ctttgcactt 1140
atattatgca aactagttca attatgcact tccatatttg ctttggtttg tgttggcatc 1200
aatcaccaaa aagggggaga ttgaaaggga attaggctta cacctagttc ctaaatagtt 1260
ttggtggttg aatcgcccaa cacaaataaa ttgaactaac tagtttgctc tagattacat 1320
gttctacagg tgccaaaggt tcatctacaa ctatactaat tcgactgtcc ggaataccgt 1380
agattattcc ggacaggaga agctttttgg aaaaacaggc caagcgcgga ccgtccgggc 1440
tcttgcggcg gaccgtccgc aacatcggga tactcctcgg acagaaccaa tgcaaaaaca 1500
caagtttcca ctacagactg tccggaggaa aagcaaagac cgtccgagcc cttgcgcgga 1560
ccgtccggcc tctggcgcgg accgtccggt aggtgagaaa ccgaaaaacc cgaaggtaac 1620
gggttcggag aaatgaatta tagcggcctc gcggaccgtc cggaccaggc gggcggaccg 1680
tccgcgactg gctctgtctg acatctgacg acgcattaaa tgcaatatag ccgttgatat 1740
agccgttact gctgaccgtt gcattttcag ccgttgatct acaggggcgg accgtccgca 1800
ccaggagggc ggaccgtccg cgctcagcag aatggcccaa cggctaggaa gtggttggtg 1860
gctataaata caaccccaac cacctccatt caatccatcc aagcattcca accttcaaca 1920
ttcaatacaa gagctagcaa tccattccaa gacacattca aagcctccat ctctccaagt 1980
ttcacaattg agaaaagaga tcattagtga ttagtagctt gagagagaaa gtgatccgtg 2040
tgttatttgt cgctcttgtt gcttggcttt ttaatcgtgc tttcttgatt ctttcattgc 2100
gatcaaactc acttgtaatt gaggcaagag acaccaatct tgtggtgatc cttgtaggaa 2160
ctttgtgttc caagtgattg agaaaagaaa gctcactcga tccgtggatc gtttgagaga 2220
gggaagggtt gaaagagacc cggcctttgt ggcctcctca acggggagta ggtttgcgag 2280
aaccgaacct cggtaaaaca aatccgcgtg tctcacttac ttattcgctt gcgatttgtt 2340
ttgcaccctc tctcgcggac tcatttatta ttactaacgc taacctcggc ttgtagttgt 2400
gattattttt gtaaatttca gtttcgccct attcaccccc ccctctaggc gactttcact 2460
caccagtatt gatttaagaa ctaagcgcct tgttattact ggtctatttg gataagtagg 2520
aatgacttag tttttaataa tatttcaagt tttacttatc tgcaggtttt ttttccagag 2580
gtacacactg gcttagattc tgggctcaac tacaaaagga cgaagctgat ggagttttaa 2640
taaaggatgt ttgccgtcgc cgggaatcgg tggtcatgca attttgtgtt aattttggtt 2700
ggaggttttc taataggatt cccttttaat catcttggtg gttaaaaaaa aatcaaaaac 2760
ctttagtgtg ctatgtccct tcagagagca gtgtaatata acattttgtg ttgtctctaa 2820
tctattttga ggagaaagcc ggaacttttt ctcgttatct gaaaaaatct ttggctagcc 2880
ttcgcgactc gccatctccc agccgtggcg ctctctcgcc cacgcacacc atgcagctgc 2940
ttcgtcattt ccagccatat gcgtgaagac atttgaattc gtccaccact gcatcactag 3000
tctcactctc acctataata tatctgcacc caacgagcag gtaccaagca attagcaaga 3060
gaaacacaag gtcgaggtgg tgaggcatgg agctcgcctt gggggccatg accagcttgg 3120
cccctaagct tggcgacctg ctcatggaga agtatgtcgt gcagaagggc ctcaagcccg 3180
acatcgagtc tctctccagg gagcttgtga tgatgaacgc cgctctcgtc gacgcgtccc 3240
gggttccacc tgaccagctc accgaggtgg aaaagctctg ggcacgcaag gtccgggact 3300
tgtcgtatga catggaggac gccgtcgacg atttcatcct gcgtgtggct ggtggtgacg 3360
actctgccgc cgactccaaa ttcttcaaga agacccttgc catggtcaag gacgtgatgt 3420
cgatgaagaa gttcaaggat cggtgccaga tctccgacaa ggtcaaagac atcaagaaac 3480
tctccaacga gttagctgaa cttcgtgcca agtacacggt aaggggtgtg ggtgctgatc 3540
tcgccgcgag caccggcatc gacacccgtg tcatcaatct gtacaagaaa gagacagatc 3600
tcgttggtat cgaggagtca agggacaaag tcattaggat gctgtctata ggggccaaag 3660
atgaagatgc acatgagttc catcaggatc taaagatagt gtctatagtc ggggttggag 3720
gactaggtaa gactactcta gccaaaacag tgcatgacat gcttaagaag caattcgact 3780
gttgtgcttt tatttctatt ggtagaactc ctaatctgaa taggacattc gagaagatgc 3840
tattggaact cgatcgtgag tataaacaag ttgacatggc cagatgggat ctagaacaat 3900
ttataaacga actggatgaa ttcttgaagg acaagaggta cgcccatgtc attcattctc 3960
cctctagttt agttgaattt tttcattcac tagtagagcg tgggcagttt tgccatgttt 4020
atatgcatac cgatttgcca agttattcat agctgtacac tcttgtgtca attttatata 4080
tatatatata tataggtact tgatcgttgt tgatgacata tgggatgttg actcatggga 4140
agcgatcaaa tatgccttaa aggacaatag ttgtggaagt agaataatca tgactactcg 4200
caattctggg tttgtcaaga aagtagaaga ggtttataga ttaaaacctc tttctaatga 4260
aaactccaag aaactgttct acaaaagaat agagagtcag gaaggagaaa gccttgatgg 4320
tgaactctct agtaaaatca tacataaatg tggcggcata ccattggcta tcattgcaat 4380
agctagtttg ttggttgaaa gatcaagtga ggagtggtca gaagtgtacg acaagattgg 4440
tcttgggaat gaggacaata caacaaagat aatgttatac agctactatg atctgcctcc 4500
ttatctcaag ccatgtctgc tgcaactaag catatatcca gaagactgtt tcattgatac 4560
aaaagctacc atatggaagt ggataggtga aggtctagtt catattgaga aagaggaggg 4620
tagcctattt aaggttggag aaagatactt caaggagctt gtgaatagaa gcatgatcca 4680
gccgatagag aacataaatg attggtttgt agaagagttc cgtattcacg acattgtgtt 4740
tgatctcatc tgtaagttgt ccaaggatga agacttcatt agccttagcg ggcaacattc 4800
atctcaggat agtttaagaa gagagaagaa aacaggtgtg cctcgctcag actgcaagct 4860
acgtcgtctg gtcgtccgaa atcaacgtgt gcagcgcttc cctgaagaaa ccatggacat 4920
gccagaggtg ttgagatcac ttagcattat agattgtaat attgcggttg tggccccaat 4980
tgatagcttc agggtttgcc gtgtgctgtc tatagtaaac aactacgtac ccatcagcct 5040
aaagcatctg gggaagctgt tgcatctcaa gttcctagag atagtataca cgcctattga 5100
tgagctccct aaggaaattg ggcatctgag gtctcttcag acactgatat tagtccgtac 5160
tggactagac gagctgccac cggctctttg ctcgcttaca cggctcatgt gtctgatagc 5220
ctatggcttc gaaaggttgc cagctgatag gatggggaac ctaacgtccc tggaggagct 5280
acaactaaat agggtagttg gccggagtgc cacccaagac ctagtggcag agtttggcaa 5340
gctgacgagg ttgagggtgg tcagcatcac cttttcagag cagctagagg agagcttgca 5400
agaagcattg gtgcaatctc tgtccaatct gcggcgactc caggaactag agcttttgtg 5460
taaaatgcca gagcggggaa gcgatatgtg gggagactgg gagccaccaa ggcagctccg 5520
gcgcctgatt attgaaggca tcgacttctc acggcagcct cgatggatca accgctcctg 5580
cctgccacgc ctctgctcct tatatctgag ggtgcacgct cttgaagcac aggacctaga 5640
taatctagcg aggttgccag agctccagta cctccagcta tttggtctca gctttcctcc 5700
aaggtatact gttggcccag acgacttcag gaatctgagg ttctgcgaag tgggcacaac 5760
gttcgagttt cgtaagggcg ccatgccaag gcttgaagtg ctgcgatttg gagtttatgc 5820
agggtactgg agttgggaag agaatggtgt gccgttcgag cagttcccaa cgaaggatgt 5880
gatcgaagat cttcacttgg acctggataa cgtcctttta cttcagcaag taatagtcaa 5940
agtcaactgc ttaggtgcta ctgccgcaca agtggaggag gtggaggccg tggtcatgcg 6000
tgccgtggaa aatcatgcca accgtccaac cataaaaatg gatcgagtat atgaagaaaa 6060
tatcttatct gatgaaaagt gggaggctct ggtgagtctg ctaaagaaaa tatgttttct 6120
tatatatatt tatatatata tatatatata tatttatgtt tgtgcacttc aattctcagc 6180
ttcggcgaca cattgaagag gattgctgcg tgcgcacgat gaaggataaa tctaatgctt 6240
tcttcatcag ccagctgtgg ttatatcgac atcttcagga agccattatt ttcatcgact 6300
gttcgggtgc cagcatgtgt gaggtgcaga aagtggaagc agcttataga catgcagccg 6360
aggttcatcc taaccatcca agtattgaac ttatcagaac aaacaccgac ggaatggcct 6420
cctcctcatc tgaccatccc aacacagagg ttcgtcctag ctgcgtggaa aatttttcag 6480
taattaatgg aaaccttagc tttgacggta taacttacca ccaacgctta tttttcgttc 6540
ccaaactcca gcccaggaat tgatgactcg gtttgtcaga tccttcgacc cagcaccagc 6600
agcaggtacg tgtgcatgcc catgatctac actcttaaat taattttatt actctatcca 6660
gttatcacgt tccaatgcca tgtgtaagtt ttagtacctg tttatttttc gcttgcaatt 6720
gttgcatctt gaactcttgc ttctaacctc cattatttgt ctgtccactt caccaagaga 6780
cagaaaatca tagctctaac ttccatgaag cctaaacctc caaactcctt gggtctgttt 6840
agggcctccc accttgtcat gtgatacttc cttttcttgc tagttccata aaaagagatc 6900
tgattgagtc taacatctag aaattctcct cgtacaagtg atagaccccc actgtgttca 6960
taggaatgct tgacaggcag gattccatta cagtagatat ctttccagaa gatagatgtc 7020
cagactgcca agtacccaac ctcttctgag tcttgtcact gaatttcatc tgtgctttag 7080
tcactcatag gaatcttcaa atatttgata ggaaaaattt ccaccttgca acgaagaagt 7140
ttagctatcc tctctttctc ctgatcctca gccccaacaa cagaaactta acacttctca 7200
aagttgattt tcatccttga cattgcatca taacaagata aaataactct aatattgttc 7260
tggttacctt ttgagttctg taaaaaatgg ttgtatcatc atcatattgc aagtaactct 7320
gaaattaagc cctttagcgg acaacctctt ctagctctaa taaggcagat aaagcatctg 7380
tcactaagtt gaacaaaaaa gggaaaagag gatcccctgt ctgagacctt taaaacttct 7440
aaaatagtca cctctctcac cactcaaatc aataggtatc atgtcccact gaactgcctg 7500
tctggtccaa cctgtccata tattagaaaa aaaacatttt ctttgaagta cctcctccaa 7560
aaagttccaa ttcaccttat catatgccct ctaaaaaatc aagccttaaa ataattccaa 7620
aaacctttat agctcttagc tcatggagta catcttgcaa aagttgtctg gtatttgctt 7680
atcactttat ctgctgcaac tgttaacctc agattaagca tttcagtaag gatcttatag 7740
atcacattca gtaaacaaat aggcctatat tgtctagtag aggtggctgg cttgctctta 7800
ggaaatagga taataactcc atagttctag cttgcctgca ttgcatagca tttccttaac 7860
gtcaccacct atcagatgcc acaaaggctt aaattttttt actgtaaatc catcaggacc 7920
aggagcggtg ttattcttca tgtagtttct ttcttttctt ttcttttgaa acatagtttc 7980
caaatatttt ttaagctact ttggttctca tttcagttag tagacgtcaa ggtttcatac 8040
aaaagctgat ttatagatta cttgcgttga atagctaacc aactaaaatg caccacgtat 8100
gctaatcaaa ccgatttcct tatggtaccc tgataaaaag cgtgctgttt ttttagaaaa 8160
taaatgttaa catgttaagt ggtttgatag gtcctaagat gattttaagt gaaaggaact 8220
aatcaaagca gcaaaagaaa gaaatatatc atatacctgg atggtagctc atgttttaat 8280
cttgtaaaag tgcttttact aaactgaatc gttttggatt agacatgttt attggctgtt 8340
gagtttgtga tccaaattct gaagaaggcg gccaagttgg cgagcgcgga tcgttttagg 8400
gtttcacctc tataaatatc tttgtaagcc gcaggagata tctatctcaa ttgtaaatct 8460
cttgcgatct gtaaccaccc gaaaatagtg agaagttgcc tgccggcgcc cgtggttttt 8520
tccccttcac tttggagggg ttttccacgt taaatccgtg tcttctctgt gattgatcct 8580
atttgtgtcg cattcattta taacattggc caaaaaaaac cttgtatcat tactgtttgc 8640
ttgaagaaat tctgtgattg catttttcct ttacatgttt gctccatcct ttgcatttca 8700
acttatttac tatatacaca aaccaatatt tcaggtaaat gtgagttgct tcagtaccaa 8760
agagagaggt cctgttcagc aagatgatta gaagcattgg catggcttgt taattatatt 8820
tgtggttctt agtctaaaat cacattgaag agggagatgg acccaagtga tgcagttcat 8880
gtgttacctg tatctgtctc tattttataa gctgtcatat attttctcga aactatcttg 8940
tgtggatttt gtgtgaagtg tacttttagt ggcacaggcc atgtatttcc ttggaaacga 9000
ccatgagagt ttgtatatgg acttattttc cccccatttt ctttcctgag atgggctgtg 9060
tatttgcttg aaagataggg ttggtattat ctttgtattt gaactctaaa tgcttaaatg 9120
aagtgatcat cctggatgga gatatgtatg gtgtgaaccc tattctcgat gccaacgtgt 9180
gtgggatttt ggtgcgagct cctgtagctc gtctttgtta tatcgatggt gttcacaata 9240
tatgcaggtt catctaacac gaatgatgaa actatatgca ggcggtgccg gtcagcagag 9300
ggttgcctga cgcggagaag agatgcaggc tttgctggct ctggaggaat tcgaacgtgt 9360
ggcacacaca gatgtgaagc aaagatacaa tacaacaagg tcttccgtag ccagtagtag 9420
ccagtaggga agaagaagaa aaacgacccg agtttctcaa ggttgtcaag ctcaaaagtt 9480
agaaaaaggg tcaacggagc tgattccctt cacaaaagtt acgtcagcaa taaattaccc 9540
cgttcattgc gaatggggtt agttaaaaaa agggtcaaca accaaaatta gcgtgcaaga 9600
ggagaaaact atgtagtata aaatgcgcat gagatcagaa gccacattaa tgcttctgtt 9660
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tttgacggtc tagtgccaca tttagtagat ggagggctct ctattttgca atatgcagat 9960
gacactttgt tgttttttta taatgattta gagaaagcag caaatctgaa atcgcttctt 10020
gtagcctttg agcaagtatc cagtttgaaa attaattacc ataaaagtga gctattctgg 10080
caaggtgaaa atcataagaa gaaatacatg cttgctatat ggaatccttt gccaacctaa 10140
ggatcaaggg ggttaggtat taacaactta gatttacaaa ataaatgctt gctaagtaat 10200
tggtttttca agctagttaa tgaggatgga ctttggtaaa gtatgttgtg gaataaatac 10260
cttaagagac acaccttgtc aaaagtatcc ttcaggcggt gattctcatt tctgatcggg 10320
aattatgaaa gtgaaacatt tgttttttta acctaggatc tttcatttta ggtaatagag 10380
aacaaataag attttgggag gacgtgtggt tgggagacca accactaatg aggcaatatc 10440
cttcactata tcatattgtg agacagaaaa gtaatattgt tgcgtctatc ttgagtacga 10500
cccctcaatg tttcgtttcg taggacgttg tgggtcagaa cataactttg tggtatgatc 10560
ttgttaatcg ggtggtgctc acctcgatga gctataatag agatgtcttt aagtggaggg 10620
taacatcttc acggtgcaat caatgtatca tattctaatt aataacggtc aaatgtttaa 10680
tcacaagctg atttggaaac taaatttacc ctaaagatta aaatcttttt gtggcatttg 10740
gttaaatgga tgttctaact aaggataacc taaccaaaac aaattcgaat gggaacaaaa 10800
aatgtgggtt ttgtaataca catgagtcta tttaacattt gtgtttagaa tgtaattttg 10860
ctcgccatat gtggaggttg tttcacttct gttttggtat gagtgtaccg aggtctgttc 10920
gtcatatttt tagtacgtgg ctcaccgcta ttgatttaag aactaagcgt cttgttatta 10980
catgtgtctc agtgttttgc tggactattt ggataagtag gaatgactta gtttttaata 11040
atgtttcaag ttttacttat ctgcagggtt tagattctgg gctcagccct cagctacaaa 11100
aagttgaagc tgatggagtt ttaataaaaa atgtttgtcg tcgcctggaa taggtggtca 11160
tgtaattttg tgttaatttt ggttagaggt tttctaatag tattactttg taataatctc 11220
ggtggtttta aaaaaaatca aaatatttta gtgtgatggt gtgtgactgt cccctcatag 11280
atcagtgtaa tataacaatt tgctaacctt ttttaggaga aagcagtaac tttttctcca 11340
ttatctaaaa aaattctttg gctagccttc gcgagtcgcc gtctcccagc cgcacgctct 11400
ctcgcccacg cacacacgat tccttctcgc gctctcg 11437
<210> 10
<211> 3129
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 10
atggagctcg ccttgggggc catgaccagc ttggccccta agcttggcga cctgctcatg 60
gagaagtatg tcgtgcagaa gggcctcaag cccgacatcg agtctctctc cagggagctt 120
gtgatgatga acgccgctct cgtcgacgcg tcccgggttc cacctgacca gctcaccgag 180
gtggaaaagc tctgggcacg caaggtccgg gacttgtcgt atgacatgga ggacgccgtc 240
gacgatttca tcctgcgtgt ggctggtggt gacgactctg ccgccgactc caaattcttc 300
aagaagaccc ttgccatggt caaggacgtg atgtcgatga agaagttcaa ggatcggtgc 360
cagatctccg acaaggtcaa agacatcaag aaactctcca acgagttagc tgaacttcgt 420
gccaagtaca cggtaagggg tgtgggtgct gatctcgccg cgagcaccgg catcgacacc 480
cgtgtcatca atctgtacaa gaaagagaca gatctcgttg gtatcgagga gtcaagggac 540
aaagtcatta ggatgctgtc tataggggcc aaagatgaag atgcacatga gttccatcag 600
gatctaaaga tagtgtctat agtcggggtt ggaggactag gtaagactac tctagccaaa 660
acagtgcatg acatgcttaa gaagcaattc gactgttgtg cttttatttc tattggtaga 720
actcctaatc tgaataggac attcgagaag atgctattgg aactcgatcg tgagtataaa 780
caagttgaca tggccagatg ggatctagaa caatttataa acgaactgga tgaattcttg 840
aaggacaaga ggtacttgat cgttgttgat gacatatggg atgttgactc atgggaagcg 900
atcaaatatg ccttaaagga caatagttgt ggaagtagaa taatcatgac tactcgcaat 960
tctgggtttg tcaagaaagt agaagaggtt tatagattaa aacctctttc taatgaaaac 1020
tccaagaaac tgttctacaa aagaatagag agtcaggaag gagaaagcct tgatggtgaa 1080
ctctctagta aaatcataca taaatgtggc ggcataccat tggctatcat tgcaatagct 1140
agtttgttgg ttgaaagatc aagtgaggag tggtcagaag tgtacgacaa gattggtctt 1200
gggaatgagg acaatacaac aaagataatg ttatacagct actatgatct gcctccttat 1260
ctcaagccat gtctgctgca actaagcata tatccagaag actgtttcat tgatacaaaa 1320
gctaccatat ggaagtggat aggtgaaggt ctagttcata ttgagaaaga ggagggtagc 1380
ctatttaagg ttggagaaag atacttcaag gagcttgtga atagaagcat gatccagccg 1440
atagagaaca taaatgattg gtttgtagaa gagttccgta ttcacgacat tgtgtttgat 1500
ctcatctgta agttgtccaa ggatgaagac ttcattagcc ttagcgggca acattcatct 1560
caggatagtt taagaagaga gaagaaaaca ggtgtgcctc gctcagactg caagctacgt 1620
cgtctggtcg tccgaaatca acgtgtgcag cgcttccctg aagaaaccat ggacatgcca 1680
gaggtgttga gatcacttag cattatagat tgtaatattg cggttgtggc cccaattgat 1740
agcttcaggg tttgccgtgt gctgtctata gtaaacaact acgtacccat cagcctaaag 1800
catctgggga agctgttgca tctcaagttc ctagagatag tatacacgcc tattgatgag 1860
ctccctaagg aaattgggca tctgaggtct cttcagacac tgatattagt ccgtactgga 1920
ctagacgagc tgccaccggc tctttgctcg cttacacggc tcatgtgtct gatagcctat 1980
ggcttcgaaa ggttgccagc tgataggatg gggaacctaa cgtccctgga ggagctacaa 2040
ctaaataggg tagttggccg gagtgccacc caagacctag tggcagagtt tggcaagctg 2100
acgaggttga gggtggtcag catcaccttt tcagagcagc tagaggagag cttgcaagaa 2160
gcattggtgc aatctctgtc caatctgcgg cgactccagg aactagagct tttgtgtaaa 2220
atgccagagc ggggaagcga tatgtgggga gactgggagc caccaaggca gctccggcgc 2280
ctgattattg aaggcatcga cttctcacgg cagcctcgat ggatcaaccg ctcctgcctg 2340
ccacgcctct gctccttata tctgagggtg cacgctcttg aagcacagga cctagataat 2400
ctagcgaggt tgccagagct ccagtacctc cagctatttg gtctcagctt tcctccaagg 2460
tatactgttg gcccagacga cttcaggaat ctgaggttct gcgaagtggg cacaacgttc 2520
gagtttcgta agggcgccat gccaaggctt gaagtgctgc gatttggagt ttatgcaggg 2580
tactggagtt gggaagagaa tggtgtgccg ttcgagcagt tcccaacgaa ggatgtgatc 2640
gaagatcttc acttggacct ggataacgtc cttttacttc agcaagtaat agtcaaagtc 2700
aactgcttag gtgctactgc cgcacaagtg gaggaggtgg aggccgtggt catgcgtgcc 2760
gtggaaaatc atgccaaccg tccaaccata aaaatggatc gagtatatga agaaaatatc 2820
ttatctgatg aaaagtggga ggctctgctt cggcgacaca ttgaagagga ttgctgcgtg 2880
cgcacgatga aggataaatc taatgctttc ttcatcagcc agctgtggtt atatcgacat 2940
cttcaggaag ccattatttt catcgactgt tcgggtgcca gcatgtgtga ggtgcagaaa 3000
gtggaagcag cttatagaca tgcagccgag gttcatccta accatccaag tattgaactt 3060
atcagaacaa acaccgacgg aatggcctcc tcctcatctg accatcccaa cacagagccc 3120
aggaattga 3129
<210> 11
<211> 1042
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 11
Met Glu Leu Ala Leu Gly Ala Met Thr Ser Leu Ala Pro Lys Leu Gly
1 5 10 15
Asp Leu Leu Met Glu Lys Tyr Val Val Gln Lys Gly Leu Lys Pro Asp
20 25 30
Ile Glu Ser Leu Ser Arg Glu Leu Val Met Met Asn Ala Ala Leu Val
35 40 45
Asp Ala Ser Arg Val Pro Pro Asp Gln Leu Thr Glu Val Glu Lys Leu
50 55 60
Trp Ala Arg Lys Val Arg Asp Leu Ser Tyr Asp Met Glu Asp Ala Val
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ile Leu Arg Val Ala Gly Gly Asp Asp Ser Ala Ala Asp
85 90 95
Ser Lys Phe Phe Lys Lys Thr Leu Ala Met Val Lys Asp Val Met Ser
100 105 110
Met Lys Lys Phe Lys Asp Arg Cys Gln Ile Ser Asp Lys Val Lys Asp
115 120 125
Ile Lys Lys Leu Ser Asn Glu Leu Ala Glu Leu Arg Ala Lys Tyr Thr
130 135 140
Val Arg Gly Val Gly Ala Asp Leu Ala Ala Ser Thr Gly Ile Asp Thr
145 150 155 160
Arg Val Ile Asn Leu Tyr Lys Lys Glu Thr Asp Leu Val Gly Ile Glu
165 170 175
Glu Ser Arg Asp Lys Val Ile Arg Met Leu Ser Ile Gly Ala Lys Asp
180 185 190
Glu Asp Ala His Glu Phe His Gln Asp Leu Lys Ile Val Ser Ile Val
195 200 205
Gly Val Gly Gly Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Lys Thr Val His Asp
210 215 220
Met Leu Lys Lys Gln Phe Asp Cys Cys Ala Phe Ile Ser Ile Gly Arg
225 230 235 240
Thr Pro Asn Leu Asn Arg Thr Phe Glu Lys Met Leu Leu Glu Leu Asp
245 250 255
Arg Glu Tyr Lys Gln Val Asp Met Ala Arg Trp Asp Leu Glu Gln Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Leu Asp Glu Phe Leu Lys Asp Lys Arg Tyr Leu Ile Val
275 280 285
Val Asp Asp Ile Trp Asp Val Asp Ser Trp Glu Ala Ile Lys Tyr Ala
290 295 300
Leu Lys Asp Asn Ser Cys Gly Ser Arg Ile Ile Met Thr Thr Arg Asn
305 310 315 320
Ser Gly Phe Val Lys Lys Val Glu Glu Val Tyr Arg Leu Lys Pro Leu
325 330 335
Ser Asn Glu Asn Ser Lys Lys Leu Phe Tyr Lys Arg Ile Glu Ser Gln
340 345 350
Glu Gly Glu Ser Leu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Lys Ile Ile His Lys
355 360 365
Cys Gly Gly Ile Pro Leu Ala Ile Ile Ala Ile Ala Ser Leu Leu Val
370 375 380
Glu Arg Ser Ser Glu Glu Trp Ser Glu Val Tyr Asp Lys Ile Gly Leu
385 390 395 400
Gly Asn Glu Asp Asn Thr Thr Lys Ile Met Leu Tyr Ser Tyr Tyr Asp
405 410 415
Leu Pro Pro Tyr Leu Lys Pro Cys Leu Leu Gln Leu Ser Ile Tyr Pro
420 425 430
Glu Asp Cys Phe Ile Asp Thr Lys Ala Thr Ile Trp Lys Trp Ile Gly
435 440 445
Glu Gly Leu Val His Ile Glu Lys Glu Glu Gly Ser Leu Phe Lys Val
450 455 460
Gly Glu Arg Tyr Phe Lys Glu Leu Val Asn Arg Ser Met Ile Gln Pro
465 470 475 480
Ile Glu Asn Ile Asn Asp Trp Phe Val Glu Glu Phe Arg Ile His Asp
485 490 495
Ile Val Phe Asp Leu Ile Cys Lys Leu Ser Lys Asp Glu Asp Phe Ile
500 505 510
Ser Leu Ser Gly Gln His Ser Ser Gln Asp Ser Leu Arg Arg Glu Lys
515 520 525
Lys Thr Gly Val Pro Arg Ser Asp Cys Lys Leu Arg Arg Leu Val Val
530 535 540
Arg Asn Gln Arg Val Gln Arg Phe Pro Glu Glu Thr Met Asp Met Pro
545 550 555 560
Glu Val Leu Arg Ser Leu Ser Ile Ile Asp Cys Asn Ile Ala Val Val
565 570 575
Ala Pro Ile Asp Ser Phe Arg Val Cys Arg Val Leu Ser Ile Val Asn
580 585 590
Asn Tyr Val Pro Ile Ser Leu Lys His Leu Gly Lys Leu Leu His Leu
595 600 605
Lys Phe Leu Glu Ile Val Tyr Thr Pro Ile Asp Glu Leu Pro Lys Glu
610 615 620
Ile Gly His Leu Arg Ser Leu Gln Thr Leu Ile Leu Val Arg Thr Gly
625 630 635 640
Leu Asp Glu Leu Pro Pro Ala Leu Cys Ser Leu Thr Arg Leu Met Cys
645 650 655
Leu Ile Ala Tyr Gly Phe Glu Arg Leu Pro Ala Asp Arg Met Gly Asn
660 665 670
Leu Thr Ser Leu Glu Glu Leu Gln Leu Asn Arg Val Val Gly Arg Ser
675 680 685
Ala Thr Gln Asp Leu Val Ala Glu Phe Gly Lys Leu Thr Arg Leu Arg
690 695 700
Val Val Ser Ile Thr Phe Ser Glu Gln Leu Glu Glu Ser Leu Gln Glu
705 710 715 720
Ala Leu Val Gln Ser Leu Ser Asn Leu Arg Arg Leu Gln Glu Leu Glu
725 730 735
Leu Leu Cys Lys Met Pro Glu Arg Gly Ser Asp Met Trp Gly Asp Trp
740 745 750
Glu Pro Pro Arg Gln Leu Arg Arg Leu Ile Ile Glu Gly Ile Asp Phe
755 760 765
Ser Arg Gln Pro Arg Trp Ile Asn Arg Ser Cys Leu Pro Arg Leu Cys
770 775 780
Ser Leu Tyr Leu Arg Val His Ala Leu Glu Ala Gln Asp Leu Asp Asn
785 790 795 800
Leu Ala Arg Leu Pro Glu Leu Gln Tyr Leu Gln Leu Phe Gly Leu Ser
805 810 815
Phe Pro Pro Arg Tyr Thr Val Gly Pro Asp Asp Phe Arg Asn Leu Arg
820 825 830
Phe Cys Glu Val Gly Thr Thr Phe Glu Phe Arg Lys Gly Ala Met Pro
835 840 845
Arg Leu Glu Val Leu Arg Phe Gly Val Tyr Ala Gly Tyr Trp Ser Trp
850 855 860
Glu Glu Asn Gly Val Pro Phe Glu Gln Phe Pro Thr Lys Asp Val Ile
865 870 875 880
Glu Asp Leu His Leu Asp Leu Asp Asn Val Leu Leu Leu Gln Gln Val
885 890 895
Ile Val Lys Val Asn Cys Leu Gly Ala Thr Ala Ala Gln Val Glu Glu
900 905 910
Val Glu Ala Val Val Met Arg Ala Val Glu Asn His Ala Asn Arg Pro
915 920 925
Thr Ile Lys Met Asp Arg Val Tyr Glu Glu Asn Ile Leu Ser Asp Glu
930 935 940
Lys Trp Glu Ala Leu Leu Arg Arg His Ile Glu Glu Asp Cys Cys Val
945 950 955 960
Arg Thr Met Lys Asp Lys Ser Asn Ala Phe Phe Ile Ser Gln Leu Trp
965 970 975
Leu Tyr Arg His Leu Gln Glu Ala Ile Ile Phe Ile Asp Cys Ser Gly
980 985 990
Ala Ser Met Cys Glu Val Gln Lys Val Glu Ala Ala Tyr Arg His Ala
995 1000 1005
Ala Glu Val His Pro Asn His Pro Ser Ile Glu Leu Ile Arg Thr
1010 1015 1020
Asn Thr Asp Gly Met Ala Ser Ser Ser Ser Asp His Pro Asn Thr
1025 1030 1035
Glu Pro Arg Asn
1040
<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 12
gcacgctcca ggttaatggc tgg 23
<210> 13
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 13
gcagctgaaa ttgagcctcc cgg 23
<210> 14
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 14
gattagtctc ggcatacgta cgg 23
<210> 15
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 15
ggataatggc gtacgtattg cgg 23
<210> 16
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 16
gtttcgaaca gaacgtacgc agg 23
<210> 17
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 17
ggctaggcgt gtcaccataa tgg 23
<210> 18
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 18
gaatacgaaa ctataccgcg ggg 23
<210> 19
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 19
gactacctct gggggtacgt agg 23
<210> 20
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 20
gacggggact taattatgcg tgg 23
<210> 21
<211> 23
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 21
gcgatccgtc acttgtatat cgg 23
<210> 22
<211> 50
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 22
aaccagcagc caaaggacaa gacaagagac acaacgaaag gaaaggaacc 50
<210> 23
<211> 50
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 23
caactagtgg gccagatatc accagccgga aattagcaaa aatgctacgg 50
<210> 24
<211> 12662
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 24
atttaatgag acctgtccat tccgcaggcg gcgtgcctgt ccattccact ggcaggcgat 60
gtgctacctc cgcatttaat gagacctgtc cattccgctg gcaggcagcg acctgtccat 120
cccacaggcg gcatgcatgt ccgttccatt ggcagactgc atgcccatac cgccgcgtgc 180
actacgccca tcattactcg tatgttacca aggaagctgc cactgcatgt caacactgcg 240
cgtactgcgg acaacatggg cctggagatt gcacagacgt cacctgcatt agttgctcta 300
ggtattccat tcattatgtt cctgggccca catgttgggg ctcagcaccc ttgtatgtgc 360
ctcccttgag ctataaaagg gaaggcacac aacgttacaa ggcaagctct caagtcactc 420
agacttactt agaccctcga gaagttctcc aagctctcga gtatcagcaa tactacatag 480
tggagaaggg ttttacgctc cggtggcctg aaccactcta aactcttgtg tgctctcgtg 540
ctttcatcga ccatctagca gacaggcaaa acgcttaggc cccctcctca tcttaggatt 600
tagggcgggt gcgttccgcc acccggctag agatttcctc tccgacactc acatacttcc 660
acgtcttgct cacaaatgct cgacaagacc attttgtagt gtgcaagacc tttcctagcg 720
acgaagattg aagtgattaa tcacccaatc cgagtgtcct tcaatgagtt ggcacggttc 780
aaatgcagaa ctactctctc cgaaattggt atttgctgca aagtcgcctt cgtcttcgac 840
aatcatgtta tgcattatta tgcatgcagt tattatctca gtaagacagt tgcaatccca 900
accgtacgca ggatcacgta gcaccaccca gcgtgcttga agaactccaa atgggcactc 960
aatatccttc ctgtaacttt cctacatttg tctgaaatat atcttttttt cctcataagg 1020
gtgtctaatg gctttcacaa aagttggcca gttcagatat atgccattag ctaggtaata 1080
accaaagttg tatgcatgat cgttgattat gtaatgaatg ggtggcattc gaccgcttgt 1140
catagggtca aataccggcg atcaatgtag cacgttcacg tcattgtttg ttctaggcat 1200
gccaaaaaaa agtatgccaa atctagagat cgtacgttgc gacagcctcg agtatcatgg 1260
taggtcttaa atttcgacca cagaactatc ctcgccacgc ggttggacag ttcctccact 1320
cccaatgcat gcaatctatg gaacccaaca ttcctggaaa ccccctcgac tcgctattgt 1380
gcatgatgcg tgcaatgtct gcttcattag gagttcgtag ataccaccca ctaaaatatg 1440
caattaatgc acgatagaaa tgaataaggc attccctaac ggtagactcc cctatttgaa 1500
tgtactcgtc tacgacatca gtaggtaaga tgtaagcaag gatccgcatt gctgcacata 1560
ctttttgaag tggttcgagt ccagctaggc cagtagcgtc gacccgttga gtaaagtaac 1620
tatcctgctg ttgcagtcct tccataatgc ggaggaacaa tgaactactc atgcggaacc 1680
tataaaatgt aataggtaaa gtatgaaaga cactgttaat gcaaaactta ataatacaag 1740
tatgtagttg ttaccttctg cgaaacacgt ggggtggata cacgagattt agccgaagta 1800
gtgatggtgg atgagattct ctccagcata atgatccctg tgaatcacgc ggcgggggat 1860
accggaacgt ctacacctac ggtgtgtagc cttaatggtg agggtaagaa gagtggcaag 1920
cataagtgtg ttgtcgtcac tatcactcga atcggaatca tcgtccctac gcaaagacga 1980
cacaacgtac aaagtcttgt tagcttgagt tgaggagtga gatgtgcaca caaatgggaa 2040
gagcacgtac ccatatgtat agacgagatg gagttagctt gtgttgcaag ctcgtgtctt 2100
gcactgaaag cctcatgtgt cttgctgtgt atggttgtcg catgggtgct tgcaatggaa 2160
tttggtcgaa tattcatgtc atatttcaat cgtgctgaaa tattgggtgc caacagattc 2220
ataatgcatt ggaagggagg cttgcagtgt acggttgttg cgtatgtgct tgcgaaggaa 2280
aagcttcgaa cgataatgca gatcaactat gagcatgggt atggtccaat aacatcgatg 2340
gtaattacaa aacgaaaaat aattacttcg ttgttggtaa tggtatatga tgaatacgaa 2400
tttaataaat attcaccaga aatatgtacg acacaatata tttaattatg agttttttaa 2460
aatttagaaa ttaaataata ggtaattata cgtattatgt gtcccacaat aacttataga 2520
gattatatgt ctaattgaaa aattaattca attattcaat ggatttatac gttaagaaaa 2580
taaaaattga aaaaatatgg tagttaatga tagttggatt gatatatata tattttatgc 2640
gtagaggata tataaaggaa tatatagacg gaatagttac agaaagattg aatatagtgg 2700
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ggctgcagat acagctggcc atgctatcaa tagattagta cttggttgcc acttgccagt 2820
agccgcactt tcctcgatat gcccaagcga gagagagaga ttcctaagtt gattcttctg 2880
tggatgaaga tgaaatctac ttctgaaatc ttgccaaccg tccaactctg tttgatctaa 2940
tttctatatc ctccggccac caagttcgtg tcaaataagc gagcacagct aggtaagtag 3000
ctgattcgaa ttccaacaaa acatctcatc ccttttagtc tcttgtgcta gatcttatgc 3060
gtctgcaacc ttgggagcta gctagccatg gagttcgcaa ctggagcgct aggcaccctt 3120
cttcccaagc tctccatgcc caagcgagcg agagagagag agattcctta gttgattctt 3180
ctgtggatga agatgaaatc tacttctgaa atcttgccac cgtccaactc tgtttgatct 3240
aatctctata tcctccggcc accaagttcg tgtcaaataa gcgagcacag ctaggtaagc 3300
agctgattcg aattccaaca aaacattgta tcccttttag gccgtgtttg ttttggcttc 3360
tggcagcttc tggtcattaa aagctgctgc aaactgtcaa acgcttagct tttcagccag 3420
tttctataaa attcgttgag gcaaaaatca tccaaaatca acataaacac ataaccggtt 3480
gagtcgttgt aataatagga atccgtcact ttctagatcc tgagtcatat gaacaacttt 3540
atcttcgttc acacgtaatc gtattgatac tcagcttctc actacagaca gattctcctc 3600
ataatcagat tttcaaaaaa actgaataga aaaaagctaa accaaacgtg ccttagtctg 3660
ttgcgctaga tctcatgcgt ctgcaacctt gggagctagc tagccatgga gttcgcaact 3720
ggagcgctag gcacccttct tctcaagctc tccatgctgc ttcatggtga gtacaacctg 3780
gagaagggcg tcagggggga catccagcgc gtcatgaaca agctcgagcg ggttcattct 3840
gtcctcggcc atgttgtcga agtgcctgtg ccactgaagc cacgtcctga tctggtcaga 3900
atgttggcac gcagcgtcag ggagctatcc tacgacatgg aggacttcgt cgacaccttc 3960
ctggtgcgtg tccaaggccc tgaacgcacc agcaaaagaa gcgccaaaat attcatgaat 4020
aagacatata tggtcgtgaa tcgccatgag atcgcccaga ccatcaagga cttcgaagag 4080
cgcgtccagc agatagatga gcgtcgtcaa aggtcattga aacacttaat ttccactttg 4140
gcttgcgtgc atatgaactt tcacctttac tgtctttctt ccattttatt tccttttctg 4200
gttctaacag gtacgatgtt gatgctatgg ttccccgtgt caaaaccttg gttgatcctc 4260
gcatatttgc tctgaagtac accaaggcca cggaccttgt cggcatggat gaggcaaggg 4320
aggaactaat cacaaggttg accaaggaag atgacacctc cactgaacaa aggcgagtct 4380
ctatcgttgg ttttggagga cttggcaaga cagcgcttgc aaaagcagtt tatgacaaac 4440
ttaaagctaa aggggaattc cattgcgcgg cctttgtgtc ggtgtctcgg tttcctcagc 4500
tcgaaaaatt cttcaaggaa ttgctttatg agcttgacga gactgagtac aaggaactta 4560
ttgacatcag caccccattg gaacttatga atctagtgca tgaattcctt cataataaga 4620
ggtacacgcg tacatgtacc acacctagtg tgcattatat gttcattcca cggaaatatc 4680
catattatag agtaatatgc ttatatatat tattgcaatt catatcttta gctatgctta 4740
cattacttct ccaattaata caataaatat aggtacctta ttgctgtcga tgacatatgg 4800
gatactgacg catgggcaat gatacaatgg gcttttcctg agaataagct aggaagcaga 4860
ataatcgcaa ctactcgcag aattgatgtt gctgagtatg taggtggttg ctatatgatg 4920
aaacctctta ctcgagagaa atcaaatata ttattctatg gacgaatatt tggctctgaa 4980
ggtaaatgtc ctcctgaact ttctgatgcg tctgagaaaa tattgaataa atgcggaggc 5040
gtgccattgg ctattattac tacatctagc ttgctggcta gtaagtcaag aaacataaaa 5100
gaatggtaca atgttgctga ttctattggt tccagaatac taaaaaacag tactgaaatg 5160
gagaatttga ggaacatact gctgcttagc tattatgatc taccagcacg attaaagaca 5220
tgtttgttat atctgagtat tttccctgaa gattgtgaga ttgggatgca tcggttaata 5280
tggaggtgga tagctgaagg ttttttcaat ggagaactag cacatgatgg gctctttaac 5340
cttggcgaat cttgtttcca cgagctcata agaagaagca tggtgcagcc agtaacactt 5400
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tacatgtcac acgaagaaga atttgtttct gcagtcaatg aaaagtttgg tcttctagat 5520
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catccacggc tggcacaatt gaggtcactt aatgccattg gatgtcctat atacgcgata 5640
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gaaggccatg atcttgttca tcttgggaaa ttgcatcacc tcaagttcct tgggctaaga 5760
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gacctcgatg gaactggtgt ggaagaatta cctcaagcct tgcataatct tacagaattg 5880
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tatttgctca atatattgtc tccgttcttt ttttttattt gacgtggttg attatttttt 7380
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tc 12662
<210> 25
<211> 6102
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 25
atggagttcg caactggagc gctaggcacc cttcttctca agctctccat gctgcttcat 60
ggtgagtaca acctggagaa gggcgtcagg ggggacatcc agcgcgtcat gaacaagctc 120
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<210> 26
<211> 2033
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 26
Met Glu Phe Ala Thr Gly Ala Leu Gly Thr Leu Leu Leu Lys Leu Ser
1 5 10 15
Met Leu Leu His Gly Glu Tyr Asn Leu Glu Lys Gly Val Arg Gly Asp
20 25 30
Ile Gln Arg Val Met Asn Lys Leu Glu Arg Val His Ser Val Leu Gly
35 40 45
His Val Val Glu Val Pro Val Pro Leu Lys Pro Arg Pro Asp Leu Val
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65 70 75 80
Phe Val Asp Thr Phe Leu Val Arg Val Gln Gly Pro Glu Arg Thr Ser
85 90 95
Lys Arg Ser Ala Lys Ile Phe Met Asn Lys Thr Tyr Met Val Val Asn
100 105 110
Arg His Glu Ile Ala Gln Thr Ile Lys Asp Phe Glu Glu Arg Val Gln
115 120 125
Gln Ile Asp Glu Arg Arg Gln Arg Tyr Asp Val Asp Ala Met Val Pro
130 135 140
Arg Val Lys Thr Leu Val Asp Pro Arg Ile Phe Ala Leu Lys Tyr Thr
145 150 155 160
Lys Ala Thr Asp Leu Val Gly Met Asp Glu Ala Arg Glu Glu Leu Ile
165 170 175
Thr Arg Leu Thr Lys Glu Asp Asp Thr Ser Thr Glu Gln Arg Arg Val
180 185 190
Ser Ile Val Gly Phe Gly Gly Leu Gly Lys Thr Ala Leu Ala Lys Ala
195 200 205
Val Tyr Asp Lys Leu Lys Ala Lys Gly Glu Phe His Cys Ala Ala Phe
210 215 220
Val Ser Val Ser Arg Phe Pro Gln Leu Glu Lys Phe Phe Lys Glu Leu
225 230 235 240
Leu Tyr Glu Leu Asp Glu Thr Glu Tyr Lys Glu Leu Ile Asp Ile Ser
245 250 255
Thr Pro Leu Glu Leu Met Asn Leu Val His Glu Phe Leu His Asn Lys
260 265 270
Arg Tyr Leu Ile Ala Val Asp Asp Ile Trp Asp Thr Asp Ala Trp Ala
275 280 285
Met Ile Gln Trp Ala Phe Pro Glu Asn Lys Leu Gly Ser Arg Ile Ile
290 295 300
Ala Thr Thr Arg Arg Ile Asp Val Ala Glu Tyr Val Gly Gly Cys Tyr
305 310 315 320
Met Met Lys Pro Leu Thr Arg Glu Lys Ser Asn Ile Leu Phe Tyr Gly
325 330 335
Arg Ile Phe Gly Ser Glu Gly Lys Cys Pro Pro Glu Leu Ser Asp Ala
340 345 350
Ser Glu Lys Ile Leu Asn Lys Cys Gly Gly Val Pro Leu Ala Ile Ile
355 360 365
Thr Thr Ser Ser Leu Leu Ala Ser Lys Ser Arg Asn Ile Lys Glu Trp
370 375 380
Tyr Asn Val Ala Asp Ser Ile Gly Ser Arg Ile Leu Lys Asn Ser Thr
385 390 395 400
Glu Met Glu Asn Leu Arg Asn Ile Leu Leu Leu Ser Tyr Tyr Asp Leu
405 410 415
Pro Ala Arg Leu Lys Thr Cys Leu Leu Tyr Leu Ser Ile Phe Pro Glu
420 425 430
Asp Cys Glu Ile Gly Met His Arg Leu Ile Trp Arg Trp Ile Ala Glu
435 440 445
Gly Phe Phe Asn Gly Glu Leu Ala His Asp Gly Leu Phe Asn Leu Gly
450 455 460
Glu Ser Cys Phe His Glu Leu Ile Arg Arg Ser Met Val Gln Pro Val
465 470 475 480
Thr Leu Glu Gly Thr Gly Leu Val Tyr Ala Cys Arg Val His Asn Met
485 490 495
Phe His Asp Leu Ile Leu Tyr Met Ser His Glu Glu Glu Phe Val Ser
500 505 510
Ala Val Asn Glu Lys Phe Gly Leu Leu Asp Val Arg Ser Arg Arg Leu
515 520 525
Ala Phe Gln Asn Ile Thr Lys Glu Gln Tyr Arg Leu Val Glu His Pro
530 535 540
Arg Leu Ala Gln Leu Arg Ser Leu Asn Ala Ile Gly Cys Pro Ile Tyr
545 550 555 560
Ala Ile Pro Pro Ile Glu Ser Tyr Lys Leu Leu Arg Val Leu Asp Phe
565 570 575
Glu Asn Cys Ala Gly Ile Glu Gly His Asp Leu Val His Leu Gly Lys
580 585 590
Leu His His Leu Lys Phe Leu Gly Leu Arg Asn Thr Phe Ile Gly Lys
595 600 605
Leu Pro Glu Gly Ile Gly Asn Leu Lys Phe Leu Gln Thr Leu Asp Leu
610 615 620
Asp Gly Thr Gly Val Glu Glu Leu Pro Gln Ala Leu His Asn Leu Thr
625 630 635 640
Glu Leu Met Cys Leu Ile Ala Asp Trp Arg Thr Arg Val Pro Asn Trp
645 650 655
Ile Gly Asn Leu Thr Ser Leu Gln His Leu Val Ile Tyr Pro Gly Gly
660 665 670
His Asp Asp Glu Asp Ser Ala Ser Arg Phe Val Asn Glu Leu Gly Lys
675 680 685
Leu Arg Gln Leu Arg Val Leu Arg Phe Leu Ile Lys Ala Gln Asp Glu
690 695 700
Gly Gln Leu Arg Asp Leu Leu Glu Ser Leu Ser Asn Leu Pro Glu Ile
705 710 715 720
Glu Ala Ile His Phe Asp Tyr Tyr Gly Val Gln Leu Asn Arg Gly Val
725 730 735
Gln Leu Glu Pro Glu Gly Tyr Ala Leu Ser Arg His Ile Arg Ser Met
740 745 750
Glu Leu Arg Trp Leu Glu Phe Ser Arg Leu Pro Leu Trp Ile Asn Pro
755 760 765
Gly Gln Leu Pro Asn Leu Tyr His Leu Trp Leu Met Val Ser Asp Ala
770 775 780
Glu Glu Arg Asp Leu Glu Ile Leu Gly Gly Phe Pro Val Leu His Ser
785 790 795 800
Leu His Leu Leu Ile Val Asn Thr Glu Arg Glu Asp Val Met Thr Cys
805 810 815
Gly Cys Gly Gly Phe Lys Asn Leu Lys Cys Cys Ser Ile Thr Lys Pro
820 825 830
Leu Lys Phe Val His Gly Ala Met Pro Arg Leu Glu Val Leu Asp Phe
835 840 845
His Phe Ser Val Gln Leu Leu Thr Asp Ser Asn Gln Glu Phe Asp Phe
850 855 860
Asp Phe Gly Leu Gly Asn Leu His Trp Leu Gln Gln Ala Ile Val Gln
865 870 875 880
Ile Thr Ala Leu Gly Glu Glu Val Glu Ser Val Gly Arg Ala Gln Val
885 890 895
Ala Leu Arg Asp Ala Ile Arg Thr His Pro Asn Arg Pro Thr Leu Glu
900 905 910
Ile Asn Leu Phe Gly Gln Thr Ile Pro Pro Glu Leu Pro Lys Gln Asp
915 920 925
Asp Asp Gly Ala Lys Ile Val Glu Ile Ser Pro Ala Glu Ser Ser Arg
930 935 940
Gln Ala Gln Glu Arg Glu Lys Arg Ser Ile Asp Val Ala Thr Lys Lys
945 950 955 960
Ala Thr Arg Val Pro Ser Phe Tyr Thr Lys Ser Ser Ile Asp Glu Pro
965 970 975
Met Asp Gln Leu Ile Asn Met Leu Ser Val Val Asp Asp Glu Ala Tyr
980 985 990
Thr Lys Asn Ile Lys Ile Leu Ser Ile Val Arg Ser Glu Gly Leu Gly
995 1000 1005
Lys Thr Thr Leu Ala Gln Lys Ala Phe Glu Glu Leu His Ser Gln
1010 1015 1020
Phe Asp Arg Gly Ala Phe Val Leu Leu Gly Gln Asn Pro Asp Leu
1025 1030 1035
Arg Arg Val Phe Ala Asp Ile Leu Arg Gly Leu Asp Lys Gln Arg
1040 1045 1050
Tyr Ile Asp Phe Pro Val Ala Ile Leu Asp Leu Val Asp Leu Ile
1055 1060 1065
Trp Leu Val Arg Lys Ser Leu Ile Asn Lys Arg Phe Phe Ile Val
1070 1075 1080
Phe Asp Asp Ile Cys Asp Val Lys Ala Trp Glu Ile Ile Lys Cys
1085 1090 1095
Ala Leu Ile Glu Asn Asn Asn His Ser Val Val Leu Thr Thr Ser
1100 1105 1110
Arg Asn Thr Gly Ile Thr Glu Ile Ile Gly Gly Ser Lys Gln Leu
1115 1120 1125
Gln Pro Leu Ser Ala Thr Ile Ser Lys Asn Leu Leu Cys Lys Arg
1130 1135 1140
Leu Phe Gly Ser Ala Gly Lys Cys Pro Ser Glu Leu Val Asn Ile
1145 1150 1155
Cys Asp Asn Leu Val Glu Glu Cys Gly Gly Ile Leu Ser Val Ile
1160 1165 1170
Asp Glu Thr Val Thr Leu Leu Ala Ser Ile Pro Pro Thr Val Glu
1175 1180 1185
Asn Trp Glu Ala Val Tyr Ala Arg Arg Met Leu Asp Arg Ser Tyr
1190 1195 1200
Pro Gly Leu Thr Asp Ser Leu Lys Asn Cys Leu Leu Tyr Phe Thr
1205 1210 1215
Met Phe Arg Arg Gly His Glu Ile Ser Gly Glu His Leu Ile Cys
1220 1225 1230
Ala Trp Ile Ala Glu Gly Phe Val His Gly Gln Glu Val Ala Glu
1235 1240 1245
Thr Tyr Leu Ser Asp Leu Val Lys Lys Lys Leu Ile Asp Ala Val
1250 1255 1260
Glu Val Asp Ala Gly Gly Lys Val Leu Thr Cys Arg Met Tyr Asp
1265 1270 1275
Leu Val His Asp Phe Ile Val Ser Lys Ser Ile Glu Glu Arg Phe
1280 1285 1290
Val Tyr Ile Leu Asn Asp Ser Glu Gly Arg Asp Leu Ser Glu Ala
1295 1300 1305
Val His Val His Gln Arg Leu Tyr Ile Gln Gly His Asn Asn Lys
1310 1315 1320
Glu Leu Asp Leu Gln Ile Pro Trp Leu Pro Gln Val Lys Ser Leu
1325 1330 1335
Val Ser Cys Gly Thr Ala Pro Ser Ile Leu Lys Phe Lys Gly Leu
1340 1345 1350
His Val Met Asp Leu Gly Ala Cys Glu Ser Leu Gln Ala Ser His
1355 1360 1365
Leu Lys Gly Ile Asn Asn Val Ser Ser Leu Arg Tyr Leu Val Ile
1370 1375 1380
Gly Gly Lys Cys Ile Ser Gly Ile Pro Lys Glu Ile Ala Lys Leu
1385 1390 1395
Glu His Leu Arg Thr Leu Asp Leu Ser Ala Ser Gly Leu Asn Glu
1400 1405 1410
Leu Pro Glu Tyr Val Phe Met Ile Arg Lys Leu Glu Arg Leu Ile
1415 1420 1425
Val Asn Ser Gln Met Lys Ile Ser Tyr Gly Ile Ala Lys Met Ser
1430 1435 1440
Ala Leu Gln Glu Leu Gly Asp Ile Asn Val Thr Asp Pro Glu Leu
1445 1450 1455
Leu Lys Ser Leu Cys Lys Leu Thr Lys Leu Arg Val Leu Arg Ile
1460 1465 1470
Ser Ile Trp Ser Trp Asp Asp Ser Leu Lys Asn Tyr Phe Lys Gln
1475 1480 1485
Leu Cys Asp Asn Leu Arg Ser Leu Val Gln Cys Thr Glu Asn Ile
1490 1495 1500
Gln Ser Leu Ser Ile Met Thr Cys Cys Ser Leu Val Phe Met Asp
1505 1510 1515
Asp Leu Gly Glu Asn Trp Thr Pro Gln Cys Leu Gln Lys Leu Glu
1520 1525 1530
Val Gly Cys Ser Ala Phe Asp Ile Leu Pro Ser Trp Phe Gly Ser
1535 1540 1545
Leu Ser Ser Ile Ser Thr Leu Thr Ile Glu Val Tyr Lys Leu Ser
1550 1555 1560
Gln Asp Ile Ile Asp Thr Leu Gly Arg Leu Ala Gly Leu Gly Ser
1565 1570 1575
Leu Ser Leu Thr Ser Lys Gln Val Pro Lys Gly Tyr Phe Val Ile
1580 1585 1590
Gly Ser Asp Arg Phe Asn Lys Leu Gln Ser Leu Lys Phe Val Ser
1595 1600 1605
Asn Ala Met Val Glu Met Phe Pro Arg Gln Gln Ser Asn Gly Thr
1610 1615 1620
Glu Gln Leu Lys Arg Leu Met Ile Val Phe His Ala Ser Arg Thr
1625 1630 1635
Gln Asp Val Asn Lys Asp Phe Cys Phe Gly Leu Glu Asn Leu Ser
1640 1645 1650
Ser Leu Glu His Val Arg Val Glu Ile Ile Cys Phe Asp Ala Ser
1655 1660 1665
His Asn Met Val Lys Asn Ala Glu Ala Ala Val Gln Lys Ala Ile
1670 1675 1680
Ser Gly Thr Ser Ile Ala Asn Leu Glu Ile Arg Arg Leu Gln Glu
1685 1690 1695
Asn Ser Met Thr Gln Asp Glu Ala Asp Leu Cys Asp Ala Val Gln
1700 1705 1710
Glu Gln Asn Asn Gln Lys His Gln Lys Met Lys Arg Ile Tyr Ala
1715 1720 1725
Thr Gly Asp Trp Gln Leu Glu Ile Ala His Ser Ser Met Glu Ser
1730 1735 1740
Gln Asp Gly Tyr Leu Thr Ser Leu Pro Asn Gln Glu Ser Ala Asp
1745 1750 1755
Val Val Gly Ser Asp Ser Ile Val Glu Pro Leu Val Asn Glu Met
1760 1765 1770
Asn Ser Gln Thr Ile Lys Arg Asp Gln Ser Thr Asn Phe Ser Glu
1775 1780 1785
Asp Glu Asp Leu Met Leu Val Ser Ser Tyr Leu Asn Val Ser Lys
1790 1795 1800
Asp Ser Ile Thr Gly Arg Asp Lys Lys Glu Gly Thr Phe Trp Glu
1805 1810 1815
Arg Val Trp Glu Tyr Tyr Asn Lys Asn Arg Thr Phe Glu Ser Asp
1820 1825 1830
His Ser Trp Ser Ser Leu Lys His Arg Trp Leu Ala Ile Gln Lys
1835 1840 1845
Glu Val Asn Ile Phe Gln Gly Tyr Tyr Asp Ala Ile Glu Arg Lys
1850 1855 1860
Asn Gln Ser Gly Gln Thr Ser Asp Asp Lys His Ala Glu Ala Glu
1865 1870 1875
Val Glu Phe Arg Glu Lys Gln Gly Lys Ala Phe Ser Val Phe His
1880 1885 1890
Val Trp Met Ile Leu Arg His Glu Pro Lys Trp Ala Phe Arg Glu
1895 1900 1905
Ser Lys Ile Lys Asp Gln His Glu Ala Asn Asn Ala Asn Thr Asp
1910 1915 1920
Ala Pro Ala Asn Ile Tyr Arg Pro Gln Gly Arg Lys Ala Glu Lys
1925 1930 1935
Glu Lys Ala Arg Ala Arg Lys His Gly Gly Ser Asp Val Asp Gly
1940 1945 1950
Asp Pro Phe Ile Glu Glu Val Lys Asn Met Arg Glu Ala Arg Glu
1955 1960 1965
Glu Thr Glu Arg Asp Arg Lys Thr His Asp Asp Lys Phe Tyr Glu
1970 1975 1980
Leu Glu Lys Ser Lys Leu Glu Leu Glu Arg Asp Arg His Asp Lys
1985 1990 1995
Glu Ile Met Gln Thr Asp Thr Ser Thr Met Asp Glu Glu Ser Lys
2000 2005 2010
Gln Tyr Phe Lys Leu Met Lys Gln Glu Ile Leu Ala Arg Arg Phe
2015 2020 2025
Gly Ser Ser Gln Pro
2030
<210> 27
<211> 7129
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 27
gtttttacat catgtttttg tttttttaaa tcgggatcga aaataatccg aacaaaacta 60
ataaaatcag ttatacgata acggtcgatt ctagattttc tcatccaact tttatcctta 120
taagcgagcc ttttggtccg ttagatctga attcaatggc tgcccgcatg tcgcacgtag 180
gccctatggt ttatttagtg catggtatta aaaaaacgcc aagaacatgt ttgaccgcat 240
gaaaaactct tcaccaccaa cagtgatgag caggtacgtg tacaactatg tgtactcgtt 300
tggcttcaaa gctgctcccg tagtttgttg aatttatact gaaatataca agaaggtaca 360
ggtttgaaaa caaggtgccg ggctagagtt ctggatatct cataaataat catagtccgt 420
gcagtgtgat gaataaatga ataaagtttg gcggtgctca tttaattgct caaatagcta 480
cgatcgagtg ctgtggctga cgcccatata aaaaatcgtc cataccagag atgtactcaa 540
gcatgcaccc gccagcaagg aaaaaacaat aaattaaaca actaccaatg cttcaggcat 600
catcttctca acaactcaat atttatttaa ttttttctcg agtttaatca ttgccgtgag 660
tattttgtca ttcatgaaag gattatatga gcttttgatc aactataagg gccttttagg 720
taagtggcta aattatagat tatctgtata acaccgactc cctttgtcca caagacattg 780
tcatggtaat attttgtcct aagtcaaata aacttaaggt tgactaataa atttgtccat 840
atttttctcc gaaatagtgt actgcaaaaa tatgttccag gataatctaa taatgtttat 900
ttggtaatat agatatatgt atttttttac atacatatac ataagtttag acaaaaactt 960
gaatgttttg ctcttttaaa catggaatat acaaataact acggtgattt gatacccggt 1020
gtcatcgcta gcgattttca taatggatgg tcaacctaat agtgagcgat catgcgaata 1080
aaaggccatg ttgggtggct aacaaggtgg caactaccaa tctaatcttg caaagctaat 1140
gtcaccttgt accatctgct acatggattc ccaaccctac aaagactatt tggctgtcaa 1200
gtgtcaaatg tactctccac gaatcattaa ccagacaagg actctctaag atacatctcc 1260
aagactctca aggcgttgaa atctttgatc acatgggttt tcatttctcc tgtggttgag 1320
gttgagaggt taagggagag aatgagggag gggaagatgc atgtggacag tggactccat 1380
gctggatttt gccaacgact cagtatgcat gtgagatgga tgctaaccta agtgtactat 1440
gcagtttaat aaagggcgtt tgacatgtat aattcaatca cattttatga tgatataaaa 1500
acatgaaggc actactagtg cccctttttt cattcttttt ccaaagtaaa ccaaggtagc 1560
tcaggtctac tggttaagtg agggagctga ggtttcattc tggtgaccac tagcggtgtc 1620
gacacggcgg gatggcccca cgtgggcgcc agcggtgtca gtgacggaga gctcctcaga 1680
tctgaactcc agtgggcggc gacccttcac cgcggaggtt gacccccaaa ccgccgtctc 1740
gcactctccc gcctccctat aactaatctc ctcctttcca ctccccgccg cgcgaaacca 1800
cacgcggcgg ccgcctcctc caccacgccg atggcgaccc ctcactcacc cagacccagc 1860
tgaacaactc cctccaccaa gcacacgcaa gcaggagaag gagcaggagc aggagcagga 1920
gccgagggcg gcgacagaga atagaggtag aggaaggcga tcgacgagga gctcggtctc 1980
acctgctagc ggcggcgacc atggaccgga tgctgctcga ccagctggcc ggcgaggccc 2040
tgcgggaggt gctgcacgcg gtgcagggca ccctgttctg ccgctccacc gccgagcgcc 2100
tgcgccggag cgtcgagccg ctgctgccgc tcgtccaggg cctcggcccg cacagcaccc 2160
agcgctccgc gggggagctc ggcgagctcg cggcgcgggt cagggaggcg ctcgacctgg 2220
cgcgccgcgc cgccgcgtcc ccgcgctgga acgtctaccg cgccgcgcag ctgtcgcgcc 2280
ggatggaggc ggccgaccgc ggcatcgcgc gctggctgga gcgccacgcc cccgcgcacg 2340
tcatcggcgg cgtgcgcagg ctccgcgacg aggccgacgc gcgcatcggt cgcctcgagc 2400
gccgcgtcga ggagatcgcc gccgccaccg cgcagccgcc gccccccgcc ctctccgtcc 2460
ccgtcgcgcc gccgccgcac aagggcgtgc ccatgccgat ggaggcgccg ctcgctaagc 2520
ccgccttcgt cgctatgacg aaggaggtgc cgcagcacaa gggcatggct atgtcggagc 2580
cggtgccggc gaaggcggcg cccgccaaag ccggggtgat ggccatggac atcgccgacg 2640
gacacgaaga cgcggagggg atggttggcg gcggcgtcaa ggtggccaag gaaaaggtga 2700
aggagatggt tatgagcggc ggcggcagct gggaggtggt cgggatctcc ggcatgggcg 2760
gcagcggcaa gaccacgctc gccatggagg tcttcaggga tcacaaggtc cgaggtaagc 2820
agaacatcga ccaccagatc caaaccttct tttccttcag ttctttccaa atcctgtgca 2880
aaggtcgcgt ctttcacagg aatcgtcctg tccttccctg caaaaattgc atcttcccca 2940
tgaatagtgg gtgctaaatt ctccaaattg gcggcatagc atcgtaggtg gttggtttgc 3000
gtgcgtgtcg tgcaattagg taaaggcgag gttgatgctt tcgtttttcc ccaaaccaca 3060
tgttcggtca aatttggcgc tttgaccacc agctagtgac aactgtactg ttgtgatggg 3120
gtttcagatt gcttttgtga attaccatgc ttggacttga gtaaccttat cgtgtcgtgt 3180
tcatggacca tggtggctac ttaatcttaa atcaagatac gtatctgctt aacgaaccgc 3240
acatgagact aatcaaatct atttcacata gaataaaccc aattcagatc caagtaacct 3300
gcttttttga agaaaaaaaa atctggagct gtgctaattt taggatctcc tttcagtgca 3360
aggaattggg atgacgatgt tgatttagac ctagtttagg tactctagta ttgaccataa 3420
tctatatata ttgaggtgga ttaaggtgta acttaaacta atttacaccc caatccactt 3480
taacacatgt ggattgaggt caataccaga atacccctaa tgccgcaacc cgggtttgta 3540
gctccatcat ctctgttttc caccaaaaaa ctcatagtaa acttaaattc aattgtcaca 3600
acaacatata ttcaacgatt ttaagtgact gctatcccaa accgtagctg atcttagggc 3660
atgtacagtg gagagacacc aaaacggttc tccaagcaca ggagacaact aagagactct 3720
attgtacagt ggagtgtcta taaacgtagt ctattaataa atacaaaatt aaatgtattt 3780
gtatagcatc agatcgatag aacagacgac aaattcgtac agtgggaagt gaggcgtctg 3840
ttgctacttg gtttacgagc cagaggcgtc tcttcacgga gagacggctc taagattttt 3900
ttgcaaataa ccccttaaac accttaagag cctccacatt aaacaccact gtacatgtcc 3960
ttaacttcat ggtatgcttt gtggtcaaca tggtgattat ggatctcatc aaaagcccat 4020
ggctacatat ctgctccctg tttgcaagct ctctctctcc cccacccctt ttcatgattc 4080
tgacatagtt tctttttttc tacagcctac ttcaacgaca ggatcttctt cgagacgatc 4140
tcgcagtccg cgaatctgga ggccatcaag atgaagctgt gggagcagat cagcggcaac 4200
atggtgctgg gtacatacaa ccagatccca gaatggcagc tcaagctagg accaagggac 4260
cgaggacccg tccttgtgat cctcgacgat gtttggtctc tcccgcagct tgaggagctc 4320
atcttcaagt tccctgggtg caagacccta gtcgtatcaa ggttcaagtt ccccacgctg 4380
gtgaaacaga cgtatgagat gcagctgcta gacgaggcgg cggctctgtc cgtcttctgc 4440
cgcgctgcgt tcgaccagga gtgtgttccg cagaccgccg acaagagatt ggtcaggcag 4500
gtctctgcag agtgcagagg tctccctctg gctctgaagg tcatcggcgc gtcgctgcgc 4560
gaccagcctc cgaagatttg gctcagcgcc aaaaaccggt tgtctcgagg agaggccatt 4620
tctgactgcc atgagaccaa gcttctggag aggatggcgg ccagtgtcga gtgcttgtcc 4680
gagaaggtta gggactgttt ccttgacctg ggctgcttcc cggaggacaa gaagatcccc 4740
ctcgacgtct tgatcaacat ctggatggag atccatgacc ttgatgagcc agatgctttt 4800
gccatcttgg ttgagctttc gaacaagaac cttcttaccc tcgttaacga tgcacagtac 4860
gtatcatcgg acatttatgt gcttcaaaat gttcagaact tagatatccc aataacaggt 4920
ttttctaact ctgctgttct atacgtgcag gaacaaggct ggagatctgt acagtagcta 4980
ccatgactac tcggtgacac agcacgacgt gttgagagat cttgctcttc acatgagcgg 5040
gcgtgacccg ctcaacaagc gcaggcggtt ggtgatgccg agaagggaag aaacacttcc 5100
gagggattgg cagaggaaca aggatgctcc gtttgaagct cagatagtct ccattcatac 5160
aggtatagcg ttagtagtta attgttcttc attacatttg tagatattca tcgctaacaa 5220
ctcgtcatcc aacttattta gtgcgcttat tctgaattcc tactgaaatt tccaactatt 5280
tccaaaactc caggcgaaat gaaagaatcc gactggttcc agatgagctt ccccaaggca 5340
gaagtgctga tcctcaactt cgcgtcgagc ctgtactacc tgccgccgtt catcgcgacg 5400
atgcagaacc tgaaggccct ggtgctgatc aactacggca gcagcagcag cagcgcagcc 5460
ctggacaacc tctccgcctt caccacgctg agcgggctga ggagcctgtg gctggagaag 5520
atcaggctgc cgccgctgcc caagacgacg atcccgctga ggaacctgca caagatctcg 5580
ctcgtgctct gcgagctgaa cagcagtcta agagggtcga cgatggacct gtcgacgacg 5640
ttcccgcgcc tgtccaacct gacgatcgac cactgcatag acctcaagga gctgccgccg 5700
agcgtctgcg agatcgggtc cctggagacc atctccatct ccaactgcca cgacctcacc 5760
gagctgccat acgagctggg gcggctgcgc tgcctcagca tcctccgcgt gtacgcctgc 5820
ccggcgctgt ggcggctgcc ggcgtcggtg tgcagcctga agcggctcaa gtacctggac 5880
atctcgcagt gcatcaacct gacggacctc cccgaggagc tcggccacct gacgagcctg 5940
gagaagatcg acatgcgcga gtgctcgcgc ctcaggagcc tccccaggtc gtcgtcctcg 6000
ctcaagtccc tcggacacgt cgtgtgcgac gaggagacgg cgctgctgtg gcgtgaggcc 6060
gagcaggtca tccctgacct ccgcgtgcag gtggccgagg agtgctacaa cctggactgg 6120
ctcgcggact gatgtctcgt tcctggatgg atgctgcggc gtccaaactg accttgtaca 6180
tatgtgatgt tgcttccccc caaaccgagc gtagggaaac tcatcaatcc acctgccaat 6240
tttgacgtgt tcagtcagtg ttcgtcatgc atccatccac tctttattct tgggtggcaa 6300
agcctcccct tcatccaaaa tacaaatgca cacaaaacaa ataaccacag aaaacacaac 6360
tgtacaaaag gctaaagata caacattccg atttttcagc tgcagcaatg ccagcaaaga 6420
gaggccaagc agggttctca aaatgcagga actacatagg tacacagtgg atagctgtac 6480
agtaacgaac taaggatcaa cggttagaat cagcaatggc gtcaaaacga tcaccatgca 6540
acagcttgaa caccgatcac ttcttaagct tgagctgttc gtccagagca tcagcgagta 6600
cttcttaaac atgacctgat ctacagtttc caccccaacc gttcgtggtt acgtttcaca 6660
tactatcact ccactgctcc cgatgtcgag gactcgaggt ccaggtccat gtcgtcgtca 6720
aggacgtcgt cgatgcacag aaactgggtc gtccagcggg cgccatcggc cggcactgtt 6780
gtctccgcca tgctctccga ctcctcgtag ttcactgtgc cgtcgcccat gaggtcagct 6840
gggaggttcc tgacgaacca aggatgactc tttatctcag gcatcgtcgt gattctctgc 6900
aaagagcatg cgttatggca catcgatctg aaagttctga acaatcaaag tgactgacgc 6960
tgcaaagggg aataagctag tatggcatca ttcacatctg ctgggttggc caaaaaaaaa 7020
accttcgcat tctggagata cgcgggcgta gtcaggaacc gcgtaccgaa cacccagtat 7080
attattctgc aaattggcat cggcatttag atgactagat tttggatat 7129
<210> 28
<211> 2616
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 28
atggaccgga tgctgctcga ccagctggcc ggcgaggccc tgcgggaggt gctgcacgcg 60
gtgcagggca ccctgttctg ccgctccacc gccgagcgcc tgcgccggag cgtcgagccg 120
ctgctgccgc tcgtccaggg cctcggcccg cacagcaccc agcgctccgc gggggagctc 180
ggcgagctcg cggcgcgggt cagggaggcg ctcgacctgg cgcgccgcgc cgccgcgtcc 240
ccgcgctgga acgtctaccg cgccgcgcag ctgtcgcgcc ggatggaggc ggccgaccgc 300
ggcatcgcgc gctggctgga gcgccacgcc cccgcgcacg tcatcggcgg cgtgcgcagg 360
ctccgcgacg aggccgacgc gcgcatcggt cgcctcgagc gccgcgtcga ggagatcgcc 420
gccgccaccg cgcagccgcc gccccccgcc ctctccgtcc ccgtcgcgcc gccgccgcac 480
aagggcgtgc ccatgccgat ggaggcgccg ctcgctaagc ccgccttcgt cgctatgacg 540
aaggaggtgc cgcagcacaa gggcatggct atgtcggagc cggtgccggc gaaggcggcg 600
cccgccaaag ccggggtgat ggccatggac atcgccgacg gacacgaaga cgcggagggg 660
atggttggcg gcggcgtcaa ggtggccaag gaaaaggtga aggagatggt tatgagcggc 720
ggcggcagct gggaggtggt cgggatctcc ggcatgggcg gcagcggcaa gaccacgctc 780
gccatggagg tcttcaggga tcacaaggtc cgagcctact tcaacgacag gatcttcttc 840
gagacgatct cgcagtccgc gaatctggag gccatcaaga tgaagctgtg ggagcagatc 900
agcggcaaca tggtgctggg tacatacaac cagatcccag aatggcagct caagctagga 960
ccaagggacc gaggacccgt ccttgtgatc ctcgacgatg tttggtctct cccgcagctt 1020
gaggagctca tcttcaagtt ccctgggtgc aagaccctag tcgtatcaag gttcaagttc 1080
cccacgctgg tgaaacagac gtatgagatg cagctgctag acgaggcggc ggctctgtcc 1140
gtcttctgcc gcgctgcgtt cgaccaggag tgtgttccgc agaccgccga caagagattg 1200
gtcaggcagg tctctgcaga gtgcagaggt ctccctctgg ctctgaaggt catcggcgcg 1260
tcgctgcgcg accagcctcc gaagatttgg ctcagcgcca aaaaccggtt gtctcgagga 1320
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tgcttgtccg agaaggttag ggactgtttc cttgacctgg gctgcttccc ggaggacaag 1440
aagatccccc tcgacgtctt gatcaacatc tggatggaga tccatgacct tgatgagcca 1500
gatgcttttg ccatcttggt tgagctttcg aacaagaacc ttcttaccct cgttaacgat 1560
gcacagaaca aggctggaga tctgtacagt agctaccatg actactcggt gacacagcac 1620
gacgtgttga gagatcttgc tcttcacatg agcgggcgtg acccgctcaa caagcgcagg 1680
cggttggtga tgccgagaag ggaagaaaca cttccgaggg attggcagag gaacaaggat 1740
gctccgtttg aagctcagat agtctccatt catacaggcg aaatgaaaga atccgactgg 1800
ttccagatga gcttccccaa ggcagaagtg ctgatcctca acttcgcgtc gagcctgtac 1860
tacctgccgc cgttcatcgc gacgatgcag aacctgaagg ccctggtgct gatcaactac 1920
ggcagcagca gcagcagcgc agccctggac aacctctccg ccttcaccac gctgagcggg 1980
ctgaggagcc tgtggctgga gaagatcagg ctgccgccgc tgcccaagac gacgatcccg 2040
ctgaggaacc tgcacaagat ctcgctcgtg ctctgcgagc tgaacagcag tctaagaggg 2100
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atagacctca aggagctgcc gccgagcgtc tgcgagatcg ggtccctgga gaccatctcc 2220
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agcctcccca ggtcgtcgtc ctcgctcaag tccctcggac acgtcgtgtg cgacgaggag 2520
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<210> 29
<211> 871
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 29
Met Asp Arg Met Leu Leu Asp Gln Leu Ala Gly Glu Ala Leu Arg Glu
1 5 10 15
Val Leu His Ala Val Gln Gly Thr Leu Phe Cys Arg Ser Thr Ala Glu
20 25 30
Arg Leu Arg Arg Ser Val Glu Pro Leu Leu Pro Leu Val Gln Gly Leu
35 40 45
Gly Pro His Ser Thr Gln Arg Ser Ala Gly Glu Leu Gly Glu Leu Ala
50 55 60
Ala Arg Val Arg Glu Ala Leu Asp Leu Ala Arg Arg Ala Ala Ala Ser
65 70 75 80
Pro Arg Trp Asn Val Tyr Arg Ala Ala Gln Leu Ser Arg Arg Met Glu
85 90 95
Ala Ala Asp Arg Gly Ile Ala Arg Trp Leu Glu Arg His Ala Pro Ala
100 105 110
His Val Ile Gly Gly Val Arg Arg Leu Arg Asp Glu Ala Asp Ala Arg
115 120 125
Ile Gly Arg Leu Glu Arg Arg Val Glu Glu Ile Ala Ala Ala Thr Ala
130 135 140
Gln Pro Pro Pro Pro Ala Leu Ser Val Pro Val Ala Pro Pro Pro His
145 150 155 160
Lys Gly Val Pro Met Pro Met Glu Ala Pro Leu Ala Lys Pro Ala Phe
165 170 175
Val Ala Met Thr Lys Glu Val Pro Gln His Lys Gly Met Ala Met Ser
180 185 190
Glu Pro Val Pro Ala Lys Ala Ala Pro Ala Lys Ala Gly Val Met Ala
195 200 205
Met Asp Ile Ala Asp Gly His Glu Asp Ala Glu Gly Met Val Gly Gly
210 215 220
Gly Val Lys Val Ala Lys Glu Lys Val Lys Glu Met Val Met Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Trp Glu Val Val Gly Ile Ser Gly Met Gly Gly Ser Gly
245 250 255
Lys Thr Thr Leu Ala Met Glu Val Phe Arg Asp His Lys Val Arg Ala
260 265 270
Tyr Phe Asn Asp Arg Ile Phe Phe Glu Thr Ile Ser Gln Ser Ala Asn
275 280 285
Leu Glu Ala Ile Lys Met Lys Leu Trp Glu Gln Ile Ser Gly Asn Met
290 295 300
Val Leu Gly Thr Tyr Asn Gln Ile Pro Glu Trp Gln Leu Lys Leu Gly
305 310 315 320
Pro Arg Asp Arg Gly Pro Val Leu Val Ile Leu Asp Asp Val Trp Ser
325 330 335
Leu Pro Gln Leu Glu Glu Leu Ile Phe Lys Phe Pro Gly Cys Lys Thr
340 345 350
Leu Val Val Ser Arg Phe Lys Phe Pro Thr Leu Val Lys Gln Thr Tyr
355 360 365
Glu Met Gln Leu Leu Asp Glu Ala Ala Ala Leu Ser Val Phe Cys Arg
370 375 380
Ala Ala Phe Asp Gln Glu Cys Val Pro Gln Thr Ala Asp Lys Arg Leu
385 390 395 400
Val Arg Gln Val Ser Ala Glu Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Leu Lys
405 410 415
Val Ile Gly Ala Ser Leu Arg Asp Gln Pro Pro Lys Ile Trp Leu Ser
420 425 430
Ala Lys Asn Arg Leu Ser Arg Gly Glu Ala Ile Ser Asp Cys His Glu
435 440 445
Thr Lys Leu Leu Glu Arg Met Ala Ala Ser Val Glu Cys Leu Ser Glu
450 455 460
Lys Val Arg Asp Cys Phe Leu Asp Leu Gly Cys Phe Pro Glu Asp Lys
465 470 475 480
Lys Ile Pro Leu Asp Val Leu Ile Asn Ile Trp Met Glu Ile His Asp
485 490 495
Leu Asp Glu Pro Asp Ala Phe Ala Ile Leu Val Glu Leu Ser Asn Lys
500 505 510
Asn Leu Leu Thr Leu Val Asn Asp Ala Gln Asn Lys Ala Gly Asp Leu
515 520 525
Tyr Ser Ser Tyr His Asp Tyr Ser Val Thr Gln His Asp Val Leu Arg
530 535 540
Asp Leu Ala Leu His Met Ser Gly Arg Asp Pro Leu Asn Lys Arg Arg
545 550 555 560
Arg Leu Val Met Pro Arg Arg Glu Glu Thr Leu Pro Arg Asp Trp Gln
565 570 575
Arg Asn Lys Asp Ala Pro Phe Glu Ala Gln Ile Val Ser Ile His Thr
580 585 590
Gly Glu Met Lys Glu Ser Asp Trp Phe Gln Met Ser Phe Pro Lys Ala
595 600 605
Glu Val Leu Ile Leu Asn Phe Ala Ser Ser Leu Tyr Tyr Leu Pro Pro
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Phe Ile Ala Thr Met Gln Asn Leu Lys Ala Leu Val Leu Ile Asn Tyr
625 630 635 640
Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ala Leu Asp Asn Leu Ser Ala Phe Thr
645 650 655
Thr Leu Ser Gly Leu Arg Ser Leu Trp Leu Glu Lys Ile Arg Leu Pro
660 665 670
Pro Leu Pro Lys Thr Thr Ile Pro Leu Arg Asn Leu His Lys Ile Ser
675 680 685
Leu Val Leu Cys Glu Leu Asn Ser Ser Leu Arg Gly Ser Thr Met Asp
690 695 700
Leu Ser Thr Thr Phe Pro Arg Leu Ser Asn Leu Thr Ile Asp His Cys
705 710 715 720
Ile Asp Leu Lys Glu Leu Pro Pro Ser Val Cys Glu Ile Gly Ser Leu
725 730 735
Glu Thr Ile Ser Ile Ser Asn Cys His Asp Leu Thr Glu Leu Pro Tyr
740 745 750
Glu Leu Gly Arg Leu Arg Cys Leu Ser Ile Leu Arg Val Tyr Ala Cys
755 760 765
Pro Ala Leu Trp Arg Leu Pro Ala Ser Val Cys Ser Leu Lys Arg Leu
770 775 780
Lys Tyr Leu Asp Ile Ser Gln Cys Ile Asn Leu Thr Asp Leu Pro Glu
785 790 795 800
Glu Leu Gly His Leu Thr Ser Leu Glu Lys Ile Asp Met Arg Glu Cys
805 810 815
Ser Arg Leu Arg Ser Leu Pro Arg Ser Ser Ser Ser Leu Lys Ser Leu
820 825 830
Gly His Val Val Cys Asp Glu Glu Thr Ala Leu Leu Trp Arg Glu Ala
835 840 845
Glu Gln Val Ile Pro Asp Leu Arg Val Gln Val Ala Glu Glu Cys Tyr
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Asn Leu Asp Trp Leu Ala Asp
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<210> 30
<211> 2943
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 30
atggaggctg ccctgctgag cgggttcatc aaaaccatcc tgccaaggct cttctcactg 60
gtacaaggga gatacaagct gcacaagggc ctcaagagcg acatcaaatc gctggagaaa 120
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ggagctgtgc tgagcctctc aattgatgag ctgcatgaac tggctcacca aatcgaggac 240
tccatagatc gcttcttgta ccatgtgacc agggagcagc aagcatcctt ttttcgtcgg 300
actgtacggt cgccgaagac tctgttgtca cgtcagcggc tggctgccga ggttcagttc 360
ctgaagaaga taccggagga ggcgcaccag cgagagaaga ggtacagggt cttcgccggc 420
ctttcttcct ctacccggca cactgaatcg tcttcctgtt cgtctgtatc tgatccgcac 480
acacttaagg ccgacgtcgt cggcatcgac ggtcccaggg acgagcttgt gcagcagtta 540
accgaagagg cagagggcct aacaaagcag ctcaaggtga tctccatcgt cgggatccat 600
ggctccggca agaccgtcct tgccagagag gtatacgaga gcgacgtcgg ccggcagttc 660
agtctccggg catgggtttc tgctactgac agaggtccga gagaggtgct catggagatc 720
ctccgaaatt ttggtaggcc agtggtggat agctctagta ttgaccagct tacggtagat 780
ctcaggaaac acttgggtga gaaaagctat ttcattgtaa tcgatggcat gcaaacagat 840
cagtggagca ccattgaaac tgccttccca gaaaacaatg ttgttagcag cagagtaatt 900
gttacaacaa caatccggtc agtagctaat tcttgcagct cttctaacgg ttatgtgcac 960
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atgaggcgat ggttagcaga gggatttgta caaacacagc cttcatctag tgaaaacttc 1380
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ttgagagtct tggatcttga acaatgtacc gacttggaag atgatcacct caaagacata 1740
tgcaaccttt ttcttatgaa atatctaagc ctcggagaaa ctattagaag tcttccaaag 1800
gagatagaaa aactgaagct cttggagaca cttgacttga ggagaacaaa ggtgaaaaca 1860
ctacctatag aggtcctcct gctcccctgt ttactccatc tgtttgggaa gttccaattt 1920
tctgataaaa tcaagataac aagtgacatg cagaagtttt tcttaactgg acagagtaac 1980
ttagagacac tttcaggatt tatcacagat gggtctcaag gattgccaca gatgatgaat 2040
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ccttgttacc ttaggtcatt gaagttaaaa gggaatttgc tggaacttcc ccagtttgtc 2280
atatcaatgc ggggtctccg ggagatatgc ctttcatcaa caaaattgac atcgggcctc 2340
cttgcaacac tcgctaactt gaaaggcttg cagcatctca agctgattgc agatgtcctt 2400
gaagatttta tcattgaagg tcaggcattc ctggggctgc tacacctatg ttttgtccta 2460
gaacgtgcca ccttaccaat aattgaagga ggagctttgc cgtacctcat ctcacttaag 2520
ctaatctgca aagatctagt tggcctcggt gacatcaaaa tcaaccgcct caaatgtctt 2580
aaggaagtca gtctagatca tagagtcgct tcggaaacaa gagaaatctg ggaaaaagct 2640
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<210> 31
<211> 980
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 31
Met Glu Ala Ala Leu Leu Ser Gly Phe Ile Lys Thr Ile Leu Pro Arg
1 5 10 15
Leu Phe Ser Leu Val Gln Gly Arg Tyr Lys Leu His Lys Gly Leu Lys
20 25 30
Ser Asp Ile Lys Ser Leu Glu Lys Glu Leu His Met Ile Ala Val Thr
35 40 45
Ile Asp Glu Gln Ile Ser Leu Gly Arg Lys Asp Gln Gly Ala Val Leu
50 55 60
Ser Leu Ser Ile Asp Glu Leu His Glu Leu Ala His Gln Ile Glu Asp
65 70 75 80
Ser Ile Asp Arg Phe Leu Tyr His Val Thr Arg Glu Gln Gln Ala Ser
85 90 95
Phe Phe Arg Arg Thr Val Arg Ser Pro Lys Thr Leu Leu Ser Arg Gln
100 105 110
Arg Leu Ala Ala Glu Val Gln Phe Leu Lys Lys Ile Pro Glu Glu Ala
115 120 125
His Gln Arg Glu Lys Arg Tyr Arg Val Phe Ala Gly Leu Ser Ser Ser
130 135 140
Thr Arg His Thr Glu Ser Ser Ser Cys Ser Ser Val Ser Asp Pro His
145 150 155 160
Thr Leu Lys Ala Asp Val Val Gly Ile Asp Gly Pro Arg Asp Glu Leu
165 170 175
Val Gln Gln Leu Thr Glu Glu Ala Glu Gly Leu Thr Lys Gln Leu Lys
180 185 190
Val Ile Ser Ile Val Gly Ile His Gly Ser Gly Lys Thr Val Leu Ala
195 200 205
Arg Glu Val Tyr Glu Ser Asp Val Gly Arg Gln Phe Ser Leu Arg Ala
210 215 220
Trp Val Ser Ala Thr Asp Arg Gly Pro Arg Glu Val Leu Met Glu Ile
225 230 235 240
Leu Arg Asn Phe Gly Arg Pro Val Val Asp Ser Ser Ser Ile Asp Gln
245 250 255
Leu Thr Val Asp Leu Arg Lys His Leu Gly Glu Lys Ser Tyr Phe Ile
260 265 270
Val Ile Asp Gly Met Gln Thr Asp Gln Trp Ser Thr Ile Glu Thr Ala
275 280 285
Phe Pro Glu Asn Asn Val Val Ser Ser Arg Val Ile Val Thr Thr Thr
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Ile Arg Ser Val Ala Asn Ser Cys Ser Ser Ser Asn Gly Tyr Val His
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Lys Met Lys Arg Leu Ser Asp Glu His Ser Glu Gln Leu Phe Ile Lys
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Lys Ala Cys Pro Thr Lys Tyr Ser Gly Tyr Thr Arg Pro Glu Ser Lys
340 345 350
Glu Val Leu Lys Lys Cys Asp Gly Gln Pro Leu Ala Leu Val Thr Met
355 360 365
Gly Gln Phe Leu Arg Lys Asn Gly Trp Pro Thr Gly Pro Asn Cys Glu
370 375 380
Asn Val Cys Arg Asp Leu Arg Arg His Leu Glu Gln Asp Asp Thr Leu
385 390 395 400
Glu Arg Met Arg Arg Val Leu Ile His Ser Leu Ser Ser Leu Pro Ser
405 410 415
His Val Pro Lys Ala Cys Leu Leu Tyr Phe Gly Met Phe Pro Cys Asp
420 425 430
His Pro Ile Lys Arg Lys Ser Leu Met Arg Arg Trp Leu Ala Glu Gly
435 440 445
Phe Val Gln Thr Gln Pro Ser Ser Ser Glu Asn Phe Asn Thr Leu Ile
450 455 460
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Lys Thr Cys Lys Thr Tyr Gly Met Met His Glu Phe Ile Leu Leu Met
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Ser Thr Ser His Asp Phe Ile Thr Leu Leu Cys Asn Asn Lys Val Glu
500 505 510
His Lys Tyr Val Arg Arg Leu Ser Leu His His His Ser Ala Thr Ser
515 520 525
Gly Ser Phe Ser Val Ile Asp Leu Ser Leu Val Arg Ser Leu Met Val
530 535 540
Phe Gly Glu Ala Gly Lys Thr Ile Leu Ser Phe Arg Lys Tyr Glu Leu
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595 600 605
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Ile Trp Phe Glu Arg Ser Lys Arg Ser Thr Asn Phe Thr Asp Leu Val
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Asn Ala Val Gln Lys Phe Ile His Asp Asp Lys Glu Ser Asn Asp Pro
705 710 715 720
Arg Ser Leu Ser Leu His Phe Asp Asp Gly Thr Glu Asn Ile Leu Asn
725 730 735
Ser Leu Lys Ala Pro Cys Tyr Leu Arg Ser Leu Lys Leu Lys Gly Asn
740 745 750
Leu Leu Glu Leu Pro Gln Phe Val Ile Ser Met Arg Gly Leu Arg Glu
755 760 765
Ile Cys Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Ser Gly Leu Leu Ala Thr Leu
770 775 780
Ala Asn Leu Lys Gly Leu Gln His Leu Lys Leu Ile Ala Asp Val Leu
785 790 795 800
Glu Asp Phe Ile Ile Glu Gly Gln Ala Phe Leu Gly Leu Leu His Leu
805 810 815
Cys Phe Val Leu Glu Arg Ala Thr Leu Pro Ile Ile Glu Gly Gly Ala
820 825 830
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835 840 845
Leu Gly Asp Ile Lys Ile Asn Arg Leu Lys Cys Leu Lys Glu Val Ser
850 855 860
Leu Asp His Arg Val Ala Ser Glu Thr Arg Glu Ile Trp Glu Lys Ala
865 870 875 880
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885 890 895
Asp Glu Ser Glu Ile Lys Ala Val Asp Cys Ser Val Ala Ser Arg Pro
900 905 910
Ala Val Ser Glu Ala Asn Gly Thr Ser Pro Met Ser Glu Val Asp Val
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930 935 940
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965 970 975
Leu Thr Glu Leu
980
<210> 32
<211> 4287
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 32
atggaggctg cagtaagttc ctccacgggg gccatgggcc ctcttctgag gaagctcgag 60
ctcctacttg ctcccgaatc ccggcttcgg aagcgagtca aggatggaat cggactcctc 120
aaggaagatc tagaagaagt aagctttccc ctcgtcgatc tatcgatgct ggaaactcct 180
agtcccaggg ctaagtgctg gatggaggag gcgcgggaac tgtcttatca tgtggaagac 240
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ttcattgttg gacctgttgg tgttggcaag accactcttg cgaaagaaat tttcggtgaa 660
cttcgaggca aatttgagtt gcgagcattt gtacatgctt cacgaaagct tgacatgaga 720
aggcttcttg ggggcattct ttcccaagtt cagccgcacc accaactacc ctctgttgct 780
ggtacagtgc agatcctcat tgacagtatt caggaacaac ttcgagataa gaggttcttc 840
attgtaattg atggtttgtg ggaagaaaca gcatgggaca ttgtaagaga tgcttttccg 900
gagggcaata attacagtag aattgtagca actacagaaa acatgaatgt agctcttaag 960
tgttgcagtt atatgacata taacattttg aagatgaaac ctcttggcat taaagactct 1020
gcatatttat tcttcaatcg agtttttggc tctgaccaac aatgccctga tgaactgaaa 1080
gaagtttcat atggtattat aagaaaatgt tgtggtcttc cactgtccat catccatgta 1140
gctggtcttt tagcaagcat agactactca gggctatggt atcatgtaca tgaccgttta 1200
tactccattc ttaatagaag ccatacagtt gaagagattc agaaaaaaat attagacctt 1260
agttacaata gtcttcctca ttgtttgaag acatgcctgc tgtatttcaa tatgtaccca 1320
gagggttaca taatgtggaa ggttcatctg gtgaaacaat ggatagctga aggttttatc 1380
aacccagctg aaggaaaaga cagagaggag attgcagagg gctattttga ggagcttgtc 1440
agtaggggaa tggtccaacc tatgaaaatt gactacaatg gtgaggtgtt gtcgtgtaca 1500
gtgcaccata ctatatttga tctcattaat tacaattcca aggaagagga atttattgct 1560
ggaatagatt actctcaacc aataacagga cttgctacaa aggcccgtcg actgtccttc 1620
agattcagta gtgccaagta tgcaaagcaa ccaacaagaa taacaacgtc acaattgcgg 1680
tcacttggat tctttggatt cagtaagtgt atgcctccaa ttgtggaatt taagcatctc 1740
cgagttctag tccttgactt ttggggaagt catgatggac acatgagttt gaacctctca 1800
aggatttaca tattatttca actgagatat ctgaagattt ccggtgatat catggttgaa 1860
ctaccagcca agatgcaagg gctacattat ttggaaacac tagagataga tgcaagacta 1920
tctgcagttc cattggatat tgtccatctt ccaagtttgt tgcatcttag tctccgagct 1980
gcaactaagt taccagatgg gattggccac atcaaatccc taagtacgct attgtatttt 2040
gacctcagat gtaactctga agacaatata cggagcttag gacagctgac gaaccttcga 2100
catcttcatc taacctgttc tacagttctc tccagtgacc acctgaagag aaagctgata 2160
cctctagcct tttctcttgg gaaacttggc aatctcaaat ctctcaccct gactcctgat 2220
gccttaagaa caaccatttt gtttgatatc tcgagcggta tctcctctcc ttccatcttt 2280
cttcagaaac ttgagttgtt gccaccaatt tgcttctttt ccagactgcc cgcttgcttt 2340
ggtgaactgc acaaactccg cattttgaaa attgtggtga aagaactgca gggaaatgat 2400
attaacaaca ttgctggatt accttcccta gtgattttct cactgtatgt gcggacagct 2460
ctgactggaa ctgtgatctt cagcaccatg tcattcccag ctctcaagta cttcagattc 2520
acatgtggtg tgacgtgctt ggcttttcag gaaggagcca tgcacagact tcaaaggctc 2580
aagctttgtt tcaatgccca tggaggcaag aaccatagcc gagtgattga cggcattgag 2640
tacctgttaa accttcagga ggtttctgga caaattgggg tcctcccagg tggtgatgaa 2700
tccaatatga gggttgttaa gttgtcattt gaagacacca ttagaaagca tccaaggtgt 2760
cttagattca acctacaatt ggtagatttt atagaagaag aatatcctcc tttagttaag 2820
ttgcatcaga ggcagcagga tgaatatgag attgaagaga atgactccgc tgatggtaat 2880
accaaacaca ctgatggcag gtatggattc aacagattca tattcagtaa ttcttcactc 2940
gtggatctag aagcagactt tcaagcacaa agtaggagta ctagcaatga ccttcccatc 3000
ccatataaca aacagttgga ttggcgcaaa gcagtaaatc atatcaggta caagcgtctg 3060
tcgcgctcct gcctcacatt cctagtcagt aacaaactct tgggagtcga acaatcattt 3120
gctctctggg aagagagaaa tgaactgtta ggggttcatg aacatgggga cactcatcac 3180
atttcaggca tagatgaata taatgaggtt gaggatgggg tggtagcggt ggagggggag 3240
ccgaaagagt tgagaatagg agaggccttg gaggggttaa ctgaaacatc ttgtttgtcg 3300
atgacgacct tggaggggtt cactggaaca tcttccttat ccatggcgag tgatgatgac 3360
acatccaata cgaccatgga ggaaatgttc atatcaccag atcgacaact caagcggaag 3420
attaagtcat ggatgcgcgg tgcttttttg ggaagcggct ctttagggat ggtgtatgag 3480
gcgatcagcc aagagggtgt gttttttgct gtgaaggaag tatctttgct tgaccaagga 3540
agcaaagcac aacaatctat tttggcactc gagaagaaaa ttgaactcct tagtcagctt 3600
caacatgaaa atatagtgca ctattatgga actgagaagg gagagtccaa actctatatt 3660
tttgttgagc ttgtgacaca aggatctctt tcatccctct ataaaaaata taaactacaa 3720
gaatcacaag tctgttggta cacaagtcag attcttaatg gattggttta cctccataag 3780
caaaatgttg ttcatggaga tataagatgt gccaatatat tggtccatgc aaatgaatct 3840
ccaaagcttg cggattttgg attggcaaaa gagatgtcaa atattcttac gctgagatca 3900
tgcgaaagaa atgtttactg gatggcacct gagtttatta atcctaaaaa gacatttgga 3960
cctgcagctg atatatggag ccttggttgt gtcgtcttgg aaatgctaac ccgacaaata 4020
ccctatccta atgttaagtg gacaaaagct ttatacatga ttggaaaagg ggagcaacct 4080
cctatcccaa actatctgtc agaagaagcg caagatttca tttgccagtg tgtaagagtt 4140
gatccagaga cccggccttc cgcaacacag cttttggagc acccatttgt taacaggcaa 4200
tctaatcttt tgtcatcctt acgagtggat gacagactag accaaatgcc tattggtgcc 4260
atccgtaaga atgttaaaaa aacttaa 4287
<210> 33
<211> 1428
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 33
Met Glu Ala Ala Val Ser Ser Ser Thr Gly Ala Met Gly Pro Leu Leu
1 5 10 15
Arg Lys Leu Glu Leu Leu Leu Ala Pro Glu Ser Arg Leu Arg Lys Arg
20 25 30
Val Lys Asp Gly Ile Gly Leu Leu Lys Glu Asp Leu Glu Glu Val Ser
35 40 45
Phe Pro Leu Val Asp Leu Ser Met Leu Glu Thr Pro Ser Pro Arg Ala
50 55 60
Lys Cys Trp Met Glu Glu Ala Arg Glu Leu Ser Tyr His Val Glu Asp
65 70 75 80
Phe Val Asp Glu Leu Met Leu Met Leu Thr Asp Ala Gly Ala Asn Ile
85 90 95
Arg Ala Val Asn Arg His Arg Val Gly Arg Val Lys Ile Ala Leu Leu
100 105 110
Thr Ala Pro Pro Arg Arg Ser Gly Ser Thr Arg Val Thr Lys Ile Ala
115 120 125
Glu Leu Arg Ala Leu Val Trp Gln Ala Thr Glu Arg Phe Glu Arg Tyr
130 135 140
Gln Leu Glu Asp Tyr Cys Ser Ser Pro Ser Asp Met Asn Leu Ile Thr
145 150 155 160
Gln His Arg Arg Ala Pro Ala Leu Tyr Gly Asp Glu Ala Asn Leu Val
165 170 175
Gly Ile Glu Ala Ser Arg Ile Lys Leu Ile Glu Met Leu Thr Gly Glu
180 185 190
Ala Glu Gln Gln Pro Lys Val Val Phe Ile Val Gly Pro Val Gly Val
195 200 205
Gly Lys Thr Thr Leu Ala Lys Glu Ile Phe Gly Glu Leu Arg Gly Lys
210 215 220
Phe Glu Leu Arg Ala Phe Val His Ala Ser Arg Lys Leu Asp Met Arg
225 230 235 240
Arg Leu Leu Gly Gly Ile Leu Ser Gln Val Gln Pro His His Gln Leu
245 250 255
Pro Ser Val Ala Gly Thr Val Gln Ile Leu Ile Asp Ser Ile Gln Glu
260 265 270
Gln Leu Arg Asp Lys Arg Phe Phe Ile Val Ile Asp Gly Leu Trp Glu
275 280 285
Glu Thr Ala Trp Asp Ile Val Arg Asp Ala Phe Pro Glu Gly Asn Asn
290 295 300
Tyr Ser Arg Ile Val Ala Thr Thr Glu Asn Met Asn Val Ala Leu Lys
305 310 315 320
Cys Cys Ser Tyr Met Thr Tyr Asn Ile Leu Lys Met Lys Pro Leu Gly
325 330 335
Ile Lys Asp Ser Ala Tyr Leu Phe Phe Asn Arg Val Phe Gly Ser Asp
340 345 350
Gln Gln Cys Pro Asp Glu Leu Lys Glu Val Ser Tyr Gly Ile Ile Arg
355 360 365
Lys Cys Cys Gly Leu Pro Leu Ser Ile Ile His Val Ala Gly Leu Leu
370 375 380
Ala Ser Ile Asp Tyr Ser Gly Leu Trp Tyr His Val His Asp Arg Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Ile Leu Asn Arg Ser His Thr Val Glu Glu Ile Gln Lys Lys
405 410 415
Ile Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Ser Leu Pro His Cys Leu Lys Thr Cys
420 425 430
Leu Leu Tyr Phe Asn Met Tyr Pro Glu Gly Tyr Ile Met Trp Lys Val
435 440 445
His Leu Val Lys Gln Trp Ile Ala Glu Gly Phe Ile Asn Pro Ala Glu
450 455 460
Gly Lys Asp Arg Glu Glu Ile Ala Glu Gly Tyr Phe Glu Glu Leu Val
465 470 475 480
Ser Arg Gly Met Val Gln Pro Met Lys Ile Asp Tyr Asn Gly Glu Val
485 490 495
Leu Ser Cys Thr Val His His Thr Ile Phe Asp Leu Ile Asn Tyr Asn
500 505 510
Ser Lys Glu Glu Glu Phe Ile Ala Gly Ile Asp Tyr Ser Gln Pro Ile
515 520 525
Thr Gly Leu Ala Thr Lys Ala Arg Arg Leu Ser Phe Arg Phe Ser Ser
530 535 540
Ala Lys Tyr Ala Lys Gln Pro Thr Arg Ile Thr Thr Ser Gln Leu Arg
545 550 555 560
Ser Leu Gly Phe Phe Gly Phe Ser Lys Cys Met Pro Pro Ile Val Glu
565 570 575
Phe Lys His Leu Arg Val Leu Val Leu Asp Phe Trp Gly Ser His Asp
580 585 590
Gly His Met Ser Leu Asn Leu Ser Arg Ile Tyr Ile Leu Phe Gln Leu
595 600 605
Arg Tyr Leu Lys Ile Ser Gly Asp Ile Met Val Glu Leu Pro Ala Lys
610 615 620
Met Gln Gly Leu His Tyr Leu Glu Thr Leu Glu Ile Asp Ala Arg Leu
625 630 635 640
Ser Ala Val Pro Leu Asp Ile Val His Leu Pro Ser Leu Leu His Leu
645 650 655
Ser Leu Arg Ala Ala Thr Lys Leu Pro Asp Gly Ile Gly His Ile Lys
660 665 670
Ser Leu Ser Thr Leu Leu Tyr Phe Asp Leu Arg Cys Asn Ser Glu Asp
675 680 685
Asn Ile Arg Ser Leu Gly Gln Leu Thr Asn Leu Arg His Leu His Leu
690 695 700
Thr Cys Ser Thr Val Leu Ser Ser Asp His Leu Lys Arg Lys Leu Ile
705 710 715 720
Pro Leu Ala Phe Ser Leu Gly Lys Leu Gly Asn Leu Lys Ser Leu Thr
725 730 735
Leu Thr Pro Asp Ala Leu Arg Thr Thr Ile Leu Phe Asp Ile Ser Ser
740 745 750
Gly Ile Ser Ser Pro Ser Ile Phe Leu Gln Lys Leu Glu Leu Leu Pro
755 760 765
Pro Ile Cys Phe Phe Ser Arg Leu Pro Ala Cys Phe Gly Glu Leu His
770 775 780
Lys Leu Arg Ile Leu Lys Ile Val Val Lys Glu Leu Gln Gly Asn Asp
785 790 795 800
Ile Asn Asn Ile Ala Gly Leu Pro Ser Leu Val Ile Phe Ser Leu Tyr
805 810 815
Val Arg Thr Ala Leu Thr Gly Thr Val Ile Phe Ser Thr Met Ser Phe
820 825 830
Pro Ala Leu Lys Tyr Phe Arg Phe Thr Cys Gly Val Thr Cys Leu Ala
835 840 845
Phe Gln Glu Gly Ala Met His Arg Leu Gln Arg Leu Lys Leu Cys Phe
850 855 860
Asn Ala His Gly Gly Lys Asn His Ser Arg Val Ile Asp Gly Ile Glu
865 870 875 880
Tyr Leu Leu Asn Leu Gln Glu Val Ser Gly Gln Ile Gly Val Leu Pro
885 890 895
Gly Gly Asp Glu Ser Asn Met Arg Val Val Lys Leu Ser Phe Glu Asp
900 905 910
Thr Ile Arg Lys His Pro Arg Cys Leu Arg Phe Asn Leu Gln Leu Val
915 920 925
Asp Phe Ile Glu Glu Glu Tyr Pro Pro Leu Val Lys Leu His Gln Arg
930 935 940
Gln Gln Asp Glu Tyr Glu Ile Glu Glu Asn Asp Ser Ala Asp Gly Asn
945 950 955 960
Thr Lys His Thr Asp Gly Arg Tyr Gly Phe Asn Arg Phe Ile Phe Ser
965 970 975
Asn Ser Ser Leu Val Asp Leu Glu Ala Asp Phe Gln Ala Gln Ser Arg
980 985 990
Ser Thr Ser Asn Asp Leu Pro Ile Pro Tyr Asn Lys Gln Leu Asp Trp
995 1000 1005
Arg Lys Ala Val Asn His Ile Arg Tyr Lys Arg Leu Ser Arg Ser
1010 1015 1020
Cys Leu Thr Phe Leu Val Ser Asn Lys Leu Leu Gly Val Glu Gln
1025 1030 1035
Ser Phe Ala Leu Trp Glu Glu Arg Asn Glu Leu Leu Gly Val His
1040 1045 1050
Glu His Gly Asp Thr His His Ile Ser Gly Ile Asp Glu Tyr Asn
1055 1060 1065
Glu Val Glu Asp Gly Val Val Ala Val Glu Gly Glu Pro Lys Glu
1070 1075 1080
Leu Arg Ile Gly Glu Ala Leu Glu Gly Leu Thr Glu Thr Ser Cys
1085 1090 1095
Leu Ser Met Thr Thr Leu Glu Gly Phe Thr Gly Thr Ser Ser Leu
1100 1105 1110
Ser Met Ala Ser Asp Asp Asp Thr Ser Asn Thr Thr Met Glu Glu
1115 1120 1125
Met Phe Ile Ser Pro Asp Arg Gln Leu Lys Arg Lys Ile Lys Ser
1130 1135 1140
Trp Met Arg Gly Ala Phe Leu Gly Ser Gly Ser Leu Gly Met Val
1145 1150 1155
Tyr Glu Ala Ile Ser Gln Glu Gly Val Phe Phe Ala Val Lys Glu
1160 1165 1170
Val Ser Leu Leu Asp Gln Gly Ser Lys Ala Gln Gln Ser Ile Leu
1175 1180 1185
Ala Leu Glu Lys Lys Ile Glu Leu Leu Ser Gln Leu Gln His Glu
1190 1195 1200
Asn Ile Val His Tyr Tyr Gly Thr Glu Lys Gly Glu Ser Lys Leu
1205 1210 1215
Tyr Ile Phe Val Glu Leu Val Thr Gln Gly Ser Leu Ser Ser Leu
1220 1225 1230
Tyr Lys Lys Tyr Lys Leu Gln Glu Ser Gln Val Cys Trp Tyr Thr
1235 1240 1245
Ser Gln Ile Leu Asn Gly Leu Val Tyr Leu His Lys Gln Asn Val
1250 1255 1260
Val His Gly Asp Ile Arg Cys Ala Asn Ile Leu Val His Ala Asn
1265 1270 1275
Glu Ser Pro Lys Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Lys Glu Met Ser
1280 1285 1290
Asn Ile Leu Thr Leu Arg Ser Cys Glu Arg Asn Val Tyr Trp Met
1295 1300 1305
Ala Pro Glu Phe Ile Asn Pro Lys Lys Thr Phe Gly Pro Ala Ala
1310 1315 1320
Asp Ile Trp Ser Leu Gly Cys Val Val Leu Glu Met Leu Thr Arg
1325 1330 1335
Gln Ile Pro Tyr Pro Asn Val Lys Trp Thr Lys Ala Leu Tyr Met
1340 1345 1350
Ile Gly Lys Gly Glu Gln Pro Pro Ile Pro Asn Tyr Leu Ser Glu
1355 1360 1365
Glu Ala Gln Asp Phe Ile Cys Gln Cys Val Arg Val Asp Pro Glu
1370 1375 1380
Thr Arg Pro Ser Ala Thr Gln Leu Leu Glu His Pro Phe Val Asn
1385 1390 1395
Arg Gln Ser Asn Leu Leu Ser Ser Leu Arg Val Asp Asp Arg Leu
1400 1405 1410
Asp Gln Met Pro Ile Gly Ala Ile Arg Lys Asn Val Lys Lys Thr
1415 1420 1425
<210> 34
<211> 10808
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 34
gtcaaccccc tcaatgtttc gtttcgtagg acgttgcggg gtcataactt atctttgtag 60
tatgacctta ttaatcgggt ggtgctcact ccgctgagct ctaatagaga tgtctttaag 120
tggagggaaa catcttctgg tcagttcacg gtgcaatcaa tgtatcaggc tctgattaat 180
aacggtcaaa tgtttaatca caagctgatt tggaaactga atttacccct aaagattaaa 240
atctttttgt ggtatttggt taaagggatt attctaacta aggataacct catcaaaaga 300
aattggaatg ggaacaaaaa atgtgggttt tgtaatactg atgagtctat tcaacatttg 360
tttatagaat gtcatgttgc tcgccatatg tggaggttgt ttcacttctg ttttggtatg 420
agtgcaccga ggtctgttcg tcatattttt agtacgtgga tcaccggtat tgatttaaaa 480
actaagcgtc ttgttattac aggtgtctca gtgttttgct gggctatttg gataagtagg 540
aatgacttag tttttaataa tgtttcaagt tttacttatc tgcaggttct ttttagaggt 600
acacactggc ttagattctg ggctcagcta caaaaggatg aagctgatgg agttttaata 660
aagaatgtct gtcgtcgcct ggaatcggtg gccatgcaat tttgtgttaa ttttggttgg 720
aggttttcta ataggattgc cttgtaatca tctcactggt tttattaagt ttaaagaacc 780
tttagtgtgt tagtgtgtgg ctgtgtggag gggtatgtcc cttcattgag cagtgtgata 840
taacaatttg tgttggccct aacctctttt gaggggaaag ccggaacttt ctctccatta 900
tcaaaaaaaa tataatgact aaaatactca tttctccttt gacgtcagtt ttctaggcaa 960
gattggagta aatgttatcc tttaattctt ttagcaccca tgtgagggac tagatactaa 1020
atccaattag tatctacttt agtccatctg tttgacaaaa tagggactaa actagactaa 1080
aaaccagaaa ctaaatatta gtcagtctaa cgaaacgggg cctaattagc tatcgttcta 1140
cgcgaggatc tacgttgttt gatagatggc gcgctgctaa aaacatgacc cgtcgggcga 1200
taacttcatc cttttcaaaa gtcctgtcga gcacggcact gtgcagccta tagatgccga 1260
gataagatcg catacaagtt gacttgaccc gctgcctgga aaaagataag cttcgaacga 1320
atcatgccca cacaacacat tccgcaagat tgattgataa tcacaaagaa ccaaacgggg 1380
atttggaaat gaaaatccag ctctgctaga ccattcaatg atctgaattt tgtcaccgca 1440
ggacacaggt ggaacatcgg ccgggaatat ctctgtccgg tttcgctgag agatactcta 1500
ggattccgag gtttgacacg tcgcaacaac cttgtccaga tcaaacaacg acggtggtgc 1560
gctaatagac gaacaggatg gaagcagaaa agtgacggca agtaaatgac gagagtttga 1620
cggactcacg gtcttctctt caccggcggt caagctaagc ctagtgctgt tctgtggatg 1680
taacggtgct gtaaaagggt ttataaaccc cataggaggt cagccagctg agtatccagt 1740
ttcaagttca gagttcaatc tcacagcacc aagcaaaaag gaagcagatc aagggcagcc 1800
gagcgagcag aggtaccccg gtctctcttt ctccttccgt acataattat ccaattcagt 1860
ttgttacttg ttaagagaat tcgatagtaa gtttgtagta agcttggtca ctccttgaac 1920
tcagcgtagt actttctccg taatacgccg ccaagagatc attctttatt ttttgcaggt 1980
tgtcaattac gtgccttaat atgagtcatt ggaagcagcc gtcgaaactc gccatgcttg 2040
tagtactgct gctgctgcta tgtcatgcag tggacagagt ccactgctcg acgcatcata 2100
acaacagcca agattttcat tctctgctag agttcaagaa gggcatcacc agtgatccgc 2160
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gcagttccac gcgaccatat cgagtcacgg agctcaacct caccggccaa aacttggctg 2280
gccaaatcag ctcctctctt ggaaacctga ccttccttca tatccttcgt cttgccaaca 2340
atagtttcca tggtcccata cctcttctca acaaactcca aaacctgagc aaactcgttc 2400
tgggaaacaa ccttttggag gatgtttttc ctgattggat tacaaactgt tccaacttag 2460
tcagcctaca tctctatgga aaccaactca ccggtcatat tccttcaaac atagactttc 2520
taacaaaact agcatatatc atccttcaca gtaataatct cactgggttc atccctccaa 2580
ccttgggaaa catccacaca ctaatggtac ttgatatttc aaataatcaa ctaaacggaa 2640
gcattcctaa tgaagtttgg caaataaaga acatagaaat gttaaatcta gcaggaaata 2700
acctatcagg tggaatccca gatactctcc ctcacttagc ttttcttatg atattatcat 2760
tggacaccaa tatgttgggt agcacattgc catcaaacat tggtgatgtg ctccctaatc 2820
tgaaagaact atacttagga ggcaactttt ttttgggtac aattccatct tccctaggca 2880
atgcttcaaa tctagaagtc atagacctac caaacaacct tttcagtggc acaatcccaa 2940
gttcttttgg aaacctttca aagttgcaga ctctaaacct tgaggtaaac atgcttgtag 3000
caagggatag tgagggctgg caattctttg atgccctggc aaaatgtaga tatctcgtta 3060
tactttcagt gtctcataat catctacacg gacctatacc aaattcgatt gctaatctgt 3120
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ctattggaaa acttagtggc ttaactgaat tatcactaca aaacaacaat cttacaggta 3240
ccattgagga atgggtcgga aagatgacaa atctaacaat tttaacacta caatcaaaca 3300
acttcacagg gaaaattcca ccttcaattg gcaatcttac acagttgaca aatttctctg 3360
tagctgaaaa caatttcttc gggtctgtac catctaactt gtggaatctg aaatcaatgt 3420
tgtatttaga ccttagtcat aacaatttcc aagggagcat acttgtttag tttggtaact 3480
taggactcgt ctcgctaaaa atttcatcga acaaattcat tggagaaaat cctgaaactt 3540
taggacaact tgaaaatata caaaccattc aaatggacca aaacattctc ggaaacattc 3600
cgtacacatt caaaagtcta tatagcttga gcttgctcaa tctatcccat aacaatttat 3660
ccggcctcat gccaactttt ctaagtggtc taaatctcac taaactggac ctatcctaca 3720
ataatttcca agggaaaata ccaagcattg gtctattcga taatcctgca attgtttcac 3780
tagatggcaa tccaggattg tgtggaggag acatggattt gcacatgcct ccatgccatg 3840
tcgctgcttc gagaagagta ggcagaacaa gcttattgat caaaatattg atcccaatat 3900
ttgggttcat gtcactcgta ttgctgtgta ctttttattc ctagagaaga ggacgtcaag 3960
aagagcatat agatcagagc tatcttatgg tgagcatttt gagaaagata cttataacga 4020
tttagctcaa gcaacacggg acttctcaga atccaacctg attgggagag gaagctatgg 4080
ttcggtgtat cgagggaagc tgaaggaaag caaaatggaa gtggcagtaa aggtttttga 4140
ccttgagatg agaggagcag aaagaagctt cgtgttagag tgtgaagcat tgtgaagcat 4200
tcaacaccgg aatcttcttc ccatcataac tgcttgctca acagtagata atataggaaa 4260
tgttttcaaa gctttaattt atgagttcat gcctaatggg agcctggaca catggctaca 4320
tcacaaaaaa gatgtggagg ctgcaaaaaa tcttggcttg actcagaata agcatagtgg 4380
ttgatatagc tgatgcattg gattatctgc accatgattg tggatggcca actgttcact 4440
gcgacttgaa acccaacatt atccttctag atgatgatat gaatgctctt ctgggagatt 4500
ttggaattgc acgcctctat cttgattatc agtcaaaatg ggcaggttca attagttcaa 4560
ttggtgtaaa gggaacaatt ggatatattc ctccaggtac ctatagttat tttagctcct 4620
tttttgatca tttatgtcaa tattttttat aggtagaaaa taagttataa cacaattaaa 4680
ttgttaattt gtgtgagcat tttccaattt agagtatgga gaaggtggcc atgcatcaat 4740
gtctggggat gtttatagtt ttgggattgt gttgctagag attttgacga gcaaaaggcc 4800
aacatatcct atgtttaagg atggcctgga catcattagc tttgtggaga ataactttcc 4860
cgatcaagta tttgaagtca ttgatgctca cctcctcgag gaatgcagga acccaactca 4920
aggaaatacc ttggtacaag aaaatgagat ctatcaattc ttggttgatc tgctgcaagt 4980
agcactttca tgccttcatt cgttaccatc tgaacgatca aacatgaagc aagtagctag 5040
cagaatgcat gcaatcaaaa cataacataa tgaaatcaca agtaataaga acaagggtgt 5100
tctatgaatt gtacaataac atattgttgg tacctaattt gaactaggtc taggatacct 5160
ttttggccaa agggctccac aaaggaagtg ttcggccgca tggaaaatag acatgtaaaa 5220
cagaaataag catttgtact gtaaataagt aatagatcag atggaaatat aagttaggaa 5280
gcgcttattg tgtaaggccc aaaatctgta taagaaaaaa aaaagtaaat atactactat 5340
gtataatttt gaggatttct tgatcctctt ttctttgagc aaattaaact aaaggaatta 5400
aagtagtcga atgacttcca ataacaattt tattccttta tagaatatac ctctataaac 5460
taaacacata atgataacta agaatttggt attcaagatt tatatccaaa acttaaaact 5520
aaaaggttgg agcaacaaat aaaagagaga ctttcatact acttatttcc tttaaaaact 5580
atatagcccc ttaaaatata gttgaaataa aataattcat gaggatatta tgtactccaa 5640
agtagatatg taatgaagat tacctttttt aagtgtgcat tcaaaataat gtttcctaaa 5700
taaataaata aataccaagt gaatatctca ttattgaagt atttgtcaat atatatatat 5760
ataaagaaag aaggaatgca tcatgctaga attttgaatg tgcatttaaa gcatagattc 5820
gaattcaaat gtgaaaagaa aaaaactgga atttgaaata aaaaaaacag caaatataaa 5880
agaaaaacaa ctttccccta cacctgggcc acattccctc ggccctagaa tatgacaaga 5940
ttttcgcttg agcttgtgag gagattagtt gcaacataaa cgaccctaga atatcaattc 6000
agggtttgtt gtcccatatt acatatggaa cagttgtctg acggttgatc tccattgcct 6060
cagaagatga ttgggtgaga catgtaagaa ttgtgaagac gatgcttcca ccatgtttgg 6120
atgtggttgt tcaaaagtta tctattactc atcgtgatgc tctagtcggg ttgtctccac 6180
aaatgccaaa tgcatctcgt attgaagctc ctttggtaga gcttccggaa gaagtggttg 6240
ttgtgcccga tgctcaatcg gggccgcacg agtatgggat ttctcgtcct ctttctggcg 6300
ttttgtgggg cttctaatcc ggtggtaccc ccaagagatc ccattgaccc aggatccagt 6360
tcaggatcat cctagtaagt gtctttgaca cgttgttcat atccatcgtt atttcgtttg 6420
attagacttt ttaatgtggt atttcttgat tggacccgat gcaagatctc cacaaatcga 6480
taatggtgct tatcttgatg tgcatgtatc atataatatg gacaacatat gcagggcatc 6540
caatagtgtt gatgttcaga ttgaggatga ggaggagcca tatgaggctg cacgggcctt 6600
agattctgat gatgatcgtc cggttcaaga aatgaccgag caagaaattg aactcataag 6660
acgtttgtgt cccgagcgtg accctgcagt acatgaattt agcagtctaa gtcattccac 6720
ccgtgcatat gctgaaggac gtgatgatga actgctagag gctccggata acaccgatag 6780
cattgagatt aaggtaggct tacttttcaa ggacctgcct acactgagac gatggctaca 6840
ggaatattct gtgaatcgca agaggccgtt caaggtgaga cactcgtatg cacaacgtcg 6900
ttacactgtt gtgtgcgagg tgtcgaaatg taattggagg gtatgtgcct gaaggcagaa 6960
ggaaaccgga aagtttaaaa tcaccaaaat tgtaggtcca cacacttgtg cccagataga 7020
gctgagcttt aagcatcgtc agttgacatc taccctaatt gcgaaaagga tattggggat 7080
attgaagggt cagccaaact tgaaggtgaa gtcaattatg accatgactt cggagctgtt 7140
tggttacagg atcaaatatg ggaaagcatg gagggcaaag cagcgagcat gcactacagg 7200
aaacgcataa attttcgtag gccggcctat tttcgtcggt cggcccacga aaatacaatg 7260
ttatttttgt cggccttcgt gaccgacgaa aatgtggaat attttcgtgg gccaggcaat 7320
attttcgtcg gcaggccgac gaaaatacga aagttatttt cgtcggcctc cacaccgacg 7380
aacattttgt gtattttcgt cggcctcagc ccggccgaca aaaataaacg tttaacgggc 7440
cactattttc gtcggcctca ctgaggccga cgaaaataga ggccgttaat cttccatccc 7500
ggcctcaccg caccttctct ctctcgctcg tcttaccttc tctcacccgc cctcaaccgc 7560
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gtaatggttt tacttagttt atagtaatta gttagctaat ttacttgata taatgtatag 7800
attgatagct attcacttgt tagtataaat agttagctag gtatttatat gtaggatact 7860
tgtagcattt tgtttaacac attgatatca catggttagc atattgttca ttatgtagct 7920
atcgtgcagt attctgtgtt ggcaccatcg tgttgttgtt tctttgcagg ttttagaaac 7980
atcactttat agtggaggtg ctgccgattt tttttattga caatagtaat ttttgtacat 8040
aggtgttctt ccgacttgac cttctccacc gttagctgga ctcgtacata ttctcaggta 8100
tacattgttt ttgtaatttc ggttaatgcg gtcatttatt atttactata tagttattag 8160
taaataagta gttactattt attctcaggt atacattgtt ttcatactag ttatttgttt 8220
tctccaccgt ggcgtgccgt gcacgtgccg tgcgcgcggc cgtgcgcgtg ccgtcttttg 8280
aatgttattt atcttttgtt taattagcct ttgaaatgga cggtgatcgg agggtgatgt 8340
cttttgttta atctccgaga tattttttaa tgtttagagt tcagttttaa tcgttaaccg 8400
tagcgaaccg tatgcgtcac ccattcggga acggcgaacg tcacattggc ttgtgaggtt 8460
cgccgttccg gaattgtcca cgtattttgg acagcctgag agtgtaagcc gatgcttgtg 8520
atttgtgaca tgtgccttac gattgacgcg gaattttggt tgtgtaaccc agttgttctc 8580
caacacacca tgttcaggcg tgtgcttgga gagcagcggg gttatgctac cgaaatttca 8640
cggcattcgt aggctacacg tcataaatca caagcatcag cctacactct tgggtgggtt 8700
tagggccttt acctaatagg gagttcacct aagccacgga cgatcgttga tgttctttga 8760
cttttgttta gcctttgaaa tggacggtga tcggagggtg atgtatgacg ggtggagaaa 8820
ggatggggca cattcgaatg aatggatggg tgtaacaaag gcttttcttg agcacgcttt 8880
caaagatgca actggtcgtc tagtgaagtg tccttgcaat cgctgtgaga acaagtggcc 8940
tcagaagaag gaagaaatgg aggttgaaat gaacgctgag gagccggggc agcttccacg 9000
cgatgctcag gaattcttcc ggctactcgc cgcgggagaa gagagactgc acgagcacac 9060
tcagatgtca gttcttggga ctctcacaag actaatggtg ataaagtcga agcacaacat 9120
ttcaaacagt gcttacaatg acatcgtcca actgatgggc gaggttctcc cggagaatca 9180
taagttgcca aagaatatgt acttcacaaa gaagatgttg gctggtcttg ggatgacata 9240
tgagaagatc gacgtgtgtc ccaacagttg catgctattc tttgaggagg atgacaagct 9300
ggaccgttgt aagcattgtg aagcttctag atatgtcgag gtgacaaatg atgagggtga 9360
attggtagtt acgaaggtcg tagctaagca acttcgtcgg ttgcccatca ttcctcggct 9420
ttcaaggttg ttcctcaaca aggaaatagc tctgcatatg acgtggccaa agaatggtgt 9480
acgtctcatc acaaggaaat agctctgcat acaacgagcc gaagaagcat catcggatgc 9540
ggatgacttt tgattagtat gtttctttta gttaatcaat taagccatgt attccaattt 9600
tcacattatt aattttcata ttatttgttt catatactgt ggtttgacat taatttatct 9660
acagttgaac atgttcaagc ataggagatc gaggaggagt gggggcagcg cggccagcga 9720
ggacagctcg ggcagtgggc tttttcaggg cacctcacag agccgacaga ggcagcaaca 9780
acttctcgac tgtctagacg aagtgtaggg tgaggagggt gagtaggagg ctcctcagca 9840
ggatgctcat gtgcagggtg aaagtcgcct agaggggggg tgaatagggc aaaactgaaa 9900
ttcttaaaaa taatcacaac tacaagctgg gttagcgtta gaaatataat tgtgtccgcg 9960
agagagggtg caaaacaaat cgcaagcgaa taaggagaga gacacgtgga tttgttttac 10020
cgaggttcgg ttctcgcaaa cctactcccc gttgaggtgg tcacaaatac cgggtctctt 10080
tcaacccttt ccctctctca aacggtccct cggaccgagt gagcttttct tctcaatcac 10140
ttggaacaca aagttcccac aaggaccacc acaagattgg tgtctcttgc ctcaattaca 10200
agtgagtttg atcgcaatga aagaatcaaa gaaagaagaa agcaatccaa gcgcaagagc 10260
tcgaaggaac acaagcaaat ctctctcact aatcactagg gcgttgtgtg tagtttggag 10320
aggatttgat cacttgggtg tgtctagaat tgaatgctaa agctcttgta agtaattgaa 10380
gtgggaaaac ttggatgact tgaatgtggg gtggttgggg gtatttatag ccccaaccac 10440
caaactagcc gtttggtggg gctgtctgtc gcatggtgca ccggacagtc cggtgcacac 10500
cggacagtgt ccggtgcgcc agccacgtca ccaggccgtt gggttccgat cgttggagct 10560
ctgactgctg ggcccgcctg gatgtccggt ggcacaccgg acatgcactg tagagtgtcc 10620
ggtgcgccac ttcgcgtgtg cctgacttct gcgcgctctg gcgcgcattt aatgcttctg 10680
caggtgaccg ttggcgcgaa gtagtcgttg ctccgctggc tcaccggaca gtctggtgta 10740
caccggacat gtccggtgaa ttatagcgga gcaaattccc gaagttggcg agttcctgag 10800
acgctctt 10808
<210> 35
<211> 3903
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 35
atgagtcatt ggaagcagcc gtcgaaactc gccatgcttg tagtactgct gctgctgcta 60
tgtcatgcag tggacagagt ccactgctcg acgcatcata acaacagcca agattttcat 120
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cgagtcacgg agctcaacct caccggccaa aacttggctg gccaaatcag ctcctctctt 300
ggaaacctga ccttccttca tatccttcgt cttgccaaca atagtttcca tggtcccata 360
cctcttctca acaaactcca aaacctgagc aaactcgttc tgggaaacaa ccttttggag 420
gatgtttttc ctgattggat tacaaactgt tccaacttag tcagcctaca tctctatgga 480
aaccaactca ccggtcatat tccttcaaac atagactttc taacaaaact agcatatatc 540
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ctaatggtac ttgatatttc aaataatcaa ctaaacggaa gcattcctaa tgaagtttgg 660
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ttaactgaat tatcactaca aaacaacaat cttacaggta ccattgagga atgggtcgga 1260
aagatgacaa atctaacaat tttaacacta caatcaaaca acttcacagg gaaaattcca 1320
ccttcaattg gcaatcttac acagttgaca aatttctctg tagctgaaaa caatttcttc 1380
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caaaccattc aaatggacca aaacattctc ggaaacattc cgtacacatt caaaagtcta 1620
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tgtggaggag acatggattt gcacatgcct ccatgccatg tcgctgcttc gagaagagta 1860
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tatcttatgg tgagcatttt gagaaagata cttataacga tttagctcaa gcaacacggg 2040
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aaaggaagtg ttcggccgca tggaaaatag acatgtaaaa cagaaataag catttgtact 3240
gtaaataagt aatagatcag atggaaatat aagttaggaa gcgcttattg tgtaaggccc 3300
aaaatctgta taagaaaaaa aaaagtaaat atactactat gtataatttt gaggatttct 3360
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ataacaattt tattccttta tagaatatac ctctataaac taaacacata atgataacta 3480
agaatttggt attcaagatt tatatccaaa acttaaaact aaaaggttgg agcaacaaat 3540
aaaagagaga ctttcatact acttatttcc tttaaaaact atatagcccc ttaaaatata 3600
gttgaaataa aataattcat gaggatatta tgtactccaa agtagatatg taatgaagat 3660
tacctttttt aagtgtgcat tcaaaataat gtttcctaaa taaataaata aataccaagt 3720
gaatatctca ttattgaagt atttgtcaat atatatatat ataaagaaag aaggaatgca 3780
tcatgctaga attttgaatg tgcatttaaa gcatagattc gaattcaaat gtgaaaagaa 3840
aaaaactgga atttgaaata aaaaaaacag caaatataaa agaaaaacaa ctttccccta 3900
cac 3903
<210> 36
<211> 1254
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 36
Met Ser His Trp Lys Gln Pro Ser Lys Leu Ala Met Leu Val Val Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Cys His Ala Val Asp Arg Val His Cys Ser Thr His
20 25 30
His Asn Asn Ser Gln Asp Phe His Ser Leu Leu Glu Phe Lys Lys Gly
35 40 45
Ile Thr Ser Asp Pro His Gly Val Leu Ser Asn Trp Asn Pro Ser Ile
50 55 60
His Phe Cys His Trp His Gly Val Asn Cys Ser Ser Thr Arg Pro Tyr
65 70 75 80
Arg Val Thr Glu Leu Asn Leu Thr Gly Gln Asn Leu Ala Gly Gln Ile
85 90 95
Ser Ser Ser Leu Gly Asn Leu Thr Phe Leu His Ile Leu Arg Leu Ala
100 105 110
Asn Asn Ser Phe His Gly Pro Ile Pro Leu Leu Asn Lys Leu Gln Asn
115 120 125
Leu Ser Lys Leu Val Leu Gly Asn Asn Leu Leu Glu Asp Val Phe Pro
130 135 140
Asp Trp Ile Thr Asn Cys Ser Asn Leu Val Ser Leu His Leu Tyr Gly
145 150 155 160
Asn Gln Leu Thr Gly His Ile Pro Ser Asn Ile Asp Phe Leu Thr Lys
165 170 175
Leu Ala Tyr Ile Ile Leu His Ser Asn Asn Leu Thr Gly Phe Ile Pro
180 185 190
Pro Thr Leu Gly Asn Ile His Thr Leu Met Val Leu Asp Ile Ser Asn
195 200 205
Asn Gln Leu Asn Gly Ser Ile Pro Asn Glu Val Trp Gln Ile Lys Asn
210 215 220
Ile Glu Met Leu Asn Leu Ala Gly Asn Asn Leu Ser Gly Gly Ile Pro
225 230 235 240
Asp Thr Leu Pro His Leu Ala Phe Leu Met Ile Leu Ser Leu Asp Thr
245 250 255
Asn Met Leu Gly Ser Thr Leu Pro Ser Asn Ile Gly Asp Val Leu Pro
260 265 270
Asn Leu Lys Glu Leu Tyr Leu Gly Gly Asn Phe Phe Leu Gly Thr Ile
275 280 285
Pro Ser Ser Leu Gly Asn Ala Ser Asn Leu Glu Val Ile Asp Leu Pro
290 295 300
Asn Asn Leu Phe Ser Gly Thr Ile Pro Ser Ser Phe Gly Asn Leu Ser
305 310 315 320
Lys Leu Gln Thr Leu Asn Leu Glu Val Asn Met Leu Val Ala Arg Asp
325 330 335
Ser Glu Gly Trp Gln Phe Phe Asp Ala Leu Ala Lys Cys Arg Tyr Leu
340 345 350
Val Ile Leu Ser Val Ser His Asn His Leu His Gly Pro Ile Pro Asn
355 360 365
Ser Ile Ala Asn Leu Ser Thr Ser Leu Gln Gln Leu Phe Met Gly Trp
370 375 380
Asn Asn Leu Ser Gly Ile Val Pro Pro Thr Ile Gly Lys Leu Ser Gly
385 390 395 400
Leu Thr Glu Leu Ser Leu Gln Asn Asn Asn Leu Thr Gly Thr Ile Glu
405 410 415
Glu Trp Val Gly Lys Met Thr Asn Leu Thr Ile Leu Thr Leu Gln Ser
420 425 430
Asn Asn Phe Thr Gly Lys Ile Pro Pro Ser Ile Gly Asn Leu Thr Gln
435 440 445
Leu Thr Asn Phe Ser Val Ala Glu Asn Asn Phe Phe Gly Ser Val Pro
450 455 460
Ser Asn Leu Trp Asn Leu Lys Ser Met Leu Tyr Leu Asp Leu Ser His
465 470 475 480
Asn Asn Phe Gln Gly Ser Ile Leu Val Phe Gly Asn Leu Gly Leu Val
485 490 495
Ser Leu Lys Ile Ser Ser Asn Lys Phe Ile Gly Glu Asn Pro Glu Thr
500 505 510
Leu Gly Gln Leu Glu Asn Ile Gln Thr Ile Gln Met Asp Gln Asn Ile
515 520 525
Leu Gly Asn Ile Pro Tyr Thr Phe Lys Ser Leu Tyr Ser Leu Ser Leu
530 535 540
Leu Asn Leu Ser His Asn Asn Leu Ser Gly Leu Met Pro Thr Phe Leu
545 550 555 560
Ser Gly Leu Asn Leu Thr Lys Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Asn Phe Gln
565 570 575
Gly Lys Ile Pro Ser Ile Gly Leu Phe Asp Asn Pro Ala Ile Val Ser
580 585 590
Leu Asp Gly Asn Pro Gly Leu Cys Gly Gly Asp Met Asp Leu His Met
595 600 605
Pro Pro Cys His Val Ala Ala Ser Arg Arg Val Gly Arg Thr Ser Leu
610 615 620
Leu Ile Lys Ile Leu Ile Pro Ile Phe Gly Phe Met Ser Leu Val Leu
625 630 635 640
Leu Cys Thr Phe Tyr Ser Arg Arg Gly Arg Gln Glu Glu His Ile Asp
645 650 655
Gln Ser Tyr Leu Met Val Ser Ile Leu Arg Lys Ile Leu Ile Thr Ile
660 665 670
Leu Lys Gln His Gly Thr Ser Gln Asn Pro Thr Leu Gly Glu Glu Ala
675 680 685
Met Val Arg Cys Ile Glu Gly Ser Arg Lys Ala Lys Trp Lys Trp Gln
690 695 700
Arg Phe Leu Thr Leu Arg Glu Glu Gln Lys Glu Ala Ser Cys Ser Val
705 710 715 720
Lys His Cys Glu Ala Phe Asn Thr Gly Ile Phe Phe Pro Ser Leu Leu
725 730 735
Ala Gln Gln Ile Ile Glu Met Phe Ser Lys Leu Phe Met Ser Ser Cys
740 745 750
Leu Met Gly Ala Trp Thr His Gly Tyr Ile Thr Lys Lys Met Trp Arg
755 760 765
Leu Gln Lys Ile Leu Ala Leu Arg Ile Ser Ile Val Val Asp Ile Ala
770 775 780
Asp Ala Leu Asp Tyr Leu His His Asp Cys Gly Trp Pro Thr Val His
785 790 795 800
Cys Asp Leu Lys Pro Asn Ile Ile Leu Leu Asp Asp Asp Met Asn Ala
805 810 815
Leu Leu Gly Asp Phe Gly Ile Ala Arg Leu Tyr Leu Asp Tyr Gln Ser
820 825 830
Lys Trp Ala Gly Ser Ile Ser Ser Ile Gly Val Lys Gly Thr Ile Gly
835 840 845
Tyr Ile Pro Pro Gly Thr Tyr Ser Tyr Phe Ser Ser Phe Phe Asp His
850 855 860
Leu Cys Gln Tyr Phe Leu Val Glu Asn Lys Leu His Asn Ile Val Asn
865 870 875 880
Leu Cys Glu His Phe Pro Ile Ser Met Glu Lys Val Ala Met His Gln
885 890 895
Cys Leu Gly Met Phe Ile Val Leu Gly Leu Cys Cys Arg Phe Arg Ala
900 905 910
Lys Gly Gln His Ile Leu Cys Leu Arg Met Ala Trp Thr Ser Leu Ala
915 920 925
Leu Trp Arg Ile Thr Phe Pro Ile Lys Tyr Leu Lys Ser Leu Met Leu
930 935 940
Thr Ser Ser Arg Asn Ala Gly Thr Gln Leu Lys Glu Ile Pro Trp Tyr
945 950 955 960
Lys Lys Met Arg Ser Ile Asn Ser Trp Leu Ile Cys Cys Lys His Phe
965 970 975
His Ala Phe Ile Arg Tyr His Leu Asn Asp Gln Thr Ser Lys Leu Ala
980 985 990
Glu Cys Met Gln Ser Lys His Asn Ile Met Lys Ser Gln Val Ile Arg
995 1000 1005
Thr Arg Val Phe Tyr Glu Leu Tyr Asn Asn Ile Leu Leu Val Pro
1010 1015 1020
Asn Leu Asn Val Asp Thr Phe Leu Ala Lys Gly Leu His Lys Gly
1025 1030 1035
Ser Val Arg Pro His Gly Lys Thr Cys Lys Thr Glu Ile Ser Ile
1040 1045 1050
Cys Thr Val Asn Lys Ile Arg Trp Lys Tyr Lys Leu Gly Ser Ala
1055 1060 1065
Tyr Cys Val Arg Pro Lys Ile Cys Ile Arg Lys Lys Lys Val Asn
1070 1075 1080
Ile Leu Leu Cys Ile Ile Leu Arg Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala
1085 1090 1095
Asn Thr Lys Gly Ile Lys Val Val Glu Leu Pro Ile Thr Ile Leu
1100 1105 1110
Phe Leu Tyr Arg Ile Tyr Leu Tyr Lys Leu Asn Thr Leu Arg Ile
1115 1120 1125
Trp Tyr Ser Arg Phe Ile Ser Lys Thr Asn Lys Val Gly Ala Thr
1130 1135 1140
Asn Lys Arg Glu Thr Phe Ile Leu Leu Ile Ser Phe Lys Asn Tyr
1145 1150 1155
Ile Ala Pro Asn Ile Val Glu Ile Lys Phe Met Arg Ile Leu Cys
1160 1165 1170
Thr Pro Lys Ile Cys Asn Glu Asp Tyr Leu Phe Val Cys Ile Gln
1175 1180 1185
Asn Asn Val Ser Ile Asn Lys Ile Pro Ser Glu Tyr Leu Ile Ile
1190 1195 1200
Glu Val Phe Val Asn Ile Tyr Ile Tyr Lys Glu Arg Arg Asn Ala
1205 1210 1215
Ser Cys Asn Phe Glu Cys Ala Phe Lys Ala Ile Arg Ile Gln Met
1220 1225 1230
Lys Glu Lys Asn Trp Asn Leu Lys Lys Lys Gln Gln Ile Lys Lys
1235 1240 1245
Asn Asn Phe Pro Leu His
1250
<210> 37
<211> 7418
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 37
cggtgcagat ctgcgctagg gcaggaacgg ttgaagaagc gagctcgatg tcagtggtga 60
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cgtaacctcg tgtcgagcca tcaactctca ccactctatt tatagactac gtaacaggaa 180
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ttgggccaac tgatggagat caattctaac actacagagt gtacatacgg gtgaacccat 300
gaaccttgca gtagagaaac tgtaaggtaa ttttgtgtgg acttaaaaca ataatcatta 360
cactaatttg tgctgtgatt ccttaattgt ctggtgcctg gtgggctagg ctggaattcc 420
taaccttcac tgccccgcct acacgttgcg cactttgact acacttggaa aacagtctgc 480
tggtcctagc tgcgataaca ttgaacaggc atgagatgca aaagcttgac ctgatgccgg 540
tccgttccaa ccatcgattg ttaaaagatc ctgatggcga tacagcaaac ttgcttgacc 600
tggtgcaagt cttcgggccc tacactcggt tgagcagaga acgacacaat cctatgaatt 660
aaaattcacc accagagagt actctttatt aatttagctg aatagcttcc tgtgactcga 720
ctcgatccat cgatattgca gagaagacca ggcctcgtct gtctagctga tgtgatgaac 780
atgcatcaac cttgctttct acagtatctc ctcctcatcc tcgtgcctct gctgctgtcc 840
gcctctgctt atgatagatc aggtgagttc accttcgatg gtttctctgg caacgatcta 900
ataaccatgg atggtgcagc ttctgtcacc aatggcctct tgagcctcac tagcgggcag 960
aaggaattga gaggtcacgc tttctatgct ttccctctcg atttcacaag tgccgccgtc 1020
ccaaatagct ccgccgttct gtccttctct acaacctttg tctttgccat catcggccca 1080
tatgatgatt tgagtggcca tggtcttgcc tttgtgcttt cttccaccaa tgatttgttt 1140
actgccttgc ctagccagta cctaggcctt ctcaattcat ggaatgatgg taactcatca 1200
aatcatcttc ttgcaatcga gcttgatacc atacagagca cccagttcaa tgacatcaac 1260
gacaaccaca ttgggatcga catcaatagc ctgtcctccg ttgcctcaca cactgcaggc 1320
tactacacct ccaatggaga gtttcatccg ctgaaactta taagtagaaa accgatgcag 1380
gtgtgggtgg actatgacag caaccatatc atgctgaatg tcacaatagc accttacttc 1440
atgtcgtcca ccaaacccag caggccactg ctctcgacta tattcaatct ttcctctatt 1500
ttgccaaccg caacagtata cgctgggttt tcctccgcga ctggcacact taactgcaag 1560
cattacgttc ttggctggag cttcaagctc aacggagaag ctgcatcact caactattcc 1620
gccttatctg tcaagactat ccaagaaatc gcacaacaag ttccaactag cgatcaccca 1680
ggcagctaca aggttctgat atgcaaaatt ctcttaccga tcgttgcaat tttcgtactt 1740
gtttctgctg ttcttgttaa ggtccacctg aagaggcgat cacaagaaag ggctgaacta 1800
gactggcaga gggagtatgg gcctccgtct ttcacctaca aagaattgtt ggccgccact 1860
catggattca aggacaagat gcttcttggt agaggaggct ttgggagtgt gtacaaagga 1920
gtgatgccta tctctaagca gatagctgct attaagcgag tgtcgccgga gtcaaggcaa 1980
gggatgaggg aattcatggc cgagatcacc atcctcggtc atcttcgcca ccgcaatctg 2040
gtgcagctga ttgggtattg cagccataag caacatcttc ttttggtcta cgactacatg 2100
ccaaatggaa gccttgactg ctatttgcat actcaagatc atggcagcac caatctatgc 2160
tgggctcaaa gattccacat catcaaaggt atagcatctg gtctcttcta cctccacgag 2220
gactgggagc aggttgtcat ccaccgggac atcaagacca gcaatgtcct tctcgatagc 2280
gagatgaatg cgaggctagg tgattttggc cttgcaagat cccatgatca tggtgctgat 2340
gctcacacca cgcatgtggc aggtacgtac ggttacattg ctcccgagtt ggccaggctt 2400
ggcaaggcaa ccaaagcaac tgacatcttt gccttcggcg tgttgatgat ggaggtcacc 2460
tgtgcaatac ggccaatatg ggtgaacacc accgatgggg agcctctggc cctagcagac 2520
tgggtgcttg ctgcatggca aggtggttcc atcaccgatg ccgtcgaccc aagactggat 2580
agttatgtgg atgaggagat agagttagtc ctgaaacttg gcttgctctg ttcgcatccc 2640
tcgccaaacg cgaggccttg catgcgcctt gtcatgcagt acctgcaaag cgacacacca 2700
ctcccatcag actttcaacc gaatagttta ctgagcattg gtgtgattca agatgaaatg 2760
catgatcagc gagccatgtc atgtccatca gctgctataa ccgatctttc caaagggaga 2820
taacatcgct gtgttacttt ggcaataatc atctgcaatg tgctcttgct taggactagt 2880
ttggaagcaa gaataatgga ggagattgag agactacaat cccatactat tcaattttaa 2940
acagtgatag ctagtttgga aactacattt ttctaaggga tttctatttt cctcagggaa 3000
aataaactta tttcccttaa gaaaatataa atcccttaaa aaatgatgtt tccaaactag 3060
ccttgaggga ttctagtctc atcgatcccc tctattccag cccttagtgt tggtactgct 3120
actgcttatt tgacgtgcta ttctatggca gagtttcgat ttacttggag taatgtgtca 3180
aatcctatga cgttgtatta ctatgaacat ctttcgtctg agattatcca gctactattc 3240
ataacgtcaa tatactagat gcagtaccca aatgtactaa atgttgtaca actgtaggtc 3300
tggcctctcg gaatgctgta gaattttggt ttaatttcat gcttcctgat tattaccatg 3360
gacatctaag agcttccacg agtgagaagt ctagttgtat atgtttgatt tagcaaatta 3420
ctttttgtct ttttttaatg caataaagaa tttaaggtgt tctcattttt aatacagtaa 3480
ggaacaaaac tcgaaaaaag gggaaaaaca tcaatatata ctagtacatt attcagatca 3540
taccttgtac tagtcagaac tgccactctc tgctgaaagg gtccaagcac taaaatagcg 3600
tttgcattaa tatttcttgt ttaccttaca ctgattaatg ggcatgttta tataccaatt 3660
cacatcaatg actataatac agttgcttaa atttgattca tcaagaacct tgctaaatta 3720
ctacagtact agagtccctt tgcagcaagt ttttcgattt ggctctttga taccacttaa 3780
attcctcttc cctaagcaac tcagccaatc tattttgcaa gcaatgtttt aaatcaagct 3840
cttgagctga taaaagcact acttctgttt ttttatcaag tccatctagc ttattcaaga 3900
ttgttttctt ctctttattg caggcaccac tggtattttt agcccaacct ctcaaaaatt 3960
taaatttttc ttctctttat tgcaggcacc aagtcttctt atctttgcat gccacctctc 4020
cagaggtgta tggcccccaa ttcttgtgat cttacattct taaccatgtc atagaatcca 4080
tctcacagta atcaccctaa ttcaaattta aattgttttt taatatgatt cgagctggat 4140
tcaccaaagt ttaaaagaag gggggtatga tcagagatat ctctattaag ggctaccacc 4200
gatgataagg gatacttcta atccaattct gtggtcagta acactctatc aagtttctca 4260
tatgtaggtg tagtaaggtt attagcccaa gtaaactgcc gcccagacat ctccaactcc 4320
ttcagacaaa gaccatcaat tacgacatta aacaggaaag gccaacgatg gtcaaaattg 4380
tccttatttt ttcgctgggt tttctgagaa tattgaaatc ccccctatta aaagaggttg 4440
ggattcatga ctccctaagc agactaactc cgacaagaat tgttcttttt tatccacttg 4500
agcaggacca tagacctcta ctaaagccca cttgaagcaa tcacttttgt tgcacaaggt 4560
gaacttaaca aaaaagtcac cctcctctat ggcccctata tcaaacacgt ctaagtcaat 4620
tcccaataaa atacctcctg agcgaccttc tagctctttg caatgccaaa gaaaattctt 4680
ccctccacat agattacgca aaaatggatc ggtagacgac ttacgcaccg tctccgaaat 4740
tgtaatgaaa gacaagtttt gctctttagc caaatctgaa acaaacttat gtttcatggg 4800
gtctttgaac ccatcactat tccaaaaaat acctttcatt tgaaaccaaa gtttttttct 4860
tctacctttt cgatttgtgt tataagatac tgcagtacga gccatagaat tatgctcact 4920
gttagtatcc ataatttcct ctagaacttc actacacatg ttactaagca ataatttatt 4980
caactcatca ctttcataaa actcaatctc ttccttaact attgccctat ctgctacttc 5040
ttgttaattt tgggacagag aactagagcc acccgactga accatggact caataaagtt 5100
ttgtacaaca caagaatcat ttgtaaattt aaagcctaaa ggatgtagat tagccacaac 5160
atcatcacac gaaaaatgta aagatgaaca agagttactc ataccttcct caatagaagt 5220
attgctcctt tgagtcacat gagagcccac actagcatct ggtacatccg ccagctttgc 5280
tatctccgga gtcatgagca caaattctcc catcaagact tgcgaatctg aaaccttctt 5340
accatgactc ccatctccac ctatttttgc tccactagat tcttctctca cttgcttgtc 5400
tctcatagaa gaatcctttt gttgtggcac tggtgccata ccccctggca catttgcatc 5460
atcatctcca aaaccaaaat catccatatc catcggctcg ggcttctcct catttatatt 5520
ctcctccacc ctgaattgca gctcatacac aaagtcgcca atggccacat ccacatattg 5580
tggaatgagg tttggatcaa gaactgacac ttgtagtcga catacatcaa acttgttggt 5640
gaacttcata tcaactgcct tggtcgcacc taaaatcgaa cccaccgccc agataagaag 5700
aaattgaatc atcacagacg gtaaaccaat gaattggacc caaaccttct taagcttcgc 5760
ttttgctttt tttctgaaac acatattcct caatttttat atatgcacta tgttctgttt 5820
gcaccacccc cattccaacg tatgatcgag ttcagaacgt gacggaaaag tggtcttgaa 5880
gcaattaacc ccagtctaaa caacctccca attccattta ctagaaacca tcctctgcaa 5940
ttctgagatc acttgtgcct cagagagaac accccttgta actttaacca cagccgctgc 6000
tacctcctct ttagggtttg ttcgcttatt ttcaatccat atggattgaa gtggattgat 6060
acggattgag agagattttg acttactagg gattgaaacc ccctcaatcc atatggattg 6120
gggtagaacc gaacaagccc ttaggcttac ttttatgctc aaaaggtatg taataaaatc 6180
caagaccatc caaagcataa ccacaggtca aagcacttaa tttatccaca catgcccttt 6240
ggttagacat ctatagcagt agggttgctt accagtgcct tctttccctc ctagcttgtt 6300
tcactagctt gacatcagac cctccctgat caggtaccag aacaccttgt ggattttaga 6360
atagactcta aacaatggag gtgtgggcac agcccctgta agcgaggaat tcaagccgct 6420
gaccggcaca ggagcttttc ccagagcttg atttagcaag gcaatagcct gaacaaacat 6480
gtctgttgag ggagatgaac caagcccagc gactgccgac aagtcgacgg atttggctcc 6540
ctggagctca cctccacgct gcaggttacc acctaaaaaa gacccacttt cagaaccaaa 6600
ccccccacgg gtccctccgg cagaaccagc tccatgacca ggattgaaat tctggccacc 6660
agcatcattg tcaaaccctc ccctgttgcc gtggtagggg cgccggaaac cacatctgtt 6720
catcaatcct ggctgcccat tgttatgccc gcctcgattg cctcctgctc catcacatcc 6780
tccttcatgc cccatctgat tcctgtcgcc tgccatggtg atggcgtctg cgtacgagga 6840
aatgaaggga caaacaacgg cagtcgaacg aactatggcc tatgggagcc ctagagaaac 6900
caaccgtgct gtcagttctt gcaaacaagg aaatcagggc atatgtgggc caagctttaa 6960
gacccggtgc cgaaaagaag agtcgctagg ccctggactc acagccacag aaacctttcc 7020
acgacaactt tttgaaactc tccattaatc ctagagccag ctgagttgcg atccaccgtt 7080
ctcggtggca cattagcatt agcttgctga tattgtggcc aagatttggt tcttggagaa 7140
gcaaacttgg ctctgcttaa cgcatccccc aaagatttgg ttctacctta gcagcaaaat 7200
aataatgcag tagtataggc ttaaggcagt gttttaaaac tgggagattc aaaagatcag 7260
tggcttgccg ttgctcaaaa gaactggcgg ctcgtggagc tctttgacga tgcacggctt 7320
ttcggaacgc ggttctaggg ctctccagtg taagtgtaac ctacgcaccg caaacaataa 7380
aacacaccaa ttgaggcaaa acaatgtcga gagcgaag 7418
<210> 38
<211> 639
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 38
Met Asn Met His Gln Pro Cys Phe Leu Gln Tyr Leu Leu Leu Ile Leu
1 5 10 15
Val Pro Leu Leu Leu Ser Ala Ser Ala Tyr Asp Arg Ser Gly Glu Phe
20 25 30
Thr Phe Asp Gly Phe Ser Gly Asn Asp Leu Ile Thr Met Asp Gly Ala
35 40 45
Ala Ser Val Thr Asn Gly Leu Leu Ser Leu Thr Ser Gly Gln Lys Glu
50 55 60
Leu Arg Gly His Ala Phe Tyr Ala Phe Pro Leu Asp Phe Thr Ser Ala
65 70 75 80
Ala Val Pro Asn Ser Ser Ala Val Leu Ser Phe Ser Thr Thr Phe Val
85 90 95
Phe Ala Ile Ile Gly Pro Tyr Asp Asp Leu Ser Gly His Gly Leu Ala
100 105 110
Phe Val Leu Ser Ser Thr Asn Asp Leu Phe Thr Ala Leu Pro Ser Gln
115 120 125
Tyr Leu Gly Leu Leu Asn Ser Trp Asn Asp Gly Asn Ser Ser Asn His
130 135 140
Leu Leu Ala Ile Glu Leu Asp Thr Ile Gln Ser Thr Gln Phe Asn Asp
145 150 155 160
Ile Asn Asp Asn His Ile Gly Ile Asp Ile Asn Ser Leu Ser Ser Val
165 170 175
Ala Ser His Thr Ala Gly Tyr Tyr Thr Ser Asn Gly Glu Phe His Pro
180 185 190
Leu Lys Leu Ile Ser Arg Lys Pro Met Gln Val Trp Val Asp Tyr Asp
195 200 205
Ser Asn His Ile Met Leu Asn Val Thr Ile Ala Pro Tyr Phe Met Ser
210 215 220
Ser Thr Lys Pro Ser Arg Pro Leu Leu Ser Thr Ile Phe Asn Leu Ser
225 230 235 240
Ser Ile Leu Pro Thr Ala Thr Val Tyr Ala Gly Phe Ser Ser Ala Thr
245 250 255
Gly Thr Leu Asn Cys Lys His Tyr Val Leu Gly Trp Ser Phe Lys Leu
260 265 270
Asn Gly Glu Ala Ala Ser Leu Asn Tyr Ser Ala Leu Ser Val Lys Thr
275 280 285
Ile Gln Glu Ile Ala Gln Gln Val Pro Thr Ser Asp His Pro Gly Ser
290 295 300
Tyr Lys Val Leu Ile Cys Lys Ile Leu Leu Pro Ile Val Ala Ile Phe
305 310 315 320
Val Leu Val Ser Ala Val Leu Val Lys Val His Leu Lys Arg Arg Ser
325 330 335
Gln Glu Arg Ala Glu Leu Asp Trp Gln Arg Glu Tyr Gly Pro Pro Ser
340 345 350
Phe Thr Tyr Lys Glu Leu Leu Ala Ala Thr His Gly Phe Lys Asp Lys
355 360 365
Met Leu Leu Gly Arg Gly Gly Phe Gly Ser Val Tyr Lys Gly Val Met
370 375 380
Pro Ile Ser Lys Gln Ile Ala Ala Ile Lys Arg Val Ser Pro Glu Ser
385 390 395 400
Arg Gln Gly Met Arg Glu Phe Met Ala Glu Ile Thr Ile Leu Gly His
405 410 415
Leu Arg His Arg Asn Leu Val Gln Leu Ile Gly Tyr Cys Ser His Lys
420 425 430
Gln His Leu Leu Leu Val Tyr Asp Tyr Met Pro Asn Gly Ser Leu Asp
435 440 445
Cys Tyr Leu His Thr Gln Asp His Gly Ser Thr Asn Leu Cys Trp Ala
450 455 460
Gln Arg Phe His Ile Ile Lys Gly Ile Ala Ser Gly Leu Phe Tyr Leu
465 470 475 480
His Glu Asp Trp Glu Gln Val Val Ile His Arg Asp Ile Lys Thr Ser
485 490 495
Asn Val Leu Leu Asp Ser Glu Met Asn Ala Arg Leu Gly Asp Phe Gly
500 505 510
Leu Ala Arg Ser His Asp His Gly Ala Asp Ala His Thr Thr His Val
515 520 525
Ala Gly Thr Tyr Gly Tyr Ile Ala Pro Glu Leu Ala Arg Leu Gly Lys
530 535 540
Ala Thr Lys Ala Thr Asp Ile Phe Ala Phe Gly Val Leu Met Met Glu
545 550 555 560
Val Thr Cys Ala Ile Arg Pro Ile Trp Val Asn Thr Thr Asp Gly Glu
565 570 575
Pro Leu Ala Leu Ala Asp Trp Val Leu Ala Ala Trp Gln Gly Gly Ser
580 585 590
Ile Thr Asp Ala Val Asp Pro Arg Leu Asp Ser Tyr Val Asp Glu Glu
595 600 605
Ile Glu Leu Val Leu Lys Leu Gly Leu Leu Cys Ser His Pro Ser Pro
610 615 620
Asn Ala Arg Pro Cys Met Arg Leu Val Met Gln Tyr Leu Pro Gln
625 630 635
<210> 39
<211> 4132
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 39
atggaccgga tgctgctcga ccagctggcc ggcgaggccc tgcgggaggt gctgcacgcg 60
gtgcagggca ccctgttctg ccgctccacc gccgagcgcc tgcgccggag cgtcgagccg 120
ctgctgccgc tcgtccaggg cctcggcccg cacagcaccc agcgctccgc gggggagctc 180
ggcgagctcg cggcgcgggt cagggaggcg ctcgacctgg cgcgccgcgc cgccgcgtcc 240
ccgcgctgga acgtctaccg cgccgcgcag ctgtcgcgcc ggatggaggc ggccgaccgc 300
ggcatcgcgc gctggctgga gcgccacgcc cccgcgcacg tcatcggcgg cgtgcgcagg 360
ctccgcgacg aggccgacgc gcgcatcggt cgcctcgagc gccgcgtcga ggagatcgcc 420
gccgccaccg cgcagccgcc gccccccgcc ctctccgtcc ccgtcgcgcc gccgccgcac 480
aagggcgtgc ccatgccgat ggaggcgccg ctcgctaagc ccgccttcgt cgctatgacg 540
aaggaggtgc cgcagcacaa gggcatggct atgtcggagc cggtgccggc gaaggcggcg 600
cccgccaaag ccggggtgat ggccatggac atcgccgacg gacacgaaga cgcggagggg 660
atggttggcg gcggcgtcaa ggtggccaag gaaaaggtga aggagatggt tatgagcggc 720
ggcggcagct gggaggtggt cgggatctcc ggcatgggcg gcagcggcaa gaccacgctc 780
gccatggagg tcttcaggga tcacaaggtc cgaggtaagc agaacatcga ccaccagatc 840
caaaccttct tttccttcag ttctttccaa atcctgtgca aaggtcgcgt ctttcacagg 900
aatcgtcctg tccttccctg caaaaattgc atcttcccca tgaatagtgg gtgctaaatt 960
ctccaaattg gcggcatagc atcgtaggtg gttggtttgc gtgcgtgtcg tgcaattagg 1020
taaaggcgag gttgatgctt tcgtttttcc ccaaaccaca tgttcggtca aatttggcgc 1080
tttgaccacc agctagtgac aactgtactg ttgtgatggg gtttcagatt gcttttgtga 1140
attaccatgc ttggacttga gtaaccttat cgtgtcgtgt tcatggacca tggtggctac 1200
ttaatcttaa atcaagatac gtatctgctt aacgaaccgc acatgagact aatcaaatct 1260
atttcacata gaataaaccc aattcagatc caagtaacct gcttttttga agaaaaaaaa 1320
atctggagct gtgctaattt taggatctcc tttcagtgca aggaattggg atgacgatgt 1380
tgatttagac ctagtttagg tactctagta ttgaccataa tctatatata ttgaggtgga 1440
ttaaggtgta acttaaacta atttacaccc caatccactt taacacatgt ggattgaggt 1500
caataccaga atacccctaa tgccgcaacc cgggtttgta gctccatcat ctctgttttc 1560
caccaaaaaa ctcatagtaa acttaaattc aattgtcaca acaacatata ttcaacgatt 1620
ttaagtgact gctatcccaa accgtagctg atcttagggc atgtacagtg gagagacacc 1680
aaaacggttc tccaagcaca ggagacaact aagagactct attgtacagt ggagtgtcta 1740
taaacgtagt ctattaataa atacaaaatt aaatgtattt gtatagcatc agatcgatag 1800
aacagacgac aaattcgtac agtgggaagt gaggcgtctg ttgctacttg gtttacgagc 1860
cagaggcgtc tcttcacgga gagacggctc taagattttt ttgcaaataa ccccttaaac 1920
accttaagag cctccacatt aaacaccact gtacatgtcc ttaacttcat ggtatgcttt 1980
gtggtcaaca tggtgattat ggatctcatc aaaagcccat ggctacatat ctgctccctg 2040
tttgcaagct ctctctctcc cccacccctt ttcatgattc tgacatagtt tctttttttc 2100
tacagcctac ttcaacgaca ggatcttctt cgagacgatc tcgcagtccg cgaatctgga 2160
ggccatcaag atgaagctgt gggagcagat cagcggcaac atggtgctgg gtacatacaa 2220
ccagatccca gaatggcagc tcaagctagg accaagggac cgaggacccg tccttgtgat 2280
cctcgacgat gtttggtctc tcccgcagct tgaggagctc atcttcaagt tccctgggtg 2340
caagacccta gtcgtatcaa ggttcaagtt ccccacgctg gtgaaacaga cgtatgagat 2400
gcagctgcta gacgaggcgg cggctctgtc cgtcttctgc cgcgctgcgt tcgaccagga 2460
gtgtgttccg cagaccgccg acaagagatt ggtcaggcag gtctctgcag agtgcagagg 2520
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ctggatggag atccatgacc ttgatgagcc agatgctttt gccatcttgg ttgagctttc 2820
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atacgtgcag gaacaaggct ggagatctgt acagtagcta ccatgactac tcggtgacac 3000
agcacgacgt gttgagagat cttgctcttc acatgagcgg gcgtgacccg ctcaacaagc 3060
gcaggcggtt ggtgatgccg agaagggaag aaacacttcc gagggattgg cagaggaaca 3120
aggatgctcc gtttgaagct cagatagtct ccattcatac aggtatagcg ttagtagtta 3180
attgttcttc attacatttg tagatattca tcgctaacaa ctcgtcatcc aacttattta 3240
gtgcgcttat tctgaattcc tactgaaatt tccaactatt tccaaaactc caggcgaaat 3300
gaaagaatcc gactggttcc agatgagctt ccccaaggca gaagtgctga tcctcaactt 3360
cgcgtcgagc ctgtactacc tgccgccgtt catcgcgacg atgcagaacc tgaaggccct 3420
ggtgctgatc aactacggca gcagcagcag cagcgcagcc ctggacaacc tctccgcctt 3480
caccacgctg agcgggctga ggagcctgtg gctggagaag atcaggctgc cgccgctgcc 3540
caagacgacg atcccgctga ggaacctgca caagatctcg ctcgtgctct gcgagctgaa 3600
cagcagtcta agagggtcga cgatggacct gtcgacgacg ttcccgcgcc tgtccaacct 3660
gacgatcgac cactgcatag acctcaagga gctgccgccg agcgtctgcg agatcgggtc 3720
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gcggctgcgc tgcctcagca tcctccgcgt gtacgcctgc ccggcgctgt ggcggctgcc 3840
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gacggacctc cccgaggagc tcggccacct gacgagcctg gagaagatcg acatgcgcga 3960
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<210> 40
<211> 2616
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 40
atggaccgga tgctgctcga ccagctggcc ggcgaggccc tgcgggaggt gctgcacgcg 60
gtgcagggca ccctgttctg ccgctccacc gccgagcgcc tgcgccggag cgtcgagccg 120
ctgctgccgc tcgtccaggg cctcggcccg cacagcaccc agcgctccgc gggggagctc 180
ggcgagctcg cggcgcgggt cagggaggcg ctcgacctgg cgcgccgcgc cgccgcgtcc 240
ccgcgctgga acgtctaccg cgccgcgcag ctgtcgcgcc ggatggaggc ggccgaccgc 300
ggcatcgcgc gctggctgga gcgccacgcc cccgcgcacg tcatcggcgg cgtgcgcagg 360
ctccgcgacg aggccgacgc gcgcatcggt cgcctcgagc gccgcgtcga ggagatcgcc 420
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cccgccaaag ccggggtgat ggccatggac atcgccgacg gacacgaaga cgcggagggg 660
atggttggcg gcggcgtcaa ggtggccaag gaaaaggtga aggagatggt tatgagcggc 720
ggcggcagct gggaggtggt cgggatctcc ggcatgggcg gcagcggcaa gaccacgctc 780
gccatggagg tcttcaggga tcacaaggtc cgagcctact tcaacgacag gatcttcttc 840
gagacgatct cgcagtccgc gaatctggag gccatcaaga tgaagctgtg ggagcagatc 900
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ccaagggacc gaggacccgt ccttgtgatc ctcgacgatg tttggtctct cccgcagctt 1020
gaggagctca tcttcaagtt ccctgggtgc aagaccctag tcgtatcaag gttcaagttc 1080
cccacgctgg tgaaacagac gtatgagatg cagctgctag acgaggcggc ggctctgtcc 1140
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tgcttgtccg agaaggttag ggactgtttc cttgacctgg gctgcttccc ggaggacaag 1440
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gatgcttttg ccatcttggt tgagctttcg aacaagaacc ttcttaccct cgttaacgat 1560
gcacagaaca aggctggaga tctgtacagt agctaccatg actactcggt gacacagcac 1620
gacgtgttga gagatcttgc tcttcacatg agcgggcgtg acccgctcaa caagcgcagg 1680
cggttggtga tgccgagaag ggaagaaaca cttccgaggg attggcagag gaacaaggat 1740
gctccgtttg aagctcagat agtctccatt catacaggcg aaatgaaaga atccgactgg 1800
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<210> 41
<211> 871
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 41
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Met Asp Ile Ala Asp Gly His Glu Asp Ala Glu Gly Met Val Gly Gly
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485 490 495
Leu Asp Glu Pro Asp Ala Phe Ala Ile Leu Val Glu Leu Ser Asn Lys
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<210> 42
<211> 3639
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 42
atggagttgg accggctgct gctcgaccag ctggctggcg aggccctacg ggagcttctg 60
cacgcggtgc agggcaccct gttctgccgc tccaccgccg agcgcctgcg ccggagcgtc 120
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cgcggcatcg cgcgctggct ggagcgccac gcccccgcgc acgtcatcgg caacgtgcgc 360
gggctccgcg acgagtccca cgcgcgcatc gcccgcctcg agcgccgcgt cgacgagatc 420
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aacaagaacc agatcataac catcttttcc ttcagtcctt ttccaaatcg tgtgcaaagg 840
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<210> 43
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<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 43
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cctctgaaca agcgtaggcg gttggtgatg ccgagaaagg aagagacact tccaagggac 1680
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ctgcactgtc tgagcatcct ccgggtgtac gcctgcccgg cgctgtggcg gctcccggcg 2280
tcggtgtgca gcctgaagag gctcaagtac ctcgacatat cccagtgcat caacctgacg 2340
gacctcccgg aggagctcgg ccacctgacg agcctggaga agatcgacat gcgggagtgc 2400
tctcgcctca ggagcctccc gaggtcgtcg tcctccctca agtccctcgg ccacgtcgtg 2460
tgcgacgagg agacggcgct gctgtggcgg gaggccgagc aggtcatccc tgacctccgg 2520
gtgcaggtgg ccgaagagtg ctacaacttg gactggctag cggactga 2568
<210> 44
<211> 855
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<400> 44
Met Glu Leu Asp Arg Leu Leu Leu Asp Gln Leu Ala Gly Glu Ala Leu
1 5 10 15
Arg Glu Leu Leu His Ala Val Gln Gly Thr Leu Phe Cys Arg Ser Thr
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Ala Glu Arg Leu Arg Arg Ser Val Glu Pro Leu Leu Pro Leu Val Gln
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Gly Leu Gly Pro His Ala Gln Arg Ser Ala Gly Asp Leu Gly Glu Leu
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Ala Ala Arg Val Arg Glu Ala Leu Asp Leu Ala Arg Arg Ala Ala Thr
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Ser Pro Arg Trp Asn Val Tyr Arg Ser Ala Gln Leu Ser Arg Arg Met
85 90 95
Glu Ala Ala Asp Arg Gly Ile Ala Arg Trp Leu Glu Arg His Ala Pro
100 105 110
Ala His Val Ile Gly Asn Val Arg Gly Leu Arg Asp Glu Ser His Ala
115 120 125
Arg Ile Ala Arg Leu Glu Arg Arg Val Asp Glu Ile Ala Ala Thr Ala
130 135 140
Ala Gln Pro Pro Pro Pro Ala Leu Ser Val Pro Val Ala Pro His Lys
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Gly Val Ala Met Pro Met Glu Val Pro Thr His Lys Gly Met Ala Met
165 170 175
Pro Met Pro Val Pro Val Gln Ala Val Pro Ala Lys Ala Gly Val Val
180 185 190
Ala Met Asp Met Asp Leu Thr Glu Gly His Glu Asn Glu Gly Met Val
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Gly Ala Gly Val Lys Val Ala Lys Glu Lys Val Lys Glu Met Val Met
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Ser Gly Gly Gly Gly Trp Glu Val Val Gly Ile Ser Gly Met Gly Gly
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Ser Gly Lys Thr Thr Leu Ala Met Glu Ile Phe Arg Asp His Lys Val
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Ala Asn Leu Glu Ala Ile Lys Met Lys Leu Trp Glu Gln Ile Ser Gly
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Pro Leu Pro Lys Thr Thr Ile Pro Leu Lys Asn Leu His Lys Ile Ser
660 665 670
Leu Val Leu Cys Glu Leu Asn Ser Ser Leu Arg Gly Ser Thr Met Asp
675 680 685
Leu Ser Met Thr Phe Pro Arg Leu Ser Asn Leu Thr Ile Asp His Cys
690 695 700
Ile Asp Leu Lys Glu Leu Pro Ala Ser Ile Cys Glu Ile Gly Ser Leu
705 710 715 720
Glu Thr Val Ser Ile Ser Asn Cys His Asp Leu Thr Glu Leu Pro Tyr
725 730 735
Glu Leu Gly Lys Leu His Cys Leu Ser Ile Leu Arg Val Tyr Ala Cys
740 745 750
Pro Ala Leu Trp Arg Leu Pro Ala Ser Val Cys Ser Leu Lys Arg Leu
755 760 765
Lys Tyr Leu Asp Ile Ser Gln Cys Ile Asn Leu Thr Asp Leu Pro Glu
770 775 780
Glu Leu Gly His Leu Thr Ser Leu Glu Lys Ile Asp Met Arg Glu Cys
785 790 795 800
Ser Arg Leu Arg Ser Leu Pro Arg Ser Ser Ser Ser Leu Lys Ser Leu
805 810 815
Gly His Val Val Cys Asp Glu Glu Thr Ala Leu Leu Trp Arg Glu Ala
820 825 830
Glu Gln Val Ile Pro Asp Leu Arg Val Gln Val Ala Glu Glu Cys Tyr
835 840 845
Asn Leu Asp Trp Leu Ala Asp
850 855

Claims (61)

1.一种在作物植物细胞中产生包含多个种内多核苷酸序列的异源基因组基因座的方法，所述方法包括将两个或更多个种内多核苷酸序列引入所述植物细胞中预定的异源基因组基因座，其中
(a)引入步骤不会导致对所述植物来说不是天然的转基因或外源多核苷酸的整合；
(b)所述种内多核苷酸赋予所述植物一种或多种农艺学特征；
(c)在所述种内多核苷酸整合至所述异源基因组基因座之前，所述种内多核苷酸中的至少一个或多个来自不同的染色体，或者与所述异源基因组基因座相比，所述种内多核苷酸不位于与其天然配置相同的染色体中；并且
(d)所述引入步骤包括不是传统育种的至少一种定点基因组修饰。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述基因组基因座与包含一种或多种转基因性状的基因组基因座相邻，所述转基因性状包含不是来自相同植物物种的多个多核苷酸。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述转基因性状包含赋予对一种或多种昆虫的抗性的一种或多种性状。
4.如权利要求2所述的方法，其中所述转基因性状包含除草剂耐受性状。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述基因组基因座由约1至约5cM或作物植物物种的等效物理染色体图谱距离的染色体区定义。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述染色体区为约10Kb至约50Mb。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸序列包含基因的至少两个等位基因。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
9.一种在优良作物植物基因组中产生疾病超级基因座以提高所述优良作物植物中的性状渗入效率的方法，所述方法包括通过以下的工程化来在所述作物植物染色体的预定基因组基因座处引入多种抗病性状：(a)插入两个或更多个抗病基因、(b)通过靶向染色体工程化来基因组易位一个或多个抗病基因、(c)通过靶向基因组修饰在所述基因组基因座处复制一个或多个抗病基因、(d)通过引入一个或多个插入来修饰所述基因组基因座、(e)缺失或取代所述基因组中的核苷酸、或上述的组合。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述疾病超级基因座与转基因性状存在连锁不平衡。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述转基因性状选自由昆虫抗性、除草剂耐受性和农艺学性状组成的组。
12.如权利要求10所述的方法，其中所述转基因性状为先前存在的商业性状。
13.如权利要求9所述的方法，其中通过减少至少50％回交或减少至少两代或三代回交来提高所述性状渗入效率。
14.如权利要求9所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
15.一种用于获得具有经修饰的基因组基因座的植物细胞的方法，所述经修饰的基因组基因座包含至少两个异源多核苷酸序列或至少两种性状，所述至少两个异源多核苷酸序列赋予对至少一种植物疾病的增强的抗病性，所述至少两种性状通过两种不同的作用模式导致对至少一种疾病的抗性，其中所述至少两个多核苷酸序列与相应的基因组基因座异源并且来自相同的植物物种，所述方法包括：
a.在植物细胞的基因组基因座的至少一个靶位点处引入位点特异性修饰；
b.将赋予增强的抗病性的至少两个多核苷酸序列引入所述靶位点；以及
c.获得具有基因组基因座的植物细胞，所述基因组基因座包含赋予增强的抗病性的至少两个多核苷酸序列。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述至少一个靶位点包含选自表2的靶位点。
17.如权利要求15所述的方法，其中所述两个异源多核苷酸中的至少一个进一步包含位点特异性修饰。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述位点特异性修饰是遗传修饰或表观遗传修饰。
19.如权利要求15所述的方法，其中所述多核苷酸序列编码赋予增强的抗病性的多肽序列。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述多核苷酸序列编码赋予增强的抗病性的多肽序列，其中所述多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少90％同一性：RppK(SEQ ID NO：11)、Htl(SEQ ID NO：8)、NLB18(SEQ ID NO：3或5)、NLR01(SEQ IDNo：29)、NLR02(SEQ ID No：26)、RCG1(SEQ ID No：31)、和RCG1b(SEQ ID No：33)。
21.如权利要求19所述的方法，其中所述多核苷酸序列编码赋予增强的抗病性的多肽序列，其中所述多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少90％同一性：PRR03(SEQ ID No：36)、PRR01(SEQ ID No：38)、NLR01(SEQ ID No：41)、和NLR04(SEQ ID No：44)。
22.如权利要求15所述的方法，其中所述至少两个多核苷酸序列包含非编码RNA或dsRNA。
23.如权利要求15所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
24.一种用于获得具有经修饰的基因组基因座的植物细胞的方法，所述经修饰的基因组基因座包含至少两个多核苷酸序列或至少两种性状，所述至少两个多核苷酸序列赋予对至少一种植物疾病的增强的抗病性，所述至少两种性状通过两种不同的作用模式导致对至少一种疾病的抗性，其中所述至少两个多核苷酸序列与相应的基因组基因座异源，所述方法包括：
a.在植物细胞的基因组基因座的一个或多个靶位点处引入双链断链或位点特异性修饰；
b.引入赋予增强的抗病性的至少两个多核苷酸序列；以及
c.获得具有基因组基因座的植物细胞，所述基因组基因座包含赋予增强的抗病性的至少两个多核苷酸序列。
25.如权利要求24所的方法，其中所述至少一个靶位点包含选自表2的靶位点。
26.如权利要求24所述的方法，其中所述多核苷酸序列编码赋予增强的抗病性的多肽序列。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少90％同一性：RppK(SEQ ID NO：11)、Htl(SEQ ID NO：8)、NLB18(SEQ ID NO：3或5)、NLR01(SEQ ID No：29)、NLR02(SEQ ID No：26)、RCG1(SEQ ID No：31)、和RCG1b(SEQ ID No：33)。
28.如权利要求26所述的方法，其中所述多肽序列与选自由以下组成的组的多肽序列具有至少90％同一性：PRR03(SEQ ID No：36)、PRR01(SEQ ID No：38)、NLR01(SEQ ID No：41)、和NLR04(SEQ ID No：44)。
29.如权利要求24所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
30.一种包含经修饰的基因组基因座的玉米植物，所述基因座包含至少第一经修饰的靶位点和第二经修饰的靶位点，其中所述第一经修饰的靶位点包含赋予对第一植物疾病的增强的抗病性的第一多核苷酸序列，并且其中所述第二经修饰的靶位点包含赋予对所述第一植物疾病或第二植物疾病的增强的抗病性的第二多核苷酸序列，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列与所述经修饰的基因组基因座异源并且存在于小于约1cM的基因组窗口内。
31.如权利要求30所述的植物，其中所述植物包含选自多肽、非编码RNA或dsRNA的第一或第二多核苷酸序列。
32.如权利要求31所述的植物，其中所述多肽与选自由以下组成的组的序列具有至少90％序列同一性：RppK(SEQ ID NO：11)、Ht1(SEQ ID NO：8)、NLB18(SEQ ID NO：3或5)、NLR01(SEQ ID No：29)、NLR02(SEQ ID No：26)、RCG1(SEQ ID No：31)、和RCG1b(SEQ ID No：33)。
33.如权利要求31所述的植物，其中所述多肽与选自由以下组成的组的序列具有至少90％序列同一性：PRR03(SEQ ID No：36)、PRR01(SEQ ID No：38)、NLR01(SEQ ID No：41)、和NLR04(SEQ ID No：44)。
34.如权利要求30所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
35.一种用于获得具有经修饰的基因组基因座的植物细胞的方法，所述经修饰的基因组基因座包含至少两个多核苷酸序列或至少两种性状，所述至少两个多核苷酸序列赋予对至少一种植物疾病的增强的抗病性，所述至少两种性状通过两种不同的作用模式导致对至少一种疾病的抗性，其中所述至少两个多核苷酸序列与相应的基因组基因座异源，其中所述基因组基因座位于1号染色体的远端区。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述基因组基因座位于端粒区。
37.一种在植物的单个基因座处育种转基因和天然疾病性状的方法，所述方法包括：
a.在植物的单个基因座处插入赋予对第一植物疾病的增强的抗病性的第一异源多核苷酸序列和赋予对所述第一植物疾病或第二植物疾病的增强的抗病性的第二异源多核苷酸序列；
b.在所述单个基因座处插入至少一个编码杀昆虫多肽、农艺学性状多肽或除草剂抗性多肽的异源多核苷酸序列；
c.将具有所述单个基因座的植物与不同的植物杂交；以及
d.获得包含所述单个基因座的子代植物；并且
其中与在多于一个的基因座处具有性状的植物相比，所述单个基因座允许较少的回交。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述不同的植物包含第二基因座，所述第二基因座包含至少一个编码杀昆虫多肽或除草剂抗性多肽的异源多核苷酸序列。
39.如权利要求37所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
40.一种经修饰的植物，其包含第一异源多核苷酸、和第二异源多核苷酸和第三异源多核苷酸，所述第一异源多核苷酸编码赋予对第一植物疾病的增强的抗病性的第一多肽，所述第二异源多核苷酸编码赋予对第二植物疾病的增强的抗病性的第二多肽；所述第三异源多核苷酸编码杀昆虫多肽或除草剂抗性多肽；其中，所述第一异源多核苷酸、第二异源多核苷酸和第三异源多核苷酸位于植物的单个基因座处。
41.如权利要求40所述的经修饰的植物，其中所述单个基因座包含约1cM、5cM或10cM。
42.如权利要求40所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
43.一种将多个抗病基因座渗入或正向育种至优良种质的方法，其中将来自不同供体植物的两个或更多个异源多核苷酸插入优良品系并开发纯合抗性品系的时间段更短。
44.如权利要求43所述的方法，所述方法进一步包括改善具有多种抗病性的农艺学性状，并减少育种的产量累赘。
45.如权利要求43所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
46.如权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸序列包含相同基因的至少两个拷贝。
47.如权利要求1所述的方法，其中所述基因组基因座世代稳定。
48.如权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个种内多核苷酸序列是遗传连锁的。
49.一种经修饰的作物植物，其包含堆叠在单个基因组基因座中的至少两个、至少三个或至少四个性状基因，其中单个基因座中的性状堆叠件允许提高育种效率，并且其中所述性状堆叠件包含通过基因组修饰引入的至少两种或更多种非转基因天然性状，所述天然性状包含来自相同作物植物的多核苷酸。
50.如权利要求49所述的植物，其中所述性状基因是天然性状。
51.如权利要求49所述的植物，其中所述性状基因选自由除草剂耐受性、昆虫抗性、产量性状或抗病性组成的组。
52.如权利要求49所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
53.一种用于获得具有经修饰的基因组基因座的植物细胞的方法，所述经修饰的基因组基因座包含至少两个多核苷酸序列，其中所述至少两个多核苷酸序列与相应的基因组基因座异源，所述方法包括：
a.在植物细胞的基因组基因座的至少一个靶位点处引入位点特异性修饰；
b.将至少两个异源多核苷酸序列引入所述靶位点；以及
c.获得具有包含至少两个异源多核苷酸序列的基因组基因座的所述植物细胞。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述两个异源多核苷酸序列中的至少一个包含赋予针对至少一种植物疾病的增强的抗病性的多核苷酸序列。
55.如权利要求53所述的方法，其中所述植物为玉米、大豆、卡诺拉油菜或棉花植物。
56.如权利要求53所述的方法，其中所述植物为单子叶植物或双子叶植物。
57.如权利要求53所述的方法，其中所述植物为玉蜀黍植物，并且其中所述至少两个多核苷酸序列选自由以下组成的组：NLB18、Htl、RppK、PRR03、NLR01、NLR02、RCG1、RCG1b、PRR03、PRR01、NLR01和NLR04。
58.一种经修饰的植物，其包含选自由NLB18、Ht1和RppK组成的组的至少三种抗病基因，其中所述至少三种抗病基因位于同一基因组基因座。
59.如权利要求58所述的方法，其中所述植物为玉蜀黍植物。
60.如权利要求58所述的经修饰的植物，其中所述植物进一步包含PRR03。
61.如权利要求58所述的经修饰的植物，其中所述植物进一步包含选自以下的至少一种基因：NLR01、NLR02、RCG1、RCG1b、PRR03、PRR01、NLR01和NLR04。
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