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CN116096752A - 抗bcma抗体-药物缀合物及其使用方法 - Google Patents

抗bcma抗体-药物缀合物及其使用方法 Download PDF

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CN116096752A
CN116096752A CN202180041471.5A CN202180041471A CN116096752A CN 116096752 A CN116096752 A CN 116096752A CN 202180041471 A CN202180041471 A CN 202180041471A CN 116096752 A CN116096752 A CN 116096752A
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seq
amino acid
antibody
acid sequence
antigen
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CN202180041471.5A
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R·亨利
T·萨马拉科恩
N·菲什金
P·朱
E·帕佐利
J·帕拉西诺
J·C·阿尔马格罗
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Original Assignee
Sanitary Material R&d Management Co ltd
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Abstract

披露了结合BCMA的抗体、抗原结合片段和缀合物(例如，抗体‑药物缀合物(ADC)，如包含剪接调节剂的那些)。本披露进一步涉及用于通过施用本文提供的组合物来治疗癌症的方法和组合物。

Description

抗BCMA抗体-药物缀合物及其使用方法
本披露要求2020年6月5日提交的美国临时专利申请号62/704,997的优先权权益，将其通过引用以其全文并入本文。
本申请含有已以ASCII格式以电子方式提交且通过引用以其全文并入本文的序列表。创建于2021年5月28日的所述ASCII副本名称为15647_0012-00304_SL.txt并且大小为698,277字节。
本披露涉及抗B细胞成熟抗原(BCMA)抗体及其抗原结合片段，以及缀合物如抗体-药物缀合物(ADC)，例如包含剪接调节剂的那些缀合物，以及它们的用途。
人类基因组中的大部分蛋白质编码基因由通过内含子(非编码区)间隔开的多个外显子(包括编码区)构成。基因表达产生前体信使RNA(pre-mRNA)。随后，通过称为剪接的方法自pre-mRNA移除内含子序列，产生成熟信使RNA(mRNA)。通过包括不同外显子组合，可变剪接产生编码不同蛋白质同种型的mRNA。
RNA剪接通过剪接体催化，该剪接体为由五个小核RNA(snRNA U1、U2、U4、U5及U6)及相关蛋白质构成的动态多蛋白质-RNA复合物。剪接体在pre-mRNA上组装以建立催化内含子的切除及外显子的接合的多个RNA及蛋白质相互作用的动态级联(Matera及Wang(2014)Nat Rev Mol Cell Biol.[自然分子细胞生物学综述]15(2):108-21)。越来越多的证据将人类疾病与影响许多基因的RNA剪接中的调节异常联系起来(Scotti及Swanson(2016)NatRev Genet.[遗传学自然评论]17(1):19-32)。几项研究现已记录癌细胞剪接概况中的以及自身剪接因素中的更改(Agrawal等人(2018)Curr Opin Genet Dev.[遗传与发育的最新观点]48:67-74)。可变剪接可引起差异性外显子包括/排除、内含子滞留或隐藏剪接位点的使用(Seiler等人(2018)Cell Rep.[细胞报告]23(1):282-96)。总而言之，这些事件造成可能促成肿瘤形成或对疗法的抗性的功能改变(Siegfried及Karni(2018)Curr Opin GenetDev.[遗传与发育的最新观点]48:16-21)。
某些产物可结合SF3b剪接体复合物。这些小分子通过促进内含子滞留和/或外显子跳读来调节剪接(Teng等人(2017)Nat Commun.[自然通讯]8:15522)。所得转录物的相当大一部分含有提前终止密码子，触发无义介导的mRNA衰变(NMD)。此外，因为典型剪接受损，故典型转录物大幅减少，此可能不利地影响细胞功能及活力。出于此原因，剪接调节剂已变为一类用于治疗癌症的有前景的药物(Puthenveetil等人(2016)Bioconjugate Chem.[生物缀合化学]27:1880-8)。将这些剪接调节剂递送至相关致癌组织同时避免或最小化潜在毒性是该领域的一项持续挑战。因此，改进小分子剪接调节剂的靶向性将是令人希望的。
BCMA，也称为TNFRSF17或CD269，是肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成员(Madry等人(1998)Int Immunol.[国际免疫学]10:1693-702；Sanchez等人(2012)Br J Haematol.[英国血液学杂志]158:727-38)。BCMA的配体包括B细胞活化因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)(Rennert等人(2000)J Exp Med.[实验医学杂志]192:1677-83)。BCMA优先由成熟B淋巴细胞表达，在造血干细胞和非造血组织中表达最少，并且在长命的骨髓浆细胞(PC)的存活中起作用(Novak等人(2004)Blood.[血液]103:689-94；O’Connor等人(2004)199:91-7)。
与来自健康供体的正常骨髓单核细胞(BMMC)相比，BCMA在自多发性骨髓瘤(MM)患者收集的恶性PC上高度表达(Sanchez等人(2012)Br J Haematol.[英国血液学杂志]158:727-38)。BCMA的过表达和激活还与临床前模型和人类的多发性骨髓瘤的进展有关(Sanchez等人(2012)Br J Haematol.[英国血液学杂志]158:727-38；Tai等人(2016)Blood.[血液]127:3225-36；Sanchez等人(2016)Clin Cancer Res.[临床癌症研究]22:3383-97)。具有诱导的BCMA过表达的鼠异种移植物比BCMA阴性对照生长得更快，并且在APRIL诱导了BCMA在离体人多发性骨髓瘤细胞中的激活后观察到类似的结果(Tai等人(2016)Blood.[血液]127:3225-36)。BCMA的这种过表达和激活可能导致经典和非经典核因子κ-B(NFKB)通路的上调，以及对生存、生长、粘附、破骨细胞激活、血管生成、转移和免疫抑制至关重要的基因的表达增强。BCMA代表可用于靶向多发性骨髓瘤和其他B细胞/浆细胞恶性肿瘤和/或提供新的癌症治疗的有前景的抗原(Shah等人(2020)Leukemia.[白血病]34(4):985-1005)。然而，仍然需要改进的有效靶向BCMA的方法。
特别地，虽然在本领域中(包括在ADC背景中)已经报道了剪接调节剂的使用，但仍然需要以靶向方式更好地将剪接调节剂递送至特定组织，例如表达BCMA的癌组织。同样地，本领域仍然需要改进的结合BCMA的抗体，其具有优异的特性，例如，在抗原结合和/或有效递送有效载荷(如剪接调节剂)至表达BCMA的靶细胞或组织的能力方面。
在各种实施例中，本披露部分地提供了新的抗体和抗原结合片段，它们可以单独使用、连接至一种或多种另外的药剂(例如，作为ADC)、或作为更大的大分子的一部分(例如，双特异性抗体或多特异性抗体，单独或作为连接至ADC形式的有效载荷的多特异性抗体的一部分)使用。这些抗体和抗原结合片段可以作为药物组合物或组合疗法的一部分施用。
在一些实施例中，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段是人源化的。在一些实施例中，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段含有源自非人(例如，小鼠)抗体的最小序列并保留非人抗体的反应性，同时在人中具有较低的免疫原性。在一些实施例中，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段能够结合BCMA。在一些实施例中，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段与BCMA结合并且与参考抗BCMA抗体或抗原结合片段相比具有一种或多种优越特性。在一些实施例中，与参考抗BCMA抗体或抗原结合片段相比，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段具有对BCMA的更高的亲和力(例如，如在结合测定中使用具有高或中等水平BCMA表达的癌细胞所评估的)。在一些实施例中，与包含参考抗BCMA抗体或抗原结合片段的ADC相比，包含本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段的ADC表现出有利的药物负载量、聚集、稳定性、活性和/或效力。在一些实施例中，包含本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段的ADC显示出治疗性ADC所需的特性。在一些实施例中，与参考抗BCMA抗体和/或参考抗BCMA ADC相比，这些特性包括但不限于例如有效药物负载水平、低聚集水平、提高的稳定性、与未缀合抗体相当的对BCMA表达细胞的留存亲和力、对表达BCMA的细胞的有效细胞毒性、提高的细胞毒性和/或针对不分裂和/或缓慢分裂细胞的细胞生长抑制活性、低水平的脱靶细胞杀伤、高水平的旁观者杀伤、和/或有效的体内抗癌活性。在一些实施例中，增加的效力、细胞毒性、和/或抗癌活性在表达高水平的由本文披露的抗体、抗原结合片段、或ADC靶向的抗原(例如，高BCMA表达)的癌症中。在一些实施例中，增加的效力、细胞毒性、和/或抗癌活性在表达中等水平的由本文披露的抗体、抗原结合片段、或ADC靶向的抗原(例如，中等BCMA表达)的癌症中。在一些实施例中，这些抗体、抗原结合片段、和/或ADC可用于治疗人类癌症患者。
在一些实施例中，待用本文披露的抗体、抗原结合片段、或ADC治疗的癌症是多发性骨髓瘤。大多数多发性骨髓瘤患者最终会复发。不希望受理论束缚，骨髓瘤患者可能会复发至少部分是由于“休眠”(例如，不分裂或缓慢分裂的)骨髓瘤细胞的存在，如存在于遍及全身的骨骼壁龛中的那些骨髓瘤细胞(Figueroa-Vazquez等人(2021)Mol Cancer Ther.[分子癌症治疗学]20(2):367-378；Franqui-Machin等人(2015)Oncotarget.[肿瘤标靶]6:40496-40506)。这种休眠的骨髓瘤细胞可能在很大程度上抵抗标准护理疗法(包括许多FDA批准的化学疗法)，这些标准疗法可以通过抑制或异常调节DNA复制和细胞分裂所需的细胞通路来发挥其抗增殖作用(Cheung-Ong等人(2013)Chem Biol.[化学生物学]20(5):648-659)。因此，在不分裂和/或缓慢分裂细胞中保留抗增殖活性的治疗剂可以提供一种有效的手段来治疗新诊断的和复发/难治性形式的多发性骨髓瘤、以及其他B细胞/浆细胞恶性肿瘤。在一些实施例中，本文披露的抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC复合物保留不依赖于细胞增殖状态的细胞毒性和/或细胞生长抑制活性。在一些实施例中，所述抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC复合物可靶向活跃分裂和休眠的细胞(例如，活跃分裂、不分裂、和/或缓慢分裂的骨髓瘤细胞)。
基于例如遗传背景、基因表达谱、或癌症的其他定义特征，某些癌症类型可能特别适合用本文披露的抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC化合物进行治疗。在一些实施例中，本文披露的抗体、抗原结合片段、或ADC的增加的效力、细胞毒性、和/或抗癌活性(例如，与参考抗BCMA抗体和/或参考抗BCMA ADC相比)在表达高或中等水平的由该抗体、抗原结合片段、或ADC靶向的抗原(例如高或中等BCMA表达)的癌症中。在一些实施例中，本文披露的抗体、抗原结合片段、或ADC的增加的效力、细胞毒性、和/或抗癌活性在包含至少一些休眠细胞(例如，不分裂或缓慢分裂的骨髓瘤细胞)的癌症中。在一些实施例中，本文披露的抗体、抗原结合片段、或ADC的增加的效力、细胞毒性、和/或抗癌活性在多发性骨髓瘤中。在一些实施例中，本文披露的抗体、抗原结合片段、或ADC的增加的效力、细胞毒性、和/或抗癌活性在表达MCL1的癌症中，例如，在具有高或中等水平MCL1表达的癌症中。
MCL1是BCL2基因家族的成员，这些基因通常被认为是程序性细胞死亡的凋亡形式的主要调节因子。已经描述了MCL1的三种主要可变剪接同种型，最长的同种型(MCL1-长、MCL1-L、MCL1L)作为一种有效的促存活/抗凋亡因子，对抗成孔和仅有BH3的家族成员的促死亡功能。在人类中，MCL1在正常生理条件下的大多数正常组织中广泛表达，并且特别富含骨髓细胞类型(包括浆B细胞，该细胞类型会导致骨髓瘤)。MCL1表达经常被许多癌症类型(包括骨髓瘤)的不同机制上调，并且已显示在骨髓瘤的一些标准护理方案后进一步表达增加，从而赋予对此类疗法的抵抗力。因此，不受理论的束缚，能够抑制MCL1(例如MCL1L功能)和/或抑制MCL(例如MCL1L表达)的治疗剂可以为骨髓瘤患者提供临床益处，尤其是在具有高MCL1L表达或依赖性的复发性/难治性形式的疾病中。
不希望受理论束缚，将剪接调节剂递送至癌细胞(例如表达BCMA的癌细胞)可通过减少或抑制MCL1表达来诱导细胞死亡(Aird等人(2019)Nat Commun[自然通讯]10:137)。MCL1 mRNA和蛋白质的寿命相对较短，各自在几种人类癌细胞系中半衰期通常为约30分钟。编码短寿命RNA转录物和蛋白质的基因可能特别适合通过剪接调节剂进行调节，因为正确剪接的RNA和蛋白质产物的预先存在池可能会在处理后迅速降解，而异常剪接的转录产物开始积累。这些异常剪接事件通常会引入错义或无义突变，导致很少或没有功能性蛋白输出。除了影响整体基因表达外，剪接调节剂处理还可能导致具有新功能或与正确剪接基因的功能对立的功能的蛋白质产物的表达。与破坏微管或损害DNA的有效载荷相比，本文所述的ADC中使用的剪接调节剂可以破坏MCL1剪接并提供通路特异性凋亡机制来杀死难以治疗的癌细胞(例如，骨髓瘤细胞)。通过靶向癌细胞对MCL1剪接的依赖性，所述抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC复合物可以为当前的临床挑战(如克服多发性骨髓瘤和其他表达BCMA的癌症中的抗药性)提供有效的治疗方案。
在各种实施例中，本披露更具体地涉及能够结合表达BCMA的癌细胞的抗体、抗原结合片段和ADC。在各种实施例中，这些抗体、抗原结合片段和ADC还能够在结合后内化到靶细胞中。披露了包含接头的ADC，该接头将剪接调节剂连接至抗体部分。抗体部分(单独或作为ADC的一部分)可以是全长抗体或其抗原结合片段。
在一些实施例中，本披露提供了分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含：
(i)三个重链互补决定区(HCDR)和三个轻链互补决定区(LCDR)，如由Kabat编号系统所定义的，包含：
HCDR1，其包含以下氨基酸序列：NYWIH(SEQ ID NO:1)；
HCDR2，其包含以下氨基酸序列：
X1TYRX5X6SX8TX10YX12QKX15 K S(SEQ ID NO:67)，其中：
X1是A或G；
X5是S或I；
X6是H或Q；
X8是D或T；
X10是Y或N；
X12是N或A；并且
X15是F或Y；
HCDR3，其包含以下氨基酸序列：
GAX3YHGYDVIX11N(SEQ ID NO:68)，其中：
X3是I或V；并且
X11是E或D；
LCDR1，其包含以下氨基酸序列：
RASQSISSYX10N(SEQ ID NO:69)，其中：
X10是L或I；
LCDR2，其包含以下氨基酸序列：
ATSNLQX7(SEQ ID NO:70)，其中：
X7是S或I；以及
LCDR3，其包含以下氨基酸序列：
QQX3RRX6PWX9(SEQ ID NO:71)，其中：
X3是F或Y；
X6是L或I；并且
X9是T或S；或
(ii)三个重链互补决定区(HCDR)和三个轻链互补决定区(LCDR)，如由IMGT编号系统所定义的，包含：
HCDR1，其包含以下氨基酸序列：
GGTFX5NYW(SEQ ID NO:72)，其中：
X5是S或T；
HCDR2，其包含以下氨基酸序列：
TYRX4X5SX7T(SEQ ID NO:73)，其中：
X4是S或I；
X5是H或Q；并且
X7是D或T；
HCDR3，其包含以下氨基酸序列：
ARGAX5YHGYDVIX13N(SEQ ID NO:74)，其中：
X5是I或V；并且
X13是D或E；
LCDR1，其包含以下氨基酸序列：QSISSY(SEQ ID NO:40)；
LCDR2，其包含以下氨基酸序列：ATS(SEQ ID NO:41)；并且
LCDR3，其包含以下氨基酸序列：
QQX3RRX6PWX9(SEQ ID NO:75)，其中：
X3是Y或F；
X6是L或I；并且
X9是T或S。
在一些实施例中，本披露提供了分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含：
(a)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ IDNO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(b)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ ID NO:8(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:9(LCDR1)、SEQ ID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:43(HCDR1)、SEQ ID NO:44(HCDR2)和SEQID NO:45(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:46(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(c)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:12(HCDR2)和SEQ ID NO:13(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:14(LCDR1)、SEQ ID NO:15(LCDR2)和SEQ ID NO:16(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:47(HCDR1)、SEQ ID NO:48(HCDR2)和SEQID NO:49(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:50(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(d)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:17(HCDR2)和SEQ ID NO:18(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:19(LCDR1)、SEQ ID NO:20(LCDR2)和SEQ ID NO:21(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:51(HCDR1)、SEQ ID NO:52(HCDR2)和SEQID NO:53(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:54(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(e)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(f)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:27(HCDR2)和SEQ ID NO:28(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:29(LCDR1)、SEQ ID NO:30(LCDR2)和SEQ ID NO:31(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:59(HCDR1)、SEQ ID NO:60(HCDR2)和SEQID NO:61(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:62(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；或
(g)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:32(HCDR2)和SEQ ID NO:33(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:34(LCDR1)、SEQ ID NO:35(LCDR2)和SEQ ID NO:36(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:63(HCDR1)、SEQ ID NO:64(HCDR2)和SEQID NO:65(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:66(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，本披露提供了分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含：
(a)来自包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(b)来自包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(c)来自包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(d)来自包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(e)来自包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(f)来自包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；或
(g)来自包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含：
(a)与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:77的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(b)与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:79的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(c)与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(d)与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:83的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(e)与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(f)与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:87的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；或
(g)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:89的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区；
(f)含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含：
(a)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ IDNO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；或
(b)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本披露提供了分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含：
(a)含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置30、34、50、54、55、57、59、61、64、66、101、103、108和109中的一个或多个处的氨基酸取代；以及
(b)含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置24、28、31、33、50、55、56、91、93、94和97中的一个或多个处的氨基酸取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置30、34、50、54、55、57、59、61、64、66、101、103、108和109中的一个或多个处的氨基酸取代，其中：
SEQ ID NO:119的位置30处的氨基酸被T取代；
SEQ ID NO:119的位置34处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:119的位置50处的氨基酸被G取代；
SEQ ID NO:119的位置54处的氨基酸被S或I取代；
SEQ ID NO:119的位置55处的氨基酸被Q取代；
SEQ ID NO:119的位置57处的氨基酸被T取代；
SEQ ID NO:119的位置59处的氨基酸被N取代；
SEQ ID NO:119的位置61处的氨基酸被A取代；
SEQ ID NO:119的位置64处的氨基酸被Y取代；
SEQ ID NO:119的位置66处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:119的位置101处的氨基酸被V取代；
SEQ ID NO:119的位置103处的氨基酸被H取代；
SEQ ID NO:119的位置108处的氨基酸被I取代；和/或
SEQ ID NO:119的位置109处的氨基酸被E取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置103处的至少一个氨基酸取代。在一些实施例中，SEQ ID NO:119的位置103处的氨基酸被H取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括至少四个氨基酸取代。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以在位置34、66、103和108处至少包括氨基酸取代。在一些实施例中，SEQ ID NO:119的位置34处的氨基酸被I取代；SEQ ID NO:119的位置66处的氨基酸被S取代；SEQ ID NO:119的位置103处的氨基酸被H取代；并且SEQ ID NO:119的位置108处的氨基酸被I取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置24、28、31、33、50、55、56、91、93、94和97中的一个或多个处的氨基酸取代，其中：
SEQ ID NO:120的位置24处的氨基酸被R取代；
SEQ ID NO:120的位置28处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:120的位置31处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:120的位置33处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:120的位置50处的氨基酸被A取代；
SEQ ID NO:120的位置55处的氨基酸被Q取代；
SEQ ID NO:120的位置56处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:120的位置91处的氨基酸被F取代；
SEQ ID NO:120的位置93处的氨基酸被R取代；
SEQ ID NO:120的位置94处的氨基酸被I取代；和/或
SEQ ID NO:120的位置97处的氨基酸被S取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括至少六个氨基酸取代。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以在位置24、28、31、50、55和93处至少包括氨基酸取代。在一些实施例中，SEQ ID NO:120的位置24处的氨基酸被R取代；SEQ ID NO:120的位置28处的氨基酸被S取代；SEQ ID NO:120的位置31处的氨基酸被S取代；SEQ ID NO:120的位置50处的氨基酸被A取代；SEQ ID NO:120的位置55处的氨基酸被Q取代；并且SEQ ID NO:120的位置93处的氨基酸被R取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:77的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(b)与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:79的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(c)与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(d)与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:83的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(e)与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(f)与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:87的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；或
(g)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:89的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区；
(f)含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含人Igλ轻链恒定区。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链；
(b)含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的轻链；
(c)含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的轻链；
(d)含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的轻链；
(e)含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链；
(f)含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链；或
(g)含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链；或
(b)含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ IDNO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段与治疗剂缀合。在一些实施例中，治疗剂是剪接调节剂。在一些实施例中，治疗剂是普拉二烯内酯或普拉二烯内酯衍生物。在一些实施例中，治疗剂是普拉二烯内酯D或普拉二烯内酯D衍生物。
在一些实施例中，治疗剂是D1：
Figure BDA0003978353560000211
在一些实施例中，治疗剂是D2：
Figure BDA0003978353560000212
在一些实施例中，本文披露的抗体-药物缀合物(ADC)包含式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是本文披露的抗体或抗原结合片段；
D是剪接调节剂；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，接头为可裂解接头。
在一些实施例中，接头包含可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分可被酶裂解。在一些实施例中，可裂解肽部分或接头包含氨基酸单元。在一些实施例中，氨基酸单元包含缬氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)。在一些实施例中，氨基酸单元包含缬氨酸-丙氨酸(Val-Ala)。在一些实施例中，氨基酸单元包含丙氨酸-丙氨酸-天冬氨酸(Ala-Ala-Asp)。在一些实施例中，氨基酸单元包含谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸(Glu-Val-Cit)。
在一些实施例中，接头包含可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分可被酶裂解。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分可被葡糖苷酸酶裂解。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分可被β-葡糖苷酸酶裂解。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分或接头包含β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，接头包含马来酰亚胺部分。在一些实施例中，马来酰亚胺部分包含马来酰亚胺基己酰基(MC)。在一些实施例中，马来酰亚胺部分与抗体或抗原结合片段上的半胱氨酸残基反应。在一些实施例中，马来酰亚胺部分经由抗体或抗原结合片段上的半胱氨酸残基连接至该抗体或抗原结合片段。
在一些实施例中，接头包含马来酰亚胺部分和可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Ala。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Ala-Ala-Asp。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含马来酰亚胺部分和可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，接头包含至少一个间隔子单元。在一些实施例中，接头中的间隔子单元包含聚乙二醇(PEG)部分。在一些实施例中，PEG部分包含-(PEG)m-且m为1至10的整数。在一些实施例中，m为2。在一些实施例中，接头中的间隔子单元经由马来酰亚胺部分(“Mal-间隔子单元”)连接至抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。
在一些实施例中，接头包含Mal-间隔子单元和可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含Mal-间隔子单元和可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，马来酰亚胺部分或Mal-间隔子单元将抗体或抗原结合片段连接至接头中的可裂解部分。
在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Ala。在一些实施例中，接头包含MC-Ala-Ala-Asp。在一些实施例中，接头包含MC-Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit。
在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。在一些实施例中，接头包含MC-β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，接头中的可裂解部分直接连接至剪接调节剂。在一些其他实施例中，间隔子单元将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂。在一些实施例中，缀合物的裂解使剪接调节剂自抗体或抗原结合片段和接头释放。在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元是自消融型的(self-immolative)。
在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元包含对氨基苄氧基羰基(pABC)。在一些实施例中，pABC将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂。在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含Val-Ala-pABC。在一些实施例中，接头包含Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，接头包含Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。在一些实施例中，接头包含β-葡糖苷酸-pABC。
在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Ala-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，接头为不可裂解接头。
在一些实施例中，剪接调节剂包含SF3b复合体的调节剂。在一些实施例中，剪接调节剂包含普拉二烯内酯或普拉二烯内酯衍生物。在一些实施例中，剪接调节剂包含普拉二烯内酯D或普拉二烯内酯D衍生物。在一些实施例中，剪接调节剂包含D1或D2。在一些实施例中，剪接调节剂包含D1。在一些实施例中，剪接调节剂包含D2。
在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC包含式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是本文披露的抗体或抗原结合片段；
D是D1；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，本文披露的ADC包含式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是本文披露的抗体或抗原结合片段；
D是D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含：
(a)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ IDNO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(b)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ ID NO:8(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:9(LCDR1)、SEQ ID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:43(HCDR1)、SEQ ID NO:44(HCDR2)和SEQID NO:45(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:46(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(c)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:12(HCDR2)和SEQ ID NO:13(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:14(LCDR1)、SEQ ID NO:15(LCDR2)和SEQ ID NO:16(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:47(HCDR1)、SEQ ID NO:48(HCDR2)和SEQID NO:49(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:50(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(d)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:17(HCDR2)和SEQ ID NO:18(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:19(LCDR1)、SEQ ID NO:20(LCDR2)和SEQ ID NO:21(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:51(HCDR1)、SEQ ID NO:52(HCDR2)和SEQID NO:53(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:54(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(e)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(f)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:27(HCDR2)和SEQ ID NO:28(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:29(LCDR1)、SEQ ID NO:30(LCDR2)和SEQ ID NO:31(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:59(HCDR1)、SEQ ID NO:60(HCDR2)和SEQID NO:61(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:62(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；或
(g)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:32(HCDR2)和SEQ ID NO:33(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:34(LCDR1)、SEQ ID NO:35(LCDR2)和SEQ ID NO:36(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:63(HCDR1)、SEQ ID NO:64(HCDR2)和SEQID NO:65(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:66(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含：
(a)与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:77的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(b)与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:79的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(c)与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(d)与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:83的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(e)与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(f)与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:87的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；或
(g)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQID NO:89的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区；
(f)含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含：
(a)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ IDNO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；或
(b)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ IDNO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ IDNO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本文披露的ADC包含式(I)：
Ab-(L-D)p(I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ IDNO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。
在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，本文披露的ADC的接头是可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Ala-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，本文披露的ADC的p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC包含式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ IDNO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1；
L是包含MC-Val-Cit-pABC(ADL1)的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC包含式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区；
D是D1；
L是包含MC-Val-Cit-pABC(ADL1)的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQID NO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在各种实施例中，本文提供了包含所述抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC的药物组合物。在一些实施例中，药物组合物包含一种或多种抗体、一种或多种抗原结合片段、和/或一种或多种本文所述的ADC以及至少一种药学上可接受的载体。在一些实施例中，药物组合物包含抗体、抗原结合片段、和/或ADC的多个拷贝。在一些实施例中，药物组合物包含本文披露的ADC的多个拷贝，其中组合物中ADC的平均p为约2至约8。在一些实施例中，组合物中ADC的平均p为约4。
在一些实施例中，本文提供了所描述的抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC复合物或组合物的治疗方法和用途，例如用于治疗癌症。在某些方面中，本披露提供了治疗患有或疑似患有癌症的受试者的方法，这些方法通过向受试者施用治疗有效量和/或治疗有效方案的本文所述抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物中的任一种来进行。在某些方面中，本披露提供了减少或减慢受试者中癌细胞群的生长的方法，这些方法通过向受试者施用治疗有效量和/或治疗有效方案的本文所述抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物中的任一种来进行。在一些实施例中，抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物的施用使癌细胞群减少至少约10％、至少约20％、至少约50％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％。在一些实施例中，抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物的施用使癌细胞群的生长减慢至少约10％、至少约20％、至少约50％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％。在一些实施例中，抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物与一种或多种另外的治疗剂组合施用。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗剂包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂、和/或γ分泌酶抑制剂。
在本文披露的治疗方法和用途的一些实施例中，用所述抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物进行的治疗诱导旁观者杀伤不表达靶抗原但与表达靶抗原的癌细胞相邻的癌细胞。在一些实施例中，受试者具有一种或多种表达靶抗原的癌细胞。在一些实施例中，靶抗原为BCMA。在一些实施例中，与参考例如替代性抗BCMA ADC(例如AB200-ADL10-MMAF)相比，所述抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物诱导旁观者杀伤癌细胞水平增加。
在本文披露的治疗方法和用途的一些实施例中，癌症表达BCMA。在一些实施例中，癌症是浆细胞恶性肿瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症包括活跃分裂的细胞、休眠细胞或两者。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症包含至少一些休眠细胞，例如，不分裂或缓慢分裂的骨髓瘤细胞。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症表达MCL1。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症具有高或中等水平的MCL1表达。
在一些实施例中，本文提供了所述抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC复合物或组合物的治疗方法和用途，例如用于确定患有或疑似患有癌症(例如，表达BCMA的癌症)的受试者是否会对用靶向BCMA的药剂(例如，本文所述的抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物)的治疗产生应答。在一些实施例中，该方法包括提供来自受试者的生物样品；使样品与本文披露的抗体或抗原结合片段接触；以及检测抗体或抗原结合片段与样品中的一种或多种癌细胞的结合。在一些实施例中，一种或多种癌细胞表达BCMA。在一些实施例中，癌症是浆细胞恶性肿瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。在一些实施例中，生物样品是血液样品或骨髓穿刺样品。在一些实施例中，血液样品是血液、血液成分、或从血液或血液成分中获得的一种或多种细胞。
在某些其他方面，本披露提供了包含抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC以及药学上可接受的稀释剂、载体和/或赋形剂的药物组合物。在一些实施例中，还提供了编码本披露的抗体或抗原结合片段、或本披露的缀合物和/或ADC中的抗体部分的一种或多种核酸。这些核酸可以是分离的核酸、掺入分离的运载体中的核酸、和/或由细胞或细胞群在适合产生抗体或抗原结合片段的条件下表达的抗体或抗原结合片段的形式。
在又其他方面，本披露提供了产生所述抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC复合物或组合物的方法。在一些实施例中，本披露提供了产生抗体或抗原结合片段的方法，该方法通过在适合产生抗体或抗原结合片段的条件下培养经修饰以包含编码本文所述的抗体或抗原结合片段的一种或多种核酸的宿主细胞或细胞群来进行。在一些实施例中，本披露提供了产生ADC的方法，该方法通过在允许缀合的条件下使本文所述的抗体或抗原结合片段与连接至剪接调节剂的接头反应来进行。在一些实施例中，本披露提供了产生ADC的方法，该方法通过在允许缀合的条件下使本文所述的抗体或抗原结合片段与接头和剪接调节剂反应来进行。
在一些实施例中，本文披露的方法包括使抗体或抗原结合片段与接头和剪接调节剂顺序地反应，其中首先使抗体或抗原结合片段与接头反应形成抗体-接头中间体，然后使抗体-接头中间体与剪接调节剂反应。在一些其他实施例中，本文披露的方法包括使抗体或抗原结合片段与接头和剪接调节剂同时反应。在一些实施例中，接头为可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Ala-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，剪接调节剂包含D1。在一些实施例中，剪接调节剂包含D2。
附图说明
图1显示流式细胞术评估抗BCMA抗体对NCI-H929人骨髓瘤细胞系(高BCMA表达)的结合亲和力。
图2显示流式细胞术评估抗BCMA抗体对OPM2人骨髓瘤细胞系(中等BCMA表达)的结合亲和力。
图3显示流式细胞术评估抗BCMA ADC对Raji人伯基特淋巴瘤细胞系(低BCMA表达)的结合亲和力。
图4显示流式细胞术评估抗BCMA ADC对NCI-H929人骨髓瘤细胞系的结合亲和力。
图5显示受ADC处理影响的基因中可能的mRNA剪接变化。不希望受理论束缚，这些可能的mRNA剪接变化可能包括增加的预成熟mRNA(内含子滞留)积累、外显子跳读事件和/或异常连接(AJ)的表达，伴随着正确剪接(成熟)的mRNA和具有规范连接(CJ)的mRNA的表达降低。
图6A-6D显示对用AB200抗体或AB200-ADL5-D4治疗的OPM2肿瘤中的四种示例性基因(FBXW5(图6A)、PLEKHJ1(图6B)、DYNLT1(图6C)和UBA2(图6D))的mRNA剪接调节。示出了成熟mRNA(FBXW5-mat、PLEKHJ1-mat和DYNLT1-mat)、pre-mRNA种类(FBXW5-pre、PLEKHJ1-pre_2和DYNLT1-pre)、具有规范剪接位点的mRNA(UBA2_CJ_1)和具有异常剪接位点(UBA2_AJ_4)的mRNA。
图7A-7D显示对用AB200抗体或AB200-ADL1-D2治疗的MOLP8肿瘤中的四种示例性基因(FBXW5(图7A)、PLEKHJ1(图7B)、DYNLT1(图7C)和UBA2(图7D))的mRNA剪接调节。示出了成熟mRNA(FBXW5-mat、PLEKHJ1-mat和DYNLT1-mat)、pre-mRNA种类(FBXW5-pre、PLEKHJ1-pre_2和DYNLT1-pre)、具有规范剪接位点的mRNA(UBA2_CJ_1)和具有异常剪接位点(UBA2_AJ_4)的mRNA。
图8A-8D显示对用AB200抗体、AB212-ADL1-D1或AB212-ADL1-D2治疗的OPM2肿瘤中的四种示例性基因(FBXW5(图8A)、PLEKHJ1(图8B)、DYNLT1(图8C)和UBA2(图8D))的mRNA剪接调节。示出了成熟mRNA(FBXW5-mat、PLEKHJ1-mat和DYNLT1-mat)、pre-mRNA种类(FBXW5-pre、PLEKHJ1-pre_2和DYNLT1-pre)、具有规范剪接位点的mRNA(UBA2_CJ_1)和具有异常剪接位点(UBA2_AJ_4)的mRNA。
图9显示示例性抗BCMA抗体(AB214)在OPM2异种移植模型中的体内抗癌活性(研究1)。
图10显示示例性抗BCMA抗体(AB212、AB217和AB218)在OPM2异种移植模型中的体内抗癌活性(研究2)。
图11显示示例性抗BCMA ADC在OPM2异种移植模型中的体内抗癌活性(研究1)。
图12显示示例性抗BCMA ADC在OPM2异种移植模型中的体内抗癌活性(研究2)。
图13显示示例性抗BCMA ADC在OPM2异种移植模型中的体内抗癌活性(研究3)。
图14显示示例性抗BCMA ADC在OPM2异种移植模型中的体内抗癌活性(研究4)。
图15显示示例性抗BCMA ADC在MOLP8异种移植模型中的体内抗癌活性(研究1)。
图16显示示例性抗BCMA ADC在MOLP8异种移植模型中的体内抗癌活性(研究2)。
图17A-17D显示AB216-ADL1-D1(y轴)和AB200-ADL10-MMAF(x轴)对一组11种人骨髓瘤细胞系的体外细胞毒性。GI50、LD50、曲线下面积(AUC)和活细胞减少最大百分比(RminAve)的值分别显示在图17A-17D中。
图18显示在正常血清条件下，在NCI-H929人骨髓瘤细胞中，在6天的
Figure BDA0003978353560000391
细胞活力测定中，对AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF活性的评估。
图19A-19B显示在低血清条件下，在NCI-H929人骨髓瘤细胞中，AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF的6天
Figure BDA0003978353560000392
细胞活力评估的生物学重复。图19A(实验重复#1)和图19B(实验重复#2)各自显示在低血清条件下，用AB216-ADL1-D1或AB200-ADL10-MMAF处理的NCI-H929人骨髓瘤细胞在第6天的相对增殖，作为时间匹配的未处理对照的百分比(％)。
图20显示在正常血清条件下，在OPM2人骨髓瘤细胞中，在6天的
Figure BDA0003978353560000393
细胞活力测定中，对AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF活性的评估。
图21A-21B显示在低血清条件下，在OPM2人骨髓瘤细胞中，AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF的6天
Figure BDA0003978353560000401
细胞活力评估的生物学重复。图21A(实验重复#1)和图21B(实验重复#2)各自显示在低血清条件下，用AB216-ADL1-D1或AB200-ADL10-MMAF处理的OPM2人骨髓瘤细胞在第6天的相对增殖，作为时间匹配的未处理对照的百分比(％)。
图22显示在用5、50或500nM的AB216-ADL1-D1或AB200-ADL10-MMAF处理24或96小时的NCI-H929人骨髓瘤细胞中MCL1的促存活、长同种型(MCL1L)的mRNA水平。
图23显示在用5、50或500nM的AB216-ADL1-D1或AB200-ADL10-MMAF处理24或96小时的NCI-H929人骨髓瘤细胞中MCL1表达的免疫印迹分析。
具体实施方式
所披露的组合物及方法可参照以下详细描述来更容易地理解。
在本文通篇，描述涉及组合物及使用这类组合物的方法。当本披露描述或主张与组合物相关联的特点或实施例时，此类特点或实施例同等地适用于使用该组合物的方法。同样，当本披露描述或主张与使用该组合物的方法相关联的特点或实施例时，此类特点或实施例同等地适用于该组合物。
当值的范围得以表示时，其包括使用该范围内的任何特定值的实施例。此外，对按范围陈述的值的提及包括该范围内的每一值。所有范围均包括其端点且可组合。当通过在前面使用“约”，以近似值表示值时，应理解特定值形成另一实施例。除非上下文另外明确地指示，否则对特定数值的提及至少包括该特定值。除非另外指示其具体使用情形，否则“或”的使用意指“和/或”。
应了解，出于清楚起见在单独实施例的情形下描述于本文中的所披露的组合物及方法的某些特点还可以单个实施例的组合形式提供。相反地，出于简便起见在单个实施例的情形下描述的所披露的组合物及方法的各种特点还可单独地或以任何子组合形式提供。
本文所引用的所有参考文献均出于任何目的通过引用并入。在参考文献与本说明书矛盾的情况下，以本说明书为准。
在本说明书及权利要求通篇使用与描述的方面相关的各种术语。除非另外指示，否则将给与这类术语以其在本领域中的普通含义。其他特别定义的术语以与本文所提供的定义一致的方式来解释。
如本文所使用，单数形式“一个/种(a/an)”和“该(the)”包括复数形式，除非上下文另外明确地指示。
如技术人员自本文所含的教导显而易见的是，在数值及范围的情形下，术语“约”或“近似地”是指近似或接近所述值或范围的值或范围，使得实施例可根据预期执行，如在反应混合物中具有所需量的核酸或多肽。在一些实施例中，“约”意指数值量±10％。
术语“抗体”在最广泛意义上用于指经由免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点识别且特异性结合如蛋白质、多肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或前述物质的组合等的靶标的免疫球蛋白分子。抗体的重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)构成。轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)构成。出于本申请的目的，成熟的重链和轻链可变区各自包含从N-末端至C-末端排列的四个框架区(FR1、FR2、FR3和FR4)内的三个互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。“抗体”可为天然存在的或人造的，诸如通过常规杂交瘤技术产生的单克隆抗体。抗体可以包含一条或多于一条重链和/或轻链。术语“抗体”包括全长单克隆抗体和全长多克隆抗体，以及诸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv的抗体片段，以及单链抗体。抗体可以是免疫球蛋白的五种主要类别中的任一种：IgA、IgD、IgE、IgG、以及IgM，或其亚类(例如，同种型IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。该术语进一步涵盖人抗体、嵌合抗体、人源化抗体以及含有抗原识别位点的任何经修饰的免疫球蛋白分子，只要其展现所需生物活性(例如，结合靶抗原(例如，BCMA)、在表达靶抗原的细胞内内化)中的一种或多种即可。
描述抗体中CDR和FR区位置的编号系统已由不同的团体定义。本领域已知和/或本文所述的任何编号系统可用于定义本披露的抗体和抗原结合片段中的CDR和FR区。
在一些实施例中，本披露的抗体和抗原结合片段包含由Kabat编号系统定义的CDR和FR区(参见，例如，Kabat等人“Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质的序列]”,Diane Publishing Company[戴安出版公司](1992)；还参见，Kabat等人“Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质的序列]”,U.S.Department of Health and Human Services[美国卫生与公众服务部],U.S.Government Printing Office[美国政府印刷局](1987和1991))。由Kabat编号系统定义的示例性CDR序列在表3中列出并且可以用于本文披露的任何示例性抗体和抗原结合片段中。在一些实施例中，Kabat编号系统还可以用于描述CDR和/或FR区内位置处的一个或多个单独氨基酸。在一些实施例中，除了使用在抗体或抗原结合片段中的绝对位置描述一个或多个氨基酸之外(或作为其替代)，使用Kabat编号系统。在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段中的氨基酸和/或氨基酸修饰可以通过其Kabat位置来指代。例如，在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含经修饰以在位置103(即，在绝对位置103)处包括至少一个氨基酸取代的SEQ ID NO:119的氨基酸序列。在一些实施例中，SEQ ID NO:119的位置103可通过其Kabat位置(即，SEQ ID NO:119的Kabat位置99)指代。在一些实施例中，SEQ ID NO:119的位置103(对应于Kabat位置99)处的氨基酸被H取代。
在一些实施例中，本披露的抗体和抗原结合片段包含由IMGT编号系统(国际免疫遗传信息系统
Figure BDA0003978353560000431
)定义的CDR和FR区。由IMGT编号系统定义的示例性CDR序列在表4中列出并且可以用于本文披露的任何示例性抗体和抗原结合片段中。
另外的编号系统，如Chothia编号系统(参见，例如，Al-Lazikani等人J Mol Biol.[分子生物学杂志]1997；273:927-48)和化学计算集团(CCG)编号系统(参见，例如，Molecular Operating Environment[分子操作环境](MOE),2013.08；Chemical ComputingGroup ULC[化学计算集团],Montreal,QC,Canada[加拿大魁北克省蒙特利尔],H3A 2R7,2018)是本领域已知的，可以用于定义本披露的抗体和抗原结合片段中的CDR和FR区。在一些实施例中，本披露的抗体和抗原结合片段包含与本文所述的CDR序列匹配有100％同源性的CDR序列。
如本文所使用，术语“单克隆抗体”是指自实质上均质的抗体群体获得的抗体，即除可能少量存在的可能性天然存在的突变以外，构成该群体的个别抗体为相同的。单克隆抗体针对单一抗原性表位具有高度特异性。相反，常规的(多克隆)抗体制剂通常包括针对不同表位或对其具有特异性的多种抗体。修饰语“单克隆”表示从基本上均质的抗体群体获得的抗体的特征，而不应解释为要求通过任何特定方法生产抗体。例如，根据本披露使用的单克隆抗体可通过首先由Kohler等人(1975)Nature[自然]256:495描述的杂交瘤方法来制造，或可通过重组DNA方法(参见，例如，美国专利号4,816,567)来制造。单克隆抗体还可使用例如Clackson等人(1991)Nature[自然]352:624-8和Marks等人(1991)J Mol Biol.[分子生物学杂志]222:581-97中所述的技术自噬菌体抗体文库分离。
本文所述的单克隆抗体具体地包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体、以及此类抗体的片段中的对应序列相同或同源；只要它们特异性结合靶抗原和/或表现出所需的生物学活性。
如本文所使用，术语“人抗体”是指由人产生的抗体或具有由人产生的抗体的氨基酸序列的抗体。
如本文所使用，术语“嵌合抗体”是指如下抗体，其中(a)恒定区被改变、替换或交换，使得抗原结合位点(可变区)连接至类别、效应子功能和/或种类不同或改变的恒定区；和/或(b)可变区或其部分被改变、替换或交换为抗原特异性不同或改变的可变区或其部分。为了产生嵌合抗体，在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法将来自非人供体抗体(例如，小鼠、兔或大鼠供体抗体)的可变区序列连接至人恒定区(参见，例如，美国专利号4,816,567(Cabilly等人))。例如，可以通过用来自人免疫球蛋白的恒定区替换小鼠恒定区来修饰小鼠抗BCMA抗体。由于用人恒定区替换，所以嵌合抗体可以保留其识别人BCMA的特异性而与原始的小鼠抗体相比在人中具有減少的免疫原性。
如本文所使用，术语“人源化抗体”是指包含至少一些人序列和至少一些非人序列的抗体形式。典型地，抗体包含赋予对靶抗原的结合特异性的人序列和一小部分的非人序列。此类抗体是嵌合抗体，其包含衍生自非人抗体的最小序列并保留非人抗体的反应性，同时在人中的免疫原性较低。典型地，人源化抗体是通过用与目的抗原(例如，BCMA)结合的非人供体抗体(例如，小鼠、兔或大鼠供体抗体)的高变区序列替换人受体抗体的高变区序列来产生。在一些情况下，受体抗体的框架区序列也可以用供体抗体的相应序列替换(例如，经由回复突变)。除了衍生自供体和受体抗体的序列外，人源化抗体还可以通过在框架区和/或替换的非人残基内进行残基取代来修饰，以改善和优化如本文所讨论的抗体特异性、选择性、亲和力和/或活性。
在一些实施例中，本文披露的抗体和抗原结合片段是人源化的。在一些实施例中，所披露的抗体和抗原结合片段含有衍生自非人抗体例如鼠抗体CA8的最小序列(参见，例如，美国专利号9,273,141，将其关于示例性非人抗体序列通过引用并入本文)。在一些实施例中，所披露的抗体和抗原结合片段保留了非人抗体的亲和力，但在一个或多个CDR和/或框架中包含修饰。在一些实施例中，所披露的抗体和抗原结合片段还表现出非人抗体未表现出的一种或多种所需特性，包括但不限于较低的免疫原性和降低的毒性。在一些实施例中，非人抗体是小鼠抗体。在一些实施例中，非人抗体是小鼠抗BCMA抗体。在一些实施例中，将非人抗体或其抗原结合片段或抗原结合结构域用作比较或“参考”抗体、抗原结合片段或抗原结合结构域，例如以评估可比较的结合亲和力。在其他实施例中，将非人抗体或其抗原结合片段或抗原结合结构域的变体(例如，人源化变体)用作比较或“参考”抗体、抗原结合片段或抗原结合结构域。
在一些实施例中，参考抗体或其抗原结合片段或抗原结合结构域是包含重链可变区和轻链可变区的人源化抗BCMA抗体，该重链可变区包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列(参见，例如，美国专利号9,273,141，将其关于示例性参考抗体序列通过引用并入本文)。此类参考抗体、抗原结合片段和/或抗原结合结构域在本文中可称为“AB200”。
如本文所使用，术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”是指抗体或蛋白质中保留特异性结合抗原(例如，BCMA)的能力的一个或多个片段。抗原结合片段还可保留内化至表达抗原的细胞中的能力。在一些实施例中，抗原结合片段还保留免疫效应子活性。经显示，全长抗体的片段可执行全长抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”内所涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，即由VL结构域、VH结构域、CL结构域和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包含通过铰链区处的二硫桥键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH结构域和CH1结合域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL结构域和VH结构域组成的Fv片段；(v)dAb片段，其包含单一可变结构域，例如VH结构域(参见，例如，Ward等人(1989)Nature[自然]341:544-6；以及国际公开号WO 1990/005144)；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独基因编码，但它们可使用重组方法通过使它们能够以单一蛋白链形式制造的合成接头来接合，其中VL区和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv))。参见，例如，Bird等人,(1988)Science[科学]242:423-6；和Huston等人(1988)Proc Natl Acad Sci.USA[美国科学院院刊]85:5879-83。此类单链抗体还意欲涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”内，且其在本领域中已知为当结合时可内化至细胞中的示例性结合片段类型(参见，例如，Zhu等人(2010)9:2131-41；He等人(2010)J Nucl Med.[核医学杂志]51:427-32；和Fitting等人,(2015)MAbs 7:390-402)。在某些实施例中，scFv分子可掺入融合蛋白中。还涵盖诸如双功能抗体的单链抗体的其他形式。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH和VL结构域是在单一多肽链上表达，但使用太短而不允许同一链上的两个结构域之间配对的接头，由此迫使这些结构域与另一链的互补结构域配对且产生两个抗原结合位点(参见，例如，Holliger等人(1993)Proc Natl Acad Sci.USA[美国科学院院刊]90:6444-8；和Poljak等人(1994)Structure[结构]2:1121-3)。抗原结合片段使用本领域普通技术人员已知的常规技术获得，且结合片段以与完整抗体相同的方式进行效用(例如，结合亲和力、内化)筛选。抗原结合片段可通过裂解完整蛋白，例如通过蛋白酶或化学裂解来制备。
术语“抗体-药物缀合物”、“抗体缀合物”、“免疫缀合物”和“ADC”可互换使用，且是指连接至一种或多种抗体或抗原结合片段的一种或多种治疗性化合物(例如，剪接调节剂)且其由以下通式定义：Ab-(L-D)p(式I)，其中Ab＝抗体或抗原结合片段，L＝接头部分，D＝药物部分(例如，剪接调节剂)，且p＝药物部分的数量/抗体或抗原结合片段。包含剪接调节剂的ADC还可在本文中更具体地称为“负载剪接调节剂的抗体”或“SMLA”。在包含剪接调节剂药物部分的ADC中，“p”是指连接至抗体或抗原结合片段的剪接调节剂的数量。在一些实施例中，接头L可包括位于抗体或抗原结合片段与剪接调节剂之间的可裂解部分。在一些实施例中，接头L可包括可裂解部分，该可裂解部分可通过一个或多个间隔子单元连接至抗体或抗原结合片段和剪接调节剂中的任一者或两者。在一些实施例中，当间隔子单元将可裂解部分连接至剪接调节剂时，其为自消融型间隔子单元。在其他实施例中，接头L不包括可裂解部分且为不可裂解接头。在一些实施例中，接头L可包括至少一个间隔子单元，该至少一个间隔子单元可直接地连接至抗体或抗原结合片段和剪接调节剂。本文描述了示例性可裂解接头和不可裂解接头。
如本文关于抗体或抗原结合片段所使用的术语“内化”是指抗体或抗原结合片段在与细胞结合后能够穿过细胞的脂质双层膜进入内部隔室(即，“内化”)，通常进入细胞中的降解隔室中。例如，内化性抗BCMA抗体为在结合细胞膜上的BCMA之后能够吸收至细胞中的抗体。在一些实施例中，本文披露的ADC中所使用的抗体或抗原结合片段靶向细胞表面抗原(例如，BCMA)且为内化性抗体或内化性抗原结合片段(即，ADC在抗原结合之后转移透过细胞膜)。在一些实施例中，内化性抗体或抗原结合片段结合细胞表面上的受体。靶向细胞膜上的受体的内化性抗体或内化性抗原结合片段可诱导受体介导的胞吞作用。在一些实施例中，内化性抗体或内化性抗原结合片段经由受体介导的胞吞作用吸收至细胞中。
如本文所使用，术语“B细胞成熟抗原”或“BCMA”是指人BCMA的任何天然形式。BCMA也可称为“肿瘤坏死因子受体超家族成员17(TNFRSF17)”或“CD269”。术语“BCMA”涵盖全长BCMA(例如，NCBI GenBank参考序列：BAB60895.1；UniProt参考序列：Q02223；SEQ ID NO:106)，以及可由细胞表达或加工(例如，可变剪接事件、可变启动子使用、转录后修饰、翻译后修饰等)产生的任何形式的人BCMA。该术语还涵盖人BCMA的功能变体或片段，包括但不限于保留人BCMA的一种或多种生物功能的剪接变体、等位基因变体和同种型(即，除非上下文指示该术语仅用于指野生型蛋白质，否则涵盖变体和片段)。BCMA可自人类分离，或可以重组方式或通过合成方法产生。该术语还可包括抗BCMA抗体(例如，本文披露的抗体或抗原结合片段)可特异性结合的任何合成变体。
术语“抗BCMA抗体”或“结合BCMA的抗体”是指结合例如特异性结合BCMA的任何形式的抗体或其抗原结合片段。它涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体和生物学功能性抗体片段，只要它们结合例如特异性结合BCMA。更具体地，在一些实施例中，本文披露的抗BCMA抗体或抗原结合片段可以结合例如特异性结合BCMA的细胞外结构域中的一个或多个氨基酸。在一些实施例中，BCMA的细胞外结构域包含SEQ ID NO:106(表8)的氨基酸1-54。
如本文所使用，术语“特异性”、“特异性结合(specifically binds和bindsspecifically)”是指抗体或抗原结合片段(例如，抗BCMA抗体)与异质蛋白质和其他生物制品群体中的靶抗原(例如，BCMA)之间的结合反应。可通过在一组给定条件下将与适当抗原的结合同与替代性抗原或抗原混合物的结合进行比较来测试抗体的结合特异性。如果抗体结合适当抗原且亲和力为与替代性抗原或抗原混合物的结合亲和力的至少2、5、7、10倍或更多倍，则认为其具有特异性。“特异性抗体”或“靶标特异性抗体”为仅结合靶抗原(例如，BCMA)但不结合其他抗原(或展现与其他抗原的最小结合)的抗体。在某些实施例中，特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的抗体或抗原结合片段对靶标的KD小于1×10-6M、小于1×10-7M、小于1×10-8M、小于1×10-9M、小于1×10-10M、小于1×10-11M、小于1×10-12M或小于1×10-13M。在某些实施例中，KD是1pM至500pM。在一些实施例中，KD在500pM至1μM、1μM至100nM、或100mM至10nM之间。
术语“表位”是指能够由抗体识别且特异性结合的抗原的部分。当抗原为多肽时，表位可由连续氨基酸或通过多肽的三级折叠而邻接的非连续氨基酸形成。抗体所结合的表位可使用本领域中已知的任何表位定位技术来识别，该表位定位技术包括用于表位识别的X射线结晶学(其通过直接目测抗原-抗体复合物)，以及监测抗体与抗原的片段或突变型变体的结合，或监测抗体和抗原的不同部分的溶剂可及性。用于给抗体表位作图的示例性策略包括但不限于基于阵列的寡肽扫描、限制性蛋白水解、定点诱变、高通量诱变作图、氢-氘交换和质谱法(参见，例如，Gershoni等人(2007)21:145-56；以及Hager-Braun和Tomer(2005)Expert Rev Proteomics[蛋白质组学专家评论]2:745-56)。
还可使用竞争性结合和表位分箱(epitope binning)来确定共有相同或重叠表位的抗体。竞争性结合可使用交叉阻断测定法来评估，如“Antibodies,A Laboratory Manual[抗体，实验室手册]”,Cold Spring Harbor Laboratory[冷泉港实验室出版社],Harlow和Lane(1988年第1版,2014年第2版)中所述的测定法。在一些实施例中，当在交叉阻断测定中，测试抗体或结合蛋白使参考抗体或结合蛋白(例如，包含CDR和/或选自表3-5中所鉴定的可变区的结合蛋白)与靶抗原(如BCMA)的结合减少至少约50％(例如，50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.5％或更高或其间的任何百分比)时，鉴定出竞争性结合，和/或反之亦然。在一些实施例中，竞争性结合可归因于共享或类似(例如，部分重叠)的表位，或由于其中抗体或结合蛋白在邻近表位处结合的位阻(参见，例如，Tzartos,Methods inMolecular Biology[分子生物学中的方法](Morris,编(1998)第66卷,第55-66页))。在一些实施例中，可使用竞争性结合来分选共有类似表位的结合蛋白的群组。例如，竞争结合的结合蛋白可“分箱”为具有重叠或邻近表位的结合蛋白组，而不竞争的结合蛋白归入不具有重叠或邻近表位的不同结合蛋白组。
术语“p”或“药物负载”或“药物:抗体比率”或“药物与抗体比率”或“DAR”是指药物部分的数量/抗体或抗原结合片段，即本文披露的ADC(例如，具有式(I)的ADC)中-L-D部分的数量/抗体或抗原结合片段。在包含剪接调节剂药物部分的ADC中，“p”是指连接至抗体或抗原结合片段的剪接调节剂的数量。例如，如果有两种剪接调节剂(例如，各自具有D1的结构的两种化合物)连接至抗体或抗原结合片段，则p＝2。在包含ADC(例如，具有式(I)的ADC)的多个拷贝的组合物中，“平均p”是指-L-D部分的平均数量/抗体或抗原结合片段，也称为“平均药物负载”。
在本文中使用“接头”或“接头部分”用于指能够将化合物(通常为药物部分，如剪接调节剂)共价接合至另一部分(如抗体或抗原结合片段)的任何化学部分。接头可能在使化合物或抗体保持活性的条件下易于发生或实质上抵抗酸诱导的裂解、肽酶诱导的裂解、基于光的裂解、酯酶诱导的裂解和/或二硫键裂解。
术语“药剂”在本文中用于指化合物、化合物的混合物、生物大分子或由生物材料制成的提取物。术语“治疗剂”或“药物”是指能够调节生物过程和/或具有生物活性的药剂。本文所述的剪接调节剂化合物是示例性治疗剂。
术语“化学治疗剂”或“抗癌剂”在本文中用于指不管作用机制如何，均有效治疗癌症的所有药剂。转移或血管生成的抑制常常为化学治疗剂的特性。化学治疗剂包括抗体、生物分子和小分子，且涵盖本文所述的剪接调节剂化合物。化学治疗剂可为细胞毒性剂或细胞生长抑制剂。术语“细胞生长抑制剂”是指抑制或遏制细胞生长和/或细胞增殖的药剂。术语“细胞毒性剂”是指主要通过干扰细胞的表达活性和/或运作而造成细胞死亡的物质。
如本文所使用，术语“剪接调节剂(splicing modulator)”、“剪接体调节剂”和“剪接调节剂(splice modulator)”是指通过与剪接体各组分相互作用而具有抗癌活性的化合物。在一些实施例中，剪接调节剂改变靶细胞中剪接的速率或形式。充当抑制剂的剪接调节剂例如可以减少不受控制的细胞增殖。在一些实施例中，剪接调节剂可通过结合SF3b剪接体复合物起作用。此类调节剂可以为天然存在的化合物或合成化合物。剪接调节剂的非限制性实例和此类调节剂的类别包括普拉二烯内酯(例如普拉二烯内酯D或普拉二烯内酯B)、普拉二烯内酯衍生物(例如普拉二烯内酯D或普拉二烯内酯B衍生物)、赫伯西地(herboxidiene)、赫伯西地衍生物、思普力西欧他汀(spliceostatin)、思普力西欧他汀衍生物、苏地霉素(sudemycin)和苏地霉素衍生物。如本文所使用，当提及剪接调节剂或类似物时，术语“衍生物”和“类似物”意指保持与原始化合物基本上相同、相似或增强的生物功能或活性但具有改变的化学或生物结构的任何此类化合物。在一些实施例中，该剪接调节剂是普拉二烯内酯或普拉二烯内酯衍生物。
如本文所使用，“普拉二烯内酯衍生物”是指结构上与称为普拉二烯内酯的天然产物家族的成员相关且保持该起始化合物的一种或多种生物功能的化合物。普拉二烯内酯最先在细菌普拉特链霉菌(Streptomyces platensis)中鉴定(Mizui等人(2004)J Antibiot.[抗生素杂志]57:188-96)为具有强效的细胞毒性且导致细胞周期停滞于细胞周期的G1和G2/M期(例如Bonnal等人(2012)Nat Rev Drug Dis[自然评论：药物发现]11:847-59)。有七种天然存在的普拉二烯内酯，即普拉二烯内酯A-G(Mizui等人(2004)J Antibiot.[抗生素杂志]57:188-96；Sakai等人(2004)J Antibiotics.[抗生素杂志]57:180-7)。美国专利号7,884,128和7,816,401描述了合成普拉二烯内酯B和D的示例性方法，并且将这些文献各自关于这些方法通过引用并入本文。普拉二烯内酯B和D的合成还可使用Kanada等人((2007)Angew Chem Int Ed.[应用化学国际版]46:4350-5)中所述的示例性方法进行。Kanada等人和国际公开号WO 2003/099813描述了自普拉二烯内酯D(WO 2003/099813的11107D)合成E7107(D11)(WO 2003/099813的化合物45)的示例性方法。对应的美国专利号为Kotake等人的7,550,503。将这些参考文献的每一个关于所述合成方法并入本文。
如本文所使用，“剪接调节剂药物部分”是指ADC或组合物中提供剪接调节剂化合物的结构的组分，例如具有式(I)的ADC中的剪接调节剂(D)组分。
如本文所使用，“剪接体”是指自诸如pre-mRNA区段的一个或多个RNA区段移除内含子的核糖核蛋白复合物。
术语“同源物”是指通过例如在对应位置处具有相同或类似的化学残基的序列而展现与另一分子的同源性的分子。
如本文所使用，术语“抑制(inhibit或inhibition of)”意指减少可测量的量，且可包括但不需要完全预防或抑制。
术语“靶标阴性”、“靶抗原阴性”和“抗原阴性”是指细胞或组织不存在靶抗原表达(或缺少可检测水平)。术语“靶标阳性”、“靶抗原阳性”和“抗原阳性”是指存在靶抗原表达(或可检测水平)。例如，不表达靶抗原的细胞或细胞系可描述为靶标阴性的，而表达靶抗原的细胞或细胞系可描述为靶标阳性的。
术语“旁观者杀伤”或“旁观者效应”是指在靶标阳性细胞存在的情况下对靶标阴性细胞的杀伤，其中在靶标阳性细胞不存在的情况下未观测到靶标阴性细胞的杀伤。细胞间接触或至少靶标阳性细胞与靶标阴性细胞之间的邻近使得能够进行旁观者杀伤。此类杀伤可与“脱靶杀伤”相区分，该“脱靶杀伤”是指对靶标阴性细胞的无差别杀伤。在靶标阳性细胞不存在的情况下可观测到“脱靶杀伤”。
如本文所使用，术语“癌症”、“赘生物”和“肿瘤”可互换使用，并且以单数或复数形式表示，是指已经历恶性转化的细胞，该恶性转化使它们对宿主生物体是致病的。通过成熟的技术，如组织学检查，可以容易地将原代癌细胞与非癌细胞区分开来。如本文所使用，癌细胞的定义不仅包括原代癌细胞，还包括源自癌细胞祖先的任何细胞。这包括转移的癌细胞，以及源自癌细胞的体外培养物和细胞系。癌症可以表现为实体瘤，例如通过诸如计算机断层摄影(CT)扫描、磁共振成像(MRI)、X射线、超声或体格检查触诊等程序基于肿瘤块可检测到的肿瘤，和/或由于可从患者获得的样品中一种或多种癌症特异性抗原的表达而可检测到的肿瘤。肿瘤还可以是造血(或血液学或血液相关)癌症，例如源自血细胞或免疫细胞的癌症，其可被称为“液体肿瘤”。基于血液肿瘤的临床病症的具体实例包括白血病，如慢性髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病；浆细胞恶性肿瘤，如多发性骨髓瘤、意义未明(或未知或不清楚)的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤；等。
在一些实施例中，本文所述的癌症可以是任何血液癌症。血液癌症包括淋巴和骨髓恶性肿瘤、以及浆细胞疾病或癌症，如多发性骨髓瘤、MGUS、浆细胞瘤(骨、髓外)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、浆细胞白血病和原发性淀粉样变性(AL)。血液癌症还可以包括其他类型的造血细胞(包括多形核白细胞(或嗜中性粒细胞)、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、树突细胞、血小板、红细胞和自然杀伤细胞)癌症。包括造血细胞的组织可称为“造血细胞组织”，并且包括骨髓；外周血；胸腺；和周围淋巴组织，如脾脏、淋巴结、与粘膜相关的淋巴组织(如肠道相关淋巴组织)、扁桃体、派尔集合淋巴结和阑尾、以及与其他粘膜相关的淋巴组织(例如，支气管内皮)。
本文所述的BCMA癌症的具体实例包括浆细胞癌。在一些实施例中，癌症是浆细胞恶性肿瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症包括活跃分裂的细胞、休眠细胞或两者。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症包含至少一些休眠细胞，例如，不分裂或缓慢分裂的骨髓瘤细胞。
当用于描述细胞时，术语“休眠”是指不分裂或以低于正常速度的速率(例如，在低血清条件下观察到的速率)分裂的细胞。参见，例如，Khoo等人(2019)Blood.[血液]134(1):30-43。该术语涵盖不分裂(静止)和缓慢分裂的细胞。术语“静止”是指处于可逆状态的细胞，其中细胞不分裂但保留重新进入细胞分裂过程的能力。静止细胞可以通过RNA含量低、缺乏细胞增殖标记和/或细胞更新水平低来识别。在一些实施例中，静止细胞是静止癌细胞。与“休眠”细胞相反，“活跃分裂”细胞是处于分裂过程中或正积极准备以正常速率(例如，在正常血清条件下观察到的速率)分裂的细胞。
术语“受试者”与“患者”在本文中可互换用于指任何动物，诸如任何哺乳动物，包括但不限于人、非人灵长类动物、啮齿动物等。在一些实施例中，受试者或患者是哺乳动物。在一些实施例中，受试者或患者是人。
术语“共施用”或“组合”施用一种或多种治疗剂包括同时施用以及按任何次序连续施用。
“药物组合物”是指呈准许施用活性成分且随后提供一种或多种活性成分的预期生物活性和/或达成治疗效果的形式，且不含对应施用配制品的受试者具有不可接受毒性的额外组分的制剂。药物组合物可为无菌的。
“药物赋形剂”包含诸如辅助剂、载体、pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、润湿剂、防腐剂等的物质。
术语“药学上可接受的”意指经联邦管制机构或洲政府审批通过或可由其审批通过，或在美国药典或其他普遍公认药典中列出以用于动物且更具体地用于人类。
“药学上可接受的盐”为保持母体化合物的所需生物活性且不赋予非所需毒理学作用的盐。这类盐的实例为：(a)与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)形成的酸加成盐；以及与有机酸(例如，乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、葡萄糖酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、棕榈酸、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸等)形成的盐；和(b)由元素阴离子(如氯、溴和碘)形成的盐。参见，例如，Haynes等人,“Commentary:Occurrence of Pharmaceutically AcceptableAnions and Cations in the Cambridge Structural Database[评论：剑桥结构数据库中药学上可接受的阴离子和阳离子的存在],”J.Pharmaceutical Sciences[药物科学杂志],第94卷,第10期(2005)，和Berge等人,“Pharmaceutical Salts[药用盐]”,J.Pharmaceutical Sciences[药物科学杂志],第66卷,第1期(1977)，将其通过引用并入本文。
例如，本文披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC的“有效量”是足以执行具体陈述的目的(例如，在施用后产生治疗效果，如减小肿瘤生长速率或肿瘤体积、减少癌症症状、或治疗功效的某些其他指标)的量。术语“治疗有效量”是指抗体、抗原结合片段、和/或ADC的有效治疗受试者的疾病或障碍的量。在癌症的情况下，治疗有效量的抗体、抗原结合片段、和/或ADC可以减少癌细胞的数量、减小肿瘤大小、抑制(例如，减缓或停止)肿瘤转移、抑制(例如，减缓或停止)肿瘤生长、和/或缓解一种或多种症状。“预防有效量”是指在必需剂量和时间段下有效达到所需预防结果的量。典型地，由于预防剂量在疾病之前或在疾病早期阶段时用于受试者中，所以预防有效量将小于治疗有效量。
如本文所使用，术语“治疗(treat或treatment)”或“治疗性”是指疾病的任何后果的任何改善，如延长的存活期、较低发病率和/或由替代性治疗模式引起的副作用减轻。如本领域容易理解的，治疗操作涵盖但不需要疾病的完全根除。如本文所使用，术语“治疗(treat或treatment)”还可指将所述抗体、抗原结合片段、和/或ADC施用于受试者，例如患有或疑似患有癌症的患者。治疗可用于治愈、愈合、减轻、缓解、更改、补救、改善、缓和、改进或影响疾病(例如，癌症)、疾病的症状或患疾病的倾向性。在一些实施例中，除了治疗患有病症的受试者之外，还可预防性提供本文披露的组合物以预防或降低罹患该病症的可能性。
在一些实施例中，使用标记的抗体、抗原结合片段、和/或ADC。合适的“标记”包括放射性核素、酶、受质、辅因子、抑制因子、荧光部分、化学发光部分、磁性粒子等。
如本文所使用，术语“蛋白质”是指至少两个共价连接的氨基酸。该术语涵盖多肽、寡肽和肽。在一些实施例中，两个或更多个共价连接的氨基酸通过肽键连接。蛋白质可由天然存在的氨基酸和肽键构成，例如当蛋白质使用表达系统和宿主细胞以重组方式制成时如此。可替代地，蛋白质可包括合成氨基酸(例如，高苯丙氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸和正亮氨酸)。“重组蛋白”是使用重组技术、使用本领域中已知的任何技术和方法，即通过表达重组核酸而制成的蛋白质。用于产生重组蛋白的方法和技术是本领域众所周知的。
如本文所使用，术语“氨基酸”和“残基”是指天然存在的和合成的氨基酸，连同以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码子编码的氨基酸，连同随后在体内修饰的那些氨基酸，例如，羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和邻磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指如下化合物，其与天然发生的氨基酸具有相同的基本化学结构，即，与氢结合的α碳、羧基基团、氨基基团和R基团，例如硒代半胱氨酸、高丝氨酸、正亮氨酸和甲硫氨酸亚砜。这种类似物可具有经修饰的R基团(例如，硒代半胱氨酸、正亮氨酸)或经修饰的肽骨架，但是依然保留与天然氨基酸一样的基本化学结构。氨基酸模拟物是指其结构与氨基酸的一般化学结构不同的化合物，但是其以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用。表1中提供了示例性氨基酸的三字母和单字母代码。
表1.示例性氨基酸的三字母和单字母代码
Figure BDA0003978353560000571
Figure BDA0003978353560000581
对于氨基酸序列，术语“同一性”或“同源性”是指通过比较两个或更多个多肽的序列而确定的其之间的关系。术语“同一性”还意指多肽之间的序列相关性程度，如由两个或更多个氨基酸残基的串之间的匹配数所确定的。两个序列之间的同一性百分比是序列共用的相同位置数量的函数(即，同一性百分比等于相同位置数量/位置总数x100)，将缺口数量和每个缺口的长度考虑在内，需要引入缺口以便最佳比对这两个序列。序列比较以及两个序列之间的百分比同一性的确定可以使用数学算法完成。对于序列比较，典型地一个序列充当参考序列，将测试序列与该参考序列进行比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中，必要时指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，或者可以指定替代参数。然后，序列比较算法将基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。另外地或者可替代地，本披露的蛋白质序列可以进一步用作“查询序列”以对公共数据库进行检索，例如鉴定相关序列。例如，可以使用Altschul等人((1990)J Mol Biol.[分子生物学杂志]215(3):403-10)的BLAST程序进行这种检索。
通常，本文披露的蛋白质与其变体(包括靶抗原(如BCMA)的变体和抗体可变结构域的变体(包括单个变体CDR))之间的氨基酸同一性或同源性为与本文所述序列具有至少80％的同一性或同源性，例如，至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、几乎100％、或100％的同一性或同源性。
以类似方式，关于编码本文所鉴定的抗体和其他蛋白质的核酸序列的“核酸序列同一性百分比”被定义为与抗原结合蛋白的编码序列中的核苷酸残基相同的候选序列中的核苷酸残基百分比。具体的方法利用设定成默认参数的WU-BLAST-2的BLASTN模块，其中重叠间隔和重叠分数分别设定成1和0.125。
抗BCMA抗体和抗原结合片段
在各种实施例中，本披露涉及能够结合和/或杀伤癌细胞(例如，表达BCMA的癌细胞)的抗体及其抗原结合片段，以及它们在缀合物(例如，ADC)和治疗性组合物中的用途。
在一些实施例中，本文披露的抗体和抗原结合片段可以单独使用、作为药物组合物或组合疗法的一部分施用、和/或作为ADC中的抗体部分施用。在一些实施例中，抗体和抗原结合片段能够结合BCMA。在一些实施例中，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段可单独使用(即，以未缀合形式)并用作ADC中的抗体部分。
在一些实施例中，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段是人源化的。在一些实施例中，抗BCMA抗体和抗原结合片段含有源自非人(例如小鼠)抗体的最小序列并保留非人抗体的反应性，同时在人中具有较低的免疫原性。在一些实施例中，与本领域已知的一种或多种抗BCMA抗体相比，这些抗BCMA抗体和抗原结合片段提供对结合亲和力、稳定性、可配制性和/或治疗功效的一项或多项改进，和/或提供降低的聚集和/或脱靶毒性。
在一些实施例中，与参考抗BCMA抗体或抗原结合片段(例如，包含AB200的参考)相比，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段提供改善的结合亲和力，无论是单独使用还是作为较大分子(如ADC)的一部分使用。在一些实施例中，与参考抗BCMA抗体或抗原结合片段相比，所披露的抗体和抗原结合片段对BCMA(例如，人BCMA)具有更高的亲和力。在一些实施例中，与参考抗BCMA抗体或抗原结合片段相比，所披露的抗体和抗原结合片段对人BCMA、猴BCMA或两者具有更高的亲和力。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段对BCMA(例如，人BCMA和/或猴BCMA)的结合亲和力可以通过例如使用人BCMA和/或猴BCMA的细胞外结构域的Octet结合测定来确定。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段对BCMA(例如，人BCMA)的结合亲和力可以通过例如使用具有高或中等BCMA表达水平的癌细胞的一种或多种结合测定来确定。
在一些实施例中，与参考抗BCMA抗体或抗原结合片段(例如，包含AB200的参考)相比，本文披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段提供改善的稳定性，无论是单独使用还是作为较大分子(如ADC)的一部分使用。在一些实施例中，与参考抗BCMA抗体或抗原结合片段相比，所披露的抗体和抗原结合片段表现出增加的热稳定性。在一些实施例中，与参考抗BCMA抗体或抗原结合片段相比，所披露的抗体和抗原结合片段具有更高的解链温度(Tm)。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段的稳定性(例如，热稳定性)可以通过例如基于温度的稳定性测定，例如差示扫描量热法(DSC)或ThermoFluor测定来确定。
凭借这些改进特性中的一些或全部，所披露的抗体和抗原结合片段(单独或作为ADC的一部分)可用作治疗剂，例如用于治疗、预防和/或诊断癌症(例如，表达BCMA的癌症)。
在一些实施例中，本文披露的抗体和抗原结合片段结合(例如，特异性结合)BCMA(例如，如在癌细胞上表达的)。抗体或抗原结合片段可结合BCMA，其中解离常数(KD)≤1mM、≤100nM或≤10nM或其间任何量，如通过例如流式细胞术分析所测量的。在一些实施例中，KD在0.5nM至10nM之间，如通过例如流式细胞术分析所测量的。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段是包含两个重链和两个轻链的四链抗体(还称为免疫球蛋白)。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段是双链半抗体(一个轻链和一个重链)或免疫球蛋白的抗原结合片段。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段是保留结合靶标癌抗原(例如，BCMA)的能力和/或提供免疫球蛋白的功能的免疫球蛋白的抗原结合片段。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或其内化性抗原结合片段。在一些实施例中，内化性抗体或其内化性抗原结合片段结合细胞表面上表达的靶标癌抗原且在结合后进入细胞。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段以ADC形式连接至剪接调节剂药物部分，并且在ADC进入且存在于表达靶标癌抗原的细胞中之后(即，在ADC已经内化之后)，例如通过裂解、通过抗体或抗原结合片段降解或通过任何其他合适的释放机制，ADC的剪接调节剂药物部分自ADC中的抗体或抗原结合片段释放。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段可包含取自表5中所列的重链和轻链可变区的配对组，或来自重链和轻链配对组的六个CDR序列的组，例如，表3或表4中列出的一组CDR。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段进一步包含人重链和轻链框架(任选地具有一个或多个回复突变以提高结合亲和力)和/或人重链和轻链恒定区或其片段。例如，抗体或抗原结合片段可包含人IgG重链恒定区(如IgG1或IgG4)和人κ或λ轻链恒定区。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含人免疫球蛋白G亚型1(IgG1)重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含人免疫球蛋白G亚型4(IgG4)重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。
表3-7列出了本披露的示例性抗体的氨基酸序列。表8和表9分别列出了示例性靶抗原和示例性参考抗体的氨基酸序列。
表2.抗BCMA抗体
mAb 类型 靶标
AB212 人源化 BCMA
AB213 人源化 BCMA
AB214 人源化 BCMA
AB215 人源化 BCMA
AB216 人源化 BCMA
AB217 人源化 BCMA
AB218 人源化 BCMA
表3.抗BCMA抗体的Kabat CDR的氨基酸序列
Figure BDA0003978353560000621
Figure BDA0003978353560000631
Figure BDA0003978353560000641
表4.抗BCMA抗体的IMGT CDR的氨基酸序列
Figure BDA0003978353560000642
Figure BDA0003978353560000651
表5.抗BCMA抗体的可变区的氨基酸序列
Figure BDA0003978353560000652
Figure BDA0003978353560000661
Figure BDA0003978353560000671
表6.抗BCMA抗体的恒定区的氨基酸序列
Figure BDA0003978353560000672
Figure BDA0003978353560000681
Figure BDA0003978353560000691
Figure BDA0003978353560000701
Figure BDA0003978353560000711
Figure BDA0003978353560000721
表7.抗BCMA抗体的全长Ig链的氨基酸序列
Figure BDA0003978353560000722
Figure BDA0003978353560000731
Figure BDA0003978353560000741
Figure BDA0003978353560000751
Figure BDA0003978353560000761
Figure BDA0003978353560000771
表8.示例性靶抗原的氨基酸序列
Figure BDA0003978353560000772
*下划线表示细胞外结构域。
表9.示例性参考抗体的氨基酸序列
Figure BDA0003978353560000781
Figure BDA0003978353560000791
在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体、抗原结合片段或抗体部分可包含上表中所列的重链和轻链可变区的任何组，或例如通过将六个CDR移植至所选人供体抗体框架中得到的来自重链和轻链组的六个CDR序列的组。在一些实施例中，本文披露的ADC的抗体、抗原结合片段或抗体部分可包含与上表中所列的序列同源的氨基酸序列，只要该抗体、抗原结合片段或抗体部分保留结合其靶标癌抗原(例如，KD小于1x10-8M)的能力和/或保留本文披露的抗体、抗原结合片段或抗体部分的一种或多种功能特性(例如，内化、调节RNA剪接等的能力)即可。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ ID NO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含如下三个HCDR和三个LCDR：由SEQ ID NO:1组成的HCDR1，由SEQ ID NO:2组成的HCDR2，由SEQ ID NO:3组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:4组成的LCDR1，由SEQ ID NO:5组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3，如由Kabat编号系统所定义的；或者由SEQ ID NO:37组成的HCDR1，由SEQ ID NO:38组成的HCDR2，由SEQ ID NO:39组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:40组成的LCDR1，由SEQ ID NO:41组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:42组成的LCDR3，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:76和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:77，或与所披露的序列具有至少90％同一性的序列。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:77的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:76具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变区氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:77具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变区氨基酸序列。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:90的氨基酸序列的重链恒定区和包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链以及与SEQ IDNO:93的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:92具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:93具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是AB212。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ ID NO:8(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:9(LCDR1)、SEQ ID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:43(HCDR1)、SEQ ID NO:44(HCDR2)和SEQ ID NO:45(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:46(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含如下三个HCDR和三个LCDR：由SEQ ID NO:1组成的HCDR1，由SEQ ID NO:7组成的HCDR2，由SEQ ID NO:8组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:9组成的LCDR1，由SEQ ID NO:10组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:11组成的LCDR3，如由Kabat编号系统所定义的；或者由SEQ ID NO:43组成的HCDR1，由SEQ ID NO:44组成的HCDR2，由SEQ ID NO:45组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:40组成的LCDR1，由SEQ IDNO:41组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:46组成的LCDR3，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:78和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:79，或与所披露的序列具有至少90％同一性的序列。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:79的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:78具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变区氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:79具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变区氨基酸序列。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:90的氨基酸序列的重链恒定区和包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链以及与SEQ IDNO:95的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:94具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:95具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是AB213。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:12(HCDR2)和SEQ ID NO:13(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:14(LCDR1)、SEQ ID NO:15(LCDR2)和SEQ ID NO:16(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:47(HCDR1)、SEQ ID NO:48(HCDR2)和SEQ ID NO:49(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:50(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含如下三个HCDR和三个LCDR：由SEQ ID NO:1组成的HCDR1，由SEQ ID NO:12组成的HCDR2，由SEQ ID NO:13组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:14组成的LCDR1，由SEQ ID NO:15组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:16组成的LCDR3，如由Kabat编号系统所定义的；或者由SEQ ID NO:47组成的HCDR1，由SEQ ID NO:48组成的HCDR2，由SEQ ID NO:49组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:40组成的LCDR1，由SEQ IDNO:41组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:50组成的LCDR3，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:80和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:81，或与所披露的序列具有至少90％同一性的序列。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:80具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变区氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:81具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变区氨基酸序列。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:90的氨基酸序列的重链恒定区和包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链以及与SEQ IDNO:97的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:96具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:97具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是AB214。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:17(HCDR2)和SEQ ID NO:18(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:19(LCDR1)、SEQ ID NO:20(LCDR2)和SEQ ID NO:21(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:51(HCDR1)、SEQ ID NO:52(HCDR2)和SEQ ID NO:53(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:54(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含如下三个HCDR和三个LCDR：由SEQ ID NO:1组成的HCDR1，由SEQ ID NO:17组成的HCDR2，由SEQ ID NO:18组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:19组成的LCDR1，由SEQ ID NO:20组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:21组成的LCDR3，如由Kabat编号系统所定义的；或者由SEQ ID NO:51组成的HCDR1，由SEQ ID NO:52组成的HCDR2，由SEQ ID NO:53组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:40组成的LCDR1，由SEQ IDNO:41组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:54组成的LCDR3，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:82和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:83，或与所披露的序列具有至少90％同一性的序列。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:83的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:82具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变区氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:83具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变区氨基酸序列。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:90的氨基酸序列的重链恒定区和包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:98的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链以及与SEQ IDNO:99的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:98具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:99具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是AB215。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含如下三个HCDR和三个LCDR：由SEQ ID NO:1组成的HCDR1，由SEQ ID NO:22组成的HCDR2，由SEQ ID NO:23组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:24组成的LCDR1，由SEQ ID NO:25组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:26组成的LCDR3，如由Kabat编号系统所定义的；或者由SEQ ID NO:55组成的HCDR1，由SEQ ID NO:56组成的HCDR2，由SEQ ID NO:57组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:40组成的LCDR1，由SEQ IDNO:41组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:58组成的LCDR3，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:84和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:85，或与所披露的序列具有至少90％同一性的序列。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:84具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变区氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:85具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变区氨基酸序列。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:90的氨基酸序列的重链恒定区和包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链以及与SEQID NO:101的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:100具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:101具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是AB216。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:27(HCDR2)和SEQ ID NO:28(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:29(LCDR1)、SEQ ID NO:30(LCDR2)和SEQ ID NO:31(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:59(HCDR1)、SEQ ID NO:60(HCDR2)和SEQ ID NO:61(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:62(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含如下三个HCDR和三个LCDR：由SEQ ID NO:1组成的HCDR1，由SEQ ID NO:27组成的HCDR2，由SEQ ID NO:28组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:29组成的LCDR1，由SEQ ID NO:30组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:31组成的LCDR3，如由Kabat编号系统所定义的；或者由SEQ ID NO:59组成的HCDR1，由SEQ ID NO:60组成的HCDR2，由SEQ ID NO:61组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:40组成的LCDR1，由SEQ IDNO:41组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:62组成的LCDR3，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:86和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:87，或与所披露的序列具有至少90％同一性的序列。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:86具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变区氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:87具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变区氨基酸序列。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:90的氨基酸序列的重链恒定区和包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:102的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链以及与SEQID NO:103的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:102具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:103具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是AB217。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:32(HCDR2)和SEQ ID NO:33(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:34(LCDR1)、SEQ ID NO:35(LCDR2)和SEQ ID NO:36(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:63(HCDR1)、SEQ ID NO:64(HCDR2)和SEQ ID NO:65(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:66(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含如下三个HCDR和三个LCDR：由SEQ ID NO:1组成的HCDR1，由SEQ ID NO:32组成的HCDR2，由SEQ ID NO:33组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:34组成的LCDR1，由SEQ ID NO:35组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:36组成的LCDR3，如由Kabat编号系统所定义的；或者由SEQ ID NO:63组成的HCDR1，由SEQ ID NO:64组成的HCDR2，由SEQ ID NO:65组成的HCDR3；以及由SEQ ID NO:40组成的LCDR1，由SEQ IDNO:41组成的LCDR2，和由SEQ ID NO:66组成的LCDR3，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:88和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:89，或与所披露的序列具有至少90％同一性的序列。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:88具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变区氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:89具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变区氨基酸序列。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和/或人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:90的氨基酸序列的重链恒定区和包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链以及与SEQID NO:105的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:104具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链氨基酸序列；和/或与SEQ ID NO:105具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是AB218。
本文披露的抗体和抗原结合片段可以包括另外的修饰(例如，一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入)同时保持结合BCMA的能力。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含指定的修饰(例如，相对于参考抗体)，并且除了指定的修饰之外，任选地包含多达约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、或约10个氨基酸修饰。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区除了任何指定的氨基酸修饰之外，还包含多达约2个、多达约5个、或多达约10个氨基酸修饰(例如，相对于参考抗体)。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含轻链可变区，该轻链可变区除了任何指定的氨基酸修饰之外，还包含多达约2个、多达约5个、或多达约10个氨基酸修饰。
在一些实施例中，氨基酸取代具有单个残基。插入的数量级通常为约1至约20个氨基酸残基，但显著更大的插入可为容许的，只要保持生物功能(例如，结合BCMA)即可。缺失通常在约1至约20个氨基酸残基范围内，但在一些情况下，缺失可能要大得多。取代、缺失、插入或其任何组合可用于获得最终衍生物或变体。通常，对数个氨基酸作出这些改变以将对分子、特别是抗原结合蛋白的免疫原性和特异性的更改减至最少。然而，在某些情况下，更多变化可为容许的。保守取代通常根据提供功能相似氨基酸的表(如下面描述为表10的示例性表)进行，并且其他取代是本领域已知的。
表10
Figure BDA0003978353560000961
Figure BDA0003978353560000971
在各种实施例中，可以通过选择保守性低于表10中所示的取代的取代来作出功能或免疫属性中的实质性改变。例如，可进行更显著地影响以下的取代：更改区域中多肽主链的结构，例如α-螺旋或β-折叠结构；靶位点处该分子的电荷或疏水性；或侧链的体积。通常可在多肽性质上产生最大变化的取代是以下取代，其中：(a)亲水性残基(例如丝氨酰基或苏氨酰基)被取代为(或被以下取代)疏水性残基(例如亮氨酰基、异亮氨酰基、苯丙氨酰基、缬氨酰基或丙氨酰基)；(b)半胱氨酸或脯氨酸被取代为(或被以下取代)任何其他残基；(c)具有正电性侧链的残基(例如赖氨酰基、精氨酰基或组氨酰基)被取代为(或被以下取代)负电性残基(例如谷氨酰基或天冬氨酰基)；或(d)具有大体积侧链的残基(例如苯丙氨酸)被取代为(或被以下取代)不具有侧链的残基(例如甘氨酸)。
在其中变异抗体序列用于抗体、抗原结合片段或ADC中的一些实施例中，变体通常展现相同定性生物活性且引发相同免疫反应，但还可视需要选择变体以修改抗原结合蛋白的特征。除了在框架区或CDR区内进行的修饰之外，还可以将本披露的抗体工程改造以包含Fc区内的修饰，通常是为了改变抗体或抗原结合片段的一种或多种功能特性，如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，在一些实施例中，本披露的抗体可以被化学修饰(例如，可以将一个或多个化学物部分连接至该抗体)，或被修饰以改变其糖基化作用，例如，以改变该抗体或抗原结合片段的一个或多个功能特性。
本文所述的氨基酸取代可以通过列出绝对残基位置然后是经取代(即，替换)的氨基酸的三字母或单字母代码来表示。例如，SEQ ID NO:119的位置30处的丝氨酸被苏氨酸取代可以表示为“Ser30Thr”或“S30T”。在这个实例中，丝氨酸是“被替换的”氨基酸，苏氨酸是“取代”或“替换”氨基酸。
在一些实施例中，本文所述的氨基酸取代可使用抗体或抗原结合片段中的取代的绝对位置、Kabat编号系统或本领域已知的另一编号系统来指代。除非另有说明，使用抗体或抗原结合片段中取代的绝对位置来指代氨基酸取代。然而，在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段中的氨基酸取代可通过其Kabat位置来指代。在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含经修饰以在位置103(即，在绝对位置103)处包括至少一个氨基酸取代的SEQ ID NO:119的氨基酸序列。在一些实施例中，SEQ ID NO:119的位置103可通过其Kabat位置(即，SEQ ID NO:119的Kabat位置99)指代。在一些实施例中，SEQ ID NO:119的位置103(对应于Kabat位置99)处的氨基酸被H取代。不受理论的束缚，在一些实施例中，与缺乏以下所述取代的抗体或抗原结合片段相比，包含在SEQ ID NO:119的位置103(对应于Kabat位置99)处的天冬氨酸被组氨酸取代的抗体或抗原结合片段可表现出对BCMA的更高亲和力。在一些实施例中，D103H(Kabat D99H)取代可提高抗体或抗原结合片段对人BCMA、猴BCMA或两者的结合亲和力。在一些实施例中，D103H(Kabat D99H)取代提高了抗体或抗原结合片段对人BCMA和猴BCMA两者的结合亲和力，如通过例如Octet结合测定所确定的。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置30、34、50、54、55、57、59、61、64、66、101、103、108和109中的一个或多个处的氨基酸取代；和
(b)含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置24、28、31、33、50、55、56、91、93、94和97中的一个或多个处的氨基酸取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置30、34、50、54、55、57、59、61、64、66、101、103、108和109中的一个或多个处的氨基酸取代，其中：
SEQ ID NO:119的位置30处的氨基酸被T取代；
SEQ ID NO:119的位置34处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:119的位置50处的氨基酸被G取代；
SEQ ID NO:119的位置54处的氨基酸被S或I取代；
SEQ ID NO:119的位置55处的氨基酸被Q取代；
SEQ ID NO:119的位置57处的氨基酸被T取代；
SEQ ID NO:119的位置59处的氨基酸被N取代；
SEQ ID NO:119的位置61处的氨基酸被A取代；
SEQ ID NO:119的位置64处的氨基酸被Y取代；
SEQ ID NO:119的位置66处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:119的位置101处的氨基酸被V取代；
SEQ ID NO:119的位置103处的氨基酸被H取代；
SEQ ID NO:119的位置108处的氨基酸被I取代；和/或
SEQ ID NO:119的位置109处的氨基酸被E取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置103处的至少一个氨基酸取代。在一些实施例中，SEQ ID NO:119的位置103(对应于Kabat位置99)处的氨基酸被H取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括至少四个氨基酸取代。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以在位置34、66、103和108处至少包括氨基酸取代。在一些实施例中，SEQ ID NO:119的位置34处的氨基酸被I取代；SEQ ID NO:119的位置66处的氨基酸被S取代；SEQ ID NO:119的位置103处的氨基酸被H取代；并且SEQ ID NO:119的位置108处的氨基酸被I取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置24、28、31、33、50、55、56、91、93、94和97中的一个或多个处的氨基酸取代，其中：
SEQ ID NO:120的位置24处的氨基酸被R取代；
SEQ ID NO:120的位置28处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:120的位置31处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:120的位置33处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:120的位置50处的氨基酸被A取代；
SEQ ID NO:120的位置55处的氨基酸被Q取代；
SEQ ID NO:120的位置56处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:120的位置91处的氨基酸被F取代；
SEQ ID NO:120的位置93处的氨基酸被R取代；
SEQ ID NO:120的位置94处的氨基酸被I取代；和/或
SEQ ID NO:120的位置97处的氨基酸被S取代。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括至少六个氨基酸取代。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以在位置24、28、31、50、55和93处至少包括氨基酸取代。在一些实施例中，SEQ ID NO:120的位置24处的氨基酸被R取代；SEQ ID NO:120的位置28处的氨基酸被S取代；SEQ ID NO:120的位置31处的氨基酸被S取代；SEQ ID NO:120的位置50处的氨基酸被A取代；SEQ ID NO:120的位置55处的氨基酸被Q取代；并且SEQ ID NO:120的位置93处的氨基酸被R取代。在各种实施例中，任何经修饰的重链和轻链可以在本文披露的抗体或抗原结合片段或ADC中配对。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段可以单独(例如，作为抗体或抗原结合片段)、连接至一种或多种另外的药剂连接(例如，作为ADC)、或作为较大大分子(例如，双特异性抗体或多特异性抗体)的一部分使用。例如，在一些实施例中，抗体或抗原结合片段是双特异性或多特异性抗体中的抗原结合结构域和/或是双特异性或多特异性抗体的一部分。在一些实施例中，抗原结合结构域是抗原结合片段。在一些实施例中，抗原结合结构域和/或抗原结合片段是单链可变片段(scFv)或Fab片段。在一些实施例中，本文披露的抗体和抗原结合片段(单独使用或作为较大大分子的一部分使用)可包括另外的修饰(例如，一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入)同时保留BCMA结合功能。
在一些实施例中，本文披露的抗体或抗原结合片段与治疗剂缀合。在一些实施例中，治疗剂是剪接调节剂。在一些实施例中，治疗剂是普拉二烯内酯或普拉二烯内酯衍生物。在一些实施例中，治疗剂是普拉二烯内酯D或普拉二烯内酯D衍生物。在一些实施例中，治疗剂是D1、D2、或者本文所述的或本文通过引用并入的另一种示例性剪接调节剂。在一些实施例中，治疗剂是D1。在一些实施例中，治疗剂是D2。
在一些实施例中，本披露提供了分离的和/或基本上纯化的核酸分子(也称为多核苷酸)，其编码包含本文所述的抗体和抗原结合片段的全长多肽或包含本文所述的抗体和抗原结合片段的区段的多肽。如本文所使用，“分离的”意指在干预之前，从核酸的正常环境中发现的一种或多种组分中去除的。在一些实施例中，单个核酸可包含本文披露的抗体或抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区的编码序列，并且任选地还包含其一个或多个恒定区的编码序列。可替代地，这些编码序列中的一些或全部可以位于单独的核酸分子上。当从适当的表达运载体表达时，由这些多核苷酸编码的多肽能够结合BCMA(例如，人BCMA)。
本文还提供了如下多核苷酸，其编码来自本披露的示例性抗BCMA抗体或抗原结合片段的重链和/或轻链的至少一个CDR区和通常所有三个CDR区。本文进一步提供了如下多核苷酸，其编码本披露的示例性抗BCMA抗体或抗原结合片段的重链和/或轻链的所有或基本上所有的可变区序列。由于遗传密码的简并性，多种核酸序列将编码本文披露的示例性氨基酸序列中的每一种。
本文还提供了用于产生本披露的抗BCMA抗体和抗原结合片段的表达运载体、宿主细胞和方法。
示例性实施例是编码本文披露的抗体或抗原结合片段的分离的核酸。另一个示例性实施例是分离的运载体，其包含编码本文披露的抗体或抗原结合片段的分离的核酸。另一个示例性实施例是分离的细胞或细胞群，其包含编码本文披露的抗体或抗原结合片段的分离的核酸，或包含含有分离的核酸的运载体。另一个示例性实施例是产生抗体或抗原结合片段的方法，该方法通过在适合产生抗体或抗原结合片段的条件下培养经修饰以包含编码本文所述的抗体或抗原结合片段的一种或多种核酸序列的宿主细胞或细胞群来进行。在一些实施例中，该方法进一步包括分离、纯化和/或回收所产生的抗体或抗原结合片段的步骤。
术语“运载体”旨在指能够转运与其连接的另一多核苷酸和/或控制与其连接的另一多核苷酸的表达的多核苷酸分子。一种类型的运载体是“质粒”，其是指可以向其中连接另外的DNA区段的环状双链DNA环。另一类型的运载体是病毒运载体，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组中。某些运载体(例如，具有细菌复制起点的细菌运载体和附加型哺乳动物运载体)能够在它们被引入的宿主细胞中自主复制。其他运载体(例如，非附加型哺乳动物运载体)可以在一旦被引入宿主细胞时整合进宿主细胞基因组中，并且由此与宿主基因组一起复制。此外，某些运载体可以指导与它们可操作地连接的基因的表达。此类运载体在本文中称为“表达运载体”或“重组表达运载体”。通常，在重组DNA技术中有用的表达运载体通常呈质粒的形式。本披露旨在包括质粒，以及起到等同功能的其他形式的表达运载体，如病毒运载体(例如，复制缺陷型反转录病毒或慢病毒、腺病毒和腺相关病毒)。
用于接收编码抗BCMA抗体重链和/或轻链可变区的序列的运载体有时也编码恒定区或其部分。此类运载体允许将可变区表达为具有恒定区的融合蛋白，从而导致产生全长抗体或其抗原结合片段。通常，此类恒定区是人恒定区。在一些实施例中，恒定区是人IgG1重链恒定区。在一些实施例中，恒定区是人IgG4重链恒定区。在一些实施例中，恒定区是人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区是人Igλ轻链恒定区。
术语“宿主细胞”是指如下细胞(或细胞群)，其被人工工程改造以包含编码肽序列的核酸，并且转录并翻译，并任选地分泌肽至细胞生长培养基中。出于重组生产的目的，典型地通过常规方法合成或克隆编码肽的氨基酸序列的核酸，并整合至表达运载体中。术语“宿主细胞”不仅指特定的受试者细胞，还指这种细胞的子代。因为某些修饰可以因突变或环境影响而出现在后续世代中，所以这类子代实际上可以与亲代细胞不同，但仍包含于本文所使用的该术语范围内。
携带和表达编码抗BCMA抗体链或抗原结合片段的核酸的宿主细胞可以是原核或真核细胞。在一些实施例中，哺乳动物宿主细胞用于表达和产生本披露的抗BCMA多肽。例如，它们可以是表达内源性免疫球蛋白基因的杂交瘤细胞系或携带外源表达运载体的哺乳动物细胞系。这些包括任何正常的必死动物或人细胞或正常或异常的永生动物或人细胞。例如，已经开发了许多能够分泌完整免疫球蛋白的合适宿主细胞系，包括CHO细胞系、各种COS细胞系、HeLa细胞、骨髓瘤细胞系、转化的B细胞和杂交瘤。示例性宿主细胞包括但不限于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾(HEK)细胞(例如，293T)、猴肾(COS)细胞(例如，COS-1、COS-7)、幼仓鼠肾(BHK)细胞(例如，BHK-21)、非洲绿猴肾细胞(例如，BSC-1)、HeLa细胞、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)、骨髓瘤细胞(例如，NS0、653、SP2/0)、以及淋巴瘤细胞，或其任何衍生的、永生化或转化的细胞。
在一些实施例中，可以将编码抗BCMA抗体或抗原结合片段的重链和/或轻链的一种或多种核酸分子或包含此类核酸分子的一种或多种表达运载体使用适合所选宿主细胞的任何方法(例如，转化、转染、电穿孔、感染)引入合适的宿主细胞以产生重组宿主细胞，使得核酸分子可操作地连接至一个或多个表达控制元件(例如，在运载体中，在由细胞中的过程创建的构建体中，整合到宿主细胞基因组中)。在一些实施例中，所得重组宿主细胞可以维持在适合表达或生产的条件下(例如，在诱导剂的存在下，在合适的非人动物中，在补充有合适的盐、生长因子、抗生素、营养补充剂等的合适的培养基中)，由此产生所编码的多肽。如果需要，可以(例如，从动物、宿主细胞、培养基)分离或回收所编码的蛋白质。该过程包括在转基因非人动物的宿主细胞中的表达(参见，例如，国际公开号WO 1992/003918)。此外，可以使用已知技术增强来自生产细胞系的抗体链或抗原结合片段的表达。例如，谷氨酰胺合成酶和DHFR基因表达系统是在某些条件下增强表达的常用方法。可以使用常规技术，如有限稀释克隆、凝胶微滴技术或本领域已知的任何其他方法来鉴定高表达的细胞克隆。
抗体-药物缀合物
本披露的抗体-药物缀合物(ADC)包括具有抗癌活性的那些缀合物。特别地，这些ADC包括缀合(即，通过接头共价连接)至药物部分(例如，剪接调节剂)的抗体或抗原结合片段，其中该药物部分当未缀合至抗体或抗原结合片段时具有细胞毒性作用或细胞生长抑制作用。在各种实施例中，该药物部分当未缀合至抗体或抗原结合片段时能够与SF3b剪接体复合物结合和/或相互作用。在各种实施例中，该药物部分当未缀合至抗体或抗原结合片段时能够调节体外和/或体内RNA剪接。在各种实施例中，通过靶向RNA剪接，本文披露的药物部分和ADC提供了强效抗增殖剂。在各种实施例中，本文披露的药物部分和ADC可以靶向活跃分裂和休眠的细胞(例如，活跃分裂、不分裂和/或缓慢分裂的骨髓瘤细胞)。
在各种实施例中，本披露至少部分地基于以下发现：本文披露的新型抗体和抗原结合片段在连接至某些生物活性剪接调节剂并用于ADC中时可以提供改进的特性。虽然剪接调节剂在单独使用时可能表现出期望的改进特征(例如，强大的SF3b剪接体复合物结合、RNA剪接的有效调节)，但它优先靶向患病组织的能力可能有限。而且，在各种实施例中，当缀合至一些抗体或抗原结合片段时，剪接调节剂可能表现出较少的期望特征。因此，用作人类治疗剂(例如，用作肿瘤药剂)的ADC的研发和生产可能不仅仅需要鉴定能够结合一个或多个所需靶标且连接至单独使用以治疗癌症的药物的抗体。抗体与药物的连接可对该抗体和该药物中的一者或两者的活性具有显著影响，该影响将根据所选接头和/或药物的类型而变化。因此，在一些实施例中，对ADC的组分进行选择以(i)保持分离的抗体和药物部分所展现的一种或多种治疗特性；(ii)维持抗体或抗原结合片段的特异性结合特性；(iii)优化药物负载以及药物与抗体比率；(iv)允许经由稳定连接至抗体或抗原结合片段而递送(例如，细胞内递送)药物部分；(v)保持ADC作为完整缀合物的稳定性直至转运或递送至靶位点为止；(vi)将施用之前或之后的ADC的聚集减至最少；(vii)在细胞环境中的裂解或其他释放机制之后，允许实现药物部分的治疗作用，例如细胞毒性作用；(viii)展现类似于或优于分离的抗体和药物部分的体内抗癌治疗功效；(ix)使药物部分引起的脱靶杀伤最小化；和/或(x)展现所需的药代动力学和药效学特性、可配制性和毒理/免疫特征。可能需要这些特性中的一些或各种以鉴定用于治疗用途的经改善的ADC(Ab等人(2015)Mol Cancer Ther.[分子癌症治疗学]14:1605-13)。
在各种实施例中，本文披露的ADC表现出上文所列一些或各个类别中的出乎意料地有利的特性。例如，在一些实施例中，与包含替代性抗体、接头和/或药物部分(例如，替代性抗体(例如，参考抗体)和/或替代性剪接调节剂)的ADC相比，本文披露的ADC构建体表现出令人惊讶的有利的药物负载、聚集和/或稳定性特征，和/或保持或改善抗体结合功能、药物活性和/或旁观者杀伤活性，同时减少脱靶杀伤。在一些实施例中，与包含替代性抗体、接头和/或药物部分(例如，替代性抗体(例如，参考抗体)和/或替代性剪接调节剂)的ADC相比，本文披露的ADC构建体对不分裂和/或缓慢分裂的细胞表现出改善的细胞毒性和/或细胞生长抑制活性。在一些实施例中，与使用替代性抗体、接头和/或药物部分(例如，替代性抗体(例如，参考抗体)和/或替代性剪接调节剂)的ADC相比，本文披露的ADC构建体表现出对BCMA的更高亲和力和/或优异的稳定性、活性、效力或其他作用(在体内或体外测量的)。在一些实施例中，比较或参考ADC是包含相同接头和/或剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体(例如，AB200或其他示例性抗BCMA抗体)的ADC。
在一些实施例中，与例如包含相同接头和/或剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体(例如，AB200或其他示例性抗BCMA抗体)的ADC相比，本文披露的ADC构建体表现出改进的结合亲和力。在一些实施例中，与包含相同接头和/或剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体的ADC相比，所披露的ADC对BCMA(例如，人BCMA)具有更高的亲和力。在一些实施例中，所披露的ADC包含示例性抗BCMA抗体或抗原结合片段、接头和剪接调节剂有效载荷。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是抗体AB212、AB213、AB214、AB215、AB216、AB217或AB218中的任一种(例如AB212或AB216，例如AB216)。在一些实施例中，参考ADC是与所披露的ADC(例如，ADL1-D2)包含相同的接头和相同的剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体(例如，AB200)的ADC。在一些实施例中，ADC对BCMA(例如，人BCMA)的结合亲和力可以通过例如使用具有高或中等BCMA表达水平的癌细胞的一种或多种结合测定来确定。
在一些实施例中，与例如包含相同接头和/或剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体(例如，AB200或其他示例性抗BCMA抗体)的ADC相比，本文披露的ADC构建体表现出改进的细胞毒性和/或细胞生长抑制活性。在一些实施例中，与包含相同接头和/或剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体的ADC相比，所披露的ADC表现出针对表达BCMA的细胞(例如，NCI-H929和/或OPM2细胞)的增加的效力。在一些实施例中，所披露的ADC的活性不依赖于细胞周期。在一些实施例中，所披露的ADC保留不依赖于细胞增殖状态的细胞毒性和/或细胞生长抑制活性。在一些实施例中，所披露的ADC可以靶向活跃分裂和休眠的细胞两者。在一些实施例中，与替代抗BCMA ADC(例如，包含替代性抗体、接头和/或有效载荷的抗BCMAADC，例如AB200-ADL10-MMAF)相比，所披露的ADC表现出针对休眠细胞(例如，不分裂和/或缓慢分裂的骨髓瘤细胞)的增加的效力。在一些实施例中，所披露的ADC不抑制不表达BCMA的细胞(例如，BCMA阴性细胞，例如Jurkat细胞)的生长和/或不杀死它们。在一些实施例中，所披露的ADC包含示例性抗BCMA抗体或抗原结合片段、接头和剪接调节剂有效载荷。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是抗体AB212、AB213、AB214、AB215、AB216、AB217或AB218中的任一种(例如AB212或AB216，例如AB216)。在一些实施例中，参考ADC是与所披露的ADC包含相同的接头和相同的剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体(例如，AB200)的ADC。在一些实施例中，ADC的细胞毒性和/或细胞生长抑制活性可以通过例如使用具有高或中等BCMA表达水平的癌细胞的体外活性测定来确定。
在一些实施例中，与例如包含相同接头和/或剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体(例如，AB200或其他示例性抗BCMA抗体)的ADC相比，本文披露的ADC构建体表现出改进的体内抗癌活性。在一些实施例中，与包含相同接头和/或剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体的ADC相比，所披露的ADC表现出针对表达BCMA的肿瘤(例如，OPM2和/或MOLP8肿瘤)的增加的肿瘤生长抑制作用。在一些实施例中，所披露的ADC包含示例性抗BCMA抗体或抗原结合片段、接头和剪接调节剂有效载荷。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段是抗体AB212、AB213、AB214、AB215、AB216、AB217或AB218中的任一种(例如AB212或AB216，例如AB216)。在一些实施例中，参考ADC是与所披露的ADC(例如，ADL1-D2)包含相同的接头和相同的剪接调节剂有效载荷但包含替代性抗体(例如，AB200)的ADC。在一些实施例中，ADC的体内抗癌活性可以通过例如在具有高或中等BCMA表达水平的异种移植模型中的活性测定来确定。
在一些实施例中，本文披露的ADC构建体表现出治疗性ADC所需的特性。在一些实施例中，这些特性包括但不限于有效药物负载水平、低聚集水平、稳定性、与未缀合的抗体相当的对表达BCMA的细胞的留存亲和力、对表达BCMA的细胞的强细胞毒性、低水平的脱靶细胞杀伤、和/或有效的体内抗癌活性。在一些实施例中，本文披露的ADC构建体在以单次剂量施用时表现出体内治疗功效。
本披露的ADC可将有效剂量的细胞毒性剂或细胞生长抑制剂选择性递送至癌细胞。在一些实施例中，所披露的ADC对表达靶抗原(例如，BCMA)的细胞具有有效的细胞毒性和/或细胞生长抑制活性。在一些实施例中，ADC的细胞毒性和/或细胞生长抑制活性依赖于细胞中的靶抗原表达。在一些实施例中，与表达低水平的相同抗原的癌细胞相比，所披露的ADC在杀伤表达高水平靶抗原的癌细胞方面特别有效。在一些实施例中，与表达低水平的相同抗原的癌细胞相比，所披露的ADC在杀伤表达中等水平靶抗原的癌细胞方面特别有效。示例性高表达BCMA的癌细胞包括但不限于人骨髓瘤NCI-H929细胞。示例性中等表达BCMA的癌细胞包括但不限于人骨髓瘤OPM2细胞和人骨髓瘤MOLP8细胞。在一些实施例中，所披露的ADC特别有效地杀伤表达靶抗原的癌细胞，同时将脱靶杀伤减至最少。在一些实施例中，所披露的ADC不对不表达靶抗原的癌细胞表现出细胞毒性和/或细胞生长抑制作用。
在一些实施例中，ADC的裂解使剪接调节剂自抗体或抗原结合片段和接头释放。在一些实施例中，接头和/或剪接调节剂被设计成用于促进旁观者杀伤(邻近细胞杀伤)。在一些实施例中，接头和/或剪接调节剂被设计成促进在细胞内化以及接头-剪接调节剂部分和/或单独的剪接调节剂部分扩散至邻近细胞之后经由裂解进行的旁观者杀伤。在一些实施例中，接头促进细胞内化。在一些实施例中，接头被设计成将细胞外环境中的裂解减至最少并由此降低针对脱靶细胞或组织(例如，非癌细胞或组织)的毒性，同时保持ADC结合靶标细胞或组织和/或对癌组织(该癌组织不表达由ADC的抗体或抗原结合片段所靶向的抗原但环绕表达该抗原的靶标癌组织)的旁观者杀伤。在一些实施例中，由ADC裂解产生的药物部分或药物部分的分解代谢物被设计成促进被靶细胞或邻近细胞摄取(即，细胞可渗透的)。此类剪接调节剂部分和分解代谢物可以称为“旁观者活跃的(bystander active)”，而细胞渗透性降低的药物部分或分解代谢物可以称为“旁观者不活跃的(bystander inactive)”。
在一些实施例中，所披露的ADC还表现出旁观者杀伤活性。不受理论束缚，在ADC向实体瘤中的渗透受到限制和/或肿瘤细胞中的靶抗原表达具有异质性时，ADC的旁观者杀伤活性可为特别有益的。在一些实施例中，本文披露的ADC表现出相比于单独药物部分而言经改善的溶解性和靶细胞渗透性。在一些实施例中，本文披露的ADC相比于单独药物部分而言表现出改善的细胞毒性。在一些实施例中，本文披露的ADC使用当作为单独药物评价时表现出较低细胞毒性的药物部分，但其又意外地优于包含当作为单独药物评价时具有较高细胞毒性的其他药物部分的ADC。在一些实施例中，相对于用包含不可裂解接头的ADC进行的可比治疗，剪接调节剂的裂解和释放改善了ADC的细胞毒性。在其他实施例中，剪接调节剂的裂解和释放并不是ADC具有所需生物活性所需的。
本文提供了ADC，其包含能够结合BCMA的抗体或其抗原结合片段(Ab)、剪接调节剂药物部分(D)以及将Ab共价连接至D的接头部分(L)。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段可以按高特异性和高亲和力结合BCMA。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段在结合后内化至靶细胞中，例如内化至该细胞中的降解隔室中。在一些实施例中，可以使用在结合靶细胞时内化、经历降解、并释放剪接调节剂药物部分以杀伤癌细胞的ADC。剪接调节剂药物部分可通过酶促作用、水解、氧化或任何其他机制自ADC中的抗体和/或接头部分释放。
示例性ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中Ab＝抗体或抗原结合片段，L＝接头部分，D＝剪接调节剂药物部分，且p＝剪接调节剂药物部分的数量/抗体或抗原结合片段。
在一些实施例中，用于所述ADC和组合物中的抗体或抗原结合片段(Ab)是本文披露的抗BCMA抗体或抗原结合片段。
接头
在一些实施例中，本文披露的ADC中的接头以足以具有治疗有效性的方式具有细胞外稳定性。在一些实施例中，接头在细胞外部稳定以使得ADC在存在于细胞外条件(例如，在转运或递送至细胞中之前)中时保持完整。在ADC的上下文中使用的术语“完整”意指抗体或抗原结合片段保持连接至药物部分(例如，剪接调节剂)。如本文所使用，在接头或包含接头的ADC的情形下，“稳定”意指当ADC存在于细胞外条件中时，ADC样品中的不超过20％、不超过约15％、不超过约10％、不超过约5％、不超过约3％、或不超过约1％(或其间任何百分比)的接头被裂解(或在总体ADC在其他方面不完整的情况下)。在一些实施例中，与替代性接头、和/或具有替代性接头和/或剪接调节剂有效载荷的ADC相比，本文披露的接头和/或ADC出奇稳定。在一些实施例中，本文披露的ADC可保持完整达超过约48小时、超过60小时、超过约72小时、超过约84小时或超过约96小时。
可例如通过在血浆中包括ADC达预先确定的时间段(例如，2、4、6、8、16、24、48或72小时)且随后定量血浆中存在的游离药物部分的量来确定接头在细胞外是否稳定。稳定性可以让ADC有时间定位至靶标癌细胞并且防止药物部分过早释放，该过早释放可能因无差别地损害正常细胞和癌细胞两者而降低ADC的治疗指数。在一些实施例中，接头在靶细胞外部稳定且一旦处于细胞内部则自ADC释放药物部分，使得药物可结合其靶标(例如，结合至SF3b剪接体复合物)。因此，在一些实施例中，有效接头将：(i)维持抗体或抗原结合片段的特异性结合特性；(ii)允许经由稳定连接至抗体或抗原结合片段而递送(例如，细胞内递送)药物部分；(iii)保持稳定和完整性直至ADC已经转运或递送至靶位点；以及(iv)允许裂解或替代性释放机制之后的药物部分的治疗作用，例如，细胞毒性作用。
接头可能影响ADC的物理-化学特性。由于许多细胞毒性剂本质上具疏水性，故将其连接至具有额外疏水性部分的抗体可能引起聚集。ADC聚集物不可溶且通常限制抗体上可实现的药物负载，这可能不利地影响ADC的效力。通常，生物制品的蛋白质聚集物还与免疫原性增加相关。如下文所示，本文披露的接头使ADC具有低聚集水平以及所需药物负载水平。
国际申请号PCT/US 2019/035015(公开号WO 2019/232449)中所述的接头可与本文披露的ADC起使用。针对所有示例性接头和接头与抗体的连接点，将国际申请号PCT/US2019/035015(公开号WO 2019/232449)通过引用并入本文。
接头可为“可裂解的”或“不可裂解的”(Ducry和Stump(2010)Bioconjugate Chem.[生物缀合化学]21:5-13)。可裂解接头被设计成当经受某些环境因素(例如当内化至靶细胞中)时释放出药物部分(例如剪接调节剂)，而不可裂解接头通常依赖于抗体或抗原结合片段本身的降解。
在一些实施例中，接头为不可裂解接头。在一些实施例中，ADC的剪接调节剂药物部分通过抗体或抗原结合片段的降解而释放。在经靶细胞内化且在靶细胞内降解时，不可裂解接头倾向于保持与抗体的至少一个氨基酸和药物共价缔合。本文描述了多种示例性不可裂解接头，且其他不可裂解接头为本领域中已知的。示例性不可裂解接头可包含硫醚、环己基、N-琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1甲酸酯(SMCC)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分(例如，1、2、3、4、5或6个PEG部分)或一个或多个烷基部分(例如，1、2、3、4、5或6个烷基部分)。
在一些其他实施例中，接头为可裂解接头。可裂解接头是指包含可裂解部分的任何接头。如本文所使用，术语“可裂解部分”是指可被裂解的任何化学键。合适的可裂解化学键在本领域中众所周知且包括但不限于酸不稳定性键、蛋白酶/肽酶不稳定性键、光不稳定性键、二硫键和酯酶不稳定性键。包含可裂解部分的接头可经由在该接头中的特定位点处裂解而允许剪接调节剂药物部分自ADC释放。
在一些实施例中，接头可在细胞内条件下裂解，接头的裂解使剪接调节剂药物部分在胞内环境中充分地从抗体或抗原结合片段释放，以激活药物和/或使药物在治疗上有效。在一些实施例中，直至ADC进入表达对ADC中的抗体或抗原结合片段具有特异性的抗原的细胞，剪接调节剂药物部分才从抗体或抗原结合片段裂解，且在进入细胞后，该剪接调节剂药物部分从该抗体或抗原结合片段裂解。在一些实施例中，该接头包含可裂解部分，该可裂解部分被固定放置使得接头的任何部分或抗体或抗原结合片段在裂解后都不会与剪接调节剂药物部分保持结合。示例性可裂解接头包括酸不稳定性接头、蛋白酶/肽酶敏感性接头、光不稳定性接头、含二甲基接头、含二硫化物接头或含磺酰胺接头。
在一些实施例中，接头为pH敏感性接头，且在某些pH值下对水解敏感。通常，pH敏感性接头可在酸性条件下水解。该裂解策略一般在胞内体胞内区室(pH约5-6)和溶酶体胞内区室(pH约4.8)中利用相较于细胞溶质(pH约7.4)较低的pH，以触发诸如腙等接头中的酸不稳定性基团的水解(Jain等人(2015)Pharm Res[药学研究]32:3526-40)。在一些实施例中，接头为酸不稳定性接头和/或可水解接头。例如，可使用可在溶酶体中水解且含有酸不稳定性基团的酸不稳定性接头(例如，腙、半卡巴腙、硫半卡巴腙、顺式乌头酸酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮或其类似物)。参见，例如，美国专利号5,122,368；5,824,805；5,622,929；Dubowchik和Walker(1999)Pharm Therapeutics[药理学和治疗学]83:67-123；Neville等人(1989)Biol Chem.[生物化学]264:14653-61。这类接头在中性pH条件(如血液中的pH条件)下相对稳定，但在低于pH 5.5或5.0(溶酶体的近似pH)下不稳定。在一些实施例中，可水解接头为硫醚接头(例如，经由酰腙键连接至治疗剂的硫醚)(参见，例如，美国专利号5,622,929)。
在一些实施例中，接头可在还原条件下裂解。在一些实施例中，接头可在诸如谷胱甘肽或二硫苏糖醇等还原剂存在下裂解。在一些实施例中，接头为可裂解二硫化物接头或可裂解磺酰胺接头。
在一些实施例中，接头为可裂解二硫化物接头。各种二硫化物接头为本领域中已知的，包括例如可使用SATA(N-琥珀酰亚胺基-5-乙酰基硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT形成的二硫化物接头。参见，例如，Thorpe等人(1987)Cancer Res.[癌症研究]47:5924-31；Wawrzynczak等人,在Immunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery andTherapy of Cancer[免疫缀合物：放射成像和癌症治疗中的抗体缀合物](C.W.Vogel编辑,Oxford U.Press[牛津大学出版社],1987)。还参见美国专利号4,880,935。通常使用二硫化物接头来开发胞内硫醇的丰度，这可促进其二硫键的裂解。最大丰度胞内硫醇、减少的谷胱甘肽的细胞内浓度通常在1-10nM范围内，比血液中最丰富的低分子硫醇(即，半胱氨酸)的细胞内浓度约5μM高约1,000倍(Goldmacher等人,在Cancer Drug Discovery andDevelopment:Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins[癌症药物的发现和开发：抗体-药物缀合物和免疫毒素](G.L.Phillips编辑,Springer,2013))。蛋白质二硫化物异构酶家族的胞内酶还可促进二硫化物接头的胞内裂解。如本文所使用，可裂解二硫化物接头是指包含可裂解二硫化物部分的任何接头。术语“可裂解二硫化物部分”是指可例如被硫醇或酶裂解和/或还原的二硫键。
在一些实施例中，接头为可裂解磺酰胺接头。如本文所使用，可裂解磺酰胺接头是指包含可裂解磺酰胺部分的任何接头。术语“可裂解磺酰胺部分”是指磺酰胺基团，即连接至胺基的磺酰基，其中硫-氮键可经裂解。
在一些实施例中，接头可为用于经由分支的多官能接头部分将超过一个药物部分共价连接至抗体或抗原结合片段的树突型接头。参见，例如，Sun等人(2002)Bioorg MedChem Lett.[生物有机化学与药物化学快报]12:2213-5；Sun等人(2003)Bioorg Med Chem.[生物有机化学与药物化学]11:1761-8。树突状接头可增加药物与抗体的摩尔比，即药物负载量，其与ADC的效力有关。因此，在抗体或抗原结合片段只具有一个反应性半胱氨酸硫醇基团的情况下，例如多个剪接调节剂药物部分可经由树突状接头连接。在一些实施例中，接头部分或接头-药物部分可经由经还原的二硫桥连化学物质或限制性赖氨酸利用技术连接至抗体或抗原结合片段。参见，例如，国际公开号WO 2013/173391和WO 2013/173393。
在一些实施例中，接头可被胞内环境中(例如，溶酶体或胞内体或小凹内)存在的裂解剂(例如，酶)裂解。接头可为例如被胞内肽酶或蛋白酶(包括但不限于溶酶体或胞内体蛋白酶)裂解的肽接头。在一些实施例中，接头包含可裂解肽部分。在一些实施例中，接头包含可裂解葡糖苷酸部分。
在一些实施例中，接头为可裂解肽接头。如本文所使用，可裂解肽接头是指包含可裂解肽部分的任何接头。术语“可裂解肽部分”是指可被胞内环境中存在的药剂裂解的任何化学键连接的氨基酸(天然或合成氨基酸衍生物)。在一些实施例中，可裂解肽部分可被酶裂解。例如，接头可以包含缬氨酸-丙氨酸(Val-Ala)序列、或缬氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)序列，这些序列可被肽酶(如组织蛋白酶，例如组织蛋白酶B)裂解。在一些实施例中，接头可以包含丙氨酸-丙氨酸-天冬氨酸(Ala-Ala-Asp)序列。在一些实施例中，接头可以包含谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(Glu-Val-Cit)序列。在一些实施例中，接头为酶可裂解接头且接头中的可裂解肽部分可被酶裂解。在一些实施例中，可裂解肽部分可被溶酶体酶(例如，组织蛋白酶)裂解。在一些实施例中，接头为组织蛋白酶可裂解接头。在一些实施例中，接头中的可裂解肽部分可被溶酶体半胱氨酸组织蛋白酶(如组织蛋白酶B、C、F、H、K、L、O、S、V、X或W)裂解。在一些实施例中，可裂解肽部分可被组织蛋白酶B裂解。可被组织蛋白酶B裂解的示例性二肽为缬氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)(Dubowchik等人(2002)Bioconjugate Chem.[生物缀合化学]13:855-69)。
在一些实施例中，接头或接头中的可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，该氨基酸单元使接头可被蛋白酶裂解，由此在暴露于一种或多种细胞内蛋白酶(如一种或多种溶酶体酶)时，促进剪接调节剂药物部分从该ADC释放(Doronina等人(2003)NatBiotechnol.[自然生物技术]21:778-84；Dubowchik和Walker(1999)Pharm Therapeutics[药理学和治疗学]83:67-123)。示例性氨基酸单元包括但不限于二肽、三肽、四肽和五肽。示例性二肽包括但不限于缬氨酸-丙氨酸(Val-Ala)、缬氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)、丙氨酸-天冬酰胺(Ala-Asn)、丙氨酸-苯丙氨酸(Ala-Phe)、苯丙氨酸-赖氨酸(Phe-Lys)、丙氨酸-赖氨酸(Ala-Lys)、丙氨酸-缬氨酸(Ala-Val)、缬氨酸-赖氨酸(Val-Lys)、赖氨酸-赖氨酸(Lys-Lys)、苯丙氨酸-瓜氨酸(Phe-Cit)、亮氨酸-瓜氨酸(Leu-Cit)、异亮氨酸-瓜氨酸(Ile-Cit)、色氨酸-瓜氨酸(Trp-Cit)和苯丙氨酸-丙氨酸(Phe-Ala)。示例性三肽包括但不限于丙氨酸-丙氨酸-天冬酰胺(Ala-Ala-Asn)、甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(Gly-Val-Cit)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(Gly-Gly-Gly)、苯丙氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸(Phe-Phe-Lys)、丙氨酸-丙氨酸-天冬氨酸(Ala-Ala-Asp)、谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(Glu-Val-Cit)(参见Anami等人(2018)Nat Comm.[自然通讯]9:2512)和甘氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸(Gly-Phe-Lys)。其他示例性氨基酸单元包括但不限于如例如美国专利号6,214,345中所述的Gly-Phe-Gly-Gly(SEQ ID NO:125)、Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO:126)、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:127)、Phe-N9-甲苯磺酰基-Arg和Phe-N9-硝基-Arg。在一些实施例中，接头中的氨基酸单元包含Val-Ala。在一些实施例中，接头中的氨基酸单元包含Val-Cit。在一些实施例中，接头中的氨基酸单元包含Ala-Ala-Asp。在一些实施例中，接头中的氨基酸单元包含Glu-Val-Cit。氨基酸单元可包含天然存在的氨基酸残基和/或次级氨基酸和/或非天然存在的氨基酸类似物(如瓜氨酸)。氨基酸单元可针对特定酶(例如，肿瘤相关蛋白酶、溶酶体蛋白酶(如组织蛋白酶B、C、D或S)或纤溶酶蛋白酶)。
在一些实施例中，接头为可裂解葡糖苷酸接头。如本文所使用，可裂解葡糖苷酸接头是指包含可裂解葡糖苷酸部分的任何接头。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分可被酶裂解。示例性可裂解葡糖苷酸接头包含以下结构：
Figure BDA0003978353560001181
术语“可裂解葡糖苷酸部分”是指可被具有葡糖苷酸酶活性的药剂裂解的糖苷键。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分可被葡糖苷酸酶裂解。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分可被β-葡糖苷酸酶裂解。在一些实施例中，可裂解的葡糖苷酸部分或接头包含β-葡糖苷酸，即，可以被β-葡糖苷酸酶裂解的糖苷键。β-葡糖苷酸酶为催化具有β-构型的葡糖苷酸的糖苷键的水解的UDP-葡糖醛酸基转移酶。
在一些实施例中，本文披露的ADC包含可被酶裂解的接头中的可裂解β-葡糖苷酸部分。在一些实施例中，接头中的可裂解β-葡糖苷酸部分可被溶酶体酶(例如，β-葡糖苷酸酶)裂解。在一些实施例中，接头为β-葡糖苷酸酶可裂解接头。在一些实施例中，接头中的可裂解β-葡糖苷酸部分允许在ADC内化之后由β-葡糖苷酸酶裂解接头，由此促进细胞环境中药物部分自ADC的释放。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的接头包含马来酰亚胺部分。如本文所使用，术语“Mal”或“马来酰亚胺部分”意指含有马来酰亚胺基团且可与硫氢基(例如抗体或抗原结合片段上的半胱氨酸残基的硫氢基)反应的化合物。可与硫氢基(硫醇)反应的其他官能基包括但不限于碘乙酰胺、溴乙酰胺、乙烯基吡啶、二硫化物、吡啶基二硫化物、异氰酸酯和异硫氰酸酯。在一些实施例中，马来酰亚胺部分包含马来酰亚胺基己酰基(MC)。在一些实施例中，马来酰亚胺部分与抗体或抗原结合片段上的半胱氨酸残基反应。在一些实施例中，马来酰亚胺部分经由抗体或抗原结合片段上的半胱氨酸残基连接至该抗体或抗原结合片段。
在一些实施例中，接头包含马来酰亚胺部分和可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Ala。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Ala-Ala-Asp。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含马来酰亚胺部分和可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的接头可以包含至少一个间隔子单元，该间隔子单元将抗体或抗原结合片段接合至药物部分(例如，剪接调节剂药物部分)。在一些实施例中，位于抗体或抗原结合片段与可裂解部分之间的间隔子单元当存在时将接头中的裂解位点(例如，可裂解肽部分)接合至抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，位于药物部分与可裂解部分之间的间隔子单元当存在时将接头中的裂解位点(例如，可裂解肽部分或可裂解葡糖苷酸)接合至药物部分。在一些实施例中，不存在裂解位点，且使用间隔子单元来将抗体或抗原结合片段连接至药物部分。
在一些实施例中，接头和/或接头中的间隔子单元实质上具有亲水性。亲水性接头可用于降低可经由多重抗药性(MDR)转运子或功能上类似的转运子自抗药性癌细胞中泵送出药物的程度。在一些实施例中，亲水性接头可包括一个或多个聚乙二醇(PEG)部分，例如1、2、3、4、5或6个PEG部分。
在一些实施例中，接头中的间隔子单元包含至少一个PEG部分。在一些实施例中，PEG部分或间隔子单元包含一个或多个-(PEG)m-，且m为1至10的整数(即，m可为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在一些实施例中，m在1至10范围内；在2至8范围内；在2至6范围内；在2至5范围内；在2至4范围内；或在2至3范围内。在一些实施例中，m为2。在一些实施例中，PEG部分或间隔子单元包含(PEG)2、(PEG)3、(PEG)4、(PEG)5、(PEG)6、(PEG)7、(PEG)8、(PEG)9或(PEG)10。在一些实施例中，PEG部分或间隔子单元包含(PEG)2。
在一些实施例中，接头中的间隔子单元包含烷基部分。在一些实施例中，烷基部分或间隔子单元包含一个或多个-(CH2)n-，且n为1至10的整数(即，n可为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在一些实施例中，n在1至10范围内；在2至8范围内；在2至6范围内；在2至5范围内；在2至4范围内；或在2至3范围内。在一些实施例中，n为2。在一些实施例中，n为5。在一些实施例中，n为6。在一些实施例中，间隔子单元包含(CH2)2、(CH2)3、(CH2)4、(CH2)5、(CH2)6、(CH2)7、(CH2)8、(CH2)9或(CH2)10。在一些实施例中，烷基部分或间隔子单元包含(CH2)2(“Et”)。在一些实施例中，烷基部分或间隔子单元包含(CH2)6(“Hex”)。在一些实施例中，烷基部分或间隔子单元包含(CH2)2-O-(CH2)2(“Et-O-Et”)。
可使用间隔子单元例如以将抗体或抗原结合片段直接地或间接地连接至药物部分。在一些实施例中，间隔子单元将抗体或抗原结合片段直接地连接至剪接调节剂药物部分。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段和剪接调节剂药物部分经由包含一个或多个PEG部分(例如(PEG)2)或一个或多个烷基部分(例如(CH2)2、(CH2)6或(CH2)2-O-(CH2)2)的间隔子单元连接。在一些实施例中，间隔子单元将抗体或抗原结合片段间接地连接至剪接调节剂药物部分。在一些实施例中，间隔子单元经由可裂解部分(例如可裂解肽或可裂解β-葡糖苷酸)和/或用于将间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段的连接部分(例如马来酰亚胺部分)将抗体或抗原结合片段间接地连接至剪接调节剂药物部分。
在各种实施例中，间隔子单元经由马来酰亚胺部分连接至抗体或抗原结合片段(即，抗体或抗原结合片段)。经由马来酰亚胺部分连接至抗体或抗原结合片段的间隔子单元在本文中称为“Mal-间隔子单元”。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含烷基部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含马来酰亚胺基己酰基(MC)。
在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-间隔子单元。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含MC。在一些实施例中，接头包含以下结构：MC。在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-(CH2)2(“Mal-Et”)。在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-(CH2)6(“Mal-Hex”)。在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-(CH2)2-O-(CH2)2(“Mal-Et-O-Et”)。在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-(PEG)2。在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-(PEG)2-CO。
在一些实施例中，接头包含Mal-间隔子单元和可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Ala。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Ala-Ala-Asp。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含Mal-间隔子单元和可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，马来酰亚胺部分或Mal-间隔子单元将抗体或抗原结合片段连接至接头中的可裂解部分。在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，Mal-间隔子单元将抗体或抗原结合片段连接至可裂解肽部分。在一些实施例中，接头包含Mal-间隔子单元-肽。
在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-间隔子单元-Val-Cit。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit。
在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-间隔子单元-Val-Ala。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Ala。
在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-间隔子单元-Ala-Ala-Asp。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，接头包含MC-Ala-Ala-Asp。
在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-间隔子单元-Glu-Val-Cit。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，接头包含MC-Glu-Val-Cit。
在一些实施例中，Mal-间隔子单元将抗体或抗原结合片段连接至可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，接头包含以下结构：Mal-间隔子单元-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，接头包含MC-β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，接头中的可裂解部分直接连接至剪接调节剂药物部分。在其他实施例中，间隔子单元将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂药物部分。在一些实施例中，剪接调节剂通过间隔子单元连接至接头中的可裂解部分。
间隔子单元可为“自消融型”或“非自消融型”间隔子单元。“非自消融型”间隔子单元是在接头裂解时间隔子单元的一部分或全部仍结合剪接调节剂药物部分的间隔子单元。非自消融型间隔子单元的实例包括但不限于甘氨酸间隔子单元和甘氨酸-甘氨酸间隔子单元。非自消融型间隔子单元最终可随时间推移而降解，但在细胞条件下不会容易地完全释放所连接的天然药物部分。“自消融型”间隔子单元允许在胞内条件下释放天然药物部分。“天然药物”或“天然药物部分”为在间隔子单元裂解/降解之后不保留间隔子单元的部分或其他化学修饰的天然药物或天然药物部分。
自消融型化学物质为本领域中已知的且可针对所披露的ADC容易地选择。在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂药物部分的间隔子单元是自消融型的，且在细胞内条件下裂解可裂解部分的同时或之前/之后不久经历自消融。在一些实施例中，缀合物的裂解使剪接调节剂自抗体或抗原结合片段和接头释放。
在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元是自消融型的。在某些实施例中，剪接调节剂通过自消融型间隔子单元连接至接头中的可裂解部分，该可裂解部分包含Val-Cit，且MC将该可裂解部分接合至抗体或抗原结合片段。在某些实施例中，剪接调节剂通过自消融型间隔子单元连接至接头中的可裂解部分，该可裂解部分包含Val-Cit，且MC-(PEG)2将该可裂解部分接合至抗体或抗原结合片段。在某些实施例中，剪接调节剂通过自消融型间隔子单元连接至接头中的可裂解部分，该可裂解部分包含Val-Ala，且MC将该可裂解部分接合至抗体或抗原结合片段。在某些实施例中，剪接调节剂通过自消融型间隔子单元连接至接头中的可裂解部分，该可裂解部分包含Ala-Ala-Asp，且MC将该可裂解部分接合至抗体或抗原结合片段。在某些实施例中，剪接调节剂通过自消融型间隔子单元连接至接头中的可裂解部分，该可裂解部分包含Glu-Val-Cit，且MC将该可裂解部分接合至抗体或抗原结合片段。在某些实施例中，剪接调节剂通过自消融型间隔子单元连接至接头中的可裂解部分，该可裂解部分包含β-葡糖苷酸，且MC将该可裂解部分接合至抗体或抗原结合片段。
在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元(例如，自消融型间隔子单元)包含对氨基苄基单元。在一些实施例中，对氨基苯甲醇(pABOH)经由酰胺键连接至接头中的氨基酸单元或其他可裂解部分，且在pABOH与药物部分之间形成氨基甲酸酯、氨基甲酸甲酯或碳酸酯(Hamann等人(2005)Expert Opin Ther Patents.[治疗剂专利专家评论]15:1087-103)。
在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元(例如，自消融型间隔子单元)是或包含对氨基苄氧基羰基(pABC)。不受理论束缚，认为pABC的自消融涉及自发的1,6-消除反应(Jain等人(2015)Pharm Res.[药物研究]32:3526-40)。在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元(例如，自消融型间隔子单元)是或包含对氨基苄基(pAB)。在一些实施例中，pAB的自消融涉及自发的1,6-消除反应。
在各种实施例中，自消融型间隔子单元将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂。在一些实施例中，接头中的自消融型间隔子单元包含对氨基苄基单元。
在一些实施例中，接头中的自消融型间隔子单元包含pABC或由其组成。在一些实施例中，pABC将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂。在一些实施例中，pABC在可裂解部分裂解后经历自消融，且剪接调节剂以其天然、活性形式从ADC释放。
在一些实施例中，所披露的ADC中使用的pABC的结构显示于下：
Figure BDA0003978353560001251
在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，接头包含氨基酸单元-pABC。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含Val-Ala-pABC。在一些实施例中，接头包含Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，接头包含Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。在一些实施例中，接头包含β-葡糖苷酸-pABC。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段经由接头缀合至剪接调节剂药物部分，其中该接头包含Mal-间隔子单元(例如，MC、MC-(PEG)2)、可裂解氨基酸单元和pABC。在一些实施例中，间隔子单元包含PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，可裂解接头包含Mal-间隔子单元-氨基酸单元-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-氨基酸单元-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC或MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Ala-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段经由接头缀合至剪接调节剂药物部分，其中该接头包含Mal-间隔子单元(例如MC)、可裂解β-葡糖苷酸和pABC。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，可裂解接头包含Mal-间隔子单元-β-葡糖苷酸-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸-pABC。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-Val-Cit-pABC的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-Val-Ala-pABC的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-Glu-Val-Cit-pABC的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-β-葡糖苷酸-pABC的接头接合至剪接调节剂。
在一些实施例中，接头中的自消融型间隔子单元包含对氨基苄基(pAB)或由其组成。在一些实施例中，pAB将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂。在一些实施例中，pAB在可裂解部分裂解后经历自消融，且剪接调节剂以其天然、活性形式从ADC释放。
在一些实施例中，所披露的ADC中使用的pAB的结构显示于下：
Figure BDA0003978353560001261
在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解肽部分。在一些实施例中，可裂解肽部分包含氨基酸单元。在一些实施例中，接头包含氨基酸单元-pAB。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含Val-Cit-pAB。在一些实施例中，接头包含Val-Ala-pAB。在一些实施例中，接头包含Ala-Ala-Asp-pAB。在一些实施例中，接头包含Glu-Val-Cit-pAB。在一些实施例中，接头中的可裂解部分包含可裂解葡糖苷酸部分。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。在一些实施例中，接头包含β-葡糖苷酸-pAB。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段经由接头缀合至剪接调节剂药物部分，其中该接头包含Mal-间隔子单元(例如，MC、MC-(PEG)2)、可裂解氨基酸单元和pAB。在一些实施例中，间隔子单元包含PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，可裂解接头包含Mal-间隔子单元-氨基酸单元-pAB。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pAB、MC-Val-Ala-pAB、MC-Ala-Ala-Asp-pAB、MC-Glu-Val-Cit-pAB或MC-(PEG)2-Val-Cit-pAB。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pAB。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Ala-pAB。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pAB。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pAB。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pAB。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段经由接头缀合至剪接调节剂药物部分，其中该接头包含Mal-间隔子单元(例如MC)、可裂解β-葡糖苷酸和pAB。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，可裂解接头包含Mal-间隔子单元-β-葡糖苷酸-pAB。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸-pAB。
在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-Val-Cit-pAB的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-Val-Ala-pAB的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-Ala-Ala-Asp-pAB的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-Glu-Val-Cit-pAB的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pAB的接头接合至剪接调节剂。在一些实施例中，抗BCMA抗体或抗原结合片段通过包含MC-β-葡糖苷酸-pAB的接头接合至剪接调节剂。
在一些实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至Val-Cit可裂解部分和pABC或pAB自消融型间隔子单元。在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至Val-Ala可裂解部分和pABC或pAB自消融型间隔子单元。在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至Ala-Ala-Asp可裂解部分和pABC或pAB自消融型间隔子单元。在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至Glu-Val-Cit可裂解部分和pABC或pAB自消融型间隔子单元。在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至β-葡糖苷酸可裂解部分和pABC或pAB自消融型间隔子单元。在一些实施例中，间隔子单元包含PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC和PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC-(PEG)m-，且m为1至10的整数(即，m可为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC-(PEG)2。
在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至Val-Cit可裂解部分和非自消融型间隔子单元。在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至Val-Ala可裂解部分和非自消融型间隔子单元。在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至Ala-Ala-Asp可裂解部分和非自消融型间隔子单元。在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至Glu-Val-Cit可裂解部分和非自消融型间隔子单元。在一些其他实施例中，剪接调节剂经由接头中的Mal-间隔子单元接合至抗体或抗原结合片段，该接头接合至β-葡糖苷酸可裂解部分和非自消融型间隔子单元。在一些实施例中，间隔子单元包含PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC和PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC-(PEG)m-，且m为1至10的整数(即，m可为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC-(PEG)2。
在一些实施例中，本披露的ADC包含式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段；
D是剪接调节剂；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段(Ab)经由接头缀合至剪接调节剂药物部分，其中该接头是所披露或通过引用并入本文的接头中的任一种、或包含所披露或通过引用并入本文的接头中的任一种的一种或多种组分。
在一些实施例中，接头为不可裂解接头。在一些实施例中，接头包含将抗体或抗原结合片段接合至药物部分的至少一个间隔子单元。在一些实施例中，间隔子单元包含至少一个烷基部分。在一些实施例中，间隔子单元包含至少一个PEG部分。
在一些实施例中，接头中的间隔子单元经由马来酰亚胺部分(“Mal-间隔子单元”)连接至抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含至少一个烷基部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含至少一个PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，Mal-间隔子单元将抗体或抗原结合片段连接至药物部分。
在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(PEG)2、Mal-(PEG)3、Mal-(PEG)4、Mal-(PEG)5、Mal-(PEG)6、Mal-(PEG)7或Mal-(PEG)8。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(PEG)2。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(PEG)2-CO、Mal-(PEG)3-CO、Mal-(PEG)4-CO、Mal-(PEG)5-CO、Mal-(PEG)6-CO、Mal-(PEG)7-CO或Mal-(PEG)8-CO。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(PEG)2-CO。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含MC。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(CH2)6(“Mal-Hex”)。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(CH2)2(“Mal-Et”)。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(CH2)2-O-(CH2)2(“Mal-Et-O-Et”)。
在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(PEG)2-CO。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(PEG)2-CO和至少一个额外间隔子单元。在一些实施例中，Mal-(PEG)2-CO将抗体或抗原结合片段连接至药物部分。在一些实施例中，接头包含Mal-(PEG)2-CO或由其组成。“Mal-(PEG)2-CO”接头的实例在本文中还称为“ADL2”或“ADL2”接头。
在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含MC。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含MC和至少一个额外间隔子单元。在一些实施例中，MC将抗体或抗原结合片段连接至药物部分。在一些实施例中，接头包含MC或由其组成。“MC”接头的实例在本文中还称为“ADL10”或“ADL10”接头。
在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(CH2)6(“Mal-Hex”)。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-Hex和至少一个额外间隔子单元。在一些实施例中，Mal-Hex将抗体或抗原结合片段连接至药物部分。在一些实施例中，接头包含Mal-Hex。“Mal-Hex”接头的实例在本文中还称为“ADL12”或“ADL12”接头。
在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(CH2)2(“Mal-Et”)。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-Et和至少一个额外间隔子单元。在一些实施例中，Mal-Et将抗体或抗原结合片段连接至药物部分。在一些实施例中，接头包含Mal-Et。“Mal-Et”接头的实例在本文中还称为“ADL14”或“ADL14”接头。
在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-(CH2)2-O-(CH2)2(“Mal-Et-O-Et”)。在一些实施例中，Mal-间隔子单元或接头包含Mal-Et-O-Et和至少一个额外间隔子单元。在一些实施例中，Mal-Et-O-Et将抗体或抗原结合片段连接至药物部分。在一些实施例中，接头包含Mal-Et-O-Et。“Mal-Et-O-Et”接头的实例在本文中还称为“ADL15”或“ADL15”接头。
在一些其他实施例中，Mal-间隔子单元将抗体或抗原结合片段连接至接头中的可裂解部分。在一些实施例中，接头中的可裂解部分为可裂解肽部分，例如氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分是氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分或氨基酸单元是Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头中的可裂解部分为可裂解葡糖苷酸部分，例如β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分是β-葡糖苷酸。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC和PEG部分。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC-(PEG)m-，且m为1至10的整数(即，m可为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在一些实施例中，Mal-间隔子单元包含MC-(PEG)2。
在一些实施例中，接头包含MC-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Ala。在一些实施例中，接头包含MC-Ala-Ala-Asp。在一些实施例中，接头包含MC-Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含MC-β-葡糖苷酸。
在一些实施例中，该间隔子单元将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂。在一些实施例中，将可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元是自消融型的。
在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元包含pABC。在一些实施例中，pABC将可裂解部分连接至剪接调节剂。在一些实施例中，可裂解部分为可裂解肽部分，例如氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分是氨基酸单元。在一些实施例中，接头包含氨基酸单元-pABC。在一些实施例中，氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含Val-Ala-pABC。在一些实施例中，接头包含Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，接头包含Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解部分为可裂解葡糖苷酸部分，例如β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分是β-葡糖苷酸。在一些实施例中，接头包含β-葡糖苷酸-pABC。
在一些实施例中，接头包含Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含将接头接合至抗体或抗原结合片段的Val-Cit-pABC和MC Mal-间隔子单元。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Cit-pABC和至少一个额外间隔子单元。MC-Val-Cit-pABC接头的实例在本文中还称为“ADL1”或“ADL1”接头。ADL1和其他示例性接头的结构示于表13中。
在一些实施例中，接头包含Val-Ala-pABC。在一些实施例中，接头包含将接头接合至抗体或抗原结合片段的Val-Ala-pABC和MC Mal-间隔子单元。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Ala-pABC。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Ala-pABC和至少一个额外间隔子单元。MC-Val-Ala-pABC接头的实例在本文中还称为“ADL6”或“ADL6”接头。ADL6和其他示例性接头的结构示于表13中。
在一些实施例中，接头包含β-葡糖苷酸-pABC。在一些实施例中，接头包含将接头接合至抗体或抗原结合片段的β-葡糖苷酸-pABC和MC Mal-间隔子单元。在一些实施例中，接头包含MC-β-葡糖苷酸-pABC。在一些实施例中，接头包含MC-β-葡糖苷酸-pABC和至少一个额外间隔子单元。MC-β-葡糖苷酸-pABC的实例在本文中还称为“ADL13”或“ADL13”接头。ADL13和其他示例性接头的结构示于表13中。
在一些实施例中，接头包含Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，接头包含将接头接合至抗体或抗原结合片段的Ala-Ala-Asp-pABC和MC Mal-间隔子单元。在一些实施例中，接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC和至少一个额外间隔子单元。MC-Ala-Ala-Asp-pABC接头的实例在本文中还称为“ADL21”或“ADL21”接头。ADL21和其他示例性接头的结构示于表13中。
在一些实施例中，接头包含Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含将接头接合至抗体或抗原结合片段的Val-Cit-pABC和MC-(PEG)2Mal-间隔子单元。在一些实施例中，接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC和至少一个额外间隔子单元。MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC接头的实例在本文中还称为“ADL22”或“ADL22”接头。ADL22和其他示例性接头的结构示于表13中。
在一些实施例中，接头包含Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含将接头接合至抗体或抗原结合片段的Glu-Val-Cit-pABC和MC Mal-间隔子单元。在一些实施例中，接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC和至少一个额外间隔子单元。MC-Glu-Val-Cit-pABC接头的实例在本文中还称为“ADL23”或“ADL23”接头。ADL23和其他示例性接头的结构示于表13中。
在一些实施例中，将接头中的可裂解部分连接至剪接调节剂的间隔子单元包含pAB。在一些实施例中，pAB将可裂解部分连接至剪接调节剂。在一些实施例中，可裂解部分为可裂解肽部分，例如氨基酸单元。在一些实施例中，可裂解肽部分是氨基酸单元。在一些实施例中，接头包含氨基酸单元-pAB。在一些实施例中，氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。在一些实施例中，接头包含Val-Cit-pAB。在一些实施例中，接头包含Val-Ala-pAB。在一些实施例中，接头包含Ala-Ala-Asp-pAB。在一些实施例中，接头包含Glu-Val-Cit-pAB。在一些实施例中，可裂解部分为可裂解葡糖苷酸部分，例如β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解葡糖苷酸部分是β-葡糖苷酸。在一些实施例中，接头包含β-葡糖苷酸-pAB。
在一些实施例中，接头包含Val-Ala-pAB。在一些实施例中，接头包含将接头接合至抗体或抗原结合片段的Val-Ala-pAB和MC Mal-间隔子单元。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Ala-pAB。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Ala-pAB和至少一个额外间隔子单元。MC-Val-Ala-pAB接头的实例在本文中还称为“ADL5”或“ADL5”接头。
在一些实施例中，接头包含Val-Cit-pAB。在一些实施例中，接头包含将接头接合至抗体或抗原结合片段的Val-Cit-pAB和MC Mal-间隔子单元。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Cit-pAB。在一些实施例中，接头包含MC-Val-Cit-pAB和至少一个额外间隔子单元。MC-Val-Cit-pAB接头的实例在本文中还称为“ADL7”或“ADL7”接头。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段经由ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头缀合至剪接调节剂药物部分。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段经由ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头缀合至剪接调节剂药物部分。已发现，在各种实施例中，包含ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头(例如，ADL1接头)和本文披露的剪接调节剂药物部分的ADC表现出治疗性ADC所需的特性。在一些实施例中，这些特性包括但不限于有效药物负载水平、低聚集水平、在储存条件下或当在体内循环时的稳定性(例如，血清稳定性)、与未缀合的抗体相当的对表达靶抗原的细胞的留存亲和力、对表达靶抗原的细胞的强细胞毒性、低水平的脱靶细胞杀伤、和/或有效的体内抗癌活性，全部特性均与使用其他接头-有效载荷的ADC相比较而言。
在一些实施例中，ADC包含ADL1-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL2-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL5-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL6-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL7-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL10-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL12-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL13-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL14-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL15-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL21-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL22-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC包含ADL23-剪接调节剂和能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，ADC保留靶向表达BCMA的癌细胞并在该癌细胞中内化的能力。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ ID NO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ IDNO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ IDNO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ ID NO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ IDNO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是剪接调节剂；
L是包含ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB212。在一些实施例中，p为1至12、1至10、2至8、或4至8的整数。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ ID NO:8(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:9(LCDR1)、SEQ ID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:43(HCDR1)、SEQ ID NO:44(HCDR2)和SEQ ID NO:45(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:46(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ IDNO:8(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:9(LCDR1)、SEQ ID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:43(HCDR1)、SEQ ID NO:44(HCDR2)和SEQ ID NO:45(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:46(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是剪接调节剂；
L是包含ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB213。在一些实施例中，p为1至12、1至10、2至8、或4至8的整数。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:12(HCDR2)和SEQ ID NO:13(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:14(LCDR1)、SEQ ID NO:15(LCDR2)和SEQ ID NO:16(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:47(HCDR1)、SEQ ID NO:48(HCDR2)和SEQ ID NO:49(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:50(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:12(HCDR2)和SEQ IDNO:13(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:14(LCDR1)、SEQ ID NO:15(LCDR2)和SEQ ID NO:16(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:47(HCDR1)、SEQ ID NO:48(HCDR2)和SEQ ID NO:49(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:50(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是剪接调节剂；
L是包含ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB214。在一些实施例中，p为1至12、1至10、2至8、或4至8的整数。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:17(HCDR2)和SEQ ID NO:18(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:19(LCDR1)、SEQ ID NO:20(LCDR2)和SEQ ID NO:21(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:51(HCDR1)、SEQ ID NO:52(HCDR2)和SEQ ID NO:53(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:54(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:17(HCDR2)和SEQ IDNO:18(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:19(LCDR1)、SEQ ID NO:20(LCDR2)和SEQ ID NO:21(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:51(HCDR1)、SEQ ID NO:52(HCDR2)和SEQ ID NO:53(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:54(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是剪接调节剂；
L是包含ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB215。在一些实施例中，p为1至12、1至10、2至8、或4至8的整数。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ IDNO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是剪接调节剂；
L是包含ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB216。在一些实施例中，p为1至12、1至10、2至8、或4至8的整数。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:27(HCDR2)和SEQ ID NO:28(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:29(LCDR1)、SEQ ID NO:30(LCDR2)和SEQ ID NO:31(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:59(HCDR1)、SEQ ID NO:60(HCDR2)和SEQ ID NO:61(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:62(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:27(HCDR2)和SEQ IDNO:28(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:29(LCDR1)、SEQ ID NO:30(LCDR2)和SEQ ID NO:31(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:59(HCDR1)、SEQ ID NO:60(HCDR2)和SEQ ID NO:61(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:62(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是剪接调节剂；
L是包含ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB217。在一些实施例中，p为1至12、1至10、2至8、或4至8的整数。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，本文披露的ADC中的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。在一些实施例中，抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:32(HCDR2)和SEQ ID NO:33(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:34(LCDR1)、SEQ ID NO:35(LCDR2)和SEQ ID NO:36(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:63(HCDR1)、SEQ ID NO:64(HCDR2)和SEQ ID NO:65(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:66(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:32(HCDR2)和SEQ IDNO:33(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:34(LCDR1)、SEQ ID NO:35(LCDR2)和SEQ ID NO:36(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:63(HCDR1)、SEQ ID NO:64(HCDR2)和SEQ ID NO:65(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:66(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是剪接调节剂；
L是包含ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB218。在一些实施例中，p为1至12、1至10、2至8、或4至8的整数。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
药物部分
本文所述的ADC中的药物部分(D)可以为任何化学治疗剂。有用的化学治疗剂种类包括例如RNA剪接调节剂。在一些实施例中，药物部分是剪接调节剂。本文中描述并举例说明了示例性剪接调节剂化合物。
在一些实施例中，药物部分选自在国际申请号PCT/US 2019/035015(公开号WO2019/232449)中示出和描述的那些，将其关于其所有披露的剪接调节剂化合物和合成这些化合物的方法通过引用并入本文。在一些实施例中，国际申请号PCT/US 2019/035015(公开号WO 2019/232449)还提供了用于将剪接调节剂接合至抗体的所有示例性接头和接头连接点，将该申请关于上述内容通过引用并入本文。在一些实施例中，本文披露的ADC中使用的剪接调节剂和接头各自选自在国际申请号PCT/US 2019/035015(公开号WO 2019/232449)中示出和描述的那些。在一些实施例中，剪接调节剂经由国际申请号PCT/US 2019/035015(公开号WO 2019/232449)中披露的接头接合至抗体部分。
如本文所使用，“烷基”或“烷基基团”意指完全饱和的直链、支链或环烃链。在某些实施例中，烷基基团可含有1-8个碳原子(“C1-C8烷基”)。在某些实施例中，烷基基团可含有1-6个碳原子(“C1-C6烷基”)。在某些实施例中，烷基基团含有1-3个碳原子。在又其他实施例中，烷基基团含有2-3个碳原子，且在又其他实施例中，烷基基团含有1-2个碳原子。
如本文所使用，“烷基烷氧基”意指被烷氧基基团取代的烷基基团。如本文所使用，“烷氧基”是指经由氧(“烷氧基”)原子连接至主碳链的如先前所定义的烷基基团。
如本文所使用，“烷基氨基”意指被氨基取代的烷基基团。如本文所使用，“氨基”是指-NH2、-NH(烷基)或-N(烷基)(烷基)。
如本文所使用，“烷基羟基”意指被氨基基团取代的烷基基团。如本文所使用，“羟基(hydroxy或hydroxyl)”是指-OH。
“亚烷基”是指烷基基团的二价基基团。例如，-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-和-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-分别是指亚甲基、亚乙基、亚正丙基、亚正丁基、亚正戊基和亚正己基。
如本文所使用，“碳环”包括芳族基团(例如芳基)和非芳族基团(例如环烷基)两者。在某些实施例中，碳环基团含有3-10个碳原子(“3至10元碳环”)。在某些实施例中，碳环基团含有3-8个碳原子(“3至8元碳环”)。在某些实施例中，碳环基团含有3-6个碳原子(“3至6元碳环”)。在某些实施例中，碳环基团含有3-5个碳原子(“3至5元碳环”)。
“卤素”是指任何卤素基团，例如-F、-Cl、-Br或-I。
如本文所使用，术语“杂环”、“杂环基”和“杂环的”意指在环中含有至少一个杂原子的单环杂环、双环杂环或三环杂环。
单环杂环是含有至少一个独立地选自O、N和S的杂原子的3元、4元、5元、6元、7元或8元环。在一些实施例中，杂环是含有一个选自O、N和S的杂原子的3元或4元环。在一些实施例中，杂环是含有零个或一个双键以及一个、两个或三个选自O、N和S的杂原子的5元环。在一些实施例中，杂环是含有零个、一个或两个双键以及一个、两个或三个选自O、N和S的杂原子的6元、7元或8元环。单环杂环的代表性实例包括但不限于氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、吖丙啶基、二氮杂环庚烷基、1,3-二噁烷基、1,3-二氧戊环基、二氢吡喃基(包括3,4-二氢-2H-吡喃-6-基)、1,3-二硫杂环戊烷基、1,3-二噻烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑烷基、吗啉基、噁二唑啉基、噁二唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑啉基、吡唑烷基、吡咯啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基(包括四氢-2H-吡喃-4-基)、四氢噻吩基、噻二唑啉基、噻二唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、硫代吗啉基、1,1-二氧化硫代吗啉基(硫代吗啉砜)、硫代吡喃基、以及三噻烷基。
本披露的双环杂环可包括与芳基稠合的单环杂环、或与单环环烷基稠合的单环杂环、或与单环环烯基稠合的单环杂环、或与具有总计5至12个环原子的单环杂环稠合的单环杂环。双环杂环的实例包括但不限于3,4-二氢-2H-吡喃基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基、1,3-苯并二硫杂环戊烯基、2,3-二氢-1,4-苯并间二氧杂环己烯基、2,3-二氢-1-苯并呋喃基、2,3-二氢-1-苯并噻吩基、2,3-二氢-1H-吲哚基以及1,2,3,4-四氢喹啉基。
术语“杂环”、“杂环基”和“杂环的”涵盖杂芳基。“杂芳基”是指具有一个或多个闭合环且在这些环中的至少一个中具有一个或多个杂原子(氧、氮或硫)的环状部分，其中这些环中的至少一个为芳族环，且其中该一个或多个环可独立地是稠合和/或桥连的。实例包括不限于苯基、噻吩基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基。
如本文所述，本披露的化合物可含有“任选地经取代的”部分。通常，术语“经取代的”无论前面是否有术语“任选地”均意指指定部分的一个或多个氢被合适取代基替换。除非另外指示，否则“任选地经取代的”基团可在该基团的每个可取代位置处具有合适取代基，且当任何给定结构中的超过一个位置可被超过一个选自指定群组的取代基取代时，在每个位置处的取代基可相同或不同。依据本披露预想的取代基组合通常为引起形成稳定或化学上可行的化合物的取代基组合。
本领域技术人员将理解，“取代”或“被取代”或“不存在”是根据被取代的原子和取代基的允许化合价而定的，并且取代或不存在产生稳定的化合物，例如，其不自发地经历如通过重排、环化、消除等进行的转化。出于本披露的目的，杂原子例如氮可以具有氢取代基，和/或满足杂原子的化合价的本文所述有机化合物的任何可允许的取代基。
“稳定”是指如下化合物：在出于本文所述的一个或多个目的而经受允许其生产、检测以及在某些实施例中其回收、纯化和使用的条件时，它们在化学上和/或物理上基本上不改变。在一些实施例中，稳定化合物或化学上可行的化合物为当在水分或其他化学反应性条件不存在的情况下保持在40℃或更低的温度达至少一周时基本上不改变的化合物。在一些实施例中，本文所述的化合物是稳定的。
本文所教示的对映异构体可以包括“对映异构纯的”异构体，其在一个或多个特定不对称中心处基本上包含单个对映异构体，例如大于或等于90％、92％、95％、98％或99％或等于100％的单个对映异构体。“不对称中心”或“手性中心”是指包含四个不同取代基的四面体碳原子。
本文所述的化合物还可在构成这类化合物的原子中的一个或多个处含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可被诸如氘(2H)、氚(3H)、碳-13(13C)或碳-14(14C)等放射性同位素放射性标记。本文所述的化合物的所有同位素变体无论是否具有放射性均意欲涵盖在本披露的范围内。另外，本文所述的化合物的所有互变异构形式均意欲处于本披露的范围内。
在一些实施例中，药物部分是具有式(II)的剪接调节剂化合物：
Figure BDA0003978353560001521
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自不存在、氢、C1-C6烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基氨基基团、C1-C6烷基羧酸基团、C1-C6烷基羟基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团、C3-C8杂环基基团、-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和-CD3；
R3选自氢、C1-C6烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基氨基基团、C1-C6烷基羧酸基团、C1-C6烷基羟基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团、C3-C8杂环基基团和-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团；并且
R4、R5和R8各自独立地选自氢、羟基基团、-O-(C1-C6烷基)基团、-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和C1-C6烷基基团；
R6和R7各自独立地选自氢、-O-R17、-O-C(＝O)-R17、-O-C(＝O)-NR15R16、C1-C6烷基基团和-NR15R16；
R15和R16各自独立地选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17；
R17选自氢、C1-C6烷基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团和C3-C8杂环基基团；并且
Z选自
Figure BDA0003978353560001531
其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R15、R16和R17各自独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-O-(C1-C6烷基)基团、-NR15R16、C3-C8环烷基基团、C1-C6烷基羟基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、苄基基团和C3-C8杂环基基团，
其中R6和R7中至少一个是氢。
在一些实施例中，R1选自氢、C1-C4烷基基团、C1-C4烷基羧酸基团和C3-C8环烷基基团。在一些实施例中，R1是氢。在一些实施例中，R1是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R1是甲基。在一些实施例中，R1是乙基。在一些实施例中，R1是C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R1是-CH2CH2CH2CO2H。在一些实施例中，R1是C3-C8环烷基基团。在一些实施例中，R1是环庚基。
在一些实施例中，R3选自氢、C1-C4烷基基团、C1-C4烷基烷氧基基团、C1-C4烷基羧酸基团和C1-C4烷基羟基基团。在一些实施例中，R3选自氢和C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R3是氢。在一些实施例中，R3是C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R3是-CH2CH2CO2H。
在一些实施例中，R4选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团、-O-C(＝O)-(C1-C4烷基)基团和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R4是氢。在一些实施例中，R4是羟基。在一些实施例中，R4是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R4是-OCH3。在一些实施例中，R4是-OCH2CH3。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-CH3。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-CH2CH3。在一些实施例中，R4是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R4是甲基。在一些实施例中，R4是乙基。
在一些实施例中，R5选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R5是氢。在一些实施例中，R5是羟基。在一些实施例中，R5是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R5是C1-C4烷基基团。
在一些实施例中，R6是氢。在一些实施例中，R7是氢。在一些实施例中，R6是氢且R7是-O-R17。在一些实施例中，R6是氢且R7是-OR17，其中R17选自氢和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R6是氢且R7是-O-R17，其中R17是氢。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢，其中R17选自氢和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢，其中R17是氢。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16，其中R15是H且R16选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16，其中R15是H且R16选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17，且其中R17选自氢、C1-C6烷基基团、C3-C8环烷基基团和C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R6是-O-R17。在一些实施例中，R6是-O-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R6是C1-C6烷基。在一些实施例中，R6是C1-C4烷基。在一些实施例中，R6是C1烷基。在一些实施例中，R6是-NR15R16。在一些实施例中，R7是-O-R17。在一些实施例中，R7是-O-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R7是C1-C6烷基。在一些实施例中，R7是C1-C4烷基。在一些实施例中，R7是C1烷基。在一些实施例中，R7是-NR15R16。
在一些实施例中，R8选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团和(C1-C4烷基)。在一些实施例中，R8是氢。在一些实施例中，R8是羟基基团。在一些实施例中，R8是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R8是-O-(C1烷基)基团。
在一些实施例中，R15是氢。在一些实施例中，R15是R17。在一些实施例中，R15是-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R15是-C(＝O)-O-R17。
在一些实施例中，R16是氢。在一些实施例中，R16是R17。在一些实施例中，R16是-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R16是-C(＝O)-O-R17。
在一些实施例中，R17选自氢、C1-C4烷基基团、C3-C6环烷基基团和C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R17是氢。在一些实施例中，R17是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R17是C1烷基基团。在一些实施例中，R17是C3-C6环烷基基团。在一些实施例中，R17是C3环烷基基团。在一些实施例中，R17是C4环烷基基团。在一些实施例中，R17是C5环烷基基团。在一些实施例中，R17是C6环烷基基团。在一些实施例中，R17是C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R17是C3杂环基基团。在一些实施例中，R17是C4杂环基基团。在一些实施例中，R17是C5杂环基基团。在一些实施例中，R17是C6杂环基基团。在一些实施例中，R17是C7杂环基基团。在一些实施例中，R17是C8杂环基基团。
在一些实施例中，Z是
Figure BDA0003978353560001551
在一些实施例中，Z是
Figure BDA0003978353560001552
在一些实施例中，Z是
Figure BDA0003978353560001553
在一些实施例中，Z是
Figure BDA0003978353560001554
在一些实施例中，Z是
Figure BDA0003978353560001561
在一些实施例中，具有式(II)的剪接调节剂化合物连接至例如具有式(I)的ADC中的接头L，如以下式(II-A)所示：
Figure BDA0003978353560001562
其中Z'选自
Figure BDA0003978353560001563
Figure BDA0003978353560001564
并且
其中所有其他变量是如关于式(II)所定义。
在一些其他实施例中，药物部分是具有式(IV)的剪接调节剂化合物：
Figure BDA0003978353560001565
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自氢、C1-C6烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基氨基基团、C1-C6烷基羧酸基团、C1-C6烷基羟基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团、C3-C8杂环基基团、-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和-CD3；
R3选自氢、C1-C6烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基氨基基团、C1-C6烷基羧酸基团、C1-C6烷基羟基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团、C3-C8杂环基基团和-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团；并且
R4、R5和R8各自独立地选自氢、羟基基团、-O-(C1-C6烷基)基团、-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和C1-C6烷基基团；
R6和R7各自独立地选自氢、-O-R17、-O-C(＝O)-R17、-O-C(＝O)-NR15R16、C1-C6烷基基团和-NR15R16；
R15和R16各自独立地选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17；并且
R17选自氢、C1-C6烷基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团和C3-C8杂环基基团；
其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R15、R16和R17各自独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-O-(C1-C6烷基)基团、-NR15R16、C3-C8环烷基基团、C1-C6烷基羟基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、苄基基团和C3-C8杂环基基团，
其中R6和R7中至少一个是氢。
在一些实施例中，R1选自氢、C1-C4烷基基团、C1-C4烷基羧酸基团和C3-C8环烷基基团。在一些实施例中，R1是氢。在一些实施例中，R1是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R1是甲基。在一些实施例中，R1是乙基。在一些实施例中，R1是C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R1是-CH2CH2CH2CO2H。在一些实施例中，R1是C3-C8环烷基基团。在一些实施例中，R1是环庚基。
在一些实施例中，R3选自氢、C1-C4烷基基团、C1-C4烷基烷氧基基团、C1-C4烷基羧酸基团和C1-C4烷基羟基基团。在一些实施例中，R3选自氢和C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R3是氢。在一些实施例中，R3是C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R3是-CH2CH2CO2H。
在一些实施例中，R4选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团、-O-C(＝O)-(C1-C4烷基)基团和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R4是氢。在一些实施例中，R4是羟基。在一些实施例中，R4是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R4是-OCH3。在一些实施例中，R4是-OCH2CH3。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-CH3。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-CH2CH3。在一些实施例中，R4是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R4是甲基。在一些实施例中，R4是乙基。
在一些实施例中，R5选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R5是氢。在一些实施例中，R5是羟基。在一些实施例中，R5是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R5是C1-C4烷基基团。
在一些实施例中，R6是氢。在一些实施例中，R7是氢。在一些实施例中，R6是氢且R7是-O-R17。在一些实施例中，R6是氢且R7是-OR17，其中R17选自氢和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R6是氢且R7是-O-R17，其中R17是氢。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢，其中R17选自氢和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢，其中R17是氢。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16，其中R15是H且R16选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16，其中R15是H且R16选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17，且其中R17选自氢、C1-C6烷基基团、C3-C8环烷基基团和C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R6是-O-R17。在一些实施例中，R6是-O-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R6是C1-C6烷基。在一些实施例中，R6是C1-C4烷基。在一些实施例中，R6是C1烷基。在一些实施例中，R6是-NR15R16。
在一些实施例中，R7是-O-R17。在一些实施例中，R7是-O-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R7是C1-C6烷基。在一些实施例中，R7是C1-C4烷基。在一些实施例中，R7是C1烷基。在一些实施例中，R7是-NR15R16。
在一些实施例中，R8选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团和(C1-C4烷基)。在一些实施例中，R8是氢。在一些实施例中，R8是羟基基团。在一些实施例中，R8是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R8是-O-(C1烷基)基团。
在一些实施例中，R15是氢。在一些实施例中，R15是R17。在一些实施例中，R15是-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R15是-C(＝O)-O-R17。
在一些实施例中，R16是氢。在一些实施例中，R16是R17。在一些实施例中，R16是-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R16是-C(＝O)-O-R17。
在一些实施例中，R17选自氢、C1-C4烷基基团、C3-C6环烷基基团和C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R17是氢。在一些实施例中，R17是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R17是C1烷基基团。在一些实施例中，R17是C3-C6环烷基基团。在一些实施例中，R17是C3环烷基基团。在一些实施例中，R17是C4环烷基基团。在一些实施例中，R17是C5环烷基基团。在一些实施例中，R17是C6环烷基基团。在一些实施例中，R17是C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R17是C3杂环基基团。在一些实施例中，R17是C4杂环基基团。在一些实施例中，R17是C5杂环基基团。在一些实施例中，R17是C6杂环基基团。在一些实施例中，R17是C7杂环基基团。在一些实施例中，R17是C8杂环基基团。
在一些实施例中，具有式(IV)的剪接调节剂化合物连接至例如具有式(I)的ADC中的接头L，如以下式(IV-A)所示：
Figure BDA0003978353560001601
在一些其他实施例中，药物部分是具有式(VI)的剪接调节剂化合物：
Figure BDA0003978353560001602
或其药学上可接受的盐，其中：
R1和R9各自独立地选自氢、C1-C6烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基氨基基团、C1-C6烷基羧酸基团、C1-C6烷基羟基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团、C3-C8杂环基基团、-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和-CD3；
R3选自氢、C1-C6烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基氨基基团、C1-C6烷基羧酸基团、C1-C6烷基羟基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团、C3-C8杂环基基团和-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团；
R4、R5和R8各自独立地选自氢、羟基基团、-O-(C1-C6烷基)基团、-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和C1-C6烷基基团；
R6和R7各自独立地选自氢、-O-R17、-O-C(＝O)-R17、-O-C(＝O)-NR15R16、C1-C6烷基基团、-NR15R16和接头；
R10选自氢、C1-C6烷基基团、-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和-CD3；
R15和R16各自独立地选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17；
R17选自氢、C1-C6烷基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团和C3-C8杂环基基团；并且
a是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R15、R16和R17各自独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-O-(C1-C6烷基)基团、-NR15R16、C3-C8环烷基基团、C1-C6烷基羟基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、苄基基团和C3-C8杂环基基团；
其中R6和R7中至少一个是氢；并且
其中R1和R9不能同时不存在。
在一些实施例中，R1选自氢、C1-C4烷基基团、C1-C4烷基羧酸基团和C3-C8环烷基基团。在一些实施例中，R1是氢。在一些实施例中，R1是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R1是甲基。在一些实施例中，R1是乙基。在一些实施例中，R1是C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R1是-CH2CH2CH2CO2H。在一些实施例中，R1是C3-C8环烷基基团。在一些实施例中，R1是环庚基。
在一些实施例中，R3选自氢、C1-C4烷基基团、C1-C4烷基烷氧基基团、C1-C4烷基羧酸基团和C1-C4烷基羟基基团。在一些实施例中，R3选自氢和C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R3是氢。在一些实施例中，R3是C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R3是-CH2CH2CO2H。
在一些实施例中，R4选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团、-O-C(＝O)-(C1-C4烷基)基团和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R4是氢。在一些实施例中，R4是羟基。在一些实施例中，R4是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R4是-OCH3。在一些实施例中，R4是-OCH2CH3。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-CH3。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-CH2CH3。在一些实施例中，R4是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R4是甲基。在一些实施例中，R4是乙基。
在一些实施例中，R5选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R5是氢。在一些实施例中，R5是羟基。在一些实施例中，R5是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R5是C1-C4烷基基团。
在一些实施例中，R9选自不存在、氢、C1-C4烷基基团、-(C＝O)-(C1-C4烷基)基团和-CD3。在一些实施例中，R9不存在。在一些实施例中，R9是氢。在一些实施例中，R9是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，C1-C4烷基基团是甲基。在一些实施例中，C1-C4烷基基团是乙基。在一些实施例中，R9是-(C＝O)-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，-(C＝O)-(C1-C4烷基)基团是-(C＝O)-甲基。在一些实施例中，R9是-CD3。
在一些实施例中，R10选自氢、C1-C4烷基基团、-(C＝O)-(C1-C4烷基)基团和-CD3。在一些实施例中，R10是氢。在一些实施例中，R10是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，C1-C4烷基基团是甲基。在一些实施例中，C1-C4烷基基团是乙基。在一些实施例中，R10是-(C＝O)-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，-(C＝O)-(C1-C4烷基)基团是-(C＝O)-甲基。在一些实施例中，R10是-CD3。
在一些实施例中，R6是氢。在一些实施例中，R7是氢。在一些实施例中，R6是氢且R7是-O-R17。在一些实施例中，R6是氢且R7是-OR17，其中R17选自氢和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R6是氢且R7是-O-R17，其中R17是氢。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢，其中R17选自氢和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R6是-O-R17且R7是氢，其中R17是氢。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16，其中R15是H且R16选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17。在一些实施例中，R6是氢且R7是-NR15R16，其中R15是H且R16选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17，且其中R17选自氢、C1-C6烷基基团、C3-C8环烷基基团和C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R6是-O-R17。在一些实施例中，R6是-O-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R6是C1-C6烷基。在一些实施例中，R6是C1-C4烷基。在一些实施例中，R6是C1烷基。在一些实施例中，R6是-NR15R16。
在一些实施例中，R7是-O-R17。在一些实施例中，R7是-O-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R7是C1-C6烷基。在一些实施例中，R7是C1-C4烷基。在一些实施例中，R7是C1烷基。在一些实施例中，R7是-NR15R16。
在一些实施例中，R8选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团和(C1-C4烷基)。在一些实施例中，R8是氢。在一些实施例中，R8是羟基基团。在一些实施例中，R8是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R8是-O-(C1烷基)基团。
在一些实施例中，R15是氢。在一些实施例中，R15是R17。在一些实施例中，R15是-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R15是-C(＝O)-O-R17。
在一些实施例中，R16是氢。在一些实施例中，R16是R17。在一些实施例中，R16是-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R16是-C(＝O)-O-R17。
在一些实施例中，R17选自氢、C1-C4烷基基团、C3-C6环烷基基团和C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R17是氢。在一些实施例中，R17是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R17是C1烷基基团。在一些实施例中，R17是C3-C6环烷基基团。在一些实施例中，R17是C3环烷基基团。在一些实施例中，R17是C4环烷基基团。在一些实施例中，R17是C5环烷基基团。在一些实施例中，R17是C6环烷基基团。在一些实施例中，R17是C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R17是C3杂环基基团。在一些实施例中，R17是C4杂环基基团。在一些实施例中，R17是C5杂环基基团。在一些实施例中，R17是C6杂环基基团。在一些实施例中，R17是C7杂环基基团。在一些实施例中，R17是C8杂环基基团。
在一些实施例中，a是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施例中，a是1、2、3、4、5或6。在一些实施例中，a是1、2、3、4或5。在一些实施例中，a是1、2、3或4。在一些实施例中，a是1、2或3。在一些实施例中，a是1或2。在一些实施例中，a是1。在一些实施例中，a是2。在一些实施例中，a是3。在一些实施例中，a是4。在一些实施例中，a是5。在一些实施例中，a是6。在一些实施例中，a是7。在一些实施例中，a是8。在一些实施例中，a是9。在一些实施例中，a是10。
在一些实施例中，具有式(VI)的剪接调节剂化合物连接至例如具有式(I)的ADC中的接头L，如以下式(VI-A)所示：
Figure BDA0003978353560001641
在一些其他实施例中，药物部分是具有式(VIII)的剪接调节剂化合物：
Figure BDA0003978353560001642
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自不存在、氢、C1-C6烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基氨基基团、C1-C6烷基羧酸基团、C1-C6烷基羟基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团、C3-C8杂环基基团、-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和-CD3；
R3选自氢、C1-C6烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基氨基基团、C1-C6烷基羧酸基团、C1-C6烷基羟基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团、C3-C8杂环基基团和-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团；
R4选自氢、羟基基团、-O-(C1-C6烷基)基团、-O-C(＝O)-(C1-C6烷基)基团和C1-C6烷基基团；并且
R10选自3至10元碳环和3至10元杂环，其各自被0至3个Ra取代，其中每个Ra独立地选自卤素、C1-C6烷基基团、-O-(C1-C6)烷基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、C1-C6烷基羟基基团、-S(＝O)w-(4至7元杂环)、4至7元碳环和4至7元杂环；
R15和R16各自独立地选自氢、R17、-C(＝O)-R17和-C(＝O)-O-R17；并且
R17选自氢、C1-C6烷基基团、C3-C8环烷基基团、苄基基团和C3-C8杂环基基团；
其中R1、R3、R4、R10、R15、R16和R17各自独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-O-(C1-C6烷基)基团、-NR15R16、C3-C8环烷基基团、C1-C6烷基羟基基团、C1-C6烷基烷氧基基团、苄基基团和C3-C8杂环基基团；并且
其中每个Ra独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、-NR15R16、C1-C6烷基基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)-(C3-C10杂环基基团)和C1-C6烷基羧酸基团，其各自被0、1或2个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、-NR15R16和C1-C3烷基基团；并且
w是0、1或2。
在一些实施例中，R1选自不存在、氢、C1-C4烷基基团、C1-C4烷基羧酸基团和C3-C8环烷基基团。在一些实施例中，R1是氢。在一些实施例中，R1是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R1是甲基。在一些实施例中，R1是乙基。在一些实施例中，R1是C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R1是-CH2CH2CH2CO2H。在一些实施例中，R1是C3-C8环烷基基团。在一些实施例中，R1是环庚基。
在一些实施例中，R3选自氢、C1-C4烷基基团、C1-C4烷基烷氧基基团、C1-C4烷基羧酸基团和C1-C4烷基羟基基团。在一些实施例中，R3选自氢和C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R3是氢。在一些实施例中，R3是C1-C4烷基羧酸基团。在一些实施例中，R3是-CH2CH2CO2H。
在一些实施例中，R4选自氢、羟基基团、-O-(C1-C4烷基)基团、-O-C(＝O)-(C1-C4烷基)基团和C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R4是氢。在一些实施例中，R4是羟基。在一些实施例中，R4是-O-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R4是-OCH3。在一些实施例中，R4是-OCH2CH3。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-(C1-C4烷基)基团。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-CH3。在一些实施例中，R4是-O-C(＝O)-CH2CH3。在一些实施例中，R4是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R4是甲基。在一些实施例中，R4是乙基。
在一些实施例中，R10选自6至9元碳环和6至9元杂环，其各自被0至2个Ra取代，其中每个Ra独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)-(3至10元杂环)基团和C1-C6烷基羧酸基团。
在一些实施例中，该碳环是被0至2个Ra取代的苯基，其中每个Ra独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)-(3至10元杂环)基团和C1-C6烷基羧酸基团。在一些实施例中，该苯基被2个Ra取代，其中每个Ra独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)-(3至10元杂环)基团和C1-C6烷基羧酸基团。在一些实施例中，该苯基是
Figure BDA0003978353560001671
在一些实施例中，该杂环是被0至2个Ra取代的9元杂环，其中每个Ra独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)-(3至10元杂环)基团和C1-C6烷基羧酸基团。在一些实施例中，该9元杂环是
Figure BDA0003978353560001672
在一些实施例中，Ra选自卤素、3至10元碳环和3至10元杂环，其中每个Ra独立地被0至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、羟基基团、C1-C6烷基基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)基团、-(C＝O)-(C1-C6烷基)-(3至10元杂环)基团和C1-C6烷基羧酸基团。在一些实施例中，Ra选自卤素、
Figure BDA0003978353560001673
Figure BDA0003978353560001674
在一些实施例中，R15是氢。在一些实施例中，R15是R17。在一些实施例中，R15是-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R15是-C(＝O)-O-R17。
在一些实施例中，R16是氢。在一些实施例中，R16是R17。在一些实施例中，R16是-C(＝O)-R17。在一些实施例中，R16是-C(＝O)-O-R17。
在一些实施例中，R17选自氢、C1-C4烷基基团、C3-C6环烷基基团和C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R17是氢。在一些实施例中，R17是C1-C4烷基基团。在一些实施例中，R17是C1烷基基团。在一些实施例中，R17是C3-C6环烷基基团。在一些实施例中，R17是C3环烷基基团。在一些实施例中，R17是C4环烷基基团。在一些实施例中，R17是C5环烷基基团。在一些实施例中，R17是C6环烷基基团。在一些实施例中，R17是C3-C8杂环基基团。在一些实施例中，R17是C3杂环基基团。在一些实施例中，R17是C4杂环基基团。在一些实施例中，R17是C5杂环基基团。在一些实施例中，R17是C6杂环基基团。在一些实施例中，R17是C7杂环基基团。在一些实施例中，R17是C8杂环基基团。
在一些实施例中，具有式(VIII)的剪接调节剂化合物连接至例如具有式(I)的ADC中的接头L，如以下式(VIII-A)所示：
Figure BDA0003978353560001681
在一些实施例中，药物部分是选自D1和D2的剪接调节剂。
在一些实施例中，药物部分是D1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，所披露的ADC中使用的D1药物部分的结构显示于下：
Figure BDA0003978353560001682
在一些实施例中，本文所述的ADC(例如，具有式(I)的ADC)中的接头经由哌嗪基团上的胺共价连接至D1药物部分。在各种实施例中，药物部分是D1的衍生物。在一些实施例中，D1衍生物保持D1的至少一种生物功能或活性(例如SF3b复合体结合、体外剪接活性、细胞毒性)，但具有改变的化学结构。
在一些实施例中，药物部分是D2或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，所披露的ADC中使用的D2药物部分的结构显示于下：
Figure BDA0003978353560001691
在一些实施例中，本文所述的ADC(例如，具有式(I)的ADC)中的接头经由哌嗪基团上的胺共价连接至D2药物部分。在一些实施例中，药物部分是D2的衍生物。在一些实施例中，D2衍生物保持D2的至少一种生物功能或活性(例如SF3b复合体结合、体外剪接活性、细胞毒性)，但具有改变的化学结构。
在一些实施例中，剪接调节剂包含D1：
Figure BDA0003978353560001692
在一些实施例中，剪接调节剂包含D2：
Figure BDA0003978353560001693
在一些实施例中，剪接调节剂包含D2’：
Figure BDA0003978353560001701
在一些实施例中，剪接调节剂包含D3：
Figure BDA0003978353560001702
在一些实施例中，剪接调节剂包含D4：
Figure BDA0003978353560001703
在一些实施例中，剪接调节剂包含D5：
Figure BDA0003978353560001704
在一些实施例中，剪接调节剂包含D6：
Figure BDA0003978353560001705
在一些实施例中，剪接调节剂包含D7：
Figure BDA0003978353560001706
在一些实施例中，剪接调节剂包含D8：
Figure BDA0003978353560001711
在一些实施例中，剪接调节剂包含D9：
Figure BDA0003978353560001712
在一些实施例中，剪接调节剂包含D10：
Figure BDA0003978353560001713
在一些实施例中，剪接调节剂包含D11：
Figure BDA0003978353560001714
在一些实施例中，剪接调节剂包含D12：
Figure BDA0003978353560001715
在一些实施例中，剪接调节剂包含D13：
Figure BDA0003978353560001716
在一些实施例中，剪接调节剂包含D14：
Figure BDA0003978353560001721
在一些实施例中，剪接调节剂包含D15：
Figure BDA0003978353560001722
在一些实施例中，剪接调节剂包含D16：
Figure BDA0003978353560001723
在一些实施例中，剪接调节剂包含D17：
Figure BDA0003978353560001724
在一些实施例中，剪接调节剂包含D18：
Figure BDA0003978353560001725
在一些实施例中，剪接调节剂包含D19：
Figure BDA0003978353560001731
在一些实施例中，剪接调节剂包含D20：
Figure BDA0003978353560001732
在一些实施例中，剪接调节剂包含D21：
Figure BDA0003978353560001733
在一些实施例中，剪接调节剂包含D22：
Figure BDA0003978353560001734
在一些实施例中，剪接调节剂包含D23：
Figure BDA0003978353560001735
在一些实施例中，剪接调节剂包含D24：
Figure BDA0003978353560001741
在一些实施例中，剪接调节剂包含D25：
Figure BDA0003978353560001742
在一些实施例中，剪接调节剂包含D26：
Figure BDA0003978353560001743
在一些实施例中，剪接调节剂包含D27：
Figure BDA0003978353560001744
在一些实施例中，剪接调节剂包含D28：
Figure BDA0003978353560001745
在一些实施例中，剪接调节剂包含D29：
Figure BDA0003978353560001751
在一些实施例中，剪接调节剂包含D30：
Figure BDA0003978353560001752
在一些实施例中，剪接调节剂包含D31：
Figure BDA0003978353560001753
在一些实施例中，剪接调节剂包含D32：
Figure BDA0003978353560001754
在一些实施例中，剪接调节剂包含D33：
Figure BDA0003978353560001755
在一些实施例中，剪接调节剂包含D34：
Figure BDA0003978353560001761
在一些实施例中，剪接调节剂包含D35：
Figure BDA0003978353560001762
示例性ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是能够结合BCMA的抗体或抗原结合片段；
D是D1或D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段靶向表达BCMA的细胞。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是内化性抗体或内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ IDNO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ ID NO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ IDNO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1或D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB212。
在一些实施例中，D是D1。在一些实施例中，D是D2。
在一些实施例中，L选自本文披露的接头中的任一种或本文披露的接头组分的任何组合。在一些实施例中，L为ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。
在一些实施例中，L是可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是不可裂解接头。
在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ IDNO:8(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:9(LCDR1)、SEQ ID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:43(HCDR1)、SEQ ID NO:44(HCDR2)和SEQ ID NO:45(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:46(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1或D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB213。
在一些实施例中，D是D1。在一些实施例中，D是D2。
在一些实施例中，L选自本文披露的接头中的任一种或本文披露的接头组分的任何组合。在一些实施例中，L为ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。
在一些实施例中，L是可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是不可裂解接头。
在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:12(HCDR2)和SEQ IDNO:13(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:14(LCDR1)、SEQ ID NO:15(LCDR2)和SEQ ID NO:16(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:47(HCDR1)、SEQ ID NO:48(HCDR2)和SEQ ID NO:49(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:50(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1或D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB214。
在一些实施例中，D是D1。在一些实施例中，D是D2。
在一些实施例中，L选自本文披露的接头中的任一种或本文披露的接头组分的任何组合。在一些实施例中，L为ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。
在一些实施例中，L是可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是不可裂解接头。
在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:17(HCDR2)和SEQ IDNO:18(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:19(LCDR1)、SEQ ID NO:20(LCDR2)和SEQ ID NO:21(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:51(HCDR1)、SEQ ID NO:52(HCDR2)和SEQ ID NO:53(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:54(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1或D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB215。
在一些实施例中，D是D1。在一些实施例中，D是D2。
在一些实施例中，L选自本文披露的接头中的任一种或本文披露的接头组分的任何组合。在一些实施例中，L为ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。
在一些实施例中，L是可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是不可裂解接头。
在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ IDNO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1或D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB216。
在一些实施例中，D是D1。在一些实施例中，D是D2。
在一些实施例中，L选自本文披露的接头中的任一种或本文披露的接头组分的任何组合。在一些实施例中，L为ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。
在一些实施例中，L是可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是不可裂解接头。
在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ IDNO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1；
L是包含MC-Val-Cit-pABC(ADL1)的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区；
D是D1；
L是包含MC-Val-Cit-pABC(ADL1)的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQID NO:101的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:27(HCDR2)和SEQ IDNO:28(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:29(LCDR1)、SEQ ID NO:30(LCDR2)和SEQ ID NO:31(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:59(HCDR1)、SEQ ID NO:60(HCDR2)和SEQ ID NO:61(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:62(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1或D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB217。
在一些实施例中，D是D1。在一些实施例中，D是D2。
在一些实施例中，L选自本文披露的接头中的任一种或本文披露的接头组分的任何组合。在一些实施例中，L为ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。
在一些实施例中，L是可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是不可裂解接头。
在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，ADC具有式(I)：
Ab-(L-D)p (I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:32(HCDR2)和SEQ IDNO:33(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:34(LCDR1)、SEQ ID NO:35(LCDR2)和SEQ ID NO:36(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:63(HCDR1)、SEQ ID NO:64(HCDR2)和SEQ ID NO:65(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:66(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1或D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区和人Igλ轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。在一些实施例中，ADC中的抗体或抗原结合片段是AB218。
在一些实施例中，D是D1。在一些实施例中，D是D2。
在一些实施例中，L选自本文披露的接头中的任一种或本文披露的接头组分的任何组合。在一些实施例中，L为ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL2、ADL5、ADL6、ADL7、ADL10、ADL12、ADL13、ADL14、ADL15、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头。在一些实施例中，ADL1、ADL6、ADL13、ADL21、ADL22或ADL23接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。
在一些实施例中，L是可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，可裂解接头还可包含一个或多个额外间隔子单元。在一些实施例中，L是不可裂解接头。
在一些实施例中，p为1至12。在一些实施例中，p为2至8。在一些实施例中，p为4至8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
在一些实施例中，相对于包含替代性药物部分(例如，替代性剪接调节剂药物部分)的ADC，包含如本文披露的D1或D2药物部分的ADC表现出改善的药物负载(药物与抗体比率)、较低聚集水平、增加的稳定性、增加的对癌细胞的中靶杀伤、降低的对非癌细胞的脱靶杀伤、和/或增加的细胞毒性和/或效力。在一些实施例中，包含如本文披露的D1或D2药物部分的ADC提供良好或优异的上文所列类别中的一种或多种特性、或治疗性ADC的一系列功能特性。在一些实施例中，相较于包含替代性药物部分(例如，替代性剪接调节剂药物部分)的ADC，包含D1或D2药物部分的ADC表现出令人惊讶地有效的效力以及对表达该ADC所靶向的抗原的细胞的细胞生长和/或增殖的增加的抑制。
药物负载
药物负载由p表示，且在本文中也称为药物与抗体比率(DAR)。药物负载可在1至15个药物部分/抗体或抗原结合片段的范围内。在一些实施例中，p为1至15的整数。在一些实施例中，p为1至12的整数。在一些实施例中，p为1至10的整数。在一些实施例中，p为1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2的整数。在一些实施例中，p为2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3的整数。在一些实施例中，p为1至8的整数。在一些实施例中，p为1至5的整数。在一些实施例中，p为2至6的整数。在一些实施例中，p为2至4的整数。在一些实施例中，p为3或4。在其他实施例中，p为4至8的整数。在其他实施例中，p为1、2、3、4、5、6、7或8，例如4或8。在一些实施例中，p为4。在一些实施例中，p为8。
药物负载可受抗体或抗原结合片段上的连接位点的数目限制。在一些实施例中，ADC中的接头部分(L)经由抗体或抗原结合片段上的一个或多个氨基酸残基上的化学活性基团连接至抗体或抗原结合片段。例如，接头可经由游离氨基、亚氨基、羟基、硫醇或羧基基团连接至抗体或抗原结合片段(例如，连接至N-末端或C-末端、连接至一个或多个赖氨酸残基的ε氨基基团、连接至一个或多个谷氨酸或天冬氨酸残基的游离羧酸基团或连接至一个或多个半胱氨酸残基的硫氢基基团)。与接头连接的位点可为抗体或抗原结合片段的氨基酸序列中的天然残基，或其可例如通过DNA重组技术(例如，通过将半胱氨酸残基引入氨基酸序列中)或通过蛋白质生物化学(例如，通过还原、pH调节或水解)引入抗体或抗原结合片段中。
在一些实施例中，可结合抗体或抗原结合片段的药物部分的数目受游离半胱氨酸残基的数目限制。例如，在连接为半胱氨酸硫醇基团的情况下，抗体可具有仅一个或数个半胱氨酸硫醇基团，或可具有仅一个或数个接头可经由其连接的具有足够反应性的硫醇基团。通常，抗体不含有许多可连接至药物部分的游离反应性半胱氨酸硫醇基团。实际上，抗体中的大部分半胱氨酸硫醇残基包含在链间或链内二硫键中。因此，在一些实施例中，缀合至半胱氨酸可能需要至少部分还原抗体。接头-药物与抗体的过量连接可通过还原可用于形成二硫键的半胱氨酸残基来使抗体脱稳定。因此，最佳的药物与抗体比率应增加ADC的效力(通过增加经连接的药物部分的数目/抗体)，且不使抗体或抗原结合片段脱稳定。在一些实施例中，最佳比率可为2、3、4、5、6、7或8。在一些实施例中，最佳比率可为约4。在一些实施例中，最佳比率可为约8。
在一些实施例中，使抗体或抗原结合片段在缀合之前暴露于还原条件以生成一个或多个游离半胱氨酸残基。在一些实施例中，可在部分或总体还原条件下用诸如二硫苏糖醇(DTT)或三(2-羧乙基)膦(TCEP)等还原剂还原抗体以生成反应性半胱氨酸硫醇基团。可经由用受限摩尔当量的TCEP进行部分还原来生成未配对的半胱氨酸，该受限摩尔当量的TCEP可还原连接轻链和重链(一对/H-L配对)以及铰链区中的两个重链(在人IgG1的情况下，两对/H-H配对)的链间二硫键，但使链内二硫键完整(Stefano等人(2013)Methods MolBiol.[分子生物学方法]1045:145-71)。在实施例中，例如通过采用施加交替还原和氧化电压的工作电极来以电化学方式还原抗体内的二硫键。此方法可允许二硫键还原与分析装置(例如，电化学检测装置、NMR光谱仪或质谱仪)或化学分离装置(例如，液相色谱(例如HPLC))或电泳装置的在线偶合(参见，例如，美国公开号20140069822)。在一些实施例中，抗体经受变性条件以显露氨基酸残基(如半胱氨酸)上的反应性亲核基团。
ADC的药物负载量可以不同方式控制，例如通过：(i)限制药物-接头中间体或接头试剂相对于抗体的摩尔过量；(ii)限制缀合反应时间或温度；(iii)用于半胱氨酸硫醇修饰的部分或限制性还原条件；和/或(iv)通过重组技术工程改造抗体的氨基酸序列，使得半胱氨酸残基的数目和位置得到改变以控制接头-药物连接的数目和/或位置。
在一些实施例中，将游离半胱氨酸残基引入抗体或抗原结合片段的氨基酸序列中。例如，可制备经半胱氨酸工程改造的抗体，其中亲本抗体的一个或多个氨基酸被半胱氨酸氨基酸替换。任何形式的抗体均可经如此工程改造，即突变。例如，亲本Fab抗体片段可经工程改造以形成经半胱氨酸工程改造的Fab，称为“ThioFab”。类似地，亲本单克隆抗体可经工程改造以形成“ThioMab”。单位点突变在ThioFab中产生单个经工程改造的半胱氨酸残基，而由于IgG抗体的二聚体性质，单位点突变在ThioMab中产生两个经工程改造的半胱氨酸残基。编码亲本多肽的氨基酸序列变体的DNA可由本领域已知的多种方法制备(参见，例如，国际公开号WO 2006/034488中所述的方法)。这些方法包括但不限于通过先前所制备的编码多肽的DNA的定点(或寡核苷酸介导的)诱变、PCR诱变和盒式诱变进行的制备。重组抗体的变体还可通过限制性片段操作或通过用合成寡核苷酸进行重叠延伸PCR来构建。具有式(I)的ADC包括但不限于具有1、2、3或4个工程改造的半胱氨酸氨基酸的抗体(Lyon等人(2012)Methods Enzymol.[酶学方法]502:123-38)。在一些实施例中，在不使用工程改造的情况下，一个或多个游离半胱氨酸残基已存在于抗体或抗原结合片段中，在此情况下可使用现有游离半胱氨酸残基来将抗体或抗原结合片段缀合至药物部分。
在一些实施例中，使用一种或多种位点特异性缀合技术来生产具有确定的药物负载量(即，确定的p或药物与抗体比率(DAR))的均质ADC产物。在一些实施例中，可以在抗体的轻链或重链中产生游离半胱氨酸残基以经由残基特异性缀合技术(RESPECT)进行位点特异性缀合。Albone等人(2017)Cancer Biol.Ther.[癌症生物学与治疗]18(5):347-357以及国际公开号WO/2016205618和WO/2017106643描述了用于生成RESPECT形式的抗体的示例性方案，将这些文献各自关于进行位点特异性缀合的方法通过引用并入本文。在一些实施例中，使用位点特异性缀合以经由接头将抗体部分共价连接至药物部分来产生本文披露的ADC。
在包含抗体或抗原结合片段和接头部分的多个拷贝的反应混合物中，在超过一个亲核基团与药物-接头中间体或接头部分试剂反应、随后与药物部分试剂反应的情况下，所得产物可为ADC的混合物，该混合物中分布有连接至混合物中的抗体或抗原结合片段的各拷贝的一个或多个药物部分。在一些实施例中，由缀合反应得到的ADC混合物中的药物负载量在1至10个经连接的药物部分/抗体或抗原结合片段的范围内。药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段(即，平均药物负载量或平均p)可通过本领域中已知的任何常规方法，例如通过质谱法(例如，反相LC-MS)和/或高效液相色谱法(例如，疏水相互作用色谱法-高效液相色谱法(HIC-HPLC))来计算。在一些实施例中，由HIC-HPLC确定药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，由反相液相色谱法-质谱法(LC-MS)确定药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约1.5至约3.5、约2.5至约4.5、约3.5至约5.5、约4.5至约6.5、约5.5至约7.5、约6.5至约8.5、或约7.5至约9.5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约2至约6、约2至约4、约3至约5、约4至约6、约5至约7、约6至约8、约7至约9、约2至约8、约2至约10、约4至约8、或约4至约10。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约2至约8。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约2至约6。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约4。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约8。
在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约2。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约1.5、约1.6、约1.7、约1.8、约1.9、约2、约2.1、约2.2、约2.3、约2.4或约2.5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为2。
在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约3。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约2.5、约2.6、约2.7、约2.8、约2.9、约3、约3.1、约3.2、约3.3、约3.4或约3.5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为3。
在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约4。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约3.5、约3.6、约3.7、约3.8、约3.9、约4、约4.1、约4.2、约4.3、约4.4或约4.5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为4。
在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约4.5、约4.6、约4.7、约4.8、约4.9、约5、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4或约5.5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为5。
在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约6。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9、约6、约6.1、约6.2、约6.3、约6.4或约6.5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为6。
在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约7。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约6.5、约6.6、约6.7、约6.8、约6.9、约7、约7.1、约7.2、约7.3、约7.4或约7.5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为7。
在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约8。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为约7.5、约7.6、约7.7、约7.8、约7.9、约8、约8.1、约8.2、约8.3、约8.4或约8.5。在一些实施例中，药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段为8。
在各种实施例中，如关于药物部分的平均数目/抗体或抗原结合片段所使用的术语“约”意指±10％。
各个ADC复合物或“种类”可在混合物中通过质谱法鉴定出且通过UPLC或HPLC(例如，疏水性相互作用色谱法(HIC-HPLC))分离。在一些实施例中，具有单一负载值的均质或接近均质的ADC产物可例如通过色谱法自缀合混合物分离。
在一些实施例中，较高药物负载量(例如，p>10)可引起某些ADC的聚集、不可溶、毒性、或细胞渗透性损失。较高药物负载量还可能不利地影响某些ADC的药代动力学(例如，清除率)。在一些实施例中，较低药物负载量(例如，p<2)可能降低某些ADC针对表达靶抗原细胞和/或旁观者细胞的效力。在一些实施例中，本披露的ADC的药物负载量在约2至约10；约2至约8；约2至约6；约2至约5；约3至约5；约2至约4；约4至约8；或约4至约10的范围内。
在一些实施例中，例如使用抗体或抗原结合片段上的链内二硫化物的部分还原来达成约2的药物负载量和/或平均药物负载量，且其提供有益特性。在一些实施例中，例如使用抗体或抗原结合片段上的链内二硫化物的部分还原来达成约4的药物负载量和/或平均药物负载量，且其提供有益特性。在一些实施例中，例如使用抗体或抗原结合片段上的链内二硫化物的部分还原来达成约8的药物负载量和/或平均药物负载量，且其提供有益特性。在一些实施例中，小于约2的药物负载量和/或平均药物负载量可能产生不可接受地高水平的未经缀合的抗体种类，这些种类可与ADC竞争结合靶抗原和/或提供降低的治疗功效。在一些实施例中，大于约8的药物负载量和/或平均药物负载量可能产生不可接受地高水平的产物异质性和/或ADC聚集。大于约8的药物负载量和/或平均药物负载量还可能由于抗体或抗原结合片段稳定所需的一个或多个化学键的损失而影响ADC的稳定性。
本披露包括产生所述ADC的方法。简言之，在一些实施例中，ADC包含作为该抗体或抗原结合片段的抗体或抗原结合片段、药物部分(例如，剪接调节剂)以及接合该药物部分和该抗体或抗原结合片段的接头。在一些实施例中，可使用具有用于共价连接至药物部分以及共价连接至抗体或抗原结合片段的反应性官能团的接头来制备ADC。例如，在一些实施例中，抗体或抗原结合片段的半胱氨酸硫醇可与接头或药物-接头中间体的反应性官能团(例如，马来酰亚胺部分，例如MC)一起形成键以制造ADC。ADC的生成可通过技术人员已知的任何技术来实现。
在一些实施例中，本披露提供了产生ADC的方法，该方法通过在允许缀合的条件下使本文所述的抗体或抗原结合片段与连接至剪接调节剂的接头反应来进行。接头-剪接调节剂复合物在接触抗体或抗原结合片段之前可经受或可不经受纯化步骤。
在一些实施例中，本披露提供了产生ADC的方法，该方法通过在允许缀合的条件下使本文所述的抗体或抗原结合片段与接头和剪接调节剂反应来进行。在一些实施例中，该方法包括使抗体或抗原结合片段与接头和剪接调节剂顺序地反应，其中首先使抗体或抗原结合片段与接头反应形成抗体-接头中间体，然后使抗体-接头中间体与剪接调节剂反应。抗体-接头中间体在接触剪接调节剂之前可经受或可不经受纯化步骤。在一些实施例中，该方法包括使抗体或抗原结合片段与接头和剪接调节剂同时反应。在此方法中，在一些实施例中，抗体或抗原结合片段接触一种反应混合物中的接头和剪接调节剂，这允许在抗体或抗原结合片段与接头之间以及接头与剪接调节剂之间同时形成共价键。这种产生ADC的方法可以包括以下反应，其中抗体或抗原结合片段在接头添加至反应混合物中之前接触抗体或抗原结合片段，且反之亦然。
在本文披露的方法的一些实施例中，接头为可裂解接头。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Val-Ala-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。在一些实施例中，可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸。在一些实施例中，剪接调节剂包含D1。在一些实施例中，剪接调节剂包含D2。在一些实施例中，通过以下产生ADC：使抗体或抗原结合片段与接合至药物部分的接头(如ADL1-剪接调节剂(例如ADL1-D1))在允许缀合的条件下反应。
根据上文所述的方法制备的ADC可经受纯化步骤。纯化步骤可涉及本领域中已知用于纯化蛋白质的任何生物化学方法或其任何方法组合。这些方法包括但不限于切向流过滤(TFF)、亲和色谱法、离子交换色谱法、基于电荷或等电点的任何色谱法、混合模式色谱法(例如，CHT(陶瓷羟磷灰石))、疏水相互作用色谱法、尺寸排阻色谱法、透析、过滤、选择性沉淀或其任何组合。
药物组合物
在一些实施例中，本披露进一步提供了药物组合物，其包含本文披露的一种或多种抗体、抗原结合片段、缀合物和/或ADC以及至少一种药学上可接受的载体。
合适的载体包括在与治疗性组合物组合时保持治疗性组合物的抗癌功能且一般不可与患者免疫系统反应的任何材料。药学上可接受的载体包括生理上兼容的任何及所有溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载体的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、组氨酸、右旋糖、甘油、乙醇、甲磺酸盐等以及其组合中的一种或多种。在一些实施例中，组合物中包括等张剂，例如，糖、多元醇(如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠。药物可接受的载体可进一步包含少量辅助物质，如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增加抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC的保存期或有效性。
在一些实施例中，本文所述的药物组合物包含本文披露的抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC的多个拷贝。在一些实施例中，药物组合物包含本文披露的ADC的多个拷贝，其中组合物中ADC的平均p为约2至约8。在一些实施例中，组合物中ADC的平均p为约4。
在一些实施例中，本文所述的药物组合物包含至少一种另外的药剂。在一些实施例中，药物组合物可以包含一种或多种另外的治疗剂，例如，一种或多种能够治疗表达BCMA的癌症的药剂。此类治疗剂的非限制性实例包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂和γ分泌酶抑制剂。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗剂包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂、和/或γ分泌酶抑制剂。
治疗用途和组合物
本文披露了使用所披露的抗体、抗原结合片段、缀合物(例如，ADC)、和/或药物组合物治疗受试者的癌症或其他增殖性病症(例如，涉及BCMA异常表达的那些)的方法。抗体、抗原结合片段和/或ADC可以单独施用或与一种或多种另外的治疗剂组合施用，并且可以以任何药学上可接受的配制品、剂量和给药方案施用。可以评估抗体、抗原结合片段和/或ADC治疗功效的毒性以及功效指标，并相应地进行调整。功效量度包括但不限于体外或体内观测到的细胞生长抑制和/或细胞毒性作用、肿瘤体积减小、肿瘤生长抑制和/或延长的存活期。
确定抗体、抗原结合片段、和/或ADC是否对细胞发挥细胞生长抑制和/或细胞毒性作用的方法是已知的。例如，抗体、抗原结合片段、和/或ADC的细胞毒性或细胞生长抑制活性可通过以下测量：使表达抗体、抗原结合片段、和/或ADC的靶蛋白的哺乳动物细胞暴露于细胞培养基中；培养细胞达约6小时至约6天的时段；以及测量细胞活力。基于细胞的体外测定可用于测量抗体、抗原结合片段、和/或ADC的活力、增殖、细胞毒性和细胞凋亡诱导(半胱天冬酶激活)。对癌细胞的这些影响中的任一者的测定可以指示，抗体、抗原结合片段、和/或ADC可用于治疗癌症。
例如，可以使用
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2.0发光细胞活力测定法来测量细胞活力。细胞活力还可以例如通过测定细胞中染料(如中性红、锥虫蓝、结晶紫或ALAMARTM蓝)的吸收来测量(参见，例如，Page等人(1993)Intl.J.Oncology[国际肿瘤学杂志]3:473-6)。在此类测定中，在含有染料的培养基中孵育细胞，洗涤细胞，且以分光亮度法测量反映细胞对染料的吸收的剩余染料。在一些实施例中，使用结晶紫测定法评估所制备的抗体、抗原结合片段、和/或ADC的体外效力和/或细胞毒性。结晶紫是一种三芳基甲烷染料，可积聚在活细胞的细胞核中。在该测定中，使细胞暴露于抗体、抗原结合片段、和/或ADC或对照剂一段时间，然后用结晶紫染色细胞，用水充分洗涤，然后用1％SDS溶解并通过分光光度法读取。还可使用蛋白质结合性染料磺酰罗丹明B(SRB)来测量细胞毒性(Skehan等人(1990)J Natl CancerInst.[美国癌症研究所杂志]82:1107-12)。
为测定细胞毒性，可测量坏死或细胞凋亡(程序性细胞死亡)。坏死通常伴随质膜渗透性的增加、细胞膨胀和质膜破裂。细胞凋亡的典型特征是膜起泡、细胞质凝聚和内源性核酸内切酶的激活。细胞凋亡可例如通过测量DNA断裂来定量。用于定量体外测定DNA断裂的商业测光方法是可用的。此类测定法的实例(包括TUNEL(其检测掺入片段化DNA中的标记核苷酸)和基于ELISA的测定法)在Biochemica[生物化学](1999)第2期,第34-37页(罗氏分子生物化学公司(Roche Molecular Biochemicals))中有所描述。
细胞凋亡还可通过测量细胞中的形态变化来测定。例如，如同坏死一样，质膜完整性的损失可通过测量对某些染料(例如，荧光染料，如吖啶橙或溴化乙锭)的吸收来测定。用于测量凋亡细胞数目的示例性方法已由Duke和Cohen,Current Protocols in Immunology[免疫学实验指南](Coligan等人,编辑(1992)第3.17.1-3.17.16页)描述。细胞还可被DNA染料(例如，吖啶橙、溴化乙锭或碘化丙锭)标记且观测细胞的沿内部核膜的染色体凝聚和边聚。可经测量以确定细胞凋亡的其他形态变化包括例如细胞质凝聚、增加的膜起泡和细胞收缩。
还可评估所披露的ADC的旁观者杀伤活性。旁观者杀伤活性可例如通过采用两个细胞系的测定法来测定，这两个细胞系中的一个对靶抗原呈阳性，一个对靶抗原呈阴性。在某些实施例中，测定法的设计允许仅追踪靶标阴性细胞。在某些实施例中，将细胞在以下三个条件下铺板：(i)单独的靶标阴性细胞(加标签或经标记)；(ii)单独的靶标阳性细胞；(iii)靶标阴性细胞与靶标阳性细胞的共培养物。随后，用ADC治疗细胞，接着监测细胞毒性。当用
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试剂读取板时，可监测所有细胞群的活力。当用
Figure BDA0003978353560002032
试剂读取板时，仅加标签或经标记的靶标阴性细胞产生信号。靶标阴性细胞与靶标阳性细胞混合时的杀伤指示旁观者杀伤，而在靶标阳性细胞不存在的情况下的靶标阴性细胞的杀伤指示脱靶杀伤。
在某些方面中，本披露的特征在于通过破坏RNA剪接来杀伤癌细胞或组织、抑制或调节癌细胞或组织的生长、或干扰癌细胞或组织的代谢的方法。该方法可用于RNA剪接破坏提供治疗效益的任何受试者。可能受益于破坏RNA剪接的受试者包括但不限于那些患有癌症(例如，表达BCMA的癌症)或有患癌症的风险的受试者。在一些实施例中，癌症为血液恶性肿瘤。在一些实施例中，癌症为B细胞恶性肿瘤、血液癌症(白血病)、浆细胞癌症(骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤)或淋巴结癌症(淋巴瘤)。在一些实施例中，癌症为淋巴样恶性肿瘤或髓样恶性肿瘤。在一些实施例中，癌症是浆细胞疾病或癌症，如多发性骨髓瘤、意义未明(或未知或不清楚)的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、浆细胞瘤(骨、髓外)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、浆细胞白血病和原发性淀粉样变性(AL)。在一些实施例中，癌症是另一种类型的造血细胞(包括多形核白细胞(或嗜中性粒细胞)、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、树突细胞、血小板、红细胞和自然杀伤细胞)癌症。在一些实施例中，癌症是浆细胞恶性肿瘤，其中浆细胞恶性肿瘤表达BCMA。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
在一些实施例中，本文所述的抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物可用于治疗多发性骨髓瘤。在一些实施例中，多发性骨髓瘤是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
在各种实施例中，所披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC可以与表达BCMA的任何细胞或组织接触和/或施用于表达BCMA的任何细胞或组织。示例性实施例包括抑制BCMA介导的细胞信号传导的方法或杀伤细胞的方法。该方法可用于表达BCMA的任何细胞或组织，如癌细胞或转移性病变。表达BCMA的细胞的非限制性实例包括浆细胞、人骨髓瘤NCI-H929细胞(高细胞表面BCMA密度)、人骨髓瘤OPM2细胞(中等细胞表面BCMA密度)、人骨髓瘤MOLP8细胞(中等细胞表面BCMA密度)以及包含编码BCMA的重组核酸或其一部分的细胞。
示例性方法包括使细胞与有效量(例如，足以杀死细胞和/或足以看到癌症的生长速度减少或减缓的量)的抗体、抗原结合片段、和/或ADC接触的步骤。该方法可用于培养物(例如，体外、体内、离体或原位)中的细胞。例如，可在培养基中体外培养表达BCMA的细胞(例如，通过肿瘤或转移性病变的活检而收集的细胞；自血液或骨髓穿刺收集的细胞；来自已建立的癌细胞系的细胞；或重组细胞)，并且可通过将抗体、抗原结合片段、和/或ADC添加至培养基中来影响接触步骤。在一些实施例中，该方法将导致对表达BCMA的细胞(特别包括表达BCMA的癌细胞)的杀伤。可替代地，在一些实施例中，抗体、抗原结合片段、和/或ADC可以通过任何合适的施用途径(例如，静脉内、皮下、或与癌细胞或组织直接接触)施用于受试者以在体内产生作用。
可以在合适的动物模型中评估所披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC治疗性组合物的体内作用。例如，可使用异种癌症模型，其中将癌症外植体或所传代的异种移植组织引入免疫受损动物(如裸小鼠或SCID小鼠)中(Klein等人(1997)Nature Med.[自然医学]3:402-8)。可使用测量对肿瘤形成、肿瘤消退或转移等的抑制的测定法预测功效。还可使用体内测定法，这些体内测定法评估通过诸如细胞凋亡等机制进行的肿瘤死亡促进。在一些实施例中，可检查来自用治疗性组合物治疗的荷瘤小鼠的异种移植物是否存在细胞凋亡灶点且与未经治疗的对照荷异种移植物小鼠进行比较。在经治疗的小鼠的肿瘤中发现的细胞凋亡灶点的程度提供了关于组合物治疗功效的指示。
本文进一步提供了治疗癌症的方法。出于治疗目的，可以将本文披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC施用于受试者(例如，非人哺乳动物或人)。在一些实施例中，这些方法包括向患有或疑似患有癌症的受试者施用治疗有效量的抗体、抗原结合片段、和/或ADC，该抗体、抗原结合片段、和/或ADC结合所表达的、易于结合的、或定位于癌细胞表面上的抗原(例如，BCMA)。在一些实施例中，将抗体、抗原结合片段、和/或ADC配制在本文披露的药物组合物中。
在一些实施例中，本披露提供了将剪接调节剂递送至表达BCMA的细胞的方法，该方法包括使剪接调节剂与免疫特异性结合BCMA表位的抗体或抗原结合片段缀合以及使细胞暴露于ADC。表达BCMA(针对其，示出了本披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC)的示例性癌细胞包括多发性骨髓瘤细胞、弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞、套细胞淋巴瘤细胞、浆母细胞性淋巴瘤细胞、浆母细胞性骨髓瘤细胞和伯基特淋巴瘤细胞。
在一些实施例中，本披露提供了治疗患有或疑似患有癌症的受试者的方法，该方法通过向受试者施用治疗有效量和/或治疗有效方案的本文所述抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物中的任一种来进行。
在一些实施例中，本披露提供了减少或减慢癌细胞群的生长的方法，该方法通过向受试者施用治疗有效量和/或治疗有效方案的本文所述抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物中的任一种来进行。在一些实施例中，抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物的施用使癌细胞群减少至少约10％、至少约20％、至少约50％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％。在一些实施例中，抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物的施用使癌细胞群的生长减慢至少约10％、至少约20％、至少约50％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％。
在一些实施例中，用本文所述的抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物进行的治疗足以减少或减慢癌细胞群的生长、减少或抑制肿瘤的生长、减少转移性病变的数量或大小、减少肿瘤负荷、减少原发性肿瘤负荷、减少侵袭性、延长存活时间、和/或维持或改善受试者的生活质量。在一些实施例中，当单独施用时，癌细胞群和/或肿瘤对用ADC中的抗体或抗原结合片段(例如，抗BCMA抗体)进行的治疗具有抗性或难治性，和/或当单独施用时，癌细胞群和/或肿瘤对用ADC中的剪接调节剂药物部分(例如，本文所述的剪接调节剂)进行的治疗具有抗性或难治性。
此外，本披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC可以施用于出于兽用目的或作为人类疾病的动物模型的非人哺乳动物。就后者而言，此类动物模型可用于评估所披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC的治疗功效(例如，测试剂量和施用时程)。
本文进一步提供了所披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC的治疗用途，例如在治疗癌症中的用途。在一些实施例中，本披露提供了本文所述的抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物，其用于治疗患有或疑似患有癌症(例如，表达BCMA的癌症)的受试者。在一些实施例中，本披露提供了本文所述的抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物在治疗患有或疑似患有癌症(例如，表达BCMA的癌症)的受试者中的用途。在一些实施例中，本披露提供了本文所述的抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物在制造用于治疗患有或疑似患有癌症(例如，表达BCMA的癌症)的受试者的药物的方法中的用途。用于鉴定患有表达靶抗原(例如，BCMA)的癌症的受试者的方法(如本文披露的那些)可用于鉴定适合用所披露的抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物治疗的患者。
本文进一步提供了所披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC的治疗用途，例如，用于确定患有或疑似患有癌症(例如，表达BCMA的癌症)的受试者是否会对用靶向BCMA的药剂(例如，本文所述的抗体、抗原结合片段、ADC、和/或药物组合物)进行的治疗有应答。可以评估受试者的样品中靶抗原的水平(例如，表达BCMA的细胞的水平)以帮助确定最有效的给药方案等。在一些实施例中，该方法包括提供来自受试者的生物样品；使样品与本文披露的抗体或抗原结合片段接触；以及检测抗体或抗原结合片段与样品中的一种或多种癌细胞的结合。在一些实施例中，一种或多种癌细胞表达BCMA。在一些实施例中，癌症表达BCMA。在一些实施例中，癌症是浆细胞恶性肿瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
示例性生物样品包括组织或体液，如炎性渗出液、血液、血清、肠液、粪便、肿瘤活检或骨髓穿刺样品。在一些实施例中，生物样品是血液样品或骨髓穿刺样品。在一些实施例中，血液样品是血液、血液成分、或从血液或血液成分中获得的一种或多种细胞。在一些实施例中，生物样品(例如，组织和/或体液)从患有或疑似患有癌症(例如，表达BCMA的癌症)的受试者获得。在一些实施例中，合适的免疫学方法可用于检测和/或测量样品中靶抗原(例如，BCMA)的蛋白质表达。此类评估还在整个疗法中用于监测目的，和/或可与其他参数的评估组合用于衡量治疗成功性。
在一些实施例中，本披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC可用作治疗剂，例如用于治疗、预防和/或诊断表达BCMA的癌症。表达BCMA的示例性癌症包括但不限于多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤和伯基特淋巴瘤。在一些实施例中，癌症是浆细胞恶性肿瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。在一些实施例中，浆细胞恶性肿瘤或癌症包括活跃分裂的细胞、休眠细胞或两者。在一些实施例中，所述抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC复合物保留不依赖于细胞增殖状态的细胞毒性和/或细胞生长抑制活性。在一些实施例中，所述抗体、抗原结合片段、缀合物、和/或ADC复合物可靶向活跃分裂和休眠的细胞(例如，活跃分裂、不分裂、和/或缓慢分裂的骨髓瘤细胞)。
在本文披露的方法和用途的一些实施例中，本披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC与一种或多种另外的治疗剂组合施用或使用。此类示例性治疗剂包括但不限于BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂和γ分泌酶抑制剂。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗剂包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂、和/或γ分泌酶抑制剂。在一些实施例中，这些治疗(例如，本披露的抗BCMA抗体、抗原结合片段、和/或ADC，以及至少一种另外的治疗剂(例如，BCL2抑制剂等))包括在同一组合物中。此类组合物可以任何适当形式且通过任何合适途径施用。在其他实施例中，在分开的组合物中以任何适当形式且通过任何合适途径施用这些治疗(例如，本披露的抗BCMA抗体、抗原结合片段、和/或ADC，以及至少一种另外的治疗剂(例如，BCL2抑制剂等))。例如，包含本披露的抗BCMA抗体、抗原结合片段、和/或ADC的组合物和包含另外的治疗剂的组合物可以在不同时间点以任何顺序同时或顺序施用；在任一情况下，其施用时间应充分地接近以便提供所需治疗性效果或预防性效果。
在一些实施例中，将本文披露的方法和用途中使用的治疗性组合物配制成药物组合物，该药物组合物包含适用于所需递送方法的药学上可接受的稀释剂、载体和/或赋形剂。示例性实施例为包含本披露的抗体或抗原结合片段、和/或ADC以及药学上可接受的载体的药物组合物。
治疗性配制品可溶解且经由能够将治疗性组合物递送至癌症的任何途径施用。潜在有效的施用途径包括但不限于静脉内、肠胃外、腹膜内、肌内、瘤内、真皮内、器官内、正位等。治疗性蛋白制剂可冻干且以无菌粉末形式储存在例如真空下，且随后在注射之前于抑菌水(含有例如苯甲醇防腐剂)或无菌水中重构。治疗性配制品可包含抗体、抗原结合片段、和/或ADC，或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸盐)。
在一些实施例中，每天、每两个月或其间的任何时间段向患者施用抗体、抗原结合片段、和/或ADC。使用前述方法治疗癌症的剂量和施用方案将随方法和靶标癌症而变化，且通常依赖于本领域中所了解的其他因素。
各种递送系统是已知的且可用于施用一种或多种本披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC。施用抗体、抗原结合片段、和/或ADC的方法包括但不限于肠胃外施用(例如，真皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下)、硬膜外施用、瘤内施用和黏膜施用(例如，鼻内和经口途径)。另外，可采用肺部施用，例如通过使用吸入器或喷雾器以及具有气雾剂的配制品。参见，例如，用于肺部施用的组合物和方法描述于美国专利号6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078；以及国际公开号WO 1992/019244、WO 1997/032572、WO 1997/044013、WO 1998/031346和WO 1999/066903中。可以通过任何方便的途径施用抗体、抗原结合片段、和/或ADC，例如通过输注或推注(bolusinjection)，或通过经由上皮或皮肤黏膜内层(例如，口腔黏膜、直肠和肠黏膜等)吸收。施用可为全身或局部的。在本文披露的方法和用途的一些实施例中，用本披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC进行的治疗涉及经由可接受的施用途径的单次推注剂量或重复剂量的抗体、抗原结合片段、和/或ADC制剂。
本文披露的治疗性组合物可在制造和储存条件下无菌且稳定。在一些实施例中，抗体、抗原结合片段、和/或ADC、或药物组合物中的一种或多种以干燥灭菌冻干粉末或无水浓缩物形式供应于气密密封式容器中且可重构(例如，用水或盐水)至适当浓度以向受试者施用。在一些实施例中，治疗剂或药物组合物中的一种或多种以至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少75mg或至少100mg或其间任何量的单位剂量以干燥无菌冻干粉末形式供应于气密密封式容器中。在一些实施例中，经冻干的抗体、抗原结合片段、和/或ADC或药物组合物在原始容器中在2℃与8℃之间储存。在一些实施例中，抗体、抗原结合片段、和/或ADC、或其药物组合物中的一种或多种以液体形式供应于气密密封式容器中，例如，指示药剂的量和浓度的容器中。在一些实施例中，液体形式的所施用的组合物供应于具有至少0.25mg/mL、至少0.5mg/mL、至少1mg/mL、至少2.5mg/mL、至少5mg/mL、至少8mg/mL、至少10mg/mL、至少15mg/mL、至少25mg/mL、至少50mg/mL、至少75mg/mL或至少100mg/mL ADC的气密密封式容器中。液体形式可在原始容器中在2℃与8℃之间储存。
在一些实施例中，所披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC可掺入适用于肠胃外施用的药物组合物中。可注射溶液可由在弗林特(flint)或琥珀色小瓶、安瓿或预填充注射器或其他已知递送或储存装置中的液体或冻干剂型构成。本文所述的治疗性组合物可呈多种形式。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如，可注射溶液和可输注溶液)、分散液或悬浮液、片剂、丸剂、粉末剂、脂质体和栓剂。形式取决于预期施用模式和治疗应用。
在一些实施例中，可通过使来自受试者的肿瘤样品与抗体、抗原结合片段、和/或ADC接触且评估肿瘤生长速率或体积来评估抗体、抗原结合片段、和/或ADC的功效。在一些实施例中，当已确定抗体、抗原结合片段、和/或ADC有效时，可将其施用至受试者。
以上治疗方法可与多种额外手术、化学疗法或放射疗法方案中的任一种组合。在一些实施例中，本文披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC与一种或多种另外的治疗剂(例如，一种或多种化学治疗剂)共配制和/或共施用。在一些实施例中，第一治疗的递送在第二治疗的递送开始时仍存在，于是存在重叠。在一些实施例中，第一治疗和第二治疗同时开始。这些类型的递送可以称为“同时(simultaneous/concurrent)”或“伴随”递送。在其他实施例中，第一治疗的递送在第二治疗的递送开始之前结束。这种类型的递送可以称为“连续”或“顺序”递送。在一些实施例中，同时施用本披露的抗BCMA抗体、抗原结合片段、和/或ADC以及至少一种另外的治疗方案和/或药剂。在一些实施例中，顺序施用本披露的抗BCMA抗体、抗原结合片段、和/或ADC以及至少一种另外的治疗方案和/或药剂。
化学治疗剂的非限制性实例包括烷基化剂，例如氮芥、乙撑亚胺化合物和烷基磺酸酯；抗代谢物，例如叶酸、嘌呤或嘧啶拮抗剂；抗有丝分裂剂，例如抗微管蛋白剂，如艾日布林(eribulin)或甲磺酸艾日布林(HalavenTM)、长春花生物碱(vinca alkaloid)和奥瑞他汀(auristatin)；细胞毒性抗生素；损害或干扰DNA表达或复制的化合物，例如DNA小沟结合剂；以及生长因子受体拮抗剂。在一些实施例中，化学治疗剂可为细胞毒性剂或细胞生长抑制剂。细胞毒性剂的实例包括但不限于抗有丝分裂剂，如艾日布林或甲磺酸艾日布林(HalavenTM)、奥瑞他汀(例如，单甲基奥瑞他汀E(MMAE)、单甲基奥瑞他汀F(MMAF))、美登木素生物碱(例如，美登素)、尾海兔素、多斯他汀(duostatin)、念珠藻素、长春花生物碱(例如，长春新碱、长春花碱)、紫杉烷、紫杉醇和秋水仙碱；蒽环霉素(例如，道诺霉素、阿霉素、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxyanthracindione))；细胞毒性抗生素(例如，丝裂霉素、放线菌素、倍癌霉素(例如，CC-1065)、金霉素(auromycin/duomycin)、卡奇霉素(calicheamicin)、内霉素、酚霉素)；烷基化剂(例如，顺铂)；嵌入剂(例如，溴化乙锭)；拓朴异构酶抑制剂(例如，依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide))；放射性同位素，如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212或Bi213、P32以及镥放射性同位素(例如Lu177)；以及细菌、真菌、植物或动物起源的毒素(例如，蓖麻毒素(例如蓖麻毒素A链)、白喉毒素、假单胞菌外毒素A(例如PE40)、内毒素、有丝分裂素、康普瑞汀(combrestatin)、局限曲菌素、白树素(gelonin)、α-帚曲菌素、相思子毒素(例如，相思子毒素A链)、莫迪素(例如，莫迪素A链)、麻疯树逆境蛋白(curicin)、巴豆毒素、肥皂草抑制剂(Sapaonaria officinalisinhibitor)、糖皮质素)。在一些实施例中，本文披露的抗体、抗原结合片段、和/或ADC与一种或多种BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂和/或γ分泌酶抑制剂共同配制和/或共同施用。
在以下实施例中，用于本文所述的实验室应用和治疗性应用的试剂盒处于本披露的范围内。此类试剂盒可包含经分隔以容纳一个或多个容器(如小瓶、管等)的载架、封装物或容器，这些容器中的每一者均包含待用于本文披露的方法中的独立元素中的一种以及含有诸如本文所述用途的使用说明书的标签或插页。试剂盒可包含含有药物部分的容器。本披露还提供了封装在指示药剂的量的气密密封式容器(如安瓿或药囊)中的抗体、抗原结合片段、和/或ADC、或其药物组合物中的一种或多种。
试剂盒可包含如上所述的容器以及与其相联的一个或多个其他容器，该一个或多个其他容器包含：自商业及使用者观点看合乎需要的材料，包括缓冲剂、稀释剂、过滤器、针、注射器；载架、封装、容器、小瓶、和/或列出内容物和/或使用说明的管标签；以及具有使用说明的包装插页。
标签可存在于容器上或容器中以指示组合物用于特定疗法或非治疗性应用，如预后、预防、诊断或实验室应用。标签还可指示关于体内或体外用途(如本文所述的用途)的指导。在包括在试剂盒中或试剂盒上的插页和/或标签上还可包括指导和或其他信息。标签可处于容器上或与容器相联。当将形成标签的字母、数字或其他字符模制或蚀刻至容器自身中时，标签可处于容器上。当标签存在于还固持容器的接受器或载架内时，标签可例如以包装插页形式与容器相联。标签可指示组合物用于诊断或治疗病症(如本文所述的癌症)。
实例
以下实例提供了本披露的说明性实施例。本领域普通技术人员将认识到可以在不改变本披露的精神或范围的情况下进行多种修改和变型。此类修改和变型涵盖在本披露的范围内。这些实例绝不限制本披露。
实例1
描述了具有表12-14中所示结构的有效载荷、接头和可缀合接头-有效载荷(接头-药物，即L-D)复合物的合成方法。使用可结合接头-有效载荷来制备抗体-药物缀合物(ADC)。示例性ADC描述于实例4-6中。
1.1试剂和材料
所描述的可缀合接头-有效载荷可使用本文所述的反应和技术来制备。在描述以下所描述的合成方法时，应理解，除非另外指示，否则可选择或修改所有所提出的反应条件(包括溶剂、反应氛围、反应温度、实验持续时间和处理程序的选择)来用作该反应的标准条件。
使用Waters自动纯化系统和XTerra MS C18柱(5μm，19mm x 100mm)在酸性流动相条件下进行液相色谱法-质谱法(LC/MS)。使用Varian仪器(安捷伦科技公司(AgilentTechnologies))在400MHz下记录核磁共振(NMR)谱。使用Teledyne Isco CombiflashRf200d进行柱色谱法。使用由美国特拉华州步琦公司(BUCHI Corporation,DE,USA)制造并根据制造商的说明使用的Büchi旋转蒸发器，或由英国Genevac公司(Genevac Ltd.,UnitedKingdom)制造并根据制造商的说明使用的Genevac离心蒸发器进行溶剂去除。
在此实例中，除非另有说明，(i)温度以摄氏度(℃)给出；在室温或环境温度进行操作，即在18℃-25℃的范围内进行操作；(ii)有机溶液经无水硫酸钠干燥，除非另有说明；使用旋转蒸发器在减压(4.5-30mmHg)下在高达60℃的浴温下进行有机溶剂的蒸发；(iii)色谱法是指硅胶快速色谱法；在硅胶板上进行薄层色谱(TLC)；(iv)通常，通过TLC或LC/MS跟踪反应过程，并且给出反应时间仅用于说明；(v)最终产物具有令人满意的质子核磁共振(NMR)谱和/或质谱数据；(vi)给出产率仅用于说明；如果需要更多材料，则重复制备过程；(vii)当给出时，NMR数据为主要诊断性质子的δ值形式，以相对于作为内标的四甲基硅烷(TMS)的百万分之一(ppm)给出，并且在400MHz下在CD3OD中测定，除非另有说明；(viii)化学符号具有其通常的含义；(ix)溶剂比率以体积比体积(v/v)方式给出；(x)“ISCO”是指使用预填充硅胶柱(12g、40g等)的正相快速柱色谱，该柱根据制造商的说明使用并从美国内布拉斯加州特利丹ISCO公司(Teledyne ISCO,Inc.,NE,USA)获得；(xi)示例性化合物是根据IUPAC命名法命名的；以及(xii)使用美国马萨诸塞州珀金埃尔默公司(erkin-ElmerInc.,MA,USA)生产的Chemdraw Professional 17.0.0.206生成示例性化合物的IUPAC名称。
术语/缩写：如本文所使用，术语“惰性化”是指用基本上不含水分的惰性气体(如氮气或氩气)置换反应器(例如，反应容器、烧瓶、玻璃反应器)中的空气。表11列出了本文使用的示例性缩写。
表11.缩写
缩写 含义
Ala 丙氨酸
Asp 天冬酰胺
Cit 瓜氨酸
DCM 二氯甲烷
DCE 1,2-二氯乙烷
DMAP N,N-二甲基-4-氨基吡啶
DMF N,N'-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
EtOAc 乙酸乙酯
Glu 谷氨酸
HPLC 高效液相色谱法
LC/MS 液相色谱法-质谱法
Mc 马来酰亚胺基己酰基
MeOH 甲醇
pABC 对氨基苄氧基羰基
PNP 对硝基苯酚
PPTS 对甲苯磺酸吡啶鎓
RT 室温
TEA 三乙胺
TES 三乙基甲硅烷基
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
Val 缬氨酸
使用以下缩写表示多重性：s＝单峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quint＝五重峰，sxt＝六重峰，m＝多重峰，dd＝双二重峰，ddd＝双重双二重峰，dt＝双三重峰，br s＝宽单峰。
LC/MS：流动相＝A(在H2O中的0.1％甲酸)和B(在乙腈中的0.1％甲酸)。梯度＝1.8min内B 5％至95％。柱＝Waters Acquity BEH C18柱(1.7μm，2.1x50mm)，根据制造商的说明使用并从美国马萨诸塞州沃特世公司(Waters Corporation,MA,USA)获得。
HPLC：使用Waters质量导向自动纯化系统和Waters 19x100mm XBridge 5微米CSH18柱在酸性条件下进行制备型LC/MS，该柱根据制造商的说明使用并从美国马萨诸塞州沃特世公司获得。流动相＝A(在H2O中的0.1％甲酸)和B(在乙腈中的0.1％甲酸)。
参考文献：美国专利号7,884,128和7,816,401描述了合成普拉二烯内酯B和D的示例性方法，并且将这些文献各自关于这些方法通过引用并入本文。普拉二烯内酯B和D的合成还可使用Kanada等人((2007)Angew.Chem.Int.Ed.[应用化学国际版]46:4350-5)所述的方法进行。Kanada等人和国际公开号WO 2003/099813描述了自普拉二烯内酯D(WO 2003/099813的11107D)合成E7107(D11)(WO2003/099813的化合物45)的示例性方法。对应的美国专利号为Kotake等人的7,550,503。将这些参考文献的每一个关于所述合成方法并入本文。
表12.示例性药物部分(有效载荷)的结构
Figure BDA0003978353560002171
Figure BDA0003978353560002181
表13.示例性接头的结构
Figure BDA0003978353560002182
Figure BDA0003978353560002191
表14.示例性可缀合接头-有效载荷(L-D)复合物的结构
Figure BDA0003978353560002192
Figure BDA0003978353560002201
Figure BDA0003978353560002211
Figure BDA0003978353560002221
Figure BDA0003978353560002231
Figure BDA0003978353560002241
1.2概述-通用程序1
Figure BDA0003978353560002242
方案1
步骤1：(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-羟基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯。在室温，向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯(1.7g，3.2mmol)在1,2-二氯乙烷(31.5mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(4.40mL，31.5mmol)和DMAP(390mg，3.2mmol)。添加氯三乙基硅烷(2.1mL，12.6mmol)，并将反应混合物搅拌16小时。添加盐水，并将反应混合物搅拌30min。将有机层分离，并将水层用DCM萃取(3X)。将有机层合并，干燥，过滤，浓缩至干，并通过硅胶色谱法(用在己烷中的0-100％EtOAc洗脱)纯化，得到标题产物。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δppm0.57-0.67(m,18H),0.80-0.90(m,10H),0.93-1.01(m,28H),1.20-1.23(m,4H),1.36-1.42(m,4H),1.43-1.54(m,4H),1.57(s,3H),1.90(m,1H),2.10(m,4H),2.38-2.53(m,3H),2.57(m,1H),2.82-2.87(m,1H),3.74(m,1H),3.81-3.89(m,1H),4.99(m,1H),5.06-5.11(m,1H),5.60-5.75(m,3H),6.11(m,1H),6.42(m,1H)。
步骤2：(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((R)-1-乙氧基乙氧基)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((S)-1-乙氧基乙氧基)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯。向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-羟基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯(4.3g，4.8mmol)在THF(60mL)中的搅拌溶液中添加乙烯基乙醚(18.4mL，192mmol)，然后添加PPTS(0.3g，1.0mmol)。将反应混合物在室温搅拌15小时。添加TEA(0.6mL)，并将混合物在室温搅拌5min。将EtOAc(60mL)和饱和NaHCO3水溶液添加至混合物中。将有机层分离，干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的0-100％EtOAc洗脱)纯化，得到呈非对映异构体的混合物的(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((S)1-乙氧基乙氧基)-2-((R,2E,4E)-6-羟基-6-甲基-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((R)1-乙氧基乙氧基)-2-((R,2E,4E)-6-羟基-6-甲基-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δppm 0.48-0.60(m,18H),0.73-0.94(m,37H),1.10-1.24(m,8H),1.26-1.53(m,13H),1.62-1.70(m,3H),1.82(m,1H),1.96-2.03(m,3H),2.30-2.52(m,4H),2.74-2.79(m,1H),3.41-3.68(m,3H),3.71-3.79(m,1H),4.90-5.12(m,3H),5.51-5.72(m,3H),6.03(m 1H),6.34(m,1H)。
步骤3：(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((R)-1-乙氧基乙氧基)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((S)-1-乙氧基乙氧基)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯。向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((R)-1-乙氧基乙氧基)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((S)1-乙氧基乙氧基)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯(2.6g，2.6mmol)在MeOH(25mL)中的溶液中添加碳酸钾(0.7g，5.3mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并且用水和盐水洗涤。将有机层干燥，过滤，并浓缩至干。将所得物质(2.45g，2.6mmol)溶解在DCM(30mL)中。将DIPEA(2.3mL，13.2mmol)、4-硝基苯基氯甲酸酯(1.6g，4.0mmol)和DMAP(0.130g，1.1mmol)添加至反应混合物中。将反应混合物在室温搅拌6小时并且然后用DCM稀释。将混合物用盐水洗涤，干燥，过滤，并浓缩至干。将获得的残余物溶解在DCM(30mL)中。添加DIPEA(2.3mL，13.2mmol)和哌嗪(0.7g，7.9mmol)，并且将反应混合物在室温搅拌4小时。将反应混合物用DCM稀释并用水和盐水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发至干。将获得的残余物使用NH-硅胶色谱法(ISCO
Figure BDA0003978353560002271
胺官能化柱)(用在DCM中的0-10％MeOH洗脱)纯化，得到呈非对映异构体的混合物的标题化合物。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δppm 0.57-0.69(m,19H)0.80-1.01(m,39H)1.16-1.41(m,15H)1.44-1.62(m,7H)1.73(m,4H)1.83-1.96(m,4H)2.38-2.61(m,4H)2.78-2.91(m,5H)3.05(s,1H)3.42-3.65(m,7H)3.75(td,1H)3.84(br s,1H),4.97-5.08(m,3H),5.11-5.20(m,1H),5.60-5.79(m,3H),6.12(br d,1H),6.43(dd,1H),6.54(d,1H)8.18-8.29(m,1H)。LC/MS(ESI,m/z),1038.7[M+H]+。
步骤4：(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-羟基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯。向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((R)-1-乙氧基乙氧基)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-((S)-1-乙氧基乙氧基)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(970mg，0.7mmol)在THF(15mL)和水(5mL)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸水合物(208mg，1.1mmol)。将反应混合物在室温搅拌4小时并通过添加饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用DCM萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，然后干燥，过滤并浓缩至干，得到(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-羟基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯。将该物质不经进一步纯化即用于步骤5中。LC/MS(ESI,m/z),966.3[M+H]+。
步骤5：(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯。在-78℃，向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-羟基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(670mg，0.69mmol)在DCM(15mL)和DIPEA(15mL，85.9mmol)中的溶液中逐滴添加氟化氢-吡啶(CAS号62778-11-4，1.9mL，20.8mmol)。使反应混合物温热至室温并搅拌16小时。将所得混合物用DCM稀释并用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。将有机层干燥、过滤、在真空中浓缩，并通过NH-硅胶色谱法(ISCO
Figure BDA0003978353560002292
胺官能化柱)和HPLC纯化，得到(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δppm 0.86-0.93(m,6H),0.94-0.99(t,3H),1.24(s,3H),1.26-1.44(m,7H),1.47-1.65(m,5H),1.66-1.79(m,7H),1.82(br d,3H),2.45-2.67(m,4H),2.76(dd,1H),2.88(br d,3H),2.94-3.04(m,1H),3.66(br d,1H),3.72-3.82(m,1H),5.00-5.06(m,1H),5.17(d,1H),5.57-5.77(m,2H),5.85(d,1H),6.12(br d,1H),6.53(dd,1H)。LC/MS(ESI,m/z),623.6[M+H]+。
1.3ADL1-D1
1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(ADL1-D1)的合成：
Figure BDA0003978353560002291
方案2
向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(177mg，0.28mmol)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(50μL，0.27mmol)，然后添加4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯(200mg，0.27mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。将所得混合物浓缩至干并通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δppm 0.86-1.04(m,16H),1.22-1.42(m,7H),1.45-1.71(m,12H),1.75-1.82(m,4H),1.84-1.97(m,2H),2.04-2.14(m,1H),2.29(m,2H),2.49-2.64(m,3H),2.69(m,1H),2.92(m,1H),3.09-3.30(m,3H),3.35-3.41(m,1H),3.41-3.61(m,10H),3.68-3.84(m,1H),4.16-4.21(m,1H),4.52(dd,1H),4.86-4.99(m,1H)5.06 -5.13(m,3H),5.60(dd,1H),5.74(dd,1H),5.89(d,1H),6.15(d,1H),6.55(dd,1H),6.80(s,2H),7.34(m,2H),7.60(m,2H)。LC/MS(ESI,m/z),1222.6[M+H]+。
1.4ADL1-D2
1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(ADL1-D2)的合成：
Figure BDA0003978353560002311
方案3
步骤1：(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-6-乙酰氧基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二烷-4-烯-7-基哌嗪-1-甲酸酯。在20℃，向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-羟基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯(160mg，0.18mmol)在1,2-二氯乙烷(5mL)中的溶液中添加DMAP(32.7mg，0.27mmol)、三乙胺(0.75mL，5.36mmol)和4-硝基苯基氯甲酸酯(360mg，1.79mmol)。将反应混合物在40℃搅拌4天，然后在60℃搅拌2小时。然后将反应混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将水层用EtOAc萃取(2X)。将合并的有机萃取物依次用水和盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的0-100％EtOAc洗脱)纯化，得到呈区域异构体的混合物的(2S,3S,6S,7R,10R,E)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-6-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-7-基乙酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-7-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸酯。
向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-6-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-7-基乙酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-7-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基乙酸盐在DCM(1.0mL)中的搅拌溶液中添加哌嗪(0.447g，5.20mmol)和DIPEA(0.9mL，5.20mmol)。将所得浅黄色悬浮液在室温搅拌6小时。将所得混合物在真空中浓缩并通过硅胶色谱法(用在DCM中的0-10％MeOH洗脱)纯化，得到呈区域异构体的混合物的(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-6-乙酰氧基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-7-基哌嗪-1-甲酸酯。LC/MS(ESI,m/z),1008.1[M+H]+。
步骤2：(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯。向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯和(2S,3S,6S,7R,10R,E)-6-乙酰氧基-3,7-二甲基-2-((R,2E,4E)-6-甲基-6-((三乙基甲硅烷基)氧基)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((三乙基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)-12-氧代-10-((三乙基甲硅烷基)氧基)氧杂环十二烷-4-烯-7-基哌嗪-1-甲酸酯(1.09g，0.92mmol)在DCM(21.0mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(19.9mL，114.0mmol)。将反应混合物冷却至-78℃。将氟化氢-吡啶(CAS号62778-11-4，0.518g，5.23mmol)添加至反应混合物中，然后使反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将所得混合物在冰浴中冷却并添加饱和NaHCO3水溶液。将反应混合物用DCM萃取，并且将有机层干燥，过滤，并在真空中浓缩。将所得产物进行HPLC纯化，得到(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δppm 0.87-0.92(m,6H),0.94(t,3H),1.16-1.31(m,1H),1.35(s,3H),1.40-1.56(m,4H),1.59(s,3H),1.66(m,3H),1.76-1.80(m,3H),1.87(m,1H),2.05(s,3H),2.30-2.41(m,1H),2.50(d,2H),2.56-2.72(m,2H),2.90(td,1H),3.19(m,4H),3.50-3.59(m,1H),3.71(br s,4H),3.77-3.89(m,1H),5.05(dd,2H),5.65(dd,1H),5.76(dd,1H),5.88(d,1H),6.14(d,1H),6.53(dd,1H)。LC/MS(ESI,m/z),665.6[M+H]+。
步骤3：1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(ADL1-D2)。
Figure BDA0003978353560002341
使用(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯作为起始物质，使用1.3节中所述的程序制备标题化合物。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δppm 0.83-1.03(m,15H)1.20-1.38(m,7H)1.40-1.70(m,15H)1.71-1.81(m,4H)1.83-1.96(m,2H)2.01-2.14(m,4H)2.27(t,2H)2.32-2.43(m,1H)2.47-2.53(m,2H)2.55-2.65(m,1H)2.67(dd,1H)2.87-2.94(m,1H)3.05-3.25(m,2H)3.43-3.55(m,11H)3.73-3.85(m,1H)4.11-4.21(m,1H)4.46-4.53(m,1H)4.53-4.60(m,1H)5.05(dd,2H)5.09(s,2H)5.49(s,1H)5.64(dd,1H)5.76(dd,1H)5.87(d,1H)6.15(d,1H)6.53(dd,1H)6.79(s,2H)7.32(d,2H)7.58(d,2H)。LC/MS(ESI,m/z),1263.8[M+H]+。
1.5ADL22-D1
1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((2S,5S)-15-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-异丙基-4,7-二氧代-2-(3-脲基丙基)-10,13-二氧杂-3,6-二氮杂十五烷酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(ADL22-D1)的合成：
Figure BDA0003978353560002351
向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(14.2mg，0.023mmol)和4-((2S,5S)-15-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-异丙基-4,7-二氧代-2-(3-脲基丙基)-10,13-二氧杂-3,6-二氮杂十五烷酰胺基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯(17.9mg，0.023mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(8μL，0.046mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。将所得混合物通过反相快速色谱法(C18，H2O/乙腈/甲酸＝95/5/0.1至0/100/0.1)纯化，得到标题化合物。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ0.86-1.07(m,17H),1.17-1.32(m,5H),1.34-1.43(m,5H),1.47-1.70(m,8H),1.74-1.81(m,4H),1.85-1.98(m,2H),2.08-2.17(m,1H),2.50-2.63(m,5H),2.69(m,1H),2.88-2.94(m,1H),3.10-3.31(m,3H),3.43(m,1H),3.48-3.76(m,19H),3.77-3.83(m,1H),4.20-4.24(m,1H),4.49-4.55(m,1H),4.84-4.87(m,2H),4.90-4.99(m,3H),5.06-5.14(m,3H),5.60(dd,1H),5.74(dd,1H),5.89(d,1H),6.16(d,1H),6.55(dd,1H),6.83(s,2H),7.35(m,2H),7.63(m,2H),8.01(d,1H),8.25(m,1H)。LC/MS(ESI,m/z),1263.8[M+H]+。
1.6ADL22-D2
1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((2S,5S)-15-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-异丙基-4,7-二氧代-2-(3-脲基丙基)-10,13-二氧杂-3,6-二氮杂十五烷酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(ADL22-D2)的合成：
Figure BDA0003978353560002361
向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(12mg，0.018mmol)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中添加4-((2S,5S)-15-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-异丙基-4,7-二氧代-2-(3-脲基丙基)-10,13-二氧杂-3,6-二氮杂十五烷酰胺基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯(17mg，0.022mmol)和DIPEA(9.4μL，0.054mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。将所得混合物在真空中直接浓缩到硅胶上并通过硅胶色谱法(用在DCM中的0-20％MeOH洗脱)纯化，得到标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.73-0.89(m,17H),1.03-1.13(m,1H),1.21-1.25(m,4H),1.25-1.40(m,5H),1.42-1.47(m,4H),1.48,(br s,3H),1.69(s,4H),1.73-1.83(m,1H),1.99(s,2H),2.10-2.25(m,1H),2.36(br s,3H),2.40-2.48(m,2H),2.54-2.66(m,2H),2.72-2.80,(m,1H),2.88-3.08(m,2H),3.34-3.44(m,9H),3.44-3.48(m,3H),3.48-3.52(m,2H),3.52-3.59(m,3H),3.64-3.75(m,1H),4.24(s,1H),4.40(m,2H),4.62(m,1H),4.80-4.85(m,1H),4.90(m,2H),5.01(s,2H),5.40(s,2H),5.48-5.57(m,1H),5.66-5.76(m,1H),5.81-5.91(m,1H),5.94-6.01(m,1H),6.02-6.11(m,1H),6.36-6.45(m,1H),7.02(s,2H),7.27-7.33(m,2H),7.58(s,2H),7.81-7.89(m,1H),8.11(m,1H),9.96-10.02(m,1H)。LC/MS(ESI,m/z),1310.2[M+H]+。
1.7ADL6-D2
1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(ADL6-D2)的合成：
Figure BDA0003978353560002371
步骤1：1-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苄基)4-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)哌嗪-1,4-二甲酸酯。向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(35mg，0.053mmol)和(9H-芴-9-基)甲基((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸酯(43mg，0.06mmol)在DMF(530μL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(28μL，0.16mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min然后在真空中浓缩，并且然后干装载到硅胶上。将残余物通过硅胶色谱法纯化，得到1-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苄基)4-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)哌嗪-1,4-二甲酸酯。LC/MS(ESI,m/z),1228.0[M+Na]+。
步骤2：ADL6-D2。向1-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苄基)4-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(45mg，0.04mmol)在DMF(1.4mL)中的搅拌溶液中添加二乙胺(195μL，1.86mmol)。将反应混合物搅拌30min，用乙酸乙酯稀释，并在真空中浓缩以除去过量的二乙胺。将残余物溶解在DMF(1.4mL)中并将2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(17mg，0.06mmol)添加到反应混合物中，然后添加DIPEA(10μL，0.06mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将所得混合物在真空中浓缩，然后干装载到硅胶上。将残余物通过硅胶柱色谱法(用在DCM中的0-15％MeOH洗脱)纯化，得到标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.77(d,3H),0.79-0.89(m,15H),1.04-1.13(m,2H),1.15-1.20(m,5H),1.22(s,3H),1.24 -1.26(m,2H),1.30(m,4H),1.32-1.39(m,2H),1.45(s,5H),1.47-1.62(m,5H),1.67-1.71(m,3H),1.75-1.82(m,1H),1.90-1.99(m,4H),1.99-2.02(m,3H),2.06-2.25(m,3H),2.30-2.41(m,2H),2.59(s,2H),2.71-2.80(m,1H),3.64-3.74(m,2H),4.03(m,2H),4.16(m,1H),4.32-4.46(m,2H),4.79-4.97(m,2H),5.01(s,2H),5.52(m,1H),5.64-5.77(m,1H),5.85(m,1H),6.00-6.09(m,1H),6.41(m,1H),7.00(s,2H),7.30(m,2H),7.58(d,2H),7.80(d,1H),8.15(d,1H)。LC/MS(ESI,m/z),1200.4[M+Na]+。
1.8ADL21-D2
1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((R)-4-氨基-2-((R)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(ADL21-D2)的合成：
Figure BDA0003978353560002391
步骤1：1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((5S,8S,11S)-11-(2-氨基-2-氧代乙基)-1-(9H-芴-9-基)-5,8-二甲基-3,6,9-三氧代-2-氧杂-4,7,10-三氮杂十二烷-12-酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯。向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(75mg，0.11mmol)在DMF(1.1mL)中的搅拌溶液中添加(9H-芴-9-基)甲基((S)-1-(((S)-1-(((S)-4-氨基-1-((4-((((4硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1,4-二氧代丁-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸酯(86mg，0.11mmol)和DIPEA(59μL，0.34mmol)。将反应混合物在室温搅拌90min。将反应混合物在真空中浓缩并通过硅胶色谱法(用在DCM中的0-15％MeOH洗脱)纯化，得到1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((5S,8S,11S)-11-(2-氨基-2-氧代乙基)-1-(9H-芴-9-基)-5,8-二甲基-3,6,9-三氧代-2-氧杂-4,7,10-三氮杂十二烷-12-酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯。LC/MS(ESI,m/z),1293.4[M+H]+。
Figure BDA0003978353560002401
步骤2和3：1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((S)-4-氨基-2-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯。向1-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)4-(4-((5S,8R,11R)-11-(2-氨基-2-氧代乙基)-1-(9H-芴-9-基)-5,8-二甲基-3,6,9-三氧代-2-氧杂-4,7,10-三氮杂十二烷-12-酰胺基)苄基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(125mg，0.097mmol)在DMF(1.9mL)中的搅拌溶液中添加二乙胺(202μL，1.934mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释并浓缩以除去过量的二乙胺。将所得产物溶解在DMF(1.9mL)中并将2,5-二氧代吡咯烷-1-基-6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(36mg，0.12mmol)和DIPEA(42μL，0.24mmol)添加到反应混合物中并在室温搅拌1小时。将反应混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(用0-15％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.71-0.87(m,9H),1.04-1.12(m,1H),1.14-1.26(m,13H),1.27-1.40(m,3H),1.40-1.52(m,9H),1.52-1.62(m,1H),1.69(s,3H),1.74-1.83(m,1H),1.99(m,4H),2.03-2.14(m,2H),2.15-2.26(m,1H),2.31-2.41(m,2H),2.54-2.65(m,4H),2.72-2.80(m,1H),3.17(d,3H),3.63-3.74(m,1H),3.99-4.12(m,2H),4.14-4.22(m,1H),4.23-4.30(m,1H),4.40(d,1H),4.55-4.65(m,2H),4.82(s,1H),4.87-4.93(m,2H),5.01(s,2H),5.47-5.57(m,1H),5.66-5.77(m,1H),6.01-6.09(m,1H),6.35-6.45(m,1H),6.89-6.96(m,1H),6.99(s,2H),7.30(m,2H),7.36-7.42(m,1H),7.62(m,2H),7.97-8.21(m,3H),9.62-9.72(m,1H)。LC/MS(ESI,m/z),1285.0[M+Na]+。
1.9ADL21-D1
1-(4-((S)-4-氨基-2-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苄基)4-((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(ADL21-D1)的合成：
Figure BDA0003978353560002411
ADL21-D1。向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(50mg，0.08mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中添加(9H-芴-9-基)甲基((S)-1-(((S)-1-(((S)-4-氨基-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1,4-二氧代丁-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸酯(73.9mg，0.096mmol)，然后添加DIPEA(140μL，0.803mmol)。将反应混合物搅拌1小时。然后，将反应混合物浓缩至干并通过硅胶柱色谱法(用在DCM中的0-15％MeOH洗脱)纯化。将含有所希望的化合物的级分浓缩，得到透明油状物，将其直接进行后续步骤。将获得的油状物溶解在DMF(2mL)中并将二乙胺(83μL，0.80mmol)添加至反应混合物中。将所得混合物在室温搅拌1小时，然后将反应混合物在真空中浓缩。将残余物再溶解于DMF(1mL)中，并且添加2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(32.2mg，0.104mmol)和DIPEA(130μL，0.803mmol)。将所得混合物搅拌1小时。将所得混合物浓缩至干并通过反相HPLC纯化，得到标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.74-0.87(m,9H),1.06(s,3H),1.12-1.26(m,13H)1.29-1.41(m,4H),1.42-1.52(m,7H),1.66-1.72(m,3H),1.73-1.83(m,1H),2.05-2.12(m,2H),2.31-2.39(m,3H),2.54-2.58(m,2H),3.28-3.30(m,3H),3.33-3.45(m,9H),3.56-3.71(m,2H),4.16-4.21(m,1H),4.24-4.29(m,1H),4.38-4.45(m,1H),4.47-4.51(m,1H),4.51-4.55(m,1H),4.56-4.64(m,1H),4.75-4.93(m,3H),5.02(s,2H),5.34-5.48(m,1H),5.61-5.72(m,1H),5.79-5.92(m,1H),6.00-6.11(m,1H),6.33-6.46(m,1H),6.99(s,2H),7.30(m,2H),7.63(m,2H),7.97-8.04(m,1H),8.05-8.11(m,1H),8.12-8.20(m,1H),9.56-9.73(m,1H)。LC/MS(ESI,m/z),1222.28[M+H]+。
1.10ADL23-D2
Figure BDA0003978353560002431
(S)-5-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((4-((((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)氧基)羰基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-5-氧代戊酸(ADL23-D2)。向(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基哌嗪-1-甲酸酯(20mg，0.03mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中添加(S)-4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-5-(((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-1-氧代丁-2-基)氨基)-5-氧代戊酸(32.3mg，0.036mmol)和DIPEA(16μL，0.09mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后添加二乙胺(155μL，1.504mmol)。将所得混合物在20℃再搅拌30min。将反应混合物用乙酸乙酯稀释并在真空中浓缩。将所得残余物溶解在DMF(1mL)中，然后添加2,5-二氧代吡咯烷-1-基-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(14mg，0.045mmol)和DIPEA(16μL，0.09mmol)。将反应混合物搅拌50min，然后用乙酸乙酯稀释(以帮助共沸去除DMF)。将混合物浓缩至干并使用制备型HPLC纯化，得到(S)-5-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((4-((((2S,3S,6S,7R,10R,E)-7-乙酰氧基-10-羟基-2-((R,2E,4E)-6-羟基-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-羟基戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-甲基庚-2,4-二烯-2-基)-3,7-二甲基-12-氧代氧杂环十二-4-烯-6-基)氧基)羰基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-5-氧代戊酸。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.74-0.89(m,16H),1.03-1.66(m,25H),1.69(s,4H),1.74-1.94(m,2H),2.00(s,4H),2.09(br d,2H),2.21(br d,3H),2.31-2.42(m,2H),2.53-2.84(m,3H),2.89-3.09(m,2H),3.34-3.48(m,10H),3.65-3.74(m,1H),4.19,(dd,1H),4.26-4.45(m,3H),4.57-4.64(m,1H),4.79-4.85(m,1H),4.90(br d,2H),5.01(s,2H),5.43(br s,2H),5.47-5.59(m,1H),5.67-5.80(m,1H),5.81-5.93(m,1H),5.94-6.14(m,2H),6.35-6.47(m,1H),6.99(s,2H),7.30(d,2H),7.58,(d,2H),7.63-7.71(m,1H),7.98-8.06(m,1H),8.15-8.27(m,1H),9.99-10.09(m,1H)。LC/MS(ESI,m/z),1393.4[M+H]+。
实例2
如下所述评估用于制备ADC的示例性拼接调制剂有效载荷。
2.1 SF3B1结合/闪烁近接测定法(SPA)
执行闪烁近接测定法以测量化合物(“有效载荷”)与SF3b复合体的结合亲和力。准备抗SF3B1抗体(MBL)在抗小鼠PVT SPA闪烁珠粒(珀金埃尔默公司(PerkinElmer))上的批量固定。对于每2.5mg核提取物，将5μg抗SF3B1抗体和1.5mg珠粒混合在150μL PBS中。将抗体-珠粒混合物在室温(RT)孵育30 min并以18,000g离心5min。每1.5mg抗体-珠粒混合物使用150μL PBS再悬浮。使珠粒悬浮并将其添加至所制备的核提取物中。将浆液在4℃在轻柔混合下孵育2小时。然后通过以18,000g离心5min来收集珠粒，并将其用PBS+0.1％TritonX-100洗涤两次。在最后一个离心步骤之后，每1.5mg珠粒用150μL PBS悬浮。测试SF3b复合体与如先前所述合成的[3H]标记的普拉二烯内酯B探针([3H]-PB)的结合(Kotake等人(2007)Nat Chem Biol.[自然化学生物学]3(9):570-5)。用50μL珠粒浆液并通过添加不同浓度的PB或PB-OH制备100μL结合反应物，且在30min预孵育之后，添加2.5nM[3H]-PB。将该混合物孵育30min，并使用MicroBeta2板计数器(珀金埃尔默公司)读取发光信号。使用Prism 7(GraphPad)对数据进行非线性回归曲线拟合。
对于测试的有效载荷D1和D2，观察到类似的结合概况(表15)。通常，特异性结合是在低纳摩尔范围内，这表明所测试的有效载荷均为强效SF3b复合体结合剂且为用于ADC中的候选化合物。
2.2体外剪接(IVS)
为评估有效载荷在无细胞系统中的活性，执行体外剪接测定。将有效载荷与核提取物和pre-mRNA受质微小基因一起孵育。
HeLa核提取物的制备：使HeLa S3细胞沉淀物再悬浮于低渗缓冲液(10mM HEPESpH 7.9、1.5mM MgCl2、10mM KCl、0.2mM PMSF、0.5mM DTT)中，并使悬浮液达到总计5个红细胞压积(packed cell volume，PCV)。离心之后，丢弃上清液，并用低渗缓冲液使细胞达到3PCV且在冰上孵育10min。使用dounce均质机溶解细胞且随后进行离心。丢弃上清液，并用1/2核压积(packed nuclear volume，PNV)的低盐缓冲液(20mM HEPES pH 7.9、1.5mMMgCl2、20mM KCl、0.2mM EDTA、25％甘油、0.2mM PMSF、0.5mM DTT)使沉淀物再悬浮，然后用1/2PNV的高盐缓冲液(除1.4M KCl之外其余与低盐缓冲液相同)使沉淀物再悬浮。将核轻轻地混合30min，之后进行离心。然后，将上清液(核提取物)透析至存储缓冲液(20mM HEPESpH 7.9、100mM KCl、0.2mM EDTA、20％甘油、0.2mM PMSF、0.5mM DTT)中。使用NanoDrop8000UV-Vis分光光度计(赛默飞世尔科学公司(ThermoFisher Scientific))测定蛋白质浓度。
IVS：Ad2.1和Ad2.2是对U2 snRNP具有较强亲和力(Ad2.1)和较弱亲和力(Ad2.2)的经工程改造的剪接底物，用于IVS测定(Finci等人(2018)Genes Dev.[基因与发育]32(3-4):309-320)。使用5'EcoRI和3'XbaI限制位点将所有Ad2源性序列(Pellizzoni等人(1998)Cell[细胞]95(5):615-24)克隆至pcDNA3.1(+)运载体(普洛麦格公司(Promega))中。使用XbaI使质粒线性化并将这些质粒用作体外转录反应中的DNA模板。使用EcoRI使FtzΔi无内含子质粒(Luo和Reed(1999)96(26):14937-42)线性化。使所有RNA进行体外转录，然后分别使用MEGAScript T7(英杰公司(Invitrogen))和MegaClear(英杰公司)试剂盒纯化。对于使用Ad2变体pre-mRNA进行的剪接反应，使用由HeLa S3、2ng pre-mRNA、0.2ng FTZΔi以及变化浓度的化合物或DMSO制备的8μg核提取物来制备1μL反应物。在30℃预孵育15min之后，添加1μL剪接活化缓冲液(0.5mM ATP、20mM磷酸肌酸、1.6mM MgCl2)，并将反应物在30℃孵育90min。然后，将反应用13μL DMSO淬灭，并使用25nL以进行RT-qPCR。使用以下准备RT-qPCR反应：TaqMan RNA-to-CT 1步试剂盒(生命技术公司(Life Technologies))、来自剪接反应的RNA、Ad2(正向：ACTCTCTTCCGCATCGCTGT(SEQ ID NO:128)；反向：CCGACGGGTTTCCGATCCAA(SEQ ID NO:129)；探针：CTGTTGGGCTCGCGGTTG(SEQ ID NO:130))和Ftz(正向：TGGCATCAGATTGCAAAGAC(SEQ ID NO:131)；反向：ACGCCGGGTGATGTATCTAT(SEQ ID NO:132)；探针：CGAAACGCACCCGTCAGACG(SEQ ID NO:133))mRNA引物-探针组。使用Prism 7(GraphPad)对所形成的剪接产物进行非线性回归曲线拟合并相对于对照(DMSO)样品归一化。
测试的有效载荷D1和D2均调节Ad2.2 pre-mRNA的剪接(表15)。通常，在有效载荷存在下，观测到剪接产物的量减少。
2.3细胞活力
将NCI-H929(美国菌种中心(American Type Culture Collection，ATCC))多发性骨髓瘤细胞以2000个细胞/孔铺板于平底96孔组织培养板(康宁公司(Corning))中的补充有10％胎牛血清的90μL总体积的组织培养基(赛默飞世尔科学公司)中。用200nM至0.03nM的3倍连续稀释的化合物处理细胞。一式三份测试各浓度。在处理时，根据制造商的建议(普洛麦格；#G9241)，使用
Figure BDA0003978353560002471
2.0发光细胞活力测定法来评估具有未经处理的细胞的板。将
Figure BDA0003978353560002472
2.0试剂添加至培养基中，孵育，并在EnVision多标记读取器(珀金埃尔默公司)上进行测定。值表示零时间(T0)。还使用
Figure BDA0003978353560002473
2.0发光细胞活力测定法测定化合物处理144小时(T144)之后的活细胞的数目。使用零时间(T0)的发光值、DMSO对照生长(C)以及在化合物存在下的测试生长(T144)，计算在各种化合物浓度水平下的生长百分比。生长抑制百分比计算如下：对于T144≥T0的浓度，[(T144-T0)/(C-T0)]x100；或对于T144<T0的浓度，[(T144-T0)/T0]x100。使用Prism 7(GraphPad)生成剂量反应曲线图并使用非线性回归分析和log(抑制剂)相对于反应-可变斜率(四个参数)进行拟合。
在表达BCMA的细胞系(包括NCI-H929、MM1.S、MM1.R和OPM2多发性骨髓瘤细胞)中确定了经测试的有效载荷的细胞活力剂量反应。D1和D2均表现出在两位数纳摩尔范围内的GI50值(即，导致细胞增殖减少50％的化合物浓度)(表15)，这通常与渗透性数据一致。示例性渗透性数据在下文描述并示于表15中。
2.4 Caco-2渗透性
将Caco-2细胞在37℃、95％湿度、5％CO2下在transwell 24孔板中培养21天。通过TEER(经上皮电阻)和荧光黄确认细胞单层的完整性。将10μM有效载荷以一式两份分别掺加于细胞单层的两侧上。通过在处理(t＝0)之后以及孵育2小时之后立即自两个隔室取样等分试样来测定自顶部至底外侧(A-B)方向以及自底外侧至顶部(B-A)方向的渗透速率。用含内标的有机溶剂使样品中的蛋白质沉淀并通过LC-MS/MS(SCIEX；API 5500)进行分析。使用在两个方向上随时间推移的有效载荷/内标的面积比反应来生成渗透性(cm/sec)值。通过B-A/A-B相除来计算流出比。对照化合物的低渗透性和高渗透性以及流出表现正如预期。D1和D2的渗透性值示于表15中。
2.5化学稳定性
在Mcilvane(柠檬酸盐-磷酸盐)缓冲液(pH 5.5，终浓度为20μM(低于储备溶液中的0.5％DMSO))(波士顿生物制品公司(Boston Bioproducts)；#BB-2466)中孵育有效载荷。将有效载荷溶液和内标吸移到96孔板中，在UPLC(Waters Aquity H类别)上运行，并分析初始色谱信号(t＝0)。柱为Waters UPLC HSS T3 1.8μm 2.1x50mm柱(#186003538)。采用经1min从95％至10％的流动相A梯度，其中A为在水中的0.1％甲酸，流动相B为在乙腈中的0.1％甲酸(流速0.9mL/min)。在37℃，将有效载荷溶液的其余部分保持在板振荡器(Eppendorf ThermoMixer)中。在37℃孵育后24小时、72小时和96小时，重复通过UPLC进行的样品分析。测定在以下三个时间点的有效载荷和内标的面积比反应：时间0、第1天、以及第3天或第4天。时间0设定成100。比较稍后时间点与时间0的面积比反应。残余物百分比计算如下：(第X天的面积比/时间0的面积比)*100＝％残余物。在比较残余物％的对数与时间点的Excel中计算直线斜率。在Excel中通过ln(2)/斜率计算半衰期且示于表15中。
表15.示例性ADC有效载荷的生物化学/物理化学表征
Figure BDA0003978353560002481
Figure BDA0003978353560002491
ND＝无数据；SPA＝闪烁近接测定法；qPCR-IVS＝体外剪接测定，qPCR读数；
Figure BDA0003978353560002492
细胞活力测定。
实例3
如下所述进行用于鉴定人源化抗BCMA抗体的诱变筛选。
3.1筛选概述
使用结合机器学习和实验设计(DOE)技术的迭代方法，生成了AB200抗体克隆的各种重链和轻链变体。AB200描述于例如美国专利号9,273,141中，将其通过引用并入本文。示例性AB200序列还提供在表9中。该筛选使用Fab片段而不是全长IgG1抗体，并且分三轮进行(第0、1和2轮)。
3.1.1第0轮
在最初的筛选轮(第0轮)中，筛选氨基酸以替换AB200重链中Kabat位置99(绝对位置103)处的天冬氨酸(D)。在Kabat位置99处进行了六个单独的天冬氨酸突变，并将其与AB200的非突变轻链Fab片段配对。
通过Octet测定法(ForteBio)测定每个突变克隆对人和猴BCMA的细胞外结构域的结合亲和力。生成装载有人或恒河猴BCMA的细胞外结构域的胺反应性第2代(AR2G)吸头(氨基连接的)，并将其在每个抗体克隆(所有克隆均为Fab形式)的200nM溶液中孵育。经600秒(每个阶段300秒)测定配体缔合和解离。对于在第1轮和第2轮筛选中鉴定的所有后续克隆，使用相同的Octet测定条件评估BCMA结合亲和力。
第0轮的结果汇总在表16和表17中。分析AB200_Fab(D99D)克隆以提供用于评估每个取代对BCMA结合亲和力的影响的基准。
D99N变体(在Kabat位置99/绝对位置103处带有天冬酰胺(N))显示出对人和猴BCMA的最强结合。不希望受理论束缚，一些天冬酰胺会脱酰胺，这可能导致药物产品的化学、制造和控制(CMC)挑战和/或增加的异质性。此外，已经证明位于CDR内的天冬酰胺的脱酰胺可能对抗原结合产生负面影响，例如降低抗原结合。因此评估了另外的变体。
D99H变体(在Kabat位置99/绝对位置103处带有组氨酸(H))显示出比D99D参考克隆提高的结合亲和力，以及对人和猴BCMA的高结合亲和力。选择该变体用于另几轮诱变。
表16.BCMA(人)的结合动力学
Figure BDA0003978353560002511
表17.BCMA(恒河猴)的结合动力学
Figure BDA0003978353560002512
3.1.2第1轮
在下一轮筛选(第1轮)中，AB200_Fab(D99H)重链片段与39个含有CDR突变的独特κ轻链配对。对于所有对，通过Octet测定法(ForteBio)测定对人和猴BCMA的细胞外结构域的结合亲和力，并且使用ThermoFluor测定法评估热稳定性(Tm)(表38)。在所测试的克隆中，AB200κ变体6(AB200-R1a-Fab_Vk6)与人和猴BCMA的结合亲和力最高(分别为1.11和4.261nM)，并以比AB200_Fab(D99H)亲本克隆更高的亲和力结合(对于人和猴，分别为2.08和5.7nM)。
接下来，设计、表达AB200_D99H_Fab的在CDR中含有突变的60个独特重链变体，将其与AB200_Vk6_Fab配对并筛选BCMA结合和热稳定性(表39)。AB200-R1a-Fab_VH26和AB200-R1a-Fab_VH32均以高亲和力与人和猴BCMA结合：对于人和猴，分别为AB200-R1a-Fab_VH26(0.926和2.311nM)和AB200-R1a-Fab_VH32(1.088和4.169nM)。
3.1.3第2轮
在最后一轮筛选(第2轮)中，使48个轻链变体(R2Vk1-R2Vk48)与第1轮重链AB200-R1a-Fab_VH26配对，并且除了其中一个轻链变体(R2Vk1-R2Vk47)以外，所以轻链变体均与第1轮重链AB200-R1a-Fab_VH32配对。评估了对人和猴BCMA的热稳定性和结合亲和力(表40和41)。
还创建了具有88个重链变体的文库，该文库的子集与来自第2轮筛选的五个轻链配对(表42-46)，总结如下：
·AB200-(2Vk30)+19个第2轮重链变体
·AB200-(2Vk31)+25个第2轮重链变体
·AB200-(2Vk8)+8个第2轮重链变体
·AB200-(2Vk35)+19个第2轮重链变体
·AB200-(2Vk44)+19个第2轮重链变体
基于几个参数，如相对于AB200参考抗体克隆的改进的特性(例如，对人BCMA的结合亲和力提高、对人与猴BCMA的结合亲和力相似、和/或改进的热稳定性)，选择重链和轻链变体的六种组合以转化为全长IgG1抗体并进行表达放大(AB212、AB213、AB214、AB216、AB217和AB218)。基于从单个重链和轻链的数据外推而选择了第七种组合(AB215)。经选择的克隆的数据示于表18中。
表18.经选择的克隆
Figure BDA0003978353560002531
实例4
将实例1和2中所述的有效载荷经由抗体上的半胱氨酸残基缀合至示例性抗BCMA抗体(参见下文第4.2节)。下文描述了示例性抗BCMA ADC的制备和评估。
4.1抗体
使用抗BCMA抗体AB212、AB213、AB214、AB215、AB216、AB217和AB218来制备抗BCMAADC。ADC在本文中也可称为负载剪接调节剂的抗体(SMLA)。
4.2生物缀合
将PBS缓冲液(pH 7.0)中的10mg/mL的每种抗体与5mM TCEP(2-4摩尔当量)(赛默飞世尔科学公司；#77720)混合以使链间二硫键断裂。将反应物在22℃轻轻地混合3小时。然后添加8-12摩尔当量的接头-有效载荷(在DMSO中的6mM储备液)，并使液充分地混合。将反应物置于在22℃孵育箱中的旋转盘上。在2小时的缀合之后，将反应混合物通过AKTA GEM150(HiTrapTM 26/10脱盐柱；40kDa，10mL)(GE医疗生物科学集团(GE Healthcare Bio-Sciences))纯化以将未缀合的有效载荷移至20mM组氨酸/乙酸缓冲液(pH 6.0)中。将所得缀合物经由Amicon超滤器(30kDa，Ultra-4)(EMD Millipore公司)浓缩，并且经由0.22μmPVDF一次性过滤器(EMD Millipore公司)进行无菌过滤。通过UV-VIS测量最终的澄清溶液，以根据Beer-Lambert定律(A＝E*c*l)和以下公式测定抗体浓度([mAb]；mol/L)和经缀合的有效载荷的浓度([LD]；mol/L)：
A280nm＝EmAb 280nm*[mAb]*l+ELD 280nm*[LD]*l
A252nm＝EmAb 252nm*[mAb]*l+ELD 252nm*[LD]*l
表19.EmAb 280nm值
mAb EmAb280nm(cm-1M-1)
AB212 220420
AB213 223400
AB214 229360
AB215 226380
AB216 229360
AB217 229360
AB218 223400
ELD 280nm＝800cm-1M-1
ELD 252nm＝31,000cm-1M-1
缩写：c-摩尔浓度；l-光路长度(Nanodrop：0.1cm)；E-摩尔消光系数；A-吸光度。
4.3生物物理学表征
分别通过液相色谱-质谱法(LC/MS)、尺寸排阻色谱法(SEC)和反相高效液相色谱法(HPLC)分析示例性抗BCMA ADC的药物与抗体比率(DAR)、聚集百分比和未缀合的有效载荷的百分比。通常，经测试的ADC含有少于2％的游离药物且含有少于10％的聚集物。
4.3.1 LC/MS分析-DAR
使用与Agilent G6224A精确质量TOF质谱仪连接的Agilent 1290UPLC系统执行LC/MS分析。在37℃，用PNGase F(新英格兰实验室(New England Biolabs)；#P0705L)使每种缀合物脱糖基化4小时，用8M Gdn-HCl(西格玛公司(Sigma)；#G9284)使其变性，并且使用DTT(5mM的终浓度)(普洛麦格公司；#V3151)将其分成轻链和重链结构域。将所制备的样品注射至Agilent PLRP-S柱(2.1x150mm，8μm)上并在室温(RT)用经28min从25％B至50％B的梯度进行洗脱。流动相A为具有0.05％TFA的水，流动相B为具有0.04％TFA的乙腈，且流速为1mL/min。由解卷积的质谱，通过对关于轻链(L0或L1)和重链(H0、H1、H2和H3)的未缀合峰和药物缀合峰的强度求加权平均值来计算DAR。使用以下公式计算完整缀合物的总DAR：(DARLC*2)+(DARHC*2)＝总DAR。示例性抗BCMA ADC的DAR值示于表20中。
4.3.2 SEC分析-聚集
使用TOSON-G3000SWXL(#008541)柱，在具有0.25mM氯化钾和15％(v/v)IPA的0.2M磷酸钾(pH 7)中以0.75mL/min的流速执行尺寸排阻色谱法。通过曲线下面积积分测定高分子量单体缀合物组分在280nm处的峰面积吸光度。示例性抗BCMA ADC的单体百分比示于表20中。
4.3.3 HPLC分析-游离药物
用10体积乙腈使缀合物在冰上沉淀2小时并短暂离心。然后，将含有残余未缀合的有效载荷的上清液注射至Agilent Poroshell 120SB-C18 120A柱(4.6x100mm，2.7μm)上，并在RT用经10min从45％B至70％B的梯度进行洗脱。流动相A为100％水，流动相B为100％乙腈，且流速为0.6mL/min，在252nm处检测。经由UV检测来定量残留的游离药物的量，并与未缀合的接头-有效载荷的外标曲线相比较。示例性抗BCMA ADC的游离药物百分比示于表20中。
Figure BDA0003978353560002571
Figure BDA0003978353560002581
4.4加速稳定性测试
将示例性抗BCMA ADC(在微量离心管中各自约1mg，约4-5mg/mL)离心并通过280nm下的UV吸光度(NanoDrop)测量以测定蛋白质浓度。然后，将样品在37℃水浴中孵育并在以下四个时间点取样：0(新鲜制备时)、1天、2天和4天。将在不同时间点获取的样品在-80℃储存，直至完成最后一次取样。在22℃解冻之后，用SEC和疏水相互作用色谱法(HIC)分析样品以定量抗体聚集和DAR。在四个时间点的示例性抗BCMA ADC的聚集百分比、浓度和DAR值示于表21中。
表21.示例性抗BCMA ADC的加速稳定性测试
Figure BDA0003978353560002591
Figure BDA0003978353560002601
Figure BDA0003978353560002611
Figure BDA0003978353560002621
Figure BDA0003978353560002631
4.5结合表征
抗体
方法：为了评估示例性抗BCMA抗体与人细胞的结合，对在细胞表面表达低、中等或高水平BCMA的细胞系进行了剂量反应结合实验。使NCI-H929(BCMA高)、OPM2(BCMA中)和Raji(BCMA低)细胞在ATCC建议的培养条件下生长，收集在无菌层流罩中，以1200rpm沉淀5min并倾析出上清液。将沉淀物重悬浮在流式细胞术缓冲液(含2％(v/v)FBS的1X PBS)中，使其密度达到约5.56x104个细胞/mL，并将90μL细胞悬浮液添加至96孔板的每个孔中。将抗体或同种型对照添加至适当的孔中至终体积为10μL，并在4℃在黑暗中孵育1-2小时。初次孵育后，将细胞以1200rpm离心5min，并除去上清液。将细胞沉淀物通过重悬浮在150μL流式细胞术缓冲液中而洗涤三次，以1200rpm离心5min，并倾析出上清液。最后一次洗涤后，将细胞重悬浮在流式细胞术缓冲液中，并与荧光标记的抗人IgG1第二抗体在冰上在黑暗中一起孵育40-60min。然后，将细胞以1200rpm离心5min，并完全像以前一样洗涤沉淀物。在倾析出最终洗涤溶液后，将细胞重悬浮在流式细胞术缓冲液中至最终密度为2x104至5x104个细胞/mL，并在BD LSRFortessa仪(BD公司(Becton-Dickinson))上进行分析。
结果：所有七个示例性抗体克隆(AB212-AB218)都以浓度依赖性方式结合每个细胞系(图1-3；表22-24)。通过流式细胞术确定结合每种细胞系的表观Kd，将这些数据在Prism(v8.0)中绘图，并且应用“一个位点-总计”曲线拟合方程。AB200抗体显示为参考，并作为细胞结合的阳性对照包括在内。
对于每种测试的细胞系，中值荧光强度(MFI)值随着抗体浓度的增加而增加，并且每种细胞系的最大MFI值与BCMA表达水平相关。通过非线性曲线拟合计算所有抗体的平衡解离常数(Kd)并汇总在表22-24中。对于所有三种细胞系，抗BCMA抗体的结合亲和力的排序是相似的，AB212和AB218分别显示出最弱和最强的结合。
表22.抗BCMA抗体结合亲和力-NCI-H929
抗体克隆ID 表观结合亲和力(Kd，nM) 95％CI(轮廓似然)
AB200 50.54 40.09至64.53
AB212 9.682 8.855至10.59
AB213 4.258 3.573至5.070
AB214 2.84 2.331至3.455
AB215 8.065 5.960至10.91
AB216 3.048 2.686至3.458
AB217 3.384 2.933至3.902
AB218 0.9872 0.7403至1.312
表23.抗BCMA抗体结合亲和力-OPM2
Figure BDA0003978353560002641
Figure BDA0003978353560002651
表24.抗BCMA抗体结合亲和力-Raji
抗体克隆ID 表观结合亲和力(Kd，nM) 95％CI(轮廓似然)
AB200 13.97 12.06至16.21
AB212 15.99 13.17至19.46
AB213 8.828 8.107至9.613
AB214 5.658 4.637至6.903
AB215 11.22 10.37至12.14
AB216 6.435 5.077至8.155
AB217 7.307 6.194至8.619
AB218 2.147 1.648至2.797
ADC
方法：使NCI-H929(BCMA高)细胞在ATCC建议的培养条件下生长，收集在无菌层流罩中，以1200rpm沉淀5min并倾析出上清液。将沉淀物重悬浮在流式细胞术缓冲液(含2％(v/v)FBS的1X PBS)中，使其密度达到约5.56x104个细胞/mL，并将90μL细胞悬浮液添加至96孔板的每个孔中。将ADC或同种型对照抗体添加至适当的孔中至终体积为10μL，并在4℃在黑暗中孵育1-2小时。初次孵育后，将细胞以1200rpm离心5min，并除去上清液。将细胞沉淀物通过重悬浮在150μL流式细胞术缓冲液中而洗涤三次，以1200rpm离心5min，并倾析出上清液。最后一次洗涤后，将细胞重悬浮在流式细胞术缓冲液中，并与荧光标记的抗人IgG1第二抗体在冰上在黑暗中一起孵育40-60min。然后，将细胞以1200rpm离心5min，并完全像以前一样洗涤沉淀物。在倾析出最终洗涤溶液后，将细胞重悬浮在流式细胞术缓冲液中至最终密度为2x104至5x104个细胞/mL，并在BD LSRFortessa仪(BD公司(Becton-Dickinson))上进行分析。
结果：为了评估接头-有效载荷缀合是否改变了抗BCMA抗体结合表达BCMA的细胞的能力，生产了针对之前论述过的七个示例性抗体克隆(AB212-AB218)中的每个的、具有ADL1-D2接头-有效载荷的ADC(平均DAR约为4)，并且对每个ADC都进行流式细胞术以量化与NCI-H929人骨髓瘤细胞系的结合。包括基于AB200参考抗体的四种额外缀合物，以探索各种接头-有效载荷组合对细胞结合的影响。所有四种AB200缀合物(三种剪接调节剂ADC和一种具有mcMMAF接头-有效载荷的ADC)均以6-10nM的平衡解离常数与NCI-H929细胞结合(图4；表25)。掺有ADL1-D2接头-有效载荷的AB200 ADC的以约9.7nM的Kd进行结合(参见下表25)。ADC包含与七个抗体克隆中的每一个缀合的相同接头-有效载荷(ADL1-D2)，其亲和力比AB200 ADC更高，其中亲和力最弱和最强的ADC的Kd值分别为约1.3nM和约0.33nM。在整个申请中，AB200-mcMMAF也可以互换地称为AB200-ADL10-MMAF。
表25.抗BCMA ADC结合亲和力-NCI-H929
Figure BDA0003978353560002661
Figure BDA0003978353560002671
4.6细胞活力
在几种表达BCMA的细胞系中测试抗BCMA ADC抑制细胞生长的能力。使用NCI-H929(ATCC，5,000个细胞/孔)、OPM2(ATCC，5,000个细胞/孔)、MOLP8(ATCC，5,000个细胞/孔)和MM1.S(ATCC，5,000个细胞/孔)细胞系。
简言之，在无菌条件下在层流罩中制备所有细胞和ADC溶液。对于每种待检测的细胞系，将细胞重悬浮在补充有FBS的适当培养基中，使其密度为5.56x104个细胞/mL。将90μL细胞悬浮液添加至透明底、黑壁、96孔板的所有孔中。对于所有测试物品(抗BCMA ADC和参考ADC)，在96孔板中制备待测的最高浓度的10X原液，并按1:3连续稀释九次以生成10点曲线。将10μL的每种10X测试物品溶液添加至含有90μL细胞的96孔板适当孔中，并将板置于37℃和5％CO2下的加湿孵育箱中持续6天。将检测板放入孵育箱后，立即用
Figure BDA0003978353560002672
试剂(普洛麦格公司)处理单个96孔细胞板，在室温下孵育10min，并在EnVision酶标仪上对发光进行定量。该板用作“零时间”参考并用于解释孵育6天后获得的数据。第6天的发光值小于零时间板的发光值表示细胞死亡，而大于零时间信号但小于第6天媒介物处理的细胞的信号表示细胞生长抑制活性。进行非线性曲线拟合并获得GI50和LD50值。
所有测试的ADC均在NCI-H929和OPM2细胞中具有活性。与相同的有效载荷缀合至参考抗体(例如，AB200缀合至D1或D2)时相比，当D1和D2缀合至AB212、AB213、AB214、AB215、AB216、AB217和AB218时，活性普遍提高。示例性抗体与D1或D2的某些组合特别具有活性(例如，AB214与D2的组合比D2与其他抗体的组合更具有活性)。另外，将某些接头与某些有效载荷(例如，ADL6与D2)组合导致在OPM2细胞中的效力出人意料地增加(表26)。
为了评估抗BCMA ADC的活性是否是抗原依赖性的，对BCMA阴性Jurkat细胞进行了处理。在BCMA阴性细胞中，当使用与强力靶向BCMA阳性细胞相同的浓度时，所测试的ADC都没有活性(表26)。这些数据表明，所测试的抗BCMA ADC的活性是抗原依赖性的。
Figure BDA0003978353560002691
Figure BDA0003978353560002701
Figure BDA0003978353560002711
4.7冻融测试
将示例性ADC样品(每个80μL，组氨酸/pH 6.0缓冲液)在-80℃冷冻2小时。然后，将样品在22℃放置30min以除去可见的冰。这完成了一个循环。在起始点以及1、4和10个冻融循环后进行取样。每次取样15μL的每种ADC，其中7.5μL用于分析DAR、聚集和浓度。在分析之前，所有样品都储存在-80℃。冻融数据示于表27中。
表27.示例性抗BCMA ADC的冻融测试
Figure BDA0003978353560002721
实例5
为了评估由抗BCMA ADC处理而诱导的pre-mRNA剪接相关基因的表达变化，在多发性骨髓瘤的异种移植模型中进行了三项体内研究。
5.1方法
将两种人骨髓瘤细胞系OPM2和MOLP8皮下接种到雌性CB17-Scid小鼠(5x106个细胞/小鼠)中，并在随机分配到治疗组之前使肿瘤体积达到约300-500mm3。然后，将小鼠随机分配以接受单次静脉内剂量的未缀合参考抗体(AB200)或抗BCMA ADC。在给药后的预定时间点，根据机构批准的方案对小鼠实施安乐死并收集肿瘤组织。然后，将肿瘤碎片在液氮中速冻或在RNAlater保存溶液中孵育后冷冻。
根据制造商的说明，使用针对微阵列总RNA分离试剂盒和MagMax仪的MagMAXTM-96从肿瘤样品中分离总肿瘤RNA。通过NanoDrop分光光度计的UV吸光度对RNA进行定量。在NanoString nCounter基因表达平台(NanoString科技公司(NanoString Technologies))上进行基因表达分析。使用由具有61个基因的70个基因组组成的定制代码集来测量由ADC和九个管家基因诱导的剪接变化(图5)。对于每个样品，将终体积为6.5μL的约250ng至350ng总RNA与定制基因表达融合物标签集(包括靶标特异性寡核苷酸探针对A和B、保护探针、荧光条形码特定性报告基因标签和生物素化通用捕获标签)混合。使探针和目标转录物在67℃杂交过夜18小时。使用高灵敏度方案在nCounter制备站上运行杂交样品，其中去除多余的融合标签集，并将转录物特异性三元复合物固定在链霉抗生物素蛋白涂覆的柱上。根据制造商的方案，在nCounter数字分析仪上以最大扫描分辨率扫描样品。对每个个体样品的基因表达数据通过使用阴性对照的平均值+2个标准偏差的背景扣除进行归一化，使用阳性对照的几何平均值进行阳性对照归一化，以及使用管家基因的几何平均值进行代码集内容归一化。
对于统计分析，使用针对Windows的GraphPad Prism v7.0软件(美国加利福尼亚州GraphPad软件公司(Software,Inc.,CA,USA))。使用单向方差分析和Tukey-Kramer多重比较检验来评估用抗体或ADC治疗的肿瘤之间的剪接变化，显著性水平设置为p<0.05。P值显示为*表示<0.05，**表示<0.01，***表示<0.001，****表示<0.0001。
5.2结果
进行了三项体内研究以评估抗BCMA ADC治疗后OPM2和MOLP8肿瘤中的基因表达剪接的变化。
在第一项研究中，将携带OPM2肿瘤的小鼠用10mg/kg剂量的未缀合的AB200抗体或包含缀合至ADL5-D4这一接头-有效载荷的AB200的ADC(AB200-ADL5-D4)(平均DAR为约4.0)治疗。在给药后24小时或48小时收集肿瘤，并使用NanoString nCounter平台上的定制剪接基因组分析总肿瘤RNA。在这两个时间点，相对于仅用AB200抗体治疗的肿瘤，在ADC(AB200-ADL5-D4)治疗的肿瘤中观察到统计学显著的剪接调节，如成熟mRNA(FBXW5-mat、PLEKHJ1-mat和DYNLT1-mat)的表达降低、pre-mRNA种类(PLEKHJ1-pre_2和DYNLT1-pre)的丰度增加、规范剪接位点(UBA2_CJ_1)的使用减少、以及异常剪接位点(UBA2_AJ_4)使用增加(图6A-6D)。
在第二项研究中，在MOLP8异种移植模型中评估了抗BCMA ADC的剪接调节，该模型相对于OPM2具有BCMA的较少的细胞表面表达。当归一化为仅20mg/kg剂量的AB200时，用10mg/kg AB200-ADL1-D2 ADC治疗的肿瘤针对使用定制NanoString组评估的所有连接均未显示出统计学显著的剪接变化。相比之下，20mg/kg剂量的相同ADC对评估的几个基因诱导了在内含子滞留和异常连接使用方面明显的、统计学显著的变化(图7A-7D)。
在第三项研究中，评估了两种示例性抗BCMA ADC(包含缀合至ADL1-D1或ADL1-D2这一接头-有效载荷的抗BCMA抗体(AB212)的ADC)的剪接调节。将OPM2肿瘤用20mg/kg剂量的每种ADC或用未缀合的AB200抗体作为阴性对照进行治疗，并在给药后24小时和48小时评估剪接变化。在24小时处，相对于仅用AB200抗体治疗，来自这两个ADC治疗组的肿瘤都显示出明显的、强效的剪接变化。在用AB212-ADL1-D1治疗的肿瘤中，在24小时处观察到的剪接调节程度维持不变或适度增加48小时，而在同一时间点在用AB212-ADL1-D2治疗的肿瘤中的剪接调节似乎正在恢复到某些连接处的基线(图8A-8D)。
实例6
为了评估抗BCMA抗体和ADC的抗肿瘤活性，在多发性骨髓瘤的异种移植模型中进行了体内研究。
6.1 OPM2异种移植模型中的抗BCMA抗体
研究1和2
方法：在OPM2多发性骨髓瘤异种移植模型中评估了裸露(未缀合)形式的示例性抗BCMA抗体亚组的抗肿瘤活性。测试了四种抗体(AB212、AB214、AB217和AB218)和一种参考抗体(AB200)，分为两项研究。根据ATCC的建议，培养和扩增OPM2细胞以进行接种。使细胞沉淀并以5.0x107个细胞/mL的密度重悬浮在无血清RPMI-1640培养基(50％v/v)和基质胶(50％v/v)的溶液中。在雌性CB17-Scid小鼠的右侧腹皮下接种100μL细胞悬浮液，并监测肿瘤生长。当平均肿瘤体积达到约150mm3时，将小鼠随机分成治疗组并给予10mL/kg单次静脉内剂量(经由尾静脉)的2.0mg/mL给药溶液，总剂量为20mg/kg(给药日由图9和图10中的箭头表示)。给小鼠称重，每周测量其肿瘤三次以监测任何变化。具有超过2000mm3或任何维度超过20mm的肿瘤的动物被取消研究并根据IACUC方案适当地使其安乐死。安乐死后，收集肿瘤样品和血清并储存起来用于后续分析。
AB200参考抗体在给药后十一天诱导了约50％的肿瘤生长抑制(TGI)，但这种影响不是统计学上显著的。同样地，抗体克隆AB214使肿瘤生长减少了约33％，但这种影响不是统计学上显著的(图9；表28)。在第二项研究中，AB212、AB217和AB218均显示出对肿瘤生长的适度影响，但这些影响未达到统计学显著性(图10；表29)。综上所述，这些数据表明，当在所述实验条件下评估时，所测试的克隆未表现出作为未结合抗体的显著抗肿瘤活性。
表28.体内活性(OPM2)-研究1
Figure BDA0003978353560002761
表29.体内活性(OPM2)-研究2
Figure BDA0003978353560002762
6.2 OPM2异种移植模型中的抗BCMA ADC
研究1和2
方法：在OPM2多发性骨髓瘤异种移植物模型中评估了示例性抗BCMA ADC的抗肿瘤活性。根据ATCC的建议，培养和扩增OPM2细胞以进行接种。使细胞沉淀并以5.0x107个细胞/mL的密度重悬浮在无血清RPMI-1640培养基(50％v/v)和基质胶(50％v/v)的溶液中。在雌性CB17-Scid小鼠的右侧腹皮下接种100μL细胞悬浮液，并监测肿瘤生长。当平均肿瘤体积达到约150mm3时，将小鼠随机分成治疗组并给予10mL/kg单次静脉内剂量(经由尾静脉)的2.0mg/mL给药溶液，总剂量为20mg/kg。给小鼠称重并每周测量其肿瘤二至三次。具有超过2000mm3或任何维度超过20mm的肿瘤的动物被取消研究并根据IACUC方案适当地使其安乐死。安乐死后，收集肿瘤样品和血清并储存起来用于后续分析。
结果：七个克隆均通过随机连接至铰链半胱氨酸而以约4.0的平均药物与抗体比率(DAR)缀合至ADL1-D2这一接头-有效载荷。以平均DAR为4缀合至mcMMAF这一接头-有效载荷的AB200参考抗体作为抗肿瘤活性的阳性对照；作为参考ADC的、以更高DAR(平均DAR为7)缀合至ADL1-D2这一接头-有效载荷的AB200也包括在内。在第一个实验中评估了AB213、AB214和AB215的缀合物(图11；表30)；在第二个实验中评估了AB212、AB216、AB217和AB218的缀合物(图12；表31)。
在第二个实验中，为了评估掺有示例性抗BCMA抗体的ADC的抗体特异性活性，通过将ADL1-D2这一接头-有效载荷以平均DAR为约4.0与抗HER2抗体曲妥珠单抗(AB185)缀合，产生了“非靶向性”ADC。由于OPM2细胞系不表达HER2，所以预计AB185-ADL1-D2 ADC不会显著抑制OPM2肿瘤生长。暴露于非靶向性ADC的OPM2肿瘤显示出与媒介物治疗的肿瘤无法区分的生长，这表明所测试的ADC显示的抗肿瘤活性取决于所使用的抗BCMA抗体。
表30.体内活性(OPM2)-研究1
Figure BDA0003978353560002781
表31.体内活性(OPM2)-研究2
Figure BDA0003978353560002782
研究3
方法：为了评估示例性接头-有效载荷在抗BCMA ADC中的体内功效，将AB212抗体缀合至ADL1-D1或ADL1-D2这一接头-有效载荷，目标平均DAR为4.0(这两种AB212 ADC均实现了3.84的DAR)。将具有OPM2异种移植物的雌性CB17-Scid小鼠随机分成十组(平均肿瘤体积为约125mm3/组)并单次尾静脉静脉内注射测试物品。每种ADC的剂量为5或10mg/kg。AB200-mcMMAF作为抗肿瘤活性的阳性对照，以10mg/kg通过尾静脉静脉内注射给药一次。
结果：当以5mg/kg给药时，没有观察到具有ADL1-D1和ADL1-D2这两个接头-有效载荷的ADC的抗肿瘤活性之间的统计学显著差异(图13；表32)。相比之下，当以10mg/kg给药时，与具有ADL1-D2这一接头-有效载荷的ADC相比，具有ADL1-D1这一接头-有效载荷的ADC表现出增加的功效(p值＝0.0308)。
表32.体内活性(OPM2)-研究3
Figure BDA0003978353560002791
研究4
方法：为了评估示例性抗体在抗BCMA ADC中的体内功效，将AB212和AB216抗体缀合至ADL1-D1这一接头-有效载荷，目标平均DAR为4.0(AB212和AB216 ADC的DAR分别为3.92和4.01)。将具有OPM2异种移植物的雌性CB17-Scid小鼠随机分成十组(平均肿瘤体积为约125mm3/组)并单次尾静脉静脉内注射测试物品。每种ADC的剂量为5或10mg/kg。AB200-mcMMAF作为抗肿瘤活性的阳性对照，以10mg/kg通过尾静脉静脉内注射给药一次。根据批准的机构方案对接种后第108天剩余的所有小鼠实施安乐死。收集血清并冷冻以进行后续分析。
结果：在施用后大约两周内，所有四个ADC组和AB200-mcMMAF对照都显示出无法区分的活性，在所有肿瘤中都诱导深度消退(图14；表33)。然而，持续监测显示5mg/kg AB212ADC组中的几个肿瘤重新生长。随后，10mg/kg AB212 ADC组和5mg/kg AB216 ADC组中的肿瘤开始重新生长，而10mg/kg AB216 ADC组中的所有小鼠在研究期间(给药后100天)保持无肿瘤，AB200-mcMMAF对照组中的所有小鼠也是如此(参见图14)。
表33.体内活性(OPM2)-研究4
Figure BDA0003978353560002801
6.3 MOLP8异种移植模型中的抗BCMA ADC
研究1
方法：为了进一步评估示例性抗BCMA ADC在体内的抗肿瘤活性，在第二个多发性骨髓瘤异种移植模型MOLP8中进行了相同ADC的筛选。选择MOLP8模型是因为其相对于OPM2具有较低的细胞表面BCMA表达水平。此研究中的所有实验条件与用于OPM2模型的那些条件相同，除了模型本身和从肿瘤接种到剂量施用的天数(给药日由图15中的箭头表示)。
结果：掺有抗BCMA抗体的所有六种测试ADC在MOLP8模型中都显示出抗肿瘤活性(图15；表34)，尽管反应程度相对于在OPM2异种移植物中获得的结果有所降低(参见OPM2研究1和2(图11和图12；表30和31))。所有治疗，包括AB200-mcMMAF阳性对照，均未能达到由混合效应模型测试所确定的统计学显著性。
表34.体内活性(MOLP8)-研究1
Figure BDA0003978353560002811
研究2
方法：为了进一步评估AB212-ADL1-D1 ADC和AB216-ADL1-D1 ADC在体内的抗肿瘤活性，通过采用与OPM2异种移植模型中使用的研究设计相同的研究设计，在MOLP8异种移植模型中测试了每种ADC(参见第6.2节(研究4))。
结果：通常，每种ADC在MOLP8肿瘤中的抗肿瘤反应程度(图16；表35)不如在OPM2肿瘤中明显(参见OPM2研究4(图14；表33))。然而，与在OPM2模型中获得的数据一致，在MOLP8肿瘤中，单次10mg/kg剂量的AB216-ADL1-D1比相同剂量的AB212-ADL1-D1诱导更大的肿瘤生长抑制，尽管这种差异不符合统计学显著性。
表35.体内活性(MOLP8)-研究2
Figure BDA0003978353560002821
实例7
为了评估AB216-ADL1-D1在体外的抗增殖活性和细胞毒性，对一组11个人骨髓瘤细胞系进行了细胞活力测定。AB200-ADL10-MMAF是一种靶向BCMA的、具有单甲基奥瑞他汀F(MMAF)有效载荷的ADC，将其用作参考ADC。
7.1方法
在无菌条件下在层流罩中制备所有细胞和ADC溶液。对于每种待检测的细胞系，将细胞重悬浮在补充有FBS的适当培养基中，使其密度为5.56x104个细胞/mL。将90μL细胞悬浮液添加至透明底、黑壁、96孔板的所有孔中。对于AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF，在96孔板中制备待测的最高浓度的10X原液，并按1:3连续稀释八次以生成9点曲线。将10μL的每种10X测试物品溶液添加至含有90μL细胞的96孔板适当孔中，并将板置于37℃和5％CO2下的加湿孵育箱中持续6天。将检测板放入孵育箱后，立即用
Figure BDA0003978353560002831
试剂(普洛麦格公司)处理单个96孔细胞板，在室温下孵育10min，并在EnVision酶标仪上对发光进行定量。该板用作“零时间”(T0)参考并用于解释孵育6天后获得的数据。第6天的发光值小于T0板的发光值表示细胞死亡，而大于T0信号但小于第6天媒介物处理的细胞的信号表示生长抑制。T0和第6天之间的发光没有变化表示细胞生长抑制活性。进行非线性曲线拟合，并计算GI50、LD50、曲线下面积(AUC)和活细胞减少最大百分比(RminAve)的值(图17A-17D，表36)。
Figure BDA0003978353560002841
Figure BDA0003978353560002851
Figure BDA0003978353560002861
7.2结果
AB216-ADL1-D1的经计算的效力度量与靶向BCMA的参考ADC(AB200-ADL10-MMAF)的成对比较表明，基于对每种ADC的相对敏感性，人骨髓瘤细胞系可以分为三个一般类别：对AB216-ADL1-D1比对AB200-ADL10-MMAF更敏感(AB216-ADL1-D1>AB200-ADL10-MMAF)；对AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF具有相似的敏感性(例如，2倍范围内的效力值)(AB216-ADL1-D1≈AB200-ADL10-MMAF)；以及对AB200-ADL10-MMAF比对AB216-ADL1-D1更敏感(AB200-ADL10-MMAF>AB216-ADL1-D1)。LP-1、NCI-H929、MOLP8和OPM2细胞对AB216-ADL1-D1比对AB200-ADL10-MMAF更敏感，其中LP-1和MOLP8细胞表现出在ADC之间的反应差异最大。相反，AMO-1、EJM、RPMI-8226、U266B1和KMS-11细胞对AB200-ADL10-MMAF比对AB216-ADL1-D1更敏感，其中AMO-1、EJM和RPMI-8226细胞表现出在ADC之间的反应差异最大。无论用于比较的效力度量如何，MM1S和MM1R细胞对这两种ADC的反应相似。
实例8
无论增殖状态如何，所有有核真核细胞类型的生存都需要经由mRNA剪接通过共转录和转录后从预成熟mRNA中去除内含子。为了进一步评估AB216-ADL1-D1的抗增殖活性，并评估细胞增殖状态是否会影响该活性，在活跃分裂的骨髓瘤细胞以及在减缓或阻止细胞生长的低血清条件下生长的相同细胞中进行了体外效力测定。
AB200-ADL10-MMAF是一种靶向BCMA的、具有MMAF有效载荷的ADC，将其用作参考ADC。已经表明，诸如MMAF等的奥瑞他汀通过阻断微管蛋白聚合和微管形成来发挥其抗增殖作用(Waight等人(2016)PLoS One.[公共科学图书馆期刊]11(8):e0160890)，微管蛋白聚合和微管形成是几个细胞过程(包括有丝分裂期间正确的染色体分离)所必需的(Petry(2016)Annu Rev Biochem.[生物化学年鉴]85:659-683)。与这种作用机制一致，MMAF和其他微管破坏剂的活性在未活跃进行细胞分裂的细胞中减弱(Collins等人(2019)Cancers.[癌症]11(3):394)。
8.1方法
根据ATCC建议的培养条件(RPMI-1640培养基，对于H929和OPM2细胞，分别补充有10％胎牛血清或20％热灭活胎牛血清)，使人骨髓瘤细胞系NCI-H929(H929)和OPM2在保持在37℃和5％CO2下的孵育箱中生长。为了减缓或阻止细胞生长并产生不分裂/缓慢分裂细胞的培养物，使正常血清条件下生长的细胞以1200rpm沉淀5min，并抽吸出上清液。将细胞沉淀物通过每次在室温PBS中轻轻重悬，然后以1200rpm离心5min而洗涤三次。将洗涤后的H929和OPM2细胞重悬浮在分别含有0.1％或0.5％v/v胎牛血清(低血清条件)的RPMI-1640培养基中，使其细胞密度为5x105个细胞/mL。每天进行细胞计数以监测细胞生长。当培养物停止生长时(如通过细胞计数所确定的)，收获细胞并铺板在96孔板(5,000个细胞/孔)中，并进行如上所述的ADC处理(参见，例如，第2.3节)。
8.2结果
AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF的抗增殖活性在正常血清条件下培养的指数生长的NCI-H929细胞中相似，其中GI50值和LD50值均在低nM范围内(图18)。然而，在减缓或停止增殖的低血清培养基中培养的NCI-H929细胞中，AB216-ADL1-D1显示出比AB200-ADL10-MMAF显著更高的活性。在低于这两种ADC的GI50值的浓度范围内，AB216-ADL1-D1显示出比AB200-ADL10-MMAF增加的抗增殖活性(图19A-19B)。在显示的最低ADC浓度(180pM)下，AB216-ADL1-D1治疗在第一个实验中导致细胞完全杀死，在重复实验中导致细胞数量减少了大约90％。相比之下，在第一个实验和重复实验中，180pM AB200-ADL10-MMAF治疗分别导致细胞数量减少40％和45％。
测试了第二种人骨髓瘤细胞系OPM2，当将其在正常血清条件下培养时，也显示其对AB216-ADL-D1和AB200-ADL10-MMAF具有相似的敏感性(图20)。与NCI-H929细胞一样，低血清条件用于产生不分裂/缓慢分裂的OPM2培养物，并且使OPM2细胞对AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF进行相同的9点剂量反应曲线。如在NCI-H929细胞中所观察到的，AB216-ADL1-D1的活性与AB200-ADL10-MMAF在非增殖细胞中的活性不同(图21A-21B)。然而，与在NCI-H929细胞中所观察到的趋势相反，在这两种ADC的≥GI50的浓度范围内，AB216-ADL1-D1的抗增殖活性相对于AB200-ADL10-MMAF增加。AB200-ADL10-MMAF的活性通常在高于其近似GI50值(约1.0nM)的浓度下趋于稳定，而在相同浓度范围内的AB216-ADL1-D1的治疗主要导致活细胞的完全消除。这些数据表明，在缓慢分裂或生长停滞的骨髓瘤细胞中，AB216-ADL1-D1可能比AB200-ADL10-MMAF保留更大的抗增殖活性。
实例9
为了评估MCL1-长同种型的过表达如何影响AB216-ADL1-D1的活性以及AB216-ADL1-D1的治疗如何影响内源性MCL1 RNA和蛋白质的表达，在用AB216-ADL1-D1治疗后的NCI-H929人骨髓瘤细胞中评估了MCL1在RNA和蛋白质水平的体外调节。将AB200-ADL10-MMAF用作参考ADC。
9.1方法
过表达MCL1的骨髓瘤细胞系的产生：为了研究MCL1-长的过表达对AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF的抗增殖活性的影响，用含有人MCL1-长cDNA(RPMI-8226_MCL1)或无插入物(RPMI-8226_EV)的pLVX表达盒慢病毒转导RPMI-8226人骨髓瘤细胞系。在RPMI-8226MCL1细胞中证实了组成型MCL1过表达(数据未显示)。两个细胞系都进行了如上所述的标准6天CTG测定(参见，例如，第2.3节)。
MCL1 RNA和蛋白质的体外调节：为了确定AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF负调节促存活MCL1-长蛋白的表达的能力，选择人骨髓瘤细胞系NCI-H929(其表达高水平的MCL1并对这两种ADC都敏感)进行评估。将大约10x106个NCI-H929细胞以1.0x106个细胞/mL的密度接种到T25烧瓶中的ATCC建议的生长培养基(RPMI-1640，补充有10％v/v FBS和50μM2-巯基乙醇)中，并且添加AB216-ADL1-D1或AB200-ADL10-MMAF至终浓度为5.0、50.0或500.0nM。准备一式两份的烧瓶以允许在处理的24和96小时进行收集。与上述相同地准备另外两个烧瓶，并用生理盐水溶液(终浓度为0.1％)处理以作为这两个时间点的阴性对照。在处理后24和96小时，将细胞转移到15mL锥形管中，并用3mL新鲜细胞培养基冲洗烧瓶以收集烧瓶中的任何残留细胞。将该溶液添加到15mL锥形管中，并将管以2,000rpm离心3min以沉淀细胞。抽吸出上清液，并通过将沉淀物轻轻重悬浮在1.0mL冰冷的1X PBS中来冲洗细胞。将每种重悬细胞沉淀物的大约三分之一转移到干净的1.7mL微量离心管中，其余三分之二转移到第二个1.7mL微量离心管中。将微量离心管在预冷至4℃的台式微量离心机中以14,000rpm离心10min。抽吸出PBS洗涤液(上清液)，并将每个管再次短暂离心以将所有液体吸到底部。抽吸出所有剩余的上清液，并将每个沉淀物在干冰上速冻并储存在-80℃直至分离出RNA或蛋白质。
根据制造商的说明，使用RNeasy试剂盒(凯杰公司(Qiagen))制备总RNA。将RNA在30μL洗脱缓冲液中洗脱，并使用Nanodrop仪通过UV光谱法进行定量。将所有RNA归一化为25ng/μL，并根据制造商的说明，使用SuperScript IV VILO逆转录试剂盒(赛默飞世尔科学公司)将1.0μg(40μL)的每种RNA转化为cDNA。使用靶向人MCL1-长同种型的定制Taqman型探针组(扩增子跨越外显子2-3连接点)和市售18S rRNA探针组(内部标准化对照)，通过双重定量实时PCR测定来评估基因表达变化。使用ΔΔCt方法分析原始数据，并将其相对于24小时未处理样品的信号归一化。
通过在RIPA缓冲液中裂解细胞沉淀物来制备蛋白质裂解物，然后将其在低功率下进行短暂超声处理以剪切基因组DNA。在预冷至4℃的台式微量离心机中，将裂解物以14,000rpm离心10min，并将可溶性蛋白质级分转移到新的1.7mL微量离心管中。将裂解物通过BCA测定定量，并将其用RIPA缓冲液和4X SDS上样染料(补充有1.0％2-巯基乙醇)归一化。将归一化的裂解物短暂涡旋并加热至95℃持续10min，以使样品完全变性。将大约10μg的总蛋白质/泳道加载到4％-12％Bis-Tris丙烯酰胺梯度凝胶(生命技术公司(LifeTech))上，并通过电泳分离蛋白质。将蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，将这些硝酸纤维素膜用5％BSA或5％脱脂奶粉在室温封闭至少30min，然后在4℃与识别人MCL1或粘着斑蛋白(上样对照)的第一抗体一起孵育过夜。第二天，将这些膜用TBST洗涤三次以除去未结合的抗体，并与缀合至辣根过氧化物酶(HRP)的抗小鼠或抗兔第二抗体在室温一起孵育至少1小时。第二抗体孵育后，将这些膜用TBST洗涤三次以除去未结合的抗体。然后，将这些膜用HRP基材涂覆以产生发光信号，该发光信号由CCD相机(ImageQuant，通用电气医疗集团(GE Healthcare))捕获。
表37.汇总-体外分析
Figure BDA0003978353560002911
Figure BDA0003978353560002921
OE＝过度表达。
9.2结果
使用RPMI-8226细胞系的同基因对进行的两个独立实验的结果表明，组成型MCL1L的过表达在6天细胞活力测定中部分挽救了AB216-ADL1-D1和参考ADC AB200-ADL10-MMAF的抗增殖作用。这与MCL1L的抗细胞凋亡作用一致，MCL1L的表达可以消除具有广泛不同作用机制的一系列疗法的作用并促进对这些疗法的抗性(Song等人(2005)Cancer BiolTher.[癌症生物学与治疗]4(3):267-276；Pei等人(2014)PLoS One.[公共科学图书馆期刊]9(3):e89064；Wuillème-Toumi等人(2005)Leukemia.[白血病]19(7):1248-1252)。计算的GI50、LD50和最大效应水平(Rmin％)值汇总在表37中。
鉴于MCL1L在促进浆细胞存活和对几种骨髓瘤标准护理疗法的抗性方面的作用，评估了AB216-ADL1-D1和AB200-ADL10-MMAF抑制RNA和蛋白质水平的MCL1L表达的能力。使用NCI-H929细胞系，在用5、50或500nM的AB216-ADL1-D1或AB200-ADL10-MMAF处理24或96小时的细胞中量化MCL1L mRNA水平。处理24小时后，观察到在用AB216-ADL1-D1处理的细胞中MCL1L RNA的浓度依赖性降低，在最高浓度(500nM)时最大抑制率大约为85％。相比之下，AB200-ADL10-MMAF处理的细胞中的MCL1 RNA水平在24小时后在任何浓度下都没有显著改变(图22)。处理96小时后，AB216-ADL1-D1进一步降低了MCL1L RNA水平，即使在5nM的最低浓度下最大抑制率也>95％。最后，与处理24小时后的观察结果一致，AB200-ADL10-MMAF在96小时时在任何浓度下均不影响MCL1L RNA表达。图22中的术语“媒介物”是指将用0.1％v/v生理盐水溶液处理的细胞作为MCL1L调节的阴性对照，其用作这两个时间点的MCL1L mRNA水平的基准。显示的数据是相对于24小时媒介物样品计算的。
还使用识别亮氨酸210附近表位的抗体对MCL1进行了免疫印迹分析，该抗体产生了大小与MCL1L(约42kDa)和MCL1S(约32kDa)一致的条带、以及不同大小和强度的其他条带(图23)。将粘着斑蛋白用作上样对照。图23中的术语“媒介物”(或“veh”)是指将用0.1％v/v生理盐水溶液处理的细胞作为MCL1L调节的阴性对照，其用作这两个时间点的MCL1L蛋白质水平的基准。
与RNA水平的数据一致，AB216-ADL1-D1处理在24小时后强烈下调MCL1L蛋白质水平，并且在96小时后在AB216-ADL1-D1处理的裂解物中几乎检测不到MCL1L。相反，MCL1L蛋白在24小时时被AB200-ADL10-MMAF适度抑制，并在96小时时进一步被抑制但仍可检测到(图23)。AB200-ADL10-MMAF诱导的RNA和蛋白质水平上的MCL1调节之间的明显差异可能是由翻译后机制(如半胱天冬酶介导的裂解)引起的，这已针对MCL1L进行了描述(Michels等人(2004)Oncogene.[癌基因]23(28):4818-4827)。综上所述，这些数据表明，AB216-ADL1-D1具有可有效下调MCL1L RNA和蛋白质表达的独特能力。这与AB200-ADL10-MMAF参考ADC形成对比，后者不调节MCL1L RNA水平，仅适度影响NCI-H929细胞中的MCL1L蛋白质水平。
Figure BDA0003978353560002941
Figure BDA0003978353560002951
Figure BDA0003978353560002961
Figure BDA0003978353560002971
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Figure BDA0003978353560002991
Figure BDA0003978353560003001
Figure BDA0003978353560003011
Figure BDA0003978353560003021
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Figure BDA0003978353560003081
Figure BDA0003978353560003091
Figure BDA0003978353560003101
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Figure BDA0003978353560003131
Figure BDA0003978353560003141
Figure BDA0003978353560003151
Figure BDA0003978353560003161
Figure BDA0003978353560003171
Figure BDA0003978353560003181
Figure BDA0003978353560003191
Figure BDA0003978353560003201
Figure BDA0003978353560003211
Figure BDA0003978353560003221
Figure BDA0003978353560003231
Figure BDA0003978353560003241

Claims (255)

1.一种分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合B细胞成熟抗原(BCMA)并且包含：
(i)三个重链互补决定区(HCDR)和三个轻链互补决定区(LCDR)，如由Kabat编号系统所定义的，包含：
HCDR1，其包含以下氨基酸序列：NYWIH(SEQ ID NO:1)；
HCDR2，其包含以下氨基酸序列：
X1TYRX5X6SX8TX10YX12QKX15 K S(SEQ ID NO:67)，其中：
X1是A或G；
X5是S或I；
X6是H或Q；
X8是D或T；
X10是Y或N；
X12是N或A；并且
X15是F或Y；
HCDR3，其包含以下氨基酸序列：
GAX3YHGYDVIX11N(SEQ ID NO:68)，其中：
X3是I或V；并且
X11是E或D；
LCDR1，其包含以下氨基酸序列：
RASQSISSYX10N(SEQ ID NO:69)，其中：
X10是L或I；
LCDR2，其包含以下氨基酸序列：
ATSNLQX7(SEQ ID NO:70)，其中：
X7是S或I；并且
LCDR3，其包含以下氨基酸序列：
QQX3RRX6PWX9(SEQ ID NO:71)，其中：
X3是F或Y；
X6是L或I；并且
X9是T或S；或
(ii)三个重链互补决定区(HCDR)和三个轻链互补决定区(LCDR)，如由IMGT编号系统所定义的，包含：
HCDR1，其包含以下氨基酸序列：
GGTFX5NYW(SEQ ID NO:72)，其中：
X5是S或T；
HCDR2，其包含以下氨基酸序列：
TYRX4X5SX7T(SEQ ID NO:73)，其中：
X4是S或I；
X5是H或Q；并且
X7是D或T；
HCDR3，其包含以下氨基酸序列：
ARGAX5YHGYDVIX13N(SEQ ID NO:74)，其中：
X5是I或V；并且
X13是D或E；
LCDR1，其包含以下氨基酸序列：QSISSY(SEQ ID NO:40)；
LCDR2，其包含以下氨基酸序列：ATS(SEQ ID NO:41)；并且
LCDR3，其包含以下氨基酸序列：
QQX3RRX6PWX9(SEQ ID NO:75)，其中：
X3是Y或F；
X6是L或I；并且
X9是T或S。
2.一种分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含：
(a)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ ID NO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(b)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ ID NO:8(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:9(LCDR1)、SEQID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:43(HCDR1)、SEQ ID NO:44(HCDR2)和SEQ ID NO:45(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:46(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(c)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:12(HCDR2)和SEQ ID NO:13(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:14(LCDR1)、SEQID NO:15(LCDR2)和SEQ ID NO:16(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:47(HCDR1)、SEQ ID NO:48(HCDR2)和SEQ ID NO:49(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:50(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(d)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:17(HCDR2)和SEQ ID NO:18(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:19(LCDR1)、SEQID NO:20(LCDR2)和SEQ ID NO:21(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:51(HCDR1)、SEQ ID NO:52(HCDR2)和SEQ ID NO:53(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:54(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(e)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(f)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:27(HCDR2)和SEQ ID NO:28(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:29(LCDR1)、SEQID NO:30(LCDR2)和SEQ ID NO:31(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:59(HCDR1)、SEQ ID NO:60(HCDR2)和SEQ ID NO:61(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:62(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；或
(g)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:32(HCDR2)和SEQ ID NO:33(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:34(LCDR1)、SEQID NO:35(LCDR2)和SEQ ID NO:36(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:63(HCDR1)、SEQ ID NO:64(HCDR2)和SEQ ID NO:65(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:66(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
3.一种分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含：
(a)来自包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(b)来自包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(c)来自包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(d)来自包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(e)来自包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；
(f)来自包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR；或
(g)来自包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区的三个HCDR，以及来自包含SEQID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区的三个LCDR。
4.如权利要求1至3中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。
5.如权利要求1至4中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:77的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(b)与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:79的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(c)与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(d)与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:83的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(e)与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(f)与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:87的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；或
(g)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:89的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。
6.如权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区；
(f)含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。
7.如权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ ID NO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；或
(b)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
8.如权利要求7所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
9.如权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ IDNO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
10.如权利要求9所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
11.一种分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含：
(a)含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置30、34、50、54、55、57、59、61、64、66、101、103、108和109中的一个或多个处的氨基酸取代；和
(b)含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置24、28、31、33、50、55、56、91、93、94和97中的一个或多个处的氨基酸取代。
12.如权利要求11所述的抗体或抗原结合片段，其中：
SEQ ID NO:119的位置30处的氨基酸被T取代；
SEQ ID NO:119的位置34处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:119的位置50处的氨基酸被G取代；
SEQ ID NO:119的位置54处的氨基酸被S或I取代；
SEQ ID NO:119的位置55处的氨基酸被Q取代；
SEQ ID NO:119的位置57处的氨基酸被T取代；
SEQ ID NO:119的位置59处的氨基酸被N取代；
SEQ ID NO:119的位置61处的氨基酸被A取代；
SEQ ID NO:119的位置64处的氨基酸被Y取代；
SEQ ID NO:119的位置66处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:119的位置101处的氨基酸被V取代；
SEQ ID NO:119的位置103处的氨基酸被H取代；
SEQ ID NO:119的位置108处的氨基酸被I取代；和/或
SEQ ID NO:119的位置109处的氨基酸被E取代。
13.如权利要求11或权利要求12所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括在位置103处的至少一个氨基酸取代。
14.如权利要求11至13中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中SEQ ID NO:119的位置103处的氨基酸被H取代。
15.如权利要求11至14中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括至少四个氨基酸取代。
16.如权利要求11至15中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列被修饰以在位置34、66、103和108处至少包括氨基酸取代。
17.如权利要求11至16中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中：
SEQ ID NO:119的位置34处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:119的位置66处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:119的位置103处的氨基酸被H取代；并且
SEQ ID NO:119的位置108处的氨基酸被I取代。
18.如权利要求11至17中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中：
SEQ ID NO:120的位置24处的氨基酸被R取代；
SEQ ID NO:120的位置28处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:120的位置31处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:120的位置33处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:120的位置50处的氨基酸被A取代；
SEQ ID NO:120的位置55处的氨基酸被Q取代；
SEQ ID NO:120的位置56处的氨基酸被I取代；
SEQ ID NO:120的位置91处的氨基酸被F取代；
SEQ ID NO:120的位置93处的氨基酸被R取代；
SEQ ID NO:120的位置94处的氨基酸被I取代；和/或
SEQ ID NO:120的位置97处的氨基酸被S取代。
19.如权利要求11至18中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以包括至少六个氨基酸取代。
20.如权利要求11至19中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列被修饰以在位置24、28、31、50、55和93处至少包括氨基酸取代。
21.如权利要求11至20中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中：
SEQ ID NO:120的位置24处的氨基酸被R取代；
SEQ ID NO:120的位置28处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:120的位置31处的氨基酸被S取代；
SEQ ID NO:120的位置50处的氨基酸被A取代；
SEQ ID NO:120的位置55处的氨基酸被Q取代；并且
SEQ ID NO:120的位置93处的氨基酸被R取代。
22.如权利要求11至21中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:77的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(b)与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:79的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(c)与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(d)与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:83的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(e)与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(f)与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:87的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；或
(g)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:89的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。
23.如权利要求11至22中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区；
(f)含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。
24.如权利要求1至23中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区。
25.如权利要求1至24中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区。
26.如权利要求25所述的抗体或抗原结合片段，其中该重链恒定区进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
27.如权利要求1至26中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含人Igκ轻链恒定区。
28.如权利要求1至27中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。
29.如权利要求1至28中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。
30.如权利要求1至29中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链；
(b)含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的轻链；
(c)含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的轻链；
(d)含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的轻链；
(e)含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链；
(f)含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链；或
(g)含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链。
31.如权利要求30所述的抗体或抗原结合片段，其中该重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
32.如权利要求1至29中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
33.如权利要求32所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链；或
(b)含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链，以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。
34.如权利要求1至29中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
35.如权利要求34所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。
36.如权利要求33或权利要求35所述的抗体或抗原结合片段，其中该重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
37.如权利要求1至36中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段缀合至治疗剂。
38.如权利要求37所述的抗体或抗原结合片段，其中该治疗剂是剪接调节剂。
39.如权利要求37或权利要求38所述的抗体或抗原结合片段，其中该治疗剂是普拉二烯内酯或普拉二烯内酯衍生物。
40.如权利要求37至39中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该治疗剂是普拉二烯内酯D或普拉二烯内酯D衍生物。
41.如权利要求37至40中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该治疗剂是D1：
Figure FDA0003978353550000171
42.如权利要求37至40中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该治疗剂是D2：
Figure FDA0003978353550000172
43.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)p(I)
其中
Ab是如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段；
D是剪接调节剂；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
44.如权利要求43所述的抗体-药物缀合物，其中该接头是可裂解接头。
45.如权利要求44所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含可裂解肽部分。
46.如权利要求45所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分可被酶裂解。
47.如权利要求44至46中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分或接头包含氨基酸单元。
48.如权利要求47所述的抗体-药物缀合物，其中该氨基酸单元包含缬氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)。
49.如权利要求47所述的抗体-药物缀合物，其中该氨基酸单元包含缬氨酸-丙氨酸(Val-Ala)。
50.如权利要求47所述的抗体-药物缀合物，其中该氨基酸单元包含丙氨酸-丙氨酸-天冬氨酸(Ala-Ala-Asp)。
51.如权利要求47所述的抗体-药物缀合物，其中该氨基酸单元包含谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸(Glu-Val-Cit)。
52.如权利要求44所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含可裂解葡糖苷酸部分。
53.如权利要求52所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解葡糖苷酸部分可被酶裂解。
54.如权利要求52或权利要求53所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解葡糖苷酸部分可被葡糖苷酸酶裂解。
55.如权利要求52至54中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解葡糖苷酸部分可被β-葡糖苷酸酶裂解。
56.如权利要求52至55中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解葡糖苷酸部分或接头包含β-葡糖苷酸。
57.如权利要求44至56中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含马来酰亚胺部分。
58.如权利要求57所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含马来酰亚胺部分和可裂解肽部分。
59.如权利要求58所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分包含氨基酸单元。
60.如权利要求58或权利要求59所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit。
61.如权利要求58或权利要求59所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Ala。
62.如权利要求58或权利要求59所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分或氨基酸单元包含Ala-Ala-Asp。
63.如权利要求58或权利要求59所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分或氨基酸单元包含Glu-Val-Cit。
64.如权利要求57所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含马来酰亚胺部分和可裂解葡糖苷酸部分。
65.如权利要求64所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
66.如权利要求57至65中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该马来酰亚胺部分包含马来酰亚胺基己酰基(MC)。
67.如权利要求57至66中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该马来酰亚胺部分与该抗体或抗原结合片段上的半胱氨酸残基反应。
68.如权利要求57至67中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该马来酰亚胺部分经由该抗体或抗原结合片段上的半胱氨酸残基连接至该抗体或抗原结合片段。
69.如权利要求44至68中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含至少一个间隔子单元。
70.如权利要求69所述的抗体-药物缀合物，其中该接头中的间隔子单元包含聚乙二醇(PEG)部分。
71.如权利要求70所述的抗体-药物缀合物，其中该PEG部分包含-(PEG)m-且m是1至10或4至8的整数，例如4、7或8。
72.如权利要求71所述的抗体-药物缀合物，其中m为2。
73.如权利要求69至72中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头中的间隔子单元经由马来酰亚胺部分(“Mal-间隔子单元”)连接至该抗体或抗原结合片段。
74.如权利要求73所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含该Mal-间隔子单元和可裂解肽部分。
75.如权利要求74所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分包含氨基酸单元。
76.如权利要求74或权利要求75所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。
77.如权利要求73所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含该Mal-间隔子单元和可裂解葡糖苷酸部分。
78.如权利要求77所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
79.如权利要求73至78中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该Mal-间隔子单元包含PEG部分。
80.如权利要求73至79中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该Mal-间隔子单元包含马来酰亚胺基己酰基(MC)。
81.如权利要求73至80中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该马来酰亚胺部分或Mal-间隔子单元将该抗体或抗原结合片段连接至该接头中的可裂解部分。
82.如权利要求81所述的抗体-药物缀合物，其中该接头中的可裂解部分包含可裂解肽部分。
83.如权利要求82所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分包含氨基酸单元。
84.如权利要求82或权利要求83所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。
85.如权利要求82至84中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含MC-Val-Cit。
86.如权利要求82至84中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含MC-Val-Ala。
87.如权利要求82至84中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含MC-Ala-Ala-Asp。
88.如权利要求82至84中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含MC-Glu-Val-Cit。
89.如权利要求82至84中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit。
90.如权利要求81所述的抗体-药物缀合物，其中该接头中的可裂解部分包含可裂解葡糖苷酸部分。
91.如权利要求90所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
92.如权利要求90或权利要求91所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含MC-β-葡糖苷酸。
93.如权利要求44至92中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头中的可裂解部分直接地连接至该剪接调节剂，或其中间隔子单元将该接头中的可裂解部分连接至该剪接调节剂。
94.如权利要求93所述的抗体-药物缀合物，其中该缀合物的裂解使该剪接调节剂自该抗体或抗原结合片段和接头释放。
95.如权利要求93或权利要求94所述的抗体-药物缀合物，其中将该接头中的可裂解部分连接至该剪接调节剂的间隔子单元是自消融型的。
96.如权利要求93至95中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中将该接头中的可裂解部分连接至该剪接调节剂的间隔子单元包含对氨基苄氧基羰基(pABC)。
97.如权利要求96所述的抗体-药物缀合物，其中该pABC将该接头中的可裂解部分连接至该剪接调节剂。
98.如权利要求96或权利要求97所述的抗体-药物缀合物，其中该接头中的可裂解部分包含可裂解肽部分。
99.如权利要求98所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分包含氨基酸单元。
100.如权利要求98或权利要求99所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解肽部分或氨基酸单元包含Val-Cit、Val-Ala、Ala-Ala-Asp或Glu-Val-Cit。
101.如权利要求98至100中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含Val-Cit-pABC。
102.如权利要求98至100中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含Val-Ala-pABC。
103.如权利要求98至100中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含Ala-Ala-Asp-pABC。
104.如权利要求98至100中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含Glu-Val-Cit-pABC。
105.如权利要求96或权利要求97所述的抗体-药物缀合物，其中该接头中的可裂解部分包含可裂解葡糖苷酸部分。
106.如权利要求105所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解葡糖苷酸部分包含β-葡糖苷酸。
107.如权利要求105或权利要求106所述的抗体-药物缀合物，其中该接头包含β-葡糖苷酸-pABC。
108.如权利要求44至107中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC、MC-Val-Ala-pABC、MC-Ala-Ala-Asp-pABC、MC-Glu-Val-Cit-pABC、MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC或MC-β-葡糖苷酸。
109.如权利要求108所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC。
110.如权利要求108所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Val-Ala-pABC。
111.如权利要求108所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。
112.如权利要求108所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。
113.如权利要求108所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。
114.如权利要求108所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸。
115.如权利要求43所述的抗体-药物缀合物，其中该接头是不可裂解接头。
116.如权利要求43至115中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该剪接调节剂包含SF3b复合体的调节剂。
117.如权利要求43至116中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该剪接调节剂包含普拉二烯内酯或普拉二烯内酯衍生物。
118.如权利要求43至117中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该剪接调节剂包含普拉二烯内酯D或普拉二烯内酯D衍生物。
119.如权利要求43至118中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该剪接调节剂包含D1或D2。
120.如权利要求43至119中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该剪接调节剂包含D1。
121.如权利要求43至119中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该剪接调节剂包含D2。
122.如权利要求43至121中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为1至12。
123.如权利要求43至122中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为2至8。
124.如权利要求43至123中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为4至8，例如4、7或8。
125.如权利要求43至124中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为4。
126.如权利要求43至124中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为8。
127.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)p(I)
其中
Ab是如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段；
D是D1；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
128.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)p(I)
其中
Ab是如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段；
D是D2；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
129.如权利要求127或权利要求128所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ ID NO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(b)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ ID NO:8(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:9(LCDR1)、SEQID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:43(HCDR1)、SEQ ID NO:44(HCDR2)和SEQ ID NO:45(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:46(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(c)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:12(HCDR2)和SEQ ID NO:13(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:14(LCDR1)、SEQID NO:15(LCDR2)和SEQ ID NO:16(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:47(HCDR1)、SEQ ID NO:48(HCDR2)和SEQ ID NO:49(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:50(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(d)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:17(HCDR2)和SEQ ID NO:18(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:19(LCDR1)、SEQID NO:20(LCDR2)和SEQ ID NO:21(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:51(HCDR1)、SEQ ID NO:52(HCDR2)和SEQ ID NO:53(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:54(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(e)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
(f)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:27(HCDR2)和SEQ ID NO:28(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:29(LCDR1)、SEQID NO:30(LCDR2)和SEQ ID NO:31(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:59(HCDR1)、SEQ ID NO:60(HCDR2)和SEQ ID NO:61(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:62(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；或
(g)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:32(HCDR2)和SEQ ID NO:33(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:34(LCDR1)、SEQID NO:35(LCDR2)和SEQ ID NO:36(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:63(HCDR1)、SEQ ID NO:64(HCDR2)和SEQ ID NO:65(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:66(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
130.如权利要求127至129中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。
131.如权利要求127至130中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:77的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(b)与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:79的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(c)与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(d)与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:83的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(e)与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；
(f)与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:87的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区；或
(g)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区，以及与SEQ IDNO:89的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。
132.如权利要求127至131中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区；
(f)含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区。
133.如权利要求127至131中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)和SEQ ID NO:3(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQID NO:5(LCDR2)和SEQ ID NO:6(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:37(HCDR1)、SEQ ID NO:38(HCDR2)和SEQ ID NO:39(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:42(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；或
(b)三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
134.如权利要求133所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
135.如权利要求127至131中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26 (LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQ ID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的。
136.如权利要求135所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
137.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)p(I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA，并且包含三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:22(HCDR2)和SEQ ID NO:23(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:24(LCDR1)、SEQ ID NO:25(LCDR2)和SEQ ID NO:26(LCDR3)，如由Kabat编号系统所定义的；或者三个HCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:55(HCDR1)、SEQ ID NO:56(HCDR2)和SEQ ID NO:57(HCDR3)；以及三个LCDR，其包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:40(LCDR1)、SEQ ID NO:41(LCDR2)和SEQID NO:58(LCDR3)，如由IMGT编号系统所定义的；
D是D1；
L是将Ab共价连接至D的接头；并且
p为1至15的整数。
138.如权利要求137所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含人重链和轻链可变区框架，或具有一个或多个回复突变的人重链和轻链可变区框架。
139.如权利要求137或权利要求138所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区以及与SEQ IDNO:85的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区。
140.如权利要求137至139中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区。
141.如权利要求127至140中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区和人Igκ轻链恒定区。
142.如权利要求127至141中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链恒定区以及含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的轻链恒定区。
143.如权利要求127至142中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链。
144.如权利要求142或权利要求143所述的抗体-药物缀合物，其中该重链恒定区或重链进一步包含C-末端赖氨酸(K)。
145.如权利要求127至144中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中该接头是可裂解接头。
146.如权利要求145所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC。
147.如权利要求145所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Val-Ala-pABC。
148.如权利要求145所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。
149.如权利要求145所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。
150.如权利要求145所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。
151.如权利要求145所述的抗体-药物缀合物，其中该可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸。
152.如权利要求127至151中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为1至12。
153.如权利要求127至152中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为2至8。
154.如权利要求127至153中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为4至8。
155.如权利要求127至154中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为4。
156.如权利要求127至154中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p为8。
157.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段、或如权利要求43至156中任一项所述的抗体-药物缀合物、以及药学上可接受的载体。
158.如权利要求157所述的药物组合物，其中该药物组合物包含该抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物的多个拷贝。
159.根据权利要求157或权利要求158所述的药物组合物，其中该药物组合物包含该抗体-药物缀合物的多个拷贝，其中该组合物中抗体-药物缀合物的平均p为约2至约8。
160.如权利要求159所述的药物组合物，其中该组合物中抗体-药物缀合物的平均p为约4。
161.一种治疗患有或疑似患有癌症的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如权利要求43至156中任一项所述的抗体-药物缀合物、或如权利要求157至160中任一项所述的药物组合物。
162.如权利要求161所述的方法，其中该癌症表达BCMA。
163.如权利要求161或权利要求162所述的方法，其中该癌症是浆细胞恶性肿瘤。
164.如权利要求161至163中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
165.如权利要求161至164中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。
166.如权利要求161至165中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。
167.如权利要求161至166中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
168.如权利要求161至167中任一项所述的方法，其中该抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物与一种或多种另外的治疗剂组合施用。
169.如权利要求168所述的方法，其中该一种或多种另外的治疗剂包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂、和/或γ分泌酶抑制剂。
170.一种减少或减慢受试者中癌细胞群的生长的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如权利要求43至156中任一项所述的抗体-药物缀合物、或如权利要求157至160中任一项所述的药物组合物。
171.如权利要求170所述的方法，其中该癌细胞群表达BCMA。
172.如权利要求170或权利要求171所述的方法，其中该癌细胞群是浆细胞恶性肿瘤。
173.如权利要求170至172中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌细胞群是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
174.如权利要求170至173中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌细胞群是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。
175.如权利要求170至174中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌细胞群是多发性骨髓瘤。
176.如权利要求170至175中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌细胞群是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
177.如权利要求170至176中任一项所述的方法，其中该抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物的施用使该癌细胞群减少至少约10％、至少约20％、至少约50％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％。
178.如权利要求170至177中任一项所述的方法，其中该抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物的施用使该癌细胞群的生长减慢至少约10％、至少约20％、至少约50％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％。
179.如权利要求170至178中任一项所述的方法，其中该抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物与一种或多种另外的治疗剂组合施用。
180.如权利要求179所述的方法，其中该一种或多种另外的治疗剂包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂、和/或γ分泌酶抑制剂。
181.一种确定患有或疑似患有癌症的受试者是否会对用如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如权利要求43至156中任一项所述的抗体-药物缀合物、或如权利要求157至160中任一项所述的药物组合物进行的治疗有应答的方法，该方法包括提供来自该受试者的生物样品；使该样品与该抗体或抗原结合片段接触；以及检测该抗体或抗原结合片段与该样品中的一种或多种癌细胞的结合。
182.如权利要求181所述的方法，其中该一种或多种癌细胞表达BCMA。
183.如权利要求181或权利要求182所述的方法，其中该癌症表达BCMA。
184.如权利要求181至183中任一项所述的方法，其中该癌症是浆细胞恶性肿瘤。
185.如权利要求181至184中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
186.如权利要求181至185中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。
187.如权利要求181至186中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。
188.如权利要求181至187中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
189.如权利要求181至188中任一项所述的方法，其中该生物样品是血液样品或骨髓穿刺样品。
190.如权利要求189所述的方法，其中该血液样品是血液、血液成分、或从血液或血液成分中获得的一种或多种细胞。
191.如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如权利要求43至156中任一项所述的抗体-药物缀合物、或如权利要求157至160中任一项所述的药物组合物，其用于治疗患有或疑似患有癌症的受试者。
192.如权利要求191所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该癌症表达BCMA。
193.如权利要求191或权利要求192所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该癌症是浆细胞恶性肿瘤。
194.如权利要求191至193中任一项所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
195.如权利要求191至194中任一项所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。
196.如权利要求191至195中任一项所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。
197.如权利要求191至196中任一项所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
198.如权利要求191至197中任一项所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物用于与一种或多种另外的治疗剂组合使用。
199.如权利要求198所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该一种或多种另外的治疗剂包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂、和/或γ分泌酶抑制剂。
200.如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如权利要求43至156中任一项所述的抗体-药物缀合物、或如权利要求157至160中任一项所述的药物组合物在治疗患有或疑似患有癌症的受试者中的用途。
201.如权利要求200所述的用途，其中该癌症表达BCMA。
202.如权利要求200或权利要求201所述的用途，其中该癌症是浆细胞恶性肿瘤。
203.如权利要求200至202中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
204.如权利要求200至203中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。
205.如权利要求200至204中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。
206.如权利要求200至205中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
207.如权利要求200至206中任一项所述的用途，其中该抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物用于与一种或多种另外的治疗剂组合使用。
208.如权利要求207所述的用途，其中该一种或多种另外的治疗剂包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂、和/或γ分泌酶抑制剂。
209.如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如权利要求43至156中任一项所述的抗体-药物缀合物、或如权利要求157至160中任一项所述的药物组合物在制造用于治疗患有或疑似患有癌症的受试者的药物的方法中的用途。
210.如权利要求209所述的用途，其中该癌症表达BCMA。
211.如权利要求209或权利要求210所述的用途，其中该癌症是浆细胞恶性肿瘤。
212.如权利要求209至211中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是白血病、淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
213.如权利要求209至212中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆母细胞性骨髓瘤或伯基特淋巴瘤。
214.如权利要求209至213中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是多发性骨髓瘤。
215.如权利要求209至214中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症是复发性/难治性多发性骨髓瘤。
216.如权利要求209至215中任一项所述的用途，其中该抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物用于与一种或多种另外的治疗剂组合使用。
217.如权利要求216所述的用途，其中该一种或多种另外的治疗剂包括BCL2抑制剂、BCLxL抑制剂、BCL2/BCLxL抑制剂、和/或γ分泌酶抑制剂。
218.一种分离的核酸，该分离的核酸编码如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
219.一种分离的运载体，该分离的运载体包含如权利要求218所述的核酸。
220.一种分离的细胞或细胞群，该分离的细胞或细胞群包含如权利要求218所述的核酸或如权利要求219所述的运载体。
221.一种产生抗体或抗原结合片段的方法，该方法包括在适合产生该抗体或抗原结合片段的条件下培养如权利要求220所述的细胞或细胞群。
222.一种产生抗体-药物缀合物的方法，该方法包括在允许缀合的条件下使如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段与连接至剪接调节剂的接头反应。
223.一种产生抗体-药物缀合物的方法，该方法包括在允许缀合的条件下使如权利要求1至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段与接头和剪接调节剂反应。
224.如权利要求223所述的方法，该方法包括使该抗体或抗原结合片段与该接头和该剪接调节剂顺序地反应，其中首先使该抗体或抗原结合片段与该接头反应形成抗体-接头中间体，然后使该抗体-接头中间体与该剪接调节剂反应。
225.如权利要求223所述的方法，该方法包括使该抗体或抗原结合片段与该接头和该剪接调节剂同时反应。
226.如权利要求222至225中任一项所述的方法，其中该接头是可裂解接头。
227.如权利要求226所述的方法，其中该可裂解接头包含MC-Val-Cit-pABC。
228.如权利要求226所述的方法，其中该可裂解接头包含MC-Val-Ala-pABC。
229.如权利要求226所述的方法，其中该可裂解接头包含MC-Ala-Ala-Asp-pABC。
230.如权利要求226所述的方法，其中该可裂解接头包含MC-Glu-Val-Cit-pABC。
231.如权利要求226所述的方法，其中该可裂解接头包含MC-(PEG)2-Val-Cit-pABC。
232.如权利要求226所述的方法，其中该可裂解接头包含MC-β-葡糖苷酸。
233.如权利要求222至232中任一项所述的方法，其中该剪接调节剂包含D1。
234.如权利要求222至232中任一项所述的方法，其中该剪接调节剂包含D2。
235.如权利要求161至167中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包括活跃分裂的细胞、休眠细胞或两者。
236.如权利要求161至167或权利要求235中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包含休眠细胞。
237.如权利要求161至167、权利要求235或权利要求236中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症表达MCL1。
238.如权利要求237所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症具有高或中等水平的MCL1表达。
239.如权利要求181至188中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包括活跃分裂的细胞、休眠细胞或两者。
240.如权利要求181至188或权利要求239中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包含休眠细胞。
241.如权利要求181至188、权利要求239或权利要求240中任一项所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症表达MCL1。
242.如权利要求241所述的方法，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症具有高或中等水平的MCL1表达。
243.如权利要求191至197中任一项所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包括活跃分裂的细胞、休眠细胞或两者。
244.如权利要求191至197或权利要求243中任一项所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包含休眠细胞。
245.如权利要求191至197、权利要求243或权利要求244中任一项所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症表达MCL1。
246.如权利要求245所述的抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或药物组合物，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症具有高或中等水平的MCL1表达。
247.如权利要求200至206中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包括活跃分裂的细胞、休眠细胞或两者。
248.如权利要求200至206或权利要求247中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包含休眠细胞。
249.如权利要求200至206、权利要求247或权利要求248中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症表达MCL1。
250.如权利要求249所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症具有高或中等水平的MCL1表达。
251.如权利要求209至215中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包括活跃分裂的细胞、休眠细胞或两者。
252.如权利要求209至215或权利要求251中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症包含休眠细胞。
253.如权利要求209至215、权利要求251或权利要求252中任一项所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症表达MCL1。
254.如权利要求253所述的用途，其中该浆细胞恶性肿瘤或癌症具有高或中等水平的MCL1表达。
255.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)p(I)
其中
Ab是抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段能够结合BCMA并且包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链以及含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链；
D是D1；
L是将Ab共价连接至D并且包含MC-Val-Cit-pABC的可裂解接头；并且
p是4至8的整数，例如4、7或8。
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