CN116019818B

CN116019818B - 一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物及其应用

Info

Publication number: CN116019818B
Application number: CN202310056638.6A
Authority: CN
Inventors: 吴皓; 刘辉辉
Original assignee: Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Current assignee: Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Priority date: 2023-01-18
Filing date: 2023-01-18
Publication date: 2024-03-19
Anticipated expiration: 2043-01-18
Also published as: CN116019818A

Abstract

本发明公开了一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物及其应用，涉及医药领域。通过小鼠噪声性耳蜗突触损伤小鼠模型实验，评价L‑5‑甲基四氢叶酸钙、MitoQ单独使用及其联合使用对两种耳蜗突触损伤的影响，发现L‑5‑MTHF‑Ca和MitoQ及其联合给药对噪声暴露引起的线粒体损伤和细胞凋亡具有良好的保护效果，对噪声暴露时内毛细胞带状突触的数量减少以及噪声暴露后的听力损失具有显著的保护作用，且联合给药具有协同效应，直观地验证了L‑5‑MTHF‑Ca+MitoQ组合药物对耳蜗突触损伤具有预防、改善和/或治疗作用，能够用于制备防治后天性感音神经性聋的药物，具有良好的研究和应用前景。

Description

一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物及其应用。

背景技术

目前全球约有11亿年轻人(12～35岁之间)正面临无法逆转的听力损失，到2030年，全世界将有近6.3亿人患上听力损失；到2050年，这个数字将会上升到9亿人以上。因此，对耳聋的防治具有极其重要的科学意义和社会效益。噪声、药物、感染、遗传等因素致毛细胞受损者称为感音性聋，其中，噪声暴露是后天性聋的主要原因，其致病机制主要是耳蜗突触(内毛细胞带状突触)损伤。此外，内毛细胞带状突触损伤也是药物性聋常见的病理改变，因此，对内毛细胞带状突触损伤进行有效干预可能成为治疗和预防听力损失的重要手段。

目前，临床上尚无有效的药物来预防和治疗噪声性内毛细胞带状突触损伤。在基础科学研究中，仅仅报道谷氨酸拮抗剂、神经营养因子、钙通道阻滞剂、抗氧化剂、抗炎药物及血管扩张剂等对噪声性听力损失的防治作用，但效果不佳且均不能防止噪声引起的内毛细胞带状突触损伤。其根本原因在于后天性感音神经性聋的发病机制尚不清楚。此外，目前公认噪声暴露及耳聋性药物可导致内耳线粒体氧化还原反应增多，但是，应用抗氧化还原制剂的效果往往不是很好。

内耳毛细胞是一感觉神经细胞，负责将声波的机械信号转换电信号。在神经系统中，DNA的损伤可导致神经退行性病变，例如：阿尔兹海默病、帕金森病及侧索硬化等神经退行性疾病。成熟的神经细胞是终末分化不再增殖的细胞。因此，细胞DNA的损伤随着损伤因子的持续而逐渐累加，最终引起细胞凋亡。虽然在不同的神经系统疾病中有多种DNA损伤修复机制的参与。但DNA损伤修复障碍而导致神经细胞功能下降甚至凋亡是许多获得性和神经退行性疾病的共同病理机制之一。

L-5-甲基四氢叶酸钙(L-5-MTHF-Ca)是一种新型的叶酸类药物，可参与体内很多重要的生化反应，具有重要的药理作用。此类药物溶于水，可以透过血脑屏障，能够预防老年痴呆、细胞贫血等症状。然而，经查阅国内外相关文献尚未见与有关L-5-甲基四氢叶酸钙及其制剂对噪声性、药物性等后天性感音神经性听力损失防治作用的研究报道。更未见其与线粒体靶向抗氧化剂(MitoQ)联用，协同防治后天性感音神经性聋中的作用。

发明内容

本发明针对现有用于预防和治疗后天性感音神经性听力损失尤其是有效干预内毛细胞带状突触损伤的药物稀少问题，目的在于提供了一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物及其应用，所述组合物包括：L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ，所述组合物对耳蜗突触损伤具有预防、改善和/或治疗作用，能够用于制备防治后天性感音神经性聋的药物。

为解决上述问题，本发明首先提供了一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物，所述组合物包括：L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1：0.1～1：10。

优选地，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1：0.5～1：3。

优选地，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1：1.2。

本发明另一方面还提供了前面任一项所述的用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物在制备防治后天性感音神经性聋的药物中的应用。

优选地，所述的后天性感音神经性聋由噪声或耳毒性药物引起的耳蜗突触损伤造成。

本发明另一方面还提供了一种用于防治后天性感音神经性聋的药用组合物，所述的药用组合物包括前面任一项所述的用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物，以及药学上可接受的载体。

优选地，所述的药用组合物的剂型包括固体剂型和液体剂型。

优选地，所述的固体剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、栓剂、膜剂、胶剂、膏剂或粉剂。

优选地，所述的液体剂型包括注射液、合剂、口服液、糖浆剂、酒剂、溶胶剂、乳剂。

相对于现有技术，本发明的有益效果是：

本发明通过小鼠噪声性耳蜗突触损伤小鼠模型实验，评价L-5-甲基四氢叶酸钙、MitoQ单独使用及其联合使用对噪声性耳蜗突触损伤的影响，发现L-5-MTHF-Ca和MitoQ及其联合给药对噪声暴露引起的线粒体损伤和细胞凋亡具有良好的保护效果，对噪声暴露时内毛细胞带状突触的数量减少以及噪声暴露后的听力损失具有显著的保护作用，且联合给药具有协同效应，直观地验证了L-5-MTHF-Ca+MitoQ对耳蜗突触损伤具有预防、改善和/或治疗作用，能够用于制备防治后天性感音神经性聋的药物。

附图说明

图1为对照组和实验组噪声暴露前和噪声暴露后第1天、第3天小鼠听力ABR检测结果；其中：

A为对照组和实验组小鼠噪声暴露前和噪声暴露后第1天听力阈值的变化；

B为对照组和实验组小鼠噪声暴露前和噪声暴露后第3天听力阈值的变化；

图2为噪声暴露后第1天对照组和实验组小鼠内毛细胞带状突触数量的变化；其中：

A为对照组和实验组小鼠耳蜗基底免疫荧光染色图；

B为对照组和实验组小鼠内毛细胞带状突触数量对比图；

图3为噪声暴露后第1天对照组和实验组小鼠毛细胞损伤标记物表达变化。

图中：***：p<0.001，**：p<0.01，*：p<0.05。

具体实施方式

以下结合附图和实施例对本发明的技术方案做进一步的说明。

本发明申请人经过研究发现，噪声暴露及耳毒性药物使用后基因表达变化主要富集在“DNA损伤”和“DNA损伤修复”上，推测后天性感音神经性聋的发病机制与DNA损伤累计相关，这可能是其发生的共同病理过程，因此推测，促进DNA损伤修复可能是防治后天性感音神经性聋的关键。另外，氧化还原反应产生的自由基可损伤DNA，因此，联合应用促进DNA损伤修复与抑制氧化应激反应，可能将会是防治耳蜗突触损伤及后天性感音神经性聋的关键。

基于上述发现，本发明申请人经过大量研究和筛选，首先提供了一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物，所述组合物包括：L-5-甲基四氢叶酸钙(L-5-MTHF-Ca)和MitoQ，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1：0.1～1：10。

一些实施例中，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1：0.5～1：3。

一些实施例中，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1：1.2。

合适的药学上可接受的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’sPharmaceutical Sciences中可找到关于药学上可接受的载体的充分说明。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、磷酸盐缓冲液、ringer溶液、生理盐水、平衡盐溶液、甘油或山梨醇等。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润滑剂、助流剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质和稳定剂，如白蛋白等。在使用时，是将安全有效量的本发明所述的大麻素组合物施用于哺乳动物(如人)。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合。对于某给定的状况而言，可以用常规实验来确定该有效量，临床医师是能够判断出来的。

一些实施例中，所述的药用组合物的剂型包括固体剂型和液体剂型。所述的固体剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、栓剂、膜剂、胶剂、膏剂或粉剂；所述的液体剂型包括注射液、合剂、口服液、糖浆剂、酒剂、溶胶剂、乳剂。

本发明通过小鼠噪声性耳蜗突触损伤小鼠模型实验，评价L-5-甲基四氢叶酸钙、MitoQ单独使用及其联合使用对两种耳蜗突触损伤的影响，结果发现L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ对噪声暴露后的内毛细胞突触的数量及线粒体损伤具有良好的保护效果，其中，当两种药物联合使用时，协同保护作用显著，直观地验证了L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ对耳蜗突触损伤及后天性感音神经性聋的防治作用。

下面对本发明的实验过程及实验结果进行详细说明，从而详细阐述L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ对耳蜗突触损伤的预防、改善和/或治疗作用，能够用于制备防治后天性感音神经性聋的药物。

(一)实验材料

1.试剂

L-5-甲基四氢叶酸钙溶液：精密称取适量L-5-甲基四氢叶酸钙(购自selleck生物科技有限公司，目录号：S5264，CAS:151533-22-1)，加双蒸水溶解，配成质量浓度为300mg/mL的储备液，-80℃贮存备用。

线粒体靶向抗氧化剂(MitoQ)溶液：精密称取适量MitoQ(购自selleck生物科技有限公司，目录号：S8978，CAS:845959-50-4)，加双蒸水溶解，配成质量浓度为250mg/mL的储备液，-80℃贮存备用。

2.动物

选取4周龄的C57/b6J雄性小鼠(上海)若干，排除中耳及内耳疾病，并进行ABR听阈检测，筛选ABR听阈正常小鼠作为实验对象。实验动物饲养维持在室温24℃，给与充足的水和食物，黑白周期为12小时，环境噪声小于40dB SPL。所有实验操作均得到上海交通大学医学院动物伦理委员会的批准。

(二)实验方法

1.动物分组及处理

实验动物随机分为4组，包括：

对照组，对照组小鼠腹腔注射与实验组小鼠同等容积的生理盐水。

实验组，又分为L-5-MTHF-Ca组(单独给药30mg/g L-5-MTHF-Ca)，MitoQ组(单独给药25mg/g MitoQ)和L-5-MTHF-Ca+MitoQ组(联合给药30mg/g L-5-MTHF-Ca+25mg/gMitoQ)。采用腹腔给药的方式，在噪声暴露前3天和噪声暴露后3天各组进行腹腔注射给药，每天给药一次。

2.实验动物噪声暴露

将所有实验小鼠置于铁网笼子不同的间隔中，小鼠可在笼子间隔中自由活动。将扬声器至于笼子正上方顶端。噪声信号由实时信号处理器(TDT系统)产生。在每次噪声暴露前都要对扬声器的声音进行校准，校准时声级计的探头是置于笼内进行的，声音在笼子内各部位的声强变化<1dB。噪声暴露时采用频率为2-20kHz，声强为103dB SPL的噪声进行暴露，暴露时间为2小时。

(三)检测

1.听力脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)

噪声暴露前和噪声暴露后1天、3天分别测量基础值和噪声暴露后听力阈值的变化情况。具体方法：选取各组的实验小鼠并称重，按10mg/mL的剂量腹腔注射5％水合氯醛进行麻醉。当小鼠呼吸缓慢平稳、角膜反射和耳廓疼痛反射消失并无打嗝现象则表明麻醉适度。将麻醉后的小鼠至于恒温垫上，设置温度为37℃，并根据小鼠肛温进行调节，以确保ABR测量的准确性并防止小鼠麻醉后因体温下降而引起死亡。ABR测试的给声方式为开放声场，扬声器位于小鼠正前方，距离双耳连线中点10cm处。将记录电极置于小鼠颅顶正中皮下，参考电极置于乳突区皮下，接地电极置于上肢肩部皮下。电极接好后首先分别检查各电极间电阻，必须保证任意两电极之间的电阻≤10Ω，电阻越小，所引起的波形紊乱和尾迹也越小，对判定听阈更有利、更准确。ABR TDT系统刺激声频率为4.0、5.6、8.0、11.3、16.0、22.6和32.0kHz的短纯音。刺激速率为10次/s，刺激持续时间为5ms，上升和下降时间均为1ms，重复速率21次/s，滤波带宽100～3000Hz，叠加次数为400；给声强度从90dB SPL开始，按5dB SPL递减，直到各个波形消失前定义为听力阈值。在接近阈值时，一般要重复检测两次以上比较波形是否一致。各指标均由测试仪器所附软件实时显示、记录、计算和存储。

2.耳蜗基底膜免疫荧光染色计数内毛细胞带状突触数量

噪声暴露后第一天，取各个组的部分小鼠进行过量麻醉致死、断头，直视下快速取出双侧听泡，置于4％多聚甲醛(PFA)中。在解剖显微镜下，用显微镊子去除听泡及周围软组织。用1mL针筒在蜗尖处钻孔并开放圆窗及卵圆窗，吸取4％PFA并将其分别经圆窗和卵圆窗注入耳蜗内，可见蜗内液体流出直至变清。进行三次圆窗、卵圆窗4％PFA灌流使耳蜗组织充分固定，置于4℃冰箱固定过夜。在显微镜下，自蜗顶向蜗底逐层剔除蜗壳骨质充分暴露螺旋韧带、基底膜和蜗轴等，以蜗轴为支点旋转向下剥离螺旋韧带及血管纹。用显微解剖镊轻轻下压骨螺旋板使其与蜗轴分离，逐渐将基底膜撕脱下来。为了增强染色效果，清除宽大、易碎的前庭膜和细长、坚韧的盖膜。将分离下来的基底膜放入有机玻璃血凝板内，加入PBS清洗3次，每次5分钟。5％ Triton X-100室温下放置30分钟后PBS清洗3次，每次5分钟。加入含5％ BSA(牛血清白蛋白，Bovine Serum Albumin)PBS封闭液阻断非特异性位点，室温下放置2小时。用1％ BSA配置1：100的mouse anti-CtBP2IgG1。加入PBS清洗基底膜3次，每次5分钟。并加入配置好的一抗，置于4℃冰箱固定过夜。第二天使用PBS漂洗3次，每次5分钟。用1％BSA配置1：200的Alexa Fluor 568-conjugated goat anti mouse IgG1。加入配置好的二抗在室温下避光染色1小时。PBS清洗3次，每次5分钟。将抗荧光淬灭封片剂(含DAPI)滴在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上，将基底膜用显微解剖镊子夹持并转到载玻片上。在显微镜下将基底膜铺平并使用8*8mm盖玻片自封片剂水滴一侧缓缓放下，确保载玻片与盖玻片之间没有气泡，用指甲油固定盖玻片。

将含有耳蜗基底膜的载破片置于激光共聚焦显微镜下，用60x水镜选取视野并观察染色效果。选用波长分别为561nm和633nm的激光波长进行激发。在所选区域对毛细胞从上至下进行扫描，对标本的各层图像进行连续观察，获得各层扫描信号后，使信号显现在同一层面，便于后期对信号数目的观察和计数，本实施例实验中扫描设定的扫描层距为0.5μm。

3、凋亡通路蛋白表达的检测

(1)耳蜗蛋白提取

5％水合氯醛麻醉小鼠，剪刀断头取出双侧耳蜗，去除听泡，放入含有冰冷PBS的解剖皿中。使用显微解剖镊去除多余组织及耳蜗上附着的血凝块，清理干净后耳蜗移入新的皿中。快速从顶圈至底圈分离耳蜗基底膜放入EP管中，以6个基底膜为一组，每管加入400μlRIPA溶液进行蛋白裂解，冰上静置30分钟，每隔10min摇晃震荡。裂解结束后，12000rpm，4℃，离心10分钟内，吸取上清液即为蛋白样品。

(2)蛋白质定量

本实施例采用碧云天BCA蛋白浓度测定试剂盒。取0.8mL蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(20mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/mL的蛋白标准溶液。取适量蛋白标准溶液，稀释至终浓度为0.5mg/mL的蛋白标准品。按50份体积BCA试剂A加1份体积BCA试剂B(50：1)配制适量BCA工作液，充分混匀。将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板中，不足20μl用标准品稀释液补足。吸取待测蛋白样品6μl加到96孔板中，并用标准品稀释液补足到20μl。各孔中加入200μl BCA工作液，37℃静置20分钟。使用酶标仪检测562nm处的吸光度。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。

(3)DS-PAGE凝胶电泳和转印

本实施例采用碧云天SDS-PAGE预制胶(Tris-Gly，10％，12孔)。取各组样本12μl，用5×Loading Buffer稀释至15μl，100℃煮沸5-10分钟，充分混匀后离心，置于冰上保存。将适量电泳液导入电泳槽中，将预制胶固定在电泳槽中，平稳、缓慢的拔出梳子，每孔加入15μl待测样品，待测样品两侧加入5μl蛋白Marker，并用1×Loading Buffer补足至15μl。80V电泳30分钟，110V电泳90分钟。电泳结束后小心取下凝胶，并将PVDF膜置于适量甲醇中浸泡1-2分钟后放入冰盒后倒满转膜液。

(4)封闭

转印结束后，将PVDF膜取出后进行切割并放入塑料盒间隔中，倒入适量封闭液。摇床室温封闭1小时，封闭非特异性结合位点。

(5)孵育一抗过夜，次日，使用洗涤液洗涤三遍，每遍10分钟。洗涤结束后使用二抗稀释液稀释相应二抗，按1：5000稀释。室温孵育1小时。孵育结束后，洗涤液洗涤3遍，每遍10分钟。

(6)ECL底物显影

将ECL发光液均匀撒在PVDF膜上，静置反应2分钟。将反应后的PVDF膜放入凝胶成像系统(Amersham Imager 600)进行图片曝光并采集图片。

(四)统计方法

实验数据结果使用mean±SEM表示，应Prism和Igor进行统计学分析和作图。使用one-way或two-way ANOVA followed by Bonferroni post-hoc test或者使用unpairedStudent’s t-test(数据同时符合正态分布和方差齐，如果不符合则用Mann-Whitney Utest)。以P<0.05定义为差异有统计学意义。

(五)实验结果

1.L-5-MTHF-Ca+MitoQ对噪声暴露后小鼠ABR的影响

如图1所示，通过检测对照组、单独给药组(L-5-MTHF-Ca组、MitoQ组)和联合给药组(L-5-MTHF-Ca+MitoQ组)小鼠噪声暴露前后ABR的变化，反映L-5-MTHF-Ca和MitoQ及其联合用药对噪声性突触损伤的功效。

结果显示，对照组小鼠和3个实验组小鼠在噪声暴露后第1天听觉阈值均上升，但对照组小鼠听觉阈值上升幅度显著高于3个实验组，其中，联合给药组小鼠的听觉阈值上升幅度最小，即，相较于单独给药L-5-MTHF-Ca或MitoQ，联合给药L-5-MTHF-Ca+MitoQ具有显著的协同效应，对噪声暴露后听力损失的保护效果更好(图1的A)。继续追踪噪音暴露后第3天小鼠听觉阈值，发现联合给药L-5-MTHF-Ca+MitoQ组小鼠听力已基本恢复(图1的B)。

上述实验结果表明，联合给药L-5-MTHF-Ca和MitoQ可以有效预防和治疗噪声诱导的听力损失。

2.L-5-MTHF-Ca+MitoQ对噪声暴露后小鼠内毛细胞带状突触数量的影响

如图2的A和B图所示，计数噪声暴露后第1天对照组、3个实验组小鼠内毛细胞带状突触数量。结果显示，噪音暴露后第1天，实验组小鼠内毛细胞带状突触数量显著多于对照组，其中，联合给药L-5-MTHF-Ca+MitoQ组小鼠的带状突触数量显著多于单独给药L-5-MTHF-Ca或MitoQ组，表明联合给药L-5-MTHF-Ca+MitoQ对噪声暴露引起的带状突触损伤具有显著的保护作用。

3.L-5-MTHF-Ca+MitoQ对噪声暴露引起的线粒体损伤及细胞凋亡具有保护作用

如图3所示，噪声暴露后第1天，取各组小鼠基底膜进行BAX、Bcl-2、细胞色素C及Cleaved caspase-3表达变化的检测。结果显示，联合给药L-5-MTHF-Ca+MitoQ可显著降低促凋亡蛋白Cleaved caspase-3以及线粒体损伤相关蛋白细胞色素C的表达量，提高抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量，对噪声暴露引起的线粒体损伤以及细胞凋亡具有显著的保护作用。

综上所述，本发明发现联合给药L-5-MTHF-Ca和MitoQ对噪声暴露引起的线粒体损伤和细胞凋亡具有良好的保护效果，对噪声暴露时内毛细胞带状突触的数量减少以及噪声暴露后的听力损失具有显著的保护作用，直观地验证了L-5-MTHF-Ca+MitoQ对耳蜗突触损伤具有预防、改善和/或治疗作用，能够用于制备防治后天性感音神经性聋的药物。

尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。

Claims

1.一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物，其特征在于，所述组合物由L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ组成，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1：0.1~1：10。

2.如权利要求1所述的用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物，其特征在于，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1： 0.5~1：3。

3.如权利要求1所述的用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物，其特征在于，所述的L-5-甲基四氢叶酸钙和MitoQ的质量比为1：1.2。

4.权利要求1-3中任一项所述的用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物在制备防治后天性感音神经性聋的药物中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的后天性感音神经性聋由噪声或耳毒性药物引起的耳蜗突触损伤造成。

6.一种用于防治后天性感音神经性聋的药用组合物，其特征在于，所述的药用组合物由权利要求1-3中任一项所述的用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物，以及药学上可接受的载体组成。

7.如权利要求6所述的用于防治后天性感音神经性聋的药用组合物，其特征在于，所述的药用组合物的剂型选自固体剂型和液体剂型。

8.如权利要求7所述的用于防治后天性感音神经性聋的药用组合物，其特征在于，所述的固体剂型选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、栓剂、膜剂、胶剂、膏剂或粉剂。

9.如权利要求7所述的用于预防治后天性感音神经性聋的药用组合物，其特征在于，所述的液体剂型选自注射液、合剂、口服液、糖浆剂、酒剂、溶胶剂、乳剂。