CN115943926A - 一种无球虫健康兔的养殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种无球虫健康兔的养殖方法，其包括：喂养方法：采取轮换用药的方式将制备的马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料对兔子进行日常喂养；消毒方法：对饲养兔子的笼具进行60℃高温蒸汽消毒6‑8h，对承粪盘、食盒、以及笼底垫板进行100℃高温蒸汽消毒8‑10min，将每只兔子每天在经过高温蒸汽消毒过的笼具内进行不断移笼；交替运用喂养方法和消毒方法，彻底净化兔子体内的球虫，得到无球虫健康兔。本发明方法适用于普通养殖场防控球虫病，减少球虫病带来的经济损失，本发明无球虫健康兔可用于兔球虫病的实验室研究，为兔养殖生产中兔球虫病的防控提供理论和实践借鉴。
Description
技术领域
本发明涉及动物养殖技术领域，特别涉及一种无球虫健康兔的养殖方法。
背景技术
兔子是最早用作实验用途的动物之一，实验用兔被广泛应用于生物学、医学、药学、营养学、化工、兽医学、农业科学等领域。普通级实验兔是目前使用数量最多的实验兔，普通级环境的实验兔场，由于兔舍环境不够规范，质量不稳定，主要疫病得不到有效的控制，大量使用抗生素和化学药品，导致生产成本大幅增加，严重影响了实验兔质量和兔实验结果。
兔球虫病是危害兔子最严重的一种传染病，属寄生性原虫病，目前世界公认的有11种艾美耳球虫，多寄生于家兔肠上皮细胞。该病也是家兔各种疾病中最常见、危害最严重的疾病之一，具有很高的发病率和死亡率，严重影响了养兔业的发展。至今为止，防治兔球虫病只能依靠抗球虫药物，而且球虫极易对抗球虫药物产生耐药性，防治效果欠佳，而且药物会在兔机体内长时间残留造成食品安全隐患。球虫病的特性导致球虫的感染率极高，普通养殖场的球虫感染率可高达100％。在商品兔场几乎不存在无球虫健康兔，实验用兔只有极少部分的SPF兔能保证无球虫感染，普通级和清洁级实验兔基本均存在球虫感染。在SPF兔产量及存活率较低的情况下，兔球虫病等相关兔试验开展严重受限，而且SPF兔成本很高。兔球虫病试验只需健康兔达到无球虫感染即可，因此急需摸索出一种无球虫健康兔的养殖方法来解决这一难题。同时该方法可为兔养殖生产过程球虫净化及防控兔球虫病提供参考和依据。
球虫病作为一个世界性难题一直未得到有效解决，无论从防治效果还是食品安全的角度考虑，球虫疫苗都是解决兔球虫病最有效的的方法。但是，兔球虫疫苗研发的过程需要用到大量的无球虫健康兔进行系列研究，如果没有充足的无球虫健康兔来源，试验将很难开展，从而导致球虫疫苗的研发非常困难和漫长。即使是SPF兔对是否感染球虫也无控制要求，通过调研我们也发现大部分的SPF兔也感染了球虫，其体内携带不同种类的球虫对试验数据造成严重影响，导致可供开展球虫试验的实验兔数量严重不足，开展试验难度大、成本高。
因此，无球虫健康兔的培育显得尤为迫切和重要。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种无球虫健康兔的养殖方法，旨在解决现有技术无法高效养殖无球虫健康兔的问题。
本发明的技术方案如下：
一种无球虫健康兔的养殖方法，其中，包括：
喂养方法：在兔子的日常喂养饲料中分别添加马度米星胺、甲基盐霉素和莫能菌素这三种抗球虫药物并混合，制得马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料，采取轮换用药的方式将所述马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料对兔子进行日常喂养，防止球虫对单一药物形成耐药性；
通过对饲养兔子的笼具进行60℃高温蒸汽消毒6-8h，对承粪盘、食盒、以及笼底垫板进行100℃高温蒸汽消毒8-10min，将每只兔子每天在经过高温蒸汽消毒过的笼具内进行不断移笼，以防止兔子重新摄入自身排出存在于笼具、承粪盘、食盒、以及笼底垫板上的卵囊；
结合实际情况交替运用所述喂养方法和消毒方法，彻底净化兔子体内的球虫，制得无球虫健康兔。
进一步地，所述无球虫健康兔的养殖方法，其中，在兔子的日常喂养饲料中分别添加马度米星胺、甲基盐霉素和莫能菌素这三种抗球虫药物，制得三种不同的混合药物饲料的步骤，包括：
日常喂养饲料中添加5ppm的马度米星胺，制得马度米星胺混合饲料；
日常喂养饲料中添加6ppm的甲基盐霉素，制得甲基盐霉素混合饲料；
日常喂养饲料中添加20ppm的莫能菌素，制得莫能菌素混合饲料。
进一步地，所述无球虫健康兔的养殖方法，其特征在于，采取每隔3-7天轮换一次用药的方式将所述马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料对兔子进行日常喂养。
有益效果：本发明提供的是一种高效的无球虫健康兔的养殖方法，本发明可实现将普通养殖环境中携带球虫的祖代/父母代/商品代健康兔净化成不携带球虫的无球虫健康兔，所述无球虫健康兔可用于兔球虫病的实验室研究，为兔养殖生产中兔球虫病的防控提供理论和实践借鉴。本发明方法适用于普通养殖场防控球虫病，减少球虫病带来的经济损失。
附图说明
图1为本发明一种无球虫健康兔的养殖方法流程图。
具体实施方式
本发明提供一种无球虫健康兔的养殖方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
为了培育无球虫健康兔，我们充分利用球虫生活史及球虫独特的特性—球虫自身限制，将普通的球虫感染兔净化成无球虫健康兔。球虫的自身限制是指感染一次球虫后，如不再重复感染，球虫就不会长期寄生于宿主体内，球虫自动从宿主体内消失的现象。这是由于球虫经过一段时间的多次裂殖生殖后，所产生的裂殖子都进入了配子生殖阶段，最后全部形成卵囊排出体外。因此，兔球虫病为自身限制性疾病。球虫的这一特点决定只要可以使兔不重复感染球虫，就可以将感染球虫的兔净化为无球虫健康兔。
基于此，本发明提供了一种无球虫健康兔的养殖方法，如图1所示，其包括：
S10、喂养方法：在兔子的日常喂养饲料中分别添加马度米星胺、甲基盐霉素和莫能菌素这三种抗球虫药物并混合，制得马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料，采取轮换用药的方式将所述马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料对兔子进行日常喂养，防止球虫对单一药物形成耐药性；
S20、消毒方法：对饲养兔子的笼具进行60℃高温蒸汽消毒6-8h，对承粪盘、食盒、以及笼底垫板进行100℃高温蒸汽消毒8-10min，将每只兔子每天在经过高温蒸汽消毒过的笼具内进行不断移笼，以防止兔子重新摄入自身排出存在于笼具、承粪盘、食盒、以及笼底垫板上的卵囊；
S30、结合实际情况交替运用所述喂养方法和消毒方法，彻底净化兔子体内的球虫，得到无球虫健康兔。
具体来讲，在本发明中，日常喂养饲料中添加5ppm的马度米星胺，制得马度米星胺混合饲料；添加6ppm的甲基盐霉素，制得甲基盐霉素混合饲料；添加20ppm的莫能菌素，制得莫能菌素混合饲料。在本发明中，采取每隔3-7天轮换一次用药的方式将所述马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料对兔子进行日常喂养。
本发明基于实验数据，对球虫健康兔的喂养方法和消毒方法进行优化，结合实际情况交替运用优化后的喂养方法和消毒方法，可高效且彻底净化兔子体内的球虫，从而制得无球虫健康兔。本发明方法适用于普通养殖场防控球虫病，可减少球虫病带来的经济损失。也就是说，本发明可实现将普通养殖环境中携带球虫的祖代/父母代/商品代健康兔净化成不携带球虫的无球虫健康兔，所述无球虫健康兔可用于兔球虫病的实验室研究，为兔养殖生产中兔球虫病的防控提供理论和实践借鉴。
为验证本发明无球虫健康兔养殖方法的技术效果，下面通过具体实施例对本发明作进一步解释说明：
实施例1
喂养方法的药物选择：
目前应用于生产中的抗球虫药物有20余种，一般为广谱抗球虫药，主要分为聚醚类离子载体抗生素和化学合成药物两大类。药物可以通过阻断球虫发育过程的某个阶段从而达到杀灭球虫的效果，但是药物的长期使用过程中极易产生耐药性从而导致效果变差，为此本发明需要开展试验以选择药物敏感性高的药物进行球虫的杀灭。
通过在饲粮中添加药物敏感性高的抗球虫药物从而降低兔子球虫卵囊排出量，并采取轮换用药的方式防止球虫对单一药物形成耐药性。为此本实施例选择了10种常见的抗球虫药物对3种最常见高发且危害较大的兔球虫虫种中型、大型、肠艾美耳球虫(兔球虫有11种)进行了药物敏感性试验。实验过程如下：
取35日龄无球虫断奶健康兔60只，分成12组，每组5只。其中第1组为饲料中无抗球虫药物添加的对照组，第2-11组为饲料中按照药物推荐使用剂量进行药物添加的药物组；第12组为从实验动物中心购入的SPF级实验兔维持饲料对照组。每组经口接种免疫后观察10日。后第5-6天(中型艾美耳球虫)、第7-8天(大型艾美耳球虫)和第9-10天(肠艾美耳球虫)收集免疫组兔子粪便进行OPG(克粪便卵囊数)计数并计算卵囊产量。试验分组见表1。
表1试验分组及处理
分别饲喂添加不同药物的饲料以及SPF兔饲料，各个虫种的卵囊产量出现了不同程度的升高或降低。结果显示，添加马度米星胺、甲基盐霉素和莫能菌素的饲料组各个虫种卵囊量降低非常明显，均低于空白对照组的1％，说明药物敏感度高；添加二硝托胺、盐酸氯苯和磺胺氯吡嗪钠的饲料组对三个虫种的药物敏感性差别较大，只对其中一个或两个虫种高度敏感；其他药物组对三个虫种呈中度敏感或不敏感。详细结果见表2和表3所示。
表2高峰期卵囊产量统计结果
注：卵囊产量为0.0并不意味着卵囊排出量完全为0，只代表其数量达不到OPG计数的最低值，即每克粪便卵囊数低于100，但使用饱和盐水漂浮法进行球虫排查时依然可检测到球虫。
表3高峰期卵囊产量比例统计结果
通过上述实验结果，本实施例选出了敏感性高的马度米星胺、甲基盐霉素和莫能菌素作为主要备选药物进行轮换用药，开展球虫净化工作。
实施例2
消毒方法的优化：
在球虫净化过程中，控制球虫的繁殖量很关键，但只使用药物进行防控，即使排出卵囊量仅为正常排出量的万分之一，但是面对千万级甚至亿级的球虫产量时，仍然会有大量的球虫卵囊排出，其后代则会继续感染动物，造成不断循环，无法实现彻底净化。
由于球虫虽然对消毒药物不敏感，但是对高温比较敏感，因此可以利用高温对环境中的球虫进行杀灭。通过查阅相关书籍和文献，发明人发现对于鸡球虫灭活的研究和相关数据较多，但对于兔球虫，相关的研究极少。由于考虑到各个动物的球虫虽有差异，但是其生活史以及生物学特性基本类似，因此鸡球虫的灭活可以作为参考。对于球虫的灭活，《鸡球虫病学》一书中有详细的描述：在40-50℃水温下，有40％-100％的卵囊排出后仅数小时就濒于死亡，在60℃水温中仅需数十分钟就死亡；75℃水温中，3-5min就死；100℃水温中，1-2s卵囊就死亡。另外，球虫不耐干燥，在干燥环境下易失活。于是本实施例参考鸡球虫的灭活方案进行了一系列实验。
高温辐射方式主要包括干热和湿热两种，干热主要包括暖风机高温空气和火焰灼烧两种方式，湿热主要指高温水蒸汽。通过比较不同高温辐射方式对球虫的灭活效果以及健康兔的实际养殖环境，从而选择最优方式作为球虫净化方案。
1、饲养间不同位置温度确定
将温感探头置于动物饲养间的不同位置，即笼具的上层、中层和下层以及地面，开启工业电暖风机并设定70℃进行加热，进行不同位点温度的实时监控并做记录，根据温度监控数据确定房间内最低温度位点以及该位点温度下限值。详细结果见表4。
表4干热情况下饲养间内不同位置温度记录结果
通过试验我们发现饲养间的环境温度并不能有效达到暖风机设定的70℃，而且空间温度存在明显的上高下低趋势，地面温度最低，且很难达到较高温度。
2、球虫干热杀灭实验
将中型艾美耳球虫孢子化卵囊液(2000个/ml)摇匀，取5ml置于洁净喷雾瓶内，全部喷洒于3个洁净不锈钢承粪盘表面。3个承粪盘放置于暖风机出风口处，房间门紧闭密封，开启电暖风机，设定温度为50℃。待温度上升至50℃时开始计时。分别于2h、4h和6h各取出1个承粪盘，随后在承粪盘内加入50ml纯化水并用毛刷对粪盘进行清洗，并将承粪盘清洗液倒至50ml洁净离心管内，做好标记并置于2-8℃保存。待3个承粪盘清洗液全部获取后，对3个离心管内的清洗液进行3500r/min 3min的离心操作，弃去上清液至2ml。
取25-55日龄无球虫健康兔10只，分成5组，每组2只。其中第1组经口接种未做任何处理的孢子化卵囊液，接种剂量为1万个/只；第2-4组分别接种高温消毒后2h、4h和6h的承粪盘清洗液，接种量为2ml/只；第5组为阴性对照组，不进行接种，各组兔子隔离饲养于无球虫环境内。分别收集每组兔感染后第4-6天的粪便进行粪检，观察是否有卵囊排出，并进行OPG(克粪便卵囊数)计数并统计卵囊减少率。
按照上述方法重复开展60℃的球虫杀灭实验。
实验结果显示，温度越高，时间越长，球虫杀灭效果越好，但在60℃持续6h的情况下依然无法完成对球虫的100％杀灭。具体实验结果见表5：
表5球虫干热杀灭实验结果
结合表4和表5结果，可以发现干热消毒时，其穿透力较弱，饲养间地面和下层温度较低，而且即使是在60℃的高温持续6h时杀灭也不能达到100％，仍有很大的提升空间。为此本发明继续尝试了穿透力更强的湿热杀灭方案。
3、高温蒸汽升温效果实验
考虑到蒸汽加热过程中可能造成的电路短路问题，本实施例将所有开关插座做密封处理，并根据房间大小选择功率大小合适的蒸汽发生器对房间进行蒸汽加热。首先在房间地面和房间上层放置两个温感探头监测房间加热过程中的实时温度。监测结果显示，蒸汽加热房间温度升高更快速，且容易达到较高温度。具体结果见表6：
表6高温水蒸汽升温效果实验结果
| 位置 | 0h温度 | 0.5h温度 | 1h温度 | 2h温度 |
| 地面 | 23.9 | 53.0 | 61.7 | 63.3 |
| 上层 | 26.1 | 62.2 | 66.5 | 68.5 |
4、球虫高温蒸汽杀灭实验
将中型艾美耳球虫孢子化卵囊液(2000个/ml)摇匀，取5ml置于洁净喷雾瓶内，全部喷洒于3个洁净不锈钢承粪盘表面。3个承粪盘并排放置于房间内，并将温感探头置于承粪盘表面，房间门紧闭密封，开启蒸汽发生器。待温度上升至50℃控制蒸汽阀门保证房间温度维持在50℃左右，并开始计时。分别于2h、4h和6h各取出1个承粪盘，随后在承粪盘内加入50ml纯化水并用毛刷对粪盘进行清洗，并将承粪盘清洗液倒至50ml洁净离心管内，做好标记并置于2-8℃保存。待3个承粪盘清洗液全部获取后，对3个离心管内的清洗液进行3500r/min 3min的离心操作，弃去上清液至2ml。
取25-55日龄无球虫健康兔10只，分成5组，每组2只。其中第1组经口接种未做任何处理的孢子化卵囊液，接种剂量为1万个/只；第2-4组分别接种高温消毒后2h、4h和6h的承粪盘清洗液，接种量为2ml/只；第5组为阴性对照组，不进行接种，各组兔子隔离饲养于无球虫环境内。分别收集每组兔感染后第4-6天的粪便进行粪检，观察是否有卵囊排出，并进行OPG(克粪便卵囊数)计数并统计卵囊减少率。
按照上述方法重复开展60℃的球虫杀灭实验。具体实验结果见表7：
表7球虫高温蒸汽杀灭实验结果
实验结果显示，温度越高，时间越长，球虫杀灭效果越好，且在60℃持续4h以上的情况下可以完成对球虫的100％杀灭。
5、球虫60℃高温蒸汽最短杀灭时间实验
为了确定在60℃湿热情况下球虫最短的杀灭时间，我们按照实施例5的方法进行了持续时间为2h、3h和4h的细化实验。实验结果显示，持续3小时球虫可到100％杀灭效果(经饱和盐水漂浮法排查无球虫)。详细结果见表8：
表8球虫60℃高温蒸汽最短杀灭时间实验结果
综合表6-表8结果，本实施例可以确定湿热消毒升温更快，球虫杀灭效果更好，可在60℃持续不低于3h的情况下做到球虫的100％杀灭。
6、含污物的球虫60℃高温蒸汽杀灭实验
考虑到正常情况下，兔子养殖过程中承粪盘内不可能是干净的，基本上都会存在粪便等污物，这些污物从理论上讲会影响温度的穿透，从而影响球虫杀灭效果。
为此本实施例选择已开展过中型艾美耳球虫实验的饲养兔子的粪盘5个，5个承粪盘并排放置与房间内，并将温感探头置于承粪盘表面，房间门紧闭密封，开启蒸汽发生器。待温度上升至60℃控制蒸汽阀门保证房间温度维持在60℃左右，并开始计时。分别于2h、3h、4h、5h和6h各取出1个承粪盘，随后在承粪盘内加入50ml纯化水并用毛刷对粪盘进行清洗，并将承粪盘清洗液倒至50ml洁净离心管内，做好标记并置于2-8℃保存。待5个承粪盘清洗液全部获取后，对5个离心管内的清洗液进行3500r/min 3min的离心操作，弃去上清液至2ml。
取25～55日龄无球虫健康兔14只，分成7组，每组2只。其中第1组经口接种未做任何处理的中型艾美耳球虫孢子化卵囊液，接种剂量为1万个/只；第2-6组分别接种高温消毒后2h、3h、4h、5h和6h的承粪盘清洗液，接种量为2ml/只；第7组为阴性对照组，不进行接种，各组兔子隔离饲养于无球虫环境内。分别收集每组兔感染后第4～6天的粪便采用饱和盐水漂浮法进行球虫排查，观察是否有卵囊排出。详细结果见表9：
表9含污物的球虫60℃高温蒸汽杀灭实验结果
表9实验结果显示，在60℃情况下持续6h才能彻底将沾有粪便污物承粪盘上的球虫卵囊杀灭。
基于上述实验数据，本发明在保证低能耗且不损坏养殖设备的前提下，要实现对养殖兔子的笼具、承粪盘和食具中的球虫卵囊全部杀灭，优先选择60℃高温蒸汽消毒6-8h，效果最佳。
7、含有污物的球虫100℃高温蒸煮杀灭实验
考虑到温度越高杀灭效果越好，在条件允许的情况本实施例对兔球虫净化过程中的体积较小的用具采用100℃高温蒸煮的方式对球虫进行杀灭。
为此本实施例选择已开展过中型艾美耳球虫实验的饲养兔子的塑料食盒、不锈钢承粪盘、不锈钢笼底垫板等易接触到球虫卵囊的物品进行100℃的蒸煮消毒，分别设定蒸煮时间为2min、4min、6min、8min和10min，每隔2min采样一次。采样采用棉签擦拭物品表面内容物，并将内容物洗脱至水中，然后将洗脱液给无球虫健康兔灌服，分别收集每组兔感染后第4～6天的粪便采用饱和盐水漂浮法进行球虫排查，观察是否有卵囊排出。详细结果见表10：
表10含污物的球虫100℃蒸煮杀灭实验结果
从表10实验结果可看出，在100℃情况下持续8min可彻底杀灭食盒、承粪盘以及笼底垫板各种物品表面的球虫卵囊。
8、温度对球虫孢子化发育的影响实验
通过大量的试验研究，本实施例发现低温(不低于0℃)会减缓球虫的孢子化发育进程，但该过程相对可逆。而高温对于发育过程的影响基本不可逆，且影响较大。结合上述研究基础，本实施例使用不同虫种的兔球虫新鲜卵囊进行人为干预培养温度来确定高温对球虫孢子化发育的影响。实验以全程最佳孢子化培养温度组为对照，另设30℃、35℃、40℃、45℃和50℃高温孢子化培养组，高温持续时间为30min，之后温度调整为最佳孢子化培养温度，并在对照组完成孢子化发育时统计各组的孢子化率。具体结果见表11：
表11温度对球虫孢子化发育的影响试验结果
实验结果表明：45℃以上的高温会对球虫孢子化发育造成不可逆的影响，从而导致孢子化率不同程度的降低，温度越高影响越大，而且每个虫种对高温的敏感性不同。在球虫排出不久尚未完成孢子化发育前对其进行高温处理，可以在较短时间和较低温度下球虫无法正常完成孢子化发育过程，因此后期不具有感染动物的能力，从而达到球虫杀灭净化的目的。基于此，本实施例通过60℃的高温蒸汽处理，可对球虫孢子化发育造成不可逆的影响，使得球虫无法正常完成孢子化发育过程，因此后期不具有感染动物的能力，从而达到球虫杀灭净化的目的。
实施例3
一种无球虫健康兔的培育方法，包括如下步骤：
1、兔子来源
选择养殖环境较好，经检测兔球虫感染程度较轻的养殖场，或普通级/清洁级实验兔生产单位。
2、兔子的选择
选择合适数量的可作为后备种兔的青年健康雄兔、雌兔，选取的兔子应无寄生虫病以及传染病史。
3、兔子的健康检测
对选取的兔子必须符合以下标准：
3.1外观指标：兔子应外视健康，饮食欲无异常，无跛脚等。
3.2寄生虫指标：无外寄生虫和全部蠕虫，如螨虫、栓尾线虫等。
3.3传染性疾病：无兔瘟、巴氏杆菌病、魏氏梭菌病、波氏杆菌病等。
4、净化场地要求
将经检测符合各项健康指标的后备青年兔放置于实验室内饲养，实验室应远离周边兔场。兔子饲养笼具应选择耐清洗消毒的材质以备后续的净化工作的顺利开展。
5、兔子球虫净化的方法
(1)在日常喂养饲料中添加5ppm的马度米星胺，制得马度米星胺混合饲料；添加6ppm的甲基盐霉素，制得甲基盐霉素混合饲料；添加20ppm的莫能菌素，制得莫能菌素混合饲料。在本发明中，采取每隔3-7天轮换一次用药的方式将所述马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料对兔子进行日常喂养，防止球虫对单一药物形成耐药性。此种方法可短期内快速降低兔子产出球虫卵囊的数量，从而降低净化难度。
(2)通过对饲养兔子的笼具进行60℃高温蒸汽消毒6-8h，对承粪盘、食盒、以及笼底垫板进行100℃高温蒸汽消毒8-10min，将每只兔子每天在经过高温蒸汽消毒过的笼具内进行不断移笼，以防止兔子重新摄入自身排出存在于笼具、承粪盘、食盒、以及笼底垫板上的卵囊。
(3)上述步骤(1)至步骤(2)中的任一方法都可以不断减少兔子卵囊排出量，但是单一方法无法彻底净化，必须交替运用上述两种方法，以达到彻底净化兔体内的球虫，并且缩短净化时间，制得无球虫健康兔。
将经检测符合各项健康指标的无球虫健康兔放置于实验室内饲养，实验室应远离周边兔场。
6、净化后无球虫健康兔标准
净化后无球虫健康兔必须符合以上第3项要求，且不携带球虫。监测兔子体内无球虫的净化：连续30天内每日收集每只兔子排出的粪便，通过饱和食盐水漂浮法进行卵囊排查无发现卵囊。因为通过相关文献数据并结合我们研究发现，兔球虫所有虫种里面潜隐期最长的为14天左右，如经过两个以上最长的潜隐期无发现卵囊则可以确定净化彻底。
7、无球虫健康兔群的成功培育
净化彻底后的无球虫健康兔将会安排专人进行饲养、配种、繁殖，并在养殖过程中进行定期监测以防止来自不同途径的球虫污染。在种兔体内无球虫卵囊产生并排出的情况下，其后代将不会感染球虫，从而形成一个相对独立封闭的无球虫健康兔饲养环境，通过不断的繁殖后代形成无球虫健康兔种群。
试验1
1.无球虫健康兔与SPF兔进行球虫病试验数据对比
为了保证培育出的无球虫健康兔进行球虫病相关试验时数据准确、可靠，本实施例将培养的无球虫健康兔与无球虫SPF兔进行了球虫相关的对比试验。
1.1试验方案：选取45～55日龄体重相近的无球虫健康兔和无球虫SPF兔各10只，各随机分成2组，每组5只。第1、2组分别为无球虫健康兔空白组、SPF兔空白组，第3、4组分别为无球虫健康兔感染组和SPF兔感染组。感染组的10只兔子每只通过灌胃的方式接种大型艾美耳球虫孢子化卵囊5万个/只，接种后观察并记录兔子精神状态、饮食欲、球虫病临床症状、排卵囊规律，另外试验前后对每只兔子进行称重以统计增重指标(接种后12天试验结束)。
1.2试验结果
感染球虫卵囊后两空白组兔子精神状态、饮食欲正常；两个感染组兔子在接种后第5天开始出现精神沉郁、食欲减退的现象；第6天开始排出卵囊并伴随出现明显的大型艾美耳球虫病临床症状：精神萎靡，少食或不食，拉稀；排卵囊高峰期出现在第8～9天；试验期间感染组兔子消瘦，试验前后增重明显低于空白组。感染前后兔子增重记录的数据如表12所示：
表12感染球虫后兔子增重结果
如表12的数据表明：在兔子增重方面，本实施例培育出的无球虫健康兔与SPF兔无明显差异。
1.3试验结论
综合以上试验结果表明：本实施例培育出的无球虫健康兔在进行兔球虫病研究时，临床症状、体重、对球虫的易感性等方面与SPF兔相比无明显差异。由此说明本发明培育的无球虫健康兔可用于球虫病相关的实验室研究和临床研究。
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
Claims (3)
1.一种无球虫健康兔的养殖方法，其特征在于，包括：
喂养方法：在兔子的日常喂养饲料中分别添加马度米星胺、甲基盐霉素和莫能菌素这三种抗球虫药物并混合，制得马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料，采取轮换用药的方式将所述马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料对兔子进行日常喂养，防止球虫对单一药物形成耐药性；
消毒方法：对饲养兔子的笼具进行60℃高温蒸汽消毒6-8h，对承粪盘、食盒、以及笼底垫板进行100℃高温消毒8-10min，将每只兔子每天在经过高温蒸汽消毒过的笼具内进行不断移笼，以防止兔子重新摄入自身排出存在于笼具、承粪盘、食盒、以及笼底垫板上的卵囊；
结合实际情况交替运用所述喂养方法和消毒方法，彻底净化兔子体内的球虫，制得无球虫健康兔。
2.根据权利要求1所述无球虫健康兔的养殖方法，其特征在于，在兔子的日常喂养饲料中分别添加马度米星胺、甲基盐霉素和莫能菌素这三种抗球虫药物，制得三种不同的混合药物饲料的步骤，包括：
日常喂养饲料中添加5ppm的马度米星胺，制得马度米星胺混合饲料；
日常喂养饲料中添加6ppm的甲基盐霉素，制得甲基盐霉素混合饲料；
日常喂养饲料中添加20ppm的莫能菌素，制得莫能菌素混合饲料。
3.根据权利要求1所述无球虫健康兔的养殖方法，其特征在于，采取每3-7天轮换一次用药的方式将所述马度米星胺混合饲料、甲基盐霉素混合饲料和莫能菌素混合饲料对兔子进行日常喂养。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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